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SINOPSE

Meios de cultura, condies gerais de preparo,

armazenamento e controle de qualidade.

* Assunto: Meios de cultura, condies gerais de preparo,

armazenamento e controle de qualidade.
* Pr-requisito: Conceitos bsicos de Microbiologia.
* Objetivo: Descrever os principais meios de cultura e o seu
preparo na microbiologia.
* Bibliografia:
1 - Descrio dos Meios de Cultura Empregados nos Exames
Microbiolgicos. ANVISA
Paulo Queiroz
Dr. Biologia Animal.

2 Microbiologia Clnica. Murray.

3 Microbiologia Clnica. Oplustil.

Meios de Cultura
Conjunto de substncias, formuladas de maneira adequada, capazes
de promover o crescimento bacteriano, em condies de laboratrio.

Caractersticas Bsicas dos Meios de Cultura

- Fonte de Carbono e Nitrognio
Acares e protenas.

A maioria das bactrias pode ser cultivada em laboratrio, utilizandose meios nutrientes.

- Fonte de Energia
Acares e lipdios.

Diferentes espcies de bactrias, variam extensivamente quanto s

- Fatores de Crescimento
vitaminas e metais.

exigncias mnimas de substncias nutrientes.

- Sais Minerais
microelementos e macroelementos.

- Condies Fsicas
pH, temperatura e aerao.

O crescimento dos microrganismos nos diferentes meios de cultura
utilizados fornece as primeiras informaes para a sua identificao.

- Esterilizao
livre de microrganismos.

importante conhecer o potencial de crescimento de cada meio de

cultura e adequar ao perfil bacteriano esperado para cada material.

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Classificao dos Meios de Cultura

Classificao dos Meios de Cultura

2. Meio de Transporte:

1. Meio de Enriquecimento:
Geralmente

lquido,

de

composio

qumica

rica

em

nutrientes, com a finalidade de permitir que as bactrias contidas em

uma amostra clnica aumentem em nmero.

Consiste em um meio isento de nutrientes, contendo um

agente redutor (Tioglicolato ou cistena). Geralmente mantm o pH
favorvel, previne a desidratao de secrees durante o transporte
e evita a oxidao e auto-destruio enzimtica dos patgenos
presentes.

Exemplo:
Caldo Brain Heart Infusion (BHI) e Caldo

Exemplo:

Tetrationato.

Meio de Stuart, Meio de Cary-Blair e

Caldo Tioglicolato.

Classificao dos Meios de Cultura

Classificao dos Meios de Cultura

4. Meio Diferencial:

3. Meio Seletivo:
A finalidade deste tipo de meio selecionar as espcies que

Possibilita a distino entre vrios gneros e espcies de

se deseja isolar e impedir o desenvolvimento de outros germes

microrganismos, por possuir substncias que permitem uma

(adio de corantes, antibiticos e outras substncias com

diferenciao presuntiva, evidenciada na mudana de colorao ou

capacidade inibitria para alguns microrganismos).

na morfologia das colnias.

Exemplo:
Exemplo:
gar Manitol Salgado e gar SS.

gar

Eosin

Methilene

Blue

(EMB), gar McConkey e gar Hektoen.

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Classificao dos Meios de Cultura

Classificao quanto ao estado fsico

- Lquidos ou caldos:
meio.

5. Meio Indicador:
utilizado no estudo das propriedades bioqumicas das
bactrias, auxiliando, assim, sua identificao. O mais simples
aquele usado no estudo das reaes de fermentao.

crescimento indiscriminado com turvao do

- Slidos: crescimento de colnias isoladas, muito utilizado para

culturas puras.
- Semi-slido:
bacteriana.

adio de menor quantidade de gar, mobilidade

Exemplo:
gar Triple Sugar Iron (TSI) e gar Citrato
de Simmons.

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Meios de Cultura
gar sangue
Meio rico e no seletivo, diferencial para a hemlise, nele
crescem a maioria dos Gram-negativo e Gram-positivo, alm de fungos
filamentosos (bolores) e leveduras, exceto algumas espcies de hemfilos
e outros fastidiosos.

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UTILIDADE

INTERPRETAO

Usado para o isolamento de microrganismos no fastidiosos.

Cor original do meio: vermelho.

Verificao de hemlise dos Streptococcus spp. e Staphylococcus spp.

Beta hemlise: presena de halo transparente

Usado na prova de satelitismo (para identificao presuntiva de

ao redor das colnias semeadas (lise total dos

Haemophilus spp.).

eritrcitos).

CONTROLE DE QUALIDADE

Alfa hemlise: presena de halo esverdeado ao

Hemlise beta hemoltica: Streptococcus pyogenes ATCC 19615 ou

redor das colnias semeadas (lise parcial dos

eritrcitos).

Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Hemlise alfa hemoltica: Streptococcus do grupo viridans ou

Gama hemlise (sem hemlise): ausncia de

Streptococcus pneumoniae ATCC 6305.

halo

Hemlise gama (sem hemlise): Enterococcus faecalis ATCC 29212 ou

ao

redor

das

colnias

(eritrcitos

permanecem ntegros).

Staphylococcus epidermidis ATCC 12228.

Meios de Cultura

Meios de Cultura

gar chocolate

gar Thayer Martin Chocolate

Meio

seletivo

pela

adio

de

colistina, vancomicina e nistatina. Inibe

crescimento de enterobactrias, Grampositivos, fungos e algumas espcies de
Neisserias saprfitas.

Meio rico e no seletivo, permite o crescimento da maioria

das bactrias aerbias e facultativas. Quando incubado em CO2 d
suporte tambm ao crescimento dos microaerfilos.
Pode-se observar halos esverdeados com colnias alfahemolticas. base do meio, adicionado sangue de cavalo,
carneiro ou coelho em temperatura alta, o que faz com que as

Enriquecido

com

adio

de

complementos para a recuperao de N.

hemcias

lisem,

liberando

hemina

hematina,

compostos

fundamentais para o crescimento dos microrganismos.

meningitidis e N. gonorrhoeae.

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UTILIDADE

Meios de Cultura

Crescimento de microrganismos exigentes Haemophilus spp.,

GAR CLED CYSTINE LACTOSE ELECTROLYTE DEFICIENT

Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e Moraxella spp.

CONTROLE DE QUALIDADE
Crescimento bom a excelente: Haemophilus influenzae ATCC
10211.

Usado para isolamento e quantificao de microrganismos

presentes em amostras urina. A deficincia de eletrlitos inibe o vu de
cepas de Proteus.

INTERPRETAO

Cor original do meio: castanho escuro (chocolate).

Colnias de tamanho pequeno a mdio, com

Empregado para isolar e quantificar microrganismos Grampositivos, Gram-negativos e leveduras.

pigmento amarelo: sugestivo de Neisseria spp,

Branhamella catarrhalis ou Moraxella spp.

Colnias pequenas e delicadas, com pigmento

creme claro: sugestivo de Haemophilus spp.

CONTROLE DE QUALIDADE
Positivo:
Lactose positiva: Escherichia coli ATCC 25922: crescimento moderado a
denso, colnias mdias ou grandes amareladas, aps 48 horas de
incubao.
Lactose negativa: Proteus vulgaris ATCC 8427: crescimento moderado a
denso, colnias azuis translcidas.
Negativo: ausncia de crescimento.
INTERPRETAO
Cor original do meio: azul claro.

Meios de Cultura
gar MacConkey
Meio seletivo para Gram-negativo e diferencial para a utilizao de
lactose. O cristal violeta inibe o crescimento de microrganismos Grampositivos especialmente enterococos e estafilococos.
UTILIDADE
Isolar bacilos Gram-negativos (enterobactrias e no fermentadores) e
verificar a fermentao ou no da lactose.

Colnias lactose positiva: cor amarela.

Colnias lactose negativa: cor azul.

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CONTROLE DE QUALIDADE

Meios de Cultura

Positivo: Proteus mirabilis ATCC 12453 (no fermentador de lactose).

Positivo: Escherichia coli ATCC 25922 (fermentador de lactose).
Negativo: Staphylococcus aureus ATCC 25923.

INTERPRETAO
Cor original do meio: rosa avermelhado.
Crescimento de bacilos Gram-negativos.

gar Salmonela-Shigella

Meio seletivo para Salmonela e Shigella e diferencial para a

utilizao de lactose (colorao rsea) e produo de H2S (colorao
negra); possuem componentes (sais de bile, verde brilhante e citrato de
sdio) que inibem microrganismos Gram-positivos.
UTILIDADE

Colnias cor de rosa: fermentadoras de lactose.

Colnias incolores: no fermentadoras de lactose.
No h crescimento de cocos Gram-positivos.

CONTROLE DE QUALIDADE

Selecionar e isolar espcies de Salmonella e Shigella, em

amostras de fezes, alimentos e gua.

Meios de Cultura

Positivo: Salmonella typhimurium ATCC 14028.

Negativo: Staphylococcus aureus ATCC 25923.

LWENSTEIN JENSEN
A base do meio constituda por ovos integrais, o que permite amplo
crescimento das micobactrias e o crescimento satisfatrio para o teste de niacina
(que positivo para Mycobacterium tuberculosis).

