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FACULTAD DE ODONTOLOGA
AUTORA:
LUPE MARITSA CHAMBA PASCAL
TUTOR:
DR.GUILLERMO ALBERTO LANAS TERN
QUITO, ECUADOR
2015
DEDICATORIA
Dedico este trabajo a Dios, por haberme dado la vida y permitirme el haber llegado hasta este
momento tan importante de mi formacin profesional.
A mis padres, por demostrarme siempre su cario y apoyo incondicional. A mi esposo, y por ser mi
pilar fundamental pese a las diferencias de opinin y por siempre estar dispuesta a escucharme y
ayudarme en cualquier momento. Especialmente dedico a mi familia todo este trabajo.
ii
AGRADECIMIENTO
El presente trabajo de tesis primeramente agradezco a ti Dios por bendecirme para llegar hasta
donde he llegado, porque hiciste realidad este sueo anhelado.
A mi director de tesis, Dr. Guillermo Lanas por su esfuerzo y dedicacin, quien con sus
Conocimientos, su experiencia, su paciencia y su motivacin ha logrado en m que pueda
terminar mis estudios con xito.
Me gustara tambin que estas lneas sirvieran para expresar mi ms profundo y sincero
agradecimiento a todas aquellas personas que con su ayuda han colaborado en la realizacin del
presente trabajo, en especial al Dr. Dayana Borja, profesora del laboratorio de Microbiologa
farmacutica de la Facultad de ciencias Qumicas de la Universidad central del Ecuador, por la
orientacin, pero sobre por el apoyo recibido durante esta investigacin.
iii
ORIGANUM
CNDIDA ALBICANS
EN COMPARACIN CON LA
iv
En mi carcter de Tutor del Trabajo de Grado, presentado por la seorita LUPE MARITSA
CHAMBA PASCAL, para optar por el Grado de ODONTLOGA cuyo Ttulo es
EFECTO ANTIFNGICO DEL
ORIGANUM
CNDIDA ALBICANS
EN COMPARACIN CON LA
Considero que dicho Trabajo rene los requisitos y mritos suficientes para ser sometido a
la presentacin pblica y evaluacin por parte del jurado examinador que se designe.
CNDIDA ALBICANS
EN COMPARACIN CON LA
vi
DECLARACIN
Yo, LUPE MARITSA CHAMBA PASCAL, declaro bajo juramento que el trabajo aqu
escrito es de mi autora; que no ha sido previamente presentado para ningn grado o
calificacin profesional; y que he consultado las referencias bibliogrficas que se incluyen
en este documento.
vii
CERTIFICACIN
Certifico que el presente trabajo fue desarrollado por la seorita Lupe Maritza Chamba
Pascal, bajo mi supervisin.
viii
CNDIDA ALBICANS
EN COMPARACIN CON LA
RESUMEN
En bsqueda de tratamientos alternativos a base de plantas medicinales contra infecciones
micticas provocadas por Cndida albicans en cavidad oral, estudio que propone como objetivo
principal evaluar la actividad antifngica de los aceites esenciales de Organo y Hierba Luisa
sobre cepas de C. albicans tomando como medicamento control a la nistatina y as establecer su
capacidad inhibitoria procedimiento: los aceites esenciales se obtuvo mediante tcnica de
arrastre a vapor de agua en diferentes consentrciones. Se llev a cabo la activacin de la cepa
micolgica y la preparacin del inculo con una turbidez de 0,5 en la escala Mc Farland, la
siembra se realiz en 19 cajas Petri con el medio de cultivo Dextrosa Sabouraund a una
temperatura de 37C para luego proceder a la colocacin de discos estriles impregnados de las
diferentes concentraciones de aceites esenciales (25%.50%,75%,100%) nistatina control positivo
y tween 80 control negativo. Se incubo el material durante 72 horas para la posterior medicin
de los halos de inhibicin mediante una regla pie de rey. Concluyendo que existieron
discrepancias significativas por grupo de estudio segn la prueba de Kruswal.
ix
ABSTRACT
This study seeks to find alternative treatments against oral infections caused by Candida
albicans using medicinal plans. The main goal of this work is to assess the antifungal
effects of oregano and lemongrass essential oils against C. albicans, considering Nystatin
as the control group medication. The essential oils were obtained using steam distillation;
then the fungal strain was activated and the cultures in 19 Petri dishes using Sabouraud
Dextrose al 37C, where we placed sterile discs impregnated with either essential oils,
Nystatin (positive control) or tween 80 (negative control). Samples were then incubated for
72 hours, after which we measured inhibition halos using a ruler and caliper gauge. The
conclusion states that there were significant discrepancies per study group according to the
kruswall Eallis test.
KEIWORDS: ORIGANUM VULGARE, CYMBOPAGON CITRATUS, CNDIDA
ALBICAN.
