EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE CARBONO EN LA PRODUCCIN DE ERITROMICINA

POR S. ERITRHAE.
Objetivos:
- Evaluar el efecto de la concentracin de glucosa en la produccin de eritromicina S. ERITRHAE
- Cuantificar la concentracin de eritromicina a lo largo de la fermentacin
- Establecer si existe un efecto de la concentracin de glucosa en el crecimiento de S. ERITRHAE
Resultados:
a) Determinacin de Biomasa
Tabla 1 Biomasa
TIEMPO DE
FERMENTACION (h)
0
24
48
72
96
120
144

Glucosa al 0.5%(g)

Glucosa al 3%(g)

1.1688
1.1699
1.1910
1.2343
1.2559
1.34435
1.4124

1.1793
1.1912
1.2416
1.3963
1.5722
1.7569
1.9591

Fase Lag

Glucosa 0.5%

[ 1.1688 g ] [ 1.0778 g ]
1.5 ml

=0.060 g/ ml=60.66 mg / ml

Fase Exponencial

Biomasa mg/ml
G 0.5%
G 3%
60.66
67.66
61.4
75.6
75.46
109.2
104.33
212.3
118.73
329.6
178
452.73
223.06
587.5

[ 1.1699 g ] [ 1.0778 g ]
1.5 ml

[ 1.1910 g ] [ 1.0778 g ]
1.5 ml

[ 1.2343 g ] [ 1.0778 g ]
1.5 ml

[ 1.2559 g ] [ 1.0778 g ]
1.5 ml

=0.061 g/ ml=61.4 mg / ml

=0.075 g/ml=75.46 mg /ml

=0.104 g / ml=104.33 mg /ml

=0.118 g /ml=118.73 mg/ml

[ 1.34435 g ] [ 1.0778 g ]
1.5 ml

[ 1.4124 g ] [ 1 .0778 g ]
1.5 ml

=0.178 g/ m=178 mg / ml

=0.223 g / ml=223.06 mg /ml

Glucosa 3%

[ 1 .1793 g ] [ 1 .0778 g ]
1.5 ml

[ 1.1912 g ] [ 1.0778 g ]
1.5 ml

[ 1.2416 g ] [ 1 .0778 g ]
1.5 ml

[ 1.3963 g ] [ 1.0778 g ]
1.5 ml

[ 1.5722 g ] [ 1.0778 g ]
1.5 ml

=0.067 g/ ml=67.66 mg / ml

=0.075 g/ml=75.6 mg/ml

=0.109 g/ ml=109.2 mg/ ml

=0.212 g/ml=212.3 mg/ ml

=0.329 g/ ml=329.6 mg/ ml

[ 1.7569 g ] [ 1.0778 g ]
1.5 ml

[ 1.9591 g ] [ 1.0778 g ]
1.5 ml

=0.452 g/ ml=452.73 mg /ml

=0.587 g/ml=587.5 mg/ ml

Tabla 2Determinacin de
TIEMPO DE FERMENTACION
(h)
0
24
48
72
96
120
144

G 0.5%
= 0.0014
2

td=

ln 0.692
=
(h1)

td=

0.692
=494.28
0.0014

Ln Glucosa al 0.5%
(g)
0.15
0.16
0.17
0.21
0.23
0.30
0.34.

Ln Glucosa al 3%(g)
0.16
0.17
0.22
0.33
0.45
0.56
0.67

G 3%
=
2

td=

ln 0.692
=
(h1)

td=

0.692
=182.10
0.0038

b) Curva estndar de Eritromicina (g/ml)

Tabla 3 Curva
Concentracin de Eritromicina
(g/ml)
0
2
4
6
8
10

Dimetro de halo de
inhibicin (mm)
4
11
19
23
26
31

Log Eritromicina
0
0.30
0.60
0.78
0.90
1

c) Determinacin la eritromicina durante la fermentacin.

