Citotoxicidad mediada por clulas I

Hasta ahora, a lo largo del curso de inmunologa hemos visto lo que sera la activacin del linfocito T, para el desarrollo
de una respuesta inmune adaptativa que ayudara a los linfocitos B a producir anticuerpos, habra una produccin de
citoquinas que estimularan a clulas granulocticas a producir una serie de factores que tambin estaran mediando la
inflamacin. Vimos tambin como los linfocitos T al ser activados, se proliferan y diferencian a clulas efectoras del tipo
Th, las cuales podan ser Th1 o Th2, y hasta ahora, lo que habamos hecho nfasis era en los efectos de las clulas Th2,
en la colaboracin de los linfocitos B para que estos se diferenciaran en clulas plasmticas productoras de
anticuerpos. En esta clase y la siguiente vamos a enfocarnos en la inmunidad del tipo celular mediada de alguna
manera por Th1 pero de una forma indirecta, es decir, ellas son actores secundarios.
Las Th1 van a reconocer complejos y pptidos antignicos asociados a molculas MHC II y de esta manera ella poda,
al ser activada, reproducir factores solubles que actuaban sobre macrfagos que estaban infectados, y as ellas
exhibieran los patgenos intracelulares. Th2 tambin habamos visto que va a reconocer complejos pptido
antignicos con molculas MHC II, pero en este caso, al ella activarse, a su vez va a producir una citoquina que va a
activar al linfocito B. Hoy les voy a hablar de las clulas T citotxicas (entre otras) que van a reconocer complejos
pptido antignicos unidos a molculas MHC I, y de esta manera al activarse y diferenciarse va a matar la clula que
expresa dicha molcula con el pptido unido.
Cules son los efectores de la inmunidad celular?? Clulas T CD4 tipo Th1, clulas TCD8, clulas NK, clulas NKT y
macrfagos activados por las clulas T (el cual ser el tema de la clase que viene). Ya sabemos que la inmunidad celular
es una clase de inmunidad adquirida, donde no participan anticuerpos y tienen un papel muy importante en el
rechazo de transplantes, en deteccin y destruccin de clulas cancergenas, y deteccin del microorganismo que vive
intracelular; en otras palabras, deteccin y destruccin de clulas propias que estn modificadas, bien sea porque han
sido infectadas por organismos de vida intracelular, o bien sea por una transformacin abrupta.
Qu sera la citotoxicidad celular?? Mecanismo efector esencial en la respuesta inmune, donde los leucocitos van a
reconocer, va a contribuir en la defensa de la anatoma micro celular contra clulas tumorales, y sta citotoxicidad es
muy importante en el rechazo de tejidos alognicos (gurdenlo en un rinconcito de su conocimiento).
Entonces hoy principalmente hablaremos de los linfocitos T CD8, las
clulas NK y superficialmente de las NKT. De ellas, unas
constitutivamente tienen la capacidad de ser citotxicas: las NK, ellas
no necesitan ningn tipo de activacin previa para ellas sembrar
toda la maquinaria metablica y todos sus componentes necesarios
para, en cuanto ellas vean una clula blanco, la destruyan. Otras,
como los linf TCD8, tienen la potencialidad de ser citotxicas, sin
embargo en su fase naive son incapaces de tener mecanismos
citotxicos porque no tienen la maquinaria metablica adecuada,
entonces ellas para poder ser citotxicas tienen que adquirir esas
propiedades. Y tambin pueden haber clulas con actividad
citotxica mediada por un porcentaje mnimo de clulas CD4 que
pueden tener tambin efectos citotxicos, bien sea mediados por citoquinas como el TNF, o por otros mecanismos
que veremos ms adelante.
Nuevamente, hoy hablaremos de: el linfocito T CD8, T CD4, la clula NK, una modificacin de NK que son las clulas K,
que no son ms que NK que han sido activadas por citoquinas, y ellas han complicado su comportamiento y son ms
efectivas en la eliminacin de clulas tumorales, y por ltimo las NKT.
Qu es lo primero que necesita un linfocito T CD8 para poderse activar?? Reconocimiento del antgeno. Existen
diferencias vastas entre lo que sera el reconocimiento del antgeno por clulas CD8 y NK . Ustedes recuerdan que una
de las caractersticas de la inmunidad innata es que no es especfica, y que las clulas NK son componentes de sta,
por ende son clulas que no tienen especificidad por el antgeno, sin embargo, ellas tienen una serie de requisitos para
activarse, donde de por medio, hay un reconocimiento, pero tengan en cuenta que no es especfico. Entonces, los CD8
s son especficos por el antgeno, y tiene restriccin por las molculas de MHC; qu ocurre con el NK? Reacciona

