Aplicação de Enzimas No Processamento de Couros: Comparação Entre Processos Químicos e Coenzimáticos

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL
ESCOLA DE ENGENHARIA
DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA QUMICA
APLICAO DE ENZIMAS NO
PROCESSAMENTO DE COUROS:
COMPARAO ENTRE PROCESSOS
QUMICOS E COENZIMTICOS
DISSERTAO DE MESTRADO
Franck da Rosa de Souza
Porto Alegre
2010

APLICAO DE ENZIMAS NO
PROCESSAMENTO DE COUROS:
COMPARAO ENTRE PROCESSOS
QUMICOS E COENZIMTICOS
Franck da Rosa de Souza
Dissertao de Mestrado apresentada como
requisito parcial para obteno do ttulo de Mestre
em Engenharia Qumica.
Orientador:
Prof.a Dra. Mariliz Gutterres
Porto Alegre
2010

A Comisso Examinadora, abaixo assinada, aprova a Dissertao Aplicao

De Enzimas No Processamento De Couros: Comparao Entre Processos Qumicos
E Coenzimticos, elaborada por Franck da Rosa de Souza, como requisito parcial
para obteno do Grau de Mestre em Engenharia Qumica
Comisso Examinadora:
Dra. Mriam Cooper
Prof. Dr. Nilo Srgio Medeiros Cardozo
Prof.a Dra. Patrice Monteiro de Aquim
Agradecimentos
Ao CNPq (Edital MCT/CNPq/CT-Agronegcio 40/2008) e CAPES pelo apoio
financeiro.
professora Mariliz Gutterres, que me orientou neste trabalho, por todo
incentivo, dedicao e amizade.
Ao Programa de Ps Graduao em Engenharia Qumica, pela concesso da
Bolsa.
Aos Bolsistas que trabalharam comigo para o desenvolvimento da etapa
experimental, em especial a bolsista Maria Izabel.
Aos colegas de grupo de trabalho do LACOURO pelas contribuies ao longo
deste trabalho.
Aos amigos do LACOP, pelos momentos de distrao e descontrao e a
todos os ex-colegas de curso que se tornaram amigos.
Aos meus pais que sempre acreditaram no meu potencial, me incentivaram e
torceram pelo meu sucesso.
Gabi, por tornar mais fcil esta jornada, pelo apoio e carinho incondicional,
pela compreenso nos momentos de ausncia e pela presena em todos os
momentos nestes ltimos anos.
Resumo
A procura por tecnologias que minimizem o consumo de gua e o potencial poluidor
da indstria do couro tem aumentado. O uso de enzimas em diversas etapas
produtivas deste processo uma alternativa cada vez mais comum, pois alm de ser
considerada tecnologia limpa, acelera o processo produtivo. O objetivo deste
trabalho foi analisar o desempenho de oito enzimas comerciais (A1, B1, B2, B3, C1,
C2, C3 e C4) fornecidas por trs empresas do setor (A, B e C) em processos
chamados coenzimticos, com teores reduzidos de produtos qumicos, nas etapas
de remolho, depilao/caleiro e purga, por meio da comparao com processos
tradicionais puramente qumicos. Na etapa de remolho foi verificada a influncia do
tempo de processamento, tipo e concentrao de enzima, sendo a pele analisada
quanto ao teor de gorduras e matria voltil e o banho analisado com relao
concentrao de cloretos, slidos
totais, fixos e volteis. Na etapa de
depilao/caleiro foi estudada a influncia do tempo, tipo e concentrao de enzima,

em comparao com dois processos qumicos (tradicional e reduzido), sendo
analisada a pele em diferentes tempos de processo (via anlise de MEV). Na etapa
de purga, o processo foi avaliado com relao ao tipo de enzima aplicada e ao
tempo de processamento. Ao todo foram realizados 24 testes (12 de remolho, 6 de
depilao/caleiro e 6 de purga) e em todos eles, alm das anlises citadas
anteriormente, foram feitas anlises de Carbono Orgnico Total (COT) e Protena
Solvel (mtodo de Lowry) nos banhos. Adicionalmente, foi determinada a atividade
das enzimas A1, B3 e C3 frente ao colgeno e das enzimas A1, B3, C3 e B1 frente a
lipdeos. Em geral, os resultados apontam que os processos coenzimticos
alcanam um maior potencial de remoo de matria orgnica, quando comparado
aos processos puramente qumicos, destacando-se as enzimas C1 no remolho e B1

e B2 na depilao/caleiro. Na purga as enzimas apresentaram desempenho
semelhante, destacando-se as enzimas B3 e C3. Os testes de determinao da
atividade enzimtica demonstraram que a enzima B3 no apresenta atividade frente
ao colgeno, enquanto que as enzimas A1 e C3 possuem atividade frente a este
substrato. J para a atividade lipoltica, o maior desempenho foi verificado para a
enzima A1. A utilizao de enzimas em curtumes tem sua eficcia comprovada na
etapa de purga, recentemente na depilao/caleiro e remolho tambm apresentou
resultados positivos.
Palavras-chave:
coenzimticos
Processamento de couros, biotecnologia, enzima, processos
Abstract
The search for technologies that minimize water consumption and pollution potential
of the leather industry has increased. The use of enzymes in various productive
stages of this process is a common alternative, since it is a clean technology and
accelerates the process. The aim of this study was to analyze the performance of
eight commercial enzyme (A1, B1, B2, B3, C1, C2, C3 and C4) provided by three
companies in the sector (A, B and C) in processes appointed co-enzymatic, with
reduced levels chemicals on the steps of soaking, dehairing/liming and bating, by
comparison with the traditional purely chemical. In the stage of soaking was seen
from the influence of processing time, type and enzymes concentration, being the
skin analyzed for fat content and volatile matter and bath analyzed with respect to the
concentration of chloride, total solids, fixed and volatile. In step dehairing/liming was
studied the influence of time, type and enzymes concentration, compared with two
chemical processes (traditional and reduced) and the skin was treated at different
process times (by SEM analysis). In the bating step, the process was evaluated for
the type of enzyme used and the processing time. Altogether 24 tests were
performed (12 of soaking, 6 of dehairing/liming and 6 of bating) and all of them,
besides the previously mentioned tests were analyzed for Total Organic Carbon
(TOC) and Soluble Protein (Lowry method) in baths. Additionally, it was determined
the activity of enzymes A1, B3 and C3 against the collagen and enzymes A1, B3, C3
and B1 front of lipids. In general, the results indicate that the co-enzymatic processes
reach a greater potential for removal of organic matter when compared to purely
chemical processes, especially the enzymes in the soaking C1, B1 and B2 in
dehairing/liming. In bating, the enzymes showed similar performance, especially
enzymes B3 and C3. Tests for determination of enzyme activity showed that the
enzyme has no activity against B3 to collagen, while the A1 and C3 enzymes have
activity against this substrate. As for the lipase activity, the greatest effects were
observed for the enzyme A1. The use of enzymes in leather processing has proven
effective in purging step recently in soaking and dehairing/liming also had positive
results.
Keywords: Leather processing, biotechnology, enzyme, co enzymatic process
Lista de Figuras
Figura 1: Esquema de um corte de pele ...................................................................... 8
Figura 2: Esquema das molculas de triglicerdeos .................................................. 10
Figura 3: Esquematizao das estruturas presentes no plo .................................... 12
Figura 4: Estrutura de uma tpica molcula de colgeno. (A) Modelo para uma nica
cadeia polipeptdica (B) Modelo representativo de parte do tropocolgeno. ............. 14
Figura 5: Esquema da ao da enzima lisil oxidase sobre o colgeno. .................... 16
Figura 6: Formao da aparncia estriada das fibrilas. (A) visualizao de uma
banda escura. (B) Micrografia de uma fibrila de colgeno......................................... 17
Figura 7: Esquema de um aminocido. ..................................................................... 21
Figura 8: Representao esquemtica de uma ligao peptdica ............................. 23
Figura 9: Esquema de funcionamento do mecanismo chave-fechadura ................... 24
Figura 10: Grfico da velocidade da reao versus concentrao de substrato ....... 29
Figura 11: Fluxograma de processamento do couro ................................................. 33
Figura 12: Esquema de rompimento por reduo das pontes dissulfdicas da cistina
................................................................................................................................... 39
Figura 13: Esquema de hidrlise da pontes de cistina. ............................................. 39
Figura 14: Esquema de rompimento das pontes dissulfetos por agente oxidante. ... 40
Figura 15: Esquema da formao de sabes na etapa de depilao e caleiro. ........ 42
Figura 16: Esquema de uma pele bovina. Principais regies (esquerda) e diviso em
meias peles (direita) ................................................................................................... 50
Figura 17: Fotografia da pele bovina utilizada nos testes .......................................... 50
Figura 18: Esquema de diviso da pele ..................................................................... 51
Figura 19: Fotografia dos fules de bancada utilizados na realizao dos

experimentos ............................................................................................................. 55
Figura 20: Representao do esquema de aleatorizao das amostras de pele para
realizao dos testes. ................................................................................................ 57
Figura 21: Uso de fenolftalena na etapa de desencalagem...................................... 61
Figura 22: Fotografia do microscpio eletrnico de varredura utilizado. ................... 65
Figura 23: Preparao de amostras para as anlises de MEV. (a) amostra de pele
desidratada; (b) amostra de pele metalizada ............................................................. 66
Figura 24: Equipamento de anlises de Carbono Orgnico Total utilizado nos
experimentos ............................................................................................................. 66
Figura 25: Percentual de Matria voltil nas peles para os testes de remolho .......... 71
Figura 26: Concentrao de cloretos em banho para os testes de remolho ............. 72
Figura 27: Concentrao de Slidos totais (ST) em banho para os testes de remolho
................................................................................................................................... 73
Figura 28: Concentrao de Slidos fixos (SF) em banho para os testes de remolho
................................................................................................................................... 74
Figura 29: Concentrao de Slidos volteis (SV) em banho para os testes de
remolho ......................................................................................................................74
Figura 30: Perfis das anlises de ST, SF e SV em banho para os testes de remolho
................................................................................................................................... 75
Figura 31: Percentual de substncias extraveis com diclorometano em peles para
os testes de remolho .................................................................................................. 76
Figura 32: Curva padro e equao da reta para os ensaios de protena solvel .... 77
Figura 33: Protena solvel para os banhos dos testes de remolho .......................... 78
Figura 34: Concentrao de Carbono Orgnico Total para os banhos dos testes de
remolho ......................................................................................................................79
Figura 35: Banhos residuais dos testes de depilao e caleiro ao final do processo
................................................................................................................................... 81
Figura 36: Da esquerda para a direita (testes 1, 2 e 3), peles ao final do processo de
depilao e caleiro ..................................................................................................... 82
Figura 37: Anlise de protena solvel para os banhos dos testes de depilao e
caleiro. ....................................................................................................................... 82
Figura 38: Anlise teor de Carbono Orgnico Total para os banhos dos testes de
depilao e caleiro. .................................................................................................... 83
Figura 39: Imagens das amostras de pele dos testes 1 a 6, da esquerda para direita,
analisadas aps 1 hora do incio do processo de depilao e caleiro, obtidas em
MEV ...........................................................................................................................85
analisadas aps 1 hora e 45 minutos do incio do processo de depilao e caleiro,
obtidas em MEV ......................................................................................................... 86
analisadas aps 2 horas e 45 minutos do incio do processo de depilao e caleiro,
obtidas em MEV ......................................................................................................... 86
obtidas em MEV ......................................................................................................... 87
obtidas em MEV ......................................................................................................... 88
Figura 44: Imagem de uma pele ao final de um teste de caleiro coenzimtico ......... 88
Figura 45: Banhos de purga dos Teste 1 (30 minutos), esquerda, e Teste 2 (3
horas), direita .......................................................................................................... 89
Figura 46: Concentrao de protena solvel dos banhos dos testes de purga ........ 90
Figura 47: Anlise teor de Carbono Orgnico Total para os banhos dos testes de
purga .......................................................................................................................... 91
Figura 48: Caracterizao de atividade de colagenases para a enzima A1 em
diferentes concentraes ........................................................................................... 93
Figura 49: Caracterizao enzimtica de colagenases para as enzimas C3 ............ 94
Figura 50: Caracterizao enzimtica de lipases para as enzimas B1...................... 95
Figura 51: Caracterizao enzimtica de lipases para as enzimas B3...................... 95
Figura 52: Caracterizao enzimtica de lipases para as enzimas C3 ..................... 96
Figura 53: Caracterizao enzimtica de lipases para as enzimas A1...................... 97
Lista de Tabelas
Tabela 1: Dados do setor pecurio (bovino) e coureiro ............................................... 2
Tabela 2: Caractersticas especiais do colagnio ...................................................... 13
Tabela 3: Contedo de aminocidos de relevncia para o colgeno tipo I ............... 15
Tabela 4: Elementos estruturais do colgeno. ........................................................... 18
Tabela 5: Classificao dos aminocidos padres. ................................................... 22
Tabela 6: Classificao de enzima de acordo com o tipo de reao ......................... 25
Tabela 7: Relao dos produtos qumicos empregados na fase de teste das
formulaes ............................................................................................................... 52
Tabela 8: Relao das enzimas utilizadas no experimento ....................................... 54
Tabela 9: Formulaes utilizadas nos testes das etapas de remolho ....................... 58
Tabela 10: Formulaes utilizadas na depilao/caleiro ........................................... 60
Tabela 11: Formulao de desencalagem (para peles divididas).............................. 61
Tabela 12: Formulaes utilizadas na purga ............................................................. 63
Tabela 13: Relao das anlises realizadas aps os testes ..................................... 64
Tabela 14: Resultados obtidos para a caracterizao da pele salgada antes do seu
processamento .......................................................................................................... 70
Tabela 15: Resultados mdios e desvio padro dos ensaios realizados para os
testes de remolho ...................................................................................................... 80
Tabela 16: Resultados mdios e desvio padro das anlises feitas nos testes de
remolho ......................................................................................................................80
testes de depilao e caleiro...................................................................................... 84
testes de purga .......................................................................................................... 92
Sumrio
Introduo .................................................................................................................. 1
1.1.
Objetivos ........................................................................................................ 5
1.2.
Limitaes do Trabalho de Pesquisa............................................................. 5
1.2.
Estrutura do trabalho ..................................................................................... 6
Reviso Bibliogrfica ................................................................................................ 7

2.1.
Pele ............................................................................................................... 7
2.1.1. Estrutura da Pele .................................................................................... 8
Epiderme ................................................................................................ 8
Derme ..................................................................................................... 9
Hipoderme ............................................................................................ 10
2.1.2. Composio da pele (constituintes moleculares) ................................. 10
Triacilgliceris ....................................................................................... 10
Elastina ................................................................................................. 11
Queratinas ............................................................................................ 11
Colgeno .............................................................................................. 13
Matriz extracelular ................................................................................ 20
2.2.
Noes de Bioqumica ................................................................................. 21

2.2.1. Aminocidos ......................................................................................... 21
2.2.2. Protenas .............................................................................................. 23
2.2.3. Enzimas ................................................................................................ 24
Nomenclatura e classificao ............................................................... 25
Mecanismo de catlise ......................................................................... 25
Cintica da reao ................................................................................ 26
A Equao de Michaelis-Menten .......................................................... 26
Fatores que influenciam a atividade enzimtica ................................... 30
2.3.
Processamento de Peles ............................................................................. 32

2.3.1. Operaes de Ribeira........................................................................... 35
Remolho ............................................................................................... 35
Depilao e caleiro ............................................................................... 37
Purga .................................................................................................... 44
2.4.
Uso de Enzimas em Curtumes .................................................................... 45
Metodologia Experimental ...................................................................................... 49

3.1.
Pele ............................................................................................................. 49
3.2.
Produtos Qumicos ...................................................................................... 52
3.3.
Enzimas ....................................................................................................... 53
3.4.
Procedimento Experimental......................................................................... 54
3.4.1. Remolho ............................................................................................... 57
3.4.2. Depilao/Caleiro ................................................................................. 59
3.4.3. Desencalagem...................................................................................... 60
3.4.4. Purga .................................................................................................... 62
3.5.
Mtodos Analticos ...................................................................................... 63
3.6.
Caracterizao Enzimtica .......................................................................... 67
Resultados e Discusso .......................................................................................... 69

4.1.
Caracterizao da Pele Utilizada................................................................. 69
4.2.
Testes de Remolho...................................................................................... 70
4.3.
Testes de Depilao e Caleiro..................................................................... 81

4.3.1. Anlise de MEV .................................................................................... 84
4.4.
Testes de Purga .......................................................................................... 89
4.5.
Caracterizao Enzimtica .......................................................................... 92
Concluses ............................................................................................................... 99
5.1.
Anlise do Setor ........................................................................................ 101
5.2.
Sugestes Para Trabalhos Futuros ........................................................... 102
Anexos .................................................................................................................... 111
Introduo
A produo mundial de couros segue em ritmo de aumento nos ltimos anos.

Conforme Gupta (2000), a contribuio de pases desenvolvidos na produo de
couro declinou de 74% para 47%, enquanto que a produo nos pases em
desenvolvimento aumentou de 26% para 53%, nas ltimas trs dcadas do sculo
XX.
O compndio estatstico mundial de 2010, lanado pela Organizao das
Naes Unidas para a Agricultura e Alimentao, FAO (2010), apontou que, no ano
de 2008, o rebanho de bovinos alcanou a marca de 1,57 bilhes de cabeas de
gado, correspondendo a aproximadamente 6,1 milhes de toneladas de pele
salgada. O comrcio mundial de couros e artigos bovinos evoluiu de US$ 4 bilhes
na dcada de setenta para US$ 58,2 bilhes em 2007 (FAO, 2010).
No Brasil, a indstria do couro tem um papel importante na economia. A
Tabela 1, elaborada a partir de dados do relatrio da FAO apresenta a evoluo do
setor entre a dcada de 90 e o ano de 2007, onde, segundo a FAO, o Brasil ocupa
posio de destaque no setor coureiro, sendo considerado o quarto maior produtor e
o terceiro exportador mundial de couros bovinos.
Segundo dados de 2008 do Centro das Indstrias de Curtumes do Brasil
(CICB), o setor coureiro-caladista movimentou um PIB estimado em US$ 3,5
bilhes, contribuindo com cerca de 8% para o saldo da balana comercial brasileira;
dispe de 800 empresas de produo e processamento de couro e gera em torno de

50 mil postos de trabalho, Silveira (2009). O Rio Grande do Sul, por sua vez,
contribui com o maior nmero de estabelecimentos de curtimento (220 em 2008)
gerando 15.821 empregos no Estado, conforme Santos (2010).
Tabela 1: Dados do setor pecurio (bovino) e coureiro
Dcada de 90
2007
Descrio
145 milhes
224 milhes
Rebanho de cabeas de gado
22,7 milhes
37,6 milhes
Quantidade peles salgadas
454,7 milhes ton
752 milhes ton
Pele salgada produzida
100 ton
6900 ton
Pele salgada exportada
US$ 0,1 milhes
US$ 2,7 milhes
Pele salgada comercializada
21 milhes ton
35 milhes ton
Couro heavy produzido
3800 ton
2700 ton
Couro heavy importado
2100 ton
18200 ton
Couro heavy exportado
US$ 20,2 milhes
US$ 214,5 milhes
Couro heavy comercializado
Fonte: FAO (2010)
Se por um lado, a indstria do couro utiliza como matria-prima um

subproduto da indstria da carne (que poderia resultar em ganho ambiental), por
outro, o processo produtivo, que visa transformao da pele em couro, necessita
de um grande volume de gua e agentes qumicos, o que, somado ao mau cheiro e
a grandes volumes de efluentes, acaba por tornar negativa a imagem desta
indstria.
Os processos de ribeira e curtimento, de acordo com Ramirez et al. (2003),
produzem cerca de 80% da poluio gerada pelos curtumes, destacando-se a
gerao de gases nocivos como sulfeto de hidrognio, lodos contendo cal, enxofre e
cromo, alm do imenso volume de gua que utilizado.
Para Rao et al. (2003), a indstria do couro emprega cerca de 30.000 a
40.000 litros de gua por tonelada de pele processada, gerando em torno de 250 kg
de couro curtido. Transpondo-se estes nmeros para uma escala mundial, o
consumo de gua passa a ser enorme. Segundo Rajamani et al. (2008), o
processamento mdio de couros no mundo de 50.000 ton/dia e a descarga de
efluente superior a 150 milhes l/dia.
INTRODUO
O efluente dos curtumes, segundo Passos (2007), composto principalmente

por matria orgnica, proveniente da pele (sangue, protenas removidas, esterco,
plos dissolvido, gorduras emulsionadas); sais (provenientes dos processos de
conservao da pele); clcio (proveniente do caleiro) e cromo (oriundo das etapas
de curtimento e recurtimento).
Os resduos slidos provenientes do processamento das peles e gerados
como subprodutos em curtumes so de trs tipos:
Restos de peles retirados em etapas anteriores ao curtimento;
Restos de peles curtidas (ou seja, de couro);
Lodos provenientes dos sistemas depuradores de efluentes lquidos.
Segundo Pacheco (2005), para cada tonelada de pele a ser processada, so

geradas as quantidades de resduos mencionadas abaixo:
Resduos de ribeira: 120 kg na forma de recorte e de 70 a 230 kg de

carnaas (muitas vezes a operao de pr-descarne realizada nos
abatedouros, o que pode causar a variabilidade mencionada);
Resduos da etapa de curtimento: 115 kg como recortes e

aproximadamente 100 kg como farelo de rebaixamento;
Resduos da etapa de acabamento: 32 kg na forma de recortes e 2

kg na forma de p.
H ainda uma quantidade de materiais que so extrados por meio de banhos

de tratamento e que se concentram no lodo final do efluente tratado.
Entre os fatores poluidores importante salientar o emprego de sais de cromo
no processo de curtimento, gerando resduos com a presena de cromo, que
segundo a norma brasileira NBR-10004 da ABNT, so classificados como Resduos
Classe I - Perigosos, necessitando tratamento e disposio especfica. O
gerenciamento pela indstria deste tipo de resduo tem gerado grandes problemas
devido dificuldade de se encontrar local adequado para disposio final.
As entidades e rgos de regulamentaes ambientais em todo mundo tm
atuado no sentido de minimizar a poluio gerada pela atividade humana,
principalmente nas indstrias. Isto torna os limites de emisso de efluentes cada vez
mais restritivos, obrigando o setor industrial a buscar e implementar novas
tecnologias produtivas menos agressivas ao meio ambiente, tratamentos de

efluentes e resduos mais eficientes e produtos biodegradveis, ou que possam ser
reciclados aps sua vida til. No Rio Grande do Sul, por exemplo, a legislao
ambiental a mais restritiva do pas, com relao aos limites de emisso de
efluentes.
Contudo, mudanas esto sendo introduzidas no setor coureiro objetivando a
minimizao do impacto desta atividade no meio ambiente. Foram desenvolvidos
trabalhos especficos para os curtumes nas reas de reciclo de banhos, Passos
(2007); otimizao da dosagem de produtos qumicos, Aquim (2004); recuperao
do cromo contido no lodo e nos resduos da operao de rebaixamento por Kupec et
al. (2002), Pereira (2006), Amaral et al. (2008), Dettmer (2008), Kanagaraj et al.
(2008) e Silva (2008); utilizao de enzimas, por Crispim e Mota (2003), Choudhary
et al. (2004), Anandan et al. (2008), Bhavan et al. (2008), Rajput (2009) e Gutterres
et al. (2009).
O uso da biotecnologia pela indstria (ou White Biotechnology, como se
popularizou) tem sido citado como uma promissora alternativa no combate
poluio, indo em direo ao desenvolvimento sustentvel. No entanto, o gargalo
deste funil para muitos produtos e processos, de acordo com Frazzetto (2003), seria
a viabilidade econmica.
A utilizao de enzimas no processamento de couros, segundo Herrmann
(2006), apresenta uma srie de vantagens em relao aos processos tradicionais,
tais como: economia de tempo, melhor rendimento de rea, maior facilidade no
tratamento de efluentes, atravs de reduo da Demanda Bioqumica de Oxignio
(DBO) e Demanda Qumica de Oxignio (DQO), reduo ou at a substituio do
uso de reagentes altamente poluentes, como sulfetos, melhor aproveitamento de
cromo e corantes pela pele, alm da economia de energia e gua.
No entanto, o uso desta tecnologia no novidade para os curtumes, que j
utilizavam enzimas desde antes da sua descoberta. A etapa de purga popularizou o
uso de enzimas na indstria coureira devido limpeza que estas promovem pele e
atualmente j existem produtos enzimticos desenvolvidos para outras etapas do
processamento. No entanto, a baixa especificidade destas enzimas disponveis
INTRODUO
comercialmente um fator limitante da sua aplicao.
1.1. Objetivos
O presente trabalho tem como objetivo aplicar enzimas comerciais nas etapas
de remolho, depilao/caleiro e purga com a finalidade de traar um comparativo
entre os processos puramente qumicos e os processos coenzimticos (que aplicam
agentes qumicos e enzimas). Com esta finalidade, foram desenvolvidos 24 testes
em fules de bancada, com diferentes formulaes (qumicas e coenzimticas) para
os processos em estudo. Para traar esta comparao, aps a realizao dos testes
foram feitas anlises nos efluentes e nas peles, com o intuito de verificar a qualidade
da pele obtida e a quantidade de matria orgnica removida em cada um. Por fim,
foram determinadas, por meio de anlises, as atividades de algumas enzimas
comerciais frente a colgenos e lipdeos.
1.2. Limitaes do Trabalho de Pesquisa

