Documenti di Didattica
Documenti di Professioni
Documenti di Cultura
Sumrio
Esquema Reaccional
Equaes Gerais e Solues Gerais
Estado Estacionrio e Pr Estado Estacionrio
Determinao de Velocidades Iniciais em condies ptimas
Construo de Curvas experimentais de vo em funo de [S]o
Cintica Enzimtica
Estuda a velocidade das reaces catalisadas por enzimas e a forma
como esta varia com a concentrao do substrato, condies do meio
(T, pH) e na presena de inibidores ou activadores.
Aspecto prtico:
No laboratrio vamos medir velocidades da reaco em diferentes condies.
Aspecto terico:
Vamos construir modelos matemticos que se ajustam aos resultados
experimentais. Estes modelos caracterizam-se por depender de parmetros que
tm um significado fsico definido.
d [ P]
v=
dt
d[S ]
v=
dt
velocidade
instantnea:
d [P ]
v=
dt
[P]
tempo
i)
ii)
iii)
iv)
velocidades iniciais, v0
vo em funo de [substrato]
(Hiprbole)
equilbrio
[P]
v4
v4
v3
v3
v2
v1
tempo
Determinao experimental da
velocidade inicial: v0 = (d[P]/dt)0
Determinam-se as tangentes na origem
das curvas [P] vs tempo, para diferentes
valores de concentrao de substrato.
A concentrao total de enzima (ET) tem
que ser constante.
v2
v1
[s1] [s2]
[s3]
[S4]
Velocidade da reaco
Velocidade da reaco
Concentrao de substrato
Concentrao de substrato
Enzima Michaeliana
Enzima Alostrica
Modelo Michaelis-Menten
k1
k-1
ES
k2
k-2
E + P
1. Identificar Variveis
2. Identificar Parmetros
3. Definir Sistema de Equaes
4. Definir as Condies Iniciais
5. Comparar as constantes de velocidade
7
E + S
k1
k-1
k2
ES
E + P
k-2
1.
2.
3.
4.
5.
6.
k1 [S]
k-1
ES
k2
k- 2 [P]
k1
k-1
ES
k2
k-2
E + P
[S]=[S]o , [E ]=[ET]
d [S]
= k 1 [E] [S] + k 1 [ES]
dt
[ES]=[ P]=0
d [P]
= k 2 [P] [E] + k 2 [ES]
dt
d [E]
= k 1 [S] + k 2 [P] [E] +
dt
d [ES]
=
dt
Equaes de Conservao
k 1 + k 2 [ES]
k 1 + k 2 [ES]
[S]o = [S]+[ES]+[P]
[ET] =[E]+[ES]
Equaes Gerais
E + S
k1
k-1
ES
Sistema de 4 Equaes
k2
k-2
E + P
Condies Iniciais:
[ES]=[ P]=0
d[S]
[S]
[S]+[ES]+[P]
o ==
k 1 [E] [S] + k 1 [ES]
dt
d[P]
[S]
d[E
T] =[E]+[ES]
= k k2 1[P]
[E][E]
[S]+ k+ 2k[ES]
=
1 [ES]
dt
dt
d [P]
= k 2 [P] [E] + k 2 [ES]
d [E]
dt = k [S]
+ k 2 [P] [E] + k 1 + k 2 [ES]
1
dt
[E]
dd[ES]
== k 1 [S] ++kk22[P]
[P] [E]
[E] + kk1
[ES]
1 ++ kk22 [ES]
dt
d [ES]
= k 1 [S] + k 2 [P] [E] k 1 + k 2 [ES]
dt
10
E+P
concentrao
E + S
d[ES]/dt0
d[E]/dt0
tempo
11
concentrao
d[ES]/dt0
d[E]/dt0
Pr
estado
estacionrio
tempo
d[ES]/dt 0
d[E]/dt 0
12
concentrao
velocidade instantnea
Pr estado
estacionrio
equilbrio
tempo
Pr estado estacionrio
A Variao de [P] - [S]o=10, 7.5, 5, 2.5, 0.1 B Periodo de validade - velocidade inicial
5
[P]
[P]
2.5
0.5
0
0
50
100
0.1
vo
vo
VM
0.5
2.5
7.5 sec 10 0
10
20
[S] mM
14
Modelo geral
k1
E + S
Hipteses restritivas:
k-1
ES
k2
k-2
E + P
E + S
k1
k-1
Equaes simplificadas:
Equaes diferenciais:
Balano de massas:
ES
kcat
d[P]
= kcat [ES]
dt
E + P
velocidade inicial
d[ES]
= k1 [E] [S] (k-1 [ES] + kcat [ES]) = 0
dt
[S]o = [S]
ET = [E]+[ES]
k1
k-1
ES
kcat
E + P
Objectivo:
Expressar vo em funo dos parmetros do modelo (k1,k-1,kcat)
e de quantidades conhecidas ([So] e ET).
