UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, Decana de amrica)

FACULTAD DE QUIMICA E INGENIERIA

QUMICA E INGENIERA AGROINDUSTRIAL
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
ACCION DE AGENTES FISICOS Y QUIMICOS SOBRE LOS
MICROORGANISMOS
Y PRUEBA DE DIFERENCIACION BIOQUIMICA
Profesor: Jos Manuel Bustamante Agreda
Integrantes:
Castro Huamn, Luz Katherine

cdigo: 14070191

Cruz Ramos, Lander Diosdado

14070194

cdigo:

De La Cruz Parco Leandro Ramos

cdigo: 14070058

Soto Vargas, Janet Magaly

cdigo: 14070205

Zegarra Chvez, Juan Andrs

cdigo: 14070223

Grupo: lunes 9 a 1 pm
Lima Per
2015 ll

INTRODUCCION
Podemos concluir que las actividades de los microorganismos se ven muy
afectadas por las condiciones qumicas y fsicas del medio. El conocimiento
de los efectos ambientales nos permite explicar la distribucin de los
microorganismos en la naturaleza y hace posible disear mtodos que
controlen o potencien las actividades microbianas.
Los mecanismos de accin de los agentes fsicos y qumicos:
Inhiben la sntesis de la pared celular, o aceleran su degradacin, alteran la
permeabilidad selectiva de la membrana citoplsmica, desnaturalizan las
protenas, y alteran su estructura secundaria y terciaria y inhiben la
actividad enzimtica mediante el bloque de los radicales sulfhidrilo (SH)
Los agentes fsicos; que actan en los microorganismos causando cambios,
evaluados en esta prctica fueron: temperatura, se determin a que medida
de esta se da la muerte trmica de cepas de Escherichia Coli y
Staphylococcus aureus; y la accin de la presin osmtica, determinando a
que concentracin de NaCl se ve afecta el crecimiento de la cepa de E. Coli.
Los agentes qumicos, que actan en los microorganismos causando
cambios, evaluados fueron: la concentracin de iones hidrogeno, se
determin el efecto del pH en el crecimiento y desarrollo microbiano en
cultivos de E. Coli con 24 horas de esas; y la accin de los desinfectantes y
antispticos como inhibidores del desarrollo microbiano en cepas de S.
aureus.

Cmo actan los agentes fsicos sobre los

microorganimos?
Todos los microorganismos son afectados por diferentes factores fsicos,
entre ellos el ms importante es la temperatura, pero tambin la presin y
otros elementos del medio.

La temperatura, es uno de los parmetros ambientales ms

importantes que condicionan el crecimiento y la supervivencia de los
microorganismos.
La temperatura afecta a la velocidad de crecimiento (y, por lo tanto al
tiempo de generacin, g). Cada bacteria (y suponiendo que el resto de
condiciones ambientales se mantienen constantes) muestra una curva
caracterstica de tasa de crecimiento en funcin de la temperatura, donde
podemos distinguir tres puntos caractersticos llamados temperaturas
cardinales:

Temperatura mnima: por debajo de ella no hay crecimiento.

Temperatura mxima: por encima de ella tampoco existe
crecimiento.
Temperatura ptima: permite la mxima tasa de crecimiento (o
sea, g mnimo).

La temperatura mnima se puede explicar en funcin de un descenso de

la fluidez de la membrana, de modo que se detienen los procesos de
transporte de nutrientes y el gradiente de protones.
Por encima de la temperatura mnima la tasa de crecimiento va
aumentando proporcionalmente hasta alcanzar la temperatura ptima,
debido a que las reacciones metablicas catalizadas por enzimas se van
aproximando a su ptimo. En dicha temperatura ptima las enzimas y
reacciones se dan a su mxima tasa posible.
A partir de la temperatura ptima, si seguimos subiendo la temperatura se
produce un descenso acusado de la tasa de crecimiento hasta alcanzar
la temperatura mxima. Dicha temperatura refleja desnaturalizacin e
inactivacin de protenas enzimticas esenciales, colapsamiento de la
membrana citoplsmica y a veces lisis trmica de la bacteria.

La presin osmtica; exceptuando los micoplasmas, que carecen de

pared celular, las bacterias pueden vivir en medios tanto hipotnicos como
hipertnicos, debido a la proteccin de una pared celular rgida y a la
membrana citoplsmica semipermeable.
Normalmente el citoplasma de las bacterias poseen una osmolaridad
ligeramente superior a la del entorno, lo que garantiza el paso de agua al
interior. La presin de turgor es relativamente constante porque la
membrana citoplsmica se topa con la rigidez de la pared celular. Esta
presin de turgor permite que la bacteria aguante cambios bruscos de
concentracin de solutos en su entorno (dentro de ciertos lmites). Pero esto
plantea una pregunta (que intentaremos responder a continuacin): cmo
logra la bacteria ajustar su osmolaridad interna a esos cambios exteriores?
A) En medios hipotnicos (con una aw>aw del citoplasma) es la pared
celular la que ejerce todo el papel: su rigidez se opone a la entrada de agua,
y por lo tanto, evita que la membrana citoplsmica tienda a sufrir una
presin de turgor excesiva.
B) En medios hipertnicos (cuando la aw del exterior es menor que la del
citoplasma). Las bacterias poseen mecanismos compensatorios por los que
tienden a aumentar la osmolaridad interior por encima de la del medio (para
garantizar la entrada de agua del ambiente y mantener su metabolismo).
Ello se logra esencialmente aumentando la concentracin de un soluto muy
soluble en agua en el interior celular, soluto llamado genricamente soluto
compatible, lo cual se puede lograr por varios posibles mecanismos:

Bombeando iones al interior.

Sintetizando una molcula orgnica osmticamente activa.
Bombeando sustancias osmoprotectoras.

Cmo actan los agentes qumicos sobre los

microorganismos?
Existen ciertas sustancias qumicas que influyen negativamente sobre las
bacterias, pudiendo ejercer dos tipos diferentes de efectos:

 Bacteriostticos: cuando impiden el crecimiento microbiano.

Bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias.
En general, si nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo de
microorganismos, hablamos respectivamente de agente microostaticos y
microbicidas. Ahora bien, para una misma sustancia qumica, la lnea de
demarcacin entre un efecto microbiostatico y otro microbicida depende
muchas veces de la concentracin de dicha sustancia y del tiempo durante
el que acta.

