Universidade Federal do Triangulo Mineiro

Ps Graduao em Patologia Humana

Ariana de Melo Borges

Papel do polimorfismo de genes envolvidos no controle da

resposta imune na susceptibilidade Doena de Chagas.

Orientador: Prof. Dr. Virmondes Rodrigues Jnior

Co-Orientadora: Profa. Dra. Cristina Wide Pissetti

Uberaba
Outubro 2013

Ariana de Melo Borges

Papel do polimorfismo de genes envolvidos no controle da

resposta imune na susceptibilidade Doena de Chagas.

Tese apresentada ao Programa de PsGraduao em Cincias da Sade, da

Universidade Federal do Tringulo Mineiro, como
requisito parcial para obteno do ttulo de
Doutora em Patologia Humana.

Orientador: Prof. Dr. Virmondes Rodrigues Jnior

Co-Orientadora: Profa. Dra. Cristina Wide Pissetti

Uberaba
Outubro 2013

Dedico este trabalho aos meus pais,

que com muito amor, confiana e
sabedoria de vida me conduziram
at aqui.

AGRADECIMENTOS

A realizao deste trabalho foi possvel graas ao empenho de muitas pessoas, mas, antes
de agradec-las, agradeo a Deus por me permitir chegar at aqui.
Ao meu orientador Prof. Dr. Virmondes Rodrigues Jnior, pelo voto de confiana, em ter
estendido a mo no momento em que mais precisei. Agradeo por ser o grande responsvel por este
trabalho, por todo o apoio e, acima de tudo, pela confiana. Obrigada pelo exemplo de
profissionalismo.
A minha co-orientada Cristina Wide Pissetti, agradeo pela disponibilidade em ajudar e pelas
valiosas idias que contriburam para a boa conduo deste trabalho.
Ao Rafael Faria de Oliveira, agradeo por toda ajuda, muitas vezes de longe, a cada e-mail
respondido e por toda ateno que teve desde o incio do meu trabalho.
As amigas Betnea Maria Ribeiro e Mnica Miguel Sawan Mendona pela amizade e pelo
apoio.
Ao colega Maurcio Llaguno pela horas de pacincia revisando os pronturios e ajudando a
classificar os pacientes em relao a forma clinica.
Aos amigos do laboratrio de Imunologia, Parasitologia e Biologia Molecular que sempre
tinham uma palavra amiga e motivadora: Paula Degani, Marcus Vincius, Beatriz, Patricia Lins, Ana
Claudia Correa, Luciano, Keila Adriana, Lucilia agradeo pela boa convivncia e pelos laos de
amizade construdos.
Aos amigos, agradeo pelos momentos de descontrao e pelo incentivo que sempre me
ajudou a crescer:
minha famlia, agradeo por estar sempre ao meu lado vibrando a cada vitria! E dando
colo e apoio nos momentos que cheguei a achar que no conseguiria.
Aos meus pais dedico esta conquista que foi possvel graas ao amor, coragem, dedicao, zelo e
orao de vocs!
Aos amigos do Laboratrio de Patologia Clinica, pelo apoio e torcida e para os simplesmente
colegas obrigada pelos obstculos pois me tornei mais forte e mais merecedora.
Aos professores que tive em toda minha vida acadmica, todos de alguma forma contriburam
com a profissional que sou
A Ana Carla, Valria.
A todos que direta ou indiratamente contriburam para a realizao deste trabalho, meu
sincero agradecimento.
Aos pacientes,
Muito obrigada!

Resumo
A doena de Chagas causada por um protozorio flagelado, o Trypanosoma cruzi, e foi
descrita por Carlos Chagas em 1909, sendo uma importante doena parasitria crnica. Estima-se
que 7 a 8 milhes de pessoas no mundo, principalmente na Amrica Latina, estejam infectadas por T.
cruzi. Manifesta-se influenciada por muitos fatores ainda no totalmente esclarecidos, e geralmente
acompanhada de uma fase aguda assintomtica ou sintomtica que evolui para a fase crnica. Vrias
citocinas so detectadas em pacientes chagsicos nas diversas formas da doena. Algumas tm
efeito protetor e outras esto relacionadas com gravidade da leso. O objetivo deste trabalho foi
investigar a importncia de polimorfismos genticos (SNP) nos genes da IL- 4, IL-10, IL-12, TNF-,
FcRIIa e iNOS no desenvolvimento das formas clnicas da Doena de Chagas. Dessa forma,
avaliamos a presena de polimorfismos genticos SNP para IL-4 (33 C/T); IL-10 (-819 C/T e -1082
A/G); IL-12B (1188 C/A), FcIIa (A/G), iNOS (-1173 C/T) e do TNF- (-308 A/G) por PCR em tempo
Real e associamos o gentipo do polimorfismo com a infeco por T. cruzi. O estudo foi realizado em
656 indivduos atendidos no ambulatrio Maria da Glria (HC/UFTM), sendo 243 (37%) com sorologia
negativa (grupo controle) e 413 (63%) com sorologia positiva, classificados de acordo com a forma
clnica: indeterminada (n= 130), cardaca (n = 238) e mista (45). Avaliando o polimorfismo das
citocinas IL-4, IL-12B, FcIIa no houve diferena significativa ao compararmos a frequncia dos
gentipos e dos alelos em relao a sorologia e com as formas clnicas. Para IL-10 (-1082 A/G)
houve uma associao significativa entre o gentipo AG e a soropositividade ao T. cruzi (p< 0,05 e
OR= 1,642). Da mesma forma para o TNF- (-308 A/G) observou-se significante associao entre a
frequncia do alelo A e dos gentipos AA+AG com a soropositividade. J o polimorfismo do gene da
iNOS mostrou importncia quanto a forma clnica, sugerindo que a maior frequncia do alelo C est
associado forma cardaca. Este estudo colocou em evidncia que o polimorfismos dos genes da IL10, TNF- e iNOS podem influenciar na suscetibilidade Doena de Chagas.

Palavras-chaves: Doena de Chagas, suscetibilidade gentica, polimorfismos, T. cruzi

Abstract

Chagas disease is an important chronic parasitic disease caused by a flagellated protozoan,

Trypanosoma cruzi, and described by Carlos Chagas in 1909. It is estimated that 7 to 8 million people
worldwide, mostly in Latin America, are infected by T. cruzi. Its manifestations are influenced by many
factors not fully understood yet that develop a variety of clinical conditions, presenting generally an
asymptomatic or symptomatic-acute phase that progresses to the chronic phase. On chagasic
patients, several cytokines are detected in the various forms of the disease. Many of these have a
protective effect and others are related to injury severity. Thus, the objective of this work was evaluate
the presence of IL-10 (Interleukin-10), IL-4 (Interleukin-4), IL-12 (Interleukin-12), TNF-, FcRIIa and
iNOS genetic polymorphisms (SNPs), and associate the polymorphic genotype with T. cruzi infection
as well. The study consisted of 656 patients seen at the outpatient clinic Maria da Glria (HC/UFTM),
243 seronegative (control group) and 413 seropositive, classified according to the clinical form:
indeterminate (n = 130), cardiac (n = 238) and mixed (45). By assessing IL-4, IL-12B and FcIIa
polymorphisms, we havent found statistic difference when comparing genotype and allelic frequency
according to serology and clinical forms. IL-10 (-1082 A/G) polymorphism showed a significative
association among patients with AG genotype and positivity for T. cruzi (p<0,05 and OR= 1,642). For
TNF- (-308 A/G) we found significative association among soropositivity, allelic A frequency and
AA+AG genotypes. iNOS gene polimorphism is important for clinical forms, suggesting that presence
of C is associated with cardiac form. Thus, we conclude that IL-10, TNF- and iNOS polimorphisms
can influence at Chagas disease pathogenesis.

Keywords: Chagas disease, Trypanosoma cruzi, polimorphism, genetic susceptibility.

Introduo
1.1 Doena de Chagas

A Doena de Chagas (tripanossomase americana) uma infeco causada pelo protozorio

flagelado Trypanosoma cruzi, descoberta e descrita por Carlos Chagas em 1909 (CHAGAS, 1909).
um dos mais importantes problemas de sade pblica em vrios pases Latino-Americanos. Tem
carter endmico, acometendo largas extenses territoriais do continente (ABEL et al., 2001).
Acredita-se que a doena de Chagas tenha surgido h milhes de anos entre os animais
selvagens (doena enzotica). O homem ao iniciar uma ao predatria, devastando matas e
florestas, com o intuito de ocupar o espao fsico para criar gados e desenvolver a agricultura,
acentuou-se o desmatamento nos ltimos dois a trs sculos e os triatomneos tiveram que se
adaptar, passando a alimentar-se de sangue de humanos e animais domsticos. (ARAGO, 1983). A
adaptao de triatomneos para habitaes humanas e a circulao de T. cruzi entre os homens, os
animais selvagens e domsticos foram determinantes para o estabelecimento da infeco humana
(FORATTINI, 1980).
No sculo XX estimava-se que em uma populao de cerca de 360 milhes de habitantes de
pases endmicos pelo menos 90 milhes de pessoas (25%) estavam sob risco de infeco e cerca de
16 a 18 milhes estariam infectados (WHO, 1991; ABEL et al., 2001). No territrio brasileiro haviam

cerca de 5 milhes de infectados, cuja metade seriam apenas portadores, sem manifestao clnica e
a outra metade chegaria bito por consequncia direta ou indireta da infeco (SOUZA, 2000;
MANOEL-CAETANO; SILVA, 2007).
Aps o incio dos programas de controle vetorial em vrios pases endmicos, houve reduo
na transmisso, o que proporcionou decrscimo substancial na incidncia da doena (MONCAYO,
2003; WHO, 2002). Em junho de 2006, o Brasil recebeu da Organizao Mundial de Sade (OMS) uma
certificao relativa eliminao da transmisso da doena de Chagas pelo principal vetor (Triatoma
infestans) e pela via transfusional (DIAS, 2006).
Segundo dados da Organizao Mundial de Sade (WHO, 2013), o Trypanosoma cruzi infecta
hoje em torno de 7 milhes de pessoas na Amrica Latina, sendo responsvel pela alta prevalncia,
morbidade e letalidade. No Brasil, esta parasitose constitui um dos mais graves problemas de sade
pblica devido a sua alta prevalncia e expressiva morbidade.
A transmisso ocorre quando o T. cruzi atinge a circulao sangunea do indivduo. De acordo
com a sua forma de transmisso a Doena de Chagas pode ser adquirida ou congnita sendo a
primeira a mais frequente. Dentre os principais mecanismos de transmisso esto: a transmisso
vetorial por triatomneo (transmisso natural), oral, transfusional, congnita, acidental e por
transplante de rgo (SILVEIRA; VINHARES, 1998).
A transmisso da doena de Chagas por vetores realizada por um hematfago, um
Hemiptera, da famlia Reduvidae, subfamlia Triatominae. So conhecidas mais de 130 espcies de
triatomneos potenciais vetores do T. cruzi, a grande maioria vivendo em associao com aves e
mamferos silvestres, utilizados como fonte alimentar, e no caso dos mamferos, tambm para
manuteno do ciclo do parasito na natureza. Destacam-se como de importncia em sade pblica
pela sua capacidade de domiciliao e antropoflia as seguintes espcies: T. infestans, R. prolixus, T.
dimidiata, P. megistus, T. brasiliensis, T. pseudomaculata, T. srdida, T. maculata, T. phylosoma e R.
Palescens. (LENT, 1979). Sendo os de maior destaque o Triatoma infestans e Rhodnius prolixus
(KOLLIEN; SCHAUB, 2000).
A infectividade natural do vetor varivel, dependendo de alguns fatores como
susceptibilidade do triatomneo de se infectar a partir de um hospedeiro infectado no momento do
repasto sanguneo e a capacidade da cepa de se desenvolver no vetor. (GARCIA; DVORAK, 1982;
PERLOWAGORA-SZUMLEWICZ; MOREIRA, 1994).
O ciclo de vida do T. cruzi complexo e inclui duas formas extracelulares e intracelulares nos
hospedeiros vertebrados. A forma extracelular tripomastigota, que no se divide, est presente na
corrente sangunea. Essas formas so ingeridas pelo inseto vetor aps o repasto sangneo. No
intestino mdio do inseto, tripomastigotas se diferenciam em epimastigotas que se multiplicam e
migram para o intestino posterior, onde se diferenciam em tripomastigotas metacclicos. Esta a