INTERPRETAO
CONTROLE DE QUALIDADE
Cor original do meio: vermelho alaranjado.
Colnias com centro negro (H2S) ou colnias incolores: suspeita de Salmonella.
Colnias incolores: suspeita de Shigella spp.
Colnias cor de rosa ou vermelho: suspeita de Escherichia coli ou Klebsiella spp.
As bactrias no fermentadoras de lactose so incolores.

Esterilizao: colocar todos os tubos em estufa;

Crescimento bom a excelente:
Mycobacterium tuberculosis ATCC 25618
Mycobacterium avium ATCC 25291

As bactrias fermentadoras de lactose aparecem na cor rosa.

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INTERPRETAO

Questo - Meio de cultura, no seletivo, que permite o crescimento da

Cor original do meio: verde claro

Positivo: Crescimento de colnias amarelas
Negativo: ausncia de crescimento.

PROCEDIMENTOS

maioria dos microrganismos Gram-positivos e negativos. Permite,

tambm, verificar a atividade hemoltica de alguns microrganismos,
como o S. pyogenes. A descrio acima trata-se do:

A) gar chocolate.

Preparao dos ovos:

B) gar Sangue.

Escovar os ovos, um a um, com escova de cerdas macias;

Deixar os ovos submersos em gua e detergente comum, durante 30 minutos;
Enxaguar com gua corrente cuidadosamente um a um;
Deixar os ovos submersos em lcool etlico a 70% durante 30 minutos;

C) gar CLED;
D) gua Dnase;
E) gar Karmalis.

Retirar os ovos cuidadosamente e secar com pano estril;

Reservar os ovos.

SINOPSE
* Assunto: Esterilizao - mtodos fsicos e qumicos,

Esterilizao - mtodos fsicos e qumicos,

princpios e tipos.

princpios e tipos.
* Pr-requisito: Conceitos bsicos de Microbiologia.
* Objetivo: Descrever os principais tipos de esterilizao
usados na microbiologia.
* Bibliografia:
1 Microbiologia Clnica. Murray.
2 Microbiologia Clnica. Oplustil.
3 - Orientaes Gerais para Central de Esterilizao. Ministrio
da Sade.

Paulo Queiroz
Dr. Biologia Animal.

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Definies

Fatores que influenciam o crescimento microbiano

Esterilizao: destruio ou remoo total dos microrganismos.

Desinfeco: destruio ou remoo de patgenos (forma
vegetativa).

Tipo de microrganismo.

Anti-sepsia: desinfeco da pele, mucosas ou tecidos.

Agentes

Temperatura.

biocidas:

agentes

que

causam

Fase de crescimento.
morte

dos

microrganismos.

Ambiente.

Agentes biostticos: agentes que provocam a inibio do

crescimento.

Mtodos de esterilizao e desinfeco

1 - Mtodos Fsicos
1.1 - Calor
Hmido
Seco
1.2 - Filtrao
1.3 - Radiao
Ionizante
No-ionizante
2 - Mtodos Qumicos
Compostos fenlicos, lcoois, xido de etileno,
halogneos, perxido de hidrognio.

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Mtodos de esterilizao e desinfeco Modos de ao

1 - Dano aos cidos nuclicos
2 - Desnaturao das protenas
3 - Inibio do metabolismo
4 - Ruptura da membrana celular

aqui nessa aula

em vrias

por desnaturao

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H 2 O2
H 2 O + O2
3O2 + O2
2O3 + 2O

O produto atua tambm em

diversos mecanismos de degradao de

H2O2
HO + HO
HO + H2O2
H2O + HO2

aminocidos e na sntese de glicose,

devido ao ser grande poder oxidante.

H 2 O2
H 2 O2 *

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Questo - Os itens I a IV referem-se ao controle de microrganismos:

Desinfectante
E I - O lcool etlico na concentrao de 70% apresenta poder esterilizante.
E II - Os utenslios esterilizados em autoclave apresentam maior esterilidade
que aqueles esterilizados em estufa de esterilizao. So iguais. Diferena

tempo de exposio
E III - A radiao ultravioleta apresenta alto poder de penetrao, podendo
Baixo poder de
ser utilizada para a esterilizao de utenslios embalados.
penetrao
E IV - Os fungos so mais resistentes ao tratamento trmico que as bactrias

esporuladas.
Esto CORRETOS:
a) apenas 1 (um) dos itens acima.
b) nenhum dos itens acima.
c) apenas 2 (dois) dos itens acima.
d) apenas 3 (trs) dos itens acima.
e) todos os itens acima.