El PH, La mayora de las bacterias pueden crecer dentro de un margen de

pH de su medio, manteniendo al mismo tiempo su pH interno ptimo
prcticamente constante.
Por ejemplo, Escherichia coli puede crecer bien entre pH 6 y pH 8, pero su
pH interno es siempre 7.6 o muy cercano a ese valor.
Respecto del margen normal de pH a los que crecen las bacterias, stas se
pueden clasificar en:

Neutrfilos, si crecen de modo ptimo en torno a la neutralidad (entre

pH 5.5 y 8).

Acidfilas, si crecen normalmente entre pH 0 y pH 5.

Alcalofilas, si crecen entre pH 8.5 y pH 11.5.

La mayor parte de las bacterias son neutrfilas. Muchas bacterias

neutrfilas modifican el pH del medio, y resisten entornos relativamente
cidos o alcalinos. Por ejemplo, algunas bacterias fermentativas excretan
cidos, mientras otras alcalinizan el medio, p. ej., produciendo amonio a
partir de diseminacin de aminocidos. Por otro lado, la mayor parte de los
hongos y levaduras requieren pHs ligeramente cidos (en torno a 4-5).
Aunque los microorganismos pueden crecer en un margen ms o menos
amplio de pH (alrededor de un ptimo), los cambios bruscos pueden ser
lesivos (afectando a la membrana y al transporte de solutos, e inhibiendo
enzimas). Si el pH citoplsmico cae rpidamente hasta 5 o menos, la
bacteria puede morir.

Desinfectantes y antispticos:

Se suelen clasificar de acuerdo

con su mecanismo de accin:

A) AGENTES QUE DAAN LA MEMBRANA
1) Detergentes.
2) Compuestos fenlicos: fenoles, cresoles, aceites esenciales
de plantas, difenilos halogenados, alquilesteres del parahidroxibenzoico.
3) Alcoholes: etanol, isopropanol.
B) AGENTES DESNATURALIZANTES DE PROTEINAS

1) cidos y bases fuertes

2) cidos orgnicos no disociables
C) AGENTES MODIFICADORES DE GRUPOS FUNCIONALES
1) Metales pesados
2) Agentes oxidantes: halgenos, agua oxigenada,
permanganato de potasio, cido peracetico.
3) Colorantes: derivados de la anilina y acridina (flavinas)
4) Agentes alquilantes: formaldehido, glutaraldehido, xido de
etileno, -propionil-lactona.

MATERIALES
EFECTO DE LA TEMEPRATURA
Cepas de Escherichia coli
aureus

(ambas

24

y Staphylococcus

horas

de

edad).

EFECTO DE LA PRESION OSMOTICA

Cepa de Escherichia coli de 24 horas de edad
crecida en caldo de cultivo.
4 Placas Petri (concentraciones

de

NaCl

al

5%,10%,20%,40% en medio base Agar Nutritivo)

1 Placa con Agar Nutritivo.
Asa de siembra
Encendedor

EFECTO DE LA
CONCENTRACION DE
IONES HIFROGENO (ph )
EN LOS MICROORGANISMOS

Cultivos de 24 horas de edad de Escherichia coli.

Tubos con caldo nutritivo estril previamente ajustados con HCl 1
N y NaOH 1Na valores de pH de 3 , 5 , 7 , 9 , 11 (1 de cada una).

ACCION DE LOS DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS

 Cepas de Escherichia coli y Staphylococcus aureus

Medio de cultivo: Agar nutritivo.

Desinfectantes:

Leja 10%
Cresol 5%
Pinesol

Antispticos:

Alcohol 70%
Agua oxigenada
Merthiolate
Pinesol
Jabn medicado(Protex)

Disco

de

papel

filtro,

pinzas.
Plumn indeleble.

DIAGRAMA DE FLUJO:

I)

ACCION DE AGENTES FISICOS SOBRE

MICROORGANISMOS

EFECTO DE LA
TEMPERATURA
CULTIVO

SOMETEMOS

Escherichia coli

40C y
65C
CADA

Sthaphylococcus
aureus

0, 40y 80

HACEMOS DILUCIONES
SERIADAS (1ML) DE CADA
CULTIVO (10-3)
SEMBRAMOS 0,1 ML DE CULTIVO POR
DIFUSIN EN MEDIO DE AGAR NUTRITIVO

ROTULAMOS LAS PLACAS

DE MANERA ADECUADA

INCUBAR A 28C por 48

HORAS EN POSICION
INVERTIDA

ACCION DE
PRESION
OSMOTICA

SEMBRAMOS E.coli POR ESTRIADO

SIMPLE EN PLACAS

BASE DE AGAR CON

NaCl
CONCENTRACION
5%

10%

20%

40%

ROTULAMOS LAS
PLACAS DE
MANERA
INCUBAR POR 48
HORAS A 28C

COMPARAMOS
RESULTADOS DE
CRECIMIENTO

II)

ACCION DE AGENTES QUIMICOS SOBRE LOS

MICROORGANISMOS
EFECTO DE LA
CONCENTRACION DE
PH EN LOS
MICROORGANISMOS

INOCULAMOS E.coli CON

AGUJA DE NICROM
CIRCULAR
SOBRE
TUBOS EN
CONCOTENIDO DE
CALDO NUTRITIVO
CON

PH 3

PH 5

PH 7

PH 9

INCUBAMOS A 28C por

48 HORAS

ANOTAMOS
OBSERVACIONES

ACCION DE LOS
DESINFECTANTES Y
ANTISEPTICOS

AGENTES
3
DESINFECTANTES
DIVISIONE

DIVISION DE
PLACAS CON

4
AGENTES
DIVISIONES
ANTISEPTICOS

1 ml de
cultivo +
Agar
nutritivo

.LEJIA AL
10%
.CRESOL
. PINESOL

1 ml de
cultivo +
Agar
nutritivo

SEMBRAMOS S.
aureus POR
DIFUSION

CON UN PINZA
ESTERIL
COLOCAMOS UN
DISCO DE PAPEL
FILTRO
PREVIAMENTE
EMBEBIDO EN
SOLUCION SOBRE
LA PLACA

.ALCOHOL AL
70%
.AGUA
OXIGENADA
.
MERTHIOLATE

INCUBAMOS A
28CPOR 48
HORAS

III) PRUEBA DE DIFERENCIACION

BIOQUIMICA

Escherichia
coli

INOCULAMOS 1
ML DE CADA
CEPA

Staphylococcus
aureus

.JABON

EN
CALDO DE ROJO
FENOL
CON

GLUCOS
A

LACTOS
A

SACARO
SA

INCUBAR LOS
TUBOS A 28C
POR 48 HORAS

PROCEDIMIENTO:
ACCION DE AGENTES FISICOS SOBRE LOS
MICROORGANISMOS

A)EFECTO DE LA TEMPERATURA
1. Sometemos a 40C y 65C los cultivos de Escherichia coli y
Sthaphylococcus aureus. A los 0, 40 y 80 realizaremos
diluciones seriadas.

