Ao de la Diversificacin

Productiva y del Fortalecimiento

de la Educacin
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL
CALLAO
FACUTAD DE INGENIERIA AMBIENTAL
Y DE RECURSOS NATURALES

Biorremediacion de suelos contaminados

por hidrocarburos
ALUMMNOS:
Rojas Ibarra Benilde
Ramrez Prez, Katty
Ostos Vigo, Katherine
Augusto Jos Orihuela

NDICE
Contenido
ndice.............................................................................................................. 2
INTRODUCCION.............................................................................................. 3
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA...................................................4

1.

1.1.

IDENTIFICACION Y DESCRIPCION DEL PROBLEMA.................4

1.2.

FORMULACIN DEL PROBLEMA................................................4

OBJETIVOS.......................................................................................... 4

1.3

1.3.1

OBJETIVO GENERAL....................................................................4

1.3.2

OBJETIVOS ESPECIFICOS............................................................4

1.4

JUSTIFICACION DEL PROBLEMA......................................................5

1.5

LIMITACIONES.................................................................................... 5
MARCO TEORICO................................................................................... 5

2.

2.1

SUELOS CONTAMINADOS POR HIDROCARBUROS.......................5

2.1.1

El suelo....................................................................................... 5

2.1.2

Suelos contaminados por hidrocarburos...................................6

HIDROCARBUROS.............................................................................. 8

2.2

1.1. Composicin del suelo................................................................................... 9

2.2.1

HIDROCARBUROS BIOGNICOS...............................................10

2.2.2

. HIDROCARBUROS ANTRPICOS.............................................10

2.2.3

ACEITES LUBRICANTES.............................................................10

2.3

DESCRIPCION BOTANICA DEL HONGO.......................................11

2.4

CARACTERISTICAS DEL Pleurotos ostreatus sp...........................12

3.

DESCRIPCION BOTANICA DE PLANTA............................................13

FENOLOGA.................................................................................... 13

3.2
3.3

FORMA DE RECOLECCIN...............................................................14

3.4

CULTIVO DE Aloe arborescens Mill..................................................14

4.

HIPOTESIS Y VARIABLES....................................................................14

IDENTIFICACIN Y DEFINICIN CONCEPTUAL DE VARIABLES.......................14

7.

PARTE EXPERIMENTAL......................................................................16
7.1

FASE LABORATORIO.....................................................................16

7.1.1.2

PROCEDIMIENTO.......................................................................16

7.1.2

PREPARACION DE INOCULOS...................................................17
2

8.

RESULTADOS.................................................................................... 18

8.1

DETERMINACION DE LAS CONCENTRACIONES.........................18

8.2.3

PARAMETRO TEMPERATURA...................................................25

9.1.3

PARAMETRO TEMPERATURA...................................................33

10.

CONCLUSIONES................................................................................ 37

11.

RECOMENDACIONES........................................................................37

REFERENCIALES........................................................................................ 38
ANEXO I:....................................................................................................... 39

INTRODUCCION

Per, un pas con una antigua tradicin minera que se extiende hasta la actualidad y
que gracias a este potencial se posiciona entre los mejores del mundo en materia de
industria extractiva. A nivel mundial y latinoamericano el Per se ubica entre los
primeros productores de diversos metales, (oro, plata, cobre, plomo, zinc, hierro,
estao, molibdeno, teluro, entre otros), lo cual es reflejo de la abundancia de recursos y
la capacidad de produccin de la actividad minera peruana.
La contaminacin por hidrocarburos y metales pesados que afecta significativamente a
los suelos y tal magnitud depende del rea contaminada y tipo de hidrocarburo. Tal es
el caso ocurrido en la regin Loreto, Tramo I del oleoducto Norperuano cerca de 10 mil
barriles de petrleo se derramaron en un suelo que ahora es inutilizable.
De todas las tcnicas posibles para la descontaminacin de un suelo a tratar, merecen
mejor atencin los de degradacin biolgica ya que son tiles para muchos tipos de
residuos orgnicos.
Son procesos naturales que adems no generar un impacto sobre el ecosistema tambin
se puede realizar a un bajo costo. Esto genera muchos beneficios debido a que
mayormente se puede realizar en el mismo sitio con lo cual se elimina el riesgo que
puede causar el transportar materiales peligrosos.
Debido a su capacidad enzimtica, los hongos constituyen uno de los grupos ms
importantes. El Pleurotus ostreatus sp ha sido ampliamente estudiado, demostrando
su importancia degradadora de suelos contaminados por metales pesados (Cd, Zn, Pb)
Est presente investigacin es tanto innovadora ya que radica en el uso de hongos para
remediar suelos contaminados por petrleo con ayuda de una planta. La simbiosis en
ambos es lo que se desea investigar para posteriores estudios.

1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA

1.1.

IDENTIFICACION Y DESCRIPCION DEL PROBLEMA

En los ltimos aos se han implementado una serie de tecnologas para

remediar

los

suelos

contaminados

por

hidrocarburos,

de

estas,

la

biorremediacin ha mostrado mayor eficiencia en la degradacin de los

contaminantes hasta formas menos toxicas, mitigando el impacto ambiental.

1.2.