A investigao cientfica na qual se baseia esta dissertao de mestrado
apresenta algumas limitaes quanto a sua interpretao. So elas:
Pele Utilizada: Os testes somente utilizaram pele proveniente da regio do

grupo proveniente de um nico animal, cuja finalidade foi atenuar as
diferenas de composio existentes entre as regies de uma mesma pele.
No entanto, sabe-se que, mesmo na regio do grupo, existem diferenas
na composio e por se tratar de material de origem biolgica, no
possvel eliminar esta variabilidade, apenas atenu-la por meio de
processos de aleatorizao das amostras, conforme feito.
Escala de Trabalho: Em funo do nmero de testes feitos e da rea til

de pele, utilizou-se a escala de bancada para contemplar todas as etapas
testadas (remolho, depilao/caleiro e purga). No entanto, sua utilizao foi
bastante trabalhosa, uma vez que as formulaes co-enzimticas previam
o uso de pequenas quantidades de enzimas, na ordem de 10-2 gramas.
Logo, supe-se que tambm possam existir erros inerentes a pesagem de
produtos, principalmente enzimas slidas, que apresentam substncias que
funcionam como carga, cujo objetivo a estabilizao do produto.
Diviso e Descarne: Aps a etapa de depilao/caleiro, usualmente, a
pele passa pelo processo de descarne e diviso, onde a mesma

separada em duas partes e posteriormente feito o processo de
desencalagem. No caso de experimentos em escala de bancada, onde as
peles possuem poucos centmetros quadrados de rea, no possvel
realizar a diviso da pele, logo a etapa de desencalagem das peles
utilizadas nos testes de purga no seguiu a formulao fornecida, sendo o
controle feito apartir do pH dos banhos.
1.2. Estrutura do trabalho

Este trabalho foi dividido em cinco captulos. No Segundo Captulo, encontrase a reviso bibliogrfica dos conceitos fundamentais utilizados neste trabalho, onde
so apresentados conceitos relacionados pele (sua estrutura e composio),
bioqumica molecular (aminocidos, polipeptdeos, protenas e enzimas), conceitos
bsicos sobre o processamento de peles, em especial queles relacionados s
etapas em estudo neste trabalho, e, por fim, o estgio atual de desenvolvimento e
utilizao de enzimas em curtumes.
A metodologia experimental utilizada neste trabalho apresentada no
Captulo 3. Neste captulo so descritos os materiais utilizados (reagentes e
matrias-primas), a metodologia empregada nas anlises tambm apresentada,
porm, sua descrio encontra-se nos anexos.
No Captulo 4, os resultados das anlises feitas a partir dos banhos residuais
ou peles so apresentados e discutidos, bem como os resultados dos ensaios de
determinao da atividade enzimtica.
Por fim, no Captulo 5 so apresentadas as principais concluses retiradas
dos experimentos e algumas sugestes e comentrios tambm foram feitos.
Reviso Bibliogrfica
Neste captulo sero apresentadas informaes encontradas na literatura a respeito

dos conceitos utilizados no decorrer do trabalho, tais como a histologia da pele,
conceitos fundamentais de bioqumica e processamento de couros, alm de uma
reviso sobre a aplicao de enzimas na indstria coureira.
2.1. Pele
A maior quantidade de pele utilizada na manufatura de couro proveniente de
bovinos, cabras, ovelhas, porcos e bfalos. Peles de coelhos, avestruz, cavalos,
animais selvagens e outras classes como rpteis, peixes e anfbios tm menor
importncia comercial. Para esta indstria as propriedades da matria-prima so de
grande impacto no produto final, pois na maioria dos couros mais de 50% da massa
final consiste em protena originria da pele (HEIDEMANN, 1993c).
A pele de cada espcie animal tem suas caractersticas de espessura,
comprimento, largura, estrutura fibrosa e desenho de superfcie. As propriedades
fsicas tambm so especficas. At mesmo dentro de uma espcie as propriedades
das peles so dependentes da raa, idade e hbitos nutricionais do animal.
Entretanto, pode-se afirmar que h mais semelhanas que diferenas entre as peles
animais, pois as estruturas de protenas como colgeno, elastina ou queratina so
as mesmas em todas as espcies animais (HEIDEMANN, 1993c; GUTTERRES,
2004).
Classifica-se a pele como rgo integrante do sistema tegumentar, pois um

tipo de tecido epitelial de revestimento. Este rgo exerce diversas funes, tais
como,
regulao
trmica,
defesa
orgnica
contra
ao
patognica
de
microorganismos, controle do fluxo sanguneo, proteo contra choques mecnicos,

reserva de nutrientes, alm de funes sensoriais (calor, frio, presso, dor e tato).
2.1.1.
Estrutura da Pele
Assim como as demais espcies de mamferos, a pele dos bovinos formada

basicamente por trs camadas, cada qual com sua funo e constituio qumica
prpria. A camada superior conhecida como epiderme, a camada intermediria a
derme e a camada inferior a hipoderme.
Um esquema ilustrativo apresentado na Figura 1, onde possvel observar
as estruturas a partir de um corte de pele.
Figura 1: Esquema de um corte de pele;

Fonte: Wikipdia
Epiderme
A
epiderme
uma
camada
estratificada
escamosa
(constituda
principalmente por queratina), caracterizada pela ausncia de matriz extracelular e

de vasos sangneos, cuja profundidade varivel, alcanando maior espessura em
regies de maior atrito. A origem da epiderme est no estrato basal, ou camada
germinativa, regio responsvel pela formao e posterior diferenciao das clulas.
REVISO BIBLIOGRFICA
O processo de queratinizao ocorre a partir do estrato granuloso em clulas

chamadas queratincitos, onde, medida que as clulas vo se diferenciando e se
aproximando da superfcie, a quantidade de queratina presente aumenta, at a
ocorrncia da morte celular e sua posterior descamao (HEIDEMANN, 1993c).
A epiderme ainda contm melancitos e clulas imunitrias. Os anexos
cutneos (plos, folculo piloso, glndulas sebceas e sudorparas) tambm esto
presentes na epiderme dos mamferos, estendendo-se at a derme. A juno entre
epiderme e derme tem a forma de papilas, que conferem maior superfcie de contato
e facilitam a difuso de nutrientes, alm de maior resistncia ao atrito da pele.
Os folculos pilosos so multifuncionais, eles contm em sua base, clulas
responsveis pela regenerao dos plos, alm de serem responsveis pela fixao
destas na pele. O conhecimento destas estruturas de extrema importncia para a
indstria do couro, pois a etapa de remoo dos plos no processamento do couro
crucial (HEIDEMANN, 1993c).
Quanto estrutura, a raiz dos plos localizada no fundo do folculo e
consiste de um bulbo capilar cujo dimetro maior que o dimetro da cavidade. O
bulbo contm clulas as quais se diferenciam pelo crescimento, saindo da matriz em
direo cavidade do plo. A superfcie da cavidade do plo recoberta por
material queratinoso, cuja funo dar sustentao ao plo. Nesta cavidade existe
uma zona de queratinizao onde a queratina fracamente formada torna-se uma
queratina altamente resistente devido ao alto grau de crosslink da estrutura
(HEIDEMANN, 1993c).
Derme
A derme, ou crium, a camada de interesse para os curtumes e representa
cerca de 85% da espessura da pele bovina. Apenas a derme ser transformada em
couro aps a remoo da epiderme, anexos cutneos, hipoderme, vasos
sangneos e sangue. Este tecido classificado como conjuntivo fibroso, sendo
constitudo por colgeno e elastina, alm de outros elementos da matriz extracelular
(gua, protenas estruturais, proteoglicanos e ons). Neste tecido esto localizados
os vasos sanguneos e linfticos que vascularizam a epiderme e tambm os nervos
e rgos sensoriais a eles associados, (MONTAGNA, 1962).
10
Hipoderme
A hipoderme ou subcutis um tecido conjuntivo adiposo, que tecnicamente
no faz parte da pele, entretanto localiza-se abaixo da derme e acima dos msculos.
formada por adipcitos (clulas com alto contedo de triglicerdeos) que se
agrupam em lobos gordurosos, os quais so limitados por fibras colgenas oriundas
da derme. A hipoderme participa do isolamento trmico e na proteo contra
choques mecnicos e traumas externos, alm de atuar como reservatrio energtico
(HEIDEMANN, 1993c).
2.1.2.
Composio da pele (constituintes moleculares)
As principais protenas constituintes da pele so queratinas, na epiderme;

colgenos e elastina, na derme; alm de triacilgliceris (mais conhecidos como
triglicerdeos), na hipoderme.
Triacilgliceris
Tambm chamados de triglicerdeos, so um dos tipos de lipdios existentes.
Sua estrutura formada por uma molcula de glicerol (lcool) ligada a trs
molculas de cidos graxos (cidos carboxlicos de cadeias longas), que podem ser
todas iguais ou diferentes, saturadas ou no, porm, quase exclusivamente com
cadeias em nmeros pares, como demonstra o esquema da Figura 2.
leos (assim classificados por encontrarem-se no estado lquido
temperatura ambiente) ou gorduras (encontram-se no estado slido) so
misturas complexas de triglicerdeos cuja composio dos cidos graxos varia de
acordo com o organismo que o produz.
Figura 2: Esquema das molculas de triglicerdeos
REVISO BIBLIOGRFICA
11
Sua funo principal a estocagem de energia. Gorduras so capazes de

liberar seis vezes mais energia metablica que a mesma massa de glicognio
hidratado, especialmente nos triglicerdeos saturados, pois cada ligao C H um
stio em potencial para a reao de oxidao (VOET et al., 1999e).
Elastina
Elastina constitui entre 2 e 3% do total da protena encontrada na pele de
bovinos adultos, entretanto encontrada em maiores propores em vasos
sangneos, tendes, ligamentos e na camada papilar da pele.
Na pele, a elastina est arranjada na forma de redes fibrilares paralelas
superfcie da pele, acumulando-se ao redor dos folculos pilosos, clulas de gordura,
parede de vasos sangneos (tanto externamente como internamente) (ROBERT,
2002).
Debelle e Tamburro (1999) e Debelle e Alix (1999), em seus trabalhos,
descrevem diversos arranjos para elastina, bem como para o colgeno. Alfa-elastina
e kappa-elastina so as unidades mais comuns, que podem se agrupar em
estruturas maiores, como tropo-elastina (massa molar de 70 kDa) e pro-elastina
(massa molar de 140 kDa).
A molcula de elastina caracterizada pelo alto contedo de aminocidos
apolares: glicina, alanina, prolina e valina, e confirmada pelo baixo teor de
aminocidos polares bsicos: lisina, histidina e arginina (HEIDEMANN, 1993c).
Queratinas
Queratina uma classe de escleroprotenas que possui duas formas bsicas,
de acordo com uma classificao evolucionria das espcies, segundo Voet et al.
(1999f), as queratinas dividem-se inicialmente em -queratinas, que ocorrem em
mamferos e -queratinas, que ocorrem em pssaros e rpteis.
As -queratinas podem ainda ser divididas em soft, encontradas no tecido
epitelial e bulbos pilosos e hard encontradas em plos, chifres unhas e outras
estruturas mais duras. A diferenciao entre estas duas formas da protena d-se
pelo contedo de cistina que maior na forma hard (MARSHALL et al., 1991).
12
O enxofre o elemento mais caracterstico de uma queratina, pois se

encontra presente em quantidade muito superior, quando comparado a sua
presena em outras molculas orgnicas. Este elemento qumico est presente na
cistena e cistina (dipeptdeo resultante da unio de dois aminocidos cistenas),
sendo responsvel pela formao das pontes dissulfdicas, que tornam a estrutura
mais coesa devido fora deste tipo de ligao. Alm das pontes dissulfdicas,
pontes de hidrognio tambm esto presentes na queratina auxiliando a estabilidade
estrutural da protena, conforme afirmam Magin et al. (2007).
A Figura 3 apresenta as estruturas presentes num corte esquemtico de um
plo.
Figura 3: Esquematizao das estruturas presentes no plo;

Fonte: Sierpinski-Hill et al.
Nos plos, a queratina pode ser dividida em trs grupos distintos, um deles,
conhecido como alfa-queratina (no confundir com a classificao anterior)
caracterizado pelo baixo teor de enxofre, em torno de 5% (com contedo de cistina
correspondendo de 3 a 5%), possui massa molar mdia entre 45 e 55 kDa, cuja
estrutura terciria da molcula do tipo -hlice. O segundo tipo, beta-queratina,
composto por um percentual de enxofre prximo a 8% (e 20% de cistina na
composio de aminocidos). Estas protenas so do tipo no estruturadas com
massa molar mdia entre 10 e 25 kDa e preenchem os espaos entre elementos
fibrosos com uma massa muito slida. O terceiro grupo chamado gama-queratina
caracterizado pelo alto teor de glicina-tirosina, cuja composio de 5 a 10% de
REVISO BIBLIOGRFICA
13
cistina, 20 a 35% de glicina e 15 a 20% de tirosina. So protenas globulares

presentes na matriz das microfibrilas e de menor peso molecular (aproximadamente
15 kDa) (SIERPINSKI-HILL et al, in press.; HEIDEMANN, 1993c) .
Colgeno
O termo colgeno, ou colagnio, designa uma famlia de protenas insolveis
fibrosas encontradas em animais multicelulares. Essas protenas so encontradas
no tecido conjuntivo, em ossos, dentes, tendes, pele, msculos, vasos sanguneos
e olhos, corresponde a aproximadamente 25% em massa de todas as protenas
existentes nos mamferos (VOET et al., 1999f).
A Tabela 2 apresenta as principais caractersticas qumicas, fsicas e fsicoqumicas das molculas de colgeno, segundo Gutterres (2004).
Tabela 2: Caractersticas especiais do colagnio
Caractersticas do colagnio
Qumicas
nica
Fsico-qumicas
protena
elevado
que
tem
contedo
em
hidroxiprolina;
Presena
de
hidroxilisina
Fsicas
Solvel em gua quente
sob
tratamento
cido
ou
Estriao
visvel
em
especfica
microscpio
lcali, para formar gelatina ou
eletrnico;
cola,
Reflexo de baixo ngulo
precipitveis
com
substncias curtentes;
em raios-X;
(especfico), alto contedo em
Insolvel em gua fria;
Comportamento
glicina
Acima da temperatura de
viscoelstico caracterstico;
prolina
cistena
apenas em traos;
retrao
retrai
1/3
Apresenta baixo contedo de
comprimento original;
aminocidos aromticos;
estado
natural
decomposto por colagenase, no

entanto,
no
por
outras
em
condies
cidas ou bsicas;
tropocolgeno
sofre
desnaturao;
proteases;
Carter anftero;
Exibe especial colorao em
Estrutura porosa depois

de curtido;
Inchamento osmtico e
liotrpico
Em
do
preparao histolgica;
Fonte: Gutterres (2004)
14
A protena classificada como colgeno tem como principais caractersticas

sua conformao em hlice tripla (formada a partir de trs cadeias polipeptdicas) e
seu contedo de aminocidos, onde a quantidade de resduos de hidroxiprolina
presente muito superior quantidade encontrada nas outras protenas existentes
na natureza (LEHNINGER, 1976).
Estrutura molecular e composio
A estrutura primria destas protenas determinada pela seqncia dos
resduos de aminocidos na cadeia polipeptdica (-peptdeos) e responsvel pela
formao dos diversos tipos de colgeno. Atualmente quase trinta tipos j foram
descobertos e embora haja diferena quanto seqncia de resduos de
aminocidos nas cadeias, alguns deles se encontram em percentuais fixos em todos
os tipos, como glicina, alanina e hidroxiprolina que correspondem respectivamente a
33, 11 e 9% dos resduos de aminocidos presentes em cada um dos tipos de
colgeno (LEHNINGER, 1976).
A estrutura secundria dos colgenos bastante semelhante a -hlice
(encontrada na queratina). Entretanto Pauling e Corey (1951) e Ramachandran e
Kartha (1954), com o auxlio da difrao de raios-X, observaram um padro diferente
entre estas duas estruturas e concluram que a estrutura secundria dos colgenos
uma hlice orientada para direita, formada por trs cadeias polipeptdicas, onde
cada uma das cadeias uma hlice orientada para a esquerda com passo de trs
resduos (tripletos). O esquema destas estruturas apresentado na Figura 4.
Figura 4: Estrutura de uma tpica molcula de colgeno. (A) Modelo para uma nica cadeia
polipeptdica com esferas representando os aminocidos. (B) Modelo representativo de parte do
tropocolgeno. Fonte: Albert et al. (1983)
REVISO BIBLIOGRFICA
15
O tripleto mais comum em colgenos corresponde seqncia de

aminocidos GLI-X-Y, onde GLI representa a glicina, X freqentemente prolina e Y
algumas vezes hidroxiprolina e outras hidroxilisina. Todo terceiro resduo de
cada cadeia polipeptdica passa no centro da hlice tripla, a qual to carregada,
que somente resduos de glicina, devido ao tamanho do seu grupamento lateral (um
tomo de H), so capazes de se encaixar no interior. Alm disso, a glicina
responsvel pela coeso da molcula de colgeno (tropocolgeno), pois forma
pontes de hidrognio entre o seu grupamento amino e o oxignio da carboxila de
resduos da posio X de uma cadeia polipeptdica adjacente. Pela mesma razo, os
anis de prolina e hidroxiprolina apontam pra fora, pois ajudam a estabilizar a hlice.
O contedo de aminocidos uma caracterstica particular de cada tipo de
colgeno e varia com a localizao e funo de cada um deles. Para o colgeno tipo
I, o mais abundante, apresentada a Tabela 3 que demonstra este perfil.
Tabela 3: Contedo de aminocidos de relevncia para o colgeno tipo I
Aminocido
Contedo de aminocido (%)
Nmero por molcula
Glicina
33.4
1016
Prolina
12.9
392
Alanina
10.5
319
Hidroxiprolina
9.2
280
cido Glutmico
4.6
140
Glutamina
2.6
79
Arginina
4.8
146
cido Asprtico
3.5
106
Aspargina
1.3
40
Serina
2.8
116
Leucina
2.5
76
Lisina
2.5
76
Valina
1.9
58
Treonina
1.7
52
Fenilalanina
1.3
40
Isoleucina
1.1
33
Hidroxilisina
0.7
21
Metionina
0.7
21
Histidina
0.5
15
Tirosina
0.5
15
Fonte: Reich (2007a)
16
O tropocolgeno pode ser representado por trs tripletos (GLI-X-Y)n, onde n

depende do tipo de colgeno. Para o colgeno tipo I, por exemplo,
aproximadamente trezentos e cinqenta, uma vez que cada cadeia polipeptdica
possui aproximadamente mil resduos de aminocidos. O comprimento da molcula
tambm varivel com o tipo, podendo medir de 150 a 450 nm e o dimetro gira em
torno de 1,5 nm.
Estrutura fibrilar
Via de regra o tropocolgeno agrupa-se formando estruturas maiores. Isto
possvel graas s ligaes covalentes formadas entre os resduos de lisinas de
molculas adjacentes, em um processo catalisado por uma enzima conhecida como
lisil oxidase. Esta enzima ataca os resduos de lisina retirando o grupamento amino
em cada resduo, isto faz com que a reatividade do grupamento aldedo seja
aumentada. Os aldedos reagem espontaneamente para formarem entre si ligaes
covalentes. A Figura 5 ilustra este processo.
Figura 5: Esquema da ao da enzima lisil oxidase sobre o colgeno.

Fonte: Wikipdia
Smith (1968) estudou a formao destes agregados moleculares de

colgenos e concluiu que o tropocolgeno agrupa-se em um estado intermedirio no
REVISO BIBLIOGRFICA
17
processo de formao das fibrilas, denominado microfibrila.
As microfibrilas de
Smith so formadas por sucessivas camadas de cinco molculas de colgeno,

formando um pentgono. Este arranjo tem um dimetro mdio de 4 nm (pois
depende do contedo de gua) e comprimento incalculvel, uma vez que o
crescimento longitudinal praticamente ilimitado. Segundo Bailey et al. (1980),
existem modelos para microfibrilas em tringulos e mais recentemente em
octgonos, entretanto, para Reich (2007a), este estado intermedirio no crucial
para o entendimento da formao das fibrilas.
As fibrilas tm sido objeto de estudo desde o final da dcada de cinqenta.
Elas so unidas lateralmente formando agregados que possuem dimetros variveis
entre 100 e 200 nm. Estes estudos tornaram-se possveis graas ao avano das
tcnicas de microscopia eletrnica, como a microscopia eletrnica de varredura,
microscopia eletrnica de transmisso e microscopia de fora atmica. Por meio
destes equipamentos foi possvel identificar estriaes peridicas de 67 nm
(conhecidas por perodos D), como no esquema apresentado na Figura 6.
Figura 6: Formao da aparncia estriada das fibrilas. (A) a mancha negativa preenche o espao
entre as molculas, contribuindo para a visualizao de uma banda escura. (B) Micrografia de uma
fibrila de colgeno; Fonte: Albert et al. (1983)
18
As fibrilas, por sua vez, tambm formam agregados maiores, as fibras

elementares, que do origem aos feixes de fibras e em ltima instncia, a rede de
fibras. O colgeno, portanto, tem um nvel hierrquico bem definido, podendo ser
resumido na Tabela 4, juntamente com suas principais caractersticas.
Tabela 4: Elementos estruturais do colgeno.
Fonte: Gutterres (2004)
Tipos de colgeno
Os diferentes tipos de colgenos encontrados so funo da polimerizao de
aminocidos em -cadeias e posteriormente, da juno destas cadeias na formao
da molcula de tropocolgeno (hlice tripla) ou na combinao de domnios nohelicoidais com domnios em hlice tripla. Uma vez que existem vinte e trs aminocidos capazes de gerar protenas, seria possvel formar milhares de tipos de
molculas de colgenos. Entretanto, segundo Reich (2007c), na atualidade so
conhecidos em torno de trinta tipos de colgenos. Alguns deles, j foram bastantes
REVISO BIBLIOGRFICA
19
estudados pela cincia por serem mais comuns, e outros, por acompanharem os
tipos mais comuns em diferentes propores. Mas a maioria destes no tem sua
funo conhecida, o que se descobriu foram apenas as seqncias de aminocidos
das -cadeias que esto codificadas no DNA da clula.
Gilbert (1998) agrupou os tipos de colgeno de acordo com a semelhana das
estruturas, em seis classes distintas:
Classe 1 (formadores de fibras) Incluem os colgenos dos tipos I, II, III V e
XI. Todos estes tipos de colgeno formam fibras, todos tm aproximadamente o
mesmo tamanho e todos tm domnios formados por trs -cadeias (polipeptdeos),
na forma de hlice tripla. Cada um desses tipos sintetizado como uma molcula de
tropocolgeno, agrupando-se posteriormente em arranjos escalonados, inicialmente
em microfibrilas, que ento se agregam em fibras. O colgeno do Tipo I o mais
abundante encontrado na pele (corresponde a aproximadamente 27% da pele),
tendes, ossos, dentina, menisco e nulo fibroso (anel externo dos discos da coluna
vertebral). O colgeno Tipo II especfico da cartilagem ( o principal colgeno
presente nas cartilagens) e humor vtreo (substncia gelatinosa que est presente
nos olhos). O Tipo III um colgeno freqentemente encontrado juntamente com o
Tipo I em diferentes propores, em pele msculos, corao e vasos sanguneos.
Colgeno Tipo V um colgeno encontrado no tecido fetal, placenta e tecidos
intersticiais, co-distribudo com o Tipo I e o colgeno Tipo XI encontrado na
cartilagem, tambm sendo distribudo com o Tipo I.
Classe 2 (associados a fibrilas) Inclui os Tipos IX, XII e XIV. So colgenos
que possuem a hlice tripla ininterrupta e esto associados s fibrilas. O tipo IX
encontrado na cartilagem e no humor vtreo. Os Tipos XII e XIV so encontrados na
pele de embries e tendes.
Classe 3 (filamentosos) Somente o Tipo VI includo nesta categoria.
Trata-se de colgenos encontrados na maioria dos tecidos intersticiais, vasos
sangneos e msculos.
Classe 4 (no fibrosos) Inclui os Tipos IV, VIII e X. So colgenos que
formam estruturas na forma de folha. O Tipo IV o maior componente da membrana
basal, uma membrana que forma uma superfcie dura que d suporte a pele e
20
muitos rgos e tambm encontrada na lmina basal. Este tipo de colgeno tem
uma cabea globular em uma das extremidades e um ramo extra na outra. O tipo
VIII um colgeno encontrado em clulas endoteliais e membrana crnea. O Tipo X
encontrado em cartilagens em desenvolvimento.
Classe 5 (fibrilas de base) - Inclui apenas o tipo VII, um tipo encontrado no
tecido epitelial da pele.
A Classe 6 formada por outros tipos de colgenos, como XVII, XIII, XVIII,
XVI, XV e XIX. O colgeno Tipo XVII encontrado nas clulas do epitlio escamoso
da pele. Os demais tm suas funes desconhecidas.
Matriz Extracelular
Os espaos intercelulares, particularmente aqueles ligados a tecidos
conectivos como a pele, contm colgeno e outras protenas dispersos em uma
matriz gelatinosa que composta por uma larga quantidade de glicosaminoglicanos.
Estas estruturas so polissacardeos (polmeros naturais) constitudos por resduos
alternados de cido rico e hexosamina.
cido hialurnico um importante glicosaminoglicano componente do tecido
conectivo, assim como sulfato de dermatana e sulfato de queratana.
Quando estes glicosaminoglicanos se conectam a protenas, formam-se os
proteoglicanos, que consistem basicamente de uma cadeia de glicosaminoglicano
com diversos ncleos de protenas ligadas de forma no covalente. A estes ncleos
proticos esto ligados oligossacardeos (como sulfato de queratana e sulfato de
condroitina).
Uma cadeia central de cido hialurnico, a qual varia seu comprimento de
4.000 a 40.000 , pode conter mais de 100 ncleos de protenas associados, onde,
nestas protenas podem ligar-se aproximadamente 50 cadeias de sulfato de
queratana (cada uma com mais de 250 unidades dissacardicas) e 100 cadeias de
sulfato de condroitina (com mais de 1000 unidades dissacardicas cada). Esta soma
faz com que a massa molar dos proteoglicanos varie entre dezenas a milhares de
Daltons. Esta conformao dos proteoglicanos conhecida como escova de
garrafa, a qual torna estes componentes altamente hidratados (VOET et al., 1999b).
REVISO BIBLIOGRFICA
21
2.2. Noes de Bioqumica

