Polígrafo Práticas de Bioquímica - UERGS

Universidade Estadual do Rio Grande do Sul UERGS
Curso de Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia
ROTEIRO DE AULAS PRTICAS DE

BIOQUMICA I
Profa. Dra. Jane Marlei Boeira
NOME:_________________________________________________________
Unidade de Porto Alegre

2015/2
Prticas de Bioqumica
Profa Jane Marlei Boeira
Normas para o trabalho no laboratrio

A palavra LABORATRIO provm da unio de duas palavras latinas: labor =
trabalho + oratorium = lugar de reflexo. Assim, o laboratrio um local de muito
trabalho e muita concentrao. Este ambiente um recinto construdo especialmente para a
execuo de experincias e a maior parte das atividades no dia-a-dia de um bioqumico se
desenvolve no laboratrio, local adequado para o trabalho de identificao, separao e
determinao da quantidade de substncias bem como, da preparao e obteno de novos
produtos. Resultados tais que podem ser utilizados para uma srie de estudos, entre estes,
para a pesquisa do funcionamento de organismos, de doenas e de novos medicamentos,
entre outros.
Ao chegar ao laboratrio lembre-se que este um local de trabalho onde o cuidado

e ateno so requisitos fundamentais para evitar acidentes.
Utilize sempre um guarda-p, de preferncia de algodo (os tecidos sintticos

podem grudar na pele, quando inflamados) e de manga comprida (para uma maior
proteo).
O uso de shorts, bermudas, saias, sandlias ou chinelos no so permitidos durante

as aulas prticas; a pele fica melhor protegida com calas compridas e sapato ou
tnis fechado.
Cabelos compridos devero ser presos, para evitar o risco de se incendiarem quando
prximos de um bico de gs.
Faa apenas as experincias indicadas. Caso tenha interesse em outras experincias,

consulte o seu professor. EXPERINCIAS NO AUTORIZADAS SO
PROIBIDAS.
Use capelas sempre que indicado. Comunique seu professor sobre qualquer
acidente, por menor que seja.
No use a boca para pipetar qualquer solvente ou soluo.
Tenha cuidado com os materiais inflamveis. Qualquer incndio deve ser abafado
imediatamente com uma toalha ou cobertor. Na primeira vez que entrar no
laboratrio procure se familiarizar com a localizao dos extintores de incndio,
toalhas ou cobertores, chuveiros, etc.
Nunca jogue produtos ou solues na pia ou no lixo. Descarte os resduos conforme

os procedimentos indicados pelo professor.
Leia com ateno o rtulo de qualquer frasco antes de us-lo. Leia duas vezes para
ter certeza de que pegou o frasco certo. Anote no Caderno de Laboratrio os dados
constantes nos rtulos dos reagentes.
Nunca use esptulas ou pipetas de um frasco em outro para evitar contaminaes.
Se um cido ou outra soluo em uso for derramado chame imediatamente o

professor.
No toque com os dedos os produtos qumicos nem prove qualquer droga ou

soluo.
No recomendvel tentar sentir o odor de uma substncia.
Deixe qualquer objeto quente esfriar por bastante tempo. Lembre-se que a aparncia
do objeto quente ou frio a mesma.
OBSERVAO IMPORTANTE: AO TRMINO DE SUAS ATIVIDADES LAVE

TODO MATERIAL UTILIZADO COM DETERGENTE E OS ENXGE COM
GUA E, EM SEGUIDA, COM GUA DESTILADA. LIMPE AS BANCADAS
ANTES DE DEIXAR O LABORATRIO.
O LABORATRIO DE BIOQUMICA deve possuir como suporte equipamentos

como espectrofotmetro, banhos-maria, estufa, geladeiras para os kits bioqumicos,
centrfugas, um aparelho medidor de pH (phmetro) e microcentrfuga, bem como materiais
como os kits de reagentes, vidrarias, micropipetas, ponteiras, tubos de ensaio etc.
As aulas so programadas previamente pelo professor e posteriormente executadas em
grupos pequenos de alunos proporcionando um aprendizado efetivo.
Este polgrafo foi preparado pela profa Dra Jane Marlei Boeira, aps pesquisas em vrias referncias.
No entanto, estas aulas podero sofrer alteraes, complementaes ou podem ser substitudas, dependendo
da disponibilidade de reagentes e equipamentos no Laboratrio de Biotecnologia da Uergs, na Unidade de
Novo Hamburgo.
PRTICA 1
REAO DE AMINOCIDOS SULFURADOS
1. OBJETIVOS:
Identificar aminocidos sulfurados, presentes na albumina do ovo, atravs de reao

de precipitao com chumbo.
2. FUNDAMENTAO TERICA:
Os -aminocidos fundamentais utilizados pelas clulas para a biosntese das
protenas apresentam caractersticas estruturais diferentes. Em parte so essas diferenas
que permitem que as protenas desempenhem papis muito variados nos seres vivos. Todos
os -aminocidos fundamentais contm na sua estrutura um grupo funcional amino e um
grupo funcional cido carboxlico ligados a um mesmo tomo de carbono, conhecido por
carbono . Esses grupos funcionais deixam de existir nesta forma quando os aminocidos
so ligados uns aos outros para originarem a molcula de uma protena (ficando apenas um
grupo amino na extremidade inicial da cadeia polipeptdica e um grupo cido carboxlico
na extremidade final). De fato so substitudos pelos grupos peptdicos, que resultam do
estabelecimento das ligaes entre os resduos dos aminocidos, ou seja, entre o que resta
dos aminocidos na estrutura da protena.
AMINOCIDOS SULFURADOS: METIONINA e CISTENA

Voc j usou alguma frmula para queda ou fortalecimento dos cabelos?
Geralmente elas contm os aminocidos metionina e cistena - aminocidos sulfurados, ou
seja, que contm enxofre na cadeia lateral.
Os aminocidos so precursores das protenas. No caso dos cabelos (assim como da

pele e unhas), eles constituem a QUERATINA, uma protena fibrosa que tem a CISTENA
como seu principal aminocido. A queratina representa 90% da constituio dos fios e
responsvel pela sua integridade.
Agresses, como poluio, secador, excesso de qumica, sol e chapinha podem
danificar a queratina do cabelo, fazendo com que o fio perca a sua integridade.
Fica fcil entender tambm por que uma pessoa com dieta muito restritiva comea
logo a ter queda de cabelos, no mesmo? Assim como aquelas que no mantm boa
ingesto de protenas!
Uma curiosidade: as pontes dissulfeto (entre molculas de enxofre) dos aminocidos
sulfurados que fazem com que o cabelo seja mais ou menos ondulado. Rompendo estas
pontes, atravs de diferentes processos, faz-se o alisamento dos fios!
3. MATERIAIS:
Soluo de albumina 10%: preparar uma soluo de clara de ovo a 10% v/v em
soluo salina (NaCl 0,9g/100mL) ou tampo fosfato 10 mmol/L, pH 7,0 (ovo
disponibilizado pelos alunos)
NaOH 2,5 M
Acetato de chumbo II 10%
5 tubos de ensaio
Pipetas graduadas de 1 e 5 mL
4. PROCEDIMENTOS:
a) Colocar em um tubo de ensaio 2 mL de soluo de albumina de ovo, 1 mL de
soluo de hidrxido de sdio 2,5 M e 1 mL de acetato de chumbo II a 10%.
b) Aquecer e observar.
Obs.:esta reao caracteriza-se pela liberao de H 2S de aminocidos e protenas
que
contenham
enxofre
na
sua
molcula.
O
precipitado
de
cor________________________ forma-se atravs da seguinte reao:
Pb+2 + S-2
PbS
5. REFERNCIAS:
NELSON, D. L.; COX, M. M. Princpios de Bioqumica de Lehninger. 5. ed. Porto Alegre:

Artmed, 2011.
BERG, J. M.; TYMOCZKO, J. L.; STRYER, L. Bioqumica. 6. ed. Rio de Janeiro: Guanabara
Koogan, 2008.
Bioqumica: aulas prticas / Departamento de Bioqumica, 6a ed., Curitiba: Ed. da UFPR, 1999.
RELATRIO No 1
PRTICA 1: REAO DE AMINOCIDOS SULFURADOS
NOME:_________________________________________ DATA:_________________
RESPONDA:
1. Qual a cor observada na reao com o acetato de chumbo II em presena da
protena albumina, presente na clara do ovo?
2. Procurar a frmula estrutural dos aminocidos que podero dar os resultados
obtidos na atividade acima.
3. Com base na cadeia lateral destes aminocidos, voc acha que eles so solveis ou
insolveis em gua? Justifique.
4. Analisar a polaridade de outros aminocidos.
5. Como os aminocidos devem unir-se para formar uma protena?
6. Construir modelos de peptdeos contendo aminocidos polares e apolares, indicando
suas possveis interaes.
7. As protenas globulares normalmente so solveis em gua. Voc observou que a
albumina, uma das protenas existentes na clara do ovo, solvel em gua. Que tipo
de aminocidos voc espera que esteja em maior quantidade nesta protena?
PRTICA 2
DETERMINAO DO PONTO ISOELTRICO DA CASENA
1. OBJETIVOS
Reconhecer as protenas como molculas eletricamente carregadas;

Analisar a influncia do pH sobre a distribuio dessas cargas.
Os aminocidos apresentam dois rupos que so passveis de sofrer protonao
(adio de H) e desprotonao (retirada de H). Observe:
A figura demonstra as etapas de ionizao em que podem ser encontrados os

aminocidos:
1. Forma positivamente carregada.
2. Forma eletricamente neutra. Note que existe uma densidade de carga negativa e
uma densidade de carga positiva sobre a molcula, conferindo carga total nula. Essa forma
tambm denominada isoeltrica ou zwitterinica.
3. Forma negativamente carregada.
Essas formas so encontradas em maior ou menor quantidade dependendo do pH em
que a soluo do aminocido se encontra. Isso porque quanto menor o valor de pH, maior a
concentrao de ons H+ em soluo e, conseqentemente, maior a prevalncia da forma
positivamente carregada (1). Em contrapartida, quanto maior o valor de pH, menor a
quantidade de ons H+ em soluo, havendo prevalncia da forma negativamente
carregada(3). A forma eletricamente neutra (2) s poder existir, ento, numa condio de
pH intermediria existncia predominante da forma positiva e negativa do aminocido.
Esses valores de pH podem ser facilmente determinados experimentalmente e tambm
podem ser estendidos s protenas, ou seja: as protenas tambm apresentam uma
distribuio de cargas, que pode ser alterada em funo do pH.
O ponto onde a carga lquida total da molcula de aminocido ou protena nula to
importante, que recebeu uma denominao especial. Assim, o valor de pH onde existe
equivalncia entre as cargas positivas e negativas da molcula denominado PONTO
ISOELTRICO.
Mas por que o ponto isoeltrico to importante??

A solubilidade das protenas, como veremos mais adiante, depende de vrios fatores.
Dentre eles, destaca-se a presena das cargas eltricas ao longo da molcula. A existncia
de uma carga positiva ou negativa determina a interao com o meio aquoso, alm de
estabelecer um estado de repulso entre as prprias molculas de protena, aumentando a
interao com o solvente e, conseqentemente, favorecendo a solubilidade.
Com vimos, no ponto isoeltrico existe um equilbrio entre o nmero de cargas positivas e
negativas, o que gera uma situao em que as foras de repulso entre as molculas de
protena e as foras de interao com o solvente so mnimas. Assim, as protenas vo
formando aglomerados que, cada vez maiores, tendem a precipitar.
importante destacar que essa diminuio de solubilidade varia de protena para protena.
3. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
A parte experimental est dividida em trs momentos, a saber:
3.1. Extrao da casena do leite
3.2. Preparo de uma soluo de casena
3.3. Determinao do ponto isoeltrico da casena
3.1. EXTRAO DA CASENA DO LEITE
3.1.1. Material
a) Reagentes e solues
b) Vidraria e instrumental
- Leite (disponibilizado pelos alunos)

- Soluo de cido actico (CH3COOH) 2M
- Etanol (CH3CH2OH) 95% (v/v)
- ter etlico (CH3CH2OCH3CH2)
- Bquer de 250 mL
- Proveta de 100 mL
- Conta-gotas
- Funil e papel de filtro
3.1.2. Procedimento
1. Aquecer 150 mL de gua destilada a 38oC;
2. Adicionar 50 mL de leite e misturar bem;
3. soluo acima, gotejar a soluo de cido actico, at o aparecimento de um
precipitado abundante (aproximadamente 0,7 mL do cido);
4. Deixar descansando durante, aproximadamente, 20 minutos para sedimentao da
protena;
5. Separar o sobrenadante por decantao;
6. Ao precipitado, adicionar 20 mL de etanol e misturar bem;
7. Filtrar (ou, se possvel, centrifugar) e desprezar o filtrado (s interessa o
precipitado);
8. Adicionar, ao precipitado, 5 mL de ter etlico e misturar;
9. Decantar o sobrenadante e secar o precipitado (casena) em papel de filtro (em
estufa).
3.2. PREPARO DA SOLUO DE CASENA

3.2.1. Material
- Casena obtida na etapa anterior

- Hidrxido de sdio (NaOH) 1M
- cido actico (CH3COOH) 1M
- Proveta de 50 mL
- Bquer de 200 mL
- Bquer de 100 mL
- Papel indicador universal
3.2.2. Procedimento
1. Pesar, aproximadamente, 1g da casena obtida na etapa anterior;
2. Adicionar 50 mL de gua destilada para ressuspender a casena;
3. Adicionar 25 mL da soluo de NaOH e agitar lentamente, para evitar a formao
de espuma, at completa dissoluo da casena;
4. Adicionar 25 mL de cido actico 1M e agitar cuidadosamente;
5. Ajustar o pH para um valor prximo da neutralidade utilizando, para isso, cido ou
base (a soluo ter volume final de 100 mL, preparada por um grupo somente).
3.3. DETERMINAO DO PONTO ISOELTRICO DA CASENA

3.3.1. Material
- Soluo de casena preparada acima

- cido actico 2M
- cido actico 1M
- cido actico 0,1M
- cido actico 0,01M
- Nove tubos de ensaio

- Papel indicador universal
- Pipetas ou conta-gotas
3.3.2. Procedimento
1. Numere nove tubos de ensaio e distribua os reagentes (quantidades em mL)
seguindo as indicaes da tabela abaixo:
SUBSTNCIA
gua destilada
cido actico 0,01M
cido actico 0,1M
cido actico 1M
cido actico 2M
4,0
0,5
-
4,4
0,1
-
4,3
0,2
-
3,7
0,8
-
3,5
1,0
-
2,5
2,0
-
0,5
3,0
-
10
3,9
0,8
3,7
1,0
2. A cada tubo, adicionar 0,5mL da soluo de casena preparada na etapa anterior.

3. Agitar lentamente, sem fazer espuma;
4.
Medir o pH em todos os tubos (papel indicador universal ou phmetro)
5. Preencha a tabela abaixo e discuta os resultados.