Tabla de Contenido
DEDICATORIA .............................................................................................................................II
AGRADECIMIENTO .................................................................................................................. III
AUTORIZACIN DE LA AUTORA INTELECTUAL ............................................................ IV
INFORME DE APROBACIN DEL TUTOR............................................................................. V
CERTIFICADO DE APROBACIN DEL TUTOR .................................................................. VI
DECLARACIN .......................................................................................................................... VII
CERTIFICACIN ..................................................................................................................... VIII
RESUMEN .................................................................................................................................... IX
ABSTRACT .................................................................................................................................... X
TABLA DE CONTENIDO .......................................................................................................... XI
LISTA DE TABLA ................................................................................................................... XVII
INTRODUCCIN .......................................................................................................................... 1
CAPTULO I .................................................................................................................................. 2
EL PROBLEMA ............................................................................................................................. 2
1.1 PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ...........................................................................................................2
xi
orales.........................................................................................................................18
xii
xiii
CAPITULO IV ............................................................................................................................. 43
xiv
4.2 DISCUSIN.......................................................................................................................... 50
CAPITULO V .............................................................................................................................. 53
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ........................................................................... 53
5.1 CONCLUSIONES. ....................................................................................................................................53
5.2 RECOMENDACIONES.............................................................................................................................54
BIBLIOGRAFA ......................................................................................................................... 55
ANEXOS ...................................................................................................................................... 58
xv
Lista de figuras
xvi
Lista de tabla
Tabla 1: Diamtro del halo de inhibicin para aceite esencial de organo .............................. 43
Tabla 2: Dimetro del halo de inhibicin para aceite esencial de hierba luisa ........................ 44
Tabla 3: Media del halo de inhibicin para aceite esencial de hierba luisa y de organo a
distintas concentraciones .......................................................................................................... 46
Tabla 4: Resultados de la prueba U Mann Whitney para el valor medio del halo de
inhibicin sobre cndida albicans............................................................................................. 47
Tabla 5: Sensibilidad de aceite esencial de hierba luisa y de organo a distintas
concentraciones sobre cndida albicans ................................................................................... 48
xvii
Lista de grficos
xviii
INTRODUCCIN
(Burnett,1982) mencion que dentro de los hongos patgenos la Cndida albicans ha
sido considerada como la especie ms patognica dentro de su gnero, misma que pudo ser
responsable de infecciones micticas en cavidad bucal, vaginal, gastrointestinal entre otras,
incluso en estados ms graves se ha observado una diseminacin en el organismo que ha
producido septicemias e incluso la muerte. Por otra parte Jawetz et al. (1999) afirm que se
han encontrado una gran variedad de microorganismos en la cavidad bucal que generalmente
viven en un estado de equilibrio, sin embargo se ha observado que cuando este estado se altera
aparece la enfermedad.
Conforme a Inga.et al. (2012). los aceites esenciales fueron definidos como
compuestos qumicos que brindan el olor caracterstico de las plantas, los mismos han sido
empleados en la industria de la perfumera, productos cosmticos, industria alimenticia y cada
vez ms ha ido aumentando su papel fundamental en el rea farmacutica con la creacin de
nuevos medicamentos a base de estos principios activos.
(Rojas, 2008) mencion que para el tratamiento de infecciones causadas por Cndida
Albicans se ha venido utilizando regularmente medicamentos como la Nistatina, fluconazol
y el ketoconazol, por lo que afirma que este hongo ha mostrado resistencia a estos
medicamentos. (Jawetz, Menick y Adelber, 2010) concuerda con lo anteriormente
mencionado sin embargo afirma que se ha descubierto cerca de 80 000 especies diferentes
de hongos en la naturaleza, no obstante solo unos cincuenta de ellos resultaron ser agentes
patgenos y son los responsables de las micosis en los seres humanos pero exclusivamente la
Candida Albicans ha venido siendo el nico agente causal de Candidiasis o algodoncillo.
Betancourt, 2013) otra planta que a travs de su aceite esencial carvacrol ha demostrado sus
propiedades antifngicas el Organo.
En
antifngico que poseen plantas medicinales como el organo y hierba luisa sobre cepas de
Cndida albicans, para de esta manera crear nuevos medicamentos que permitan controlar
las diversas patologas, eliminar los agentes causales y mejorar las propiedades ofrecidas por
los agentes antimicticos tradicionales.
2
CAPTULO I
EL PROBLEMA
Segn (Carreira y Almagro, 2000) indicaron que una de las infecciones ms comunes en
cavidad bucal ha sido la candidiasis oral, siendo una infeccin asociada a Cndida
albicans
Fernndez et al. (2001) Indic que an no est del todo claro cul de estos antimicticos
presenta mayores efectos, en base a esto persiste la necesidad de determinar si la nistatina
puede ser sin duda el agente de eleccin para el tratamiento de esta patologa o puede ser
remplazado por medicamentos alternativos naturales que puedan ofrecer la misma capacidad
inhibitoria con mayores ventajas en cuanto a costo, fabricacin, manipulacin y menores
efectos adversos que los medicamentos comnmente utilizados.
Evaluar el efecto antifngico in vitro del aceite esencial de Origanum vulgare (Organo),
Cymbopogon citratus (Hierba Luisa) a concentraciones del (25%, 50%,75% y 100%) frente a
Cndida albicans mediante la medicin de los halos de inhibicin formados en el cultivo.
Por otra parte (Marav Gisella, 2012) manifiesta que sin duda alguna es indiscutible el
papel que ha desempeado la medicina alternativa en la terapia de afecciones y dolencias de
enfermedades, adems de brindar un gran aporte en el desarrollo sustentable de la sociedad
especialmente dirigido a aquellos sectores de bajos recursos econmicos.
