INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA DE INGENIERIA GUANAJUATO

LABORATORIO DE BIOQUIMICA FARMACEUTICA

PRACTICA 1
REACCIONES DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS

EQUIPO 2
Jorge de Jesus Mendoza Gutirrez
Oscar Efran Fernndez Delgado
Diego Armando Medina Prez

OBJETIVOS:
1. Elaboracin de reacciones determinadas, necesarias para reconocer a los
aminocidos y sus propiedades componentes.
2. Identificacin va trabajo experimental, de algunas propiedades fisicoqumicas
constituyentes en las protenas

Introduccin
Tanto en la ciencia como en la naturaleza, nos topamos con una amplia variedad de
compuestos indispensables para el desarrollo y bienestar de ciertas funciones vitales en
todo ser vivo; todos son importantes debido a su contribucin en todo equilibrio fisiolgico
y qumico de una funcin biolgica especfica, pero solo una biomolcula resulta tan
verstil como para cumplir varias funciones a la vez dentro de organismos vivos; a estas
biomolculas se les conoce como protenas, y son verstiles debido a que actan como
catalizadores, brindan soporte estructural y proteccin, son agentes de transporte,
mensajeros qumicos y contribuyen como factores de reconocimiento celular. Las
protenas son polmeros compuestos por unidades monomricas llamadas aminocidos,
que se encuentran unidos mediante enlaces peptdicos de amida en macromolculas con
pesos moleculares que van desde miles hasta millones de unidades de masa atmica (De
ah que se puedan apreciar ciertas caractersticas). [1][2]
Los aminocidos, aparte de contener un grupo amino con un grupo cido carboxlico
estando ligados al mismo tomo de carbono, tambin contienen una composicin y
secuencia de aminocidos caracterstica (estructura primaria), basada en una cantidad y
secuencia de los aminocidos que la integran, por consecuencia mostrara propiedades
diferentes para identificarse con su entorno. Hoy da dentro del mbito cientfico se
registran alrededor de 200 aminocidos conocidos y clasificados va sus funciones
biolgicas, 20 de ellos se dilucida forman parte de las protenas y 10 se clasifican como
los esenciales, debido a la cuanta de los mismos dentro del organismo (fenilalanina,
triptfano, lisina, valina, treonina, metionina, leucina, Isoleucina, arginina e histidina). [2][3]
[4]
En un enfoque farmacutico, es de inters comn el identificar mediante reacciones a
ciertos aminocidos para conocer los bloques que constituyen a las protenas inmersas
en un sistema o sustancia, en especial frmacos, gracias a la cual se garantiza la
eficiencia del frmaco y que cumpla con la funcin biolgica indicada; para hacer posible
lo expuesto, se realizan varias reacciones que nos facilitan el identificar esos bloques de
aminocidos constituyentes. [3][4]
Reaccin de Biuret.
Esta reaccin se lleva acabo mediante pptidos y protenas constituyentes (siendo
siempre de carcter positivo), no tomando en cuenta a los aminocidos, ya que depende
a la presencia del enlace peptdico - CO- NH , que se disipa al liberarse los

aminocidos. Importante que los grupos amino se encuentren enlazados a los pptidos
para formar el complejo y propiciar mencionada reaccin. [1][3]
Reaccin de Lowry.
Similar a la reaccin de Biuret, forma un complejo, violeta, entre el ion cobre y las
protenas, reaccionando con las mismas en un medio alcalino y teniendo por ventaja ser
extremadamente sensible pudiendo detectar ciertas cantidades del orden de 10
microgramos de protenas. Cuando este complejo reacciona con el reactivo de FolinCiocalteau, se reduce por la presencia del grupo fenol en la protena formando un
complejo de color azul oscuro, que ser 100 veces mas sensible que la reaccin de
Biuret, variando la intensidad del mismo acorde a la protena que se utiliza, y cuya
estructura se desconoce. [3]
Reaccin de la Ninhidrina.
Apropiada para todo compuesto con grupos amino y carboxilo, la Ninhidrina resulta un
agente oxidante poderoso que, debido a sus propiedades, reacciona con la mayora de
los alfa-aminocidos, descarboxilandolos, y detectando la presencia de aminocidos y
protenas va un complejo purpura que variara dependiendo al aminocido. [1][2]
Reaccin de Xantoprotico.
Los anillos aromticos presentes en algunos aminocidos, reaccionan con cido ntrico
concentrado (nitracin), formando nitros derivados de color amarillo, y anaranjado en
solucin alcalina, por lo cual esta reaccin permite reconocer la presencia de Tirosina,
Fenilalanina (reaccin ms lenta) y Triptfano. [2][4]
Reaccin de Ehrlich.
La presencia de anillos aromticos en la cadena lateral de los aminocidos se puede
identificar mediante la reaccin con cido sulfanlico y nitrito de sodio, por formacin de
sales de Diazonio fuertemente coloreadas, permitiendo detectar la presencia de Tirosina e
Histidina libres, y formando pptido o protenas. Por lo general forman un color entre
naranja y rojo cereza. [1][4]
Reaccin para azufre de cistena y cistina.
Cuando la a-aminocidos y las protenas que contienen grupos tilicos se calientan en
medio fuertemente alcalinos, en lcalis fuertes forman H2S, el azufre presente reacciona
para formar sulfuros; estos sulfuros se detectan mediante la formacin de un precipitado
negro de sulfuro de plomo por adicin de acetato de plomo. Los grupos tioles tambin
reaccionan con el nitro prusiato de sodio en presencia de un exceso de amonaco para
dar un complejo de color rojo. [3]
Punto Isoelctrico