2. Sembramos por el mtodo de difusin 0,1 ml de la ltima

solucin (10-3) en medio de Agra Nutritivo. Rotulamos de
manera correctas las placas.

3. Incubamos a 28C por 48 horas .Realizamos el recuento de

microorganismos para cada
tratamiento.

B) ACCION DE LA PRESION OSMOTICA

1.- En las placas con diferentes concentraciones de NaCl , sembrar la
cepa de E coli. Por el mtodo de estriado.

2.- Rotular de manera correcta las placas .Llevar a incubacin por 48

horas a 28C.

3.- Comparar el crecimiento microbiano entre las lacas que contienen

las diferentes concentraciones de NaCl con Agar Nutritivo.

ACCION DE AGENTES QUIMICOS SOBRE LOS

MICROORGANISMOS
A) EFECTO DE LA CONCENTRACION DE IONES
HIDROGENO EN LOS MICROORGANISMOS

1.- Inocule con una azada el cultivo de E coli en cada uno de los tubos de
caldo nutritivo con distintos valores de pH. Incubamos a 28C por 48 horas y
anotamos resultados.

B) ACCION DE LOS DESINFECTANTES Y ANTISEPTICOS

AGENTES DESINFECTANTES
1.- Dividir la placa Petri en 3 mitades con el rotulador. Sembramos
Staphylococcus aureus mediante el mtodo de difusin, inoculando
1 ml de cultivo puro.

2.- Utilizando una pinza estril colocar un disco de papel filtro de

1,5 cm de dimetro embebido en la solucin del desinfectante
.Incubar las placas a 28C por 48 horas en posicin invertida.

AGENTES ANTISEPTICOS
1.- Dividir a placa de Agar Nutritivo en 4 mitades con el plumn
indeleble.
2.- Realizar el mismo procedimiento que con los agentes
desinfectantes con la cepa de Staphylococcus aureus . Incubamos a
28C por 48 horas y anotamos las observaciones con los datos de
la escala acoplada en la gua de trabajo y as mismo anotamos los
resultados.

RESULTADOS:
Efecto de la temperatura

Temperatura

Tiempo
(min)

40C

65C

Crecimiento microbiano( UFC/ml)

Escherichia
coli
2,4x103

Staphylococcus
aureus
2,20x103

40

3,20x103

4,80x103

80

7,20x103

6,40x103

1,8x103

1,75x103

40

2,65x103

4,20x103

80

4,00x103

5,30x103

Staphylococcus aureus:
Escherichia Coli:

Interpretacin de resultados
Para determinar el efecto de la temperatura sobre el microorganismo,
comparamos 2 cepas Escherichia coli y Staphylococcus aureus a
diferentes temperatura de 40 y 65C.
Comparamos el efecto para una misma cepa y obtuvimos que el
crecimiento bacteriano fue mayor para la temperatura de 40 para
ambos microorganismos y que la cantidad de colonias aumentaban
de manera notoria a esta temperatura, tambin pudimos ver que el
nmero de colonias aumentaban en mayor cantidad para el
Escherichia coli a comparacin de Staphylococcus aureus para las dos
temperaturas de acuerdo a nuestro resultados.
Observamos que la temperatura de mayor crecimiento de las dos
cepas fue el de 40, y que, y que el E. Coli es ms sensible a la
temperatura de 65C ya que su aumento de colonias fue mayor en
comparacin del Staphylococcus aureus.

Discusin de resultados
De acuerdo a nuestras graficas pudimos ver en todas, una curva de
crecimiento, a pesar de que las temperaturas no fueron las ptimas
para el crecimiento de las cepas.
El desarrollo para el crecimiento ptimos para el Escherichia coli y
Staphylococcus, es de temperatura de 40 ya que ah pudimos
observar un mayor nmero de colonias formadas.

Pero tambin observamos crecimiento la temperatura de 65C y esto

se debe a las endotoxinas de la pared celular. Para el caso de
Escherichia coli, esta en una bacteria gran negativa el cual contiene
toxinas, estas son parte integral de las paredes celulares de bacterias
gran negativas, esta toxina es termoestable, esta es un pequeo
pptido que induce la secrecin actuando sobre la guanilato ciclasa
del enterocito. Una de ellas es la toxina shiga termoestable.
La pared celular de esta cepa, estas contienen petidiglucano y est
compuesta por dos derivados de azucares, N-acetilglucosamina y
acido N-acetilmuramico, y un pequeo grupo de aminocidos que
incluyen L-alanina, D-glutmico, estos aminocidos tienen un
enlace covalente muy fuerte que es el puente disulfuro estos
enlaces los hacen ms estables que ante un cambio de temperatura
pueden seguir sin romperse, por lo tanto la bacteria va a seguir
creciendo y no va haber muerte.

En el caso del microorganismos Staphylococcus aureus estas tambin

resisten temperaturas altas debido a las enterotoxinas estafiloccicas
son termo resistentes, algunas pueden mantenerse estables incluso al
calentarlos ms de 100 C.
Una de ellas es Toxina-1 del sndrome de shock txic esta
una toxina de 22 kDa termoestable y resistente a protelisis.

es

Por ello el staphylococcus puede tener aumento de colonias a pesar

que la temperatura a la cual fue sometida no es la ptima, pero por la
caracterstica ya mencionada puede resistir a temperaturas altas y as
desarrollarse.