Hallar un efecto anti fngico positivo de los aceites esenciales de Origanum vulgare
(Organo) y Cymbopogon citratus (Hierba Luisa) sobre Cndida albicans marcara el
inicio de una nueva generacin de frmacos anti fngicos a base de principios activos
procedentes de plantas medicinales que generalmente son fciles de adquirir y son abundantes
en nuestro pas, permitiendo de esta manera la eliminacin eficaz del hongo y mejorando los
beneficios teraputicos ofrecidos por los medicamentos tradicionalmente utilizados como es
el caso de la nistatina.
1.4 HIPTESIS
CAPTULO II
MARCO TERICO
2.1 Fitoterapia
Por otra parte (Rojas, Sols y Palacios, 2010) han realizado diversos estudios en los
cuales han evaluado las propiedades curativas presentadas por diferentes plantas medicinales
entre ellas hierba luisa, tomillo, organo entre otras aplicadas de diversas formas y en distintas
preparaciones tanto en estudios in vitro como in vivo mostraron una efectiva actividad
inhibitoria sobre diversos microorganismos.
Wen. et al. (2011). Manifest que con la creciente aparicin de enfermedades e infecciones
resistentes a los medicamentos modernos con los cuales fueron tratadas las enfermedad
como antibiticos y antifngicos convencionales los mismos que a su vez pudieron producir
efectos de toxicidad por su uso prolongado, por esta razn ha incrementado el inters por
encontrar medicamentos que puedan sustituir los frmacos sintticos brindando nuevas
oportunidades teraputicas.
(Espinoza, 2008) afirmo que la caa santa creci especialmente en zonas tropicales y
subtropicales. Caracterizada como planta, robusta, de tallos muy bifurcados de 1 a 2 m de
alto, hojas verdes largas como listones, olorosas (olor ctrico), y acumuladas al asiento o
base. De la misma manera (Rojas, Ronceros, Palacios y Sevilla, 2012) manifestaron que ha
sido considerado originaria del Sureste de Asia, pero en tiempos resientes la encontraron en
cualquier parte del mundo especialmente en zonas clidas y templados.
(Rojas.et al. 2012) Determino que la planta aromtica perteneci a la familia Poaceae
(Gramineae), comnmente conocida como hierba luisa, caa santa, te limn, citronela
segn el lugar donde fue encontrada, pasto perenne, de hojas erectas, planas de 1 m de lago
aproximadamente y 5 a 15 mm de ancho, despiden un aroma similar al limn rojizas al
secarse y su florecimiento existir con mucha rareza.
Figura 1: Hierba Luisa (Cymbopogon citratus)
Reino: Cormobionta
Divisin: Magnoliophyta
Clase: Liliatae (Liliopsida)
Familia: POACEAE (Gramneas)
Gnero: Cymbopogon Spreng
Especie: Citratos Stapf (Inga y Giovana, 2012)
Adems (Inga y Giovanna, 2012) indicaron que los aceites esenciales fueron adquiridos de
diferentes partes de las plantas, generalmente de flores, hojas, frutos y semillas, en el caso de
la hierba luisa obtuvieron de sus hojas encontrando como principal compuesto qumico un
aldehdo denominado citral 70-85%. (Salazar, 2011) afirmo que posee otros componentes
como: el geraniol, linalol, citronelal, limoneno, nerol, y dipenteno, tambin estuvieron
relacionados con muchos de sus propiedades teraputicas.
Inga.et al. (2012) manifest que este componente principal del aceite esencial de esta planta
hizo que presentara propiedades como antibacterial y fungicida adems. (Salazar, 2011)
manifiesto que este componentes principal ha sido de gran importancia para la industria ya
que se lo utilizo en la perfumera, confitera, licores como ingrediente en la sntesis de sustancias
aromticas
han demostrado
realizaron investigaciones con los aceites esenciales de esta plantas estableciendo como
resultados propiedades antibacterianas y anti fngicas siendo sensible principalmente la
Cndida albicas.
Tambin Rojas et al. (2012) concuerda que se ha comprobado adems que su aceite
esencial resulto efectivo como agente antifngico y bactericida, ansioltico, sedativo ya que
su principal compuesto presenta con una efectiva accin. Tambin (Meza y Vargas, 2013)
10
mencionaron que puede ser efectivo en la curacin de acn, sarna, pie de atleta y para abrir
poros ya que segn estudios in vitro ha sido efectivo contra cepas del gnero Aspergillus.
Conforme a (Cameroni, 2013) el organo es una especie herbcea que puede llegar a
medir hasta 1metro de altura, pertenece a la familia Labiatae, presenta flores de color blanco a
purpura, de hojas vellosas lisas (Figs. 2 y 3)
Figura 2: Organo (Origanum vulgare)
11
Gnero: Origanum
Especie: vulgare
componentes no menos
importantes son los cidos cafecos con propiedades antioxidantes. Por otra parte (Salamanca
y Snchez, 2009) mencionaron que haciendo uso de los aceites esenciales y de los extractos
acuosos se ha podido identificar flavonoides apigenina, luteolina, alcoholes alifticos,
compuestos terpnicos y derivados fenilpropano.
Adems Corella (2013) afirm que el aceite esencial de organo presenta 60 componentes,
de los cuales los clasificaron en grupos: Monoterpenos, sisquiterpenos y fenlicos. De
manera que siendo los principales componentes el timol, carvacrol, pcimeno y terpenos.
12
(Morales, 1999) dedujo que se trat una planta aromtica muy usada en la preparacin de
alimentos para el hombre por su contenido y debido que provee de un aroma muy agradable a
los alimentos, as como los aceites esenciales tambin han sido utilizados en la industria
farmacutica, accesorios de limpieza e higiene tambin presenta propiedades antibacterianas y
antispticas.