FORMULACIN DEL PROBLEMA

En la actualidad existen muchos problemas ambientales por derrame de

petrleo crudo, sin solucin efectiva. Por ello al realizar este estudio se plantea
una posicin para solucionar tal impacto. 1 Tanto el Pleurotos ostreatus sp como
el Aloe arborescens Mill son remediadores de suelos contaminados por metales
pesado e hidrocarburos pero, qu pasara si existiera La simbiosis entre el
Pleurotos ostreatus sp y el Aloe arborescens Mill seran una herramienta
eficiente para remediar suelos contaminados por hidrocarburos?
1.3 OBJETIVOS
1.3.1
Biorremediar

OBJETIVO GENERAL
suelos

contaminados

por

hidrocarburos

(Fraccin

de

hidrocarburos F2 (C10-C28)) estudiando el simbiosis entre el hongo Pleurotos

ostreatus sp y el Aloe arborescens Mill.
1.3.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS
1) Determinar el grado de concentracin del suelo contaminado por
hidrocarburos.
2) Efectuar pruebas de laboratorio para determinar la biorremediacion
utilizando el hongo Pleurotos ostreatus sp.
3) Estudiar el comportamiento de la simbiosis frente a las distintas
concentraciones de plomo en la parcela y sobre la calidad de suelo
1.4 JUSTIFICACION DEL PROBLEMA
Las actividades extractivas pueden ocasionar graves daos ambientales,
propiciando la erosin y contaminacin del suelo con hidrocarburos. La
biorremediacin es una alternativa que ofrece un bajo costo. Esta tcnica
1 Biorremediacin de suelos contaminados Por Katherine Torres DelgadoTatiana
Zuluaga Montoya

incluye diferentes procesos tecnolgicos que permiten la recuperacin de suelos

contaminados mediante el cultivo de plantas y la adaptacin de hongos; por lo
cual es necesario conocer la eficiencia de cada especie para acumular metales en
sus tejidos y su resistencia a diferentes concentraciones de contaminantes, as
como las condiciones necesarias para el cultivo y desarrollo de las especies que
favorezcan la biorremediacin de un suelo contaminado.
1.5 LIMITACIONES
1) Medir la concentracin del suelo contaminado antes de iniciar la
biorremediacion y posteriormente requiere un costo elevado. Por lo que
se hizo referencia en proyectos anteriores afines a este.
2) Obtencin de equipos para la medicin de algunos parmetros
2. MARCO TEORICO
2.1 SUELOS CONTAMINADOS POR HIDROCARBUROS
2.1.1 El suelo
El suelo constituye la capa superficial del manto terrestre y su profundidad es
variable. Est formado por partculas minerales, organismos vivos, materia
orgnica, agua y sales. La mayora de los componentes provienen de la
meteorizacin de rocas, descomposicin de restos vegetales y accin de
microorganismos, formando uno de los recursos naturales ms importantes del
planeta.
El suelo es un medio altamente complejo, formado, prevalentemente por tres
fases: slida (50%), lquida y gaseosa. Estas tres fases se pueden organizar de
muy diferentes formas, adquiriendo diversas proporciones para dar lugar a
centenares de tipos de suelos.
Una de las formas de clasificacin de suelos es mediante el tamao de las
partculas que forman su fase slida, tal y como se puede observar en la tabla
adjunta

Tabla 1: Clasificacin de suelos segn el tamao de partculas

La materia orgnica y los compuestos minerales se organizan en el espacio

generando una estructura porosa, donde puede haber agua o aire. En el agua
6

contenida en estos poros hay sales minerales y nutrientes y, por lo tanto, es el

medio

donde

se

puede

desarrollar

la

actividad

metablica

de

los

microorganismos que habitan el suelo.

Figura 1. Esquema de la disposicin en el espacio de los agregados constituyentes de un suelo

2.1.2 Suelos contaminados por hidrocarburos

Los procesos de combustin dan lugar a un tipo de contaminacin difusa que
afecta mayoritariamente a la atmsfera, pero que a causa de procesos de
precipitacin y lixiviado se puede acumular en suelos y sedimentos. En cambio,
las actividades de produccin, transporte y utilizacin de combustibles fsiles
dan lugar a emplazamientos definidos, con la posibilidad de la existencia de un
alto grado de contaminacin.

Los hidrocarburos se encuentran en el suelo en forma de mezclas complejas que

suelen constituir fases lquidas no acuosas.
Los crudos de petrleo son mezclas formadas por diversos miles de compuestos,
mayoritariamente hidrocarburos, formado a partir de la fosilizacin o
diagnesis sufrida por restos orgnicos sometidos a condiciones de elevada
presin y temperatura durante millones de aos. As mismo, contienen
derivados heteroatmicos sulfurados, nitrogenados y oxigenados, en menor
medida, y tambin metales como hierro, vanadio, nquel, en forma de complejos
organometlicos. La composicin qumica de crudos procedentes de diversas
regiones puede presentar gran variabilidad, aunque siempre son las mismas
familias de hidrocarburos, en mayor o menor medida, las presentes en la mezcla
de compuestos:
Hidrocarburos saturados, bsicamente n-alcanos e isoprenoides pero
tambin ciclo alcanos. Contienen el nmero mximo de hidrgenos
posibles.
Hidrocarburos aromticos, mono (con un anillo bencnico) o
policclicos (con ms de uno) y/o con sustituyentes alquilados,
representan entre un 1 y un 20% de los hidrocarburos totales en la
mayora de crudos.
Compuestos polares (resinas y asfaltenos), ms pesantes, con azufre,
nitrgeno y/o oxgeno y pueden contener tambin metales
Figura 2: Estructuras qumicas de diferentes componentes mayoritarios del petrleo

crudo

A partir de la destilacin del crudo de petrleo, se producen diferentes

fracciones, como se puede observar en la tabla 2. Conocer las diferencias entre
los hidrocarburos que forman estas fracciones es imprescindible para entender
su destino ambiental y para prever la dificultad que implicara en un proceso de
biorremediacin. Estas diferencias, a nivel estructural, conducen a diferentes
comportamientos en relacin a la adsorcin a las partculas del suelo y
solubilidad en el agua, entre otros procesos que harn de la descontaminacin,
un proceso ms o menos complicado y/o costoso. El crudo se destila a
temperaturas crecientes y como ms elevada es la temperatura, ms carbonos
tienen los hidrocarburos que se obtienen y diferentes sus usos as como su
peligrosidad y recalcitrancia como contaminantes.
Tabla 2: Fracciones que se pueden obtener en la destilacin fraccionada de un crudo de
petrleo.