ACCION DE LA PRESION OSMOTICA

AGAR NUTRITIVO
SOL. SALINA
(5%)

SOL.SALINA
(10%)

SOL.SALINA
(20%)

SOL.
SALINA
(40%)

SI

NO

NO

Imperceptib
le

152

00

00

--

Represen
tacin
fotogrfic
a final

Presencia
de
colonias
Numero
de
colonias

Los microorganismos requieren agua para su crecimiento, adems

para obtener nutrientes de sta. Una presin osmtica alta causa
prdida de agua y plasmlisis de la clula, por lo que se utiliza este
fenmeno para conservar los alimentos ya sea aadiendo sal o
azcar, lo que previene el crecimiento bacterial. Sin embargo
algunas bacterias se han adaptado a altas concentraciones de sal,
a stas se les conoce como halfilos extremos. Por otro lado,
los halfilos facultativos no requieren una alta
concentracin de sal, pero pueden crecer hasta una
concentracin de 2%. Otras bacterias pueden tolerar hasta
un 15% de sal.

INTERPRETACION:
o El crecimiento bacteriano puede ser afectado grandemente por
las cantidades de agua que entran o salen de la clula. Cuando
el medio que rodea a un organismo es hipotnico (presencia de
pocos solutos) resulta una presin osmtica mayor dentro de la
clula. La pared de la mayora de las bacterias es tan fuerte y
rgida, que un hinchamiento celular ligero generalmente es
inaparente.

Sin embargo cuando las bacterias son colocadas en una

solucin hipertnica) presencia de gran cantidad de solutos) su
crecimiento puede ser inhibido considerablemente. Esta
inhibicin depender del tipo de soluto y de la naturaleza del
organismo; el citoplasma se deshidrata y el agua sale de la
clula, causando plasmlisis. En algunos casos la clula es
inhibida en ausencia de agua celular suficiente. En casos
extremos hay una activacin enzimtica permanente y las
clulas no se recuperan en solucin isotnica.

Las bacterias pueden crecer en medios con distintos valores

de concentracin de sales, o en algunos casos necesitan de
estas condiciones para su desarrollo metablico adecuado.
Estos se clasifican en Halfilos, los cuales a su vez puede ser
tolerantes (viven en 3.5% de NaCl, y que ven inhibido su
crecimiento a concentraciones mayores o menores de sales) y
extremos (que viven en y requieren concentraciones saturantes
de sales) ; Halotolerantes que pueden desarrollarse en moderadas
concentraciones pero que presentan mayor crecimiento a bajas
concentraciones y finalmente los microorganismos no Halfilos.

DISCUSIN:
En funcin de los necesarios conceptos previos podemos concluir
que los resultados obtenidos son fidedignos y correspondientes a
lo esperado para cada caso. Profundizaremos estos con el
siguiente grafica de curvas en funcin del crecimiento y la
concentracin salina.

La cepa empleada en la experiencia fue E.coli una bacteria no

halfila por lo cual solo presento crecimiento en cultivo con
solucin salina en concentracin de 2%, debido a ello en las placas
con5% y 10% no hubo formacin de colonias puesto que no
permiten el medio adecuado para su desarrollo, as mismo en la
placa con concentracin al 40% apreciamos un medio difuso para
deteccin de colonias debido a una sobresaturacin por la
precipitacin de las sales. Sin embargo si hubiramos inoculado la
otra cepa (Staphylococcus aureus) podramos haber obtenidos
colonias hasta una concentracin del 20% debido a que estos
microorganismos son halotolerantes. Por los resultados obtenidos
determinamos que la cepa en estudio solo mostrara un crecimiento
en concentraciones bajas puesto que si estas aumentan afectaran
el crecimiento bacteriano.

CONCENTRACION DE IONES DE HIDROGENO

<> Poco crecimiento

++

<> Regular crecimiento

+++

<> Crecimiento moderado

++++ <> Abundante crecimiento

pH 3.0
Escherichia coli

pH

pH 7.0

pH 9.0

pH 11.0

5.0
+

++++

+++

++

Interpretacin de resultados:
Para el estudio del pH de la bacteria Escherichia coli preparamos
diferentes soluciones de concentraciones variadas de pH como lo
muestras nuestro cuadro, en cual podemos observar por turbidimetria

la cantidad de bacterias en cada tubo y notamos que en el tubo de

concentracin pH de 7.0 hay una mayor turbidez a diferencia de
los dems tubos, por lo que el E. coli su pH optimo es neutro esta
entre 6.0 7.0, a diferencia del tubo con pH acido hay poco
ANTISEPTICO

E.coli

ALCOHOL AL 70%

S. aureus

+++
++
+
+

H2O2
MERTHIOLATE
JABON PROTEX

crecimiento de la bacteria para pH 3.0, para el pH bsico 11.0 se

observ menor crecimiento.
De acuerdo a nuestra investigaciones encontramos que el pH ptimo
es de 7.0, por lo cual nuestra prueba fue realizada en buenas
condiciones, y el resultado de ella nos llev a encontrar el pH
adecuado experimentalmente.

Agentes antispticos
+

<> Poco crecimiento

++

<> Regular crecimiento

+++

<> Crecimiento moderado

++++ <> Abundante crecimiento

Tamao de los halos de crecimiento:

EFECTO DE LOS ANTISEPTICOS FRENTE AL

STAPHYLOCOCCUS AUREUS

ANTISEPTICO

ALCOHOL AL 70%

Halo de inhibicin en mm
frente al S. aureus
5 mm

H2O2
MERTHIOLATE
JABON PROTEX

4 mm
1mm
1mm

DETALLES DE LAS SUSTANCIAS EN ESTUDIO:

Alcohol al 70%: El mecanismo de accin de los alcoholes es la
desnaturalizacin
de
las
protenas
de
los
microorganismos. La desnaturalizacin proteica slo es
posible en presencia de agua; por este motivo el alcohol
absoluto presenta un poder bactericida mucho menor que las
mezclas de alcoholes con agua. Podra tener cierta accin
bacteriosttica al inhibir la produccin de metabolitos
esenciales para la divisin celular rpida. Tiene accin
bactericida pero poco efecto residual. Presenta un inicio de
accin retardado; por este motivo se debera dejar actuar dos
minutos
antes
de
cualquier
procedimiento.
Bactericida de potencia intermedia. Es activo frente a
bacterias Gram positivas y Gram negativas, incluyendo
patgenos multirresistentes (Staphylococcus aureus).
El etanol posee suficiente actividad frente a virus lipdicos y no
lipdicos para ser considerado virucida de amplio espectro. La
combinacin de alcohol etlico al 80% y cido peractico del
0.2% es muy efectiva para inactivar a virus lipdicos y no
lipdicos. Es inactivo frente a las esporas (stas pueden
contaminar las soluciones); por esta razn no es considerado
un desinfectante de tan alto nivel.
Perxido de hidrogeno: Posee propiedades antispticas y es
el ms utilizado en el mercado en formulaciones del 5% al 20%.
Se ha utilizado como desinfectante y esterilizante qumico por
inmersin. El perxido de hidrgeno tiene efectos oxidantes por
producir OH y radicales libres, los cuales atacan a los
componentes esenciales de los microorganismos como
lpidos, protenas y ADN. Se degrada rpidamente en
oxgeno y agua, por lo que precisa estabilizadores para su
conservacin. Es un agente oxidante de efecto fugaz por

ser descompuesto por las catalasas de los tejidos.