Lozano et al. (2004) concuerda con lo anteriormente mencionado que este tipo de planta
tubo utilidad con mayor frecuencia en la preparacin de los alimentos debido a la presencia
de antioxidantes sin embargo fue usada como planta medicinal afirmando que tena actividad
antibacteriana contra Gram negativos, Gram positivos pero tambin presenta actividad
antifungicida sobre la Cndida albican.
(Betancourt, 2013) manifest que han existido diversos estudios donde hacen tributo a las
propiedades antibacterianas frente a diversos microorganismos, todo estos tributos floreci
debido a que han encontrado componentes de mayor abundancia en este aceite esencial
como son en timol y carvacrol. Siendo aparentemente el timol mucho ms efectivo contra
13
Tambin (Jawetz, Melnick y Adelberg, 1999) mencionaron que los pacientes con defensas
comprometidas son susceptibles a los hongos ubicuos a los cuales estn expuestas personas
14
sanas sin sufrir enfermedad. En muchos casos el tipo de hongos y la historia natural de la
infeccin mictica son determinados por el estado de predisposicin subyacente del husped.
Como miembros de la flora bacteriana normal la cndida y las levaduras vinculadas han sido
oportunistas endgenos.
Paralelamente (Ceccoti, 2000) enunci que las infecciones provocadas por hongos han
incrementado su frecuencia y su importancia clnica, en pocas anteriores las micosis bucales
estaba asociadas con condiciones tales como: leucemia, cnceres destructivos, quemaduras,
diabetes, mal nutricin, tratamientos con corticoides, entre otros. Por
otra parte
(Bscones, 2004) mencion que la candidiasis oral en la poblacin normal estuvo presente
entre un 40 y 60% considerndose ms frecuente en el paciente geritrico debido a factores
generales y locales.
Conforme a lo mencionado anteriormente (Nath, 2007) afirmo que los hongos con menor
virulencia intrnseca son agentes causales de enfermedad solo cuando los individuos han sido
diagnosticados con defensas deficientes, existi un incremento de estas micosis oportunistas
en los ltimos aos debido a la presencia de personas susceptibles con mayores factores de
riesgos como: Sida, diabetes, los tratamientos con antibiticos de amplio espectro, los
linfomas.
15
Conforme a Jawetz et al. (1999) afirm que varias especies de cndida pueden producir
candidiasis, siendo esos miembros de la flora normal de la piel, mucosas del aparato
respiratorio y gastrointestinal. Las especies de cndida colonizan las superficies mucosas de
todos los humanos durante poco despus del nacimiento, y el riesgo de infeccin endgena
siempre est presente. La candidiasis es la micosis sistmica ms comn.
Sumndose a lo que expuso (Negroni, 2009) manifest que los hongos del gnero Cndida
son levaduras, es decir que son de talo unicelular, abarcando este gnero ms de 200
especies sumamente ubicuas y con caractersticas muy diversas.
seudohifas esto sucede cuando las yemas continan su crecimiento pero sin desprenderse, de
esta manera generan cadenas de clulas alargadas pinzadas entre las clulas. (Libana, 1995)
establece que la Cndida se puede presentar como clulas redondas u ovaladas, con
presencia de un metabolismo aerobio siendo gram positivas.
16
Por otra parte (Rodrguez, 2006) aseguraron que la Cndida Albicans forma parte de la
microbiota normal de la boca, considerada una levadura de 2 a 5 m de dimetro, de
paredes delgadas, que produce brotes o yemas esfricas u ovoides. Hongo dimrfico con
capacidad de producir hifas y micelios verdaderos
2.4.2.2 Cultivo
(Segn Rodrguez, 2006) mencion que el crecimiento de Cndida albicans fue rpido
en medio Sabouraud, agar sangre, soya tripticasa y en muchos medios ricos. Tras la
incubacin a 21 - 37 C a los das posteriores de crecimiento las colonias toman la forma
de Y, no obstante al interior del agar se desarrollan tanto.
17
2.4.2.3 Candidiasis
orales
seudo-membranas
blanquecinas de color crema pudiendo florecer en cualquier parte de la cavidad oral debido a
la presencia de muchos factores favorecedores de candidiasis, algunos de ellos fisiolgicos
embarazo,
senectud,
infancia
otros
patolgicos
traumatismo,
estados
de
(Cecootti, 2000) concuerdo de la misma manera que la candidiasis oral fue la patologa
muy frecuente en cavidad oral en poblaciones con defensas inmunitarias deficientes, cuyo
agente etiolgico es el microorganismo denominado Cndida albicans, de acuerdo a sus
caractersticas presentes el odontlogo puede hacer un diagnstico precoz de enfermedades
como la diabetes o Sida.
18
Segn (Ceccotti, 2000) consider la clasificacin hecha por Grinspan en: forma aguda o
muguet, formas subagudas y crnicas.
En su obra (Holbrook y Ross, 1985) afirm que esta lesin encontr presente en la
infancia, vejez o individuos debilitados, apareciendo cuando el mecanismo de defensa se
halla comprometido o en infantes que an no se ha establecido.
(Laskaris, 1995) mencion que la patologa fue caracterizada por placas amarillo
blanquecinas, ligeramente elevadas, pudiendo ser removidas por raspado dejando una
superficie rojiza.