El punto isoelctrico (pI) se define como el pH en el que los aminocidos naturales o

cualquier otra especie anftera posee una carga 0, para hallar el punto isoelctrico de un
aminocido necesitamos calcular sus pKa experimentalmente, sumarlos y dividirlos entre
dos:
pI = (pKa + pKa)/2
Al verse manipuladas la carga neta de las protenas debida a la interaccin con el
disolvente, atraer iones de carga opuesta, debido a la polaridad de los puentes de
hidrogeno con otros iones en la solucin, y formando una atmosfera inica capaz de cubrir
las cargas de la protena. [1][2][4]
Reactivos y Material
Reactivos

Material (por grupo)

Preparar las soluciones de

Albumina de huevo al 1%
Gelatina al 1%
Casena al 1%
Fenilalanina al 1%
Cistena al 1%
Glicina al 1%
Prolina al 1%
Solucin de CuSO4-5H2O al 0.5%
Solucin de CuSO4 para Lowry

50 tubos de ensaye
20 pipetas de vidrio de 5ml
2 soportes universal
4 baos de hielo
12 gradillas para tubo de ensaye
8 pinzas para tubo de ensaye
2 vasos de precipitados de 100 ml
2 buretas de 25 ml
2 pinzas para buretas
4 vasos de precipitados de 500 ml para bao
Mara
1 vaso de precipitados de 100 ml
Papel indicador de pH

Solucin de NaOH al 20%

Solucin de Ninhidrina al 1% en etanol 95%
Solucin de NaOH 40%
Solucin de acetato de plomo al 10%
Solucin de ac. Sulfanlico al 0.5% en HCl 2%
Solucin de NaNO2 al 0.5%
Reactivo de Folin-Ciocalteau
HNO3 concentrado
NH4OH concentrado
H2SO4 concentrado
Agua destilada
Solucin de casena alcalina al 1%
100 ml de HCl 0.2N para titular(por grupo)
100 ml de NaOH 0.2N para titular (por grupo)

Metodologa
Reaccin de Biuret

Equipo:
Parrillas de calentamiento
Vortex
Micropipeta de 1ml

REACCION DE LOWRY

REACCION DE LA NINHIDRINA

REACCION XANTOPROTEICO

REACCION DE EHRLICH

REACCION PARA AZUFRE DE CISTEINA Y CISTINA

PUNTO ISOELECTRICO

Resultados y Observaciones
Reaccin de Biuret
Reactivo
Positivo o Negativo
Color de la reaccin
Albumina
Positivo
Violeta()
Gelatina
Positivo
Violeta (tomo una tonalidad casi transparente)
Casena
Positivo
Violeta (tomo una tonalidad mas fuerte )
Glicina
Negativo
No hubo coloracin
T. de Agua
Negativo
No hubo coloracin
Tabla 1.- Resultados obtenidos con las sustancias va Reaccin de Biuret