Es activo frente a bacterias y virus, segn la concentracin y
condiciones de utilizacin. Estudios in vitro de soluciones de
perxido de hidrgeno al 3% han mostrado amplio espectro
de eficacia, con mayor actividad frente a bacterias gram
positivas como el S.aureus.
La conclusin de los estudios realizados con el perxido de
hidrgeno es que este agente no influye negativamente sobre
la curacin de heridas, pero es inefectivo en reducir la
cantidad de bacterias, sin embargo este compuesto puede
ser til como agente qumico debridante.
Merthiolate: Es un bacteriosttico (no produce la muerte de
microorganismos, impide su reproduccin), necesitando
grandes concentraciones para alcanzar efectos
bactericidas.
Inhiben la actividad enzimtica por unin del mercurio con
los grupos sulfhifdrilo de las mismas. En grandes
concentraciones, inhibe la reproduccin de bacterias
grampositivas, como Staphylococcus aureus.
Estas sustancias estn fuera de uso debido a:
Aumento por parte de los microorganismos de la resistencia al
mercurio
Poseen efectos txicos sobre tejidos y corrosivos sobre
metales
Son poco activos al pH de los lquidos corporales
Se inactivan drsticamente con la presencia de materia
orgnica
Jabn Protex: Desde que se hicieron populares los jabones
antibacteriales en la dcada de los 90, muchos consumidores
empezaron a usarlos en reemplazo de los jabones tradicionales.
Sin embargo, recientemente la Administracin de Alimentos
y Frmacos de los Estados Unidos (FDA) ha sealado
que no existe evidencia que respalde que el jabn
antibacterical previene la proliferacin de grmenes.
La mayora de jabones antibacteriales tiene entre sus
principales componentes qumicos al triclosn, un agente
antimicrobiano que se encuentra en jabones comunes del
hogar, champs y cremas dentales, puede adherirse en el
interior de la nariz humana y comenzar una colonizacin de
las bacterias Staphylococcus aureus, y podra predisponer a
algunas personas a la infeccin. Hasta el momento no se ha
podido probar que el jabn antibacterial sea ms beneficioso
para la salud que el jabn tradicional. En esta prueba, pudimos

comprobar la poca eficiencia del jabn antibacterial PROTEX,

frente a la proliferacin de Staphylococcus aureus, tan solo
fijndonos el pequeo halo, casi imperceptible que posee en la
placa.
Puede que con ello, nos hagamos la pregunta: Entonces
Qu de diferente tienen lo llamados jabones
antibacteriales respecto a los jabones tradicionales?

Interpretacin de resultados:
Con lo descrito previamente, notamos que despus de todo, el jabn
antibacterial Protex no deba ser tan efectivo como quiz
suponamos. Asimismo el Methriolato es un compuesto, que
necesita una alta concentracin para poder inhibir la proliferacin de
microorganismos, mas no la muerte de estos. Por lo tanto esto dara
razn, al poco tamao del halo de inhibicin que poseen en el
experimento de las placas. Por otro lado, el alcohol al 70% posee
gran efectividad frente a bacterias Gram positivas y Gram negativas ,
lo que hace que en el experimento, haya podido tener un halo de
mayor tamao que la de los dems antispticos. Por ltimo el
perxido de hidrogeno es un agente oxidante de efecto fugaz,
pues se descompone frente a las catalasas de los tejidos.
Asimismo los radicales antioxidantes que posee ataca a los
componentes esenciales de los microorganismos como lpidos,
protenas y ADN, lo que lo hace efectivo para detener la
proliferacin de bacterias Gram positivas, en especial del
Staphylococcus aureus.

Prueba de diferenciacin bioqumica

Determinar si hay crecimiento y cambios de color del indicador.

Criterios de evaluacin: produccin de cido.

Prueba positiva (+): color amarillo

Prueba negativa (-): color rojo

GLUCOSA:

E. Coli: Naranja amarillento

(+)
S. Aureus: naranja

(+)
SACAROSA:
E. Coli: anaranjado rojizo

(+)
S. Aureus: amarillo

(+)
LACTOSA:

E. Coli: amarillo

(+)
S. Aureus: naranja

(+)
Especificaciones:
El caldo base rojo de fenol; y sacarosa, glucosa o lactosa, son
utilizados para la diferenciacin de cultivos puros, en base a la
capacidad de los microorganismos en estudio (E. Coli y S. Aureus)
para fermentar la glucosa.

Formula:

Peptona de casena.
Cloruro de sodio.
Glucosa, sacarosa o lactosa.

Rojo de fenol.

Explicacin:
La capacidad de las bacterias de fermentar carbohidratos es utilizado
como un criterio para su identificacin.
El medio provee los
requerimientos
nutricionales
para
el
crecimiento
de
los
microorganismos y contiene Rojo de fenol como indicador de pH.
Este indicador fue utilizado en este experimento obteniendo
resultados altamente confiables.
La peptona provee la fuente de nitrgeno para el buen desarrollo de
los microorganismos, el cloruro de sodio mantiene el balance
osmtico del medio y el Rojo de Fenol acta como indicador, virando
de color rojo-naranja a amarillo en presencia del cido producido por
la fermentacin del azcar.