forma infectante que excretada com as fezes e infecta hospedeiros vertebrados, passando atravs
de mucosas ou leses na pele. Eles, ento, invadem clulas vizinhas, diferenciando-se em
amastigotas. Multiplicam-se no citoplasma celular, amastigotas transformam-se em tripomastigotas.
Aps a ruptura das clulas as formas tripomastigota ganham a corrente circulatria e tecidos
adjacentes. Assim, formas tripomastigotas se espalham e podem invadir diferentes tipos celulares,
formando ninhos de amastigotas, incluindo clulas musculares cardacas e esquelticas, onde fazem
novos ciclos intracelulares, neles podendo causar leses de intensidade varivel (DaROCHA et al.,
2002).
Depois de adquirida, a doena de Chagas pode se dividir em duas fases: a aguda e a crnica,
com ou sem sintomatologia. (DIAS; COURA, 1997). A fase aguda caracteriza-se por alta parasitemia,
intensidade do processo inflamatrio, podendo ser assintomtica (mais comum) ou sintomtica.
Quando apresenta sintomas so: febre, mal estar, edemas, hepatoesplenomegalia, conjuntivite
unilateral (sinal de Romaa), miocardite, infartamento ganglionar generalizado, taquicardia,
elementos diretamente relacionados com a defesa celular e meningoencefalite. (TORRES, 1917;
ANDRADE, 1958). Ocorre aumento da parasitemia devido multiplicao exponencial do parasita.
A fase aguda dura entre 10 a 60 dias, aps esse perodo h diminuio dos parasitas na
circulao, sendo pouco encontrado normalmente na fase crnica. O incio da infeco pode ser
acompanhado de sintomas e sinais locais, decorrentes da penetrao do parasita e representado
pelo sinal de Romaa ou pelo chagoma de inoculao, com formao de uma leso exsudativa
proliferativa, acompanhada de reao ganglionar satlite (DIAS et al., 1956; ANDRADE, 1958). Essa
fase apresenta um curso clnico curto e reaes inflamatrias nos tecidos parasitados (DIAS, 1984). O
principal tecido acometido o cardaco, cuja manifestao a miocardite grave, relacionada com a
presena de parasitas intracelulares (ANDRADE, 1982; PRATA; MACDO, 1984; PRATA, 2001). Os
sintomas e sinais da infeco inicial so, em regra, transitrios, regredindo parcial ou totalmente
aps os primeiros meses de doena (geralmente, aps dois a quatro meses). Alguns doentes morrem
durante essa fase, com manifestaes de meningo-encefalite ou de insuficincia cardaca ou, de
ambas. Sem tratamento, a mortalidade decorrente dessas causas de cerca de 5 a 10% (PRATA,
2001). Na maioria, porm, a doena se desenvolve de maneira favorvel, passando a uma fase de
cronicidade assintomtica ou com sintomas de varivel intensidade (DIAS et al., 1956).
Na doena humana, durante a primeira semana, formas de tripomastigotas podem ser
detectadas por exame microscpico em sangue fresco. No final de dois meses de infeco,
tripomastigotas diminuem na circulao controlada pela resposta imune adaptativa, podendo apenas
ser detectados por meio de mtodos parasitolgicos de xenodiagnstico e hemocultura (BRENER,
1987). Baixos nveis de parasitismos intracelulares teciduais persistem durante a vida do hospedeiro,
que podem ser observados atravs de tcnicas como imunohistoqumica, Reao em Cadeia da

Polimerase (PCR) in situ ou PCR convencional (TARLETON; ZHANG, 1999). Pode-se detectar presena
de anticorpos sricos da classe IgG, sendo importantes para o diagnstico sorolgico (HOFT et al,
2000). Depois de dois a quatro meses, as manifestaes clnicas agudas desaparecem e os parasitas
so raramente detectados no sangue perifrico. O parasitismo tissular escasso.
A doena entra na fase crnica, geralmente comeando com um longo perodo
assintomtico, chamado de forma indeterminada, que acomete a maioria dos doentes (50 a 60%)
podendo persistir de dez a trinta anos ou por toda a vida. Cerca de 20 a 30% desenvolvem, aps 10 a
20 anos de infeco, miocardiopatia de gravidade varivel; 8 a 10% apresentam a forma digestiva,
caracterizada por dilataes do esfago e/ou clon (megaesfago e megaclon). Os demais
pacientes apresentam associao das manifestaes cardaca e digestiva, conhecida como forma
mista (BRENER, 1987; DIAS, 1989).
A fase crnica caracterizada pela baixa parasitemia e

elevado nmero de anticorpos

circulantes. Esse comprometimento do sistema imune pode atingir os gnglios e causar uma
miocardite focal discreta, progressiva e fibrosante com exsudao de clulas mononucleadas, ou
formando ndulos que se assemelham a granulomas. No h fibrose, mas visualizam-se focos de
cicatrizao (LOPES et al., 1981), podendo ou no haver hipertrofia do corao (FERRAZ et al, 2007).
A maioria dos casos agudos no tratados evolui para a forma crnica indeterminada.
Caracterizada por positividade de exames sorolgicos e/ou parasitolgicos, ausncia de sintomas
e/ou sinais da doena, eletrocardiograma convencional normal e corao, esfago e clons
radiologicamente normais. Esses critrios esto de acordo com a Validade do Conceito de Forma
Indeterminada da Doena de Chagas, apresentado em 1985. (MACEDO, 1997)
A evoluo clnica de pacientes com a forma indeterminada geralmente lenta e benigna.
Em longo prazo, a evoluo desses pacientes favorvel, e eles, geralmente, morrem de outras
causas (DIAS, 1989).
A forma digestiva pode acometer o esfago, que na fase precoce caracterizada pela
incoordenao dos movimentos peristlticos do esfago e coln devido a destruio dos plexos
mesentricos e mais tarde so seguidos por dilatao, disfagia e sintomas relacionados. Constipao
prolongada o principal sintoma do megaclon, que apresenta diferentes graus de dilatao
(BRENER, 1987).
No megaesfago e megaclon h sempre algum grau de destruio do sistema nervoso
autnomo, que precede as alteraes de motilidade. Existem leses nas camadas musculares, mas
no se sabe se so primrias ou secundrias (KEBERLE, 1957; PRATA, 2001).
Em algumas circunstncias, principalmente quando o quadro cardaco muito intenso na
fase aguda, h uma evoluo direta para a forma crnica sintomtica. Do ponto de vista
epidemiolgico, as formas crnicas sintomticas da doena de Chagas humana so as que causam

maiores impactos mdico-sociais, principalmente a cardiopatia crnica, que a principal

manifestao mrbida da doena. (PRATA, 2001). Incidindo em chagsicos de todas as reas
endmicas, em torno de 10 a 40% dos chagsicos crnicos.
Nos estgios iniciais da forma cardaca, o paciente pode ser assintomtico ou apresentar
sintomas relacionados a distrbio de ritmo e conduo cardaca (PRATA ,1984). As manifestaes
clnicas persistem ou se intensificam, podendo surgir grave insuficincia cardaca congestiva (ICC)
com fenmenos tromboemblicos e arritmias graves. Os distrbios do ritmo na presena ou no de
disfuno sistlica podem manifestar-se com quadros de palpitaes e alguns casos com sinais de
baixo dbito transitrio como lipotimia e sncope. As embolias pulmonares e sistmicas originadas de
tromboses murais em cmaras cardacas so relativamente frequentes no curso clnico da
cardiopatia chagsica e em alguns casos se constituem na primeira manifestao da doena. (SIMES
et al., 2000). Pacientes portadores dessa forma clnica apresentam miocardite usualmente intensa e
difusa, sendo acompanhada de cardiomegalia, leses vasculares e fibrose (REZENDE; RASSI, 1983;
MARIN-NETO et al., 1980).

Aspectos morfolgicos

Aproximadamente 90% dos pacientes sobrevivem fase aguda e a classificao antomoclnica da doena dada pela intensidade da parasitemia e da resposta inflamatria (ABEL; KALIL;
CUNHA-NETO, 1997; MANOEL-CAETANO; SILVA, 2007).
Pacientes acometidos pela Doena de Chagas apresentando miocardite apresentam
macroscopicamente aumento da rea cardaca. Com uma distenso e congesto do saco pericrdico
com maior quantidade de lquido resultando da intensa inflamao que acometem os trs folhetos
cardacos, principalmente o miocrdio. O epicrdio pode apresentar espessamento brancacento,
nodular ao longo dos ramos coronarianos, caracterizando uma pericardite produtiva. Esta
pericardite mais comum na fase crnica, podendo acontecer na fase aguda. Geralmente o
endocrdio tem aspecto normal e, raramente, pode ocorrer trombose intracavitria. (AEZ, et al.,
1999; ANDRADE, et al., 2006; BENVENUTI; GUTIERREZ, 2007).
Na microscopia a leso inflamatria acomete os trs folhetos cardacos simultaneamente,
com uma verdadeira pancardite. Alm de congesto e edema verifica-se predomnio de intenso
infiltrado de mononucleares (macrfagos, linfcitos, linfobrastos e plasmcitos) e quantidade
varivel de mastcitos e granulcitos, inclusive eosinfilos. O infiltrado penetra no endomssio,
sobrepondo ao longo dele ou formando acmulos, mascarando as fibroclulas, dissociando-as e
separando-as dos capilares, estendendo-se o perimsio e adventcia dos vasos. Na fase aguda h um

parasitismo intenso principalmente nas clulas musculares, visualizando os ninhos de amastigotas.

Mas podendo parasitar outras clulas como macrfagos subepicrdicos e intramusculares, as clulas
de Schwann dos gnglios e outras, porm no se encontram ninhos tpicos, visualizando no mximo
alguns parasitas (AEZ et al., 1999; BILATE; CUNHA-NETO, 2008).
Principalmente nas clulas musculares cardacas que se cumpre o ciclo do parasita, onde se
inicia a inflamao caracteristicamente intrafascicular. Aparecendo a reao inflamatria somente
em torno das fibras parasitadas rotas. As mioclulas parasitadas em geral no degeneram, sendo
destruda somente uma parte, ao se romper as formas amastigotas e os demais elementos caem no
interstcio, desencadeando o processo inflamatrio (ANDRADE, 1999).
As fibras musculares no parasitadas mostram vrias leses, desorganizao e destruio dos
sarcmeros, lise ou dissociao das microfibrilas. Ocorre ainda hipotrofia e necrose com esfacelo de
grande nmero de fibras. Apesar da gravidade do processo inflamatrio e dos fenmenos destrutivos
que o acompanham, a fibrose no existe ou discreta durante a fase aguda (AEZ, et al., 1999;
ANDRADE, et al., 2000).
Pode ser observada uma epicardite aguda varivel, ora focal, ora difusa, atingindo
especialmente o tecido gorduroso e as estruturas nervosas podendo acarretar ganglionite,
periganglionite e neurite agudas. Tambm o endocrdio parietal mostra discreta inflamao aguda,
focal ou difusa. Os linfonodos intrapericrdicos, situados entre a aorta e o tronco pulmonar mostram
quadro de depleo linfoctica, porm no h relatos de parasitismo (AEZ, et al.,1999).
A cardiopatia chagsica crnica, cujo substrato morfolgico uma inflamao crnica
progressiva e fibrosante, que pode ser assintomtica ou apresentar-se como uma sndrome
congestiva e/ou alteraes do ritmo cardaco e da conduo do estmulo eltrico.
Macroscopicamente o epicrdio quase sempre apresenta espessamentos brancacentos, sob
a forma de placas, faixas ou estrias, apresentando pequenos ndulos disseminados na superfcie
atrioventricular ou ao longo dos ramos coronrios. Microscopicamente o quadro histolgico geral
uma inflamao crnica fibrosante do tecido gorduroso subepicrdico. Alm dos espessamentos
pode apresentar epicardite fibrinosa. Uma miocardite crnica fibrosante que se mantm em
atividade pela ecloso de repetidos focos inflamatrios, os quais confluem, conferindo leso um
aspecto zonal ou difuso. Os focos inflamatrios predominando intrafasciculares ou endomissiais
estendem-se geralmente ao conjuntivo interfascicular ou adventcia dos vasos de pequeno e mdio
calibre (ANDRADE, 1999; ANDRADE et al.,2006; MANOEL-CAETANO; SILVA, 2007; BILATE; CUNHANETO, 2008).
Os processos degenerativos variam de intensidade nas diversas reas miocrdicas. Atingem
fibras contidas nos focos inflamatrios ou encerradas nas reas de fibrose. Em fases mais avanadas
do processo, grupos de miofibrilas desaparecem em meio ao infiltrado celular, e restos celulares so

