Universidad Nacional Autonoma de Mexico

Facultad de Estudios Superiores Cuautitln

Bioqumica Diagnstica
Bioqumica general
Grupo: 1301
Reporte de la prctica No. 8 Reacciones de identificacion de lipidos
Equipo: N 8
Integrantes: Granados Vieyra Omar
Hernndez Tapia Frida Zulema
Len Corts David
Asesores:
Q.F.B. jessica Filisola VIllaseor
Q. Yesica Natali lvarez Pacheco
Fecha de realizacin: 12-Octubre-2015
Fecha de entrega: 19-Octubre-2015

Introduccin
(Eso ya lo paso a mano)
PONDRE:
-fundamento de la cromatografa en capa fina y el uso de mezclas de solventes como
fase mvil
-extraccion de solventes

Objetivos
Observar la solubilidad de diferentes muestra de lpidos, tanto comerciales como
muestras puras, en diversos disolventes, adems de extraer, separar e identificar lpidos
en la yema de huevo, mediante el uso de disolventes orgnicos, cromatografa
bidimensional y reveladores, como la luz UV, ninhidrina, bismuto y molibdeno, para
conocer las caractersticas que afectan la solubilidad de los lpidos, as como las
caractersticas de los lpidos presentes en la yema del huevo.
Metodologa

La indicada en el manual de Bioqumica General, correspondiente a la prctica 8

Extraccin, separacin e identificacin de fosfolpidos pginas 81-84
NOTA: Se especifica una cantidad en el punto 3 del inciso B (Extraccin de fosfolpidos de
yema de huevo), al agregar 64 mL de cloroformo y 36mL de metanol.
Resultados
(los paso directamente a mano)
Anlisis
La glicerina es un compuesto formado por tres grupos hidroxilo, esto quiere decir que es
polar; por lo tanto se disuelve en agua y etanol y es totalmente insoluble en benceno,
cloroformo, la acetona es un disolvente polar aprtico en el que fue insoluble la glicerina,
esto se debe que por ser aprtico no puede formar puentes de hidrgeno, como
consecuencia fue incapaz de solubilizar a la glicerina
El cido oleico es cido graso monoinsaturado de 18 carbonos, esto le da un carcter no
polar y por eso es soluble tanto en benceno como en cloroformo, es insoluble en
solventes polares como el agua y la acetona; se observ una parcial solubilidad en el
etanol debido a que tiene la presencia de un doble enlace, lo que lo hace ms susceptible
a sufrir oxidaciones no enzimticas
El cido palmtico saturado de 16 carbonos, al igual que en la prueba con el cido oleico,
es soluble en solventes orgnicos como el benceno, el cloroformo y la acetona e
insoluble en agua y etanol. Al no tener insaturaciones es totalmente insoluble en agua y
etanol

(Pea 2004)
Tanto el aceite de oliva como el aceite comestible tiene cidos grasos, algunos saturados
y otros insaturados, se encontr que ambos tiene cido palmtico analizado anteriormente,
esto explica su solubilidad en los disolventes no polares, cloroformo y benceno y ser

insolubles en los disolventes polares agua y etanol, en ambos casos se observ el mismo
efecto; en el caso de la acetona fue difcil observar si se solubilizo o no, creemos que esto
se debe a que la acetona se evapora a temperatura ambiente y al tardarnos en
adicionarle al tubo pudimos perder parte de la alcuota, aun as se observa que no
solubilizo a ninguna de las dos muestras.
La leche tiene una gran cantidad de cidos grasos, aunque tambin est formada por un
88% de agua, esto la hace totalmente miscible en el agua y el etanol; e insoluble en los
disolventes orgnicos, puede suceder que los cidos grasos presentes en la leche se
hayan solubilizado en los disolventes no polares, pero por la cantidad de muestra utilizada
es imposible probar esta hiptesis
Hay un margen amplio de error entre resultados debido a que se usaron cantidades de
muestra muy pequeas, y por lo tanto en algunos casos era difcil identificar si se
solubiliza o no