RESULTADOS
pH
turbidez
* Sugesto: voc pode adotar a seguinte escala para quanto turbidez:
4. REFERNCIAS:
REMIO, J.O.R.; SIQUEIRA, A.J.S.; AZEVEDO, A.M.P. BIOQUMICA: Guia de Aulas

Prticas. Porto Alegre: EdiPUCRS, 2003.
Artmed, 2011.
Koogan, 2008.
11
RELATRIO No 2
PRTICA 2: DETERMINAO DO PONTO ISOELTRICO DA CASENA
NOME:_________________________________________ DATA:_________________
I.
Resultados:
RESULTADOS
pH
turbidez
II.
Responda:
1. Qual a propriedade da protena que permite identificar seu ponto isoeltrico?

Justifique sua resposta.
2. Explique a turbidez apresentada no tubo identificado como o do ponto isoeltrico?
3. A casena a principal protena do leite, constitudo aproximadamente por 1/3 da
protena total no leite humano. Considerando que o pH deste leite de
aproximadamente 6,6 e com base no experimento, responda:
a. A casena solvel ou est precipitada no leite humano?
b. O que aconteceria se acidificssemos o leite at um valor de pH que
coincida com o PI da casena?
4. Embora fosse proibido e tornasse o leite imprprio para o consumo humano, alguns
produtores inescrupulosos adicionavam soda custica ao leite de vaca para evitar
que ele coalhasse. Esta adio era feita empiricamente, mas voc tem condies
de explicar o fenmeno. Descreva-o.
12
AULA PRTICA 3
IDENTIFICAO DE PROTENAS (REAO DO BIURETO)
1. OBJETIVO:
Caracterizar a presena de protenas em material biolgico atravs da reao do

biureto.
Biureto o nome dado estrutura originada a partir da decomposio da uria, quando
essa submetida a uma temperatura de, aproximadamente, 180oC:
Solues alcalinas que contenham biureto desenvolvem uma colorao violeta, quando
em presena de sulfato de cobre (CuSO4). Esse fenmeno deve-se formao de um
complexo entre o on Cu2+ e os tomos de Nitrognio presentes na molcula do biureto. O
esquema abaixo representa um modelo da formao desse complexo:
Interao biureto / Cu2+
13
Se fizermos uma boa observao, veremos que as ligaes existentes na molcula de

biureto so muito parecidas com as ligaes peptdicas estabelecidas entre os aminocidos
durante a formao de peptdeos e das protenas.
Observe o esquema abaixo, que representa a interao entre as ligaes peptdicas
de uma protena ou peptdeo com ons Cu2+:
Interao ligao peptdica / Cu2+
Assim, a reao de peptdeos e protenas com o sulfato de cobre recebeu o nome

de Teste do Biureto, e utilizada para pesquisa de ligaes peptdicas.
OBS.: quando solues de protenas em meio fortemente alcalino so tratadas com
solues diludas de on cprico h o aparecimento da cor caracterstica (violcea). O
aparecimento da colorao deve-se a formao de um complexo de coordenao on Cu+2
com tomos de nitrognio presentes nos grupos peptdicos.
3. MATERIAL
1. Casena (Sol 10%) (1)
4. frutose ((Sol 10%)
7. clara de ovo (trazer)
10. leite de soja (trazer)
13. NaOH 2,5 M
2. batata (trazer)
5. farinha (trazer)
8. mamo (trazer)
11. leite integral (trazer)
14. Soluo de CuSO4 1%
Obs.: (1) casena preparada na aula prtica anterior.
3. glicose (sol 10%)

6. fgado (trazer: fgado de frango)
9. acar (trazer)
12. maisena (trazer)
60 Tubos de ensaio
15 Pipetas graduadas p/ 1mL
14
4. PROCEDIMENTO
1) Identificar os tubos de ensaio com o nome ou nmero da respectiva amostra a ser
testada.
2) Pipetar 1,0 mL de soluo de casena e colocar num tubo de ensaio.
3) Adicionar 1,0 mL de soluo da NaOH 2,5 M e 1,0 mL de soluo de CuSO 4 1%.
Agitar bem, observar e anotar o resultado na tabela.
4) Utilizando o resultado obtido no item anterior como padro, testar a presena de
protenas nas demais amostras mencionadas na tabela. Observar e anotar os
resultados.
Observao: Para a realizao desta atividade as amostras slidas devem ser dissolvidas
em gua destilada: conforme indicao:
Farinha, maizena e acar: dissolver aproximadamente 1g da amostra em 5 mL de
gua destilada;
As amostras mamo, fgado, batata devem ser maceradas e misturadas a
aproximadamente a 5 mL de gua destilada. Filtrar a mistura com auxlio de um
pedao de gaze.
5. REFERNCIAS:

Artmed, 2011.
Koogan, 2008.
Bioqumica: aulas prticas / Departamento de Bioqumica, 6a ed., Curitiba: Ed. da UFPR, 1999.
15
RELATRIO No 3
AULA PRTICA 3: IDENTIFICAO DE PROTENAS (REAO DO BIURETO)
NOME:______________________________________DATA:___________________
I.
Resultados
MATERIAL BIOLGICO
1. CASENA
2. BATATA
3. GLICOSE
4. FRUTOSE
5. FARINHA
6. FGADO
7. CLARA DE OVO
8. MAMO
9. ACAR
10. LEITE DE SOJA
11. LEITE INTEGRAL
COR APRESENTADA
12. MAIZENA
II.
Responda:
a) Em quais alimentos/tecidos voc comprovou a existncia de protenas? Justifique.

b) Pesquisar o tipo de protena mais abundante em cada amostra testada.
c) Quais os grupos presentes nas protenas (se houver) que so responsveis pela mudana
de cor oservada?
16
PRTICA 4
CARACTERIZAO DE PROTENAS POR MEIO DE REAES DE
COLORAO E PRECIPITAO
1. OBJETIVOS:
Caracterizar a presena de protenas em material biolgico;

Demonstrar as reaes de colorao para protenas;
Verificar experimentalmente a precipitao de protenas com e sem desnaturao;
Relacionar as observaes prticas com a teoria de protenas gerais, estrutura e
isolamento de protenas.
Caracterizao de protenas
A caracterizao de protenas pode ser feita utilizando reaes de colorao ou
precipitao.
Devido presena de diferentes aminocidos e s ligaes peptdicas as protenas
reagem com uma variedade de compostos formando produtos coloridos. Existem reaes de
colorao que so especficas para aminocidos encontrados nas protenas e essas reaes
so importantes tanto na deteco como na dosagem de aminocidos e protenas. Existem
tambm reaes chamadas de gerais, porque iro caracterizar grupamentos comuns a todas
as protenas, como grupos aminos e ligaes peptdicas (reao da ninhidrina e do biureto,
respectivamente).
Os grupos -amino de aminocidos, peptdeos e protenas reagem com a
ninhidrina formando um complexo de cor prpura, quando a soluo aquecida. A
intensidade da cor proporcional concentrao de aminocidos sendo a tcnica utilizada
para a determinao quantitativa dos mesmos. Os iminocidos (prolina e hidroxiprolina)
formam um complexo amarelo.
A reao do biureto devida s ligaes peptdicas dando positiva para peptdeos
com mais de 2 aminocidos e protenas, sendo tambm positiva para substncias que
contm mais de dois grupos amida. Ocorre a formao de um complexo de coordenao
com o cobre de cor prpura.
A solubilidade das protenas muito varivel e depende da distribuio e da
proporo dos grupos polares e apolares na molcula. A protena solvel quando ocorre
interao protena-gua e tende a ser insolvel quando ocorre interao protena-protena.
Qualquer condio que altere essas interaes alterar a solubilidade.
Desnaturao por definio a modificao que ocorre na estrutura nativa de uma
protena, alterando assim sua propriedade. A desnaturao envolve alteraes nas estruturas
quaternria, terciria e secundria das protenas. A estrutura primria mantida.
Existem vrios agentes desnaturantes: calor, cidos, solventes orgnicos, sais de
metais pesados etc.
17
As alteraes que se observam em decorrncia da desnaturao podem ser, entre