observados no interior dos macrfagos. Em outras reas, focos inflamatrios so menos destrutivos,
o infiltrado diminui ou desaparece, permanecendo ntegra a estrutura do sarcolema e do endomsio
(ANDRADE, 1999).
Com a diminuio ou desaparecimento do infiltrado surge neoformao conjuntiva a partir
do endomsio, a qual substitui as fibras cardacas destrudas e associado a esta ocorre colapso da
trama reticular miocrdica. O colgeno neoformado afasta e circunda as demais fibroclulas que se
atrofiam e desaparecem. Nas zonas de fibrose, o colgeno dos tipos I e III. A fibrose pode atingir e
envolver o perimsio e unir-se a fibras de outros fascculos adjacentes, que se tornam no s
interrompidos, mas tambm fixados uns aos outros pelo conjuntivo esclertico neoformado
(ANDRADE, 1999; LOPES, et al, 2006).

Patogenia

Quando se refere a patogenia da Doena de Chagas, entendem-se todos os mecanismos

envolvidos na produo de leso pelo T. cruzi. Esses mecanismos se correlacionam com fatores que
podem atuar direta ou indiretamente, qualitativa e quantitativamente na determinao e evoluo
da infeco. Podendo ser divididos em: 1) Fatores dependentes do parasita (polimorfismo, tropismo,
virulncia, constituio antignica, nmero de T. cruzi, tipo de cepa e outros) e 2) Fatores inerentes
ao hospedeiro (constituio gentica, sexo, idade, espcie, resposta imunolgica, infeco, fatores
nutricionais e outros). (TAFURI, 1987).

Embora haja uma literatura rica sobre o assunto, no h respostas concretas maioria
dos mecanismos que regulam a mudana da reatividade local e geral do organismo na
evoluo da doena da fase aguda para a crnica durante a infeco chagsica. Acredita-se
que o parasita apresenta um papel fundamental durante as fases aguda e crnica da doena,
provavelmente dependente do tipo de cepa presente na infeco.
O mecanismo de patognese na doena de Chagas est baseado em duas hipteses: a
primeira seria que a persistncia do T. cruzi em locais especficos nos hospedeiros infectados
resultaria em uma reatividade inflamatria crnica; a segunda hiptese seria que a infeco pelo T.
cruzi induziria a uma resposta imune na qual os prprios tecidos so alvos, independente da
persistncia do parasita (TARLETON, 2001).
Outra hiptese que foi proposta que a auto-imunidade poderia facilitar a compreenso da
patognese da doena. (KALIL; CUNHA-NETO, 1996). Embora no visualize a presena de T. cruzi nos
tecidos e sangue na fase crnica da doena, encontram-se focos de infiltrado de clulas
mononucleares no corao de pacientes infectados pelo T. cruzi nessa fase. Ocorrendo um

predomnio de clulas TCD8+ e alguns macrfagos, (REIS et al., 1993) e as fibras cardacas destrudas,
infectadas ou no, encontram-se associadas com linfcitos T CD4+ ou CD8+ (TOSTES JUNIOR et al.,
1994). A parasitemia baixa e leso tecidual, aliada a presena de fibras destrudas, mesmo sem a
deteco do parasita no local, tem servido de base hiptese da existncia de auto-imunidade
contra o tecido cardaco.

No contexto de autoimunidade, diversos antgenos tissulares foram descritos nas duas

ltimas dcadas como elementos alvo dos linfcitos T e B autorreativos, e diversos
mecanismos foram propostos como responsveis pela induo de autorreatividade (LEVITUS
et al., 1991). A hiptese de autoagresso foi considerada durante algumas dcadas como a
mais provvel para explicar a patologia chagsica (RIBEIRO-DOS SANTOS; ROSSI, 1985).
No momento discute-se muito a teoria imunitria, ou seja, a autoimunidade como fator
principal da patogenia da doena, embora existam grandes dvidas quanto aos mecanismos
autoimunitrios, vrios anticorpos tm sido detectados em pacientes naturalmente infectados
ou em animais de experimentao.
Muitos autores tm proposto que o padro de resistncia ou susceptibilidade infeco
pelo T. cruzi est relacionado ao tipo de citocinas produzidas, com participao destacada das
citocinas Th1, responsveis por promover a resistncia (SILVA et al., 1992; HOFT et al.,
1993; MINOPRIO et al., 1993; REED et al., 1994). Assim, a resistncia ao parasita
dependeria de citocinas tais como o IFN-, TNF- e IL-12, enquanto IL-10, IL-4 e TGF-
promoveriam a susceptibilidade (SAVINO et al., 2007).

1.2 Resposta Imune na Doena de Chagas

Grande parte das manifestaes clnicas da doena de Chagas no homem acredita-se ser
consequncia da resposta imune dirigida ao parasita. A infeco por T. cruzi sensibiliza diferentes
mecanismos do sistema imune, ocasionando o aparecimento de respostas humorais (TAKEHARA et
al., 1981; KRETTLI; BRENER, 1982; TAKEHARA et al., 1989) e celulares (ROBERSON; HANSON, 1973;
TARLETON, 1990; NICKELL, KEANE; SO, 1993) contra o parasita.
No incio da infeco, o parasitismo eventualmente controlado por vrios mecanismos
imunes: citocinas ativadoras de macrfagos, opsonizao atravs de anticorpos e citotoxicidade
medida por clulas T. A resposta imune controla o parasitismo, mas falha ao tentar eliminar
completamente o parasita; por isso, os pacientes permanecem infectados por toda vida (HUDSON;
BRITTEN, 1985). Vrias evidncias apoiam a hiptese de que a persistncia do T. cruzi nos tecidos

seria o estmulo para a resposta inflamatria crnica, que resulta em destruio tecidual (TARLETON;
ZHANG, 1999; TARLETON, 2001).
A inflamao o processo patolgico bsico da doena de Chagas. A resposta inflamatria
que segue infeco pelo T. cruzi essencial resistncia do hospedeiro, mas tambm responsvel
pela patologia observada na doena de Chagas (TEIXEIRA et al., 2002). A inflamao focal pode ser
destrutiva no s para as clulas parasitadas, mas tambm para as clulas no parasitadas. Ela se faz
inicialmente custa de linfcitos e logo depois, de neutrfilos e eosinfilos (BRENER; ANDRADE;
BARRA-NETO, 2000).
Estudos relacionam a imunidade celular como sendo um importante mecanismo para a
proteo infeco experimental por T. cruzi, visto que camundongos geneticamente desprovidos de
timo (KIERZENBAUM; HOWARD, 1976) ou timectomizados logo aps o nascimento (SCHMUNIS et al.,
1971) apresentam um aumento da susceptibilidade ao T. cruzi., sugerindo que linfcitos T favorecem
a resistncia infeco. A diminuio ou mesmo destruio de clulas T CD4+ (RUSSO et al., 1988)
aumenta a susceptibilidade de animais infeco, induzindo maiores nveis de parasitemia e
mortalidade. As clulas T CD8+ possuem um papel no controle da resposta imune da infeco,
demonstrado atravs de um trabalho de Tarleton (1990), onde animais foram infectados com uma
cepa virulenta de T. cruzi e foram tratados com anticorpo anti-CD8+, e ainda, a ausncia de clulas
CD8+ em camundongos mutantes para o gene da 2-microglobulina resultam no aumento da
susceptibilidade infeco (TARLETON et al., 1992).
Est bem documentada a ao do sistema imune na resistncia infeco, no havendo,
entretanto, consenso sobre a contribuio especfica de cada componente. Muitas evidncias
mostram a participao das clulas B, clulas T (CD4+ e CD8+), clulas Natural Killer (NK) e macrfagos
no controle da infeco (LAUCELLA; ROTTENBERG; TITTO, 1996).
Na tentativa de controlar a infeco pela resposta imune na Doena de Chagas, ocorre
deteco e destruio dos parasitos diretamente, em especial por clulas dendrticas e macrfagos,
com a ativao dessas clulas no intuito de potencializar suas funes como apresentadores de
antgenos, e consequentemente, direcionar uma resposta imune adaptativa eficiente; e pelo
monitorando da infeco de clulas no-fagocticas, que so o alvo primrio da infeco por T.cruzi.
A presena de T. cruzi estimula uma linha de defesa, composta por macrfagos e clulas NK.
(NOGUEIRA; COHN, 1978). Em hospedeiros infectados, tem sido observado o aumento da atividade
ltica das clulas do hospedeiro e pelo aumento de populaes linfocitrias com marcadores
caractersticos das clulas NK (CD69 no homem). Estas liberam o IFN- que atua ativando macrfagos
(GAZZINELLI et al., 1992). Estes por sua vez, produzem TNF- e IFN- e induz a produo de xido
ntrico que txico e eliminam os parasitas. (VESPA; CUNHA; SILVA, 1994; MARTINS et al., 1998).
Alm do TNF-, vrias outras citocinas pr-inflamatrias como IL-1, IL-6 e IL-12 e quimiocinas como

IP-10, MCP-1, MIG e RANTES so produzidas pelos macrfagos ativados e, por sua vez, recrutaro
vrias clulas do sistema imunolgico.
O exsudado inflamatrio na miocardite chagsica constitudo principalmente por linfcitos
e macrfagos. (ALMEIDA, 1986). A miocardite pode evoluir de vrios modos, agravando-se devido
intensidade e qualidade do exsudato inflamatrio e alteraes vasculares (TAFURI et al., 1971;
HIGUCHI et al., 1987).