INTERPRETACION DE RESULTADOS:
Tanto la E. Coli como S. Aureus son bacterias anaerobias facultativas,
es decir, pueden desarrollarse bajo condiciones de presin de oxgeno
bajas. Esto les permite obtener energa fermentando Hidratos de
carbono, y generar cidos derivados de los mismos. Por eso
disminuyen el PH de su medio.
Podemos observar que en las muestras de glucosa y lactosa que
contenan E. Coli se tornaron amarillo lo que garantiza la
fermentacin, mientras que la sacarosa se torn rojo anaranjado lo
que tambin confirmara que se dio de manera ms leve.
De igual forma en la muestra que contena cepa de S. Aureus, las 3
muestras con sacarosa, lactosa y glucosa cambiaron su coloracin de
rojo intenso a tonalidades de amarillo-anaranjado confirmando la
fermentacin (positivo).
Nuestros resultados se dieron de la manera que se esperaba,
confirmando el poder de ambas bacterias como fermentadores de
carbohidratos.

CUESTIONARIO:
1. De los microorganismos estudiados Qu estructuras
bacterianas le confieren resistencia trmica? Por qu?
En el caso del Staphylococcus aureus que son Gram-positivos
carentes de endosporas se debe a su capacidad de producir toxinas

que son altamente estables, y resistentes al calor, congelacin e

irradiacin, por lo que una vez formadas en el alimento, es
extremadamente difcil eliminarlas.

Las enterotoxinas estafiloccicas constituyen un grupo heterogneo de

protenas solubles en agua, poseen un peso molecular relativamente bajo que
oscila entre 26 000 y 30 000 daltons. Estas toxinas provienen de cepas
especficas; sin embargo, una cepa de Staphyloccocus aureus puede sintetizar
mltiples serotipos toxignicos. Las enterotoxinas presentan alta
termoestabilidad, requieren al menos 30 min a 100C para ser destruidas. Se
conocen 7 serotipos enterotoxignicos diferentes: A, B, C 1, C2 C3, D, E.
Las enterotoxinas A y D son las ms frecuentemente asociadas con las
intoxicaciones alimentarias, y el tipo B se detecta con mayor regularidad en
infecciones intrahospitalarias.
A su vez la produccin de la enzima termonucleasa (enzima termoestable que
degrada al cido desoxirribonucleico hasta nucletido) tambin aporta
termoestabilidad al microorganismo.La produccin de esta enzima se inhibe
en anaerobiosis y se estimula por la presencia de oxgeno, requiere iones
calcio para su actividad enzimtica, posee un pH ptimo de 8,6 y se precipita
de cultivos fluidos con sulfato de amonio. Su termoestabilidad (resiste
temperatura de 130 C por 16,6 min) es la nica asociacin con el crecimiento
de S. aureus. Esta relacin ha motivado el desarrollo de diferentes mtodos
para detectar esta enzima en el alimento y utilizarla como pesquisaje en los
alimentos susceptibles a la contaminacin de S. aureus.
FUENTE: http://virus.usal.es/web/demo_microali/enterotoxina/set.html
http://www.elika.net/datos/pdfs_agrupados/Documento95/7.Staphylococcus.pdf
2. Cul es el rango de temperatura en el cual los
microorganismos crecen y se multiplican rpidamente y en
funcin de esto, cul sera la temperatura recomendada para
la conservacin de los alimentos? Por qu?
Las bacterias que causan enfermedades, y que pueden
contaminar los alimentos, se clasifican de acuerdo a su rango
de crecimiento. Tenemos a la bacterias mesfitas, que tienen
una temperatura ptima de crecimiento entre los 30 C y 42
C. Estas bacterias detienen su crecimiento alrededor de los 8 C,
temperatura que no las mata; tampoco mueren a la temperatura de
congelacin de los alimentos (-18 C).
Estas bacterias tienen la propiedad de volver a multiplicarse cuando
regresan a temperaturas favorables. Por encima de los 60 C
comienzan a alterarse; si la temperatura llega a 100 C, y se
mantiene por algunos minutos, slo sobreviven las denominadas

esporas. Debido a esta caracterstica de las bacterias con relacin a la

temperatura, hay una zona entre los 10 C y los 60 C que se
considera zona de peligro. Tenemos tambin a las termfilas,
que prefieren el calor y crecen mejor entre los 55 C y 65 y
finalmente a las psicrfilas, las cuales prefieren el fro y su
temperatura para reproducirse est entre los 10 C y 20 C.
No se deben dejar los alimentos que se van a consumir en los rangos
de temperatura ya mencionados, ya que existe la probabilidad de que
esas bacterias se multipliquen. Lo recomendado es cocinar los
alimentos y consumirlos. Si deben conservarse, habr que hacerlo en
heladera por debajo de los 10 C o en conservadoras de calor por
encima
de
los
65
C.
Existe una franja de temperatura peligrosa, entre 5 y 65, en la que
los microorganismos crecen rpidamente.
Los alimentos calientes se deben cocinar a 65 C o ms.
Los alimentos fros deben mantenerse entre 5 y 1 C.
El fro hace ms lento o detiene el desarrollo de las bacterias,
mientras que el calor destruye microorganismos que pueden
alterar las propiedades de un alimento.
Los alimentos cocinados que no vayan
inmediatamente, deben conservarse en fro.

consumirse

Un alimento pre-cocinado se debe recalentar a una

temperatura de 70 C durante 15 segundos antes de ser
consumido, y slo se debe recalentar la cantidad que vayamos
a comer enseguida.

FUENTE:www.um.es/adyv/diversidad/salud/nutricion/con
servacion.php- Universidad de Murcia: Avda. Teniente
Flomesta, n 5 - 30003 - Murcia
3. Qu cuidados debemos practicar frente a la cantidad de
agua extra o intracelular en posibles productos frescos a
temperatura ambiente?
La actividad de agua (aw) es la cantidad de agua libre en el alimento,
es decir, el agua disponible para el crecimiento de microorganismos y
para que se puedan llevar a cabo diferentes reacciones qumicas.
Tiene un valor mximo de 1 y un valor mnimo de 0. Cuanto menor
sea este valor, mejor se conservar el producto. La actividad de
agua est relacionada con la textura de los alimentos: a una mayor
actividad, la textura es mucho ms jugosa y tierna; sin embargo, el
producto se altera de forma ms fcil y se debe tener ms cuidado.
Cuanto menor es la actividad de agua de un alimento, mayor