contra clulas que no expresan MHC y esto es lo que determina que stas clulas puedan atacar, ellas tienen unos
receptores que NO son para antgeno, sino que cualquier clula que ellos ven que tiene distribuida la concentracin
de MHC I, o la tiene alterada o disminuida, entonces ellos van a tener la seal suficiente para empezar con sus
mecanismos citotxicos y matar a sta clula blanco.
Repito: el hecho de que ellos (clulas NK) puedan percibir y que esto desencadene una respuesta en l en forma de
matar es que tiene un tipo de receptores que va a poder percibir que la clula blanco no tiene los niveles adecuados
de MHC I, lo cual implica un receptor que luego veremos pero NO ES TCR, no es un receptor para antgeno.

Clulas T Citotxicas (CTL)

Estos son generalidades que ya conocen sobre las clulas T CD8: citotxicas mediante el reconocimiento especfico del
antgeno, y en muchos casos requieren de citoquinas que van a ser producidas por un linfocito T CD4 Th1 (los cuales
van a colaborar, no solo con macrfagos activndolos para destruir los patgenos que nos han infectado, sino tambin
cooperan con los linfocitos T CD8). Tienen restriccin por MHC I. Los Th1 tambin van a activar clulas NK a travs de
las citoquinas, entre ellas la ms importante en este caso es el INF.
No solo es importante la inmunidad antiviral, sino tambin la antitumoral. Ustedes saben que todas las clulas
nucleadas, bajo condiciones normales, van a expresar molculas de MHC I, y aquellas infectadas expresan pptidos
virales unidas al complejo, los cuales sern reconocidos por las clulas T CD8 y esto va a conducir a una actividad
efectora que va a llevar luego a la muerte de la clula infectada. En el caso de las clulas tumorales ya no son
protenas virales obviamente, a menos que sea un tumor inducido por virus, sino que son protenas modificadas que
son las que determinan que la clula se transforme.

Qu se necesita para ste reconocimiento y futura activacin del linfocito

T CD8?? del linfocito T CD8 y su reconocimiento de la clula diana??
algn tipo de sinapsis inmunolgica como sera la interaccin del TCR
pptido-molcula MHC I, pero son muy importantes las molculas de
adhesin tipo LFA-1 y tambin CD2 LFA-3.. Para la estimulacin de la
clula obviamente se requieren los co estimuladores, que aqu no estn
representados. Cmo sera la interaccin inicial? En su funcin de
vigilancia inmunolgica l va circulando, hasta que se consigue con una
clula infectada, la cual va a presentar pptidos unidos a MHC I, y a
travs del LFA1 de ella que se une al I-CAM de la clula infectada, si no
hay una interaccin antgeno especfica sigue circulando y se va
tranquilamente en circulacin.. Si hay un reconocimiento del
pptido unido al MHC, stas uniones de las molculas de
adhesin se hacen ms fuertes y entonces sta clula T
citotxica va a enviar sus seales de muerte (luego veremos
cules son) y despus de satisfacer toda su maquinaria se
separa..
Qu ocurre? Fjense que hay dos condiciones diferentes:
1. Cuando un linfocito T CD8 naive necesita transformarse en
CTL.. Entonces el linfocito T CD8 virgen debe activarse,
proliferar, diferenciarse a clulas citotxicas efectoras.
2. Cuando ya tenemos ste CTL y va a actuar con una clula
diana
AHORA.. Har nfasis en la primera condicin..
Aqu tienen un linfocito T CD4 que est produciendo
anticuerpos.. Uno debera esperar que, al igual que pasa esto
con el linfocito T CD4 (sea Th1 o Th2), el linfocito T CD8 al
reconocer una molcula MHC I que tiene el pptido unido, a
travs de seales co estimuladoras y de interacciones de las