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SINOPSE
* Assunto: Determinao de sensibilidade das bactrias aos

Determinao de sensibilidade das bactrias

aos antimicrobianos

antimicrobianos.
* Pr-requisito: Conceitos bsicos de Microbiologia.
* Objetivo: Descrever os mtodos de determinao da
sensibilidade de bactrias a agentes antimicrobianos.
* Bibliografia:
1 Descrio dos Meios de Cultura Empregados nos Exames
Microbiolgicos. ANVISA.
2 - Microbiologia Clnica. Murray.
3 Microbiologia Clnica. Oplustil.

Paulo Queiroz
Dr. Biologia Animal.

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NCCLS - National Committee for Clinical Laboratory Standards

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PROCEDIMENTO TCNICO

ANTIBIOGRAMA

Retirar as placas e os frascos com os discos da geladeira cerca de 20-30

minutos para que adquiram a temperatura ambiente antes da execuo da prova.

Tcnica destinada determinao da sensibilidade bacteriana in vitro

frente a agentes antimicrobianos, tambm conhecido por Teste de Sensibilidade a
Antimicrobianos (TSA).

1 - Com uma ala bacteriolgica em platina

devidamente flambada e resfriada, tocar na colnia
recente (18 a 24h).

A metodologia de Kirby e Bauer para antibiograma a mais difundida e

utilizada at hoje na rotina de anlises clnicas, devido a sua praticidade de
execuo, baixo custo e confiabilidade de seus resultados.
Apesar de sua relativa simplicidade de execuo, a tcnica de Kirby e
Bauer exige que as instrues sejam seguidas rigorosamente de forma que os
resultados obtidos correspondam realidade e possam ser comparados com as

2 - Suspender as colnias em soluo salina

estril (NaCl 0,85%) at se obter uma turvao
compatvel com o grau 0,5 da escala Mac Farland
(1x106 UFC/mL).

tabelas internacionais.

3 - Embeber um swab estril na suspenso bacteriana,

comprimindo-o contra as paredes do tubo para tirar
o excesso da suspenso, e semear em seguida de forma
suave em todas direes na placa (cinco direes),
procurando abranger toda a superfcie.

5 - Com auxlio de uma pina flambada e

resfriada, colocar os monodiscos ou multidiscos,
sobre a superfcie do meio inoculado, exercendo
uma leve presso com a ponta da pina para
uma boa adeso dos discos.
6 - Incubar a placa com os discos em estufa
bacteriolgica a 36 C por 18 a 24 horas.

7 - Resultados:
Com o auxlio de uma rgua, paqumetro ou dispositivo
semelhante, medir o dimetro dos halos inibitrios de
4 - Aguardar (no mais que 15 minutos) a superfcie

cada disco, e consultar uma tabela apropriada para

do gar secar.

determinar

se

bactria

em

anlise

sensvel,

intermedirio ou resistente ao antimicrobiano testado.

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Critrios de interpretao dos resultados

Critrios de interpretao dos resultados

Resistncia intermediria (RI): A categoria RI ao antimicrobiano inclui
cepas cujas CIMs do antimicrobiano se aproximam das concentraes que a droga

Suscetvel (S): A categoria S ao antimicrobiano implica que as cepas

sejam inibidas pela concentrao usualmente alcanada pelo antimicrobiano nos

atinge no sangue e nos tecidos, e cuja taxa de resposta pode ser menor do que
aquela encontrada para cepas S.
RI implica em eficcia clnica em stios corpreos aonde antimicrobiano

tecidos, quando as doses recomendadas do antimicrobiano so utilizadas

adequadamente para o stio da infeco.

fisiologicamente concentrado ou quando uma dose maior do antimicrobiano que a

dose usualmente recomendada pode ser utilizada (exemplo: altas doses de
penicilina so efetivas no tratamento de pneumonia pneumoccica por uma cepa
com RI).

Critrios de interpretao dos resultados

Resistncia (R): A categoria R inclui cepas que no so inibidas pelas

concentraes sistmicas alcanadas pelo antimicrobiano, quando o esquema usual
de doses do antimicrobiano utilizado.

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Questo - Sobre os antibiogramas, incorreto afirmar que:

C

a) No mtodo de difuso do disco, o meio de cultura utilizado o gar

Mueller-Hinton.

b) O mtodo da diluio consiste de uma fita de plstico inerte,

90 x 60 mm
transparente, medindo 5,5 mm de largura por 60 mm de comprimento.

c) O Etest um mtodo quantitativo para avaliar a sensibilidade aos

antimicrobianos, combinando os princpios da difuso do disco e da diluio, e
pode ser utilizado para uma grande variedade de microrganismos, incluindo
leveduras e anaerbios.

d) O mtodo da diluio utilizado para determinar quantitativamente a

menor concentrao do antimicrobiano necessrio para inibir o crescimento
in vitro de um microrganismo.

e) A escala de McFarland utiliza padres de turvao para o preparo de

inculos padronizados de microrganismos.

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