es su vida til. Es importante diferenciar entre cantidad de agua y

actividad de agua.
El primer trmino hace referencia a la cantidad total de agua
presente en el alimento, aunque puede ser que no est libre para
interaccionar. La actividad de agua, en cambio, hace referencia solo a
la cantidad de agua libre en el alimento y disponible para reaccionar,
es decir, la que puede facilitar la contaminacin del producto.
Las dos maneras ms importantes de reducir la actividad de agua de
los alimentos pasan por el secado y la incorporacin de sal o
azcar para atrapar las molculas de agua. El primer mtodo es
el ms antiguo y, adems de secar, tambin ayuda a formar aromas y
sabores tpicos en los alimentos procesados con este mtodo. Segn
el tipo de alimentos, se utiliza uno u otro mecanismo de secado: para
alimentos slidos como vegetales, frutas o pescado, se utiliza el
secado con aire caliente; para lquidos como la leche, el secado
por aspersin; para mezclas pastosas lquidas, el secado al
vaco; y para una amplia variedad de productos, el secado por
congelacin.
Otro mtodo consiste en agregar sal o azcar a los alimentos.
Este no requiere mquinas especializadas, pero s debe tenerse
mucho cuidado durante su procedimiento. Se aade azcar en las
mermeladas o concentraciones de salmuera en las carnes para
disminuir la actividad de agua. El producto terminado debe evaluarse
para determinar en cifras su actividad de agua.

FUENTE:bnnnnwww.consumer.es/seguridadalimentaria/ciencia-y-tecnologia/2008/03/26/175613.php
4. Qu ejemplos de aplicacin estn basados en la
fisiologa de la presin osmtica?
ESTABILIZACION DE VINOS: Tiene por objeto eliminar un precipitado
de tartrato potsico que disminuye generalmente su valor comercial y
puede hacerse precipitando los tartratos de forma controlada, tras
concentrar el vino por smosis inversa.Hacer pasar el vino a travs de
una smosis inversa, obteniendo, por un lado, un permeado que
representa aproximadamente el 60% del volumen inicial, y por otro,
un concentrado que supone el 40% restante en el que los distintos
productos que no pueden atravesar las membranas.
CONCENTRADO DE ZUMOSDE FRUTAS: La concentracin elimina el
agua, y mantiene el aroma y resto de molculas. La produccin de
zumos concentrados mediante smosis inversa tiene las siguientes

ventajas: No destruye las vitaminas ni se pierden los aromas, al

hacerse a temperatura ambiente.
PRE CONCENTRADO DE SUERO LCTEO: Cuando el suero no se
procesa en la misma planta donde se obtiene, es preciso transportarlo
para su tratamiento. Con la pre concentracin elimina gran parte del
agua existente reduciendo considerablemente los gastos de
transporte.

REDUCIR EL CONSUMO ENERGTICO DE LA EVAPORACIN. Si el suero

lcteo se procesa en la misma planta su pre concentracin mediante
smosis inversa permite reducir los consumos energticos globales de
la fabricacin y aumentar la capacidad de produccin de los
evaporadores existentes.

FUENTE: http://www.lenntech.es/biblioteca/osmosisinversa/que-es-osmosis-inversa.htm
5. Cul es la razn de usar el alcohol de 70%?
El mecanismo de accin de los alcoholes es la desnaturalizacin de
las protenas de los microorganismos. La desnaturalizacin
proteica slo es posible en presencia de agua; por este motivo el
alcohol absoluto presenta un poder bactericida mucho menor que las
mezclas de alcoholes con agua. Podra tener cierta accin
bacteriosttica al inhibir la produccin de metabolitos esenciales para
la divisin celular rpida. Tiene accin bactericida pero poco efecto
residual. Presenta un inicio de accin retardado; por este motivo se
debera dejar actuar dos minutos antes de cualquier procedimiento.
Bactericida de potencia intermedia. Es activo frente a bacterias
Gram positivas y Gram negativas, incluyendo patgenos
multirresistentes (Staphylococcus aureus).
Como elemento de desinfeccin el alcohol diluido con agua en
una proporcin de 70 y 30 es ms efectivo que puro. El
alcohol diluido desinfecta mejor. Si entran en contacto con alcohol
puro, las estructuras externas de los microorganismos se deshidratan
y en ocasiones, forman una capa gruesa que impide el ingreso del
alcohol y protege al microbio. En cambio, el alcohol diluido al 70%
no tiene la capacidad de deshidratar esas capas externas, por
eso penetra en el interior de las bacterias y resulta efectivo para
destruirlas.

FUENTE:http://www.funlarguia.org.ar/Herramientas/Guia
-de-Prevencion-de-Infecciones-Intra-Hospitalarias/Usode-Antisepticos-y-Desinfectantes
6. En un proceso productivo de derivados de frutas. Cul
sera el agente contaminante principal? Cul sera su agente
qumico de control? Qu funcin cumplira este agente?
Proponga un ejemplo.
En un proceso de derivados de frutas nuestros agentes
contaminantes serian bacterias, mohos, y levaduras principalmente.
Por esta razn utilizaramos el Hipoclorito de sdio a 5,25% diluido por
1L de agua. Este agente cumple la funcin de oponerse a la sepsis o
putrefaccin de materiales vivos. Se trata de desinfectantes con baja
actividad txica hacia los tejidos vivos donde se aplican.

FUENTE:
http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/14agquimicos.h
tm

7. Explique el efecto de los desinfectantes y antispticos en el

desarrollo microbiano.
Efecto de los desinfectantes:
Existen varios tipos de desinfectantes con efectos variados en el
crecimiento bacteriano, de acuerdo con el Museo Nacional de la
Salud. El desinfectante tpico detiene el crecimiento de las
bacterias matndolas. Un segundo tipo de desinfectante, el
inhibidor, previene que las bacterias crezcan en el lugar donde se
aplica el qumico. Finalmente, un desinfectante conocido como
"agente bacteriosttico" no mata las bacterias, sino que detiene
temporalmente el crecimiento bacteriano. La proliferacin del uso de
desinfectantes puede causar eventualmente que estos se vuelvan
menos efectivos, de acuerdo con Michigan Company (distribuidora de
desinfectantes). Un desinfectante no puede matar cada microbio
bacteriano. Algunas bacterias sufren una mutacin aleatoria
que las previene de intoxicarse con el desinfectante. Estas
bacterias sobreviven y producen nuevas poblaciones resistentes a ese
desinfectante especfico.
Efecto de los antispticos:
Los antispticos son sustancias antimicrobianas que se aplican a
un tejido vivo o sobre la piel para reducir la posibilidad
de infeccin, sepsis o putrefaccin. Algunos antispticos son
autnticos germicidas, capaces de destruir microbios (bactericidas),