Los lpidos tienen en comn ser insolubles o muy poco solubles en disoluciones acuosas y solubles
en disolventes orgnicos. Los lpidos de la membrana forman hasta tres tipos de enlaces:
interacciones hidrofbicas, que pueden romperse con disolventes apolares como el hexano y el
cloroformo, enlaces de hidrgeno, que necesitan disolventes polares de alta constante dielctrica
para romperse y enlaces inicos, que se rompen actuando sobre el pH; por lo que los lpidos de una
muestra biolgica se pueden extraer mezclandola Con disolventes orgnicos en proporciones
variables. La mezcla ms comn es cloroformo/metanol, basada en el mtodo desarrollado por
Folch y cols : En este mtodo se forman dos fases, los lpidos purificados en la fase inferior

hidrofbica (cloroformo) y los no lpidos en la fase superior hidroflica (hidroalcohlica). La

separacin de estas fases no es completa y los lipidos quedan en la capa clorofrmica
con algunos componentes no lipdicos.
Al momento de calentar la fase clorofrmica y se elimin el cloroformo por evaporacin y qued el
extracto de la mezcla de lpidos. Los lpidos extrados deben ser purificados, porque en la mayora
de los casos estn contaminados por otros compuestos no lipdicos, como protenas hidrofbicas,
aminocidos libres y pigmentos, que se arrastran con los lpidos al usar disolventes polares.

Para la cromatografa bidimensional, a medida que el solvente fu subiendo por la placa

por capilaridad, fu arrastrando a los lpidos. La separacin ocurre por una interaccin
entre los lpidos y su solubilidad relativa en los solventes utilizados. Los lpidos una vez
separados pueden ser ser detectados en las placas mediante distintos mtodos de
tincin. Las molculas que actan como reveladores reaccionan con los dobles enlaces
de los cidos grasos, el fsforo o los grupos amino de la cabeza polar de los lpidos. Las
diferentes especies lipdicas son identificadas en base a su migracin relativa en las
placas y comprobadas con los reveladores.
Las manchas de color son inmediatamente visibles; las incoloras pueden revelarse
mediante Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede usar una fase
estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F25a F366), el nmero que
aparece como subndice nos indica Ia longitud de onda de excitacin del indicador
utilizado"
Una vez realizada la cromatografa, pasamos a su visualizacin. La gran parte de las placas
cromatogrficas contienen un producto indicador fluorescente que permite la visualizacin de
los lpidos que son activos a la luz ultravioleta, concretamente a 254 nm. El indicador absorbe

la luz UV, y emite luz visible, por lo general de color verde. La presencia de un compuesto
activo que se encuentra en el UV evita que dicho indicador absorba luz en la parte en la cual
hemos colocado el producto, lo cual se traduce en ver una mancha en la placa lo que nos
indica la presencia de un determinado compuesto.
Cuando se trata de compuestos que no consiguen absorber la luz UV, la visualizacin del
cromatograma necesita usar un agente revelador. Dicho revelador debe reaccionar con los
productos que son absorbidos dando compuestos de colores. Por lo cual, el revelador a usar
depende del tipo de compuesto que queramos visualizar.

La luz UV revela fosfolpidos con dobles enlaces conjugados, por lo que se deduce que se
obtuvo cido palmtico, cido olico, cido linoleico y cido araquidonico.
El bismuto revela lpidos con colina color naranja-amarillo. Se obtuvieron lipofosfolpidos,
fosfatidilcolina y asfingomielina.
El molibdato reacciona con el fsforo inorgnico dando un color azul marino a los
lpidos fosforilados. La reaccin se basa en que el fosfato inorgnico, en medio cido,
con el molibdato da fosfomolibdato, color amarillo, que es reducido luego por el cido
ascrbico que nos da azul de molibdeno, color azul verdoso. Esto identifica
LIPOVITELENINA y fosfatidilcolina, dos fosfolpidos presentes en la yema del huevo

----> reducido a molibdeno (ESTA REACCIN PONLA COMO EL REPORTE DE ALE)

La ninhidrina es un revelador que sirve para identificar aminocidos, en este caso nos
ayuda a identificar lpidos que tienen aminoacidos; La ninhidrina es capaz de
reaccionar rpidamente con el grupo -amino de los aminocidos, oxidndolo y

liberando amonio. Este se condensa con la ninhidrina reducida y con otra molcula de
ninhidrina para producir un aducto prpura denominado Prpura de Ruhemann

En la yema de huevo encontramos Fosfatidiletanolamina y Fosfatidilserina, ambos

compuestos aminolipidos, no lipoprotenas; ya que la ninhidrina no identifica
lipoprotenas

Conclusiones
Se pudo comprobar la solubilidad de distintas muestras de lpidos en reactivos como
agua, acetona, etanol, benceno y cloroformo. Ningn lpido fue soluble en agua, tal como
lo marca la literatura, e inclusive, hubo muestras lipdicas que no fueron solubles con
ningn reactivo utilizado. Sin embargo, varias muestras lipdicas s fueron solubles, pero
no con todos los reactivos usados.
Por otra parte, se logr identificar distintos tipos de lpidos por medio del mtodo de
cromatografa de capa fina bidimensional y una posterior revelacin de los mismos con
ninhidrina, luz UV, bismuto y molibdato.
Referencias

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