molculas de adhesin, este CD8 T citotxico debera activarse, proliferar y diferenciarse a una CTL, PERO NO SIEMPRE
ES ASI! l en muchos casos necesita de la cooperacin de un linfocito Th1, para que ste le provea de la IL-2, que
aunque l puede producir, no son cantidades suficientes.
Representado en ste cuadrito: aqu tienen los diferentes estadios de este linfocito T CD8 a medida que se va
activando, resulta que su etapa precursora l no expresa receptor de IL-2 como debera de esperarse, no va a producir
IL-2, por lo tanto no prolifera. Una vez que l es activado, empieza a expresar receptores para la IL-2; y si recuerdan
hay un evento simultneo que se empieza a derreprimir el gen que codifica para el receptor de IL-2 y al mismo tiempo
se activa el gen que produce la IL-2, entonces al mismo tiempo que se expresa el receptor comienza a producirse la IL2, pero esta no es en cantidad suficiente como para que stos linfocitos proliferen y se diferencien. Entonces aqu
necesito, por la IL-2 que va a producir la Th1, para que adquiera la maquinaria necesaria para su efecto, que son unos
grnulos citotxicos, lo que le permite a ella matar. Se requieren aprox 5 das para que pase ste linfocito virgen a su
forma efectora.
P qu tiene ms importancia: el INF la IL-2? En ste caso la IL-2, porque ella es el factor de diferenciacin de los
linfocitos T, y el interfern tiene otras funciones.
P en este caso podramos hablar de la bimodalidad de la clula dendrtica para tambin activar al citotxico al expresar
MHC I?? pudiera ser.. Qu hace a la clula dendrtica excelente clula presentadora? Que ella expresa co estimuladores
en una concentracin bastante alta.
FORMAS DE ACTIVACIN DE TCD8
1. Aqu tienen una clula presentadora de antgeno, que normalmente sera
un macrfago.. Ella va a estimular al linfocito TCD4, ella se va a activar y va
a determinar que a travs de sus citoquinas aumente la exposicin de B7,
en este caso.. Y ste determina que por co estimulacin el mismo linfocito
TCD8 produzca IL-2.
2. Otra posibilidad es: la clula
presentadora de antgeno activa la CD4
que producir IL-2 y sta aumenta los
niveles de los receptores para ella en
CD8, generando efectos sobre ste
linfocito TCD8.
3. Otro ejemplo es que la clula
dendrtica (que expresa altos niveles de
B7) activa directamente a las clulas
TCD8 vrgenes. Entonces aqu tienen una
clula dendrtica infectada por virus.. La
clula TCD8 activada va a producir IL-2.
Qu ocurre en el caso de proliferacin
de las CTL memoria?? Recuerden que ya
las memoria son clulas que han visto al
antgeno por primera vez, que ellas se indujeron.. Se originan de una diferenciacin
de unas clulas vrgenes y estn esperando encontrarse al antgeno por segunda
vez y tiene unas caractersticas diferentes a las vrgenes. Si esto ocurre, en el caso
de la CTL memoria, ellas ya tienen una maquinaria adecuada de manera que al
encontrarse con una clula infectada por virus ella puede activarse y empezar a
producir su propia IL-2 necesaria para tener su efecto citotxico, y no requiere de Th.
Continuamos con la segunda parte de la historia.. Aqu tenemos un linfocito Tc que ya tiene la maquinaria y disposicin
para matar, pero volvemos a lo mismo, este tipo de clulas no pueden ir matando alegremente por ah, necesitan una
serie de condiciones que determinan que no pueda matar a todo el mundo.. Esta CTL requiere estrictamente que le
sea presentado (otra vez) el mismo antgeno y en el mismo MHC I que determin que este linfocito se activara cuando