d [P]
v0 =
= kcat [ES ]
dt
0
d [ ES ]
= k1[ E ][S ] (k1 + kcat )[ES ] = 0
dt
ET = [ E ] + [ ES ]
[S0 ] = [S ]
d [P]
v0 =
= kcat [ES ]
dt 0
k1 [E ][S ] = (k1 + kcat )[ES ]
[S ] = [S ]0
ET = [E]+ [ES ]
definindo
k1
k-1
kcat
ES E + P
KM
[E ] = [ES ] k1 + kcat
k1
ET = [ES ]
KM
+ [ES ]
[S ]0
k +k
K M = 1 cat
k1
1
[S ]0
[ES ] =
ET
K
1+ M
[S ]0
VM
kcat ET [S ]0
v0 =
K M + [S ]0
VM = kcat ET
Equao de Michaelis-Menten
KM constante de Michaelis-Menten
VM velocidade mxima
VM [S ]0
v0 =
K M + [S ]0
[ES ] =
ET [S ]0
K M + [S ]0
Substituindo na
expresso de vo
k-1
k cat
ES
E +P
[S]
KS
E
V
[S
]
M
o
vo =
KM + [So]
kcat
ES
E +P
Estacionrio
Rpido
Equilbrio
VM = k cat [ET]
k +k
KM = 1 cat
k1
KM =
k1
= KS
k1
19
E+S
k1
k-1
ES
kcat
E+P
Rpido equilbrio
KS =
[E ][S ] = k1
[ES ] k1
E+S
KkS1
k-1
kcat
E+P
Estado estacionrio
k 1 + k cat
KM =
k1
ES
Rpido equilbrio
k-1 >>> kcat
KM =
k 1
= KS
k1
TPC
Deduzir a equao de Michaelis-Menten utilizando a hiptese restritiva de rpido
equilbrio. Chegar s expresses de VM e KM para o modelo:
E+S
KkS1
k-1
ES
kcat
E+P
v0
VM [S] o
=
KM + [S]o
KM unidades de concentrao
VM unidades de velocidade
Reaco de 1 ordem
[So]<<KM vo=(VM/KM) [So]
Reaco de ordem zero
[So]>>KM vo=VM
assmptota
VM = kcat ET
Variao de VM
Variao de KM
VM
VM
vo
vo
0.5VM
0.2 VM
0.1 VM
KM
[So]
VM depende da concentrao
da enzima. Corresponde a vo
quando toda a enzima est
saturada com substrato, i.e.
quando [S]>>>KM.
KM 2KM 5KM
10KM
[So]
Determinao experimental de VM e KM
[S] (M)
v0
Linearizaes
VM [S] o
=
KM + [S]o
1 = KM 1 + 1
v0
VM S o
VM
vo = K M
vo
+ VM
So
So
K
= M + 1 S
vo
VM
VM
Lineweaver Burk
Eadie Hofstee
Hanes Woolf
26
Determinao experimental de VM e KM
Linearizaes da equao de Michaelis-Menten
A - Lineweaver Burk
B - Eadie Hofstee
1
vo
V
M
declive =
slope
VM
declive = -K M
slope
VM
1
[S]
-1
KM
1
v0
KM
VM
1 + 1
S o
VM
VM
KM
vo =
KM
vo
S
+ VM
o
vo
[S]
Mtodo directo
Linearizao de
C - Hanes Woolf
D - Cornish Bowden
V
M
[S]
vo
declive =
VM
vo
V*M
VM
[S]
-K M
[S]3
[S]2
v3
v2
v1
[S]1
KM
K *M
KM
VM
1
+
VM
VM
= vo +
vo
S
KM
o
v0
VM [S] o
=
KM + [S]o
Mtodo Estatstico
Clculo do parmetro VM
Clculo do parmetro KM
v0
v0
2
[S ] 2 v0 [S ]
0
0
VM =
v0 2
v0 2
v0
[S ] 2 0 [S ] [S ]
0
0
0
2
v0
v0 2
2
[S ] v0 [S ] v0
0
0
K M =
2
2
v0
v0
v0
[S ] 2 v0 [S ] [S ]
0
0
0
29
v0
Erro do parmetro VM
VM [S] o
=
KM + [S]o
( )
VM =
2
v
2
VM4 exp
0 2
[ S ]0
v0
v0
2
[S ] 2 0 [S ]
0
0
Erro do parmetro KM
2
2
v
v
2
VM2 exp
v0 2 + 2 K M 0 + K M2 0 2
[ S ]0
[ S ]0
=
2
2
2
v0
v0
2
[S ] 2 0 [S ]
0
0
( )
K M
30
substrato
k1
k-1
ES
kcat
E+P
KM M
kcat
Enzima
kcat
kcat
kcat
=
=
k1 < k1
K M k 1 + kcat k 1 + kcat
k1
<1