outras, a diminuio da solubilidade e/ou a perda da atividade biolgica.
A diminuio da solubilidade pode ser explicada pela exposio de radicais
hidrofbicos e outros que prejudiquem a interao protena-gua e favorecem a interao
protena-protena. A floculao e a coagulao so manifestaes visveis das alteraes
estruturais causadas pelos agentes desnaturantes.
Agentes desnaturantes
Calor: agitao trmica afeta as interaes que estabilizam a estrutura tridimensional
das protenas (pontes de hidrognio, interaes hidrofbicas).
Reagentes para alcalides (cidos): combinam com protenas com carga positiva
formando complexos insolveis. Por exemplo: tricloroacetato de protena.
Sais de metais pesados: combinam-se com protenas com carga negativa, formando
proteinatos insolveis, por exemplo: proteinato de chumbo.
Solventes orgnicos: estes solventes apresentam constante dieltrica inferior gua,
ento a atrao entre cargas opostas alta (precipitao).
As protenas podem ser precipitadas sem sofrer desnaturao por variao do pH e
por alteraes da fora inica do meio e por ao de solventes orgnicos baixa
temperatura.
Ao variar o pH da soluo de protena, os radicais dos aminocidos sofrem
dissociao e no ponto isoeltrico, quando a molcula est totalmente dissociada, a fora de
atrao eletrosttica mxima e a solubilidade decresce.
A capacidade dos sais neutros de influenciar a solubilidade de muitas protenas
uma funo da fora inica. A concentrao reduzida de sal aumenta a solubilidade das
protenas porque diminui a interao protena-protena, fenmeno denominado "salting-in".
Em altas concentraes de sal ocorre a remoo da gua de hidratao, o que leva a
predominncia da interao protina-protena, resultando em precipitao, ou "salting-out".
O "salting-out" um processo muito importante porque diferentes concentraes de sal
podem ser empregadas para separar diferentes protenas.
3.
REATIVOS:
Soluo de protenas a 10% (trazer um ovo para preparar a soluo)
Soluo de ninhidrina 0,1%
Hidrxido de sdio 2,5 mol/L
Soluo de sulfato de cobre 1%
cido tricloroactico (TCA) a 10% v/v
Acetato de chumbo 5% p/v
lcool etlico absoluto
Clara de ovo "in natura" (trazer um ovo)
Cloreto de sdio 1 mol/L
Soluo saturada de sulfato de amnio 76,6g% p/v
4.
18
MATERIAIS:
45 tubos de ensaio
5 bastes de vidro
Banho-Maria
5. PREPARO DOS REATIVOS

Soluo de protenas: preparar uma soluo de clara de ovo a 10% v/v em soluo
salina (NaCl 0,9g/100mL) ou tampo fosfato 10 mmol/L, pH 7,0
Soluo de ninhidrina: pesar 100 mg de ninhidrina e dissolver em 100 mL de tampo
fosfato 0,01 mol/L, pH 7,0. Conservar em frasco escuro e em geladeira.
6. PROCEDIMENTOS
I. Reaes de colorao
a) Reao da Ninhidrina (no temos)
Tubo 1: 2 mL de ninhidrina + 5 gotas de protenas 10%, banho-maria por 5 min, a
100oC. Anotar o resultado.
b) Reao do Biureto
Tubo 2: 1 mL de protena 10% + 5 gotas de NaOH 2,5 mol/L e 3 gotas de sulfato de
cobre 1%
Tubo 3: 1 mL de gua destilada + 5 gotas de NaOH 2,5 mol/L e 3 gotas de sulfato
de cobre 1%
Anotar o resultado.
II. Reaes de precipitao
a) Ao do calor
Tubo 4: 2 mL de protena 10%, aquecer em banho-maria a 100 oC por 3 min. Anotar
o resultado.
b) Reao com reagentes para alcalides
Tubo 5: 1 mL de protena 10% + 1 mL de TCA 10%. Anotar o resultado.
c) Reao com sais de metais pesados
Tubo 6: 1 mL de protena 10% + 1 mL de acetato de chumbo 5%. Anotar o
resultado
d) Reao com solventes orgnicos
Tubo 7: 1 mL de protena 10% + 3 mL de lcool etlico. Anotar o resultado.
19
e) Efeito da adio de sais

Tubo 8: 3 mL de clara pura + gua destilada at a formao de precipitado
esbranquiado. Dissolver com auxlio de um basto, adicionar NaCl 1mol/L gota a
gota at o precipitado redissolver.
Tubo 9: 2 mL da soluo anterior + 4 mL de soluo saturada de sulfato de amnio.
Observar. Adicionar 4 a 6 mL de gua destilada e observar o efeito.
7. Referncias:

Artmed, 2011.
Koogan, 2008.
Bioqumica: aulas prticas / Departamento de Bioqumica, 6a ed., Curitiba: Ed da UFPR, 1999.
20
RELATRIO No 4
AULA-PRTICA 4: CARACTERIZAO DE PROTENAS POR MEIO DE
REAES DE COLORAO E PRECIPITAO
NOME:____________________________________________DATA:_______________
I.
OBJETIVOS:____________________________________________________
________________________________________________________________
___
II.
INTERPRETAO DOS RESULTADOS

REAES
Ninhidrina
1. Reaes
colorao
TUBO
RESULTADO
INTERPRETAO
de
2
Biureto
3
4
5
2. Reaes de precipitao
6
7
8
9
III.
Responder:
1. Em que se fundamenta a reao da ninhidrina e que classes de substncias reagem

positivamente?
21
2. Em que se fundamenta a reao do Biureto e que grupos nas protenas so