Na populao de linfcitos T, alm da expresso da protena CD3, so expressas

molculas acessrias, CD4 e CD8. A molcula de CD4 expressa em aproximadamente 60%
das clulas T maduras CD3+, enquanto CD8 expressa em cerca de 30% das clulas T
(ABBAS; LICHTMAN, POBER, 2005). As clulas T CD4+ so extremamente importantes
na proteo contra a infeco pelo T. cruzi, visto que so necessrias para a produo de
citocinas Th1, como a IL-12 e IFN-, que auxiliam na ativao de macrfagos e na destruio
de formas intracelulares do parasito em clulas infectadas (ALIBERTI et al., 1996;
TARLETON et al., 1996; BRENER; GAZZINELLI, 1997). Estas clulas contribuem tambm
estimulando os linfcitos B e produo de anticorpos lticos (BRENER; GAZZINELLI, 1997)
Estudos apontam as clulas T CD8 + envolvidas nos mecanismos imunopatolgicos.
(CUA; CUA, 1995). Essas clulas dominam o foco inflamatrio nos tecidos parasitados e
sua ausncia leva replicao descontrolada do parasita e subsequente morte do hospedeiro
infectado. Trabalho de Reis e colaboradores (1993) realizou imunoistoqumica em tecidos
cardacos, originado de pacientes com cardiomiopatia chagsica grave, mostrando que os
processos inflamatrios so caracterizados principalmente por linfcitos T CD8+, nos quais
muitos expressam granzima A. Clulas T CD8+ alm de serem importantes produtoras de
IFN- na infeco chagsica, apresentam citotoxidade in vitro em resposta a antgenos
expressos por T. cruzi. (GARG et al., 1997; WIZEL; NUNES; TARLETON, 1997; GARG;
TARLETON, 2002). Autores sugerem que estas clulas so as principais efetoras da
patognese, contribuindo para o desenvolvimento de citlise e fibrose em resposta a
citopatologia (BRENER. GAZZINELLI, 1997)
No que diz respeito ativao de clula T em paciente chagsico crnico, mostrou-se que
indivduos com a forma indeterminada ou severa da doena de Chagas apresentam uma alta
freqncia de circulao de clulas T CD4+ e CD8+ com ausncia de molcula CD28 de superfcie
(DUTRA et al., 1996). As clulas T ativadas, particularmente a subpopulao de clula T CD8+, foram
tambm encontradas no infiltrado inflamatrio das leses (REIS et al., 1993).
CARDONI; ANTNEZ; ABRAMI ,(1999) avaliaram a cintica das clulas NK e a produo de IL12 e IFN- pelas clulas do bao de camundongos, infectados experimentalmente com cepas de T.

cruzi e afirmaram que o efeito central do IFN- in vivo seria a gerao do xido ntrico, para
destruio intracelular dos parasitas. Ainda observaram que durante toda a fase aguda houve um
aumento na produo de IL-12 e IFN- pelas clulas esplnicas, devido ao aumento da atividade das
clulas NK. Concluram que a resposta global na fase aguda foi, predominantemente, do tipo Th1 nas
diferentes cepas de camundongos e que os fatores que controlam essa resposta protetora so de
importncia primria para determinar a resistncia infeco ou o dano tissular.
Allavena e Sica

Mantovani,

(2004), chegaram s mesmas concluses que o perfil Th1 representado

principalmente pelas citocinas inflamatrias IFN- e TNF- ativam macrfagos, assim como o prprio
parasito pode ativar resultando em um padro caracterizado pela produo elevada de agentes
antimicrobicidas como o xido ntrico (NO) e as espcies reativas do oxignio. Desse modo, parece
claro que a ativao clssica dos macrfagos por citocinas pro-inflamatrias exercem um papel
fundamental no controle da parasitemia e mortalidade na fase aguda da infeco por T. cruzi.
O estudo de Reis e colaboradores (1993), no qual usaram um painel de anticorpos
monoclonais e policlonais, caracterizou imunohistoquimicamente as clulas inflamatrias em
coraes de pacientes com cardiopatia chagsica crnica; demonstrou que o tipo de clula
dominante nas leses inflamatrias era linfcito T CD8 muitos dos quais expressavam granzima A, as
clulas B e macrfagos. Granzima A um mediador solvel presente nos lisossomos dos linfcitos T
citotxicos e penetram nos poros da membrana das clulas, degradando substncias no interior
dessas e ativando o processo de apoptose. Encontraram ainda poucos macrfagos que expressavam
TNF- e poucas clulas NK e linfcitos B nas leses. Concluram que a demonstrao de linfcitos
granzima A+ nas leses cardacas dos chagsicos cardiopatas gerava fortes evidncias para o
envolvimento de eventos citotxicos na destruio dos tecidos miocrdicos, enfatizando a grande
participao das clulas T CD8+ na doena de Chagas humana.
Os processos inflamatrios esto associados com as leses ocorridas pela presena do T.
cruzi e, por sua vez, com a produo de citocinas e quimiocinas que recrutam e ativam clulas
inflamatrias. (HODGE-DUFOUR et al., 1998). Citocinas do tipo Th1, como o IFN-, na fase aguda da
infeco chagsica, age eliminando o parasita. (MICHAILOWSKH et al., 1998). Entretanto, durante a
fase crnica da infeco, uma exacerbao da resposta imunolgica da produo exagerada de IFN-
pode promover a destruio do miocrdio (REIS et al., 1997; BAHIA-OLIVEIRA et al.,2000)
As citocinas mostram um papel fundamental na infeco pelo T. cruzi e suas atuaes
determinam o incio, a durao e a composio da resposta imune. O IFN- considerado uma
citocina de defesa estando relacionada com a resistncia infeco, devido a sua capacidade de
ativar os macrfagos que, por sua vez, apresentam atividade tripanocida. Macrfagos infectados
liberam IL-12, que estimulam as clulas NK a produzir IFN- . O IFN- em associao com TNF-,
induzem a expresso da enzima xido ntrico sintetase (iNOS) atravs dos macrfagos e,

consequentemente, a produo de xido ntrico, que apresenta atividade microbicida sobre o T.

cruzi.
As interleucinas IL-4 e IL-10 e o Fator Transformador de Crescimento Beta (TGF-) suprimem
a ativao dos macrfagos induzida por IFN- desativando a capacidade tripanocida dos macrfagos
e inibindo a liberao de xido ntrico e tambm a diferenciao de clulas Th1. (GAZZINELLI et al.,
1992). O estudo de Silva et al., 1991 mostrou que o TNF- um potente inibidor dos efeitos de
ativao de citocinas por macrfagos in vivo e in vitro, tendo papel na regulao da infeco (SILVA;
TWARDZIK; REED, 1991).
A IL-6 e a IL-1 esto associadas com as alteraes na funo das clulas endoteliais, podendo
estar envolvidas nas alteraes microvasculares observadas na miocardite chagsica. As citocinas
IFN-, o TNF-, a IL-6 e IL-1 modulam a expreso de molculas de adeso, importantes no
recrutamento de linfcitos para os focos inflamatrios. Por isso, qualquer alterao nos nveis ou no
equilbrio entre as citocinas pode estar associado com a resistncia e o desenvolvimento das leses
vistas na fase crnica da Doena de Chagas. (LAUCELLA; ROTTEMBERG; TITTO, 1996)
Foi sugerido que indivduo com doena na forma severa tenha uma tendncia a produzir
mais IFN- comparado com os pacientes indeterminados sob estimulao com antgenos do parasita
(GOMES et al., 2003) e que clones de clulas T derivadas dos coraes de pacientes cardacos
produza predominante IFN- (ABEL et al., 2001). Uma correlao entre nveis de TNF- e a ocorrncia
das formas graves da doena tem sido tambm estabelecida (TALVANI et al., 2004).
Logo aps este controle inicial da parasitemia e do parasitismo tecidual, a miocardite, bem
como a ativao policlonal de linfcitos, so atenuados durante a fase crnica da doena.
Mecanismos imunorreguladores entram em cena, controlando atividade do sistema imune, fator
necessrio para preveno dos aspectos deletrios da estimulao imunolgica excessiva. A
diminuio da proliferao das clulas T est correlacionada com ativao de macrfagos, produo
de NO e produo ineficiente de IL-12 (ABRAHAMSOHN; COFFMAN, 1995)
Nessa fase de regular o sistema imune, as prostaglandinas e o xido ntrico so cruciais, uma
vez que a interferncia em seus nveis, diminuindo-os, est correlacionada com a restaurao da
resposta proliferativa dos linfcitos contra antgenos parasitrios e uma aumentada produo de
molculas pr-inflamatrias (PINGE-FILHO et al., 1999). Outro importante aspecto imunorregulador
na resposta anti-T.cruzi a induo de apoptose de clulas B e T (LOPES; REIS 1995; FREIRE-DE-LIMA
et al., 2000).
Citocinas imunoregulatrias, como TGF-, IL-4 e IL-10, tambm tm destaque no controle da
resposta imune durante a infeco com T.cruzi e modelos experimentais reforam a importncia
destas citocinas. Por exemplo, camundongos deficientes de IL-10 exibem uma forte resposta
inflamatria e embora controlem bem o parasitismo, sucumbem perante uma resposta inflamatria

exacerbada. A depleo de IL-12 tem um efeito retardante na morte destes animais (HUNTER et al.,
1997), reforando o papel deletrio da resposta inflamatria exagerada. No caso da IL-4, animais que
so deficientes nesta citocina mostram uma clara polarizao Th1, cursando desta forma com um
parasitismo reduzido e tambm com intensa miocardite, porm, a IL-4 demonstra ter um papel
menor na regulao da resposta imune na doena de Chagas (HOLSCHER et al., 2000; SOARES et al.,
2001). Outro aspecto importante no que diz respeito s citocinas que imunorregulam a resposta antiT.cruzi a demonstrao de que mRNA de IL-4 e IL-10 j so observados 15 dias aps a infeco,
sugerindo sua participao desde os eventos iniciais da doena (GOLGHER ;GAZZINELLI, 2004).
Um importante aspecto a ser considerado neste cenrio de imunorregulao da resposta
imune na doena de Chagas a possibilidade de utilizao destas vias, por parte do parasito, a fim de
escapar dos mecanismos imunes efetores, promovendo assim sua sobrevivncia e estabelecimento
de uma infeco crnica (GOLGHER; GAZZINELLI, 2004). De fato, os efeitos, principalmente de IL-10 e
TGF- tem repercusses diretas na capacidade microbicida dos macrfagos (SILVA; TWARDZIK; REED,
1991; SILVA et al., 1992). Outro aspecto importante que pode estar relacionado com esta
imunoregulao a participao das clulas T reguladoras CD4+CD25+ na doena de Chagas; embora
os estudos relacionados a esta populao celular estejam cada vez mais comuns, sua participao
exata na doena de Chagas ainda necessita ser determinada (GOLGHER; GAZZINELLI, 2004).
Este perodo de dita latncia da infeco pode perdurar por toda a vida do hospedeiro.
Porm, em uma parcela dos indivduos este equilbrio quebrado e as manifestaes clnicas da
doena se manifestam. Ainda h muito a ser esclarecido sobre a exata relao parasito-hospedeiro
envolvida neste desequilbrio, com as teorias fundamentadas principalmente em trs hipteses: a
patologia sendo derivada da presena contnua do parasito no indivduo; a patologia sendo gerada a
partir da induo de resposta autoimune exacerbada; e ultimamente, uma tentativa de conciliao
destas duas teorias, onde a interao dos genomas do parasito e do hospedeiro tem um papel
crucial.
As primeiras teorias acerca da patognese da doena de Chagas vieram a partir da
identificao direta do parasito nos tecidos. Desta forma, a patologia seria devido a uma ruptura da
clula parasitada e liberao dos antgenos do parasito, afetando o tecido e direcionando uma
inflamao crnica. Contudo, esta teoria esbarrava na ausncia de demonstrao de parasitos nos
tecidos de cerca de 80% dos indivduos j com a patologia desenvolvida (TEIXEIRA et al., 2006B). Esta
dificuldade foi resolvida com o advento de testes imunolgicos e, em especial moleculares, que
demonstraram a presena de kDNA de T. cruzi nos tecidos de indivduos chagsicos (ZHANG;
TARLETON, 1999). No entanto, somente a deteco de DNA nuclear, ou seja, nDNA indicativo de
uma infeco ativa com T.cruzi (BRAGA et al., 2000; LAURIA-PIRES et al., 2000). De fato, as