Uma breve reviso sobre aminocidos e protenas se faz necessria para o
entendimento de enzimas, bem como para complementar o contedo apresentado
anteriormente neste captulo (na seo sobre componentes da pele).
2.2.1.
Aminocidos
Aminocidos tm uma estrutura bastante simples, conforme demonstra a

Figura 7, formada por um carbono central, chamado de -carbono, que ligado a
um grupamento amino, um radical carboxlico, um tomo de hidrognio e uma cadeia
lateral (grupamento R). Este grupamento R responsvel pelos diferentes tipos de
aminocidos existentes. As diferentes combinaes dos vinte tipos de aminocidos
padres geram as diversas protenas existentes.
Figura 7: Esquema de um aminocido.
Os vinte aminocidos apresentados na Tabela 5 no so os nicos existentes

no meio biolgico (embora sejam os mais comuns), existem tambm outros tipos
chamados no padres, que muitas vezes desempenham importante papel como
constituintes de protenas e peptdeos biologicamente ativos, embora estejam em
menor ocorrncia.
De acordo com Voet et al. (1999a), a maneira mais comum de classificar os
aminocidos em trs principais grupos, de acordo com o radical R. Os
aminocidos apolares (primeira coluna da Tabela 5) apresentam caracterstica de
hidrofobia; aminocidos polares neutros (segunda coluna) possuem radicais com
tendncia a formar pontes de hidrognio e aminocidos polares com carga (terceira
coluna) tm caractersticas hidroflicas.
22
Tabela 5: Classificao dos aminocidos padres.

Aminocidos com cadeias
laterais apolares
laterais polares neutras
laterais polares com carga
Glicina Gly G
Serina Ser S
Lisina Lys K
Alanina Ala A
Treonina Thr T
Valina - Val V
Arginina Arg R
Leucina Leu L
Aspargina Asn N
Isoleucina Ile I
Histidina His H
Glutamina Gln Q
Metionina Met M
cido Asprtico Asp D

Prolina Pro P
Tirosina Tyr Y
Fenilalanina Phe F
cido Glutmico Glu E
Cistena Cys C
Triptofano Trp - W
Fonte: Voet et al. (1999a)
REVISO BIBLIOGRFICA
23
Para formar estruturas maiores, os aminocidos so capazes de se

polimerizar. Este processo pode ser representado por uma reao de polimerizao
por condensao (onde gerada uma molcula de gua) e formada a ligao
peptdica. De acordo com o nmero de unidades de aminocidos, possvel
classificar estes polmeros em dipeptdeos (duas unidades), tripeptdeos (trs
unidades), oligopeptdeos (menos de 20 unidades) e polipeptdeos (mais de 20
unidades).
Aps a incorporao em um peptdeo, os aminocidos individuais
(monmeros) utilizados so chamados de aminocidos residuais. A Figura 8
representa o esquema de formao de uma ligao peptdica.
Figura 8: Representao esquemtica de uma ligao peptdica;

Fonte: Wikipdia
Polipeptdeos so polmeros lineares nos quais cada resduo de aminocido

participa de duas ligaes peptdicas e est ligado ao outro em uma configurao
cabea-cauda (grupamento carboxila ligado ao grupamento amina de outro
aminocido). Os resduos das pontas participam apenas de uma ligao peptdica e
so chamados de N-terminal (aquele resduo que contm o grupamento amina livre)
e C-terminal (o resduo que contm o grupamento carboxila livre).
2.2.2.
Protenas
Protenas so molculas que contm uma ou mais cadeias de polipeptdeos.

A variao no comprimento e na seqncia de aminocidos dos polipeptdeos
24
24
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REVISO BIBLIOGRFICA
25
Nomenclatura e classificao
Enzimas so usualmente classificadas e nomeadas de acordo com a reao
qumica que elas catalisam. No entanto, um esquema para a classificao
sistemtica funcional e nomenclatura de enzimas foi adotado pela Unio
Internacional de Bioqumica e Biologia Molecular (IUBMB) devido ao avano desta
cincia com relao ao nmero crescente de enzimas descobertas. Existem seis
grandes classes de reaes enzimticas, apontadas na Tabela 6. Cada enzima
possui dois nomes e um nmero de classificao composto de quatro partes.
Tabela 6: Classificao de enzima de acordo com o tipo de reao

Classificao
Tipo de reao catalisada
Oxidoredutases
Reaes de oxidao-reduo
Transferases
Transferncia de grupos funcionais
Hidrolases
Reaes de hidrlises
Liases
Eliminao de grupos para formar ligas duplas
Isomerases
Isomerizao
Ligases
Formao de ligaes com hidrlise de ATP
A enzima de nome carboxipeptidase A, tem o nome sistemtico de peptidil-Laminocido hidrolase e seus nmeros de classificao EC 3.4.17.1, onde EC
significa comisso de enzima e os nmeros representam a classe, subclasse e
nmero de srie arbitrrio.
Mecanismo de catlise
Enzimas alcanam suas enormes taxas de reao atravs do mesmo
mecanismo utilizado pela catlise qumica.
Os tipos de mecanismos empregados pela catlise enzimtica so
classificados como:
Catlise cido-base;
Catlise covalente;
Catlise metal on;
Catlise eletrosttica;
26
Catlise devido a efeitos de proximidade e orientao;
Catlise via ligao preferencial pelo estado de transio.
Cintica da Reao
O estudo da cintica de reaes enzimticas teve incio em 1902, quando
Adrian Brown estudou as taxas de hidrlise de sacarose pela enzima fructofuranosidase (VOET et al., 1999d).
Com base no seu estudo, Brown props um mecanismo de reao em duas
etapas, onde na primeira reao elementar o substrato (S) liga-se enzima (E)
formando um complexo enzima-substrato (ES), na seqncia este complexo
decomposto em produto (P) e enzima, como demonstra a seguinte reao:
Os smbolos k1 e k-1 so as constantes da reao direta e inversa e k2 a

constante da segunda reao. Para fins de simplificao matemtica, neste caso
(reao de dissociao do complexo ES) no foi considerada a constante k-2, pois
para instantes iniciais a concentrao de produtos nula.
A Equao de Michaelis-Menten
Nesta equao, a taxa de formao de produtos expressa da seguinte
maneira:
Equao 1
J para a formao do complexo enzima-substrato, a taxa final de formao

a diferena entre as taxas de consumo de substrato e consumo do complexo:
Equao 2
A fim de resolver esta equao, duas simplificaes foram propostas em 1913

por Leonor Michaelis e Maud Menten e em 1925 por G. E. Briggs e J. B. S. Haldane,
REVISO BIBLIOGRFICA
27
respectivamente (Voet et al.,1999d):

1. Suposio de Equilbrio. Assumiu-se k-1
k2 e desta forma o equilbrio da
primeira reao elementar descrito como:

Equao 3
Onde KS a constante de dissociao da primeira reao elementar.

2. Suposio de estado estacionrio. Considerou-se que a concentrao de
substrato infinitamente maior que a concentrao de enzima ([S]
E]).
Com exceo ao incio da reao, onde nos primeiros milissegundos ocorre a

mistura de E e S, a [ES] permanece aproximadamente constante at que o
substrato esteja prximo de ser totalmente consumido. Ento, a taxa de
sntese de ES pode ser considerada igual taxa de consumo na maioria do
curso da reao. Em outras palavras, ES mantm um estado estacionrio e
[ES] pode ser tratado como constante ao longo do tempo:
Equao 4
Para tornar usuais estas expresses, buscaram-se variveis facilmente

mensurveis. [ES] e [E] no so mensurveis, entretanto, a concentrao total de
enzimas [E]T pode ser facilmente medida:
Equao 5
Aplicando-se a equao 4 na equao 2 obtemos:

Equao 6
Agora utilizando a equao 5 na equao 6 e manipulando-se os termos

obtm-se:
28
Equao 7
A constante de Michaelis-Menten (KM) definida como:

Equao 8
Rearranjando a equao 7 obtm-se:

Equao 9
Isolando [ES], obtm-se:
Equao 10
Logo, para um tempo inicial t = 0, a equao 1, aps a aplicao da equao

10, resulta na seguinte forma:
Equao 11
Agora, ambas as concentraes [E]T e [S] so experimentalmente

mensurveis. O uso da velocidade inicial (operacionalmente considerada como
sendo a velocidade medida antes da converso de 10% do substrato em produto).
A velocidade mxima (Vmx) da reao ocorre a altas concentraes de
substrato, quando a enzima est saturada, ou seja, quando a enzima est toda sob
a forma ES.
Equao 12
REVISO BIBLIOGRFICA
29
Aplicando a equao 12 na equao 11, obtm-se abaixo a equao de

Michaelis-Menten:
Equao 13
Esta equao a base da cintica enzimtica. A Figura 10 reproduz o grfico

de Michaelis-Menten, onde a partir do qual possvel obter-se o valor de KM.
Operacionalmente, KM definido como o valor da concentrao de substrato
para qual a taxa da reao a metade da taxa mxima (Vmx).
O KM nico para cada par enzima-substrato e depende no s da natureza
de ambos, como tambm influenciado pela temperatura e pH. A constante de
Michaelis-Menten pode ser expressa como:
Equao 14
Figura 10: Grfico da velocidade da reao versus concentrao de substrato
Pode-se dizer que KM o parmetro indicativo da afinidade da enzima pelo

substrato.
Quando a velocidade de formao do complexo [ES] for maior que a
velocidade de dissociao, tem-se:
30
Equao 15
Um baixo valor de KM significa que a enzima atinge a eficincia cataltica

mxima a baixas concentraes de substrato.
Quando a velocidade de formao do complexo [ES] for menor que a
velocidade de dissociao tem-se:
A constante cataltica (kcat) de uma enzima definida como:

Equao 16
Esta constante indica o nmero de reaes que cada stio ativo da enzima catalisa
por unidade de tempo, ou seja, indica a rotatividade do catalisador.
Quando a cintica da reao simplificada, como no caso de MichaelisMenten, k2 = kcat. Para casos em que [S]
KM, pouqussimo ES formado,
consequentemente [E] [E]T e a equao 11 reduz-se a:

Equao 17
Fatores que influenciam a atividade enzimtica

A variao da atividade enzimtica (taxa da reao) depende basicamente da
concentrao de substrato presente no meio, entretanto, sabe-se que outros fatores
tambm influenciam o desempenho das reaes enzimticas, atuando de forma
positiva junto ao processo ou atuando de forma a retardar ou at mesmo inibir as
reaes. Alguns dos fatores mais importantes so apresentados a seguir (VOET et
al., 1999c; d).
REVISO BIBLIOGRFICA
31
Cofatores e coenzimas
Reaes enzimticas algumas vezes incluem a participao de outras
substncias no mecanismo de catlise que so essenciais ao processo.
Cofatores so pequenas molculas, geralmente ons metlicos (Cu2+, Fe3+ ou
Zn2+) que participam de catlise envolvendo reaes de oxidao e reduo. A
importncia destes cofatores explica a necessidade da ingesto de pequenas
quantidades de certos elementos na dieta de alguns seres vivos.
J as coenzimas so substncias orgnicas necessria atividade
enzimtica, como por exemplo, as vitaminas e grupos prostticos (componentes de
origem no protica, como acares).
Efeitos do pH, e temperatura
Enzimas so mais estveis a temperaturas menores. Assim como as demais
protenas, enzimas podem desnaturar ou perder sua atividade a altas temperaturas,
pois so termolbeis, e a atividade pode diminuir se no estiverem nas condies
ideais. A condio ideal varia de acordo com a enzima em questo. Para o caso de
enzimas obtidas a partir de vegetais, por exemplo, a temperatura ideal normalmente
corresponde quela encontrada na regio da qual foram extradas.
Alguns grupos do stio ativo das enzimas so protonados, ao mudar o pH do
meio pode-se protonar ou desprotonar estes grupos. Alguns substratos tambm so
ionizveis e no reagem em determinados valores de pH.
Com relao ao pH, no entanto, as enzimas podem reagir de duas formas:
trabalhando em um valor de pH timo ou atuando em uma determinada faixa de pH
(bsica, cida ou neutra).
Inibio
Muitas substncias alteram a atividade de enzimas pela reversibilidade
combinada com um caminho que influencia a ligao com o substrato. Estas
substncias so classificadas como inibidores, podendo levar a uma inibio
temporria ou definitiva.
As inibies so classificadas de duas maneiras:
32
Inibio competitiva. Neste caso, o inibidor e o substrato possuem analogia

estrutural e por esta razo disputam a ocupao do mesmo centro ativo. No
entanto, quando o inibidor se coloca no centro ativo, no h formao de
produto. Porm, este tipo de inibio pode ser revertida pelo acrscimo de
substrato.
Inibio no competitiva. O inibidor no competitivo combina-se com a

enzima atravs da formao espontnea de ligaes covalentes que podem
ser compostas com o stio ativo, com outras regies da enzima ou com o
prprio complexo ES, dependendo da natureza deste inibidor. Em qualquer
caso promove uma alterao configuracional irreversvel na enzima,
alterao que tem como conseqncia sua inatividade. O resultado final
corresponde a uma diminuio da concentrao da enzima.
A inibio alostrica diferente dos dois tipos vistos anteriormente e no
existe para prejudicar a enzima, mas para ajudar os organismos em que elas se
encontram, sendo considerada um mecanismo de regulao da produo enzimtica
(RIEGEL, 1996).
2.3. Processamento de Peles

A utilizao de peles animais uma prtica criada pelo homem das cavernas,
podendo ser consideradas as primeiras vestimentas utilizadas. Obviamente, no
incio no havia se pensado em nenhum processo que conservasse este material
por mais tempo, com exceo secagem ao sol.
Com o desenvolvimento das civilizaes surgiram as tcnicas de curtimento
vegetal, as quais se tornaram a base da produo de couros, pois a etapa de
curtimento era a nica existente. Segundo Reich (2007b), o primeiro estudo
publicado sobre o curtimento de peles data de 1795, cujo autor, Seguin, foi aluno de
Lavoisier. No entanto, a teoria do curtimento vegetal s foi publicada aps 100
anos por H. R. Procter e J. A. Wilson.
Atualmente, a produo de couros mais do que apenas o curtimento.
Existem diversas etapas que preparam a pele para o curtimento e outras tantas que
REVISO BIBLIOGRFICA
33
conferem acabamento e as propriedades desejadas ao produto final. O processo de

produo de couros wet-blue, desenvolvido por A. Schultz e patenteado em 1893
por M. Dennis (patente n 495028, USA) at hoje o mais utilizado.
O fluxograma das etapas da manufatura de couros apresentado na Figura
11.
Pele
Salgada
Bater sal
Pr-remolho
Prdescarne
Remolho
Pquel
Purga
Desencalagem
Descarne e
Diviso
Depilao e
Caleiro
Curtimento
Rebaixe
do couro
Recurtimento
Pracabamento
Acabamento
final
Figura 11: Fluxograma de processamento do couro (as etapas descritas em retngulos indicam que o
processo ocorre em meio aquoso)
O processo que visa transformar a pele crua (verde) ou conservada (salgada)

em couro composto pelas etapas de ribeira, curtimento e acabamento, onde cada
uma destas constituda por diversas operaes.
A ribeira a primeira etapa do processamento, sendo constituda por uma
srie de operaes em meio aquoso, cujo objetivo a limpeza da pele e preparao
para o curtimento. constituda pelas operaes apresentadas abaixo:
Bater sal. Remoo mecnica do sal superficial (previamente adicionado

com o intuito de conservar a pele);
Pr-remolho. Lavagem da pele para remoo do excesso de sujeira e

sal, e para facilitar o pr descarne (utilizando a pele mida);
Pr-descarne.
Remoo
parcial
da
hipoderme
(em
mquina
descarnadeira), visando o aproveitamento de protenas e sebo removidos;
Remolho. Processo de limpeza (remoo de sangue, urina, esterco, terra,
34
sal e algumas protenas solveis) e reidratao das peles que ocorre em

meio lquido;
Caleiro e Depilao. Processo qumico que, por meio do intumescimento

da pele e separao das fibras colagnicas, promove a remoo da
queratina (presente em plos e epiderme);
Descarne e diviso. O descarne remove por ao mecnica (mquina de

descarnar) os tecidos adiposo e subcutneo, visando facilitar a difuso
dos produtos qumicos nas etapas posteriores. A diviso separa
mecanicamente a pele em duas camadas: flor (camada superior) e raspa
(camada inferior);
Desencalagem. Processo qumico que visa remover substncias

alcalinas adicionadas na etapa de caleiro e solubiliz-las, revertendo o
inchamento promovido pela adio de cal no caleiro;
Purga. Processo enzimtico que visa uma limpeza profunda da pele,

removendo restos de queratina e lipdeos;
Pquel. Processo qumico de acidificao da pele, preparando as fibras

colagnicas para o curtimento.
A segunda etapa do processamento das peles o curtimento, cujo objetivo

principal tornar a pele um produto imputrescvel. Para tanto, um agente curtente
reage com as molculas de colgeno estabilizando a estrutura por meio de fortes
ligaes.
Como agente curtente, podem-se empregar sais metlicos (sais de cromo e
alumnio), macromolculas orgnicas (taninos vegetais, poliuretanos e poliacrilatos),
aldedos (formaldedo e glutaraldedo) e epxidos (HEIDEMANN, 1993a). No
entanto, sabe-se que 90% dos curtumes empregam os sais de cromo, como o
sulfato bsico de cromo III (KANTH et al., 2009). Posterior etapa de curtimento, a
pele passa a ser denominada de couro; e quando o curtimento feito com cromo, o
couro chamado de couro "wet-blue" devido sua umidade e colorao.
Aps curtido, o couro tem sua umidade reduzida e espessura uniformizada
por meio de dois equipamentos (enxugadeira e rebaixadeira).
A terceira etapa, acabamento, consiste em operaes de recurtimento, pracabamento e acabamento final, que tm por finalidade dar aos couros as
REVISO BIBLIOGRFICA
35
caractersticas exigidas pela sua aplicao final (estofamento de mveis e veculos,

solados, acessrios, calados, roupas, entre outros).
Recurtimento. Tambm conhecido como acabamento molhado, rene as

etapas de lavagem cida (objetivando a remoo de sais curtentes na
superfcie), neutralizao, recurtimento (define as caractersticas fsicomecnicas), tingimento e engraxe;
Pr-acabamento. Estas operaes variam de acordo com o produto final,

podendo incluir secagem, estiramento e lixamento;
Acabamento final. Consiste na aplicao de produtos diretamente sobre a

flor por meio de pistolas ou equipamentos especiais, melhorando o
aspecto e conferindo efeitos de cor e textura diferenciados.
2.3.1.
Operaes de Ribeira
As operaes de ribeira consistem no foco deste trabalho, portanto sero

detalhadas nesta seo. Esta etapa assim chamada devido demanda de gua
elevada envolvida nos processos, isto fez com que, historicamente, os curtumes se
instalassem s margens de rios a fim de suprir esta necessidade.
As operaes de remolho, caleiro/depilao e purga foram estudadas neste
trabalho, onde processos puramente qumicos foram comparados a processos que
se utilizavam de enzimas. Dentre as operaes de ribeira, a purga a nica na qual
tradicionalmente se utilizam enzimas.
Remolho
Os objetivos principais neste processo so levar a pele verde ou salgada ao
estado de pele fresca (hidratada) e promover a limpeza superficial da pele. Esta
operao tornou-se indispensvel devido aos processos de conservao pelos quais
a pele submetida. Estes processos, por sua vez, se fazem necessrios devido a
fatores como a distncia entre abatedouros e curtumes, processamento das peles
em bateladas, globalizao do mercado, entre outros.
Os mtodos tradicionais de remolho consistem de um a dois tratamentos
feitos em fulo, tanques ou molinetas, em banhos com 100 a 300% de gua e
temperatura entre 20 e 28C por um tempo de 6 a 24 horas (GUTTERRES, 2010).
36
A diferena de tempo mencionada acima se deve ao modo utilizado para

conservar a pele. A conservao com sal remove a gua presente entre as fibras da
pele, que est fracamente ligada estrutura, j a conservao por secagem vai
alm, removendo as molculas que esto fortemente ligadas ao colgeno (isto
ocorre quando o contedo de gua presente est abaixo dos 30%, onde este teor
conhecido como gua de hidratao).
Logo, esperado que o processo de remolho de peles secas seja mais lento,
uma vez que o baixo teor de gua provoca uma diminuio dos espaos
interfibrilares, dificultando o acesso da gua no interior da fibra colagnica.
A temperatura da gua de remolho tambm outro fator a ser levado em
considerao. A maior temperatura da gua ocasiona um aumento da vibrao de
suas molculas, conseqentemente, levando liberao de parte da gua de
hidratao das molculas de colgeno e resultando em um aumento de superfcie,
alm de eliminao de substncias da pele e agentes conservantes. Por outro lado,
a menor temperatura da gua aumenta a absoro desta pelas peles, uma vez que
a molcula de gua encontra-se num estado mais ordenado, resultando em um
aumento de espessura (HEIDEMANN, 1993b).
A ao mecnica tambm desempenha papel importante. Deve ser intensa, a
fim de produzir uma boa lavagem e limpeza, porm, em peles secas necessrio
que este processo ocorra apenas aps a reidratao da pele, para que a mesma
no sofra danos nos processos posteriores.
No remolho, alm de gua so adicionados alguns agentes, com a finalidade
de acelerar este processo, tais como:
cidos. cido frmico o mais comum. Sua utilizao esta relacionada

preservao do plo;
lcalis. Os mais comuns so hidrxido de sdio, carbonato de sdio ou

sulfito de sdio, adicionados em quantidades de 0,1 a 1%. Estes produtos
facilitam a umectao e remoo de lipdeos, devido ao efeito de
inchamento das fibras e formao de sabes, respectivamente. Alm
disso, a solubilizao das sujeiras, protenas e proteoglicanos superior
em pH alcalinos;
REVISO BIBLIOGRFICA
37
Tensoativos. Utilizados para acelerar e intensificar o processo de

remolho colaboram na umectao da pele, solubilizao de sujeiras e
emulso de gorduras;
Enzimas. Segundo Thanikaivelan et al. (2004) e Gutterres (2005), o uso

de enzimas no remolho tem o objetivo de acelerar o processo, levando a
uma reidratao mais eficiente, proporcionar melhor abertura da fibras e
consequentemente melhora na penetrao dos reagentes, por meio da
remoo de protenas interfibrilares, degradao de gorduras e remoo
de glicosaminoglicanos e protenas da pele.
Basicamente, utilizam-se dois tipos de enzima no remolho: proteases e