responsveis por esta reao?
3. Qual a importncia da reao do Biureto?
4. Qual a importncia das reaes de precipitao de protenas por reagentes dos
alcalides e por sais de metais pesados?
5. Explique os mecanismos que levam uma protena a se dissolver quando h um
pequeno aumento na fora inica da soluo e os mecanismos que levam uma
protena a precipitar quando h um grande aumento na fora inica da soluo.
6. Que mudanas ocorrem com uma protena quando em contato com etanol?
22
AULA PRTICA 5
CARACTERIZAO DOS TRIACILGLICERIS DE LEO VEGETAL
1. OBJETIVOS:
Caracterizar triacilgliceris atravs de hidrlise alcalina (reao de saponificao);
Evidenciar a formao dos produtos de hidrlise (sabes) pelas suas propriedades.
Os lipdios se caracterizam por sua insolublidade em gua e solubilidade em solventes
orgnicos como clorofrmio, ter, benzeno, mistura de Folch (clorofrmio:metanol). A
grande maioria dos lipdios apresenta cidos graxos esterificados em sua estrutura,
abrangendo os acilgliceris ou os glicerdeos, os cerdeos, os fosfolipdeos e os
glicolipdeos. Estes compostos, mediante aquecimento em presena de bases fortes como
NaOH e KOH, produzem sais de sdio ou potssio de cidos graxos ou sabes alcalinos.
Devido a esta propriedade, estes lipdeos so denominados de lipdeos saponificveis j que
podem ser caracterizados pela saponificao.
Exemplo:
H2-C-O-CO(CH2)7-CH=CH(CH2)7-CH3
H-C-O-C0(CH2)7-CH=CH(CH2)7-CH3
H2-C-O-CO(CH2)7-CH=CH(CH2)7-CH3
Trioleil-glicerol (ou triolena)
O
3CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-C
OK
+
3KOH
o
100 C, 30 min
CH2OH
+
CH2OH
CH2OH
Oleato de potssio (sabo)
glicerol
Os sabes so molculas anfipticas, apresentando em sua estrutura uma longa cadeia
hidrocarbonada (cauda apolar) e um grupo carboxilato (cabea polar). Formam solues
coloidais estveis em gua, j que as molculas se associam por interaes hidrofbicas
entre as caudas apolares formando micelas, apresentando grupos carboxilatos carregados
negativamente na superfcie das mesmas. Na superfcie da gua, as molculas de sabo se
orientam em uma camada onde as cabeas polares interagem com a gua e as caudas
apolares permanecem fora do lquido. Esta disposio provoca o abaixamento da tenso
23
superficial da gua. Os cidos graxos dos sabes podem ser precipitados pela adio de
cidos fracos (cido actico).
CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7COO-K+ + CH3COOH
++
Os sabes deOleato
metais de
alcalinos
terrosos
) so
insolveis porque se encontram
potssio
+ (Ca
cido
actico
praticamente no dissociados.
CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7COOH + CH3COOK
CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7COO-K+ cido
+ CaCl3
olico + acetato de potssio
Oleato de potssio + cloreto de clcio
CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7COO
Ca + 2 KCl
CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7COO
Oleato de clcio (insolvel)
Os sabes tambm possuem poder emulsificante visto que quando agitados com leo ou
gordura, em meio aquoso, interagem com os mesmos atravs das caudas apolares
produzindo gotculas carregadas que se mantm em emulso.
3. REATIVOS:
Soluo de potassa alcolica: 1 volume de hidrxido de potssio a 40% e 1 volume
de etanol a 95%
leo vegetal (preparar partir de semente de soja, ver item 5)
cido actico concentrado
Soluo de cloreto de clcio a 10%
Soluo saturada de cloreto de sdio
Acetona
4.
MATERIAIS
25 tubos de ensaio
2 Copos de bquer 100mL
Papel filtro
Banho-maria
Prolas de porcela ou vidro para ebulio
5. PREPARO DOS REATIVOS

1. Obteno de leo vegetal a partir da extrao de lipdios de semente de soja: em um
copo de Becker de 100 mL pesar 10 g de soja moda e seca. Adicionar 25 mL de
acetona e agitar por 5 min. Filtrar atravs de papel filtro para um outro copo de Becker
de peso conhecido e lavar o resduo com 10 mL de acetona por duas vezes. Evaporar o
24
filtrado em banho-maria temperatura de 50oC, com agitao constante at eliminao

total da acetona.
Observar o resduo amarelo e oleoso, pesar o copo de Becker e por diferena de peso
calcular o rendimento da extrao.
6. PROCEDIMENTOS:
I.
Em um tubo de ensaio grande colocar 15 gts de leo vegetal e 5 mL de soluo de

potassa alcolica. Adicionar prolas de porcelana para evitar ebulio tumultuosa.
Aquecer em banho-maria fervente durante 30 min. Nestas condies, o leo
saponificado obtendo-se uma soluo opalescente de sais de potssio de cidos graxos
(sabes) e glicerol.
II.
Repartir a soluo de sabes em quatro tubos de ensaio e realizar os seguintes testes:

a) Tubo 1: Abaixamento da tenso superficial: agitar a soluo de sabes e verificar a
formao de espuma
b) Tubo 2: Precipitao de cidos graxos: ao segundo tubo adicionar gota a gota cido
actico concentrado at notar o aparecimento de um precipitado branco de cidos
graxos, que so insolveis devido ao seu baixo grau de dissociao
c) Tubo 3: Precipitao de sabes de clcio: ao terceiro tubo adicionar cloreto de
clcio a 10% gota a gota at notar o aparecimento de um precipitado de sabes de
clcio
d) Tubo 4: Precipitao por excesso de eletrlitos: ao quarto tubo adicionar igual
volume de soluo saturada de cloreto de sdio. Observar a formao de um
precipitado de sabo por excesso de sais neutros, sendo explicada pelo efeito do on
comum, que reprime a dissociao dos sabes fazendo que as micelas percam a
carga e precipitem.
7. REFERNCIAS:

Artmed, 2011.
Koogan, 2008.
25
RELATRIO No 5
PRTICA 5: CARACTERIZAO DOS TRIACILGLICERIS DE LEO
VEGETAL
NOME:____________________________________DATA:___________________
I.
OBJETIVOS:____________________________________________________
___
_________________________________________________________________________
II.
TUBO
1
2
3
4
III.
INTERPRETAO DOS RESULTADOS

REAO
Abaixamento da tenso
superficial
Precipitao
de
cidos
graxos
Precipitao de sabes de
clcio
Precipitao por excesso de
eletrlitos
RESULTADO
RESPONDA:
1. Escrever a reao de hidrlise alcalina de um triglicerdeo.

2. Por que se utiliza etanol na reao de saponificao?
3. Explicar a ao detergente dos sabes.
4. Explicar a precipitao de sabes por excesso de eletrlitos.
OBSERVAES
26
AULA PRTICA 6
VERIFICAO DA SOLUBILIDADE DO LEO DE SOJA E DO CIDO
ESTERICO EM SOLVENTES ORGNICOS
1. OBJETIVOS:
Verificar a solubilidade dos leos de soja e esterico em solventes orgnicos e
inorgnicos.
Os lipdios (do grego: lipos, gordura) so substncias de origem biolgica, solveis em
solventes orgnicos (ter, clorofrmio, benzeno) e insolveis ou pouco solveis em gua.
Os testes de solubilidade so feitos utilizando-se solventes como a gua destilada, ter
etlico, soluo de hidrxido de sdio, de bicarbonato de sdio, de cido clordrico e cido
sulfrico concentrado, entre outros.
3. MATERIAIS:
cido esterico (procurar na Delaware (fone: 3341-0812), ver tambm no
mercado pblico - ou substituir por leo de coco)
leo de soja (trazer)
HCl 0,1M
NaOH 0,1 M
Etanol 70%
ter etlico
25 tubos de ensaio
Pipetas graduadas de 5 mL
Esptula
4. PROCEDIMENTOS:
a) Numerar cinco tubos de ensaio e adicionar em cada um deles uma ponta de esptula
rasa de cido esterico (estearina).
b) Aps, adicionar em cada tubo 5,0 mL de cada uma das seguintes substncias,
conforme a tabela:
TUBO
1
2
3
4
5
5,0 mL SOLVENTE
gua
Sol de cido clordrico 0,1M
Sol de hidrxido de sdio 0,1 M
Sol de etanol 70%
ter etlico
27
c) Agitar bem cada um dos seguintes solventes e verificar se o cido esterico

solubiliza ou no em cada um dos solventes. Anotar os resultados na tabela de
resultados.
d) Repetir o experimento anterior, utilizando no lugar do cido esterico 3 gotas de
leo de soja. Anotar os resultados na tabela de resultados.
5. REFERNCIAS