manifestaes crnicas da doena de Chagas no esto relacionadas com severa parasitemia, pelo
contrrio, esta praticamente ausente na fase crnica da doena (TEIXEIRA et al., 2006B).
Nas ltimas dcadas a autoimunidade tem sido considerada um importante aspecto na
patogenia da doena de Chagas, recebendo ateno e suporte substanciais (GIRONES; FRESNO, 2003,
LEON; ENGMAN, 2003). Dados experimentais tm demonstrado que a autoimunidade um
importante componente da patognese da Doena de Chagas. Sendo assim os fenmenos
autoimunes relacionados seriam: a presena dos anticorpos e de clulas autorreativas (LEVITUS et al.,
1991); mimetismo molecular entre os componentes do hospedeiro e do parasita (ABEL; KALIL;
CUNHA NETO, 1997); e a observao de que clulas mononucleares de pacientes chagsicos podem
responder a antgenos autlogos in vitro (DUTRA et al., 2000); e a ocorrncia de populaes de
clulas circulando relacionadas a auto-imunidade, tal como clulas B CD5+, nos pacientes chagsicos
(DUTRA ; ROCHA; TEIXEIRA, 2005). atualmente aceito que resposta antiparasitas e autorreativas
no so mutuamente exclusivas na doena de Chagas e que as combinaes destes tipos de resposta
imune podem estar envolvidas no estabelecimento da patologia. (DUTRA ; ROCHA; TEIXEIRA, 2005).
H uma evidncia demonstrando que alm da auto-imunidade fatores genticos do parasita e
hospedeiro tambm podem influenciar o resultado da infeco (KIERSZENBAUM, 2003).
Girones e Fresno (2003), postularam que essa persistncia do T. cruzi, junto com a resposta
imune especfica induzida por antgenos miocrdicos mltiplos pode causar danos cardacos. Estes
mesmos autores encontraram que a auto-reatividade encontrada na fase crnica da infeco por T.
cruzi est ligada parasitemia; os anticorpos e clulas T reativas contra o auto-antgeno que mostrou
ser significativamente mais baixa em camundongos C57BL/6 do que nos BALB/c . A este respeito, a
eliminao do parasita na fase aguda poderia revogar potencialmente a induo da auto-imunidade
(KIERSZENBAUM, 2003 ).
Para MORRIS e colaboradores (1990), a destruio do tecido que caracterstica das formas
clnicas mais severas da doena de Chagas causada por uma reao inflamatria progressiva
multifocal. Props que a miosite e linfcitos T que se infiltram no tecido do corao so envolvidos no
dano cardaco. Chagsicos com doena cardaca evidente produziram altos nveis de IFN-, mas
diminuda produo de IL-4 aps estimulao in vitro, sugerindo que dano do corao poderia ser
resultado das citocinas inflamatrias. A persistncia da inflamao pode ser relacionada citocinas
produzidas pelas clulas T CD4+ especficas.
Dutra, Rocha e Teixeira (2005) sugerem uma provvel combinao de composio gentica do
hospedeiro e do parasita, alm do que o sistema imune do hospedeiro e o ambiente, contribuem
para a determinao do resultado clnico da doena.
Atualmente quatro mecanismos principais so definidos como responsveis pelo
desenvolvimento das formas clnicas da Doena de Chagas, sendo eles: Agresso dependente do

parasito, alteraes do sistema nervoso autnomo, agresso imunomediada com processos

inflamatrios nos tecidos e aparente ausncia de parasitos e alteraes microvasculares (MARINNETO et al., 2007).
Camundongos Knouck-out (KO) para o gene da IL-10 (IL-10 KO) infectados com a cepa Y de T.
cruzi apresentaram menor nmero de parasitas no sangue e tecidos e maior produo de IFN- e
xido ntrico pelas clulas do bao do que o tipo selvagem. O tratamento de camundongos IL-10 KO e
selvagens com IL-10 recombinante resultou em aumento da parasitemia. Camundongos Knouck-out
para os genes da recombinase ativa (RAG/KO), que no possuem clulas B e T, fornecem um modelo
para determinar a importncia da imunidade inata na resistncia. Camundongos RAG/KO e selvagens
tiveram nveis de parasitemia semelhantes at o 13 dia da infeco, sugerindo o controle efetivo do
parasitismo pelo sistema imune inato durante a fase inicial da infeco, a partir de ento, foi maior
em RAG/KO. O tratamento de camundongos RAG/KO, IL-10 KO e selvagens com anticorpos
neutralizantes anti-IFN-, anti-TNF ou anti-IL-12 aumentou os nveis de parasitemia, mostrando a
importncia da produo endgena dessas citocinas no controle do parasitismo pelas respostas inata
e adaptativa. Clulas do bao de camundongos selvagens tratadas com anti-IL-12 apresentaram
produo diminuda de IFN- e xido ntrico, sugerindo que a produo de IFN- dependente do
estmulo de IL-12 (ABRAHAMSOHN; COFFMAN, 1996).
Devido s propriedades imunossupressoras da IL-10 sobre a resposta Th1, impedindo a ao
de respostas inflamatrias deve-se inferir que esta citocina tem um papel fundamental na doena de
Chagas.
A IL-10 produzida por polimorfos nucleares de indivduos chagsicos na forma
indeterminada e cardaca (DUTRA et al., 1997). Trabalhos mostram que aumento da produo da IL10 por clulas T e moncitos de pacientes na forma indeterminada em relao a indivduos cardacos
(GOMES et al., 2003; BARROS-MAZON et al., 2004; SOUZA et al., 2004).
Entretanto, em modelos experimentais, foi demonstrado que a IL-10 tambm est associada
susceptibilidade infeco por T. cruzi. Clulas do bao de camundongos susceptveis produzem
significativamente mais IL-10 que camundongos resistentes (SILVA et al., 1992).

Alm disso,

tratamento com baixas doses de anticorpos neutralizantes para IL-10 protege camundongos da
infeco fatal, enquanto que altas doses no promovem resistncia (REED et al., 1994). Estes
trabalhos sugerem que a IL-10, semelhante ao IFN-, tambm apresenta um papel duplo na
patognese da doena de Chagas, sendo que uma produo excessiva de IL-10 impede a eficcia da
resposta anti-parasitria e uma produo diminuda pode contribuir para uma resposta Th1
exagerada.

Hhler e colaboradores (1998) puderam demonstrar a importncia do IFN-, quando

utilizaram camundongos deficientes em IFN- e inibidores da NO sintase (iNOs),

conseguiram demonstrar que ambos animais apresentavam susceptibilidade infeco pelo T.
cruzi. Este resultado levou os pesquisadores a conclurem o quanto o IFN- e NO mediado
pela iNOs, so cruciais para a atividade tripanomicida dos macrfagos e sobrevivncia dos
camundongos na fase aguda da infeco chagsica.
Esplencitos obtidos durante a fase aguda da infeco produziram quantidades elevadas de
NO que foram correlacionadas com a resistncia ou susceptibilidade dos animais. Nveis de nitrito e
nitrato no plasma durante estgios avanados da infeco foram maiores em camundongos C57BL/6
do que em BALBL/c. O tratamento de camundongos C57BL/6 com inibidores da NO sintase
aumentou a parasitemia e a mortalidade. Finalmente, foi encontrada uma droga doadora de NO
capaz de matar tripomastigotas in vitro, na ausncia de quaisquer outras clulas, sugerindo a morte
de T. cruzi mediada diretamente por NO (VESPA; CUNHA; SILVA, 1994; COSTA et al., 2006).
Foi demonstrado que camundongos infectados por T. cruzi e deficientes no receptor de IFN-
ou deficientes iNOs foram altamente suscetveis infeco, tiveram parasitemias elevadas e
histopatologia grave. Ambas as linhagens de camundongos foram incapazes de responder a infeco
devido atividade tripanocida prejudicada de macrfagos, causada pela deficincia na produo de
xido ntrico. Esse estudo demonstrou uma via de induo de iNOs dependente de IFN- crucial para
a eficiente produo de xido ntrico na resistncia infeco aguda por T. cruzi (HLHER et
al.,1998).
O tratamento de camundongos infectados com L-NMMA (inibidor da L-argnina), e anticorpos
monoclonais anti-TNF- ou anti-IFN- causou reduo na produo de NO e na quantidade de clulas
apoptticas, sugerindo que NO, produzido por macrfagos ativados por TNF- e IFN-, tem papel
direto na induo da apoptose in vivo (MARTINS et al., 1998).Foi demonstrado que formas
epimastigotas e tripomastigotas de T. cruzi estimulam a produo de TNF- por clulas do bao
(TARLETON, 1988).
Verificou-se que TNF- teve efeito protetor contra a multiplicao de parasitas na fase inicial
da doena, agindo na induo de clulas inflamatrias para alvos teciduais (miocrdio),
provavelmente diminuindo a carga parasitria (LIMA et al., 1997). No entanto, em outro estudo, TNF foi encontrado no citoplasma de macrfagos e dentro de reas necrticas do bao de
camundongos Swiss, C3H/He e DBA. Esse resultado sugere que TNF- tem papel importante nas
alteraes necrticas do bao associadas com a gravidade da infeco experimental por T. cruzi
(LIMA; ANDRADE; ANDRADE, 2001).
Souza e colaboradores (2004) mostraram que a infeco por T. cruzi leva a uma expresso
aumentada de TNF- por moncitos de indivduos cardiopatas em relao ao de forma

indeterminada. O contrario foi observado na expresso de IL-10 que foi maior entre os indivduos
com forma indeterminada. Os autores sugerem ainda que a produo aumentada de IL-10 entre os
indivduos com forma indeterminada responsvel pela diminuio de MHC-II observada entre estes
indivduos. Corroborando com eles, Bahia-Oliveira e colaboradores (1998) mostraram que clulas
mononucleares de pacientes com cardiopatia chagsica, estimuladas com antgenos parasitrios,
apresentam maior produo de IFN- em relao a indivduos com forma indeterminada. O contrrio
foi observado novamente para a IL-10.
Apesar do papel protetor claro da resposta inata inicial, tripomastigotas infectantes vivos
podem desencadear a resposta por macrfagos que pode ser protetora para o hospedeiro (IL-12) ou
para o parasita (IL-10), e na ausncia de linfcitos. A extenso da infeco parece ser funo do
balano entre efeitos antagonistas exercidos sobre os macrfagos (REIS, 1993).
interessante observar que T. cruzi um estmulo poderoso para resposta imune inata
montada por macrfagos e clulas NK. Com o estmulo persistindo ao longo da infeco, seria
importante avaliar a contribuio da resposta inata para imunopatologia na fase crnica (REIS, 1993).
Os resultados obtidos em experimentos com camundongos infectados por T. cruzi
estabelecem que citocinas Th1, que esto envolvidas na hipersensibilidade tardia, so induzidas
durante a infeco aguda e parecem ter papel obrigatrio na eliminao do parasita (CUNHA-NETO
et al., 1995).
Os nveis sricos de IL-2, IFN- e TNF- foram estudados em pacientes com doena de Chagas
crnica (forma indeterminada, cardiopatia insipiente, cardiopatia bem estabelecida, forma digestiva
e forma mista). Os nveis sricos de TNF foram indetectveis e de IFN- no diferiram nas diferentes
formas clnicas ou com a gravidade da doena. No entanto, foram encontrados nveis mais elevados
de IL-2 em pacientes com cardiopatia descompensada, sugerindo que a dosagem dessa citocina
possa servir como indicadora da necessidade de teraputicas mais agressivas nesses pacientes
(WARD et al., 1999).
A demonstrao clara da participao da imunidade humoral na resistncia infeco
experimental por T. cruzi foi evidenciada em um estudo de transferncia passiva de anticorpos. Os
resultados sugerem que a imunidade humoral participa da resposta imune protetora contra o T. cruzi
(KRETTLI; BRENER, 1982).
Em todas as formas clnicas da doena de Chagas crnica, o envolvimento da imunidade
mediada por clulas de fundamental importncia. Nesse contexto, alguns estudos relataram o
papel de mecanismos citotxicos no desenvolvimento das manifestaes clnicas mais graves (REIS et
al., 1993).

