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El blanco y el control
por Celia E.Coto*
Profesora Titular Consulta de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. UBA
Investigadora Superior del CONICET.
algo, cuntos tubos dan positivos, cantos animales mueren por efecto de una
droga, cuntas clulas hay en un cultivo, cuntas partculas de metal hay en una
solucin, cuntas bacterias hay en una gota de agua limpia, etc. Los valores
cuantitativos se aplican generalmente cuando se quiere comparar entre muestras
incgnitas o contra una muestra estndar. Pero este concepto lo estudiaremos en
otro captulo de esta serie.
Con los siguientes ejemplos trataremos de aclarar qu significa un blanco o
un control:
Caso 1.
Se desea conocer la presencia de un metal en una muestra de agua (puede ser
cobre, hierro cadmio u otro). Se sabe que hay un reactivo (se denomina as a un
compuesto qumico o mezcla de compuestos qumicos que reaccionan con el
metal en cuestin) digamos, por ejemplo, produciendo un color. Elijamos el azul.
La intensidad del color depender de la cantidad de metal presente en la muestra,
a mayor cantidad ms intensidad tendr el azul.
Para medir la intensidad del color que nos dar una medida de la cantidad de
metal presente en la muestra utilizaremos un aparato llamado colormetro o uno
ms perfeccionado como un espectrofotmetro. En qu consiste la lectura?.
Colocando nuestro tubo de ensayo en el aparato conseguiremos que una luz
atraviese la solucin y que sea recibida por un "sensor" que la convertir en una
medida relacionada con la facilidad conque el rayo de luz pueda atravesar la
solucin. La idea es simple: ms oscura la solucin pasar menos luz.
Para que la lectura de estos aparatos tenga lugar, primero hay que calibrarlos con
una muestra de agua, pero... todo no termina ah Qu pasa cuando nuestro
reactivo es ligeramente coloreado?. La medicin final ser igual a la suma de:
a) color de reactivo + color de reactivo ms metal, con lo que obtendremos una
medicin falsa, porque nuestra incgnita se compar contra agua que es
transparente.
valor
positivo
que
tendremos
en
cuenta
en
el
clculo
final.
b) color de la muestra - color del blanco (control) = lectura incgnita. Ahora s, este
valor expresa la verdadera cantidad de metal presente en la muesta.
En este caso y en casos similares, el uso del control evita obtener mediciones
errneas por exceso, al no tener en cuenta el aporte que hacen al sistema, los
reactivos.
Caso 2.
Nos proponemos encontrar una droga que impida el crecimiento celular con la
esperanza de descubrir un compuesto farmacolgico que eventualmente pudiera
usarse contra el cncer. Antes de realizar una prueba en animales debemos
probar la droga en un sistema celular en el laboratorio.
no.
Veamos el siguiente ejemplo:
Serie
C (control)
5 x 106
A (droga X)
3 x 103
B (droga Y)
1 x 102
despus de
la siembra
conclumos que
se
han incrementado
puede analizar tambin de otra forma, pero resulta ms que evidente el papel
fundamental del control sin el cual no podra arribarse a ninguna conclusin.
Caso 3.
de
sustancia
que
tengo)
se
utiliza
entre
otros
aparatos
el
4.
Los experimentos que se realizan con animales son muy frecuentes, aunque hay
una tendencia a evitar su uso por razones humanitarias y reemplazarlos por otros
sistemas.
Sin embargo, muchas veces son paso indispensable antes de realizar ensayos en
el hombre. Hay muchos tipos de experimentos que se pueden realizar con
animales, en especial, ratones, que por su pequeo tamao son ms manejables
que las ratas. Por otro lado, la experiencia acumulada en la Ciencia a travs de
tanto aos de experimentacin indica que los resultados obtenidos en ratones son
de inmediata aplicacin al hombre. Existen adems ratones endocriados
(obtenidos por cruzamiento entre ratones familiares) y libres de grmenes, de
modo de evitar que el resultado de un experimento sea complicado por la
participacin de microrganismos ajenos a la experimentacin. Vamos a describir el
caso de un experimento en el que se desea conocer el efecto de la infeccin con
un agente patgeno en el ratn. En primer lugar, debemos trabajar con un nmero
relativamente grande de animales, por ejemplo 10, para que los resultados sean
significativos. La nocin de significacin la estudiaremos en otro captulo, para el
ejemplo
que
daremos
no
es
necesario
conocer
su
importancia.
para beber a su disposicin (ad libitum). Todos los das sern revisados y se
registrar el nmero de enfermos o muertos. Como dato final se tendr en cuenta
la mortalidad (nmero total de muertos) y la morbilidad (nmero total deenfermos).
Serie B. 10 ratones similares sern inoculados con la solucin en la que estaba
suspendido el agente patgeno pero sin el agente (placebo). Sern observados
del mismo modo que la serie A y constituye el grupo de animales controles. En el
siguiente cuadro se analizan los resultados de tres experimentos hipotticos.
Serie
Nmero de
animales
enfermos
Morbilidad
%
Nmero de
animales
muertos
Mortalidad
%
Experimento
1
A
B (control)
10
100
10
100
20
10
100
10
100
90
90
20
Experimento
2
A
B (control)
Experimento
3
A
B (control)
Analicemos
los
0
resultados:
Conclusin
Hemos presentado aqu varios ejemplos del papel que el blanco o control
juega en la interpretacin de resultados experimentales, es la forma de
validar que un solo componente presente es el desencadenante de una
respuesta. Por lo temprano de estas clases no quisiera polemizar sobre
algunos factores que a veces entorpecen esta conclusin.
Captulo 2. Las diluciones seriadas
Hay muchas situaciones en que las cantidades de sustancia necesarias para ver
un efecto son extremadamente pequeas (por ejemplo un frmaco para tratar una
enfermedad, una
animal
de
tubo
concentracin ml de H2O
ml solucin x
dilucin
0.5 mg/ml
2 ml
2 ml solucin madre (1
mg/ml)
1/2
0.25 mg/ml
2 ml
2 ml de la solucin 0.5
mg/ml
1/4
0.125 mg/ml
2 ml
2 ml de la solucin 0.25
mg/ml
1/8
tubo
concentracin ml de H2O
ml de solucin x
dilucin
0.01M (10-2)
9 ml
1 ml solucin 0.1M
1/10
0.001M (10-3)
9 ml
1 ml solucin 0.01M
1/100
0.0001M (10-4)
9 ml
1 ml solucin 0.001M
1/1000
Estas diluciones las usaremos en los captulos siguientes para realizar una curva
de calibracin y una curva dosis-respuesta, experiencia que describiremos en el
prximo captulo.
Curva de Calibracin
Dado que se ha trabajado con datos reales, los grficos que se obtienen no son
tan ideales, pero esta situacin no es un obstculo ya que dentro de ciertos
valores es posible trazar la recta ms probable que une una serie de puntos, con
el uso de los programas de clculo de las computadoras.
Hay que advertir que una respuesta lineal no se obtiene en todo el rango de
concentraciones posibles sino dentro de un conjunto de valores que dependen de
numerosos factores dependientes del mtodo de medicin. Por otra parte, este
tipo de curvas no se limita solamente a la determinacin de un elemento o
compuesto qumico sino que tiene mltiples aplicaciones.