Los resultados sealados en la tabla 1, se obtuvieron mediante la experimentacin, para

ello se llevaron acabo las reacciones sealadas con cada una de las sustancias y las
cantidades descritas; las reacciones nos arrojaron lo que se muestra en la tabla.
Observaciones:
1. Observamos que debido a dicha reaccin de Biuret en las sustancias de Albumina,
Gelatina y Casena; al agregar el reactivo de sulfato de cobre ms la solucin de
protena, precipito una coloracin violeta.
2. La reaccin en todos los compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos
consecutivos en sus molculas es positiva.
Reaccin de Lowry
Reactivo
Positivo o Negativo
Color de la reaccin
Albumina
Positivo
Azul turbio
Gelatina
Positivo
Azul Tenue
Casena
Positivo
Azul marino
Glicina
Negativo
No hubo coloracin
T. de Agua
Negativo
No hubo coloracin
Tabla 2.- Resultados obtenidos con las sustancias va Reaccin de Lowry

Observaciones
1. Los resultados fueron los esperados, aunque hubo una ligera variacin con la
albumina, que debi haber arrojado un azul mas claro, fuera de ese pequeo
inconveniente los resultados nos coinciden con lo investigado en varias fuentes.
2. Los colores indicados, al reaccionar cada una de las sustancias presentes, son los
adecuados debido a su composicin qumica capaz de generar mencionada
reaccin para determinar el aminocido.
Reaccin de Ninhidrina
Reactivos
Albumina
Gelatina

Positivo o Negativo
Positiva
Positiva

Color de la reaccin
Morado(se hizo como gelatinoso)
Violeta

Casena
Positiva
Morado
Glicina
Positiva
Morado
Cistena
Negativo
Anaranjado
Prolina
Negativo
Entre amarillo y caf
Fenilalanina
Negativo
Morado
T. de Agua
Negativo
No hubo coloracin
Tabla 3.- Resultados obtenidos con las sustancias va Reaccin de Ninhidrina

Se expone el color del compuesto generado por su reaccin, el cual determina si cumple
con la variacin expuesta en la literatura, este resultado fue posible debido a que el tomo
de carbono del carbonilo presento una carga parcial positiva, por lo que el C central de la
mayora de los reactivos resulto ser menos estable y ms electroflico.
Reaccin de Xantoprotica
Reactivos
Positivo o Negativo
Color de la reaccin
Albumina
Positivo
Amarillo (protena con anillos aromticos)
Gelatina
Positivo
Poco amarillo(anillos aromticos)
Casena
Positivo
Amarillo(protenas con anillos aromticos)
Glicina
Negativo
No hubo coloracin
Fenilalanina
Negativo
No hubo coloracin
T. de Agua
Negativo
No hubo coloracin
Tabla 4.- Resultados obtenidos con las sustancias va Reaccin de Xantoproteica

La glicina no reaccion con el reactivo de Biuret porque est en forma libre, y no hay
enlaces peptdicos con los que pueda reaccionar. Adems en la reaccin xantoprotica el
resultado fue negativo porque carece de grupos aromticos.
Si se tiene un precipitando de coloracin amarilla o simplemente no hubo coloracin, la
reaccin es negativa al no haber presencia de protenas.
Reaccin de Ehrlich
Reactivos
Positivo o Negativo
Color de la reaccin
Albumina
Positivo
Rojo(se utilizo Histidina)
Gelatina
Positivo
Naranja(se utilizo Tirosina)
Casena
Positivo
Rojo(se utilizo Histidina)
Glicina
Negativo
Amarillo(ninguna de las dos)
T. de Agua
Negativo
Amarillo (ninguna de las dos)
Tabla 4.- Resultados obtenidos con las sustancias va Reaccin de Ehrlich

Al momento de reaccionar los compuestos expuestos en la tabla con sus reactivos

correspondientes, observamos las siguientes coloraciones y resultados; explicamos el
fundamento de los mismos gracias a la formacin de N-feniliminas por condensacin
catalizada por bases de compuestos que contienen grupos activos de metileno.
Reaccin para azufre de cistena y cistina
Reactivos
Albumina
Gelatina
Casena

Positivo o Negativo
Positivo
Negativo

Color de la reaccin
Caf, ligera presencia de cistena y cistina
Incoloro
Blanquecino

Glicina
Negativo
Incoloro
Cistena
Positivo
Negro
T. de Agua
Negativo
Incoloro
Tabla 5.- Resultados obtenidos con las sustancias va Reaccin para azufre de cistena y
cistina