2.2HIDROCARBUROS
Los hidrocarburos son compuestos formados por tomos de carbono e
hidrgeno, de gran abundancia en la naturaleza, presentes principalmente en el
9

petrleo. El nmero de carbonos y su estructura qumica determina su

clasificacin. Los hidrocarburos alifticos son de cadena lineal o ramificada y
pueden ser saturados (alcanos) o insaturados (alquenos y alquinos). Los
hidrocarburos de cadenas cclicas, pueden ser saturados (ciclo alcanos) o con
uno o ms anillos bencnicos (aromticos).

1.1. Composicin del suelo

La matriz de un suelo est compuesta por cinco componentes principales: Minerales.
Los materiales minerales constituyen los principales componentes Estructurales de los
suelos y suponen ms del 50% del volumen total. Aire agua. Conjuntamente
constituyen el volumen de poros, que, por lo general, ocupa entre el 25 y 50% del
volumen total. La proporcin aire agua varaconsiderablemente con la humedad del
suelo. Organismos vivos. Ocupan menos del 1% del volumen.Materia orgnica. Oscilan
entre el 3 y 6% del volumen, con valor medio.1.1.1. La fraccin mineral. El mineral
predominante en un suelo es el dixido de silicio (SiO2). Igualmente se encuentran en
abundancia el aluminio y el hierro, mientras que el calcio, magnesio, potasio, titanio,
manganeso, nitrgeno, azufre, sodio y fsforo estn presentes en menor cuanta
(Alexander, 1991). La Composicin qumica vara de un suelo a otro y, en un mismo
suelo, a diferentes profundidades. Los microorganismos obtienen parte de los
nutrientes que necesitan de la fraccin mineral del suelo, siendo dichos nutrientes
nitrgeno, fsforo, potasio, magnesio, azufre, hierro, calcio, manganeso, zinc, cobre y
molibdeno. Sin embargo los microorganismos pueden disponer con facilidad
nicamente de una pequea parte de estos minerales, convirtindolos ms en una
provisin de lento empleo, que en una fuente de rpido uso. Los suelos se clasifican
segn el tamao de sus partculas2 teniendo en cuenta tres componentes principales:

Arcilla. Pasa por un tamiz de 0,002 mm (2 m).

Limo. Queda retenido en el tamiz de 0,002 mm pero pasa a travs del tamiz de

0,05 mm.
Arena. Queda retenida en el tamiz de 0,05mm aunque pasa a travs del de
2mm23

2 En general, la clasificacin segn tamaos est basada en el anlisis

granulomtrico que proporciona el Departamento de Agricultura de los
Estados Unidos (USDA
10

El rea especfica (rea/volumen) de los diferentes tipos de partculas afecta

directamente las propiedades fsicas, qumicas y biolgicas del suelo (Tabla
1.1). La arcilla constituye el tipo de partcula que mayor efecto produce sobre
Las propiedades de un suelo, principalmente debido a la alta actividad superficial que
la caracteriza. La mayor parte de sus partculas son de naturaleza coloidal, tienen una
carga superficial negativa y de forma plana; adems, son buenos absorbentes de agua,
iones y gases.

2.2.1

HIDROCARBUROS BIOGNICOS

Estos son sintetizados por casi todas las plantas, animales terrestres y marinos,
incluyendo la micro biota, bacterias, plancton marino, diatomeas, algas y
plantas superiores (Bedair & Al-Saad, 1992). La sntesis de este tipo de
hidrocarburos est controlada por rutas metablicas, lo cual trae como
resultado mezclas de compuestos de limitada complejidad estructural
relacionada directamente con la funcin biolgica especfica.
2.2.2 . HIDROCARBUROS ANTRPICOS
Son aquellos introducidos como resultado de cualquier tipo de actividad
humana. Los procesos de combustin industrial contribuyen con niveles altos,
debido al humo generado por carbn, combustibles fsiles y petrleo refinado,
las descargas de aguas municipales, las actividades de transporte y los derrames
son algunas de las principales fuentes de estos contaminantes. 4
2.2.3 ACEITES LUBRICANTES
Los aceites lubricantes estn constituidos por una base lubricante y una serie de
aditivos. Dependiendo del uso del aceite, la base lubricante ser mineral
(proveniente del petrleo crudo), sinttica o vegetal, siendo el uso mayoritario
las bases lubricantes minerales.
3 2 Aquellas partculas que quedan retenidas en el tamiz de 2mm de paso
se clasifican como grava o piedra.
4 Maestra en Ciencias del Ambiente Alternativa de biorremediacin con bacterias
autctonas de sedimento contaminado de la Laguna de Tamiahua, Veracruz,
Mxico.Biol. Wendy Lizbeth Mendo Pascual