Artmed, 2011.
Koogan, 2008.
28
RELATRIO No 6
AULA PRTICA 6: VERIFICAO DA SOLUBILIDADE DO LEO DE SOJA E
DO CIDO ESTERICO EM SOLVENTES ORGNICOS
NOME:____________________________________DATA:______________________
I.
OBJETIVOS:____________________________________________________
________________________________________________________________
___
II.
RESULTADOS:
Solvente
gua
cido clordrico 0,1M
Hidrxido de sdio 0,1M
Etanol 70%
ter etlico
III.
cido esterico
leo de soja
INTERPRETAO:
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
29
AULA PRTICA 7
EXTRAO DE DNA DE Allium cepa PELA PRECIPITAO EM ETANOL
(Extrao de DNA: mtodo de extrao com detergente e precipitao em etanol)
1. OBJETIVOS:
Extrair DNA pelo mtodo de precipitao em etanol
2. FUNDAMENTAO TERICA
A extrao de DNA de clulas eucariontes consta fundamentalmente de trs etapas:
a) Ruptura das clulas para liberao dos ncleos;
b) Desmembramento dos cromossomos em seus componentes bsicos, DNA e protenas;
c) Separao do DNA dos demais componentes celulares.
O bulbo da cebola ser usado por apresentar clulas grandes, que se rompem quando a
clula picada. O detergente desintegra os ncleos e os cromossomos das clulas da
cebola, liberando DNA. Um dos componentes do detergente, o dodecil (ou lauril) sulfato de
sdio, em concentrao salina adequada, desnatura as protenas, separando-as do DNA
cromossmico. O lcool gelado, em ambiente salino faz com que as molculas de DNA se
aglutinem, formando uma massa filamentosa e esbranquiada.
3. MATERIAL
uma cebola grande (+- 200g) (disponibilizado pelos alunos)

faca de cozinha (disponibilizado pelos alunos)
dois copos de Becker
banho-maria (+- 60 C)
gua filtrada
sal de cozinha
detergente (SDS dodocil sulfato de sdio ou SLS lauril sulfato de sdio) (pode
ser detergente comum de lavar a loua)
lcool etlico 95 % gelado a cerca de -10 C
basto fino de vidro
papel filtro
gelo modo
30
soluo salina-citrato pH5,6

4. PROCEDIMENTOS
1. Descascar uma cebola de tamanho mdio e pic-la em pedaos pequenos de

aproximadamente 0,5 cm.
2. Pesar cerca de 50g de cebola picada e adicionar, em um bequer , a mistura de 60 mL de
detergente (SDS ou SLS a 25%) e uma colher de 5 mL de NaCl. Mexer bem at a
dissoluo.
3. Misturar a cebola e a soluo de detergente salino e deixar 15 minutos em banho maria
a 60 C.
4. Retirar e esfriar rapidamente em banho de gelo picado, por 5 minutos.
5. Filtrar em papel filtro e recolher o filtrado em um bequer limpo.
6. Ao filtrado, adicionar deixando escorrer vagarosamente pela borda, 75 mL a 100 mL de
lcool 95 % gelado a -10 C. Formar-se-o 2 fases: a superior , alcolica e a inferior,
aquosa.
7. Introduzir um basto de vidro atravessando a interfase e, em seguida, imprimir-lhe um
movimento circular. Verifica-se que o material filamentoso (filamentos de DNA) vai
aderindo ao mesmo.
8. Retirar o basto e dissolver o filamento a ele aderido em 5 mL da soluo salina-citrato,
previamente pipetados num tubo de ensaio. Guardar a 4 oC, caso queiram guardar o material
para posterior anlise.
Reagentes e suas funes:
- Soluo de Dodecil Sulfato de Sdio a 25% - o detergente lisa os ncleos pela ao sob
os lipdios da membrana nuclear, inibe a ao enzimtica (DNAse) e desnatura protenas
- lcool Etlico 95% - para precipitar o DNA
- Soluo Salina-Citrato Cloreto de sdio 0,025 M e Citrato trissdico a 0,0015 M
pH7,0. Esta soluo contm fora inica adequada para dissolver o DNA.
5. REFERNCIAS

Artmed, 2011.
Koogan, 2008.
31
RELATRIO No 7
Prtica 7: EXTRAO DE DNA DE Allium cepa
NOME:_______________________________________________DATA:__________
1. OBJETIVO:___________________________________________________________
_____________________________________________________________________
2. RESULTADO:
2.1 Descrever o que foi observado ao isolar o DNA da cebola:
_____________________________________________________________________
______________________________________________________________________
_____________________________________________________________________
3. RESPONDA:
3.1. Qual a funo do SDS sobre as clulas?________________________________
_________________________________________________________________________
___________________________________________________________________
3.2 Qual a funo do lcool etlico sobre o DNA?____________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
4. CONCLUSES:______________________________________________________
______________________________________________________________________
5. COMENTRIOS:_____________________________________________________
32
________________________________________________________________________
33
PRTICA 8
EXTRAO DE AMIDO E CARACTERIZAO DE CARBOIDRATOS
Esta prtica ser dividida em duas etapas:
I)
Extrao de amido;
II)
Caracterizao de carboidratos.
I.
EXPERIMENTO 1: EXTRAO DE AMIDO
1. OBJETIVO:
Extrair o amido de batata inglesa.
Polissacardeos so molculas de elevado peso molecular, cuja unidade fundamental
so os monossacardeos, principalmente a glicose. Exemplos de polissacardeos
importantes na natureza, podemos destacar o glicognio, a celulose e o amido.
O amido, polissacardeo de extrema importncia em alimentos, produzido em
grande quantidade nas folhas dos vegetais como forma de armazenamento dos produtos da
fotossntese, e constitudo por dois outros polissacardeos estruturalmente
diferentes: amilose e amilopectina (ver figuras abaixo).
34
3. MATERIAIS:
Providenciados pelos alunos
1 batata mdia e uma faca sem ponta (ou uma batata j descascada e cortada em
cubos) (trazer)
Do laboratrio
Liquidificador
papel de filtro ou gaze
2 bqueres ( 1 e 2 ) de 200 mL
1 basto de vidro
gua fervente e gua fria
pipeta
4. PROCEDIMENTO:
Liquidificar a batata sem casca com 100 mL de gua destilada (temperatura

ambiente) e transferi-la para o bquer 1, sem desprezar o lquido formado;
Filtrar o material do bquer 1 e transferir o filtrado para o bquer 2;

Deixar o bquer 2 em repouso por 10 minutos e verificar o surgimento de um
precipitado branco no fundo do bquer;
Limpar o bquer 1;
Ferver 150 mL de gua destilada no bquer 1;
Separar cuidadosamente o sobrenadante do precipitado do bquer 2;
Ao precipitado adicionar 50 mL da gua fria, agitar e misturar gua do bquer 1
at a formao de uma soluo opalescente. Esta soluo (de amido) ser usada
no experimento seguinte.
II.
1.
EXPERIMENTO 2 - CARACTERIZAO DE CARBOIDRATOS

OBJETIVOS:
Entender o mecanismo de solubilizao do amido;
Caracterizar o amido como um polissacardio;
Caracterizar os monmeros do amido;
35
Entender a interao do amido com o iodo.
Por serem molculas muito ricas em grupamentos hidroxila (-OH), os
monossacardeos podem ser facilmente desidratados por ao de cidos fortes
concentrados, como o cido sulfrico (H2SO4). O cido rompe facilmente as ligaes
glicosdicas presentes em molculas de polissacardeos, quebrando-os e fornecendo seus
monossacardeos. Esses, por sua vez, so desidratados e podemos ter como produto:
o furfural, quando o monossacardeo desidratado for uma pentose, e o
hidroximetilfurfural (HMF), quando for uma hexose. Tanto o furfural quanto o HMF so
substncias incolores, impedindo que a reao seja visualizada. Para resolver esse
problema, adiciona-se um composto fenlico ao meio (alfa-naftol, conhecido como reativo
de Molisch). O fenol reage como os produtos incolores, e provoca o aparecimento de um
anel de colorao lils.
Reao do carboidrato com o Reativo de Molisch
Reao do amido com o iodo:

O amido uma mistura de 10% a 20% de amilose e 80% a 90% de amilopectina.
Como mostrado na figura do experimento 1, a amilose um polmero de cadeia no
ramificada e a amilopectina contm ramificaes.
36
Como podemos observar, a molcula da amilose no apresenta ramificaes e, no

espao, assume conformao helicoidal (forma de hlice). A ligao entre os tomos de
carbono das unidades de glicose so do tipo alfa 1-4.
A amilopectina apresenta estrutura ramificada, sendo que os "ramos" aparecem a

cada 24-30 molculas de glicose. A ligao entre as unidades de glicose tambm do tipo
alfa 14 na
mesma
cadeia.
Porm,
unindo
duas
cadeias
aparecem ligaes do tipo alfa 1-6. Observe a figura abaixo:
37
Molculas de alto peso molecular (como a amilose e a amilopectina) podem sofrer

reaes de complexao, com formao de compostos coloridos. Um exemplo importante
a complexao da amilose e da amilopectina com o iodo, resultando em complexo azul e
vermelho-violceo, respectivamente. A figura abaixo esquematiza a interao do iodo com
a estrutura do amido:
O complexo esquematizado ao
lado apresenta colorao azul intensa,
desenvolvida
pela
ocluso
(aprisionamento) do iodo nas cadeias
lineares da amilose.
Como a amilopectina no
apresenta estrutura helicoidal, devido
presena das ramificaes, a interao
com o iodo ser menor, e a colorao
menos intensa.
O amido est presente nas farinhas de trigo, de milho, na batata, no arroz, e nos
gros em geral. As molculas de amido ficam organizadas em grnulos. A presena dessa
substncia constitui uma reserva de glicose, portanto, energia dos vegetais e pode ser
reconhecida quando o alimento entra em contato com a soluo de tintura de iodo (Lugol).
O amido pode precipitar aps a adio de soluo saturada de Sulfato de Amnio ou
de soluo de lcool etlico (etanol). O sulfato de amnio aumenta a fora inica
desidratando o amido, que precipita. O etanol um solvente orgnico, possui grande
solubilidade na gua, assim, quando adicionado soluo de amido, ele se solubiliza
rompendo as interaes amido-gua, formada por pontes de H, fazendo com que o
amido precipite.
3. MATERIAIS:
38
Filtros de papel
Soluo de amido preparada no experimento 1
4 tubos de ensaio
3 pipetas graduadas
cido sulfrico concentrado (cuidado corrosivo)
Bquer pequeno
Basto de vidro
lcool etlico absoluto
Reativo de Molisch: 5,0g de alfa-naftol em 100 mL de cido actico

(CH3COOH) concentrado (95%); (temos beta-naftol, ok, testar com este)
Soluo de Lugol: 5 g de iodo (I2) + 10 g de iodeto de potssio (KI).

Completar o volume para 100 mL com gua destilada. Diluir 1:10 no
momento da utilizao;
Soluo saturada de Sulfato de Amnio: dissolva 7,7 g de sulfato de amnia

em 10 mL de gua destilada;
3. PROCEDIMENTOS:
3.1. Reao de Molisch (reao geral para carboidratos):
Transferir 2 mL de soluo de amido para o tubo 1 (sem agitar; evitar

transferir o precipitado);
Adicionar 3 gotas do reativo de Molisch e misturar bem;
Adicionar ao tubo 1, 2mL de cido sulfrico concentrado (cuidado ao
adicionar), fazendo-o escorrer pela parede do tubo;
Registrar o ocorrido.
3.2. Reao com o Iodo (reao para identificao de amido)

Transferir 2 mL da soluo de amido para o tubo 2;
Adicionar 5mL de gua destilada;
Adicionar uma gota de lugol;
Aquecer o tubo 2 a 90oc por 5min e observar alteraes;
Deixar o tubo esfriar e observar alteraes;
3.3. Reao de Precipitao (I): precipitao do amido por soluo saturada de
sulfato de amnio
Transferir para o bquer pequeno 5 mL da soluo de amido (sem
agitar);
39
Adicionar 3 mL de soluo de Sulfato de Amnio ao bquer,

agitando;
Deixar o material em repouso por 10 minutos;
Filtrar a soluo deixando o precipitado no bquer;
Adicionar 1 gota de lugol ao filtrado e ao precipitado;
3.4. Reao de precipitao (II): precipitao do amido por lcool etlico

Transferir 1 mL da soluo de amido para o tubo de ensaio 3;
Acrescentar 5 mL de lcool Etlico, agitando;
Deixar o material em repouso por 10 minutos;
Filtrar a soluo deixando o precipitado no bquer;
Adicionar 1 gota de lugol ao filtrado e ao precipitado;
4. REFERNCIAS

Artmed, 2011.
Koogan, 2008.
40
RELATRIO No 8
PRTICA 8 EXTRAO DE AMIDO E CARACTERIZAO DE
CARBOIDRATOS
NOME:____________________________________________DATA:______________
1. OBJETIVOS:_______________________________________________________
___________________________________________________________________
2. RESULTADOS:
2.1.
Reao de Molisch:
2.2.
Reao com o Iodo:
2.3.
Reao de Precipitao (I)
2.4.
Reao de precipitao (II)
3. RESPONDA
a. Explicar os motivos para a precipitao e solubilizao do amido em gua com a
variao da temperatura.
b. Correlacionar tal propriedade com a estrutura da molcula de amido.
c. Explicar por que o amido, apesar de sua polaridade, pode ser de difcil solubilizao
em algumas condies.
d. Explicar a reao de Molisch.
e. Explicar como o amido interage com o iodo (a nvel molecular) e como ocorreram
as mudanas de cor observadas.
f. Por que ocorre a precipitao do amido em presena de soluo saturada de sulfato
de amnio e de etanol?
41
PRTICA 9
TESTE DA ATIVIDADE DE FERMENTAO DO LEVEDO
1. OBJETIVOS:
Comprovar a ocorrncia da fermentao;

Identificar os produtos obtidos aps este processo.
A fermentao alcolica um processo biolgico no qual acares como
a glicose, frutose e sacarose so convertidos em energia celular com produo
de etanol e dixido de carbono como resduos metablicos. Como este processo pode ser
realizado sem a presena de oxignio considerado um processo anaerbico.
Praticamente todos os organismos vivos podem utilizar a glicose para produo
da energia necessria para seus processos metablicos. Neste processo, chamado gliclise,
a glicose e alguns outros acares so transformados em outras substncias, com liberao
de energia.
O que determina quais substncias sero produzidas depende do tipo de microorganismos e o meio onde vivem. As leveduras de cervejaria e padaria e em todos os outros
organismos que promovem a fermentao alcolica, fermentam a glicose em etanol e CO 2,
de forma que, neste processo, toda massa de glicose est contida nos produtos e no
utilizada outra substncia como "matria prima" (como oxignio, nitrato, ons frricos, etc).
O processo de gliclise, comum as fermentaes, produz cido pirvico, que no
meio celular encontra-se ionizado na forma de piruvato e um intermedirio reduzido,
o NADH. Como a quantidade de NADH limitada e ele necessrio na sua forma oxidada
(NAD+) na gliclise e, consequentemente, na continuao do processo de produo de
energia, o NADH tem que ser oxidado. A forma como ele ser oxidado caracteriza o tipo de
fermentao, e quase sempre utiliza o outro subproduto da gliclise: o piruvato ou seus
derivados.
Na fermentao alcolica, o piruvato sofre descarboxilao (perda de um tomo
de carbono, na forma de CO2), pela ao da uma enzima piruvato descarboxilase, enzima
esta que necessita de Mg2+para catalisar, possuindo tambm uma coenzima, a tiamina
pirofosfato (que auxilia na catlise), formando aldedo actico (acetaldedo). Este aldedo
sofre reduo, oxidando o NADH para NAD + e formando o etanol, processo intermediado
pela enzima lcool desidrogenase. Esta enzima est presente em muitos organismos que
42
metabolizam o lcool, incluindo o homem. No fgado humano esta enzima catalisa a

oxidao do etanol, quer ele seja ingerido quer ele seja produzido por microorganismos intestinais, com a concomitante reduo do NAD+ para NADH.
Durante a produo de etanol h liberao de CO2. Essa liberao responsvel
pelo crescimento de massas de bolo e de po que possuem fermento (organismos
fermentadores). A fermentao tambm responsvel pela fabricao de bebidas alcolicas.
3. MATERIAIS:
a) Providenciado pelos alunos:
Fermento biolgico (cubos)