l era virgen. Cuando se dan estas condiciones, para esto necesitamos de molculas de adhesin I-CAM y LFA1, de
manera que se forme un conjugado del linfocito Tc efector con la clula blanco.. Esto va a enviar seales al citoplasma
de las clulas y va a haber un cambio en el citoesqueleto de esta clula, donde habr activacin por rearreglo de
microtbulos y microfilamentos, y esto va a determinar que los grnulos TODOS se polaricen hacia la zona de contacto
con la clula blanco. Estos grnulos van a ser liberados a la zona de contacto por la clula Tc, para despus dejar
moribunda a la clula diana y tranquilamente disociarse y matar a otras clulas que tengan las mismas condiciones. La
clula moribunda muere por apoptosis.
P qu determina que el CTL no salga lesionado en la sinapsis citotxica?? Hay dos razones: unos autores dicen que
existe un gradiente en las sustancias de los grnulos que van hacia la clula diana y al citotxico no le pasa nada.. la
contrapartida de esto es que dicen que hay unas enzimas catepsinas que van a estar en la zona de contacto y
protegen al linfocito Tc para que no se afecte.
Estos seran microfotografas de lo que est ocurriendo: una clula blanco y esto la CTL, y bueno aqu est en dibujito
caricatura.. Donde lo ms importante es que te van mostrando como va variando la positividad de los grnulos, cmo
ellos se van moviendo por el citoplasma hacia diferentes regiones, y como quedan en la etapa final. Esta interaccin
entre la clula citotxica y la clula blanco es lo que se conoce como el beso de la muerte, y est representado aqu
de alguna manera donde en teora esto representa la interaccin del TCR con el MHC I, eso es lo que determina luego
que halla la liberacin de los grnulos que van a inducir la muerte de la clula infectada. Las sustancias en los grnulos
van a abrir un poro en la clula, produciendo su muerte por un choque que no es verdadero.. Las clulas NO
NECESARIAMENTE mueren por choque osmtico..
stos grnulos son ricos en ciertas enzimas.. El grnulo una
vez que llega es dirigido hacia la membrana del linfocito Tc
que luego va a ser excitado y los monmeros de perforina
van a atacar (se van a unir) a la membrana de la clula
blanco y requiere la presencia de calcio para ella
polimerizarse, y eso no les recuerda al C9 del
complemento?? Ella acta de una manera parecida! Si slo
acta perforina, cosa que NO ES AS a menos que halla una
mutacin o sea un modelo experimental manipulado
genticamente, esta clula morir por un choque osmtico
porque estos poros producen un desbalance y la clula
revienta. Aqu les traigo un dibujito de la perforina, no
deben saber mucho de ella pero me pareci que era bien
interesante xq desde hace muchos aos se ha hablado de
ella pero en noviembre del 2010 es que se caracteriza la
molcula como tal completamente.. Y fue publicado en la revista nature. Y aqu tienen representado como sera el
ensamble de la perforina al abrir el poro
Los grnulos no contienen slo perforina, tambin tienen granzima y granulisina. La perforina acta en el paso del
contenido de los grnulos al citoplasma de la clula blanco, ella es una protena de 67kD (en el kuby dice 65, es lo
mismo) pero me parece importante que sepan que es una molcula pequea, tiene multidominios.. Oligomeriza o
polimeriza en presencia de calcio y abre poros en la membrana. Normalmente, una vez que ella acta y abre el poro,
facilita la entrada de las granzimas.
Las granzimas son sernproteasas que van a activar la apoptosis, una vez que ellas entran al citoplasma de la clula
diana. Se han descrito en humanos 5 granzimas diferentes, pero las ms estudiadas son la A, B y C. Por otro lado est
la granulisina, que tiene acciones antimicrobianas que pueden inducir apoptosis; ella acta por despolarizacin de la
membrana mitocondrial.