11

Bsicamente son una mezcla de hidrocarburos parafnicos, naftenicos y

aromticos obtenidos por destilacin de crudos petrolferos (aceites minerales)
o por sntesis a partir de productos petroqumicos (aceites sintticos). La
variacin en la proporcin de los diferentes tipos de hidrocarburos en la mezcla
determina las caractersticas fsicas y qumicas de los aceites.
Una alta fraccin de hidrocarburos parafnicos confiere al aceite una mayor
resistencia a la oxidacin, mientras que un alto contenido de hidrocarburos
aromticos favorece la estabilidad trmica. Para mejorar las caractersticas del
aceite es comn aadir aditivos (Tabla 1), en proporciones de un 15 y un 25% en
volumen de producto terminado estos son de distinta naturaleza y confieren al
aceite propiedades especficas.
Tabla 3. Valores tpicos de composicin de los aceites minerales, indicando
la funcin de diferentes aditivos

2.3DESCRIPCION BOTANICA DEL HONGO

Es fundamental que el hongo que se va a cultivar se identifique correctamente
desde el punto taxonmico, ya que de ello dependern las tcnicas que se
utilizaran en el cultivo.
Nombre cientfico: Pleurotos ostreatus sp
Nombre comunes: Setas, hongo ostra, orejas blanca, orejas de palo.
Sistemtica: La identificacin de las distintas especies de hongos es necesaria
para decidir si son o no apropiadas para el consumo.

12

Taxonoma:
Reino: Fung
Subreino: Fung superior
Clase: Basidiomycetos
Subclase: Eubasidiomycetos
Orden: Agaricales
Familia: Pleurotaceae
Gnero: Pleorotus
Especie: Ostreatus
2.4 CARACTERISTICAS DEL Pleurotos ostreatus sp
La produccin de este hongo es el resultado de la utilizacin de los
residuales de fcil biodegradacin, la cual en una ambiente particular
requiere de la presencia de los microorganismos apropiados, que en mucha
ocasiones pueden consistir en una comunidad microbiana compleja. 5
Para que esto suceda el ambiente debe ser apto tanto pare l crecimiento de
los microorganismos como para la produccin de reacciones qumicos de
transformacin n velocidades significativas.
Hay que tener en cuenta factores que son muy importantes en lo que se
citan: caractersticas del sustrato, concentracin de nutriente, temperatura,
pH, humedad, entre otros.
Las ventajas de cultivas Pleurotus, con respecto a otros hongos son las
siguientes:
Son agentes biolgicos capaces de convertir la materia orgnica no
comestible y de bajo valor econmico en un producto con un importante

valor agregado.
No se requiere de sustratos preformados. Se pueden cultivar en

sustratos sin fermentar previamente.

Fructifica bien en residuos con bajo contenido de nitrgeno produciendo

frutos con alto contenido de ese elemento.

Se caracteriza por un rpido crecimiento micelial que facilita una
colonizacin activa de residuos lignocelulosicos y otro tipo de residuos

contaminantes.
Pueden tolerar altas concentraciones de CO2 en la atmosfera ambiental.

2.5GENERALIDADES SOBRE SU CULTIVO

El cultivo de esta seta es posible realizarlo con diferentes tcnicas, pero en
todas ellas lo fundamental consiste en sembrar el micelio sobre un sustrato
humedito (casi siempre pasteurizado), incubarlo a 20-25 C, mientras
permanece cubierto con plstico y, por ltimo, mantenerlo descubierto en
5 file:///C:/Users/compumega/Downloads/T72379.pdf evaluacin de la produccin
del hongo pleurotos ostreatus sobre cinco tipos de sustratos

13

sitios muy hmedos y frescos, generalmente a , menos de 15 C, hasta que

salgan las setas.
2.6SIEMBRA E INCUBACION
La siembra consiste en mezclar el micelio con el sustrato ya preparado de un
modo uniforme. La cantidad de micelio comercial vara entre 1 y 4 % del
peso hmedo. A mayor cantidad el desarrollo del hongo ser ms rpido y
abundante pero la temperatura tambin ser mayor, lo que perjudicara el
desarrollo del micelio.
El micelio se prepara en laboratorio, germinando las esporas en placas con
agar maltosa u otros medios de cultivo. Despus se hace crecer sobre granos
de cereales esterilizados, y una vez colonizados se realiza la incubacin en
un ambiente cerrado para evitar la contaminacin o la deshidratacin y para
mantener la humedad de 85%.
La duracin de esta etapa puede variar, pero en general es de cuatro
semanas, tiempo que tarda el micelio en cubrir toda la caja y empezar a
aparecer unos puntos pequeos y en cantidad llamados primordios ya que
indican que es el momento de llevarlas a fructificacin.
3. DESCRIPCION BOTANICA DE PLANTA
3.1 DESCRIPCIN
Hierba carnosa generalmente de 50-70 cm de altura. De la parte basal
surgen varios tallos formando un "plantn". Hojas agrupadas hacia el
extremo de los tallos, de 30-40 cm de longitud, con el borde espinosodentado. Flores tubulares, colgantes, rojas, agrupadas en espigas situadas en
el extremo de cortos escapos. Fruto capsular, dehiscente.
3.2 FENOLOGA
Flores entre septiembre y diciembre por espacio de unas 9 semanas. Es
perenne.
3.3FORMA DE RECOLECCIN
Tomar hojas bien desarrolladas y sanas. Lavar antes de consumir. Utilizar
preferentemente frescas o conservarlas en fro.
3.4CULTIVO DE Aloe arborescens Mill.
Se multiplica por propgulos o "hijos", los que se localizan alrededor de la
planta "madre". Presenta pocas exigencias culturales, por lo que desarrolla
bien en todo tipo de suelo ligero. Requiere ser cultivada a pleno sol y puede
ser plantada en macetas.
4. HIPOTESIS Y VARIABLES
14

4.1 FORMULACION DE HIPOTESIS

El sinergismo entre el son una herramienta eficiente para remediar suelos
contaminados por hidrocarburos

IDENTIFICACIN Y DEFINICIN CONCEPTUAL DE VARIABLES

4.1.1 VARIABLE INDEPENDIENTE (X)
X= Simbiosis
4.1.2 VARIABLES DEPENDIENTE (Y)
Y= Suelos contaminados por hidrocarburos
4.1.3 OPERACIONALIZACION DE LAS VARIABLES
VARIABLE

DEFINICION
CONCEPTUAL

DEFINICION
OPERACIONAL

INDICADORES

Se aplica a
la interaccin
biolgica, a
la relacin estrecha y
persistente entre
organismos de
diferentes especies.