lipases. De acordo com Herrmann (2006), enquanto um remolho tradicional retira em
mdia 4% de sulfato de dermatana (glicosaminoglicano constituinte da matriz
extracelular), o remolho tratado com protease microbiana capaz de remover 42%
desta substncia.
Segundo Bienkiewicz (1990), proteoglicanos so os componentes mais
importante para a elaborao de um balano de massa na pele, devido imensa
quantidade de gua que estas protenas so capazes de absorver. Estas protenas
so degradadas por lcalis e pela ao das enzimas.
Conforme Heidemann (1993b), ainda est em discusso se a remoo de
protenas interfibrilares (proteoglicanos e glicosaminoglicanos) essencial para a
produo de couro ou se sua liberao apenas um indicativo de peles bem
remolhadas.
Depilao e Caleiro
O processo de depilao o primeiro grande passo na manufatura de couros,
influenciando de forma determinante na qualidade do couro produzido. A pele
precisa ter removidos a epiderme e os plos, incluindo suas razes e todo material
queratinoso que preenche os folculos pilosos, antes de seguir para o prximo
passo.
Para entender o mecanismo de depilao indispensvel que se conhea a
estrutura das queratinas. Conforme mencionado na seo 1.2.3 a queratina pode ser
classificada em dois grandes grupos, -queratinas (presente nos mamferos) e -
38
queratinas (presente em aves e rpteis). A queratina dos mamferos pode ainda ser
classificada em soft e hard. A queratina encontrada nos plos da forma hard,
e pode ser subdividida em trs famlias menores: alfa, beta e gama queratinas.
As alfa-queratinas so protenas estruturais, tm suas estruturas tercirias na
forma de uma -hlice, possuem baixo contedo de enxofre e esto localizadas no
crtex (camada interna) dos plos. As beta-queratinas formam estruturas protetoras,
compondo grande parte da cutcula (camada externa) dos plos. Este tipo de
queratina dificilmente aproveitada, devido ao ataque qumico que ocorre na sua
superfcie. J as gama-queratinas, so protenas globulares presentes na matriz das
microfibrilas, com alto teor de enxofre, que mantm coesa a estrutura das
microfibrilas por meio do entrecruzamento das ligaes dissulfdicas (SIERPINSKIHILL et al., in press; HEIDEMANN, 1993c).
O processo de depilao normalmente feito em meio aquoso, mas tambm
pode ser desenvolvido com a aplicao de uma pasta (este ltimo mais comum em
peles mais finas como as de caprinos ou ovinos que requerem uma ao mecnica
mais abrandada). A depilao pode seguir duas rotas distintas: baseado no
afrouxamento do plo (com a preservao do mesmo) ou baseado na destruio das
estruturas queratinosas (GUTTERRES, 2010).
Os processos com afrouxamento do plo podem ser de natureza qumica,
enzimtica, mecnica ou qumico-mecnica. O princpio de funcionamento deste
processo est focado no ataque s queratinas do tipo soft, que se distribuem na
epiderme e membrana basal dos folculos pilosos, desta forma os plos so
afrouxados e removidos (e sua estrutura mantida preservada). Alm de enzimas,
produtos qumicos como amonaco, aminas, hidrxidos de metais alcalinos terrosos
e hidrxido de sdio tambm podem ser utilizados para promover a depilao com
preservao dos plos (GUTTERRES, 2010).
A destruio do plo como mtodo depilatrio tem por princpio o ataque s
queratinas. Neste caso, o ataque ocorre preferencialmente nas estruturas que
contm maior quantidade de cistina, ou seja, nas e queratinas, que esto
localizadas na cutcula e na matriz das microfibrilas, respectivamente.
As pontes S-S da cistina podem ser rompidas por reduo ou oxidao. A
REVISO BIBLIOGRFICA
39
reduo pode ser feita por quase todo o tipo de agente redutor, ocorrendo
preferencialmente sob condies alcalinas. Os agentes mais utilizados so tiocompostos, que agem atravs da troca com um dos tomos de enxofre na ponte
dissulfdica da cistina.
A Figura 12 representa um esquema deste tipo de reao, onde
apresentada parte da cadeia de queratina, com nfase na regio da cistina, um
agente redutor qualquer e o resultado desta reduo.
O
C
CH
NH
NH
CH2
2 HS
CH
S
CH2
NH
R
R
CH2
NH CH
NH
CH2
O
C
NH
NH CH
NH
Ponte S-S da cistina
Agente Redutor
Ligao S-S rompida
Figura 12: Esquema de rompimento por reduo das pontes dissulfdicas da cistina.
Durante a depilao, as protenas da camada basal da epiderme se

hidrolisam formando produtos de degradao que contm enxofre e posteriormente
podem passar a sulfetos, polissulfetos e compostos sulfdricos. Estes, por sua vez,
podem atuar sobre a cistina do pelo ou l, fragilizando a queratina, resultando em
maior suscetibilidade ao ataque pelos hidrxidos (GUTTERRES, 2010).
O
C
NH
CH
NH
CH2
O
C
CH2
NH CH
NH
NH
CH2
OH
SH
O
CH
S
+ H2O
NH
CH2
NH CH
C
O
cadeias lateriais
Figura 13: Esquema de hidrlise da pontes de cistina.
NH
40
A hidrlise das pontes de cistina (catalisada pela presena de lcalis)

representada no esquema da Figura 13 pode levar gerao de cido sulfnico, e,
como reao lateral, cido sulfdrico.
Segundo Marmer e Dudley (2006), agentes oxidantes, tais como percarbonato
e perborato de sdio, sistemas cianato/perxido de hidrognio, entre outros, atuam
na queratina seguindo um mecanismo de reao elementar. A Figura 14 apresenta
este esquema, onde o oxignio representa (de forma simplificada) o agente
oxidante.
O
C
NH
CH C
NH
CH2
+ H2O + 5 O
S
O
C
CH2
NH CH
O
C
NH
NH
CH2
S
O OH
OH
CH2
NH CH
NH
CH C
NH
Agente
AgenteRedutor
oxidante
cadeias lateriais
Sulfnico
de
c.
Figura 14: Esquema de rompimento das pontes dissulfetos por agente oxidante.
Para complementar a ao dos agentes qumicos, nos processos com

destruio dos plos, necessria ao mecnica prolongada, para promover a
remoo dos restos de plos presos nos folculos pilosos.
O sistema de depilao por reduo qumica conhecido por cal/sulfeto (em
especial sulfeto de hidrognio) o mais disseminado pelos curtumes, segundo Bajza
e Vrcek (2001). Os motivos principais seriam devido ao baixo custo do sulfeto de
sdio e da cal, alm da eficincia do processo (quando combinado a um longo
tempo de processamento, ao mecnica adequada e principalmente etapa de
caleiro com suficiente inchamento da pele).
A utilizao de xido de clcio no processo conhecido como caleiro tem como
objetivo o inchamento da pele para facilitar a remoo de plos remanescentes nos
folculos pilosos, uma vez que, em gua convertido em lcali.
REVISO BIBLIOGRFICA
41
O hidrxido de clcio remove a carga eltrica dos grupos bsicos existentes

no colgeno, modificando as dimenses de suas estruturas. Alm disso, segundo
Sivasubramanian et al. (2008), a cal tambm atua na eliminao de proteoglicanos
da matriz extracelular da pele, o que contribui para a abertura das fibras de
colgeno.
Existem dois tipos de inchamento da pele, o liotrpico e o osmtico. O
inchamento que ocorre na etapa de depilao e caleiro uma combinao de
ambos.
No inchamento liotrpico, ons livres rompem as foras de atrao entre as
molculas filamentosas, separando-as internamente. Esta separao enfraquece a
estrutura protica e favorece o inchamento da estrutura devido absoro de gua
ocorrendo um aumento da espessura sem diminuio do comprimento das fibras.
Este tipo de reao irreversvel.
J no inchamento osmtico, a difuso da gua ocorre devido diferena de
concentraes entre as duas solues. Esta membrana permite a passagem da
gua em busca do equilbrio de concentraes, da soluo mais diluda para a mais
concentrada. Neste caso as fibras aumentam a espessura e diminuem de
comprimento, porm este um fenmeno reversvel.
Segundo Gutterres (2010), outro fenmeno que pode ser observado no
processo de depilao e caleiro em sistemas que se utilizam de sulfeto a ao da
cal sobre as graxas naturais. Os lipdios da hipoderme so compostos
principalmente por triglicerdeos, porm, na derme, alm destes podem ser
encontradas ceras, fosfolipdios e esteris. No decorrer do processo, as ceras
permanecem intactas, enquanto os esteris so modificados completamente
sofrendo hidrlise e posterior saponificao. Este comportamento tambm pode ser
observado no caso dos triglicerdeos, porm, em menor quantidade. Os sabes de
clcio (insolveis) presentes no processo de caleiro devem-se, ento, reao dos
cidos graxos livres, presentes na pele, com o hidrxido de clcio, de acordo com a
reao esquematizada na Figura 15.
42
2R C
O
OH
cido Graxo
Ca OH
OH
Cal Hidratada
O
R
O
2+
C Ca
O
2 H2O
Sabo
Figura 15: Esquema da formao de sabes na etapa de depilao e caleiro.
O principal problema relacionado ao processo de depilao cal/sulfeto est

relacionado toxicidade destes elementos. O dano ambiental causado pelo efluente
que contm estes agentes qumicos, traduz-se pela elevao do pH, demanda
biolgica de oxignio (DBO), demanda qumica de oxignio (DQO), alm da gerao
de sulfetos (como cido sulfdrico, resultante da reao entre cidos e sulfeto de
sdio), diminuindo, desta forma, a eficincia das estaes de tratamento de
efluentes.
De acordo com Marsal et al. (1999) e Taylor et al. (1987), os processos de
depilao tradicionais que utilizam cal e sulfeto contribuem com 50 a 60% do total da
carga de DBO, DQO, slidos dissolvidos totais (SDT) e slidos suspensos totais
(SST), alm da alta alcalinidade do efluente.
Os mtodos enzimticos de depilao podem ser considerados como um dos
mais recentes e tambm um dos mais antigos j utilizados em curtumes. Em
meados do sculo XIX a depilao era feita por meio de um banho de remolho em
putrefao ou por transpirao da pele mida, onde era possvel conduzir a um
afrouxamento do plo. A remoo era efetivada mecanicamente.
De acordo com Rui et al. (2009), em 1910, Otto Rhm patenteou na
Alemanha o primeiro mtodo enzimtico de depilao e limpeza das peles e em
1922, J. A. Wilson e G. Daub iniciaram as primeiras pesquisas sobre a depilao
enzimtica com o uso de microscpios. Na China, entre os anos 60 e 70, a
depilao enzimtica alcanou uma srie de avanos e descobertas, entretanto,
devido ao alto custo desta tecnologia e as dificuldades na manufatura, como a perda
da estrutura da flor e alargamento dos poros, esta tcnica foi abandonada em
meados dos anos 80 e o processo de depilao voltou ao sistema cal/sulfeto.
REVISO BIBLIOGRFICA
43
Os mecanismos de depilao enzimtica so dependentes do tipo de enzima

utilizada, uma vez que cada enzima tem preferncia sobre um determinado
substrato. Queratinases, proteases em conjunto com -amilases ou colagenases
atuam na depilao de peles, entretanto, possuem mecanismos diferentes, pois
cada uma destas enzimas hidrolisa um aminocido distinto.
O processo depilatrio ideal, segundo Rui et al. (2009), deveria ser capaz de
rapidamente afrouxar a ligao do bulbo piloso papila e ser capaz de rapidamente
efetuar a separao entre camada externa da raiz do plo e a estrutura interna do
folculo, e, finalmente, deveria ser capaz de causar suficiente destruio celular da
camada externa da raiz do plo para permitir a fcil retirada deste.
Alguns pesquisadores da dcada de 70 acreditavam que o processo de
depilao estava intimamente ligado perda de substncias como a mucina,
encontrada na Camada de Malpighi (na epiderme); folculos pilosos, camada papilar,
glndulas sudorparas e sebceas (na derme). Quando a mucina era hidrolisada
pela enzima (protease com atividade colagenoltica), a conexo entre plos e peles
seria enfraquecida.
Atualmente o uso de proteases com atividade sobre colgeno no
recomendado na depilao, uma vez que esta enzima tambm causa danos s
fibras do couro, enfraquecendo a estrutura.
Madhumathi et al. (2007) propuseram um processo de depilao utilizando
duas enzimas. Uma -amilase para fazer a abertura da estrutura, e uma protease
sem atividade sobre o colgeno, para fazer a depilao. O estudo em questo,
apesar de possuir um mecanismo complexo, onde duas enzimas estariam atuando,
demonstrou que o desempenho de cada enzima em particular no foi afetado pela
presena da outra.
O mecanismo de atuao das queratinases, de acordo com Gupta e Ramnani
(2006), no est totalmente elucidado. Para a hidrlise das ligaes peptdicas da
queratina necessria a clivagem das pontes dissulfeto. Huber et al. (2008)
sugerem dois mecanismos propostos para a clivagem desta ligao: atravs de
sulfitlise ou por um tipo de enzimas (dissulfeto redutase).
44
Purga
Purga um processo enzimtico de protelise (quebra de protenas que
levam liberao de peptdeos menores) de resduos da pele. De acordo com
Heidemann (1993b) e Qio et al. (2009) a funo da enzima remover, em conjunto
com a ao mecnica produzida pelos fules, protenas interfibrilares, resduos de
queratina que se encontram dentro ou ao redor dos folculos pilosos, resduos de
sangue que ocasionalmente podem coagular, alm de aumentar a abertura das
fibras de colgeno.
Os trabalhos de Ding (2003) e Ding e Liang (2005) apontam que alm de
assumir as funes mencionadas anteriormente, as enzimas tambm modificam a
estrutura das fibras elsticas. Fibras elsticas constituem de 0,1% a 1,0% do peso
da derme, distribudas principalmente na camada papilar e so formadas por
elastina (82%) e microfibrilas de colgeno (8%).
De acordo com os trabalhos anteriormente citados, quando a purga
adequada, as mudanas morfolgicas nas fibras elsticas so leves e as fibras de
colgeno sofrem uma abertura que no danifica as fibrilas colagnicas. J uma
purga extensa leva a danos estruturais, tanto s fibras elsticas quanto s fibrilas de
colgeno, com excessiva abertura das fibras e grande perda desta protena
(colgeno).
Historicamente, esta etapa foi pioneira na aplicao de enzimas pelos
curtumes, onde inicialmente se utilizavam fezes animais. O principal problema
ocasionado pelo uso de excrementos, alm do desagradvel manuseio, est
relacionado variao da atividade enzimtica (at aquele momento desconhecida),
pois muitas vezes a mesma quantidade utilizada poderia levar a uma purga mal
realizada, ou ento purga excessiva das peles, uma vez que no existia um
controle na quantidade e atividade das enzimas presentes nos excrementos.
Mais tarde, com a descoberta da existncia e funo das enzimas, foi
utilizado pncreas bovino modo para purgar peles, o qual produz uma mistura de
enzimas conhecida como pancreatina, formada principalmente por amilase (a qual
atua nos amidos), lipase (cujo substrato preferencial a gordura) e tripsina (enzima
de ao proteoltica). Com isto, os problemas devidos composio do preparado
REVISO BIBLIOGRFICA
45
enzimtico diminuram, uma vez que a homogeneidade da mistura e da atividade

maior nestes casos.
Com o avano das tcnicas de isolamento e cultivo de microorganismos,
atualmente na purga so utilizadas proteases de fungos e bactrias, alm das
tripsinas isoladas a partir da pancreatina de origem animal, em processos com
durao varivel entre trinta minutos e uma hora.
Os resduos de plos remanescentes ao fim desta etapa no sero removidos
em etapas posteriores e iro influenciar o aspecto final do couro. Segundo Ahmed e
Gasmelseed (2003) e Ding e Liang (2005), uma purga mal realizada pode afetar a
qualidade do couro acabado, com o surgimento de manchas escuras ou toque
spero. Ao contrrio, uma purga bem sucedida, melhora as caractersticas como
aparncia uniforme dos gros, maciez e elasticidade, evidenciados pela eliminao
dos resduos de queratina da pele. Qio et al. (2009) afirmam que os produtos
qumicos na etapa de purga no so capazes de substituir enzimas com a mesma
resposta.
2.4. Uso de Enzimas em Curtumes

Enzimas sempre foram utilizadas nos curtumes, nas etapas de purga, sendo
aplicadas mesmo antes de sua descoberta. Entretanto, como mencionado
anteriormente, elas j foram utilizadas nos processos de depilao, no incio do
sculo passado, antes do desenvolvimento dos processos qumicos de depilao.
Estas protenas ganham cada vez mais destaque, por serem consideradas
tecnologias ambientalmente corretas e tambm devido ao avano da cincia de
purificao, desenvolvimento e aperfeioamento de enzimas. Atualmente enzimas
so aplicadas em diversas etapas do processamento de couro, desde a ribeira, at o
acabamento, como demonstram os trabalho de Gutterres et al. (2009), Aquim et al.
(2008), Thanikaivelan et al. (2005) e Choudhary et al. (2004).
No remolho, enzimas so aplicadas para encurtar o tempo de produo por
meio do ataque s gorduras solidificadas e protenas no colagnicas, que s vezes
esto recobrindo a superfcie externa da pele e dificultando o acesso das fibras de
colgeno gua. Alm de visar a reidratao do colgeno, as enzimas contribuem
46
para a eliminao de protena interfibrilar. Os tipos de enzimas utilizadas no remolho

so preferencialmente lipases e proteases.
A utilizao de enzimas na etapa de depilao e caleiro tem como meta a
diminuio do impacto ambiental do efluente gerado nesta etapa, atravs da
eliminao (ou diminuio) do uso de cal e sulfetos. Alm disso, uma melhora na
qualidade das peles, em termos de eficincia depilatria, verificada com o uso de
enzimas.
Processos de depilao coenzimticos (uso de enzima em conjunto com
agentes qumicos depilantes) foram desenvolvidos nos trabalhos de Valeika et al.
(2009), Dayanandan et al. (2003), Aravindhan et al. (2007) e Saravanabhavan et al.
(2003). Em todos os casos, uma diminuio nos nveis de DQO e DBO foi verificada,
embora alguns destes trabalhos tenham utilizado cal para promover o inchamento
da pele.
A depilao enzimtica tornou-se uma alternativa tecnicamente vivel. De
acordo com as publicaes de Sivasubramanian et al. (2008), Dayanandan et al.
(2003), Macedo et al. (2005) e Sivasubramanian et al. (2008), existem enzimas
capazes de promover a depilao sem auxlio de agentes qumicos, nos mais
variados tipos de processo (depilao com pasta, depilao em fulo e depilao
com aplicao de pasta no carnal).
Os trabalhos de Saravanabhavan et al. (2005), Saravanabhavan et al. (2008)
e Bhavan et al. (2008) eliminam a aplicao de cal para promover o inchamento das
peles e utilizam metasilicato de sdio com esta funo, provando que a ao de
proteases aumentada na presena deste composto. Alm do benefcio ambiental
deste processo, que livre de cal e sulfeto, um ganho de 8% em rea foi observado,
tornando vivel de forma tcnica e econmica este mtodo, conforme sugerem os
autores.
Na purga, seu uso tradicional, entretanto, Ahmed e Gasmelseed (2003) e
Ding e Liang (2005) encontraram uma alternativa que utiliza matria-prima local
disponvel (pncreas bovino), diminuindo a dependncia dos curtumes com relao
s empresas multinacionais.
REVISO BIBLIOGRFICA
47
Uma das descobertas mais recentes para aplicao de enzimas seu uso no
pr-curtimento, objetivando uma maior exausto do banho de curtimento (maior
nmero de cross-link e menor desperdcio do agente curtente). De acordo com
Kanth et al. (2009) e Aravindhan et al. (2007), os resultados so motivantes do ponto
de vista ambiental.
Seguindo esta mesma linha de pesquisa (exausto do banho), Yuan et al.
(2008) e Parvinzadeh (2007), aplicaram enzimas proteolticas no acabamento
molhado de couros, na etapa de pr-tingimento e tingimento de ls. Os autores
verificaram melhorias em propriedades como afinidade ao corante, exausto do
banho, uniformidade da cor e penetrao do corante, e, nas peles; molhabilidade da
fibra, absoro do corante, diminuio do encolhimento e melhoria da tenso de
estiramento de fibras de l.
Embora estas aplicaes tenham impacto direto na melhoria do efluente
gerado, no podem ser consideradas tratamentos de efluentes e resduos. No
entanto, existem trabalhos voltados ao tratamento de resduos, que aplicam enzimas
na recuperao de cromo e protenas de resduos de aparas curtidas, tais como os
de Cantera et al. (2002), Kolomaznik et al. (2008), Jian et al. (2008) e Amaral et al.
(2008), bem como na produo de hidrolisados de colgeno a partir de aparas no
curtidas (BAJZA, 2001).
Metodologia Experimental
Neste captulo ser feita a descrio das etapas envolvidas na elaborao da parte
experimental deste trabalho. Inicialmente sero apresentados os materiais utilizados
para a realizao da etapa experimental (pele, produtos qumicos e enzimas). Em
seguida, ser mostrado o mtodo de aleatorizao das amostras de pele utilizadas.
Na seqncia, sero descritos os testes realizados e apresentadas as formulaes
utilizadas. Por fim, sero apresentados os mtodos utilizados nas anlises dos
testes realizados.
3.1. Pele
Para a realizao deste trabalho foi utilizada uma pele bovina da raa
zebuna, conservada pelo processo de salga e previamente descarnada, proveniente
do curtume Kern-Mattes, localizado na cidade de Porto, Rio Grande do Sul.
A Figura 16 apresenta a representao de uma pele bovina, onde a imagem
do lado esquerdo ilustra as principais regies do animal e a imagem da direita
apresenta a diviso da pele ao meio (uma vez que alguns curtumes trabalham com
peles divididas ao meio, para facilitar o manejo e processamento), enfatizando a
regio do grupo.
Para a produo de couros, a regio do grupo possui maior importncia, pois
uma grande regio como propriedades homogneas. No controle de qualidade dos
couros produzidos, as normas tcnicas nacionais e internacionais recomendam a
retirada de amostras da regio do grupo, como a norma ASTM (D2813/2008).
50
Logo, neste trabalho, tambm foram utilizados apenas pedaos de peles

provenientes do grupo, de modo que as regies da barriga (flancos), cabea e
ancas foram aproveitadas para testes prvios de Hammes (2009), em seu trabalho
sobre o estudo da ao enzimtica na etapa de remolho.
Figura 16: Esquema de uma pele bovina. Principais regies (esquerda) e diviso em meias peles
(direita); Fonte: Gutterres (2010)
A Figura 17 apresenta a fotografia da pele utilizada nos experimentos, onde a

regio da cabea est na parte superior da fotografia, conforme o esquema
apresentado na Figura 16.
Figura 17: Fotografia da pele bovina utilizada nos testes
METODOLOGIA EXPERIMENTAL
51
Aps a remoo dos flancos, ancas e cabea, a regio restante apresentou

uma rea aproximada de 1,63 m, distribuda em duas partes que foram subdivididas
em 54 pedaos menores, cuja rea mdia de cada um era de aproximadamente 400
cm.
Este esquema de corte da pele est apresentado na Figura 18, onde
possvel ver o esquema utilizado no mapeamento das amostras de pele.
importante salientar que a faixa central de 10 cm de largura foi desprezada, uma vez
que esta faixa da linha dorsal do animal tem uma
rigidez maior, e deve ser
desprezada por recomendaes das normas.