Relata-se na literatura a importncia do NO como microbicida na doena de Chagas. Em

contrapartida durante a infeco experimental, tem sido demonstrado que o NO tambm induz
imunossupresso (ABRAHAMSOHN; COFFMANN, 1996).
Na doena de Chagas, os mecanismos pelos quais o NO exerce funo imunossupressora ainda
no foram totalmente esclarecidos, entretanto, foi demonstrado que o NO pode inibir a
apresentao de antgenos por macrfagos regulando negativamente a expresso de molculas MHC
(SICHER; VASQUEZ; LU, 1994). Outros estudos revelam que o NO pode alterar o funcionamento de
complexos enzimticos no metabolismo celular, inibir a duplicao de DNA ou causar danos diretos
no DNA sugerindo que o NO no s pode inibir a replicao, mas tambm pode induzir a morte
celular (GRANGER; LEHNINGER, 1982).
Para confirmar o papel do IFN- e NO na imunossupresso, Goni. Alcaide e Fresno (2002),
utilizaram camundongos knock-out em IFN-R ou iNOs. Verificando que as clulas esplnicas (SC) de
camundongos no infectados, tambm KO, proliferaram exatamente como as clulas dos controles,
que eram das linhagens Sv129 e C57BL/6 respectivamente, em resposta a Concavalina A (Con-A).
Entretanto, a resposta de SC dos animais KO infectados a Con-A foi minimamente depreciada (cerca
de 20 a 30% de inibio) quando comparada aos controles. A produo de NO foi grandemente
diminuda em SC ativados com Con-A nos animais KO iNOs. Em concordncia carncia de produo
significativa de NO, L-NMMA no afetou a proliferao pelas SC nestes animais infectados. Chegaram
concluso de que os animais KO apresentaram uma alta parasitemia, porm muito pouca
imunossupresso, afirmando que neste caso, a imunossupresso no foi necessria para o
desenvolvimento do parasita, pois o mesmo pde crescer melhor devido facilidade pelos animais
serem KO, sendo assim a imunossupresso no seria necessria pelo parasita e sim uma resposta
excessiva do sistema imune, levando aos danos.
Existem muitas dvidas relacionadas ao fato de que alguns indivduos infectados
desenvolvem uma forma severa da doena de Chagas e outros no; tambm h dvidas em relao
s manifestaes clnicas, que se apresentam de forma heterognea. Na forma cardiodigestiva,
CARDOSO et al. (2006) encontraram um perfil de citocinas distinto quando comparado a outras
formas clnicas da doena de Chagas; sugerindo que os eosinfilos so as maiores fontes de citocinas
nessa entidade clnica. Os pacientes com a forma indeterminada da doena apresentam clulas T
capazes de controlar a atividade citotxica deletria atravs da inibio da ativao do HLADR das
clulas T CD8+. Acredita-se que a falta de uma populao reguladora nas formas cardaca ou
digestiva acarretaria em prejuzo da resposta imune, que culminaria numa forte atividade citotxica
e destruio dos tecidos (VITELLI-AVELAR et al., 2005).
A heterogeneidade sugere que variaes genticas do hospedeiro, parasita ou ambos, so
importantes no estabelecimento da forma clnica da doena. Em humanos essa suspeita foi

confirmada atravs de estudos com tcnicas de PCR em material de bipsia e/ou necropsia; Vago e
outros (2000), demonstraram variabilidade gentica do parasita como sendo um dos fatores
determinantes da forma digestiva ou cardaca da doena de Chagas.
Com objetivo de caracterizar o perfil gentico de cepas de T. cruzi obtidas de pacientes
chagsicos, com e sem sintomas, oriundos de nosso pas, FREITAS et al. (2005) e, em nossa regio
LAGES-SILVA et al. (2006), confirmaram que o T. cruzi II o agente causador das leses da doena de
Chagas no Brasil. Entretanto, LAGES-SILVA et al. (2006) encontraram um alto grau de variabilidade
dentro das cepas de T. cruzi II, demonstrado pelo intenso polimorfismo do kDNA, entre todas as
formas clnicas e tambm dentro das mesmas. Segundo MACEDO et al. (2004) o intenso
polimorfismo poderia ser explicado devido ao fato de muitas populaes de T. cruzi serem policlonais
e o elevado grau de diversidade do parasita poderia estar associado sua necessidade de adaptao
e sobrevivncia em diferentes hospedeiros.
A severidade e prevalncia da doena de Chagas pode variar geograficamente, o que muitas
vezes dificulta o esclarecimento clnico e epidemiolgico. Dados tm demonstrado que uma
alterao pode ser devido variao gentica constitucional do hospedeiro, relacionada com os
mecanismos de defesa que esto envolvidos no controle do parasitismo e da leso tecidual. (DUTRA;
ROCHA; TEIXEIRA; 2005; DUTRA; GOLLOB, 2008).

A interao entre o parasito e mediadores do sistema imune seria talvez o principal

fator responsvel pelos danos tissulares nas clulas infectadas, favorecendo a persistncia da
inflamao cardaca e da fibrose reparativa subsequente, levando a uma perda funcional
importante do rgo ao longo dos anos. Diferentes modelos genticos experimentais so
potentes ferramentas para elucidar tais mecanismos e direcionar novas estratgias de
interveno na doena humana.

1.2.1 Gentica

Observa-se que nem todos os indivduos infectados com um microrganismo desenvolve

doena e estudos tm demonstrado a importncia dos genes humanos em determinar a resistncia
ou suscetibilidade determinada infeco (CASANOVA; ABEL, 2005). Acredita-se que a resistncia ou
predisposio a uma doena infecciosa pode seguir um padro de herana simples ou complexo
(PICARD;CASANOVA; ABEL, 2006)
Devido a isso, diversos autores tm buscado identificar os fatores que contribuam com a
suscetibilidade doena que atinge apenas uma minoria. (HILL et al., 1991; McGUIRE et al., 1994;
CABRERA et al., 1995; CHEVILLARD et al., 2002; FLORI et al., 2005).

O estudo dos fatores de suscetibilidade ou resistncia s doenas infecciosas parasitrias

um enorme desafio. Provavelmente envolve muitos genes do hospedeiro, interagindo com a
gentica do parasita e com o ambiente. Sendo uma relao complexa, o que dificulta o
entendimento dos mecanismos responsveis pela diversidade clnica observada em reas endmicas.
(CAMPINO et al., 2006).
Parasitos apresentam mecanismos sofisticados de escape do sistema imunolgico, tornandose extremamente adaptados ao microambiente do organismo humano. A plasticidade do genoma de
certos parasito tem levado a estudos que tentam ligar as diferentes formas clinicas e sub clnicas,
causadas pela infeco, existncia de clones e cepas de diferentes virulncias e/ou patogenicidade
na populao de parasitos. (MELLO; BRENER, 1978; DE DIEGO et al., 1998; MACEDO; PENA, 1998)
A importncia da gentica do hospedeiro no desenvolvimento da doena tem sido difcil de
ser estudada devido multiplicidade dos fatores que podem interferir com o curso da doena,
incluindo a heterogeneidade de parasitas que podem determin-la. Entretanto, estudos bem
desenvolvidos tm mostrado resultados interessantes e de grande valia para a comunidade
cientfica, permitindo identificar passos crticos em mecanismos patognicos em algumas infeces
(DESSEIN et al., 2001)
O primeiro locus de suscetibilidade a uma doena parasitria foi mapeado em 1996, para a
esquistossomose (MARQUET et al., 1996). O estudo das doenas infecciosas difere do de outras
doenas complexas porque os fatores ambientais envolvidos so conhecidos na maioria dos casos e
podem ser includos na anlise (CLEMENTI; GIANANTONIO, 2006). Vrios estudos tm tentado
identificar os fatores que causam o desenvolvimento da doena em apenas uma frao da populao
exposta aos parasitos. Muita ateno tem sido dada ao ambiente, pois a transmisso do parasito
depende sobretudo de fatores ambientais, tais como a densidade e distribuio do vetor e virulncia
do parasito. Os parasitos, devido ao seu grande genoma, tm desenvolvido mecanismos sofisticados
de escape do sistema imune, como a variao antignica (DESSEIN et al., 2001).
O papel da variabilidade gentica do hospedeiro desperta interesses na suscetibilidade
infeco, em relao a sua gravidade individual, sua progresso e as taxas de infeco em nvel
populacional (SEGAL; HILL, 2003). Em seres humanos, a avaliao da suscetibilidade/resistncia a
infeces significa identificar o papel de fatores genticos na expresso de fentipos complexos. Tal
papel pode ser estudado por mtodos de epidemiologia gentica, combinando informaes
epidemiolgicas (medida de fatores de risco) e genticas (relaes familiares entre indivduos,
marcadores genticos) (ABEL; DESSEIN, 1997).
H inmeras vantagens em estudar as doenas infecciosas humanas, visto que a influncia
de fatores ambientais no risco de infeco j bem conhecida, podendo ser considerada na anlise.
Alm disso, h forte indicao na escolha de genes candidatos por associao ou por estudos de

ligao, com base na funo (biologia) do gene candidato e seu papel na resposta imunolgica ao
patgeno estudado, e/ou em estudos de genes homlogos identificados em modelos animais, ou em
genes implicados em doenas semelhantes (ABEL; DESSEIN, 1997; SEGAL; HILL, 2003; BURGNER;
JAMIESON; BLACKWELL, 2004). Contribuindo com a relevncia que o processo de identificao de
genes principais envolvidos na resposta a um determinado patgeno oportuniza o estudo de vrias
caractersticas complementares,como fentipos clnicos (afetado/no afetado), fentipos biolgicos
(medida da intensidade da infeco) e fentipos imunolgicos (nveis de anticorpos ou de citocinas).
(ABEL; DESSEIN, 1997).
Ainda preciso considerar que a suscetibilidade gentica a infeces raramente segue um
simples padro de herana mendeliana, exceto em raros casos familiares em que os defeitos
ocorrem em um nico gene. H duas principais tcnicas para mapear e identificar associaes
genticas em doenas complexas: estudos de associao e de ligao (SEGAL; HILL, 2003;
FRODSHAM; HILL, 2004). Os estudos de associao, normalmente, precisam ser realizados com um
grupo pr-selecionado de polimorfismos em um nico nucleotdeo (SNP) (WEISS; TERWILLINGER,
2000) e testam uma associao significativa entre o polimorfismo gentico e um fentipo, dentro de
uma populao (QUINTANA-MURCI et al., 2007). Os mtodos de associao apresentam como
limitao a necessidade de identificao prvia de polimorfismos, preferencialmente aqueles de
relevncia funcional (SEGAL; HILL, 2003; FRODSHAM; HILL, 2004). Entretanto, apresenta grande
importncia o fato de poderem ser usados em estudos de associao entre afetados e controles, ou
dentro de famlias. Em testes de associao familiares, utilizam-se os pais e um filho afetado para
testar se um alelo em particular transmitido mais frequentemente do que seria esperado pela
herana mendeliana. Isto conhecido como teste de desequilbrio de transmisso (TDT) (SEGAL;
HILL, 2003).
Na doena de Chagas, o achado de agregao familial de casos de Cardiopatia Chagsica
Crnica (CCC) refora o papel da gentica do hospedeiro nas manifestaes da forma crnica
cardaca. possvel, ento, que polimorfismos genticos afetando a resposta imune poderiam
influenciar a progresso para a CCC entre os indivduos infectados por T. cruzi (BILATE; CUNHA-NETO,
2008). Vrios trabalhos, estudando diferentes genes candidatos, tm sido realizados.
Com relao aos genes do HLA, alguns estudos apontam associao de polimorfismos nesses
genes e a progresso para a forma cardaca da doena e/ou desenvolvimento da infeco crnica
(FERNANDEZ-MESTRE et al., 1998; DEGHAIDE; DANTAS; DONADI, 1998; COLORADO et al., 2000;
CRUZ-ROBLES et al., 2004) e um estudo no conseguiu confirmar essa relao (FA et al., 2000).
Considerando a resistncia infeco, o hapltipo DRB1*14-DQB1*0301 protegeu contra a infeco
em uma rea altamente endmica do Peru, sendo uma herana dominante (NIETO et al., 2000). A
comparao da frequncia dos alelos DRB1 e DQB1 entre pacientes e controles mostrou uma

frequncia reduzida de DRB1*14 e DQB1*0303 nos pacientes, sugerindo efeitos protetores