Propiedad de cmo se
relacionan el hongo y
la planta para
utilizarse para un
mismo fin.

1. pH
2. Temperatura
3. Humedad

Son suelos que han

sido alterados en su
composicin qumica y
fsica limitando sus
propiedades afines.

Cambio de la
concentracin del
suelo por
hidrocarburo
alterando su uso.

1. Concentracin
de hidrocarburo
(F2)

VARIABLE
INDEPENDIENT
E

Sinergismo

VARIABLE
DEPENDIENTE
Suelos
contaminados
por
hidrocarburos

5. METODOLOGIA DE LA INVESTIGACION
5.1 TIPO DE INVESTIGACIN
El presente trabajo se realizar de investigacin experimental
5.2DISEO DE INVESTIGACIN
Este proyecto es experimental.
5.3COBERTURA DE LA INVESTIGACIN

15

El trabajo de investigacin se efectuara por cuatro personas que por consiguiente sern
responsables del proyecto Biorremediacion de suelos contaminados por hidrocarburos
mediante fitosimbiosis entre el hongo Pleurotos ostreatus sp y el Aloe arborescens
Mill.
5.4POBLACIN Y MUESTRA
El universo del presente trabajo sern las cinco orificios cilndricos que se realiz en la
parcela, y nuestra muestra ser la cantidad de contaminante que absorbe el hongo
Pleurotos ostreatus sp y el Aloe arborescens Mill.

6. LUGAR DE INVESTIGACION
El proyecto de investigacin se llev a cabo en parcela experimental en los alrededores
de la Facultad de Administracin, ubicada en la Universidad Nacional del Callao, cuyas
coordenadas son 10 15` de latitud S, 7747'` de longitud W y cuya altitud es de 5
m.s.n.m.
Figura 3: Ubicacin del lugar de investigacin

7. PARTE EXPERIMENTAL
7.1 FASE LABORATORIO
7.1.1

REACTIVACION DEL MICELIO Pleurotos ostreatus sp

Los hongos necesitan nutrientes ricos en carbono, por esta razn se escogi el
Agar Agar debido a su alto contenido de dextrosa (fuente de C)
7.1.1.1 MATERIALES Y EQUIPOS
16

Cepa de Pleurotos ostreatus sp

5 Placas Petri
1 pinza
Agua destilada
Estufa de cultivo
2 Vasos precipitados
Matraz
Autoclave
Agua de jardn o agua de grass

7.1.1.2 PROCEDIMIENTO

Preparar el medio de cultivo

Preparar 300 ml en 5 placas Petri o 25 ml en cada una

Preparar el medio de cultivo con el agua de jardn o de grass
Pesar 50 g del agua de jardn o de grass
Colocarlo en un Matraz de 500 ml (agua hasta 300 ml)
Hervir hasta que se evapore
Filtrar el grass que queda
Disolver todo el medio de cultivo

Sembrar sobre las 5 placas con Agar

Verter el agua de grass en las 5 placas con Agar

Crecimiento de la cepa en las 5 placas con Agar

Aislar la cepa en las 5 placas con Agar
Introducir en la incubadora por 3 a 5 das
Esperar a que invada por toda la placa Petri

7.1.2 PREPARACION DE INOCULOS

El sustrato es el material sobre el cual crece el micelio. Las propiedades fsicas y
qumicas del sustrato son las que determinan que hongos o que
microorganismos pueden crecer en l. Como sustrato se utiliz granos de arroz.

7.1.2.1 MATERIALES Y EQUIPOS

Medio kilo de arroz

Una estufa
Un matraz
Una olla
1 litro de agua destilada
Bolsas hermticas
Sulfato de Calcio
Pinza
17

7.1.2.2

PROCEDIMIENTO

Preparar el sustrato
Escoger los granos de arroz
Remojar el arroz en agua caliente durante 15 minutos
Pesar 150 g para cada bolsa hermtica que se usara.
Esterilizar en autoclave (20 min a 121 C)

Inocular la cepa en el sustrato

Echar la muestra de la cepa que est en la placa Petri a cada bolsa
hermtica que contiene el arroz
Introducir en la incubadora para su crecimiento
Esperar a que invada todo el cereal listo para el proyecto.

7.2 FASE CAMPO

7.2.1 ACONDICIONAMIENTO DEL AREA DE TRABAJO

Reconocimiento del rea de estudio y habilitacin

Limpiar el rea de trabajo
Se removi la tierra de la parcela
Excavar los hoyos en el rea de trabajo
Formacin de cercos vivos
Delimitar el rea con cuerdas
Tamizar la tierra

7.2.2 PREPARACION DE LOS MATERIALES

Incubar el hongo en la parcela

Sembrar el Aloe arborescens Mill.