Los resultados expuestos fueron posibles gracias a las propiedades expuestas de los
componentes reaccionantes, cabe mencionar que el azufre es muy reactivo y bastante
fuerte, y mas en reaccin con cistena, debido a que en presencia de esta forma un
campo elctrico polar capaz de atraer todo electrn para provocar reaccione en cadena.
Debido a la propiedad conjunta fue posible que las reacciones con ciertos reactivos fueran
mas fuertes y con otras mas dbiles, gracias a sus propiedades como compuesto quimico.
Punto isoelctrico
Se utilizaron 15 ml de casena, y se precipito con .45 ml de HCl 0.2 M mediante titulacin,
arrojndonos un pH de 6; al momento de titularla con 0.55 ml se toma el pH que nos dio 5,
despus de efectuar otra titulacin con 0.65 ml su pH nos da 3, posteriormente se toma
poca solucin que debido a lo observado no precipita al agregar 0.6 ml con un pH de 6.

Anlisis y discusiones
Debido a los resultados presentados en la practica, no tenemos mucho que discutir
puesto que la mayora de las reacciones nos arrojaron las coloraciones esperadas, segn
lo dilucidado por la literatura; cabe mencionar que esto fue posible debido a la buena
organizacin y el manejo adecuado de los materiales y reactivos.
Tuvimos una pequea variacin en el compuesto de la albumina (reaccin de Lowry), pero
tal consecuencia fue porque un compaero no agrego la cantidad indicada de albumina
en el tubo de ensaye; y al momento de agregar el reactivo, se observo una ligera
variacin en la coloracin del mismo al momento de reaccionar, por consiguiente tambin
el resultado vario, aunque con ligeros mrgenes nos dio positivo como se debi de dar.
El punto isoelctrico vari pero porque los compaeros que realizaron la experimentacin
no tomaron en cuenta un pequeo detalle, aunque la variacin no tuvo un margen de error
alejado de lo esperado y se pudo dar un resultado ms cercano a la realidad, los
resultados arrojados fueron los esperados y se cumple con el objetivo de la prctica.
El hecho de que la mayora de las soluciones problema hayan dado positivo para la
reaccin de Biuret, indica que todas estn conformadas por ms de tres residuos de
aminocidos.
La intensidad del color de una reaccin vari de una solucin problema a otra, no slo por
la cantidad de grupos disponibles para la reaccin en la protena, sino tambin por la
cantidad de reactivos agregados.

Los resultados en las reacciones de precipitacin con los cidos clorhdrico y ntrico
fueron los mismos porque ambos son cidos fuertes, y al estar en las mismas
concentraciones se disocian de igual forma, el efecto que causaron en las protenas fue el
mismo.

Conclusiones
1. Las reacciones realizadas en esta prctica pueden servir para determinar la
presencia de ciertos grupos en una protena, pero no son adecuados para la
identificacin de aminocidos.
2. Se reviso y comprob sobre la importancia que cumplen los aminocidos dentro
de toda reaccin qumica; a la vez se apreciaron ciertas propiedades en los
mismos, basadas en los colores arrojados por las sustancias reaccionantes con
las sustancias, concluyendo que toda protena complementan su funciones dentro
de todo sistema qumico y biolgico gracias a los aminocidos.
Cuestionario
1. La solucin para la prueba de Biuret debe ser alcalina. Por qu? Justifique su
respuesta.
Cuando una protena se pone en contacto con un lcali concentrado, se forma una
sustancia compleja denominada Biuret. Es una molcula formada a partir de dos
de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da positiva esta
reaccin. La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta,
debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los
pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces
peptdicos1
2. Puede utilizarse la reaccin de Ninhidrina para determinar la presencia de
protenas? Justifique la respuesta.

Es una de las reacciones ms sensibles para identificar aminocidos en general,

ya que detecta una parte de aminocido en 1 500 000 partes de agua.
Aminocidos y muchas aminas primarias dan un color violeta caracterstico.
Reacciona con todos los aminocidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8,
dando una coloracin que vara de azul a violeta intenso. Pero una amina
adyacente a un carbono terciario no puede ser detectada por la prueba de
Ninhidrina. La reaccin de Ninhidrina con aminas secundarias da una sal de
iminio, que es tambin de color, y esto es generalmente de color amarilloanaranjado en color 2.