mientras que otros son bacteriostticos y solamente previenen o

inhiben su crecimiento.
Los agentes qumicos afectan a los microorganismos mediante 5
mecanismos de accin:
1. Desnaturalizacin de protenas
2. Rotura de membrana celular
3. Eliminacin de grupos sulfhidrilos
4. Antagonista qumico
5. Oxidacin
En general, el mecanismo de accin de los antispticos y
desinfectantes depende de tres mecanismos bsicos: Capacidad de
coagular y precipitar protenas, alterar las caractersticas de
permeabilidad celular y toxicidad o envenenamiento de los
sistemas enzimticos de las bacterias, que a su vez dependen
del grupo qumico. stos pueden producir la muerte o inhibicin
celular de las bacterias por oxidacin, hidrlisis o inactivacin de
enzimas, con prdida de los constituyentes celulares. Son ms
selectivos.

FUENTE:http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/dermato
logia/v15_n2/pdf/a02.pdf
8. De acuerdo a la capacidad fermentativa de los
carbohidratos por las bacterias estudiadas. Indique los
alimentos que pueden ser potencialmente deteriorados por
esta actividad metablica. Por qu?
En la fermentacin alcohlica, tiene como finalidad biolgica
proporcionar
energa
anaerbica
a
los
microorganismos unicelulares (levaduras)
en
ausencia
de oxgeno a partir de la glucosa. El etanol resultante se emplea
en la elaboracin de algunas bebidas alcohlicas, tales como
el vino,
la cerveza,
la sidra,
el cava,
etc.
En
la
fermentacin
actica,
es
la fermentacin bacteriana por Acetobacter,
un gnero de
bacterias aerobicas, que transforma el alcohol etlico en cido
actico, la sustancia caracterstica del vinagre. La fermentacin
actica del vino proporciona el vinagre debido a un exceso

de oxgeno y es uno de los fallos del vino, un proceso que

degrada sus cualidades. La fermentacin actica es un rea de
estudio
dentro
de
la cimologa.
En la fermentacin butrica es la conversin de
los glcidos en cido butrico por accin de bacterias de la
especie Clostridium butyricum en ausencia de oxgeno.
En la fermentacin lctica, Un ejemplo de este tipo de
fermentacin es la acidificacin de la leche. Ciertas bacterias
(Lactobacillus, Streptococcus), al desarrollarse en la leche
utilizan la lactosa (azcar de leche) como fuente de energa. La
lactosa, al fermentar, produce energa que es aprovechada por
las bacterias y el cido lctico es eliminado.

FUENTE:http://www.unavarra.es/genmic/curso
%20microbiologia%20general/20-bacterias
%20lacticas.htm

Defina:
-Antisptico:
Un antisptico es un tipo de desinfectante que, cuando se aplica
sobre superficies del cuerpo o en tejidos expuestos, destruye o inhibe
el crecimiento de microorganismos en tejidos vivos, sin causar
efectos lesivos. Algunos antispticos se aplican sobre piel intacta o
membranas mucosas, quemaduras y heridas abiertas para prevenir la
sepsis al desbridar o excluir los microbios de estas reas.
-Desinfectante:
Un desinfectante es un producto que permite eliminar las bacterias,
los virus o los microorganismos. La utilizacin de un desinfectante
permite limitar o, incluso, hacer desaparecer completamente,
los riesgos de contaminacin de una enfermedad. En medicina
un desinfectante sirve para limpiar o dar asepsia a todo lo que est
en contacto con un paciente como el material mdico, las camas, los
suelos, las camillas o los pomos de las puertas. Entre los
desinfectantes ms utilizados encontramos la cal viva, el etanol, el
yodo y el cloruro de sodio.
-Bactericida:
Un efecto bactericida es aquel que produce la muerte a una
bacteria. Un efecto bactericida est producido por sustancias
bactericidas. Estas sustancias son secretadas por los organismos
como medios defensivos contra las bacterias. antimicrobianos de
efecto lsico o ltico (Lisis) en las bacterias, provocan una reduccin en
la poblacin bacteriana en el husped o en el uso de sensibilidad

microbiana.
Los
bactericidas
antispticos o antibiticos.

pueden

ser desinfectantes,

-Bacteriosttico:
Sustancia que dificulta la reproduccin bacteriana. Una sustancia
bacteriosttica no produce la muerte de las bacterias, pero al
dificultar o impedir su reproduccin la cepa bacteriana envejece y
desaparece.
-Plasmlisis:
En los vegetales, la semipermeabilidad de la membrana
citoplasmtica y la permeabilidad de la pared celular originan, entre
otros, el fenmeno de plasmlisis. Se produce ya que las
condiciones del medio extracelular son hipertnicas; debido a esto, el
agua que hay dentro de la vacuola sale al medio hipertnico
(osmosis) y la clula se deshidrata ya que pierde el agua que la
llenaba. Finalmente se puede observar cmo la membrana celular se
separa de la pared (la clula se plasmoliza). Si es que este
fenomeno ocurre, la planta corre el riesgo de una muerte segura. Al
menos hasta que consiga agua que llene la vacuola, volvindose la
clula turgente nuevamente y que se recupere.

Bibliografa:

BROOKS,Geo.JanetS.Butel.MicrobiologamdicadeJawetz,Editorial:Mxi
co.ElManualModerno,2005.Pag.48-51

Isabel Arias B1 , Jos Carlos Huguet, Rev Peru Med Exp Salud Publica
2002; 19 (4)

ROJASCAMPOS,Norman.ElLipopolisacaridobacteriano:unapotenteendot
oxinaconmltiplesactividadesbiolgicas.acultaddeMicrobiologa,Universid
addeCostaRica

Paginas web:

http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/13agfisicos.htm#_Toc59451618

http://omarleo168-microbiologia.blogspot.pe/2011/02/accion-de-losagentes-quimicos-sobre.html

http://microbiologiaitt.es.tl/8-.--Efecto-de-factores-f%EDsicos-y-qu
%EDmicos-sobre-el-crecimiento-microbiano.htm