Existen diferentes formas como puede ser mediada la citotoxicidad: una es la que acabo de hablarles que es a travs
de perforinas o por grnulos.. Otra es por liberacin de enzimas.. Otra es por citoquinas (TNF).. Y a dems nuestro
amigo FAS, muy importante, a travs del cual las clulas citotxicas (bien sea CTL o NK) van a matar.. Qu ocurre?
Tenemos un linfocito T que expresar FASligando que puede tener una forma soluble y al unirse con su FAS
correspondiente determina la muerte de la clula que lo expresa. Cmo el FASL (ligando) es soluble? Hay unas mtalo
proteinazas sobre la superficie extracelular que
participan en el clivaje del FASL de manera que quede
soluble. Ya habamos hablado de por qu la clula que
expresa el FAS es la que muere (en regulacin).. A
dems hay otra muerte inducida por receptores que
sera el receptor para el TNF; estos dos tipos de
receptores inducen muerte en las clulas que las
expresan, ya que ellos pertenecen a la misma familia
(molculas de la familia de receptores de TNF), tienen
un dominio de muerte que van a estar involucrados en
la activacin de caspasas que determinan que las
clulas NO MUERAN por choque osmtico (necrosis),
sino por una muerte celular programada o apoptosis.
Si FAS une a su ligando o TNF se une a su receptor, se
determinar una activacin de este dominio de muerte
y va a ensamblar a estas molculas FADD (en caso de
FAS) o TRADD (en caso de TNF), y esto activa unas
caspasas (en este caso 8 y 10) que en algn punto
divergen o se asemejan, estn intracelulares bajo una
forma inactiva de procaspasa, entonces en la activacin
de FADD las procaspasas se activan a a caspasa y son
proteasas que actan a cadenas infinitas de
interacciones hasta que se puedan activar tambin
nucleasas que inducen la fragmentacin del ADN. Eso es apoptosis.
Entonces de algn modo ocurren los 2 mecanismos que son diferentes pero que en algn punto divergen en una va
comn; el CTL puede matar a travs de la liberacin de grnulos con perforinas y granzimas, donde la perforina abre
el poro, la granzima penetra y activa caspasas y esto conduce a apoptosis; otra va, el FASL del CTL va a unirse al
receptor FAS en la clula diana va a activar caspasas que causarn la muerte por apoptosis.
Existen dos tipos de muerte celular (que ya deberan conocer):
- La necrosis: se pierde organizacin celular y conduce a la inflamacin del tejido intersticial
- En la apoptosis: hay una formacin de cuerpos apoptticos, encogimiento celular, degradacin de cromatina.. Los
eventos son ordenados y sus cuerpos apoptticos son engullidos por clulas fagocticas y no hay inflamacin.
Hay mtodos qumicos para poderlo determinar.
Esto que vemos aqu son clulas que recibieron el golpe letal (efecto de la TCD8 sobre la clula diana) y observamos
los cuerpos apoptticos.
Esto no es para que se lo aprendan, es simplemente por lo grfica que es: fjense la membrana, el citoplasma, el ADN
que se va a fragmentar por las nucleasas.. Aqu tienen FASL, TNF con su receptor.. Y fjense la cantidad de casapasas
que se van activando por el camino hasta llevar a la activacin de nucleasas que fragmentan el ADN cascada de
caspasas.

Clulas NK
Ustedes ya saben cuales son sus caractersticas: son linfocitos, no tienen TCR, no expresan Igs en membrana (por lo
tanto no tienen marcadores ni de T ni de B), se activan por INF, IL-2 e IL-15, su mecanismo de destruccin no es
especfico, pero ya dijimos que s hay requisitos que evitan que ellas vayan matando alegremente; no tienen restriccin
por MHC tipo I pero s lo reconocen; aqu ven los marcadores de superficie de las clulas NK..