independentes na infeco crnica na populao estudada. A comparao das frequncias allicas
entre pacientes com ou sem cardiopatia mostrou maior frequncia de DRB*01, DRB*08 e
DQB1*0501 e frequncia reduzida de DRB1*1501 nos pacientes com arritmia e insuficincia cardaca
congestiva. Os resultados sugerem que os genes do HLA classe II podem estar associados com o
desenvolvimento da infeco crnica e com o dano cardaco na doena de Chagas (FERNANDEZMESTRE et al., 1998). Outro trabalho mostrou que HLA-A30 conferiu suscetibilidade, enquanto HLADQB1*06 conferiu proteo contra o desenvolvimento da doena, independente da forma clnica
apresentada (cardaca ou digestiva) (DEGHAIDE; DANTAS; DONADI, 1998). As frequncias do
hapltipo DRB1*01 DQB1*0501 do alelo DPB1*0401 estavam significativamente aumentadas nos
pacientes com cardiopatia, enquanto a frequncia de DPB1*0101 foi maior entre os assintomticos
do que entre o grupo com insuficincia cardaca congestiva (COLORADO et al., 2000). Nesse mesmo
aspecto, Cruz-Robes et al. (2004) sugerem que os alelos do HLA podem estar associados com o
desenvolvimento da infeco crnica e com o dano cardaco na doena de Chagas. No entanto, os
dados obtidos por Fa et al. (2000) indicam que os polimorfismos nas molculas HLA-DR e DQ no
influenciam a suscetibilidade s diferentes formas clnicas da doena de Chagas nem a progresso
cardiopatia. Esses estudos falham em apontar genes relevantes que causem a dicotomia clnica
observada. Isso pode ser devido heterogeneidade gentica das populaes estudadas (BILATE;
CUNHA-NETO, 2008). Vrios estudos tm indicado diferentes marcadores de suscetibilidade gentica
em pacientes com CCC
Polimorfismos em citocinas tm sido estudados a fim de se obter uma associao com o
desenvolvimento da infeco e/ou com a progresso para a CCC. A freqncia do gentipo alto
produtor de TGF-1 10C/C foi maior no grupo de pacientes nas populaes peruana e colombiana
comparada ao grupo controle, indicando suscetibilidade diferencial infeco por T. cruzi (CALZADA
et al., 2009).
Trabalho realizado por Pissetti e colaboradores (2011), sugerem que o polimorfismo na
posio -238 influencia a susceptibilidade para a infeco juntamente com o aumento da produo
srica de TNF- em pacientes soropositivos para a Doena de Chagas.

GENETICA DO HOSPEDEIRO

Alm desses fatores h estudos que sugerem que fatores: a) genticos do hospedeiro humano;
b) ambientais; e c) variabilidade do T. cruzi so importantes para determinar a prevalncia da doena
de Chagas assim como as manifestaes clnicas. (VASCONCELOS et al., 2012). Os fatores genticos
envolvidos na suscetibilidade doena de Chagas tm se tornado cada vez mais estudados. Tais

fatores contribuiriam para a compreenso da heterogeneidade clnica observada na doena. Ainda,

conforme observado por Zicker et al. (1990), h agregao familiar da cardiopatia chagsica crnica,
reforando a hiptese de que fatores genticos do hospedeiro contribuiriam para o desenvolvimento
das diferentes formas clnicas.
Estudos como de Deghaide, Dantes e Donadi (1998) e de Layrisse e outros (2000) relatam
genes que atuam no interior do complexo de histocompatibilidade principal e outros autores como
Rodriguz- Prez e colaboradores (2005) indicam genes de citocinas e quimiocinas determinando a
susceptibilidade e forma clnica desenvolvida.
A doena de Chagas manifesta-se influenciada por muitos fatores ainda no totalmente
esclarecidos, que desenvolvem uma variedade de quadros, cuja maioria acompanhada de uma fase
aguda assintomtica ou sintomtica que evolui para a fase crnica. Vrias citocinas so detectadas
em pacientes chagsicos nas diversas formas da doena. Muitas destas tm efeito protetor e outras
esto relacionadas com gravidade da leso. Assim, o objetivo deste estudo associar a presena de
polimorfismos genticos nos genes da IL-10 e IL-4 com a presena de infeco por T.cruzi.
Trischaman e outros (1978) estudaram a suscetibilidade de camundongos de diferentes
linhagens isognicas infeco pelo T. cruzi, observando que a resistncia est ligada ao padro
gentico. Boyer et al. (1983) comprovaram a importncia do padro gentico ao estudarem a
infeco em camundongos portadores de um nico gen lpr, ligado linfoproliferao e que controla
certas reaes auto-imunes.
DeTitto (1994), postulou que, embora a resposta imune tenha importante papel na
resistncia, em conjunto, a sobrevida est mais relacionada com o padro gentico dos animais.
Concluindo que o resultado da infeco depende das caractersticas do parasito infectante e da
combinao de alelos presentes em cada linhagem de camundongo, incluindo fatores imunolgicos e
no-imunolgicos.
Vrios mtodos de estudo (familiar, de populao e mapeamento de genes em modelos
experimentais) tm sido utilizados para mapear e identificar genes ou lcus relevantes, que
influenciam na resistncia ou suscetibilidade s infeces. Dentre eles, o estudo de populao tem
contribudo tambm com informaes evolucionrias. Em particular, tem sido estabelecido que
doenas causadas por infeces parasitrias podem agir com uma forte influencia seletiva na
diversidade gentica da populao exposta, favorecendo a sobrevivncia de indivduos mais
resistentes doena. (CAMPINO et al., 2006).
Os primeiros estudos de gentica foram desenvolvidos em modelos experimentais, nos quais
foi possvel um maior controle de variveis ambientais (estado nutricional, condies climticas,
outras infeces) e parasitrias (heterogeneidade, tamanho do inoculo), comprovando que o
componente gentico est fortemente associado suscetibilidade s doenas. Um exemplo clssico

foi quando Bradley et al., (1979) identificaram o locus lsh do cromossomo 1 que controla a rpida
multiplicao de Leishmania donovani em camundongos.
Os estudos iniciais da gentica humana e suscetibilidade s infeces parasitrias comearam
com observaes da alta prevalncia de alelos mutantes do gene da -globina em reas de alta
endemicidade para malria, levando a hiptese de que esses alelos eram protetores contra a
infeco por Plasmodium. Desde ento, vrios estudos genticos tm sido desenvolvidos, com o
objetivo de identificar passos crticos no processo patognico e para determinar novos alvos para
vacinas e quimioterapias (DESSEIN et al., 2001)
No decorrer dos anos, houve grande interesse em associar genes relacionados resposta
imunolgica, com genes do antgeno leucocitrio humano (HLA) e genes que codificam produtos da
resposta imunolgica, com doenas infecciosas parasitrias. Estudos comprovaram a ao de vrios
componentes genticos na susceptibilidade de doenas como malria, esquistossomose e
leishmaniose, e com menos progresso , na filariose, oncocercose, ascaridase, tripanossomase
africana e doena de Chagas (CAMPINO et al., 2006)
O gene HLA, cuja funo apresentar antgenos ao sistema imunolgico, teve hapltipos
associados com doena heptica grave em indivduos com esquistossomose (SECOR et al., 1996;
HIRAYAMA, 2002), leishamaniose cutnea em indivduos de rea endmica (LARA et al., 1991;
OLIVIO-DIAZ et al., 2004) e resistncia durante a malria grave (HILL et al., 1991). Outros estudos
associaram ao HLA a filariose linftica (YAZDANBAKHSH et al., 1995), oncocercose (MURDOCH et al.,
1997) e doena de Chagas (FERNANDEZ-MESTRE et al., 1998; NIETO et al., 2000)
Genes de produtos da resposta imune tambm apresentam grande importncia devido ao
papel destas molculas na defesa do hospedeiro e na patognese de doenas. Polimorfismos do
gene da sintaxe do xido ntrico (NOS) do tipo 2 foram associados proteo malria grave e reinfeco (KWIATKOWSKI, 2005).Variantes do gene do fator de necrose tumoral- (TNF-) foram
associados malria grave e risco de re-infecao (MCGUIRE et al., 1994; MCGUIRE et al., 1999;
MEYER et al., 2002; FLORI et al., 2005), risco aumentado em desenvolver leshmaniose mucocutnea
(CABRERA et al., 1955) e doena de Chagas (PISSETTI et al., 2011).
Variantes do gene do fator de necrose tumoral (TNF-) foram associados malria grave e
risco de re-infeco (McGUIRE ETA al., 1994; McGUIRE et al., 1999; MEYER et al., 2002; FLORI et al.,
2005), risco aumentado em desenvolver leishmaniose mucocutnea (CABRERA et al., 1955) e
tripanossomase africana em indivduos expostos (COURTINI et al., 2005).
Polimorfismos do gene do interferon (IFN-) foram associados malria grave, risco
reduzido de desenvolver malria cerebral (CABANTOUS et al., 2005; KOCH et al., 2005) e controle da
doena heptica avanada em esquistossomose (CHEVILLARD et al., 2002) Variantes do gene da
interleucina 4 (IL-4) demonstraram afetar a produo de anticorpos contra antgenos malricos

(LUON et al., 2001) e controle da leishmaniose visceral. (MOHAMED et al., 2003). Um polimorfismo
do gene da interleucina -10 (IL-10) foi associado a menor risco de desenvolver tripanossomase
africana aps longos perodos de exposio ao parasito (COURTIN et al., 2005).
Pesquisas genticas so de grande importncia para o estudo das infeces parasitrias,
entretanto, muitos efeitos genticos ainda precisam ser elucidados na biologia destas doenas. Existe
um grande progresso no estudo do papel do gene da IL-10 no desenvolvimento de doenas autoimunes, virais e bacterianas, porm, pouco se sabe sobre os efeitos deste gene em doenas causadas
por parasitos como, por exemplo, a doena de chagas.
Diante disso os genes candidatos so para IL-4, IL-10, IL-12 p40, FcRIIa, iNOS e TNF-,
devido a suas funes biolgicas podem desempenhar um envolvimento protetor ou susceptvel na
doena de Chagas.

IL-4

A Interleucina 4 (IL-4) uma glicoprotena de 18 kDa, localizado na regio do cromossomo

5q31. Desempenha um papel importante na produo de imunoglobulina E (IgE), na atividades do
fator de crescimento celular de clulas T e mastcitos. (YOKOTA et al. 1986)
A IL4 produzida por clulas T, que regula a proliferao e diferenciao de uma variedade
de clulas. Ele modula a atividade destas clulas aps a ligao aos receptores da superfcie celular.
A citocina IL-4 faz parte da resposta Th2, sendo uma das principais desse padro de resposta.
Entretanto, algumas clulas Th1 podem produzi-la em pequena quantidade. Ela induz a proliferao
e diferenciao dos linfcitos B, que aumenta a expresso de MHC II. Tem ao inclusive na
expresso dos receptores com alta afinidade para a imunoglobulina E (IgE), mastcitos e basfilos.
Agindo sobre os linfcitos T, B, NK, mastcitos, sinovicitos e clulas endoteliais, usando a via
JAK/STAT. Induz a diferenciao de linfcitos-B para produzir IgG e IgE. Atua sobre macrfagos
ativados, reduzindo os efeitos das citocinas IL-1, FNT, IL-6 e IL-8, e inibindo a produo de radicais
livres de oxignio. Alm disso, aumenta a suscetibilidade dos macrfagos aos efeitos dos
glicocorticoides (SOMMER; WHITE, 2010; CURFS; MEIS; HOOGKAMP-KORSTANJE, 1997)
A IL-4 tem potencial teraputico em muitas situaes clnicas, como, por exemplo, em
psorase, osteoartrite, linfoma e asma (KURTZ ET AL., 2007)
A substituio do nucleotdeo (C-T) na posio -590 da regio promotora do gene da IL-4 est
presente 27% dos caucasoides. Sendo que o alelo IL-4 -590T foi associado com

a expresso

aumentada do gene in vitro e com maiores nveis de IgE in vivo. (ROSENWASSER et al., 1995). O alelo
IL-4 -590T foi associado com asma, rinite e atopia em crianas com risco para doenas alrgicas
(MARSH et al., 1994). Trabalho de Burchard et al., 1999 tambm associou o alelo T com baixos