8. RESULTADOS
8.1 DETERMINACION DE LAS CONCENTRACIONES
Dimensiones del lugar de trabajo:
2,8 m

C1

C3

18

Blanc
o

3,00
m
C2

C4

Dimensiones de cada orificio

D= 0,60

D= 0. 70

50
cm

50
cm

Foto1: Ubicacin de las muestras en el lugar del trabajo

19

C3

C1

Blanco

C2

C4

Siendo
C1 = 1000 mg /kg MS
C2 = 1100 mg /kg MS
C3= 1200 mg /kg MS
C4= 1300 mg /kg MS

8.2 MEDICION DE LOS PARAMETROS

8.2.1 PARMETRO pH

Se utiliza un potencimetro calibrado para la medicin de los

parmetros en el orificio C1
La medicin de parmetro se hace en el mismo lugar
20

Se obtuvieron los siguientes resultados

Para la C1

Fecha
02 de Mayo
09 de Mayo
11 de Mayo
13 de Mayo
15 de Mayo
16 de Mayo
19 de Mayo
21 de Mayo
23 de Mayo
25 de Mayo
27 de Mayo
29 de Mayo
30 de Mayo
1 de Junio
3 de Junio
5 de Junio
8 de Junio
9 de Junio
12 de Junio
13 de Junio
16 de Junio
18 de Junio
19 de Junio

Blanco
7,53
7,52
7,52
7,51
7,5
7,49
7,47
7,42
7,39
7,36
7,34
7,32
7,33
7,3
7,31
7,27
7,23
7,21
7,22
7,24
7,25
7,27
7,31

C1
8,23
8,16
7,56
7,46
7,21
7,19
6,71
6,65
6,55
6,42
6,23
6,19
6,21
6,32
6,49
6,61
6,65
6,69
6,70
6,72
6,75
6,79
6,81

Para la C2

21

Fecha
23 de Mayo
25 de Mayo
27 de Mayo
29 de Mayo
30 de Mayo
1 de Junio
3 de Junio
5 de Junio
8 de Junio
9 de Junio
12 de Junio
13 de Junio
16 de Junio
18 de Junio
19 de Junio

Blanco
7,39
7,36
7,34
7,32
7,33
7,3
7,31
7,27
7,23
7,21
7,22
7,24
7,25
7,27
7,31

C4 Fecha
02 de Mayo
8,35
09 de Mayo
7,31
11 de Mayo
6,87
13
6,69 de Mayo
15 de Mayo
6,58
16 de Mayo
6,65
19 de Mayo
6,75
21 de Mayo
6,79
23 de Mayo
7,71
25 de Mayo
7,73
27 de Mayo
7,77
29
7,81 de Mayo
30 de Mayo
6,76
1 de Junio
6,89
3 de Junio
7,09
5 de Junio
8 de Junio
9 de Junio
12 de Junio
13 de Junio
16 de Junio
18 de Junio
19 de Junio

Blanco
7,53
7,52
7,52
7,51
7,5
7,49
7,47
7,42
7,39
7,36
7,34
7,32
7,33
7,3
7,31
7,27
7,23
7,21
7,22
7,24
7,25
7,27
7,31

C2
8,22
8,18
7,66
7,54
7,32
7,11
6,81
6,76
6,53
6,31
6,38
6,45
6,53
6,69
6,71
6,77
6,81
6,83
6,85
6,87
6,91
6,97
7,04

Para la C3

22

Para la C4
Fecha
23 de Mayo
25 de Mayo
27 de Mayo
29 de Mayo
30 de Mayo
1 de Junio
3 de Junio
5 de Junio
8 de Junio
9 de Junio
12 de Junio
13 de Junio
16 de Junio
18 de Junio
19 de Junio

Blanco
7,39
7,36
7,34
7,32
7,33
7,3
7,31
7,27
7,23
7,21
7,22
7,24
7,25
7,27
7,31

C3
8,11
7,34
7,37
7,49
7,55
7,68
7,77
6,78
6,85
6,87
6,92
6,94
6,95
6,97
7,09

8.2.2 PARAMETRO HUMEDAD

Se usa el mtodo analtico

La medicin del parmetro se hace en laboratorio
En una bolsa hermtica se introduce una cantidad de suelos, para
luego en laboratorio proceder a pesarlo.
Luego del pesado, se echa al calienta para evaporar todo el
lquido.
Se pesa nuevamente y la diferencia de peso es la variacin de la
humedad.
Se utiliza la siguiente formula

Humedad =

Peso finalPeso inicial

100
Peso incial

23

Se obtuvieron los siguientes resultados

Para la C1 - C2

Fecha
02 de Mayo
09 de Mayo
11 de Mayo
13 de Mayo
15 de Mayo
16 de Mayo
19 de Mayo
21 de Mayo
23 de Mayo
25 de Mayo
27 de Mayo
29 de Mayo
30 de Mayo
1 de Junio
3 de Junio
5 de Junio
8 de Junio
9 de Junio
Para C3

Blanco
18,87
17,98
16,45
16,35
16,12
15,42
15,35
14,22
13,78
14,06
13,15
12,47
18,01
23,11
27,58
28,14
30,15
33,15

C1
21,22
21,19
20,14
19,57
24,14
27,48
23,15
22,57
20,43
19,15
18,63
17,15
20,19
21,15
22,95
25,33
27,28
28,14

C2
32,15
30,15
28,14
31,15
32,47
29,15
30,14
27,11
22,19
21,78
19,45
17,81
20,21
20,82
22,21
25,36
26,48
28,18

24

Fecha
23 de Mayo
Fecha
Blanco
C1
25 de Mayo
02 de Mayo
25
24
27 de Mayo
09 de Mayo
24
25
29 de Mayo
11 de Mayo
24
25
30 de Mayo
13 de Mayo
24
26
1 de Junio
15 de Mayo
25
26
3 de Junio
16 de Mayo
25
27
5 de Junio
19 de Mayo
26
26
8 de Junio
21 de Mayo
25
27
9 de Junio
23 de Mayo
25
27
Fecha
25 de Mayo
25
26
23 de Mayo
27 de Mayo
25
26
25 de Mayo
29 de Mayo
25
26
27 de Mayo
30 de Mayo
25
25
29 de Mayo
1 de Junio
26
27
30 de Mayo
3 de Junio
26
27
1 de Junio
5 de Junio
26
25
3 de Junio
8 de Junio
27
26
5 de Junio
9 de Junio
26
26
8 de Junio
12 de Junio
25
26
9 de Junio
13 de Junio
25
26
16 de Junio
26
26
18 de Junio
25
26
19 de Junio
26
26
TEMPERATURA
Para