Faca (sem ponta)
Acar comum.
b)
Do laboratrio:
Dois tubos de ensaio;
Dois tubos de Durham;
Soluo de levedo vivo em meio
nutritivo (soluo de acar);
Banho-Maria (aproximadamente
100oC )
Fitas de medio de pH
Dois bqueres
4. PROCEDIMENTO:
1) Diferencie os dois tubos de ensaio escrevendo LV e LM em cada um deles,
significando Levedo Vivo e Levedo Morto, respectivamente;
2) Faa o mesmo com os dois tubos de Durham;
3) Prepare a Soluo 1 de levedo juntando 1 colher de caf de acar a 75 mL de gua
destilada e 1/8 do cubo de levedo;
4) Prepare a soluo 2 de levedo juntando 2 colheres de acar a 25mL de gua
destilada e 1\4 de cubo de levedo (fermento biolgico);
5) Preencha os tubos grandes LM e LV com a soluo 1 de levedo at 3 cm da borda;
6) Preencha os tubos de Durham com a soluo 2 at a borda;
7) Coloque o tubo Durham LM e o tubo de ensaio LM no Banho-Maria por 20
minutos;
8) Findado este tempo pegue os tubos fervidos e, segurando um tubo em cada mo,
jogue o tubo Durham LM, com a boca para baixo, dentro do tubo de ensaio LM;
9) Faa o mesmo com os tubos LV;
43
10) Observe os tubos em intervalos de 10 minutos anotando os resultados em uma

tabela. Devero ser feitas 7 medies, iniciando-se do tempo 0. (caso no note
grandes alteraes, d maiores intervalos, fazendo as 7 medies em cerca de meiahora enquanto realiza as demais atividades).
Obs: A altura do tubo deve ser medida da base do tubo de ensaio at a borda
inferior do tubo de Durham.
11) Insira uma fita de medio de pH em cada tubo aps 50 minutos;
12) Faa um grfico com os resultados obtidos na tabela, indicando duas curvas que
representaro as alturas em LM e LV.
5. Referncias

Artmed, 2011.
Koogan, 2008.
HARVEY. R.A.; FERRIER, D.R. Bioqumica Ilustrada. 5 Ed. Porto Alegre: Artmed, 2012.
44
RELATRIO No 9
PRTICA 9: TESTE DA ATIVIDADE DE FERMENTAO DO LEVEDO
NOME:__________________________________________DATA:________________
1. OBJETIVOS:_______________________________________________________
___________________________________________________________________
2. RESULTADOS:
MEDIES
Tempo
LV
LM
0 min
Medida de pH
(aps 50 min)
LV
LM
45
3. Grfico:
4. RESPONDER:
a) Por que a fermentao um processo anaerbico?
b) Qual a desvantagem da fermentao anaerbica em comparao fermentao
aerbica em termos energticos?
c) Quais as aplicaes da fermentao alcolica para a indstria?
d) Bactrias acticas so utilizadas para a produo de vinagre (cido actico) a partir
do etanol. Pesquise como ocorre este tipo de fermentao e qual a aplicao na
indstria de alimentos.
e) A fermentao ltica pode ocorrer nos msculos de animais superiores e em
microrganismos.
i. Pesquise sobre a fermentao ltica que ocorre pelos lactobacilos,
bactrias presentes no leite e diga quais as suas aplicaes.
ii. Pesquise a importncia da fermentao ltica nos msculos dos
organismos superiores, incluindo o homem.
iii. Quais as conseqncias de uma intensa atividade fsica no homem?
Que substncias so produzidas em quantidade maior, neste caso?

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Curso de Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia

ROTEIRO DE AULAS PRTICAS DE

Profa. Dra. Jane Marlei Boeira

Unidade de Porto Alegre

Profa Jane Marlei Boeira

Normas para o trabalho no laboratrio

Ao chegar ao laboratrio lembre-se que este um local de trabalho onde o cuidado

Utilize sempre um guarda-p, de preferncia de algodo (os tecidos sintticos

O uso de shorts, bermudas, saias, sandlias ou chinelos no so permitidos durante

Faa apenas as experincias indicadas. Caso tenha interesse em outras experincias,

No use a boca para pipetar qualquer solvente ou soluo.

Profa Jane Marlei Boeira

Nunca jogue produtos ou solues na pia ou no lixo. Descarte os resduos conforme

Nunca use esptulas ou pipetas de um frasco em outro para evitar contaminaes.

Se um cido ou outra soluo em uso for derramado chame imediatamente o

No toque com os dedos os produtos qumicos nem prove qualquer droga ou

No recomendvel tentar sentir o odor de uma substncia.

OBSERVAO IMPORTANTE: AO TRMINO DE SUAS ATIVIDADES LAVE

O LABORATRIO DE BIOQUMICA deve possuir como suporte equipamentos

Profa Jane Marlei Boeira

Identificar aminocidos sulfurados, presentes na albumina do ovo, atravs de reao

AMINOCIDOS SULFURADOS: METIONINA e CISTENA

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Os aminocidos so precursores das protenas. No caso dos cabelos (assim como da

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Reconhecer as protenas como molculas eletricamente carregadas;

A figura demonstra as etapas de ionizao em que podem ser encontrados os

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Mas por que o ponto isoeltrico to importante??

- Leite (disponibilizado pelos alunos)

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3.2. PREPARO DA SOLUO DE CASENA

- Casena obtida na etapa anterior

3.3. DETERMINAO DO PONTO ISOELTRICO DA CASENA

- Soluo de casena preparada acima

- Nove tubos de ensaio

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2. A cada tubo, adicionar 0,5mL da soluo de casena preparada na etapa anterior.

Medir o pH em todos os tubos (papel indicador universal ou phmetro)

5. Preencha a tabela abaixo e discuta os resultados.

* Sugesto: voc pode adotar a seguinte escala para quanto turbidez:

REMIO, J.O.R.; SIQUEIRA, A.J.S.; AZEVEDO, A.M.P. BIOQUMICA: Guia de Aulas

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1. Qual a propriedade da protena que permite identificar seu ponto isoeltrico?

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Caracterizar a presena de protenas em material biolgico atravs da reao do

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Se fizermos uma boa observao, veremos que as ligaes existentes na molcula de

Interao ligao peptdica / Cu2+

Assim, a reao de peptdeos e protenas com o sulfato de cobre recebeu o nome

Obs.: (1) casena preparada na aula prtica anterior.

3. glicose (sol 10%)

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a) Em quais alimentos/tecidos voc comprovou a existncia de protenas? Justifique.

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Caracterizar a presena de protenas em material biolgico;

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As alteraes que se observam em decorrncia da desnaturao podem ser, entre

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