3. Por qu la Prolina desarrolla un color diferente al resto de los aminocidos con la

Ninhidrina?
Porque es un Iminoacidos, tuene un grupo amino y un grupo carboxilo
Se trata del nico aminocido proteinognico cuya -amina es una amina
secundaria en lugar de una amina primaria. Aunque no posee un grupo imino
Y por lo tanto al ser una amina secundaria al reaccionar con la Ninhidrina da una
coloracin amarilla3

4. Explicar las diferencias en los resultados obtenidos en la prueba de Xantoproteica

y de Ehrlich con las muestras de gelatina, casena y albumina.
Las diferencias radican en base a los compuestos reaccionantes para los reactivos
mencionados, las propiedades en los componentes para la prueba xantoprotica
sern mas polares y electronegativos que las de la prueba de Ehrlich, habr mayor
energa inmersa en la reaccin, intercambio de fases y por consiguiente mayor
fuerza entre sus molculas.
Es mayor expansibilidad entre sus molculas.

5. Qu tipo de estructura secundaria favorece la Prolina en las protenas que la

contienen?
La prolina est involucrada en la produccin del colgeno. Est tambin
relacionada con la reparacin y mantenimiento de los msculos y huesos. La
hlice de colgeno es un tipo de estructura secundaria de las protenas que
solamente la presenta el colgeno, que est formado por unas unidades
denominadas tropo colgeno, y son estas las que presentan la hlice colgena.
Una caracterstica de estas estructuras es la composicin en cuanto a
aminocidos, que sigue el mismo patrn Gly-X-Y-Gly-X-Y etc. y es para todas las
cadenas. X e Y son cualquier aminocido, aunque existen preferencias por la
prolina, hidroxiprolina y menos por la lisina 4.

6. Explique

el

fundamento

de

la

tcnica

para

identificar

cistena.

Tcnica de reconocimiento de aminocidos azufrados mediante la reaccin de

acetato de plomo en medio alcalino con los tomos de azufre de cistena para
formar un precipitado de color gris oscuro o negro (Sulfuro de Plomo).

7. Qu es el punto isoelctrico de una protena y que aplicaciones puede tener?

Las molculas complejas, tales como las protenas, se combinan con los iones
hidrgeno y con otros iones presentes en la disolucin, dando lugar a la carga neta
de la molcula. A la concentracin de iones hidrgeno, o al pH, para el cual la
concentracin del ion hbrido de una protena es mxima y el movimiento neto de
las molculas de soluto en un campo elctrico es prcticamente nulo, se le
denomina punto isoelctrico5. Y sirve para determinar la solubilidad de las
protenas y si darn reaccin acido o alcalina.

8. Cul es el valor de pH, que obtuvo para el punto isoelctrico (pI) de la casena al
titular con acido?Y cual con lcali anote el pI de la casena practico y terico
(Investigue).
Al introducir o agregar el HCl a la casena se precipito, logrando un pH de 6, en
momento de la titulacin cambia su pH a 5 con 0.55 ml y cambio nuevamente con
0.65ml y se obtuvo un pH de 3
con el lcali se logro un pH de 6 posiblemente fue por no haber precipitacin en
esta.
El punto isoelctrico (pI) terico de la casena es 4.6. y el punto isoelctrico (pI)
practico de la casena es de 6

Referencias Cuestionario:
[1] Universidad Nacional De La Plata (n.d.). Identificacin de protenas mediante la
reaccin el Biuret. Obtenida el 29 de agosto de 2012, de
http://catedras.quimica.unlp.edu.ar/qo3/Apuntes/Biuret.pdf
[2] Armstrong, F Bioqumica. Editorial Reverte, S.A. Barcelona Espaa. 1982
[3] Prolina. Modificada por ltima vez el 17 ago 2012, de
http://es.wikipedia.org/wiki/Prolina
[4] Hlice de colgeno. Modificada por ltima vez el 11 abril 2012, de
http://es.wikipedia.org/wiki/H%C3%A9lice_de_col%C3%A1geno
[5] Punto isoelctrico. Modificada por ltima vez el 27 junio 2012, de
http://es.wikipedia.org/wiki/Punto_isoel%C3%A9ctrico

Bibliografa

[1] Pacheco Leal D. (2004). Bioqumica Mdica (1era Edicin). Mxico. Editorial
Limusa.
[2] Melo Ruiz V. (2007). Bioqumica de los procesos metablicos (2da Edicin).
Mxico. Editorial Reverte.
[3] W. Pratt C. (2012). Bioqumica (1era Edicin). Mxico. Editorial Manual Moderno.
[4] Horton H. (2007). Principios de Bioqumica (4ta Edicin). Mxico. Editorial
Pearson.