(Bscones, 2004) mencionaron que existe otra forma de llamada candidiasis aguda
atrfica, considerada lesin roja que aparece despus de la ingesta de antibiticos o
corticoides durante largo periodo de tiempo. De igual manera (Bascones, 2009) asegur
que esta infeccin se halla asociada a fatiga, anemia, debilidad y/o diabetes.
19
(Holbrook y Ross, 1985) encontr que la base acrlica de la dentadura postiza estuvo
colonizando en forma abundante por el microorganismo y esto puedo constituirse un
reservorio para la recurrencia de la infeccin.
Candidiasis crnica
estuvieron
desarrollo
la
infancia
temprana,
se
vincula
con
Segn (Bscones, 2004) mencion que este tipo de afeccin ha sido menos frecuente y en
un 5% de los casos se describen alteraciones premalignas del epitelio. Se parecen
bastante al cuadro de leucoplasia con dificultades en la eliminacin durante el raspado,
siendo a veces necesaria la escisin quirrgica.
20
Candidiasis sistmica.
(Libana, 1995) asegur que esta infeccin est dada como consecuencia de
una
Paralelamente (Prats, 2008) consider que dentro de las infecciones fngicas sistmicas
puedo encontrarse las primarias o tambin llamadas oportunistas ya sea que se den en
pacientes inmunocompetentes o que presenten inmunodeficiencia.
(Burnett, 1982) manifest que la cavidad oral la infeccin fngica ms prevalente estuvo
generalmente relacionada con especies del gnero Cndida y de hecho se ha determinado que
un 60% de individuos relativamente sanos no hospitalizados posee este microorganismo. La
cndida si puede estar vinculada con infecciones localizadas benignas de la piel e incluso
puede producir una infeccin aguda diseminada de pulmn o intestino llegando a convertirse
en casos muchos ms severos en septicemia, endocarditis o meningitis.
Segn (Rang, 2004), el empleo de los medicamentos antifngicos fue relativamente nuevo
su uso comenz apenas hace cinco dcadas con la utilizacin de la anfotericina y hasta la
actualidad han mostrado grandes avances. Por otra parte (Ambrogio, 2008), menciona que los
21
agentes antifngicos son compuestos qumicos que presentan toxicidad en parte por la
semejanza entre la clula humana y la clula fngica siendo ambas eucariotas y con una
estructura lipdica similar de la membrana celular, ergosterol para los hongos y colesterol en
la humana.
2.5.1 Indicaciones
2.5.2 Clasificacin
1.
Antibiticos
a.
b.
No polinicos: griseofulvina
22
2.
Azoles:
a.
b.
3.
4.
Piramidinas: flucocitosina
5.
2.5.3 Polienos
De la misma manera (Echeverra, 2009) indic que dentro de este grupo han sido
encontrados la anfotericina B y la nistatina, antifngicos que fueron usados especficamente
para el tratamiento candidiasis oral cuyo principal agente patgeno es la especie Cndida
albicas actuando adems sobre otras especies de Cndida.
(Samaniego, 2009) afirm que son molculas anfipticas esto quiere decir que exhibieron
funciones opuestas debido a que estn formadas por un grupo hidroflico e hidrofbico, su
nombre deriva de la presencia de cuatro enlaces covalentes para la nistatina y de siete enlaces
para la anfotericina B.
2.5.3.2 Mecanismo de accin
Segn (Rang, 2004) concluy que su principal mecanismo de accin fue inhibir los
procesos de permeabilidad y transporte de las membranas celulares produciendo prdida de
potasio intracelular, adems presentaron mayor afinidad por la membrana de los hongos y
algunos protozoos que la de los mamferos y bacterias lo que puede deberse a una mayor
23
2.5.3.3 Nistatina
Segn (Rang, 2004) indic que sobre un antibitico polinico que presenta un mecanismo
de accin similar al de la anfotericina B, fue aislado del Streptomyces noursei en 1950, en
principio fue denominado fungicidina y fue una mezcla qumica de sustancias desarrolladas y
refinadas por Squibb Research Laboratories cambiando su denominacin a nistatina,
prcticamente no absorbi por las mucosas del cuerpo o la piel, su uso se limita a micosis de
aparato digestivo.
Mientras que (Espinoza, 2009) afirm que la nistatina ha sido un medicamento muy
txico por lo que no se usa a nivel sistmico solo su uso se debe hacer en piel y mucosa
mostrando eficacia en la zona afectada.
2.5.3.3.1 Indicaciones
(Espinoza, 2009) mencion que se trata de un agente antifngico que solo se utiliza en el
tratamiento de infecciones por Cndida de la piel, candidiasis oral y vaginal produciendo una
accin eficaz sobre la zona afectada, adems no produce efectos irritativos locales o alergia
sin embargo resulta ser muy txico a nivel sistmico.
24
5.3.3.2Mecanismo de accin
2.5.3.3.3 Dosis
Segn (Espinoza, 2009) afirm que puede tener diversas presentaciones farmacuticas
como pomadas, cremas y talcos para su aplicacin tpica en piel, cremas, vulos y tabletas
para tratar la candidiasis vaginal y para la candidiasis bucal en forma de suspensin.