Aps serem cortados, os 54 pedaos de peles foram identificados por Letras
e nmeros, como indica a Figura 18, e foram armazenados sob refrigerao at o
momento do seu uso nos testes. Em funo do nmero de testes realizados e da
massa de pele requerida em cada teste, no foi possvel realizar a rplica dos
testes.
Figura 18: Esquema de diviso da pele
52
3.2. Produtos Qumicos

Foram necessrios, para a realizao dos testes e anlises, diversos produtos
qumicos, cujo objetivo principal era prover as condies ideais para o
desenvolvimento das reaes qumicas, tanto as envolvidas nos processos
estudados, quanto quelas que ocorreram nos mtodos analticos.
A Tabela 7 apresenta todos os insumos qumicos utilizados na realizao dos
testes de ribeira dos experimentos.
Tabela 7: Relao dos produtos qumicos empregados na fase de teste das formulaes
Etapa de Uso
Nome do Produto
Remolho, depilao
e caleiro, purga e
Busperse 215
desencalagem
Observaes
Auxiliar o desengraxe das
Tensoativo da Buckman
peles e emulsificar as
indicado para processos
gorduras naturais;
Remolho,
depilao/caleiro e
Objetivos
enzimticos;
Auxiliar o desengraxe das

Eusapon LDE
desencalagem
peles e emulsificar as
Tensoativo da Basf
gorduras naturais;
Aumentar a velocidade da
Remolho
Carbonato de
Sdio
reidratao por meio do

efeito osmtico e formar
sabes com os cidos
graxos da pele;
Depilao/caleiro
Hidrxido de
Clcio
Promover o inchamento e
intumescimento da pele;
Promover a quebra das
Depilao/caleiro
Sulfeto de Sdio pontes dissulfdicas (depilar

a pele);
Proporcionar limpeza das
Depilao/caleiro
Molescal LND peles e combater o
Auxiliar de caleiro da Basf
inchamento excessivo;
Diminuir o inchamento da
Desencalagem
Sulfato de
pele atravs da remoo do
Amnio
hidrxido de clcio presente

entre as fibras;
Desencalagem
Decaltal ESN
Auxiliar a remoo de Clcio Agente de desencalagem

da pele;
Basf isento de N
53
Nesta seo, sero apresentados os reagentes qumicos utilizados nos testes

de ribeira nas etapas de remolho, depilao/caleiro, desencalagem e purga, tanto no
processo qumico quanto no processo coenzimtico. Alguns destes reagentes so
desenvolvidos especificamente para a indstria curtidora, sendo produzidos por
empresas que atuam no fornecimento de insumos para o setor, outros, no entanto,
so reagentes de uso comum em laboratrios ou indstrias.
Os reagentes de uso industrial foram doados pelas empresas Basf e
Buckmam ao Laboratrio de Estudos em Couro e Meio Ambiente (LACOURO), para
a realizao desta dissertao e tambm para outros estudos desenvolvidos pelo
grupo de trabalho.
Tensoativos, ou surfactantes, como tambm so chamados, so produtos
utilizados para diminuir a tenso superficial de lquidos. So compostos por uma
parte solvel em gua e outra parte insolvel, podendo atuar como detergentes,
dispersantes, emulsionantes, umectantes e solubilizantes.
O auxiliar de caleiro, Molescal LND uma soluo de compostos orgnicos
isenta de sulfeto de sdio e com efeito redutor, que auxilia o afrouxamento dos plos
e reduz o inchamento da pele.
O agente de desencalagem, Decaltal ESN, segundo o fabricante, fabricado
a partir de uma mistura de sais e cidos orgnicos e inorgnicos, cuja composio
isenta de nitrognio, elemento presente em sais amoniacais, muitas vezes
empregado na desencalagem, que neste caso foi evitado, pois um agente de
contaminao das guas.
3.3. Enzimas
As enzimas utilizadas foram fornecidas por trs empresas do setor de
insumos para curtumes que no tero seus nomes citados neste trabalho, uma vez
que o objetivo principal destes testes foi verificar a eficcia das enzimas disponveis
comercialmente para o setor coureiro, e no a divulgao ou desvalorizao de uma
marca especfica.
As empresas sero identificadas pelas letras A, B e C e as enzimas por
algarismos de 1 a 4. Ao todo, foram utilizadas oito enzimas (uma em p, fornecida
54
pela empresa A, trs lquidas fornecidas pela empresa B e quatro em p fornecidas

pela empresa C), como pode ser verificado na Tabela 8, juntamente com demais
dados disponibilizados pelos fornecedores em catlogos, sites, ou na rotulagem dos
produtos.
Tabela 8: Relao das enzimas utilizadas no experimento
Nome da
Enzima
Aplicao
Fonte
Etapa
Teste nro
Purga
1,2
A1
Enzima de
purge
mistura de extratos
pancreticos e sais
B1
Lipase
no informada
Remolho,
Depilao/Caleiro
4,5,6,12
5,6
B2
Protease
no informada
Remolho,
Depilao/Caleiro
4,5,6, 11
5,6
B3
Enzima de
purge
no informada
Purga
3,4
C1
Enzima para
remolho
enzima microbiana
Remolho
7,8,9
C2
Enzima para
caleiro
enzima microbiana
Depilao/Caleiro
3,4
C3
Enzima de
purge
extrato pancretico
Purga
5,6
C4
Lipase
enzima microbiana
Depilao/Caleiro
3,4
As orientaes dos fabricantes quanto ao processo na qual as enzimas

poderiam ser utilizadas, os limites percentuais de aplicao, faixa de pH do meio,
alm da temperatura, quando disponibilizadas, foram obedecidas, de modo que as
enzimas A1, B3 e C3 foram utilizadas na etapa de purga, a enzima C1 foi aplicada
apenas na etapa de remolho, a enzima C2 apenas na depilao/caleiro. As enzimas
B1, B2 e C4 so indicadas tanto para remolho quanto para caleiro de acordo com o
fabricante. No entanto, a ltima foi utilizada apenas no caleiro, pois segundo o
fabricante C, a enzima C1 tambm apresenta atividade lipoltica, dispensando o uso
conjunto de outras enzimas.
3.4. Procedimento Experimental

A etapa experimental foi realizada no Laboratrio de Estudos em Couro e
55
Meio Ambiente (LACOURO) do Departamento de Engenharia Qumica (DEQUI). Os

experimentos foram conduzidos em fules de bancada com controle de rotao e
temperatura (por meio de imerso dos fules em banho).
Como pode ser visto na Figura 19, os testes foram realizados em batelada de
trs fules, que corresponde capacidade mxima do equipamento. Cada fulo de
bancada capaz de processar aproximadamente 500 g de pele.
Figura 19: Fotografia dos fules de bancada utilizados na realizao dos experimentos
A etapa experimental teve incio com a preparao da pele. Como

mencionado na seo 3.1, os experimentos utilizaram apenas a parte do grupo, por
ser mais homognea, tanto em termos de espessura quanto em composio de
fibras. O grupo foi separado em lado direito e esquerdo e a faixa central do lombo
de aproximadamente 10 cm foi removida. Aps isso, cada uma das metades do
grupo foi subdividida em vinte e sete pedaos menores de aproximadamente 400
cm (20 X 20 cm). Para chegar a este valor foi feita uma avaliao prvia do volume
de gua consumido em cada anlise realizada.
Inicialmente, na etapa de remolho (para o
efluente), foram previstas as
56
anlises de teor de cloretos, slidos totais fixos e volteis e nitrognio NTK.

Somando as quantidades de banho necessrias para cada teste, sendo estes
realizados em triplicata, chegou-se ao valor de 231 ml de banho, valor esse que foi
aproximado para 250 ml.
Outra considerao feita foi que, no remolho, a pele absorveria no mximo
35% do seu peso em massa de gua. Desta forma seriam necessrios
aproximadamente 400 ml de banho para garantir que ao final do processo houvesse
quantidade suficiente de efluente para realizao dos testes. Sendo a quantidade de
gua adicionada na formulao de remolho em 200%, seria preciso 200 g de pele
em cada fulo. Este padro de massa de pele necessria em cada fulo tambm foi
adotado para os processos de depilao/caleiro e purga.
O passo seguinte foi estimar a massa especfica da pele. Para tanto, algumas
amostras de pele foram medidas e pesadas, chegando-se a concluso que, para a
pele em questo a densidade mdia era de 0,5 g/cm. A partir deste dado, concluiuse que os pedaos da pele deveriam medir 20 X 20 cm, como mencionado
anteriormente.
A fim de garantir que os resultados no sofressem influncia com relao
regio da pele, foi feita uma aleatorizao das amostras, cujo esquema
apresentado na Figura 20. Este processo de aleatorizao consistiu em pegar dois
pedaos do lado esquerdo e dois pedaos do lado direito do grupo (de regies no
muito prximas) e dividi-los em quatro partes iguais. Aps a diviso foram montados
quatro conjuntos (onde cada conjunto abastecia um fulo) contendo 1/4 de cada um
dos pedaos das peles utilizadas.
Aps a diviso da pele, foi realizada a caracterizao da mesma, onde foram
analisados o teor de substncias extraveis com diclorometano, ou, como tambm
chamado, anlise do teor de gorduras (ABNT, NBR 11030/1997), teor de matria
voltil (ABNT, NBR 11029/2001) e o teor de nitrognio e substncias drmicas em
peles (ASTM, D2868/2007).
Este procedimento de aleatorizao das peles foi adotado em todos os testes
de remolho, depilao/caleiro e purga estudados neste trabalho.
57
Pele dividida
Fulo
Fulo
Fulo
Fulo
Figura 20: Representao do esquema de aleatorizao das amostras de pele para realizao dos
testes
A metodologia adotada para os testes bem simples. Como mencionado no

incio desta seo, as peles foram cortadas, identificadas e acondicionadas sob
refrigerao. Aps a escolha e o corte das peles (cada pedao de 20 X 20 cm foi
novamente dividido em 4 partes iguais), o sal em excesso foi removido (substituindo
a operao de bater sal), os conjuntos de pele foram pesados e as peles foram para
os fules, juntamente com os insumos e a gua (para uniformizar o processo foi
utilizada gua destilada em todos os testes), que foram calculados em funo da
massa de pele contida em cada fulo.
Os itens seguintes apresentaro as formulaes utilizadas nas etapas de
remolho, depilao/caleiro, desencalagem e purga. Os objetivos de cada etapa j
foram discutidos no captulo 2, bem como a funo dos insumos na seo 3.2 e a
apresentao das enzimas na seo 3.3.
3.4.1.
Remolho
Na etapa de remolho foram desenvolvidas seis formulaes distintas, que se

desdobraram em doze testes, pois trs destas formulaes foram aplicadas com
variao de tempo. A formulao de cada um destes testes pode ser vista na Tabela
9, onde so apresentados a durao dos testes e o percentual de aplicao dos
58
insumos, calculados sobre o peso do conjunto de peles presentes nos fules.

Os testes de 1 a 3 foram chamados de qumicos, uma vez que no utilizavam
enzimas. Estes testes diferiam entre si pela durao, que variou entre 1 a 4 horas.
Os testes de 4 a 12 so todos co-enzimticos, entretanto, entre os testes 4 a
6, foi utilizado um tipo de enzima e a nica diferena entre eles est relacionada ao
tempo, assim como entre os testes 7 a 9, que utilizavam outro tipo de enzima e
tambm diferem apenas pelo tempo de processamento. O teste 10 uma variao
do teste 9, onde foi dobrada a concentrao da enzima. Os testes 11 e 12 so
variantes do teste 4, onde so aplicadas apenas as enzimas B2 (protease) e B1
(lipase), respectivamente.
Tabela 9: Formulaes utilizadas nos testes das etapas de remolho
Tempo de
processor
(horas)
gua
Carbonato de
Sodium
Tipo e
percentual de
Enzima
aplicado
Nome e percentual
do tensoativo
empregado
Percentuais mssicos aplicados sobre o peso da pele (%)

Teste 1
200
0,3
Elsapon LDE- 0,15
Teste 2
200
0,3
Elsapon LDE - 0,15
Teste 3
200
0,3
Elsapon LDE - 0,15
Teste 4
200
0,3
B1 - 0,03
B2 - 0,07
Busperse 215 - 0,02
Teste 5
200
0,3
B1 - 0,03
B2 - 0,07
Busperse 215 - 0,02
Teste 6
200
0,3
B1 - 0,03
B2 - 0,07
Busperse 215 - 0,02
Teste 7
200
0,3
C1 - 0,3
Busperse 215 - 0,02
Teste 8
200
0,3
C1 - 0,3
Busperse 215 - 0,02
Teste 9
200
0,3
C1 - 0,3
Busperse 215 - 0,02
Teste 10
200
0,3
C1 - 0,6
Busperse 215 - 0,02
Teste 11
200
0,3
B2 - 0,07
Busperse 215 - 0,02
Teste 12
200
0,3
B1 - 0,03
Busperse 215 - 0,02
59
As formulaes qumicas foram baseadas em processos industriais e as

formulaes co-enzimticas a partir da indicao dos fabricantes, com relao ao
percentual de enzimas aplicadas. As condies operacionais dos fules foram
constantes em todos os processos de remolho,
com rotao de 20 rpm e
temperatura de 28 C.
Aps a realizao dos testes, peles e banhos foram coletados e armazenados
separadamente (sob refrigerao) at o momento das anlises, por um perodo
mximo de 15 dias para algumas anlises, como COT e Protena Solvel.
3.4.2.
Depilao/Caleiro
Nesta etapa, verificou-se a influncia da quantidade e do tipo de enzima no

processo de depilao da pele. O tempo total de processamento foi fixado em 16
horas e 15 minutos para todos os testes. Os insumos foram dosados no decorrer
das primeiras 4 horas e 15 minutos, a temperatura e rotao foram mantidas em
28C e 20 RPM, respectivamente. As 12 horas seguintes de processamento
utilizaram rotao de 10 rpm e a temperatura citada anteriormente.
Para a realizao dos testes foi necessrio fazer a etapa de remolho, anterior
a este processo. Com esta finalidade utilizou-se a formulao do teste 3 da Tabela 9
para remolhar a pele para todos os testes de depilao/caleiro realizados. Deste
modo, garantiu-se que as diferenas apresentadas nestes testes (quando
comparados os diferentes tipos de processo) devem-se apenas a esta etapa de
depilao/caleiro.
Na Tabela 10 so apresentadas as formulaes de depilao/caleiro
estudadas. A formulao 1 uma formulao convencional utilizada pela indstria. A
formulao 2 apresenta teores de insumos reduzidos e concentrao do banho, com
menor volume de gua. As formulaes 3 e 4 utilizam as enzimas C4 (lipase) e C2
(enzima para caleiro), onde a diferena entre os processos est relacionada ao
percentual de enzimas aplicado, que o dobro para o processo 4, quando
comparado ao teste 3. Os testes 5 e 6 utilizam as enzimas B1(lipase) e B2
(protease), onde, tambm neste caso, o teste 6 apresenta percentual dobrado com
relao ao teste 5.
60
Tabela 10: Formulaes utilizadas na depilao/caleiro

Tempo
de
Processo
(horas)
Insumos
0,75
Teste 3
Enz C
Teste 4
Enz C
Teste 5
Enz B
Teste 6
Enz B
gua
50
40
40
40
40
40
Ca(OH)2
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
Molescal LND
0,6
0,6
Eusapon Eusapon Busperse Busperse Busperse Busperse

LDE LDE 215 215 215 215 0,08
0,08
0,08
0,08
0,08
0,08
C4 - 0,03 C4 - 0,06 B1 - 0,04 B1 - 0,08
C2 - 0,15 C2 - 0,30 B2 - 0,06 B2 - 0,12
Enzima
Na2S
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
Ca(OH)2
0,5
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
Na2S
1,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
Ca(OH)2
0,5
0,3
0,3
0,3
0,3
0,3
gua
150
50
50
50
50
50
Ca(OH)2
1,5
1,5
1,5
1,5
1,5
Tensoativo
1,5
Teste 2
Qum.
Red.
Tipo e Percentual (%)
Tensoativo
Teste 1
Qum.
Conv.
Eusapon Eusapon Busperse Busperse Busperse Busperse

LDE LDE 215 215 215 215 0,02
0,02
0,02
0,02
0,02
0,02
Enzima
C2 - 0,05
C2 - 0,1
B2 - 0,04 B2 - 0,08
Nos testes 3 e 5, as enzimas foram aplicadas seguindo-se as recomendaes

do fabricante. J os testes 4 e 6, como citado anteriormente, utilizaram o dobro do
percentual anterior, dos testes 3 e 5, respectivamente.
3.4.3.
Desencalagem
Embora a etapa de desencalagem no fosse objeto de estudo deste trabalho,

uma vez que no se utilizam enzimas nesta etapa, ela tambm foi realizada, para
que a etapa seguinte, a purga, pudesse ser estudada.
Esta etapa, no entanto, foi problemtica, pois no curtume de onde veio a
formulao utilizada, aps o caleiro, a pele passa pelo processo de descarne e
61
diviso. Neste caso, no foi possvel realizar tal etapa, uma vez que no existem
equipamentos no laboratrio capazes de dividir peles to pequenas.
Logo, a formulao apresentada na Tabela 11 no foi capaz de desencalar
totalmente as peles, uma vez que a espessura da mesma era maior, dificultando o
processo de difuso dos agentes desencalantes na pele.
Tabela 11: Formulao de desencalagem (para peles divididas)
Tempo de
processo (min.)
15
20
40
Insumos
Percentual (%)
Observao
gua
200
esgotar o fulo
gua
200
(NH4)2SO4
0,3
Eusapon LDE
0,02
gua
200
(NH4)2SO4
0,3
Busperse 215
0,1
Decaltal ESN
1,2
esgotar o fulo
medir pH
Na desencalagem realizada, o tempo foi dobrado e a quantidade de

reagentes utilizada foi praticamente triplicada, com relao aos dados apresentados
na Tabela 11. A temperatura do banho de aquecimento dos fules foi acertada em
28 C e a rotao em 20 rpm. Fitas para medir pH foram utilizadas nos banhos de
desencalagem. Para as peles foi utilizado indicador fenolftalena em cortes feitos na
pele, como indica a Figura 21.
Figura 21: Uso de fenolftalena na etapa de desencalagem.
62
O objetivo de se conferir o pH na seo transversal da pele foi verificar se a

remoo de clcio efetivada ao longo de toda sua espessura.
3.4.4.
Purga
Para a realizao da purga de peles, industrialmente, deve-se passar

primeiramente pelas etapas de bater sal, pr-remolho, pr-descarne, remolho,
depilao/caleiro, descarne e desencalagem. Em escala laboratorial, estando a pele
salgada e previamente descarnada, as etapas que antecedem a purga so: remolho,
depilao/caleiro e desencalagem.
Foram utilizadas as formulaes do teste 3 de remolho (apresentada na
Tabela 9), do teste 1 de depilao/caleiro (Tabela 10) e da Tabela 11, para a
desencalagem, em todos os teste de purga. O processo de purga foi iniciado aps a
desencalagem das peles, aproximadamente 24 horas do incio do remolho.
importante salientar que a etapa final da desencalagem e a purga
ocorreram simultaneamente, pois, quando se adicionaram os produtos da
formulao de purga (enzima e tensoativo) aos fules, alm da pele, os mesmos
continham gua (200%), sulfato de amnio (0,3%), auxiliar de desencalagem (1,2%)
e tensoativo (0,1%), por mais de 40 minutos de processo.
Na purga foram testadas trs diferentes formulaes (onde cada uma destas
utilizou uma enzima de um fornecedor distinto), em seis testes, pois cada formulao
utilizou dois tempos de processamento, como pode ser visto na Tabela 12. Nesta
etapa utilizou-se temperatura de 36C e rotao de 20 rpm.
Os testes 1 e 2 utilizaram a enzima A1, os testes 3 e 4 utilizaram a enzima B3 e os
testes 5 e 6 utilizaram a enzima C3. Com relao ao tempo de processamento,
usualmente a indstria utiliza perodos em torno de 30 minutos, porque se acredita
que longos perodos de exposio de peles s enzimas podem causar danos
estrutura das fibras colagnicas e superfcie da flor com seu desenho granular. No
entanto, neste trabalho,alm do tempo de 30 minutos, para fins de estudo, o tempo
foi extrapolado para cada uma das enzimas testadas, como demonstram os testes 2,
4 e 6, que tiveram a durao de 3 horas, com o objetivo de testar a ao enzimtica
em longos perodos de contato com a pele.
63
Tabela 12: Formulaes utilizadas na purga

Tipo e
percentual de
Enzima
Nome e percentual
do tensoativo
empregado
Tempo de
processo
(horas)
gua
Teste 1
0,5
200
A1 - 0,06
Busperse 215 - 0,08
Teste 2
200
A1 - 0,06
Busperse 215 - 0,08
Teste 3
0,5
200
B3 - 0,06
Busperse 215 - 0,08
Teste 4
200
B3 - 0,06
Busperse 215 - 0,08
Teste 5
0,5
200
C3 - 0,06
Busperse 215 - 0,08
Teste 6
200
C3 - 0,06
Busperse 215 - 0,08
Percentuais mssicos aplicados (%)
3.5. Mtodos Analticos

Os 24 testes (12 de remolho, 6 de depilao/caleiro e 6 de purga) com as
formulaes descritas anteriormente tiveram coletas de
banhos e peles para
analisar de acordo com os ensaios apresentados na Tabela 13. As normas que

descrevem cada um destes mtodos esto dispostas nos anexos, ao final deste
trabalho.
Para todos os 24 experimentos foram feitas anlises de Carbono Orgnico
Total (COT) e Protena Solvel, nos efluentes dos banhos. Estes ensaios foram
realizados com o intuito de quantificar e comparar o percentual de matria orgnica
removido em cada teste.
Nos banhos de remolho, as anlises de cloretos foram realizadas com o
intuito de verificar se as enzimas influenciam na abertura das fibras a ponto de
remover um maior percentual do sal absorvido pelas peles no processo de salga. Os
slidos dissolvidos totais remetem a pequenas molculas orgnicas, sujeiras
presentes na pele, sais dissolvidos no banho, entre outros. O nitrognio NTK outra
forma de quantificar a matria orgnica (com exceo a lipdeos, que no possuem
nitrognio em sua composio).
64
Tabela 13: Relao das anlises realizadas aps os testes

Norma/metodologia
Etapa Analisada
Fase
Analisada
Teor de Cloretos em Banhos
NBR - 13337/1995
Remolho
Efluente
Teor de Slidos Totais, Fixos

e Volteis
NBR - 14550/2000
Remolho
Efluente
Percentual de Matria Voltil
NBR - 8290/1983
Remolho, caracterizao da pele
Pele
Substncias Extraveis com

Diclorometano
NBR - 11030/1997
Remolho, caracterizao da pele
Pele
Nitrognio e Substncias
Drmicas em Peles
ASTM - D2868/2007
Caracterizao da pele
Pele
Microscopia Eletrnica de
Varredura
Depilao/caleiro
Pele
Teor de Carbono Orgnico

Total
Remolho, depilao/caleiro e
purga
Efluente
Teor de protenas solveis
Mtodo de Lowry
Remolho, depilao/caleiro e
purga
Efluente
Anlise
Nas peles remolhadas foram analisados o teor matria voltil (umidade), para
avaliar o grau de umedecimento e abertura das fibras, e de gorduras (substncias
extraveis com diclorometano), com a finalidade de verificar qual enzima atua melhor
na remoo deste tipo de substncia orgnica.
Na etapa de caleiro, alm das anlises comuns a todas as outras etapas,
foram feitas anlises de microscopia eletrnica de varredura (MEV), em peles
retiradas no decorrer do processo, cujo objetivo era verificar a remoo dos plos e
abertura da estrutura ao longo do processo e compar-las quanto a sua eficcia,
entre os diversos testes realizados.
Na purga, foram feitas anlises de nitrognio amoniacal nos efluentes,
tambm com o objetivo de verificar a hidrlise de protenas da pele.
As anlises de MEV e de COT foram realizadas em equipamentos
especficos, onde no foram encontradas normas especficas para realizao destes
ensaios.
As anlises de MEV foram realizadas no Centro de Microscopia Eletrnica da
65
Universidade (CME/UFRGS). Em um aparelho da marca JEOL, modelo JSM 6060,

exibido na Figura 22.
O preparo das amostras seguiu o protocolo elaborado pelo CME, onde as
mesmas foram cortadas em um tamanho aproximado de 1 cm, desidratadas em
banhos sucessivos de acetona (dimetilcetona), com concentrao de 30, 70 e 100%
de acetona (em volume) e armazenadas em dessecador at o momento das
anlises.
A Figura 23 apresenta uma das amostras desidratadas, montada sobre um
stub (base suporte) antes da metalizao (a) e outra amostra metalizada (b),
pronta para ser analisada.
Figura 22: Fotografia do microscpio eletrnico de varredura utilizado.
As anlises de COT foram realizadas na Central Analtica do Departamento

de Engenharia Qumica, no Analisador de Carbono Orgnico Total, marca
Shimadzu, modelo V CSH.
Para a realizao das anlises, o pH das amostras foi conferido e as
66
amostras foram previamente filtradas, utilizando-se vcuo quando necessrio. O

mtodo do equipamento selecionado no equipamento para as anlises foi o TC
ALTA 1000 ppm, indicado para amostras com grande concentrao de carbono. A
diluio inicial do equipamento foi de 5 vezes e no foi feita diluio manual.
a
Figura 23: Preparao de amostras para as anlises de MEV. (a) amostra de pele desidratada; (b)
amostra de pele metalizada
A Figura 24 demonstra o equipamento utilizado nas anlises de COT.
Figura 24: Equipamento de anlises de Carbono Orgnico Total utilizado nos experimentos
67
3.6. Caracterizao Enzimtica