Tabla 4 Concentracin
TIEMPO DE
FERMENTACION
(h)

Glucosa al
0.5%
(mm)

Glucosa al 3%
(mm)

Log
Eritromicina
(G 0.5%)

Log
Eritromicina
(G 3%)

[Eritromicina]mg/ml
G 0.5%
G 3%

0
24
48
72
96
120
144

4
6
9
11
15
18
21

4
4
7
9
10
13
15

G 0.5%

X=

0.019
0.096
0.211
0.289
0.442
0.558
0.674

0.019
0.019
0.134
0.212
0.250
0.366
0.443

b
=log
m
43.503
=0.019
25.97

63.503
X=
=0.096
25.97
X=

1.044
1.044
1.361
1.945
1.778
2.323
2.773

G3%
Antilog G 0.5%

X=

b
=log
m

93.503
=0.211
25.97

1.247
1.652
1.945
2.767

X=

43.503
=0.019
25.97

43.503
X=
=0.019
25.97
X=

73.503
=0.134
25.97

113.503
=0.289
25.97

X=

93.503
=0.212
25.97

X=

153.503
=0.442
25.97

X=

103.503
=0.250
25.97

X=

183.503
=0.558
25.97

X=

133.503
=0.366
25.97

X=

213.503
=0.674
25.97

X=

153.503
=0.443
25.97

4.720

1.044
1.361
1.945
1.778
2.323

3.614

X=

Antilog G 0.5%
1.044

1.044

X=

1.044
1.247
1.652
1.945
2.767
3.614
4.720

2.773

d) Calculo de rendimiento
Tabla 5 Rendimiento
TIEMPO DE
FERMENTACION
(h)
0
24
48
72
96
120
144