Blanco
13,78
C2
14,06
25
13,15
25
12,47
25
18,01
25
23,11
25
27,59
25
28,17
25
30,19
26
33,12
26
Blanco
26
13,78
27
14,06
27
13,15
27
12,47
25
18,01
25
23,11
26
27,59
26
28,17
26
30,19
26
33,12
25
27
36
25

C3
23,41
22,67
21,19
20,59
19,14
19,48
23,15
22,67
20,53
19,25
C4
21,22
21,19
20,14
19,57
24,14
27,48
23,15
22,57
20,43
19,15

C4

8.2.3 PARAMET
RO

Se utiliza un termmetro de alcohol

La medicin de parmetro se hace en el mismo lugar
Se obtuvieron los siguientes resultados

Para la C1 - C2

25

Para C3

26

Para C4

9.
9.1.1

Fecha
23 de Mayo
25 de Mayo
27 de Mayo
29 de Mayo
30 de Mayo
1 de Junio
3 de Junio
5 de Junio
8 de Junio
9 de Junio
12 de Junio
13 de Junio
16Fecha
de Junio
18
23 de
de Junio
Mayo
19
de
Junio
25
Mayo

Blanco
25
24
24
24
25
25
26
25
25
25
25
25
26
Blanco
25
26
24

C3
26
27
27
28
28
29
28
26
25
24
24
24
233
C
25
28
25
29

27 de Mayo
29 de Mayo
30 de Mayo
1 de Junio
3 de Junio
5 de Junio
8 de Junio
9 de Junio
12 de Junio
13 de Junio
16 de Junio
18 de Junio
19 de Junio

24
24
25
25
26
25
25
25
25
25
26
25
26

28
28
27
27
26
26
26
26
25
25
24
24
24

ANALISIS DE
RESULTADOS
PARMETRO pH
Grafico 4:

Valores de pH del Blanco

27

7.6
7.5
7.4
pH

7.3
Blanco

7.2
7.1
7
0

10

15

20

25

Tiempo (das)

Grfico 5: Valores de pH del C1

9
8
7
6
5
pH 4
C1

3
2
1
0
0

10

15

20

25

Tiempo (das)

Grafico 6: Valores de pH del C2

28

9
8
7
6
5
pH 4
C2

3
2
1
0
0

10

15

20

25

Tiempo (dias)

Grafico 7: Valores de pH del C3

8.5
8
7.5
pH

C3

6.5
6
0

10

12

14

16

Tiempo (dias)

Grafico 8: Valores de pH del C4

29

9
8
7
6
5
pH 4
C4

3
2
1
0
0

10

12

14

16

Tiempo (dias)

Grafica 9: Valores de pH para todas las muestras

9
8
7
6
Blanco

5
pH 4

C1

C2

C3
C4

1
0
0

10

15

20

25

Tiempo (dias)

Notamos que la variacin del pH del blanco es casi lineal, mientras que los
valores de las concentraciones varan con el tiempo.

9.1.2 PARAMETRO HUMEDAD

30

Grafico 10: Variacin de la humedad del Blanco

35
30
25
20
Humedad 15

Blanco

10
5
0
0

8 10 12 14 16 18 20

Tiempo (dias)

Grafico 11: Variacin de la humedad del C1

30
25
20
Humedad

15
C1

10
5
0
0

10 12 14 16 18 20

Tiempo (dias)

Grafico 12: Variacin de la humedad del C2

31

35
30
25
20
Humedad 15

C2

10
5
0
0

10 12 14 16 18 20

Tiempo (dias)

Grafico 13: Variacin de la humedad del C3

12
10
8
Humedad

6
C3

4
2
0
0

10 12 14 16 18 20

Tiempo (dias)

Grafico 14: Variacin de la humedad del C4

32

12
10
8
Humedad

6
C4

4
2
0
0

10 12 14 16 18 20

Tiempo (dias)

Grafico 15: Variacin de la humedad para todas las muestras

35
30
25
20

Blanco
C1

Humedad 15

C2

10

C3
C4

5
0
0

8 10 12 14 16 18 20

Tiempo (dias)

Debido a que la humedad del suelo se vea variando debido a que el grupo rego
las plantas 3 veces por semana se calcul el % de humedad del suelo solo los
das en los que se tomaban los datos

9.1.3 PARAMETRO TEMPERATURA

Grafico 16: Variacin de la Temperatura para el blanco
33

27.5
27
26.5
26
25.5
Temperatura

25
24.5

Blanco

24
23.5
23
22.5
0

10

15

20

25

Tiempo (dias)

Grafico 17: Variacin de la Temperatura para C1

27.5
27
26.5
26
25.5
Temperatura

25
24.5

C1

24
23.5
23
22.5
0

10

15

20

25

Tiempo (dias)

Grafico 18: Variacin de la Temperatura para C2

34

40
35
30
25
Temperatura

20
15

C2

10
5
0
0

10

15

20

25

Tiempo (dias)

Grafico 19: Variacin de la Temperatura para C3

12
10
8
Temperatura

6
C3

4
2
0
0

10

15

20

25

Tiempo (dias)