Aps a realizao dos testes e das anlises, algumas enzimas foram
escolhidas para que suas atividades frente a lipdeos e colgenos fossem
determinadas. Nesta linha de caracterizao de atividade enzimtica, outros
trabalhos esto sendo desenvolvidos pelo grupo de pesquisa (DETTMER et al.,
2010).
As enzimas de purga B3, A1 e C3 tiveram sua atividade colagnica medida,
de
acordo
com
uma
metodologia
encontrada
no
site
da
Sigma-Aldrich
(http://www.sigmaaldrich.com/etc/medialib/docs/Sigma/Enzyme_Assay/collagenfalgp
asub.Par.0001.File.tmp/collagenfalgpasub.pdf). Estas mesmas enzimas, juntamente
com a lipase B1, tambm tiveram sua atividade lipdica medida. Para a realizao
das anlises de lipases foi utilizada a metodologia desenvolvida no trabalho de
Volpato (2009), com base no trabalho de Winkler e Stuckmann (1979). Os
procedimentos utilizados para a realizao destes testes (atividade colagnica e
lipdica) encontram-se descritos no anexo.
Resultados e Discusso
Este captulo destina-se apresentao e discusso dos resultados experimentais

obtidos neste trabalho. Primeiramente, so apresentados os resultados de
caracterizao da pele utilizada nos experimentos. Logo aps so apresentados os
resultados e a discusso para os testes de remolho, depilao e caleiro e purga dos
processos qumicos e coenzimticos testados, nesta seqncia. Por fim, so
apresentados os resultados relacionados determinao da atividade enzimtica de
algumas das enzimas utilizadas no trabalho, com relao a colgeno e a lipdeos.
4.1. Caracterizao da Pele Utilizada

Conforme foi mencionado no captulo anterior, a pele utilizada foi
caracterizada com relao ao teor de substncias extraveis com diclorometano
(gorduras), teor de matria voltil (gua) e teor de nitrognio e substncia drmica
em peles.
A Tabela 14 apresenta os resultados obtidos nessas anlises com seus
respectivos desvios padro. Foram feitos seis testes utilizando-se a norma ASTM D
2868/2007, para determinao do percentual de nitrognio, nitrognio em base seca
e substncia drmica (protenas fibrosas) em peles. O percentual de gordura foi
determinado por meio da norma NBR 11030/1997 da ABNT em seis testes. A
anlise de matria voltil utilizou-se do procedimento ABNT, NBR 8290/1983
realizado em quadruplicata.
70
Tabela 14: Resultados obtidos para a caracterizao da pele salgada antes do seu processamento
Teste
Valor Mdio
Desvio Padro
Percentual de Nitrognio
7,721
0,431
14,385
0,804
Percentual de Substncia Drmica
80,844
4,517
Percentual de gua
46,328
0,231
Percentual de Gordura
1,384
0,1357
Percentual de Nitrognio (base

seca)
Estes dados servem como parmetro de comparao para os testes de

remolho, onde foram realizadas anlises de matria voltil e de substncias
extraveis com diclorometano.
4.2. Testes de Remolho

Uma dificuldade encontrada neste trabalho experimental esteve relacionada
anlise dos resultados, pois as variveis de resposta utilizadas para quantificar a
ao das enzimas nos testes feitos no eram sensveis o suficiente para detectar as
mudanas que ocorriam entre cada teste.
Vrias das anlises feitas apresentaram grande variabilidade entre as suas
triplicatas, logo, diversas vezes, o intervalo de confiana calculado para o ensaio no
permitiu, que fossem feitas afirmaes com respeito s diferenas encontradas entre
os testes realizados.
Os resultados encontrados nos ensaios foram sumarizados nos grficos
seguintes, com o auxlio do programa Minitab (verso 15), que apresenta os
valores mdios encontrados para cada anlise (uma vez que estes foram realizados
em triplicata) juntamente com o intervalo de confiana que foi padronizado em 95%.
Os grficos relacionados aos ensaios de COT foram os nicos que no
apresentaram seu intervalo de confiana. Isto porque as anlises de COT
apresentaram apenas os resultados mdios dos testes. No entanto, como
mencionado no captulo anterior, o desvio padro das amostras era de no mximo
2% para o COT.
RESULTADOS E DISCUSSO
71
Devido a busca por uma varivel de resposta adequada, a etapa de remolho,

que foi a primeira a ser realizada, teve uma maior quantidade de anlises feitas. As
anlises realizadas nos testes de remolho foram apresentadas na Tabela 13 do
captulo anterior.
A Figura 25 apresenta o primeiro dos ensaios realizados, utilizado para
determinar o percentual de matria voltil em peles.
Percentual mssico de gua na pele (%)
69
68
67
66
65
64
63
62
61
60
s
Te
_1
te
2
3
4
5
6
7
8
9
0
1
2
e_
e_
e_
e_
e_
e_
e_
e_
_1
_1
_1
st
st
st
st
st
st
st
st
te
te
te
e
e
e
e
e
e
e
e
s
s
s
T
T
T
T
T
T
T
T
Te
Te
Te
Figura 25: Percentual de Matria voltil nas peles para os testes de remolho
O objetivo deste teste seria determinar a quantidade de gua absorvida pela

pele, uma vez que este parmetro est relacionado com a reidratao da pele e
abertura das fibras de colgeno aps o processo de desidratao causado pelo sal
de conservao.
No entanto, como foi afirmado anteriormente, este um dos casos onde o
resultado das anlises no leva a muitas concluses, em funo do amplo intervalo
de confiana, principalmente com relao aos testes 2, 8 e 9.
A prpria metodologia, neste caso, contribui com a alta variabilidade dos
resultados, uma vez que as peles utilizadas devem ser cortadas em pequenos
pedaos de aproximadamente 25 mm, acarretando na perda de gua da amostra
devido presso exercida pela lmina no momento do corte.
72
De
acordo
com
este
ensaio,
ao
final
dos
testes
de
remolho,
independentemente do tempo, o teor de umidade na pele subiu de 46%, de acordo

com a Tabela 14, para aproximadamente 63%. Este percentual est associado ao
contedo de gua ligado de forma mais concisa ao colgeno, uma vez que parte da
gua absorvida pela pele foi removida atravs da presso exercida no momento de
preparao das amostras para as anlises.
A Figura 26 demonstra o resultado da segunda anlise realizada. O ensaio
para determinao do teor de cloretos em banhos apresentou uma variabilidade
menor, quando comparado ao ensaio anterior.
Por meio desta anlise tambm possvel identificar a quantidade de gua
absorvida pela pele, pois, medida que a pele se reidrata, o cloreto absorvido por
ela na etapa de salga liberado ao banho.
Concentrao de Cloretos (g/L)
70
65
60
55
50
s
te
te
e
st
te
e
st
te
e
st
te
e
st
te
e
st
te
e
st
te
e
st
te
e
st
te
9
s
te
te
10
e
st
te
11
s
te
te
12
Figura 26: Concentrao de cloretos em banho para os testes de remolho
Nesta anlise, pode-se identificar a importncia da varivel tempo de

processamento. Quando se comparam os valores obtidos para os testes 1, 4 e 7 (1
hora de processamento) aos valores dos testes 2, 5 e 8 (2 horas de processamento)
e tambm dos testes 3, 6, 9, 10, 11 e 12 (4 horas de processamento), observa-se
claramente trs faixas de valores. Ainda possvel concluir que o tipo de processo
73
(qumico ou coenzimtico) no possui grande influncia na liberao de cloretos no

banho, uma vez que, para o tempo mximo o valor cresce de 63 g/l, no processo
qumico para 65 g/l. Por fim, a utilizao da concentrao em dobro das enzimas C1
(teste 10) no se demonstrou vantajosa, no entanto, a utilizao das enzimas B1 e
B2 separadamente (teste 12 e 11, respectivamente) levaram a resultados
levemente superiores quando comparadas ao teste 6, embora estatisticamente no
se possa fazer tal afirmao.
As Figuras 27, 28 e 29 esto relacionadas com a determinao do teor de
slidos totais, fixos e volteis em banho. Esta anlise quantifica o teor de
substncias liberadas da pele para o banho, sendo os volteis considerados de
origem orgnica e os fixos de origem inorgnica (como cloreto, por exemplo). Os
slidos totais constituem a soma dessas duas parcelas e esto ilustrados na Figura
27.
Concentrao de slidos totais(mg/L)
75000
70000
65000
60000
55000
8
9
5
0
1
6
2
7
3
2
4
1
e_
e_
e_
e_
_1
e_
_1
e_
e_
e_
e_
_1
st
st
st
st
st
st
st
st
st
te
te
te
e
e
e
e
e
e
e
e
e
s
s
s
e
e
e
-T
-T
-T
-T
-T
-T
-T
-T
-T
-T
-T
-T
ST
ST
ST
ST
ST
ST
ST
ST
ST
ST
ST
ST
Figura 27: Concentrao de Slidos totais (ST) em banho para os testes de remolho
Os resultados verificados na Figura 28 so um reflexo da Figura 26, uma vez

que os valores de concentrao de slidos fixos (material de origem inorgnica) so
um pouco superiores aos valores de teor de cloretos.
74
Concentrao de slidos fixos (mg/L)
70000
65000
60000
55000
50000
0
2
1
9
7
2
8
1
3
4
5
6
_1
_1
_1
e_
e_
e_
e_
e_
e_
e_
e_
e_
te
st
st
te
st
st
te
st
st
st
st
st
e
s
e
s
e
e
e
s
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e
e
e
e
e
e
T
T
T
T
T
T
T
T
T
-T
-T
-T
F
F
F
SF
SF
SF
SF
SF
SF
SF
SF
SF
S
S
S
Figura 28: Concentrao de Slidos fixos (SF) em banho para os testes de remolho
A Figura 29 apresenta os resultados do teor de slidos volteis. Esta

quantidade est relacionada liberao de matria orgnica, como proteoglicanos,
protenas fibrosas, protenas no fibrosas (como sangue) e gorduras provenientes
da pele.
concentrao de slidos volteis (mg/L)
7500
7000
6500
6000
5500
5000
4500
4000
SV
s
Te
8
0
9
5
1
7
6
2
2
3
4
e_
_1
e_
_1
e_
e_
e_
_1
e_
e_
e_
st
st
st
st
st
st
st
st
te
te
te
e
e
e
e
e
s
s
s
e
e
e
T
T
T
T
T
T
T
T
Te
Te
Te
V
V
V
SV
SV
SV
SV
SV
SV
SV
SV
S
S
S
_1
te
Figura 29: Concentrao de Slidos volteis (SV) em banho para os testes de remolho
possvel observar, no caso da Figura 29, que a amplitude do intervalo de
75
confiana para os testes maior em relao s figuras 27 e 28. Isso se deve ao fato
de que parte da protena liberada pela pele estava em suspenso no banho e pode
ter passado atravs da peneira utilizada para reteno de slidos. Ainda de acordo
com esta figura, o processo qumico mais eficiente em termos de remoo de
matria orgnica (podendo esta ser relacionada com a matria voltil) que o
processo coenzimtico, que utilizou as enzimas B. Apenas no teste 10 foi verificado
resultado superior a este (teste 3), no entanto, devido aos problemas mencionados
na filtrao da amostra esta anlise no se demonstrou vlida para propsitos de
comparao entre as tecnologias, uma vez que havia presena de material slido
suspenso nesta anlise.
Por fim, a Figura 30 demonstra a compilao dos trs grficos anteriores.
Nesta figura possvel observar o que foi mencionado anteriormente (a soma do
teor de slidos fixos e volteis corresponde aos slidos totais), alm da influncia
progressiva do tempo no efeito de remolho.
Concentrao de Slidos no Banho (mg/L)
80000
70000
60000
50000
40000
30000
20000
10000
A nlise
T F
T F
T F
T F
T F
T F
T F
T F
T F
T F
T F
T F
S S SV
S S SV
S S SV
S S SV
S S SV
S S SV
S S SV
S S SV
S S SV
S S SV
S S SV
S S SV
1
2
3
4
5
6
7
8
9
0
1
1
1
12
TE
TE
TE
TE
TE
TE
TE
TE
TE
TE
TE
TE
S
S
S
S
S
S
S
S
S
ES
ES
ES
TE
TE
TE
TE
TE
TE
TE
TE
TE
T
T
T
Figura 30: Perfis das anlises de ST, SF e SV em banho para os testes de remolho
A Figura 31 ilustra os resultados obtidos nos testes de substncias extraveis

com diclorometano realizados nas peles. Logo, neste caso, quanto maior foi o
percentual de gorduras encontrado no teste, menor a quantidade de lipdeos
removidas da pele, resultando em um processo menos eficiente.
76
Percentual de gordura presenta na pele (%)
1,1
1,0
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
2
1
0
9
8
7
4
3
2
1
6
5
_1
_1
_1
e_
e_
e_
e_
e_
e_
e_
e_
e_
st
st
st
st
st
st
st
st
st
te
te
te
s
s
s
e
e
e
e
e
e
e
e
e
T
T
T
T
T
T
T
T
T
Te
Te
Te
Figura 31: Percentual de substncias extraveis com diclorometano em peles para os testes de
remolho
A amplitude do intervalo de confiana tambm alta neste caso. No entanto,

possvel afirmar que o processo qumico tem uma capacidade menor na remoo
de gorduras, quando comparado aos processos coenzimticos. Ainda, de acordo
com esta anlise, o tempo, tipo de enzima e percentual de aplicao no possuem
influncia na remoo de gorduras. Comparando-se os dados da Tabela 14 com os
percentuais de gordura remanescentes (mdia entre os testes 1 a 3) na pele,
verifica-se que o processo qumico remove em torno de 38,5% da gordura inicial
presente na pele. J os testes coenzimticos 11 e 12 apresentaram um percentual
de remoo de aproximadamente 67,5%, o que representa uma diferena de 29%
entre a eficincia dos processos.
A falta de confiana no resultados dos testes feitos, devido ao elevado desvio
padro de algumas amostras, muitas vezes inerente metodologia, que se
demonstrou incapaz de detectar as diferenas existentes entre os processos, levou
busca de outras anlises.
Diversos trabalhos como os de Anandan et al. (2008), Mukhtar e Haq (2008),
Ganesh Kumar et al. (2008), Madhumathi et al. (2007) e Riffel et al. (2003) utilizaram
o mtodo de Lowry et al. (1951) para determinao de protenas solveis com o
77
objetivo de quantificar diferenas entre processos qumicos e coenzimticos.

Adicionalmente, anlises para a determinao de COT tambm foram realizadas,
como no trabalho de Yilmaz et al. (2007).
A anlise de protena solvel requer a construo de uma curva padro,
conforme descrito na metodologia (Lowry et al., 1951). Esta curva apresentada na
Figura 32, juntamente com a equao da reta obtida (Equao 18), que foi utilizada
Concentrao de BSA - mg/ml
na converso das leituras de absorbncia em concentrao de protena (mg/ml).

0,0060
0,0050
y = 0,0063x - 0,0008
R = 0,9902
0,0040
0,0030
0,0020
0,0010
0,0000
0,0000
0,2000
0,4000
0,6000
0,8000
1,0000
Absorbncia a 750 nm
Figura 32: Curva padro e equao da reta para os ensaios de protena solvel
Equao 18
Foram feitas algumas diluies manuais para adequar as leituras dos testes
faixa de aplicao da curva padro. Para o remolho, as amostras foram diludas
cinqenta vezes (50x); para a depilao e caleiro utilizou-se diluio de sessenta
vezes (60x) e para os testes de purga a diluio foi de 10 vezes (10x).
Embora os testes 4 e 5 apresentem uma amplitude elevada do seu intervalo
de confiana, os demais testes apresentaram bons resultados. Assim como na
Figura 29, neste caso tambm possvel verificar a influncia do tempo na liberao
de protenas.
78
Os resultados desta anlise encontram-se na Figura 33.
Concentrao de protenas (mg/mL)
0,05
0,04
0,03
0,02
0,01
0,00
2
1
9
0
8
1
7
2
5
3
6
4
_1
_1
e_
e_
e_
e_
e_
_1
e_
e_
e_
e_
st
st
st
st
st
st
st
st
st
te
te
te
s
s
e
s
e
e
e
e
e
e
e
e
T
T
T
T
T
T
T
T
T
Te
Te
Te
Figura 33: Protena solvel para os banhos dos testes de remolho
Verificou-se que os testes qumicos e coenzimtico (testes 1 a 8) apresentam

desempenho semelhante, levando-se em considerao a varivel tempo. No entanto
o desempenho da enzima C1 no tempo de 4 horas (teste 8) foi muito superior em
comparao aos demais testes (1 a 7 e 12). O teste 10, comparado ao teste 9,
provou que a concentrao de enzima estava adequada para os propsitos
desejados (liberao de protenas). J o teste 11 indicou duas possibilidades. A
primeira de que pode haver um efeito de interao entre as enzimas B1 e B2,
prejudicando o desempenho das mesmas quando utilizadas em conjunto.
E a
segunda, de que a dosagem de enzima utilizada est subestimada, no sendo

possvel verificar a ao da enzima sob o substrato. De fato, os percentuais de
aplicao das enzimas B1 e B2 (que somados atingem 0,1%) so inferiores queles
utilizados pela enzima C1 (0,3%).
A Figura 34 apresenta os resultados das anlises do teor de COT.
79
3000
Concentrao de COT (mg/L)
2500
2000
1500
1000
500
0
_4
_1
_5
_6
_2
_7
_3
_8
_9
10
11
12
te
te
te
te
te
te
te
te
te
e_
e_
e_
s
s
s
s
s
s
s
s
s
t
t
t
s
s
s
Te
Te
Te
Te
Te
Te
Te
Te
Te
Te
Te
Te
Figura 34: Concentrao de Carbono Orgnico Total para os banhos dos testes de remolho
Pode-se observar neste caso, assim como no anterior, que os processos

coenzimticos que utilizam as enzimas B1 e B2 aplicadas nos testes 4 a 6
apresentam desempenho comparvel aos processos qumicos, ou seja, estas
enzimas no atuam no substrato. J a enzima C1 (teste 7 a 10) apresenta
desempenho muito superior s demais no tempo de 4 horas. No entanto, para o
dobro da concentrao enzimtica (teste 10), no se verifica o mesmo
comportamento que foi encontrado para a Figura 33, pois neste caso verifica-se uma
queda acentuada com relao remoo de carbono orgnico da pele para o
banho. Para os casos 11 e 12, observa-se, que mesmo atuando sozinhas, estas
enzimas no so capazes de remover maior quantidade de matria orgnica,
chegando-se a mesma concluso anterior.
Os resultados das anlises de matria voltil, teor de cloretos, percentual de
gorduras e carbono orgnico total, bem como os desvios padro para cada anlise
esto dispostos na Tabela 15. Os resultados dos demais testes, protena solvel,
slidos totais, fixos e volteis encontram-se na Tabela 16.
80
Tabela 15: Resultados mdios e desvio padro dos ensaios realizados para os testes de remolho
Anlises realizadas em peles (p) e banhos (b)
Matria voltil (p)
Teor de cloretos (b)
% de gorduras (p)
COT (b)
Teste
mdia (%)
DP
mdia (g/l)
DP
mdia (g/l)
DP
mdia (mg/l)
63,372
0,033
52,312
0,221
52,312
0,221
1114,0
63,412
0,233
59,785
0,301
59,785
0,301
995,3
63,572
0,085
63,739
0,527
63,739
0,527
1781,0
61,800
0,134
53,786
0,173
53,786
0,173
1318,0
62,772
0,161
59,492
0,453
59,492
0,453
1055,0
62,820
0,008
63,687
0,552
63,687
0,552
1570,0
64,932
0,011
54,769
0,866
54,769
0,866
457,2
64,249
0,451
62,988
0,236
62,988
0,236
813,7
63,610
0,416
65,955
1,008
65,955
1,008
2765,0
10
64,835
0,106
66,068
0,710
66,068
0,710
1474,0
11
64,168
0,015
65,331
0,348
65,331
0,348
1275,0
12
64,639
0,049
65,501
0,445
65,501
0,445
1621,0
Tabela 16: Resultados mdios e desvio padro das anlises feitas nos testes de remolho
Anlises realizadas em banhos
Slidos Fixos
mdia
Slidos Volteis
mdia
Slidos Totais
mdia
DP
(mg/l)
Prot. Solvel
mdia
Teste
(mg/l)
DP
(mg/l)
DP
54189,333
69,551
4484,000
120,466 58673,333
61974,667
107,058
4868,000
158,038 66842,667 188,694 1,17E-02 1,75E-03
64886,667
57,735
6205,333
56,048
71092,000
51241,333
256,042
4446,667
71,703
55688,000 199,038 8,61E-03 3,51E-03
56942,667
55,474
5310,667
261,085 62253,333 314,180 1,39E-02 3,43E-03
62618,667
221,173
5614,667
210,079 68233,333 280,637 2,69E-02 4,35E-04
54562,667
289,837
4697,333
52,205
59106,667 276,676 4,94E-03 5,48E-04
62086,667
238,976
5616,000
64,374
67702,667 174,646 1,49E-02 5,12E-04
63529,333
393,148
5572,000
139,485 68973,333 341,955 4,18E-02 9,58E-04
10
67616,000
233,135
6853,333
113,795 74469,333 140,987 4,22E-02 1,75E-03
11
65501,333
283,248
5788,000
197,545 71289,333
12
65213,333
159,516
5613,333
391,639 70604,000 174,034 2,33E-02 6,61E-04
69,551
78,791
85,822
(mg/ml)
DP
2,50E-03 4,84E-04
2,54E-02 5,54E-04
3,30E-02 1,04E-03
81
4.3. Testes de Depilao e Caleiro

As anlises realizadas nos testes de depilao e caleiro foram feitas ao final
do processo, logo, o tempo de processamento das peles no foi avaliado neste
caso, mas apenas o tipo de enzima aplicado e sua concentrao.
Alm dos ensaios de determinao do teor de carbono orgnico total e
protena solvel, foram feitas anlises de microscopia eletrnica de varredura (MEV),
para acompanhar a ao enzimtica ao longo do processo.
A Figura 35 ilustra os banhos residuais dos testes de depilao e caleiro. Esta
etapa apresentou maiores concentraes de matria orgnica nos banhos em
comparao com a etapa de remolho e a de purga, o que j era esperado, uma vez
que nesta etapa est prevista a liberao de plos e epiderme.
Figura 35: Banhos residuais dos testes de depilao e caleiro ao final do processo
Verifica-se neste processo uma grande quantidade de matria orgnica em

suspenso liberada, alm disso, a quantidade de hidrxido de clcio presente
tambm colabora para a formao de precipitado, uma vez que a solubilidade deste
82
componente em gua baixa (aproximadamente 1,41 g/l em gua a 40 C).