Conforme a (Smith y Reynard, 1997)
candidiasis oral en las siguientes dosis: Adultos y nios: se debe realizar colutorios de
suspensin de nistatina de 100000 U /ml 4 veces/da (debiendo mantener el medicamento en
la boca para luego eliminarlo), como mnimo se debe seguir con el tratamiento durante 2
das despus de que hayan desaparecido los sntomas, los neonatos reciben dosis de 1 ml y
los segundos de 2ml .
25
CAPITULO III
METODOLOGA
3.2.1 Universo
Aquellos hongos pertenecientes a la flora bucal normal que actan como oportunistas en
micosis bucal.
26
Replicaciones de cepas puras y que no hayan tenido contacto con ningn tipo de
reactivo o medicamento.
27
VARIABLE
DEFINICIN
DIMENSIO
INDICADOR
ESCALA
VALOR
Dimetro
del
Cuantitativa
halo
de
razn de 25%,
NES
CONCEPTUAL
Aceite
Producto
esencial puro
con
en diluciones
impedir
de Canela
desarrollo
vegetal
Cuantitativa
capacidad de
el
inhibicin
50%,
del
75%
En milmetros (mm)
100%
hongo.
VARIABLE INDEPENDIENTE
Cualitativa
Dimetro
del
Cualitativa
halo
de
razn de 25%,
inhibicin segn
50%,
las
100%
pautas
de
75%
Nula (-)
Sensible (+)
Muy sensible (++)
Duraffourd
Sumamente sensible (+++)
Aceite
Producto
esencial puro
con
en diluciones
impedir
de
desarrollo
Hierba
Luisa
vegetal
Cuantitativa
capacidad de
el
Dimetro
del
Cuantitativa
halo
de
razn de 25%,
inhibicin
50%,
del
75%
En milmetros (mm)
100%
hongo.
VARIABE VARIABLE
Cualitativa
Dimetro
del
Cualitativa
halo
de
razn de 25%,
inhibicin segn
50%,
las
100%
pautas
de
75%
Nula (-)
Sensible (+)
Muy sensible (++)
Duraffourd
DEPENDIENTE
VARIABLE
Especie de hongo
Cndida
Crecimiento
Cualitativa
oportunista
oportunista
que
albicans
bacteriano
nominal
desempea
papel
importante
en
Turbidez
UFC
micosis bucal.
28
a.- Recoleccin
La recoleccin se realiz a partir de plantas frescas. Se recolectaron ramas, tallos, y las flores
en cuanto al organo y las hojas con sus respectivos talluelos de la hierba luisa. Esto
proveniente de del mercado San Miguel de la ciudad de Tulcn. Toda la recoleccin fue
lavada con agua fra para luego ser secada en un medio ambiente fresco fuera del alcance de
contaminacin durante un periodo de 8 das hasta obtener el producto completamente seco y
homogneo.
Posterior al proceso de secado se traslad la muestra hacia las instalaciones del laboratorio
FICAYA de la Universidad Tcnica del Norte.
El procedimiento para la extraccin del aceite se hizo mediante la tcnica de arrastre por
vapor de agua (fig.4). Esta tcnica es una de las ms conocidas para obtener los aceites
esenciales de diversos tipos de plantas medicinales, basada su mecanismo de accin en que el
aceite es arrastrado por el vapor que se genera de la fuente de agua contenida en uno de los
recipientes (matraz), luego esta mezcla (vapor de agua y aceite) ser condensada mediante su
paso por un refrigerante de vidrio, para luego separar el aceite del agua por simple diferencia
de densidades. Adems se obtuvieron diluciones de los aceites puros en la solucin de tween
29
80 obtenindose concentraciones del 25%, 50%, 75% y 100% de los dos aceites (fig. 5).
Todo este proceso mantenindose a cargo del Dr. Jos Luis Moreno, encargado de las
instalaciones del laboratorio.
Elaboracin: Autor
Fuente. Facultad de Ingeniera en Ciencias Agropecuarias y Ambientales (FICAYA)
Elaboracin: Autor
Fuente. Facultad de Ingeniera en Ciencias Agropecuarias y Ambientales (FICAYA).
30
Elaboracin: Autor
Fuente. Facultad de Ciencias Qumicas (UCE).
31
Elaboracin: Autor
Fuente. Facultad de Ciencias Qumicas (UCE).
El medio de cultivo agar Dextrosa Sabouraud fue preparado segn las instrucciones del
fabricante en este caso fue 32,50 gramos para 500 ml. (fig. 8), la preparacin se realiz
en un Matraz Erlenmeyer que fue llevada a la estufa hasta obtener una mezcla homognea
(Fig. 9) en estado de gelificacin que posteriormente fue llevado al proceso de esterilizacin.
Luego de este proceso el preparado fue distribuido de manera equilibrada en las 19 placas
Petri, a razn de un espesor de 4 mm por placa aproximadamente.
Figura 8: Preparacin de los medios de cultivo.
Elaboracin: Autor
Fuente. Facultad de Ciencias Qumicas (UCE).
32
Elaboracin: Autor
Fuente. Facultad de Ciencias Qumicas (UCE).
Elaboracin: Autor
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33
Una vez reactiva la cepa del hongo y con la ayuda del asa bacteriana, se trasfirieron asadas
bacterianas una solucin neutra, luego se agit el tubo por 5 minutos, observando una
turbidez de 0.5 en la escala de Mc. Farland (Fig. 11).