Grafico 20: Variacin de la Temperatura para C4

35

12
10
8
Temperatura

6
C4

4
2
0
0

10

15

20

25

Tiempo (dias)

Grafico 21: Variacin de la Temperatura para todas las

muestras

40
35
30
25
Temperatura

Blanco

20

C1

15

C2

10

C3

C4

0
0

10

15

20

25

Tiempo (dias)

10. CONCLUSIONES
36

A travs de este proyecto se presentar y se demostrar los beneficios

de la biorremediacin como mtodo de limpieza de suelos
contaminados por hidrocarburos que es una alternativa viable con el
hongo Pleurotus Ostreatus, que tiene la capacidad de hacer simbiosis

con la sbila.
Ambos son ideales para la biorremediacion de suelos que han sido
contaminados por hidrocarburos ya que poseen una propiedad de
hiperacumulacion de sustancias toxicas evalundose la eficacia en

relacin con el hidrocarburo presente en la muestra.

A partir de este estudio se da hincapi a la contaminacin minera que
existe en nuestro pas y lo poco que ha sido cuidada, dando una
opcin econmica para mejorar el ambiente que nos rodea y de la
cual somos beneficiaros.

11. RECOMENDACIONES

Desde la primera etapa del proyecto hasta el trmino del proyecto se

recomienda tener las siguientes consideraciones.

Despus del plantado se recomienda regar la planta peridicamente

dejando un daAntes del regado se debe remover la tierra desde el nivel radicular

para que en el momento del regado permita la oxigenacin del suelo.

En el momento de la medicin de los parmetros se deben de hacer
con los respectivos equipos de proteccin, ya que el suelo est

contaminado por hidrocarburo

En lo que respecta en la metodologa, en el laboratorio se recomienda
tener rotulados los crisoles para la medicin de la humedad en la

estufa
En la medicin del pH se debe utilizar un potencimetro calibrado.
Extraer la muestra de suelo de la zona radicular para obtener un
valor representativo

REFERENCIALES
1. http://www.bdigital.unal.edu.co/815/1/32242005_2009.pdf

37

2. file:///C:/Documents%20and
%20Settings/Administrador/Escritorio/Suelos/236T0045.pdf
3. file:///C:/Documents%20and%20Settings/Administrador/Mis
%20documentos/Downloads/3294%20(2).pdf
4. www.plomoambienteperu.com
5. http://www.uv.mx/pozarica/mca/files/2012/10/WENDY-L.-MENDOPASCUAL.pdf
6. https://books.google.com.pe/books?
id=Nxb3iETuwpIC&pg=PA33&dq=bacterias+biorremediacion+petroleo&hl
=es&sa=X&ved=0CBoQ6AEwAGoVChMI94LN_vjhyAIVhFkmCh1QDQ1L#
v=onepage&q=bacterias%20biorremediacion%20petroleo&f=false
7. https://books.google.com.pe/books?id=8TBF3JbVzkC&pg=PA325&dq=bacterias+biorremediacion+petroleo&hl=es&
sa=X&ved=0CDIQ6AEwBGoVChMI94LN_vjhyAIVhFkmCh1QDQ1L#v=one
page&q=bacterias%20biorremediacion%20petroleo&f=false

ANEXO I:

CRONOGRAMA DE TRABAJO

S E M A M A

38

ACTIVIDAD

Reconocimiento del rea de estudio y

habilitacin
Acondicionamiento de la parcela
Limpieza de la parcela
Remocin de la tierra
Cercos vivos
Acondicionamiento del proyecto
Perforacin a las parcelas
Tamizado
Contaminacin de suelos con hidrocarburos
Compostaje - Humus
Plantacin de alfalfa y sbila
Trabajo de laboratorio
Anlisis

2 3 4 5

1
0

1
1

1
2

1
3

1
4

x
x x x
x
x x
x
x
x

x
x
x

x
x
x

x
x
x

x x x

ANEXO II
CRONOGRAMA DE ANALISIS DE TEMPERATURA
Anlisis (T,
pH)
1 anlisis (T,
pH)
2 anlisis (T,
pH)
3 anlisis (T,
pH)
4 anlisis (T,
pH)
5 anlisis (T,
pH)
6 anlisis (T,
pH)

1 2

3 4

5 6

D I
A S
7 8 9
1 11 12 13
0

1
4

15 16

17

x
x
x
x
x
x
39

1 19
8

20

7 anlisis (T,
pH)
8 anlisis (T,
pH)
9 anlisis (T,
pH)
10 anlisis (T,
pH)
11 anlisis (T,
pH)
12 anlisis (T,
pH)
13 anlisis (T,
pH)
14 anlisis (T,
pH)
15 anlisis (T,
pH)
16 anlisis (T,
pH)
17 anlisis (T,
pH)
18 anlisis (T,
pH)
19 anlisis (T,
pH)
20 anlisis (T,
pH)

x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x
x

40

ANEXO III
CRONOGRAMA DE ANALISIS DE HUMEDAD

Anlisis
(Humedad)
1 anlisis
(Humedad)
2 anlisis
(Humedad)
3 anlisis
(Humedad)
4 anlisis
(Humedad)
5 anlisis
(Humedad)
6 anlisis
(Humedad)
7 anlisis
(Humedad)
8 anlisis
(Humedad)
9 anlisis
(Humedad)
10 anlisis
(Humedad)

D I A S
1 2 3 4 5 6 7 8 9

1
0

1
1

1
2

1
3

1
4

1
5

1
6

1
7

1
8

1
9

2
0

x
x
x
x
x
x
x
x
x
x

41

42