A Figura 36 demonstra as peles aps o processo de depilao e caleiro para
os trs principais processos, qumico convencional (teste 1), qumico com reduo
dos percentuais de gua e insumos (teste 2) e coenzimtico (teste 3).
Figura 36: Da esquerda para a direita (testes 1, 2 e 3), peles ao final do processo de depilao e
caleiro
possvel observar com base nas imagens que a depilao no teste 2 foi
incompleta. No teste 1 havia grande presena de plos nos folculos e no teste 3 a
pele estava mais limpa, embora fosse verificado que existiam alguns pelos inteiros
que no foram removidos, devido ao mecnica baixa nos fules de bancada.
Concentrao de protenas (mg/mL)
0,25
0,20
0,15
0,10
Teste_1
Teste_2
Teste_3
Teste_4
Teste_5
Teste_6
Figura 37: Anlise de protena solvel para os banhos dos testes de depilao e caleiro.
83
A Figura 37 apresenta o resultado da anlise de protena solvel nos banhos

residuais de depilao e caleiro.
Observa-se nesta figura que o teste 1 aponta os menores teores de
concentrao de protenas, porm, vale lembrar, que este teste (ver Tabela 10)
apresenta uma formulao diferente das demais, no s pela quantidade de
insumos aplicados, mas tambm pela quantidade de gua utilizada neste processo,
acarretando em uma diluio dos resultados. No entanto, para os demais resultados,
observa-se um aumento na concentrao de protenas para os testes coenzimticos
(teste 3 a 6) em comparao com o teste qumico 2. Com relao concentrao
enzimtica, no existem diferenas significativa entre os testes 5 e 6 (enzimas B1 e
B2), j para os testes 3 e 4 (enzimas C), o aumento na concentrao de protenas
mnimo com relao ao aumento na concentrao da enzima.
O grfico da Figura 38 indica o mesmo comportamento obtido para o ensaio
de protena solvel, confirmando estes resultados.
9000
8000
7000
6000
5000
4000
3000
2000
1000
0
Teste_1
Teste_2
Teste_3
Teste_4
Teste_5
Teste_6
Figura 38: Anlise teor de Carbono Orgnico Total para os banhos dos testes de depilao e caleiro.
A Tabela 17 sumariza os resultados dos ensaios realizados nos testes de

caleiro que foram apresentados sob a forma de grficos na Figura 37 e na Figura 38,
juntamente com o desvio padro dos ensaios de protena solvel. Os desvios padro
84
para os testes de COT no foram demonstrados, pois conforme foi mencionado

anteriormente, o equipamento que realiza a amostra limitou um desvio mximo de
2% entre as triplicatas.
Tabela 17: Resultados mdios e desvio padro dos ensaios realizados para os testes de depilao e
caleiro
Anlises realizadas
Teste
4.3.1.
COT
Protena Solvel
mdia (mg/l)
mdia (mg/ml)
DP
2156
8,44E-02
1,33E-03
4864
1,45E-01
3,65E-03
6967
1,86E-01
2,50E-03
7871
1,99E-01
8,86E-04
8232
2,07E-01
3,37E-03
8613
2,17E-01
1,16E-02
Anlise de MEV
Ao todo foram analisadas trinta amostras no microscpio eletrnico de

varredura, gerando mais de trezentas e vinte imagens de peles desta etapa em
diferentes tempos de processamento e tambm sob diferentes graus de
magnificao.
A apresentao de todas estas imagens obtidas seria excessiva, de modo
que apenas algumas imagens representativas de cada teste em cada um dos
tempos de coleta, foram escolhidas para fins de comparao entre os processos
qumicos e coenzimticos.
As peles foram coletadas no decorrer dos processos de depilao e caleiro e
armazenadas sob refrigerao at o momento de preparao das amostras para as
anlises no MEV. Os resultados so apresentados em blocos, onde cada bloco de
imagem representa um valor de tempo no qual a amostra foi coletada.
Os testes 1 e 2 so processos convencionais, sendo que o segundo
apresenta uma formulao com percentuais de gua e de aplicao de insumos
reduzidos. Os testes 3 e 4 utilizam as enzimas C2 e C4 (com aplicao do dobro do
percentual de enzimas no teste 4. J os testes 5 e 6 utilizam as enzimas B1 e B2.
85
O primeiro bloco de imagens de MEV, Figura 39, foi gerado utilizando-se

uma magnificao de 50 vezes. As amostras apresentadas so relativas seo
transversal das peles dos testes 1 a 6 (enumerados a partir da esquerda para direita
e de cima para baixo). Estas peles foram retiradas do processo depois de decorrida
a primeira hora do processamento de depilao e caleiro, onde haviam sido
adicionados apenas tensoativos, gua, hidrxido de clcio e enzima (nos testes
coenzimticos).
1
Figura 39: Imagens das amostras de pele dos testes 1 a 6, da esquerda para direita, analisadas aps
1 hora do incio do processo de depilao e caleiro, obtidas em MEV
Uma vez que para os testes de remolho no foram verificadas diferenas

significativas entre os processos qumicos e enzimticos, aps a primeira hora de
processo, espera-se o mesmo para a etapa de depilao e caleiro.
O segundo bloco de imagens, Figura 40, j apresenta algumas diferenas
visuais. Neste momento da etapa de processamento alm dos insumos
mencionados anteriormente, tambm foi adicionado sulfeto de sdio e hidrxido de
clcio.
possvel observar, de acordo com as imagens, que a base dos plos para
os processos coenzimticos comea a ficar mais solta, sendo possvel observar que
alguns plos j foram removidos. No possvel, at o momento, identificar
86
diferenas entre os processos coenzimticos, no entanto, estes se diferenciam do

teste 1, que alm de possuir menos plos, apresenta parte destes visivelmente
destrudo, enquanto que isto no se verifica para os testes coenzimticos.
1
1 hora e 45 minutos do incio do processo de depilao e caleiro, obtidas em MEV
A Figura 41 representa o terceiro bloco de imagens do MEV, obtidos aps 2

horas e 45 minutos do incio do processo, correspondendo terceira etapa de
adio de hidrxido de clcio e segunda de sulfeto de sdio.
1
2 horas e 45 minutos do incio do processo de depilao e caleiro, obtidas em MEV
87
O efeito de inchamento, provocado pela adio do hidrxido de clcio j est

bem visvel, para os testes 1 e 5. No entanto, a presena de restos de plos nos
folculos pilosos ainda existe. Para os testes coenzimticos, alguns plos ainda no
foram totalmente liberados, embora o afrouxamento da estrutura da raiz esteja cada
vez mais visvel.
Na Figura 42, aps se passarem 4 horas e 15 minutos do incio do processo
possvel verificar o avano do processo de depilao.
1
O processo qumico praticamente j removeu toda queratina dos plos,

restando alguns poucos folculos com razes remanescentes. Nos processos
coenzimticos visvel a presena de alguns plos no removidos pelo processo.
Ao final do processo de depilao, como pode ser visto no bloco de imagens
da Figura 43, o processo qumico (teste 1), aparenta o melhor resultado. No entanto,
observou-se que os poucos plos remanescentes nos testes coenzimticos so
removidos com muito mais facilidade que os restos de plos presos nos folculos
pilosos dos testes 1 e 2. O caso do teste 2 mais problemtico, uma vez que a
quantidade de sulfeto adicionada foi insuficiente para atacar toda queratina dos
plos, restando diversos folculos com plos remanescentes alm de diversos plos
no atacados.
88
O teste 5 apresentou resultados visivelmente bons, pois a pele est limpa e

livre de plos.
O teste 3, tambm apresentado na Figura 36, (pgina 82) apresentou uma

boa limpeza da pele, embora seja visvel a presena de plos mais finos.
Esta observao bem interessante, uma vez que, para peles com plos
mais claros, verificou-se que os processos coenzimticos no atuaram to bem
quanto em peles de pelagem escura, permanecendo ao final do processo alguns
plos mais jovens, como demonstra a imagem da Figura 44.
Figura 44: Imagem de uma pele ao final de um teste de caleiro coenzimtico
89
4.4. Testes de Purga

A etapa de purga teve seus seis testes avaliados com relao ao teor de
carbono orgnico total e de protena solvel nos banhos. Foram testadas 3 enzimas,
cada uma delas com os tempos de processo de 30 minutos e tambm 3 h. A Figura
45 apresenta a imagem de dois banhos residuais dos testes 1 e 2 (que utilizam a
enzima A1), onde possvel observar a diferena de colorao, indicativa do teor de
matria orgnica removido em cada um dos banhos. interessante fazer uma
comparao desta imagem com a imagem da Figura 35 (pgina 81), que apresenta
os banhos residuais dos testes de caleiro. Alm da grande diferena de colorao,
percebe-se a presena de matria orgnica em suspenso no caso da figura
anterior, que funcionam como dois indicativos do teor elevado de material extrado
das peles.
Figura 45: Banhos de purga dos Teste 1 (30 minutos), esquerda, e Teste 2 (3 horas), direita
A Figura 46 apresenta os resultados para os testes de protena solvel dos

banhos residuais de purga. A curva padro para este teste encontra-se na Figura 32
(pgina 77) da seo 4.2.
90
Concentrao de protena solvel (mg/mL)
0,018
0,016
0,014
0,012
0,010
0,008
0,006
0,004
0,002
0,000
Teste_1
Teste_2
Teste_3
Teste_4
Teste_5
Teste_6
Figura 46: Concentrao de protena solvel dos banhos dos testes de purga
Como j era de se esperar, estes valores foram os menores encontrados em

comparao com os 24 testes realizados. Alm de exibir uma ntida influncia da
varivel tempo, o tipo de enzima tambm influenciou a remoo de protenas. O
teste 4 (3 horas, enzima B3) apresentou a maior concentrao de protenas, j o
teste 5 apresentou a menor. Se for levado em considerao que, nas indstrias, a
durao do teste de purga de aproximadamente 30 minutos, conclui-se que os
testes 1 e 3 apresentam o melhor desempenho.
A enzima C3 (tripsina microbiana) utilizada nos testes 5 e 6 menos
concentrada ou tem menor atividade, em comparao s enzimas A1 (tripsina
pancretica) e B3, pois os resultados obtidos foram bem inferiores, para os dois
tempos estudados.
Outra constatao obtida atravs da Figura 46 com respeito queda de
velocidade de ao da enzima. Em 30 minutos, para os testes 1 e 4, a concentrao
de
protena
liberada
no
banho
era
de
aproximadamente
0,004
mg/ml,
correspondendo a uma atividade enzimtica de 0,008 mg/(ml*h). Aps 3 horas de

processo (testes 2 e 4) esta atividade diminui para 0,003 mg/(ml*h) no teste 2 e para
0,005 mg/(ml*h) no teste 4, indicando o avano da reao enzimtica (com
conseqente consumo de substrato).
De acordo com as anlises de COT da Figura 47, as trs enzimas utilizadas
91
apresentam atividades bastante prximas para o tempo de 30 minutos, porm, para

os tempos de 3h, em ordem decrescente tem-se os resultados dos testes na ordem
4, 2 e 6, o que reproduz as constataes feitas pela anlise de protenas solveis.
Apesar do comportamento similar, as diferenas entre os pontos foram menos
acentuadas para COT. provvel que esta diferena possa ser explicada por
alguma limitao no mtodo de Lowry, pois este ensaio pode apresentar alguma
restrio com relao ao tipo de protena que pode ser detectado. Vale lembrar
tambm que lipdeos so molculas detectveis pelo ensaio de COT e no
detectveis nos ensaios de protena solvel, o que pode levar a alguma
interferncia, tambm j constatada na comparao entre estas anlises para os
testes de remolho.
1200
1000
800
600
400
200
Teste_1
Teste_2
Teste_3
Teste_4
Teste_5
Teste_6
Figura 47: Anlise teor de Carbono Orgnico Total para os banhos dos testes de purga
Silva e Pfeifer (2004) utilizaram formulaes semelhantes com algumas das

enzimas
empregadas
neste
trabalho,
concluindo
que
para
os
processos
coenzimticos, os valores de DBO, DQO e sulfetos foram menores que os processos

qumicos, o teor de substncias extraveis com diclorometano presente na pele
tambm foi acentuadamente melhor, destacando ainda uma melhora nas
propriedades fsicas de resistncia ao rasgo, trao e ensaios de elongao.
A Tabela 18 demonstra de forma resumida os resultados que foram
92
apresentados nos grficos da Figura 47 e da Figura 46, juntamente com o desvio

padro para os ensaios de protena solvel.
Tabela 18: Resultados mdios e desvio padro dos ensaios realizados para os testes de
purga
Anlises realizadas
COT
Protena Solvel
Teste
mdia (mg/l)
mdia (mg/ml)
DP
799,20
4,11E-03
1,29E-04
1100,00
1,04E-02
9,78E-05
838,30
4,60E-03
1,51E-04
1128,00
1,59E-02
3,15E-04
796,60
6,67E-04
3,23E-05
858,00
5,37E-03
2,22E-04
4.5. Caracterizao Enzimtica

Os testes de determinao da atividade enzimtica (que definida como a
velocidade de converso do substrato em produto) foram realizados apenas para
algumas enzimas, isto porque a quantidade de substrato analtico era insuficiente
para realizao de um nmero maior de testes e o objetivo foi o de testar a aplicao
destes mtodos para aplicaes posteriores pelo grupo de trabalho, no
desenvolvimento de enzimas.
Os grficos gerados a partir destes dados tambm utilizaram o software
Minitab 15, onde alm dos valores mdios, so plotados os intervalos de confiana
de 95% para cada um dos pontos.
Para os ensaios de determinao da atividade enzimtica sobre colgenos
foram testadas as enzimas de purga C3, B3 e A1, aplicadas nas concentraes de
0,03, 0,06, 0,09 e 0,27%. O pH foi mantido fixo para todos os testes em 7,5 e a
temperatura de 25C. Estas enzimas tiveram suas atividades medidas em triplicata
sobre o substrato FALGPA (N-(3-[2-Furyl]Acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala), conforme a
metodologia apresentada no anexo.
Nestes testes de atividade de colagenases, uma unidade (padro de medida
utilizado em enzimologia) foi definida como a quantidade de enzima que hidrolisa 1
93
mol de FALGPA a 25 C e pH 7,5. A Figura 48 apresenta os resultados obtidos

para a enzima de purga A1, obtida a partir de extratos pancreticos.
Unidade/mL sol. enzimtica
7
6
5
4
3
2
1
0
A1 - 0,03%
A1 - 0,06%
A1 - 0,09%
A1 - 0,27%
Figura 48: Caracterizao de atividade de colagenases para a enzima A1 em diferentes

concentraes
Observa-se uma baixa, porm crescente, variao do substrato com a

concentrao de enzimas, o que indica que esta enzima no tem elevada atividade
sobre colgenos.
J para os ensaios apresentados na Figura 49 (enzima C3), os resultados
obtidos foram o dobro daqueles encontrados pela enzima A1. Tambm se verifica,
para este caso, que a atividade enzimtica (considerando-se apenas o valor mdio e
desconsiderando-se o intervalo de confiana) tem seu pico para a concentrao de
0,09%. O elevado intervalo de confiana dos resultados apresentados se deve a
dificuldade na execuo da metodologia utilizada na anlise.
A enzima B3 no apresentou atividade sobre os colgenos nos testes feitos.
Na etapa de purga, a atividade da enzima frente a colgenos no muito desejada,
uma vez que podem ocorrer danos estrutura, como a perda do contorno de gro,
ou lisura da flor e tambm diminuio da resistncia trao. Por isto, usualmente, o
tempo de exposio das peles enzima gira em torno de 30 minutos. Logo, pode-se
considerar que a enzima B3 apresentou o melhor resultado, uma vez que, atividades
das enzimas frente a este substrato no foram detectadas pelo mtodo.
94
16
14
12
10
8
6
4
2
0
C3 - 0,03%
C3 - 0,06%
C3 - 0,09%
C3 - 0,27%
Figura 49: Caracterizao enzimtica de colagenases para as enzimas C3
Os ensaios de determinao da atividade de lipases foram realizados em

triplicata e utilizou-se a metodologia empregada no trabalho de Volpato (2009).
Foram testadas as mesmas enzimas anteriormente utilizadas (A1, B3 e C3), alm de
uma lipase (B1), nas mesmas concentraes anteriores (0,03, 0,06, 0,09 e 0,27%),
temperatura ambiente e pH igual a 8,0.
A unidade (apresentada nos grficos), neste caso, a quantidade de enzima
necessria para hidrolisar 1 mol de pNPP (substrato utilizado no testes) nas
condies de pH utilizadas neste experimento.
Nestes ensaios, o intervalo de confiana obtido para os pontos experimentais
foi bem menor, tornando estes resultados mais confiveis.
A Figura 50 indica os resultados dos testes para a lipase B1.
Neste caso, bem como em todos os outros, observa-se que existe uma
relao crescente, na faixa de concentrao estudada, entre o percentual de enzima
e a atividade enzimtica.
95
0,20
0,15
0,10
0,05
0,00
B1 - 0,03%
B1 -0,06%
B1 - 0,09%
B1 -0,27%
Figura 50: Caracterizao enzimtica de lipases para as enzimas B1
A Figura 51 apresenta os resultados encontrados para a enzima de purga B3.

Para esta enzima a atividade enzimtica realmente baixa quando comparada aos
resultados das outras enzimas testadas.
0,040
0,035
0,030
0,025
0,020
0,015
0,010
0,005
B3 - 0,03%
B3 - 0,06%
B3 - 0,09%
B3 - 0,27%
Figura 51: Caracterizao enzimtica de lipases para as enzimas B3
96
Os resultados da enzima de purga C3 (tripsina microbiana denominao do

fabricante), esto apresentados na Figura 52. Observa-se, neste caso, que a
atividade frente a lipdeos maior que aquela medida para a enzima B1 (classificada
como lipase). Esta diferena pode ser explicada pelo processo de purificao da
enzima, que, para isolar uma determinada enzima com ao especfica, acaba
excluindo outras de ao mais genrica que contribuem tambm na remoo de
lipdeos. Como foi mencionado anteriormente, enzimas pancreticas (tripsinas)
possuem ao sobre diversos tipos de substratos. J lipases so enzimas de
atividade especfica sobre lipdeos.
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
C3 - 0,03%
C3 - 0,06%
C3 - 0,09%
C3 - 0,27%
Figura 52: Caracterizao enzimtica de lipases para as enzimas C3
A ltima figura (Figura 53) demonstra os pontos experimentais obtidos pelas

enzimas A1, tripsina obtida do pncreas. Esta enzima, por ser menos purificada,
apresenta atividade sobre diversos substratos e neste caso apresentou os melhores
resultados de atividade sobre lipdeos em comparao com as demais enzimas.
Os testes de determinao da atividade enzimtica auxiliam na compreenso
dos resultados dos testes de purga, bem como na escolha do produto enzimtico
mais adequado para uma determinada funo (remoo de protenas no fibrilares,
97
ganho em rea, remoo de gorduras, entre outros).
1,1
1,0
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
A1 - 0,03%
A1 - 0,06%
A1 - 0,09%
A1 - 0,27%
Figura 53: Caracterizao enzimtica de lipases para as enzimas A1
Cantera et al. (2004) em seu trabalho, fizeram uma caracterizao completa

de vrias enzimas comerciais com relao a diversos substratos. Como concluso,
os autores colocaram em dvida o comportamento dos preparados enzimticos
estudados e mencionaram a influncia de diversos insumos que esto presentes nos
processos e que podem atuar inibindo ou ativando a atividade da enzima.
Concluses
Neste trabalho foi desenvolvido um estudo comparativo nas etapas de
remolho, depilao, caleiro e purga, entre processos que se utilizam apenas de
insumos qumicos tradicionais na indstria do couro (chamados aqui de processos
qumicos) e processos que utilizam, alm dos produtos qumicos, enzimas para
auxiliar
processamento
(nomeados
neste
trabalhos
como
processos
coenzimticos). Basicamente, o trabalho foi dividido em quatro partes. Os testes de

remolho, testes de depilao e caleiro, testes de purga e, por fim, determinao da
atividade enzimtica de algumas enzimas testadas. Logo, ser desta forma que as
concluses sero apresentadas.
A primeira dificuldade encontrada neste trabalho, apresentada inicialmente na
seo 1.2 (pgina 5), foi ter que encontrar uma varivel de resposta adequada, uma
vez que as anlises de matria voltil, teor de substncias extraveis com
diclorometano da pele e teor de slidos dissolvidos volteis dos banhos residuais
apresentaram resultados com grande amplitude do intervalo de confiana. claro
que o problema nem sempre foi da metodologia, mas s vezes esteve relacionado
dificuldade intrnseca de diferenciao entre as tecnologias empregadas.
Com isso, a primeira concluso apresentada diz respeito justamente aos
ensaios utilizados na comparao entre processos qumicos e coenzimticos.
De acordo com as anlises feitas, as diferenas entre os testes realizados so
muito sensveis em termos de resultados, ao contrrio dos ensaios que apresentam
100
baixa sensibilidade, de modo que, a maior dificuldade encontrada neste trabalho foi
encontrar variveis robustas o suficiente, capazes de mensurar cada um dos
processos estudados.
Analisando-se os testes feitos, percebe-se que para a maioria dos casos os
testes de protena solvel e carbono orgnico total apresentaram o mesmo
comportamento para um dado processo. As anlises de protena solvel, alm de
serem fceis de realizar, apresentaram um intervalo de confiana bastante estreito.
J as anlises de COT requerem apenas uma estimativa mdia do teor de matria
orgnica encontrado na amostra para adequar o mtodo da curva de calibrao
utilizada pelo equipamento.
claro que os ensaios de protena solvel no avaliam o teor de protenas
em suspenso nos banhos, muito menos o teor de lipdeos, sendo estes,
mensurados apenas pelo COT, no entanto, mostraram-se adequados para avaliar a
liberao de proteoglicanos no banho.
Na etapa de remolho, observou-se que o tipo de enzima e o tempo de
processamento apresentaram influncia nos resultados dos testes. Nesta etapa, o
teste 9 (enzima C1, 4 h) destacou-se em comparao aos demais, uma vez que as
concentraes de matria orgnica presente no banho foram no mnimo 60%
maiores quando comparados aos testes qumicos (teste 1 a 3). A varivel
concentrao de enzima demonstrou que a dosagem utilizada pelo teste 9 foi bem
estipulada, no sendo necessrio adicionar maiores quantidades de enzimas.
No remolho, observou-se tambm que para as condies experimentais
apresentadas, as enzimas B1 e B2 apresentaram desempenho comparvel ou at
mesmo inferior aos testes qumicos, concluindo-se que alm de um efeito de
interao e competio pelo substrato, que acontece ao serem utilizadas juntas
estas enzimas, a concentrao utilizada (indicada pelo fabricante) insuficiente para
provocar melhorias significativas na etapa de remolho.
Partindo-se para as anlises dos testes de depilao e caleiro, conclui-se que,
embora os resultados para o teste 6 (enzimas B1 e B2, com concentrao dobrada)
apresentassem o maior valor, no se pode afirmar que existem diferenas
significativas entre os testes coenzimticos, devido ao intervalo de confiana dos
CONCLUSES
101
resultados das anlises de protenas solvel. No entanto, possvel identificar

diferenas ntidas entre os processos qumicos e coenzimticos, ao comparar os
resultados das anlises de MEV, COT e valores mdios de protena solvel.
De um modo geral, os testes coenzimticos demonstraram maior capacidade
de remoo de matria orgnica que os testes qumicos, em todas as etapas
estudadas. Destacam-se a enzima C1 no remolho, B1 e B2 na depilao e caleiro e
a enzima B3 na purga.
Os resultados dos ensaios da determinao da atividade enzimtica de
colagenases indicam que as enzimas testadas (A1, C3 e B3) possuem baixa
atividade com relao a este substrato, destacando-se a enzima B3 que no teve
sua atividade detectada pelo mtodo, o que est adequado aplicao destas que
no possuem o objetivo de hidrolisar o colagnio.
A Enzima A1 (enzima de purga proveniente do pncreas bovino), apresentou
os melhores resultados nos testes de determinao de atividade lipoltica, sendo
esta enzima superior a enzimas classificadas como lpases.
A determinao da caracterizao enzimtica, que neste trabalho foi apenas
especulativa, continua sendo desenvolvida pelo grupo de pesquisa do LACOURO,
cujo objetivo maior o isolamento de microorganismos e produo de enzimas para
aplicao em processos da indstria coureira.
5.1. Anlise do Setor

Por fim, fazendo-se um balano do tema no setor coureiro, pode-se afirmar
que o potencial da utilizao de enzimas pela indstria no se encontra totalmente
desenvolvido para os produtos oferecidos indstria brasileira de couros, haja visto
que, para etapas como a depilao e caleiro, onde os benefcios ambientais so
imensos, o percentual de aplicao de enzimas no est bem otimizado, bem como
faltam estudos sobre especificidade de enzimas.
A tendncia para o setor nos prximos anos a maior disseminao do uso
de enzimas em etapas como remolho e, principalmente, depilao e caleiro. Com
isto,
espera-se,
desenvolvimento,
por
parte
qualidade
das
e
indstrias
confiabilidade
de
bioprodutos,
destes
um
produtos
salto
no
enzimticos
102
comerciais.
5.2. Sugestes Para Trabalhos Futuros

Para dar continuidade a esta linha de pesquisa, sugere-se como trabalhos
futuros a comparao de processos qumicos e coenzimticos nas etapas
posteriores do processo,
que so o pr-curtimento, curtimento, recurtimento e
acabamento molhado.
Outro tema interessante seria a determinao dos percentuais timos de
aplicao de enzimas nas diversas etapas de processamento (tanto na ribeira,
quanto no curtimento e acabamento), levando-se em conta as atividades
enzimticas.
A caracterizao destas enzimas comerciais um tema que teve incio neste
trabalho, e, atualmente, segue como um dos objetivos do grupo de pesquisadores
do LACOURO, estando inserido em um projeto maior, que visa produo de
enzimas com maior atividade e
processamento de couros.
especificidade para diversas etapas do
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Anexos
Metodologias Usadas nas Anlises dos Testes:
Determinao de Cloretos em Banhos

Percentual de Matria Voltil
Anlise de Nitrognio e Substncia Drmica em Couro
Determinao do Teor de Substncias Extraveis com Diclorometano e
Hexano
Determinao do Teor de Slidos Totais, Fixos e Volteis em Banhos
Determinao de Protena Solvel
Determinao da atividade lipoltica
Determinao de atividade colagnica
112
Determinao de Cloretos em Banhos - NBR 13337/1995

1. Objetivo:
Determinao da concentrao de Cloreto de sdio em banhos residuais de

pr-remolho, remolho, gua de lavagem e caleiro.
2. Materiais e mtodos:
2.1. Reagentes:
soluo de Cromato de potssio 6%;

soluo padro de Nitrato de prata 0,1 N;
gua destilada;
2.2. Procedimento:
pipetar 2 ml da amostra para um Erlenmeyer;

adicionar 20 ml de gua destilada;
adicionar 2 ml de Cromato de potssio 6%;
titular com a soluo de Nitrato de prata at a obteno da colorao
vermelho-tijolo;
3. Clculos:
A concentrao de Cloreto de sdio em g/l calculada a partir da seguinte
equao:
NaCl = V1x fc x 2,925
onde:
ANEXOS
NaCl = concentrao de Cloreto de sdio, g/l;