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34
Elaboracin: Autor
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Elaboracin: Autor
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35
Adems tambin para el grupo de control negativo se usaron discos embebidos con tween
80, garantizando de esta manera la actividad de las sustancias usadas
3.5.2.5 Incubacin
Se hizo la incubacin a una temperatura de 37C en donde se incluyeron dos placas
controles demostrando as la viabilidad del hongo y la esterilidad del medio, para proceder a
la medicin de los halos a las 72 horas comprobando la efectividad antifungica de cada una
de las sustancias.
Figura 14: Incubacin de la siembra a 37C.
Elaboracin: Autor
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36
Elaboracin: Autor
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37
Elaboracin: Autor
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41
Elaboracin: Autor
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Elaboracin: Autor
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42
CAPITULO IV
4.1 RESULTADOS
Los datos de la medicin de los halos de inhibicin de los distintos cultivos se registraron en
Microsoft Excel y se puede apreciar en las tablas y grficas 1 y 2, en las que se observa una
alta variabilidad de los valores de los halos de inhibicin y una cierta tendencia a que aumente
el valor de dimetro conforme aumenta la concentracin del aceite esencial tanto dela hierba
luisa como la del organo.
A.e.organ
o 50%
A.e.organ
o 75%
A.e.organ
o 100%
Nistatina
14
11
16
10
12
13
15
20
10
20
11
15
17
12
11
20
19
12
11
16
18
8,5
No se
encuentran
elementos de
tabla de
ilustraciones.
43
A.e.organo 50%
A.e.organo 100%
Nistatina
20
20
16
20
19
18
17
16
15
14
12
20
A.e.organo 75%
13
12
11
10
16
15
12
11
11
10
12
11
8,5
6
4
0
1
Tabla 2: Dimetro del halo de inhibicin para aceite esencial de hierba luisa
A.e.hierba
luisa 25%
A.e.hierba
luisa 50%
A.e.hierba
luisa 75%
A.e.hierba
luisa 100%
Nistatina
16
12
24
20
10
15
10
13
13
10
13
12
13
18
11
11
25
16
12
13
8,5
Muestra
44
Grfica 2: Dimetro del halo de inhibicin para aceite esencial de hierba luisa
Nistatina
24
24
20
20
25
18
16
16
12
12
10
16
15
13
13
12
10
11
13
12
9
8,5
4
0
0
1
Un comportamiento bastante disperso fue evidente en los dos grupos, en cualquier caso, las
distintas concentraciones de los aceites esenciales probados tuvieron un efecto inhibidor
superior al del control positivo de la Nistatina.
45
Tabla 3: Media del halo de inhibicin para aceite esencial de hierba luisa y de organo a
distintas concentraciones
GRUPO
A.e.organo 25%
Media
A.e.organo 50%
A.e.organo 75%
A.e.organo 100%
A.e.hierba luisa 25%
A.e.hierba luisa 50%
A.e.hierba luisa 75%
A.e.hierba luisa 100%
Nistatina
Desviacin estndar
12,4
5,0
12,0
1,4
15,4
3,2
18,0
1,6
10,6
6,5
12,2
2,3
14,6
5,3
17,8
5,1
8,7
1,3
Grfica 3: Media del halo de inhibicin para aceite esencial de hierba luisa y de organo a distintas concentraciones
20,0
18,0
16,0
14,0
12,0
10,0
8,0
6,0
4,0
2,0
0,0
18,0
17,8
15,4
12,4
14,6
12,2
12,0
10,6
8,7
46
Se observ que los valores medios del halo de inhibicin guardan relacin con la
concentracin del extracto probado, los valores para ambos grupos experimentales son
bastante similares al comparar sus pares correspondientes en funcin de la concentracin.
El mximo valor medio de halo de inhibicin se present con el aceite esencial de organo
(18mm), seguido por el aceite esencial de hierba luisa al 100% ( 17,8mm).
Para comparar los valores medios del dimetro del halo de inhibicin como criterio de
efectividad de las soluciones propuestas se efectu la prueba de Kruswal Eallis en la que se
obtuvo una significancia p =0,039, con lo que pudo concluirse que si existieron
discrepancias significativas por grupo, la prueba de U Mann Whitney fue necesaria para
comparar las medias por pares.