Todos saben que las clulas NK son componentes tempranos en la

respuesta del hospedador. Entonces esto est muy bien representado
aqu: se producen
los interferones y
posterior a esto
hay activacin de
NK y muchos das
despus es que la
CTL se pone en
marcha.. Y este grfico es una repeticin de lo mismo, de lo que les
acabo de decir, pero fjense que aqu hay componentes adicionales:
los interferones primordiales seran y , por qu no el ? xq l
necesita que se desarrolle primero la inmunidad adaptativa para
producirse; fjense lo que ocurre en relacin al ttulo de carga viral..
Cuando NK se activa hay un pico de carga viral, que slo va a
disminuir cuando los CTL acten.. O sea, NK es buena pero no tan
eficiente como la activacin de linfocitos Tc.
Actividad citotxica de las clulas NK
Cmo mata la NK? Requiere de un cierto reconocimiento para discriminar a quin tiene que matar y a quin no. Esta
actividad citotxica va a depender de un balance entre seales activadoras e inhibidoras de los receptores de clulas.
Hasta ahora, siempre se les ha dicho que llega un antgeno, se une a un receptor, esto va a dar una seal activadora y
la clula tiene su efecto; aqu en las clulas NK lo ms importante
son las seales inhibidoras. Yo puedo tener una seal activadora,
pero si tengo un receptor inhibidor unido a su ligando, el que
predomina es el efecto de ste ltimo.
Entonces, observen lo que ocurre en una clula normal: uno
debera esperar tener niveles adecuados de MHC I, nosotros en
la clula NK vamos a tener unos receptores activadores y unos
inhibidores, el receptor inhibidor se va a unir a la MHC I y por lo
tanto cuando hay niveles normales de ste el receptor inhibidor
se une y enva seales inhibitorias. De manera que aunque yo
haya unido el receptor activador, la seal es negativa y el NK no
mata.
Qu ocurre cuando la clula tiene una expresin anormal del
MHC I? no se da la seal inhibidora y el NK inicia la
degranulacin para matar a la clula.
Si tienes inhibidor y activador no mata
Si no tienes inhibidor pero s activador mata
Si no tienes inhibidor ni activador no mata
----------en el Abbas estn muy bien explicados los receptores inhibidores y activadores.. Guense por ah------------Yo slo les voy a presentar los mas importantes, que seran el CD19, y los KIR, fjense que ellos son inhibidores porque
tienen una cola intracitoplasmtica que est unida a unas secuencias que son conocidas como ITIM.. Y el TIM de aqu
lo que quiere decir es inhibidor.. cuando se une al receptor las seales que se envan son negativas.
Por otro lado estn unos receptores activadores: CD16 (que recuerdan es el receptor para el Fc de la IgG, estdienlo,
recurdenlo), y Nkp30, Nkp44 y NKp46 tambin.
Los motivos o secuencias intracitoplasmticas son I-CAMs. Cuando el receptor une su ligando debe haber una
transduccin, cmo? Cuando se une un receptor activador que tiene I-CAM intracelulares, va a haber activacin de
tyrosncinasas y va a haber una fosforilacin. Qu pasa con los inhibidores? Sus colas intracitoplasmticas de xxxx van
a activar fosfatasas y ellas van a actuar sobre los motivos intracelulares inhibiendo su fosforilacin.

Cmo se sabe que hay alteracin del MHC?? En las clulas infectadas por virus hay una variacin en la presentacin de
MHC. Las clulas modificadas pueden presentar bajos niveles. Los virus pueden inhibir la sntesis de protenas, entre
ellas, la produccin de MHC inducidos por interferones. Igualmente, las protenas virales pueden bloquear el
ensamblaje. Los virus pueden alterar la glicosilacin de protenas
celulares del hospedador. Y por ltimo, la unin de Receptores
activadores (como NKR-P1) junto con una baja expresin o unin a
Receptores KIR activa a las clulas NK para que maten a las clulas
diana por apoptosis.
Cmo mata la clula NK? Por interaccin FAS-FASL, por liberacin de
grnulos perforina y granzima, y por otros mecanismos que slo
ellas (con respecto a CD8) tienen que es ADCC citotoxicidad
celular dependiente de anticuerpos. Las clulas NK, a travs de su
receptor CD16 se va a unir a una IgG y va a enviar seales de
activacin a la clula NK que va a generar sus grnulos y destruir a
la clula infectada. Hay otras clulas que pueden matar por ADCC,
que son aquellas que tengan receptores para el Fc de las Igs, entre
ellas: macrfagos, neutrfilos, eosinfilos

NKT
Son linfocitos que no pertenecen ni a los linfocitos T ni a los NK,
pero expresan TCR (no convencional). Si recuerdan, una de las
caractersticas de los TCR de los linfocitos es su gran variabilidad,
pero en el caso de las NKT su TCR es invariante!, tiene una cadena
invariante donde la gran mayora de las NKT tienen una regin
variable y una secuencia J, y una cadena seminvariante donde la
regin V es 11. Resulta que stas clulas con sus receptores lo que
reconocen son glicolpidos. Elemento de restriccin? Molcula CD1d (del tipo de molculas de MHC I no clsicas).

TAREA!!!!!
Estudiar a profundidad las clulas NKT
Estudiar valoracin experimental de la citotoxicidad mediada por clulas (Kuby pag 366-368)

Fin! :)
Vero M
22-02-11