V1 = volume de Nitrato de prata gasto na titulao, em ml;
fc = fator de correo do Nitrato de prata;
113
114
Percentual de Matria Voltil, NBR-8290/1983

1. Objetivo:
Determinar o percentual de substncias volteis, massa perdida pela pele ou

couro quando seco temperatura de 1022 C at que se atinja massa constante.
2. Material e mtodos:
2.1. Procedimento:
Cortar aproximadamente 10g da amostra em pedaos pequenos com

medidas no superiores a 5x5 mm;
Secar os pesa-filtros por no mnimo 5h antes de proceder a anlise;
Pesar aproximadamente 3g da amostra com preciso de 0,0001g em um
pesa-filtro previamente tarado;
Levar estufa a (1022 C) at massa constante, aproximadamente 12h;
Resfriar em dessecados por no mnimo 30 minutos;
Pesar novamente o frasco;
2.2. Observaes:
Realizar o ensaio em triplicata;

3. Clculos:
O teor de matria voltil dado pela seguinte equao:
MV = (M2-M3 / M2-M1)*100
onde:
ANEXOS
MV = teor de matria voltil;

M1 = massa do pesa-filtro vazio, em gramas;
M2 = massa do pesa-filtro com amostra, entes do ensaio, em gramas;
M3 = massa do pesa-filtro com amostra, aps secagem, em gramas;
115
116
Determinao
do
Teor
de
Substncias
Extraveis
com
Diclorometano e Hexano, NBR 11030/1997

1. Objetivo:
Este mtodo visa a determinao da frao total de substncias,

gorduras, solveis nos solventes Diclorometano e Hexano em todos os tipos de
peles e couros. As substncias em questo so, portanto, compostos apolares e/ou
pouco polares, provenientes de operaes de engraxe, no caso de couros e
gorduras naturais produzidas durante a vida do animal.
2. Materiais e Mtodos:
2.1. Aparelhagem/ vidraria
extrator do tipo Soxhlet;

balana analtica;
estufa;
dessecador;
2.2. Reagentes:
Diclorometano P.A.;
Hexano P.A.;
2.3. Procedimento:
secar os frascos do determinador de gorduras por no mnimo 5h em estufa a

1022 Ce pes-los em balana analtica;
pesar, por diferena, aproximadamente 5g de amostra para o interior da
cpsula do aparelho, em balana analtica, utilizando luvas ou pina a fim de no
haver contaminao por gorduras presente nas mos;
ANEXOS
117
acoplar as cpsulas ao extrator;

adicionar 100 ml do solvente a ser utilizado em cada frasco coletor;
ligar o aparelho temperatura de 130 C e o arrefecimento, atravs da
abertura da torneira de gua;
proceder a extrao por 4h, 1 h com o cartucho imerso no solvente e 3h com
o solvente gotejando;
passado o perodo inicial, fechar o compartimento superior a fim de proceder
a recuperao do solvente;
aps aproximadamente 1h, o solvente, devidamente recuperado dever estar
totalmente contido no compartimento superior, permitindo a retirada dos frascos
coletores, quando usado hexano demora mais tempo;
desligar o aparelho e a gua de arrefecimento;
erguer os conjuntos de extrao a fim de que esfriem por um perodo de 5
minutos;
remover os frascos dos conjuntos e coloca-los na estufa a fim de evaporar o
solvente residual, cuidado, muito solvente na estufa pode causar exploses.
recolher o solvente recuperado para o interior de um frasco devidamente
identificado;
ao trmino do tempo de secagem, pesar os frascos, no deve exceder 1 hora;
3. Clculos:
O teor de substncias extraveis, em percentual, calculado a partir da

seguinte expresso:
% gorduras = (P2 P1) / (m * (1 MV))
onde:
% gorduras = teor de substncias extraveis em %;
118
P1 = peso inicial do frasco coletor;

P2 = peso do frasco coletor aps a extrao, contendo o material extrado;
m = massa inicial de amostra adicionada cpsula do extrator;
MV = teor de matria voltil, previamente analisado;
ANEXOS
119
Anlise de Nitrognio e Substncia Drmica em Couro ASTM

D2868/2007
Viso geral do Mtodo
A amostra aquecida na presena de H2SO4 concentrado, K2SO4, e

CuSO4, e digerida at a soluo ficar incolor ou amarelo plido. Ento a soluo
resfriada. Em seguida a mesma tratada/alcalinizada com soluo de tiossulfato de
sdio e hidrxido de sdio. O nitrognio ento destilado em uma soluo de acido
brico e o total de nitrognio determinado por titulometria. A substncia drmica
calculada com base no valor de nitrognio.
Materiais
Bloco digestor: um aparelho digestor para bales Kjeldahl com suco para
remoo de SO3 e gua.
Bales de Kjeldahl: um frasco especial adequado ao equipamento de digesto
e destilao com em media 100 a 800 ml de capacidade.
Destilador de Nitrognio: aparato equipado com caldeira para arraste de
vapor e condensador para destilao da amnia no frasco de Kjeldahl conectado.
Reagentes
Soluo indicadora de cido Brico.

Soluo indicadora mista.
Mistura cataltica.
Hidrxido de Sdio 40%.
Hidrxido de Sdio Padro 0,1N.
cido Sulfrico Padro 0,3N.
cido Sulfrico concentrado livre de nitrognio.
Tiossulfato de sdio 80 g/l.
120
Padronizao
Brancos: Faca uma determinao em branco substituindo a amostra por 1g

de sacarose e seguindo exatamente o procedimento para as amostras.
Pode ser usado um padro de glicina para testar o mtodo.
Procedimento
Amostragem e digesto: Adicione 5g 0,1g de mistura cataltica ao frasco de

Kjeldahl. Pese 0,75 0,1g de amostra com preciso de 0,0001g, anote e transfira a
mesma para o frasco de Kjeldahl. Manuseando com cuidado na capela adicione 13
ml de cido sulfrico concentrado, mexa suavemente o frasco e tampe o mesmo.
Coloque o frasco no bloco digestor, ligue a gua e o aquecimento no mximo.
Proceda a digesto por no mnimo 3h. Confira se a soluo ficou transparente, caso
contrrio continuar digerindo. Assim que digesto for concluda, desligar o digestor e
deixar os frascos esfriarem.
Destilao: Adicione cerca de 15 ml de tiossulfato de sdio. Agite a soluo
at ficar marrom. Adicione uma alquota volumtrica de 50 ml de soluo indicadora
de cido brico a um erlenmeyer de 300 ml, que ser o frasco receptor do destilador,
a ponta de sada do destilador deve ficar mergulhada na soluo indicadora.
Conecte o frasco de Kjeldahl ao destilador. Ligue a alimentao de gua do
destilador, adicione cerca de 50 ml de hidrxido de sdio 40%. Confira o nvel de
gua da caldeira. Ligue o aquecimento da caldeira assim que todo o hidrxido de
sdio tenha sido adicionado a amostra. Proceda a destilao at que tenha sido
recolhido no mnimo 75 ml de destilado.
Titulao: Titule o destilado imediatamente com cido sulfrico padro at o
ponto final (ausncia de colorao verde). No caso do branco a titulao ocorre com
hidrxido de sdio padro at o ponto final verde se a soluo ficar violeta. Se o
branco ficar verde tambm titulado com cido sulfrico padro.
Clculos
Branco: O valor obtido para o branco, caso a titulao deste tenha sido feita
com hidrxido de sdio, deve ser convertido para volume de cido sulfrico pela
ANEXOS
121
seguinte frmula:
Onde:
B = Volume do branco, convertido para milmetros de cido sulfrico padro.
Vb = Volume de hidrxido de sdio padro requerido na titulao.
Nb = Normalidade da soluo de hidrxido de sdio padro.
Na = Normalidade da soluo de cido sulfrico padro.
Nitrognio na amostra: O valor de nitrognio na amostra calculado pela
seguinte frmula:
Onde:
A = Volume de cido sulfrico padro requerido na titulao do destilado.
B = Volume de hidrxido de sdio padro requerido na titulao do branco.
Use sinal positivo caso o branco tenha sido titulado com hidrxido de sdio. Caso
tenha sido titulado com cido sulfrico use sinal negativo.
N = Normalidade do cido sulfrico padro.
P = Massa da amostra em gramas.
Nitrognio base seca: O valor de nitrognio na amostra ento convertido
para base seca, utilizando o percentual de matria voltil. Para este valor ser vlido,
a amostra utilizada para a anlise de matria voltil deve ser pesada no mesmo
instante que a aa utilizada para nitrognio.
Onde:
122
%NTK = percentagem de nitrognio total determinado por Kjeldahl.

C = percentual de nitrognio da amostra em base mida.
M = Percentual de matria voltil da amostra.
Substncia drmica: O percentual de substncia drmica pode ser calculado
ao multiplicar o valor encontrado para NTK pelo fator 5,62.
Preparao das solues

Soluo indicadora de cido Brico: Dissolva 40g de cido brico (H3BO3)
em gua, adicione 20ml da soluo indicadora mista e dilua a 1L.

Soluo indicadora mista: Dissolva 0,060g de indicador vermelho de metila
e 0,040 g de indicador azul de metileno em 100ml de lcool etlico 95%.

Mistura cataltica: 100g K2SO4 + 3g CuSO4.
Hidrxido de Sdio 40%: Dissolva aproximadamente 400g de lentilhas de
NaOH (98%) em gua e dilua a 1L.

Hidrxido de Sdio Padro 0,1N: Dissolva 10ml da soluo concentrada de
NaOH (40%) em 1L de gua destilada. Determine a normalidade exata por

volumetria de neutralizao com o cido sulfrico padro usando o indicador misto
para o ponto final cido Sulfrico Padro 0,3N: Dissolva 9ml de H2SO4
concentrado em gua e dilua a 1L. Determine a normalidade exata por titulao com
um
padro
primrio
assim
como
carbonato
de
sdio
anidro
ou
tris(hidroximetil)aminometano.
cido Sulfrico concentrado livre de nitrognio.
Tiossulfato de sdio 80 g/l: Dissolva 80g de tiossulfato de sdio
(Na2S2O3.5H2O) em gua e dilua a 1L.
ANEXOS
123
Determinao do Teor de Slidos Totais, Fixos e Volteis em

Banhos (adaptado a partir da norma NBR14550/2000)
Preparo da areia:
Utilizar areia previamente filtrada, colocar em um kitassato 4 dedos de areia

mais 1 dedo de excesso de cido ntrico. Levar para a chapa aquecedora, dentro da
capela, at o incio da ebulio do cido, e ento deixar ebulir por 2 horas.
Feito isso, entornar o contedo do kitassato em uma jarra de plstico, para
ento iniciar o processo de lavagem da areia.
A lavagem da areia feita atravs da adio de gua jarra, agitando-se a
areia para que possa ocorrer uma melhor lavagem de todo o contedo e o posterior
descarte da gua de lavagem. Quando o pH da mistura H2O+areia estiver igual ao
pH da gua da torneira, necessrio que se faa mais 3 lavagens da areia
utilizando gua destilada.
Aps a lavagem, a areia deve ser calcinada. Para isso, utilizamos cpsulas de
porcelana. Com a areia ainda mida, colocar uma quantidade compatvel com o
tamanho da cpsula e levar mufla por 1 hora a 700C. Finalizado esse processo,
obtm-se a areia calcinada.
Tarar as cpsulas de porcelana
Leva-se mufla temperatura de 550C 600C por 1 hora
ST (slidos totais):
Com as cpsulas previamente taradas, adicionar cerca de 20g de areia

calcinada cada cpsula, levar a cpsula com areia a mufla a 105oC por 1 hora,
tirar, esfriar em dessecador, pesar e anotar o resultado. Adicionar 25ml da amostra
homogeneizada ao adicionar amostra lquida, utilizar uma peneira para reter
partculas muito grandes que possam prejudicar a anlise de slidos do banho.
Levar a cpsula estufa at se obter apenas slidos na cpsula. Para
124
certificar-se de que no existe mais umidade na cpsula, recomendo deixar a

amostra na estufa de um dia para o outro ou at peso constante. Assim, retira-se a
amostra da estufa e deixe-a esfriar em dessecador. Quando a cpsula estiver
temperatura ambiente, que deve levar cerca de 40 minutos, pesar a amostra em
balana analtica e anotar o resultado.
SDF (slidos fixos):
Levar a cpsula utilizada na determinao de SDT para a mufla temperatura

de 550C 600C por 2 horas. Cuidar ao abrir a mufla. A mufla deve ser aberta
somente temperaturas inferiores a 400C, pois a temperaturas mais elevadas pode
ocorrer danos na mesma se aberta abruptamente. Retirar a cpsula da mufla e
esfriar em dessecador. Pesar a amostra e anotar o resultado.
SV (slidos volteis):
obtido indiretamente atravs da diferena entre os dois resultados

anteriores
Resultados e clculos:
ST = ( A B ) X 1.000.000
V
onde:
SDT representa os slidos dissolvidos totais, em miligramas por litro;
A a massa da cpsula com o resduo (aps a estufa), em gramas;
B a massa da cpsula com areia, em gramas;
V o volume da amostra, em mililitros.
ANEXOS
125
SF = ( C B ) X 1.000.000
V
onde:
SDF representa os slidos dissolvidos fixos, em miligramas por litro;
C a massa da cpsula com o resduo (aps a mufla), em gramas;
B a massa da cpsula com areia, em gramas;
V o volume da amostra, em mililitros.
SV = ST SF
onde:
SV representa os slidos volteis, em miligramas por litro;
ST representa os slidos totais, em miligramas por litro;
SF representa os slidos fixos, em miligramas por litro.
126
Determinao de Protena Solvel - Mtodo de Lowry
Fundamento Terico
O mtodo de Lowry et al. (1951) um mtodo colorimtrico para

estimao quantitativa de protenas totais.
O princpio do mtodo baseia-se numa mistura contendo molibdato, tungstato
e cido fosfrico, (reagente Folin-Ciocalteau), que sofre uma reduo quando reage
com protenas, na presena do catalisador cobre (II), e produz um composto com
absoro mxima em 750nm.
O mecanismo de reduo do reagente de Folin-Ciocalteau por protenas
ocorre diretamente atravs das cadeias laterais de alguns aminocidos (tirosina,
triptofano, cistena, asparagina e histidina), que contribuem com quatro eltrons, ou
atravs da retirada de dois eltrons de cada unidade tetrapeptdica dos peptdeos e
protenas, que facilitada pela formao do quelato entre o cobre (II) e
peptdeos/protenas.
Aplicaes
A principal vantagem do mtodo de Lowry a sua alta sensibilidade e, por

isto, tem sido utilizado para a determinao da concentrao de protenas totais em
diversos meios, sendo eles: plasma sangneo, saliva humana, tecido animal,
plantas, suco biliar, membranas, leite, derivados do leite e produtos alimentcios
(Zaia et al., 1998).
Segundo os mesmos autores, o mtodo de Lowry recomendado, pois no
estudo comparativo de metodologias o mesmo mostrou-se sensvel, com melhor
exatido, menor consumo de amostra e, dependendo do caso, menos suscetvel a
alguns tipos de interferentes.
ANEXOS
127
Reagentes e solues:
Reagente A: Dissolver 0,5g de sulfato de cobre (CuSO4.5H2O) e 1,0g de

citrato de sdio (citrato de Na3) em 100ml de gua destilada. Esta uma soluo
estvel e pode ser preparada com antecedncia.
Reagente B: Dissolver 20,0g de carbonato de sdio (Na2CO3) e 4,0g de
hidrxido de sdio (NaOH) em 1,0L de gua destilada. Soluo no estvel, deve
ser preparada na hora da anlise.
Reagente C: Misturar 1,0ml do reagente A e 50,0ml do reagente B.
Reagente D: Reagente Folin-Ciocalteus 2N e gua destilada preparados na
proporo 1:1. uma soluo estvel.
Soluo padro de BSA (Bovine Serine Albumine) (0,5mg/ml).
Procedimentos:
Para determinar a concentrao de protenas da amostra, construir uma curva

padro de calibrao com cinco concentraes diferentes de protena, BSA 0; 0,1;
0,2; 0,3; 0,4; 0,4; 0,5 mg/ml.
Adicionar 2,5ml do reagente C a um tubo de ensaio contendo 500L de
amostra diluda apropriadamente (contendo at 0,5mg/ml) de protenas e misturar
bem. A amostra deve ser diluda de forma que sua concentrao fique dentro da
amplitude da curva de calibrao. Normalmente, diluies de 40 vezes so
suficientes (50L de amostra + 1950L de gua destilada);
Incubar a temperatura ambiente por 5-10 minutos;
Adicionar a seguir 250L do reagente D, misturar bem e incubar novamente
por 30 minutos;
Ler a absorbncia 750nm.
128
A concentrao das amostras determinada pela interpolao dos valores de

absorbncia na curva padro.
Obs.: A curva de calibrao deve ser feita todas as vezes que a metodologia
for utilizada, j que alguns reagentes no so estveis e devem ser preparados no
momento da anlise.
ANEXOS
129
Determinao da atividade lipoltica - Mtodo de Winkler e

Stuckmann 1979
Reagentes e solues:
soluo A: Dissolver 30 mg de pNPP em 10 ml de propanol-2 e misturar a

uma soluo B.
2. Soluo B: Dissolver 400mg de triton 100-x e 100mg de goma arbica em
90 ml de uma soluo de tris- HCL 50 mM e Ph 8,0.
Substrato de pNPP: Misturar as solues de A e b( instvel).
Soluo de Tris-HCL 50 mM: Dissolver 6,057 g de Tris em 1,0 l de gua
destilada, levar esta soluo a pH 8,0 com uma soluo de HCL 1M.
Procedimentos:
Colocar 0,15 ml de extrato enzimtico em eppendorfs de 2,0 ml;

Fazer um branco para cada amostra, a enzima deve ser termicamente
inativada (100 C, 30 min);
Adicionar 1,35 ml do substrato de pNPP em todas as amostras, inclusive
brancos, e misturar;
Incubar a temperatura de 37C por 15 minutos;
Centrifugar a 12000 rpm, por 10 min, aproximadamente 10C;
ler a absorbncia 410 nm.
Uma unidade de atividade (U) foi definida como a quantidade de enzima
necessria para liberar 1
mol de pNPP por minuto.
Obs: Se for necessrio diluir o extrato enzimtico usar tris- HCL.
130
Para obter a atividade lipoltica necessrio multiplicar a absorbncia por

0,0504. Esse valor de 0,0504 foi obtido atravs da Lei de Beer, onde j foi calculado
o valor do coeficiente de absortividade molar e corrigido para os volumes de
substrato e enzima usados no protocolo. O valor encontrado est em U/ml. Para
determinar a atividade especfica basta dividir a atividade lipoltica volumtrica pela
biomassa.
ANEXOS
131
Enzymatic Assay of COLLAGENASE using

N-(3-[2-FURYL]ACRYLOYL)-LEU-GLY-PRO-ALA (FALGPA)
as the Substrate
PRINCIPLE:
FALGPA Collagenase> FAL + Gly-Pro-Ala

Abbreviations used:
FALGPA = N-(3-[2-Furyl]Acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala
FAL = N-(3-[2-Furyl]Acryloyl)-Leu
CONDITIONS: T = 25C, pH 7.5, A345nm
1, Light path = 1 cm
METHOD: Continuous Spectrophotometric Rate Determination
REAGENTS:
50 mM Tricine Buffer with 10 mM Calcium Chloride and 400 mM Sodium

Chloride, pH 7.5 at 25C (Prepare 500 ml in deionized water using Tricine, Sigma
Prod. No. T-0377, Calcium Chloride, Dihydrate, Sigma Prod. No. C-3881, and
Sodium Chloride, Sigma Prod. No. S-9625. Adjust to
pH 7.5 at 25C with 1 M
NaOH.).
10 mM N-(3-[2-Furyl]Acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala Solution (FALGPA) (Prepare
132
50 ml in Reagent A using N-(3-[2-Furyl]Acryloyl)-Leu-Gly-Pro-Ala, Sigma Prod. No.

F-5135. Approximately 30 minutes of stirring is required for this product to dissolve
completely. Adjust to pH 7.5 at 25C with either 1 M NaOH or 1 M HCl.).
Collagenase Enzyme Solution (Immediately before use, prepare a solution

containing 2 units/ml of Collagenase in cold deionized water.)
PROCEDURE:
Pipette (in milliliters) the following reagents into suitable cuvettes:
Test
Blank
Reagent B (FALGPA)
2.90
2.90
Deionized Water
------
0.10
Mix by inversion and equilibrate to 25C. Monitor the A345nm until constant,
using a suitably the rmostatted spectrophotometer. Then add:
Reagent C (Enzyme Solution)
Test
Blank
0.10
------
Immediately mix by inversion and record the decrease in A345nm for

approximately 5 minutes. Obtain the DA345nm/minute by using the maximum linear
rate for both the Test and Blank.
CALCULATION:
ANEXOS
133
(DA345nm/min Test - DA345nm/min Blank)(3)(df)

Units/ml enzyme =
UNIT DEFINITION:
One unit hydrolyzes 1.0 mmole of furylacryloyl-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA, F5135) per minute at 25C at pH 7.5 in the presence of calcium ions.
REFERENCE:
Van Wart, H.E., and Steinbrink, D. R. (1981) Analytical Biochemistry 113, 356365

Aplicação de Enzimas No Processamento de Couros: Comparação Entre Processos Químicos e Coenzimáticos

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UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL

Franck da Rosa de Souza

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL

A Comisso Examinadora, abaixo assinada, aprova a Dissertao Aplicao

Dra. Mriam Cooper

Prof. Dr. Nilo Srgio Medeiros Cardozo

Prof.a Dra. Patrice Monteiro de Aquim

totais, fixos e volteis. Na etapa de

depilao/caleiro foi estudada a influncia do tempo, tipo e concentrao de enzima,

aos processos puramente qumicos, destacando-se as enzimas C1 no remolho e B1

Processamento de couros, biotecnologia, enzima, processos

Figura 19: Fotografia dos fules de bancada utilizados na realizao dos

Limitaes do Trabalho de Pesquisa............................................................. 5

Estrutura do trabalho ..................................................................................... 6

Reviso Bibliogrfica ................................................................................................ 7

Noes de Bioqumica ................................................................................. 21

Processamento de Peles ............................................................................. 32

Uso de Enzimas em Curtumes .................................................................... 45

Metodologia Experimental ...................................................................................... 49

Produtos Qumicos ...................................................................................... 52

Mtodos Analticos ...................................................................................... 63

Caracterizao Enzimtica .......................................................................... 67

Resultados e Discusso .......................................................................................... 69

Caracterizao da Pele Utilizada................................................................. 69

Testes de Depilao e Caleiro..................................................................... 81

Testes de Purga .......................................................................................... 89

Caracterizao Enzimtica .......................................................................... 92

Anlise do Setor ........................................................................................ 101

Sugestes Para Trabalhos Futuros ........................................................... 102

Anexos .................................................................................................................... 111

A produo mundial de couros segue em ritmo de aumento nos ltimos anos.

dispe de 800 empresas de produo e processamento de couro e gera em torno de

Rebanho de cabeas de gado

Quantidade peles salgadas

454,7 milhes ton

752 milhes ton

Pele salgada produzida

Pele salgada exportada

US$ 0,1 milhes

US$ 2,7 milhes

Pele salgada comercializada

Couro heavy produzido

Couro heavy importado

Couro heavy exportado

US$ 20,2 milhes

US$ 214,5 milhes

Couro heavy comercializado

Fonte: FAO (2010)

Se por um lado, a indstria do couro utiliza como matria-prima um

O efluente dos curtumes, segundo Passos (2007), composto principalmente

Restos de peles retirados em etapas anteriores ao curtimento;

Restos de peles curtidas (ou seja, de couro);

Lodos provenientes dos sistemas depuradores de efluentes lquidos.

Segundo Pacheco (2005), para cada tonelada de pele a ser processada, so

Resduos de ribeira: 120 kg na forma de recorte e de 70 a 230 kg de

Resduos da etapa de curtimento: 115 kg como recortes e

Resduos da etapa de acabamento: 32 kg na forma de recortes e 2

H ainda uma quantidade de materiais que so extrados por meio de banhos

tecnologias produtivas menos agressivas ao meio ambiente, tratamentos de

comercialmente um fator limitante da sua aplicao.

1.2. Limitaes do Trabalho de Pesquisa

Pele Utilizada: Os testes somente utilizaram pele proveniente da regio do