Yp /x=

Yp /x

Yp /x

G 0.5%

G 3%

27.43
4.10
2.06
2.97
2.19
2.26

0
0.76
0.62
0.28
0.33
0.33

Pf Pi
100=
Xf Xi

G 0.5%

Yp /x=

1.2471.044
100=27.43 mg
61.4 mg60.66 mg

Yp /x=

1.6521.044
100=4.10 mg
75.46 mg60.66 mg

Yp /x=

1.9451.044
100=2.06 mg
104.33 mg60.66 mg

Yp /x=

2.7671.044
100=2.97 mg
118.73 mg 60.66 mg

Yp /x=

3.6141.044
100=2.19 mg
178 mg60.66 mg

Yp /x=

4.7201.044
100=2.26 mg
223.06 mg60.66 mg

G 3%

Yp /x=

1.0441.044
100=mg
75.6 mg67.66 mg

Yp /x=

1.3611.044
100=0.76 mg
109.2 mg67.66 mg

Yp /x=

1.9451.044
100=0.62mg
212.3 mg67.66 mg

Yp /x=

1.7781.044
100=0.28 mg
329.6 mg67.66 mg

Yp /x=

2.3231.044
100=0.33 mg
452.73mg67.66 mg

Yp /x=

2.7731.044
100=0.33mg
587.5 mg67.66 mg

e) Recopilacin de los resultados

Tabla 6 Resultados

G 0.5%
0.001

G 3%
0.003

td

Yp/x G 0.5%

Yp/x G 3%

RCC

G 3%
182.10
494.28

2.26mg

0.33 mg

Si

G 0.5%

Discusin de resultados:
S. ERITRHAE es una actinobacteria gram positiva que se caracteriza por la produccin de eritromicina el cul es un
antibitico de inters comercial, la eritromicina es un metablito secundario el cul se supone que se produce en condiciones
de estrs para la supervivencia de la bacteria cuando hay condiciones de estrs. En este experimento simulamos las
condiciones de estrs que ocurre de forma natural en el medio ambiente por la presencia de otras bacterias que disminuyen
los nutrientes e inducen la produccin de eritromicina. En la tabla 1 podemos observar como la biomasa de S. ERITRHAE es
menor cuando se tiene una concentracin de glucosa al 0.5% que al 3%, esto es lgico pues conforme exista ms nutrientes
en el medio el crecimiento microbiano ser mayor, podemos observar como a las 72 horas este crecimiento es notablemente
mayor con 3 en el medio y a las 144 horas se puede observar que la biomasa es ms del doble con glucosa al 3%
(587.5mg/ml) que con glucosa al 0.5% (223.06mg7ml).
La velocidad de crecimiento tambin es ligeramente diferente, de hecho es tres veces mayor con glucosa al 3% (ver tabla 6),
los parmetros cinticos se alteran al haber mayor nutrientes en el medio, esto ocurre de forma directamente proporcional
pues a mayor concentracin de glucosa mayor es la velocidad de crecimiento y adems el tiempo de duplicacin se reduce
drsticamente, en el caso de glucosa al 3.0% el tiempo de duplicacin es tres veces (494.28182.10=3) que el de la glucosa
al 0.5%. Esto va a ser importante pues debe existir una cantidad adecuada de biomasa para producir una mayor cantidad de
metabolitos secundarios pero no demasiado nutriente para que solo exista biomasa y no la eritromicina en este caso.
Para hacer una aproximacin de la eritromicina en el medio un mtodo qumico sera bastante inadecuado debido a que estos
mtodos tienden a ser costosos pues se necesita eritromicina de alta pureza y reactivos para realizar el ensayo por lo que la
determinacin por halos de inhibicin con una curva estndar es en la prctica un mtodo confiable si se realiza de forma
adecuada. La curva estndar nos arroj la ecuacin para determinar las concentraciones de eritromicina, esta se muestra en
el grfico c. AL observar las concentraciones de eritromicina en el medio podemos observar una mayor produccin conforme
al tiempo de fermentacin, en el grfico se observa un aumento casi lineal de concentracin de eritromicina conforme pasaba
el tiempo alcanzndose el valor mximo a las 144 horas que fue el tiempo mximo. En el caso de las concentraciones de
glucosa podemos observar en la tabla 4 como en el caso de la glucosa al 0.5% la produccin de eritromicina es mayor desde
las primeras 24 horas existiendo una diferencia muchsimo mayor a las 144horas donde para glucosa al 0.5% fue de
4.720mg/mL y de 2.773mg/mL, esto es debido a lo espuesto con anterioridad pues a mayor nutrientes en el medio la bomasa
es mayor utilizando la mayor parte de los nutrientes para el crecimiento de la poblacin de S. ERITRHAE y en condiciones de
estrs la produccin de eritromicina es mayor pues estos nutrientes se arrojan al medio para la supervivencia de la bacteria,
todos estos resultados lo confirman, sin embargo, es necesario para un inters de mercado este tipo de relacin y en que
proporcin para aprovechar estas condiciones. Cuando evaluamos la proporcin de eritromicina con respecto a la biomasa
observamos en la tabla 5 un mayor rendimiento cuando tenemos glucosa al 0.5% siendo de 2.26 a las 144 horas y de 0.33
con glucosa al 3% a las 144horas. Esto resulta importante pues en un lote piloto es entonces saber que se quiere y aplicar los
mtodos para obtenerlo, es decir, si se quiere biomasa entonces es mejor colocar una concentracin de glucosa al 3% y si
queremos obtener mayor eritromicina es entonces mejor colocar una menor concentracin de nutrientes. El incremento en
biomasa de S. ERITRHAE es mayor cuando se aumenta la concentracin de glucosa debido a que la bacteria se enfoca en el
crecimiento, esto es confirmado por una menor produccin de eritromicina lo que quiere decir que a mayor concentracin de
nutrientes en el medio mayor es la biomasa y en cambio cuando se reduce la concentracin de glucosa en biomasa de S.
ERITRHAE menor pero sus rutas metablicas se enfocan en la supervivencia y produccin por lo tanto de eritromicina. Esto
es notable y ms evidente al comparar los rendimientos siendo mayor en condiciones de estrs. La cintica de crecimiento de

S. ERITRHAE tambin se ve afectada por la cantidad de glucosa en el medio siendo mayor cuando existe ms de glucosa en
el medio.

Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Facultad de Qumica
Biosntesis y Biotecnologa
Practica No. 3
EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE GLUCOSA
EN LA PRODUCCIN DE ERITROMICINA POR S.
ERITRHAE.
Grupo: 2
Profesores: Norma Anglica Camacho de la Rosa
Marco Antonio Ortiz Jimnez
Jorge Soto Y Soria
Alumna: Garca Gonzlez Tania Beln