Tabla 4: Resultados de la prueba U Mann Whitney para el valor medio del halo de inhibicin sobre cndida albicans
Tabla 4: Resultados de la prueba U Mann Whitney para el valor medio del halo de
inhibicin sobre cndida albicans
Grupo
s
A.e.or
gano 25%
A.e.or
gano 50%
A.e.or
gano 75%
A.e.or
gano 100%
A.e.hier
ba luisa
25%
A.e.hier
ba luisa
50%
A.e.hier
ba luisa
75%
A.e.hier
ba luisa
100%
Nistatin
a
A.e.or
gano 25%
A.e.or
gano 50%
1,000
A.e.or
gano 75%
A.e.or
gano 100%
A.e.hi
erba luisa
25%
A.e.hi
erba luisa
50%
A.e.hi
erba luisa
75%
A.e.hi
erba luisa
100%
Nistati
na
,993
,757
1,000
1,000
,999
,792
,972
,983
,682
1,000
1,000
,997
,720
,986
,997
,880
,989
1,000
,998
,539
,400
,720
,983
1,000
,031
1,000
,955
,438
1,000
,998
,757
,980
,989
,701
,031
47
si es mayor a 14 es sensible
Nula
Sensibilidad
intermedia
Sumamente
sensibilidad
Grupo
A.e.organo
25%
Frecuencia
N
20,0%
40,0%
0,0%
40,0%
100,0%
A.e.organo
50%
0,0%
100,0%
0,0%
0,0%
100,0%
A.e.organo
75%
0,0%
20,0%
60,0%
20,0%
100,0%
A.e.organo
100%
0,0%
0,0%
80,0%
20,0%
100,0%
A.e.hierba
luisa 25%
20,0%
40,0%
40,0%
0,0%
100,0%
A.e.hierba
luisa 50%
0,0%
80,0%
20,0%
0,0%
100,0%
A.e.hierba
luisa 75%
0,0%
80,0%
0,0%
20,0%
100,0%
A.e.hierba
luisa 100%
0,0%
40,0%
20,0%
40,0%
100,0%
Nistatina
40,0%
60,0%
0,0%
0,0%
100,0%
48
Total
Grfica 4: Sensibilidad de aceite esencial de hierba luisa y de organo a distintas concentraciones sobre cndida albicans
100,0%
20,0%
80,0%
20,0%
40,0%
20,0%
20,0%
40,0%
40,0%
60,0%
60,0%
100,0%
40,0%
60,0%
40,0%
20,0%
80,0%
40,0%
80,0%
20,0%
80,0%
40,0%
20,0%
20,0%
40,0%
20,0%
0,0%
Nula
Sensibilidad lmite
Sensibilidad intermedia
Sumamente sensibilidad
49
4.2 DISCUSIN
los aceites esenciales con plantas aromticas entre las que se destac la hierba luisa sobre la
levadura Cndida albicans, obteniendo como resultado que el aceite esencial de hierva luisa
ejerce mayor actividad sobre la cndida albicans, este hongo result ser muy sensible a este
aceites de la plantas antes mencionada. En mi investigacin realizada de igual forma se puede
manifestar que la hierba luisa presento eficacia sobre sepas de cndida albicans teniendo
una sensibilidad mayor en la concentracin al 100%. Alzamora, et al. Agreg que se realiz
como tratamiento comn de una ua del pie afectado por hongos, con gotas de aceite esencial
puro de .hierba luisa, pudiendo demostrar su poderoso efecto, sin producir dao al tejido sano
circundante
vez la versatilidad que tiene hierba luisa al actuar contra bacterias, hongos y en este caso
parsitos, en esta investigacin realizada los resultados concuerdan con lo mencionado
anteriormente deduciendo que la hierba luisa si posee efecto antifngico sobre cepas de
Cndida albicans . Abe et al (2003) demostraron en un trabajo investigando
sobre el
Autores como (Madsen y Bertelsen, 1995) han demostrado que el organo por sus
propiedades antibacterianas antifungicas es un efectivo agente en el crecimiento de hongos
bacterias y microbios debido a la presencia de timol y carvacol. De igual manera en este
estudio realizado podemos afirmar sobre lo antes mencionado teniendo un efecto inhibitorio
sobre la cepas de Cndida albicans.
Elaite et al. (2011) evalu la actividad del aceite esencial de organo frente a levaduras
aisladas, causantes de patologas oral. En este estudio se hizo evidente la gran actividad
fungicida que presenta el aceite de organo ya que en el estudio in vitro se evidencio
claramente los halos de inhibicin formados, estudio que concuerda a que el organo es un
antifngico como se demuestra en esta investigacin. Concordando con los estudios
realizados anteriormente los resultados de este estudio demuestran sobre su efectividad
antifungica.
51
carvacol, puedo manifestar que el organo si posee efecto inhibitorio sobre cepas de Cndida
albicans
Por otro parte en la investigacin realizada por (Ardila, Vargas, Prez y Meja, 2009), para
determinar el efecto antifungico de algunas plantas medicinales entre estas incluido el
organo sobre cepas de sobre cepas de C. albicans se pudo determinar un efecto inhibidor
positivo de los aceites esenciales de O. vulgare. Estoy de acuerdo con lo mencionado
anteriormente en este estudio realizado afirma sobre lo escrito.
Este trabajo investigativo tuvo como fin demostrar el efecto antifngico presentado por los
aceites esenciales de Cymbopogon citratus (hierba Luisa) y Origanum vulgare (organo)
aplicados sobre cepas de Cndida albicans, principal hongo asociado con la presencia de
candidiasis oral en comparacin con la nistatina un medicamento generalmente utilizado para
el tratamiento de esta patologa. Encontrando efecto antifungico tanto en el organo como la
hierba luisa demostrando mejor efecto inhibitorio la hierba luisa pero en forma cualitativa.
52
CAPITULO V
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
5.1 CONCLUSIONES.
2. Se pudo comprobar que los dos grupos de aceites esenciales en investigacin en las
distintas concentraciones 25%, 50%, 75%, 100% tuvieron un efecto inhibitorio
superior al control positivo de la Nistatina
4. Tanto la Cymbopogon citratus (Hierba Luisa) como Origanum vulgare (Hierba Luisa)
al 100% tuvieron una mayor efectividad de capacidad inhibitoria frente a cepas de
cndida albicans respecto a las dems concentraciones.
53
5.2 RECOMENDACIONES
para
54
BIBLIOGRAFA
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de
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55
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Editorial cientfica . S.A. de C.V.
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Microbiologa
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57
ANEXOS
58