valores de volume expiratrio em pacientes com asma. Esses dados sugerem que o polimorfismo C590T poderia influenciar a gravidade da asma.
Kotanides e Reich (1996) identificaram uma STAT6 especfica de ligao a ADN local alvo no
promotor do gene do receptor de IL4 (IL4R) e mostraram que a IL4 STAT6 ativa a expresso dos
genes atravs deste local.
Hunt et al . (2000 ) analisou os polimorfismos no gene IL4 na doena de Graves e no
hipotireoidismo auto-imune. A anlise mostrou uma proporo reduzida do alelo T na variante de
polimorfismo do promotor de IL4 (- 590C -T), em pacientes com Graves e por todo o grupo de
pacientes de hipotireoidismo auto imune em comparao com o grupo de controle. Isto refletiu em
uma reduo no gentipo heterozigoto nos grupos de pacientes , quando comparada com os
controles. Os autores concluram que a IL4 uma variante , ou um gene intimamente ligado , tem um
efeito de proteo modesto contra o desenvolvimento da doena da tiride auto-imune,
particularmente GD.
Kawashima et ai. (1998) investigaram ligao e associao entre marcadores do gene em
dermatite 5q31 -33 e atpica em 88 famlias com dermatite atpica japoneses. Anlise par de irmos
afetados sugere ligao entre o gene IL4 e dermatite atpica (LOD = 2,28 ) . Testes de desequilbrio
de transmisso mostrou uma transmisso significativamente preferencial a dermatite atpica prole
do alelo T do polimorfismo a - 590C / T do gene de IL4 ( p = 0,001). A comparao de caso-controle
sugerem uma associao genotpica do gentipo T / T com dermatite atpica (odds ratio = 1,88 , p =
0,01). Uma vez que o alelo T pode estar associada com o aumento da actividade do promotor do
gene de IL4 em comparao com o alelo C , Kawashima et ai. (1998 ) sugeriram que as diferenas
genticas na actividade de transcrio do gene de IL4 pode influenciar a predisposio a dermatite
atpica .
Zee et ai. (2004) coletaram amostras de DNA no incio do estudo , em uma coorte
prospectiva de 14.916 homens inicialmente saudveis americanos. Os autores ento genotipados 92
polimorfismos de 56 genes candidatos entre os 319 indivduos que , posteriormente, desenvolveram
AVC isqumico e entre os 2.092 indivduos que permaneceram livres de doena cardiovascular
relatados ao longo de um perodo de seguimento mdio de 13,2 anos. Dois polimorfismos
relacionados com a inflamao, val640 -to -leu no gene SELP ( 173.610,0002 ) e uma transio 582C T no gene IL4 , foram encontrados para ser preditores independentes de relao de acidente vascular
cerebral (odds tromboemblica de 1,63 , p = 0,001 , e as probabilidades proporo de 1,40, P =
0,003, respectivamente).

IL-10

Interleucina 10 (IL-10) uma citocina com funo antiinflamatria, produzida por macrfagos
e clulas mononucleares, cujo gene est localizado no cromossomo 1q31-32, com tamanho
aproximado em 5,2 kb do genoma do DNA contendo 5 xons (PALMER et al., 2003). Tem papel na
regulao da imunidade celular quanto humoral, regulando a liberao de macrfagos e citocinas
pr-inflamatrias com a IL-1, IL-6, IL-8 e fator estimulador de colnia de granulcitos, fator de
necrose tumoral alfa e consequentemente efeito imunossupressor sobre as clulas T, moncitos e
macrfagos. Suprimindo a Th1, que promove a ativao celular e inibindo a apoptose das Clulas B.
(MOORE et al., 2001).
A IL-10 foi originalmente descrita como um fator inibidor de sntese de interferon gama
(FIORENTINO et al., 1991). Essa citocina expressa em vrios subtipos de linfcitos T, macrfagos,
moncitos, clulas dendrticas, mastcitos, linfcitos B, eosinfilos, queratincitos, clulas epiteliais e
vrias linhagens de clulas tumorais (MOORE et al., 2001). Dentre suas principais funes biolgicas
esto: limitar ou anular a resposta inflamatria, bloquear a secreo de citocinas pr-inflamatrias e
regular a diferenciao e proliferao de vrias clulas imunolgicas como os linfcitos T, linfcitos B,
clulas natural killer (NK) e mastcitos (ASADULLAH et al., 2003).
Como a proteo imune contra o T.cruzi envolve a produo de xido ntrico (VESPA et al.,
1994). No incio da infeco, clulas NK produzem IFN- e direcionam um mecanismo microbicida
frente ao T. cruzi, ao induzir a sntese de NO nas clulas macrocticas (MUNOZ-FERNANDES et al.,
1992b). Assim como o IFN-, o TNF- tambm so capazes de induzir a ativao de macrfagos
(SILVA et al., 1991), enquanto que, o TGF- e a IL-10 inibem essa ativao. Dessa forma uma alta
produo de IL-10 proprocionaria uma susceptibilidade para o agravamento da Doena de Chagas.
Cerca de 20 SNPs foram descritos na regio promotora da IL-10. Dentre eles, os mais
estudados esto situados nas posies -1082 (G/A), -819 (C/T) e -592 (C/A) do stio inicial da
transcrio. Estes polimorfismos se combinam formando hapltipos: ACC, GCC, ATA e GTA, sendo o
ultimo extremamente raro na populao. Os polimorfismos das regies -819 e -592 esto em
desequilbrio de ligao, ou seja -819 C e -592C so herdados juntos, e o mesmo acontece para 819/T e -592A. (TURNER et al., 1997). Um estudo realizado com brasileiros do Rio de Janeiro e ndios
Terena do Centro-Oeste do Brasil comprovou o desequilibrio de ligao entre as regies -819 e -592
em 100% dos casos. (ALBUQUERQUE et al., 2004).
Turner et al. (1997), demonstraram que esses polimorfismos desencadeiam uma expresso
varivel do gene, determinada predominantemente pelo alelo -1082. Entretanto, tem sido difcil
determinar a relao exata entre o gentipo e o padro de expresso gentica correspondente
(LOWE et al., 2003; SUAREZ et al., 2003; WARLE et al., 2003). Os resultados so contraditrios,
dependem do tipo de ensaio, clula e estmulo utilizado. Portanto, ainda no totalmente claro qual
hapltipo/gentipo causa alta ou baixa produo de IL-10 (WARLE et al., 2003; OPDAL, 2004).

Vrios autores, utilizando ensaios in vitro e estratgias de manipulao de genes, em que a

regio promotora da IL-10 foi ligada ao gene da luciferase, encontraram o hapltipo GCC como maior
produtos de IL-10 e o ATA como menor, determinando assim, trs fentipos possveis: baixo
produtor ATA/ATA, produtor intermedirio ACC/ATA, ACC/ACC, GCC/ATA ou GCC/ACC e alto
produtor GCC/GCC (TURNER et al., 1997; CRAWLEY et al., 1999; MIYAZOE et al., 2002; REUSS et al.,
2002; SUAREZ et al., 2003).
Por outro lado, outros autores utilizando ensaios in vitro com PBMC (clulas monucleares de
sangue perifrico) e sangue total, encontraram associao entre maior produo de citocina e o alelo
-1082A (KEIJSERS et al., 1997, 1998; ESKDALE et al., 1999; WARLE et al., 2003). Bozzi et al. (2006)
observaram, por citometria de fluxo, que indivduos -1082G/G apresentam quatro vezes menos
clulas produtoras de IL-10 que indivduos G/A e A/A. Um ensaio utilizando estratgias de
manipulao de genes, em que a regio promotora da IL-10 foi ligada ao gene da luciferase e
expressas clulas B transformadas, demonstrou que a atividade de transcrio do gene
predominantemente regulada pelo polimorfismo na posio -1082, onde a troca do nucleotdeo G
pelo A aumenta em 2 vezes a capacidade de transcrio. Porem este mesmo trabalho no observou o
mesmo efeito com culturas de PBMC estimuladas com concavalina A (REES et al., 2002).
A diferena de expresso entre os gentipos deve ocorrer provavelmente pela alterao de
ligao a fatores de transcrio. O polimorfismo da regio -1082 est localizado entre uma sequencia
de ligao a um fator de transcrio ETS-like (KUBE et al., 1995). Sequencias com o gentipo -1082A
apresentam maior afinidade a fatores nucleares de moncitos que sequencias com -1082G,
sugerindo diferena de afinidade de ligao entre os genes.
A patognese de doenas infecciosas graves determinada, em parte, pela intensidade da
resposta inflamatria, que varia entre indivduos e que pode ser regulada a nvel gentico. Culturas
de clulas sanguneas humanas estimuladas com LPS (lipopolissacardeo) mostram uma grande
variao interindividual na secreo da IL-10 e cerca de 50 a 75% dessa variabilidade explicada por
fatores genticos (REUSS et al., 2002).
Estas diferenas genticas e, portanto, a capacidade de produo diferenciada, tem sido
associada com vrias doenas. Em duas populaes diferentes do Norte e Sul da Itlia foi encontrada
uma frequncia significativamente aumentada de -1082G/G entre indivduos com idade avanada
em relao a controles e pacientes com infarto agudo do miocrdio. Ao mesmo tempo, a frequncia
de -1082A/A foi significativamente maior em pacientes que sofreram infarto agudo do miocrdio em
relao aos grupos controle e de idade avanada. O autor conclui que o gentipo -1082G/G
protetor contra o infarto agudo do miocrdio e possivelmente um parmetro determinante para a
longevidade. (LIO et al., 2004)

Summers et al. (2000) demonstraram que o hapltipo ATA, especialmente o alelo -592A, foi
significativamente mais frequente em um grupo de 23 casos de sndrome de morte subida infantil
(SIDS). Este grupo props que o dficit de IL-10, devido ao polimorfismo, poderia contribuir com a
SIDS pela iniciao tardia de produo de anticorpo protetores e pela baixa capacidade de inibir
produo de citocinas inflamatrias (SUMMERS et al., 2000). Entretanto, em um estudo maior,
OPDAL et al., (2003) encontraram associao entre o mesmo hapltipo com morte sbita infantil de
causa infecciosa, porm no encontraram a mesma associao com SIDS (OPDAL et al., 2003). Estes
trabalhos evidenciam a importancia qualitativa e quantitativa na escolha da casustica do estudo.
Oral et al. (2006) encontraram frequencia allica de -1082G significantemente mais comum
entre pacientes com tuberculose em relao a controles saudveis. Diminuio da frequncia do
alelo -1082 parece estar correlacionada com progresso na tuberculose pulmonar (SCOLA et al.,
2003). Recentemente um estudo demonstrou correlao entre o gentipo -1082/A

com

tuberculose pleural, que uma forma autolimitada da doena. (HENAO et al, 2006). Estes autores
sugerem que este polimorfismo pode afetar a suscetibilidade tuberculose e aumentar o risco de
desenvolver doena.
Estudos com indivduos com pneumonia mostraram que o gentipo -1082 G/G est correlacionado
com doena mais grave e maior risco de choque sptico (GALLAGHER et al., 2003; SCHAAF et al.,
2003). Outro estudo com pacientes em estado crtico admitidos em unidade de terapia intensiva, o
alelo -292A foi associado com baixa produo de IL-10 e correlacionado com alta mortalidade (LOWE
et al., 2003). Novamente diferenas na casustica mostraram resultados diferentes.
Outras doenas foram correlacionadas aos polimorfismos do gene da IL-10: artrite
reumatoide juvenil, lpus eritematoso, diabetes, doena inflamatria intestinal, evoluo clnica de
doenas neoplsicas como linfomas de no-Hodgkin, ocorrncia de abortos de repetio. (CRAWLEY
et al., 1999; TAGORE et al., 1999; GIBSON et al., 2001; DAHER et al., 2003; LECH-MARANDA et al.,
2004; TSIAVOU et al., 2004)
IL-10 um potente inibidor da ativao de macrfagos e outras clulas polimorfonucleares.
Esta inibio resulta na reduo na expresso de citocinas pr-inflamatrias como TNF-, IL-1, IL12, IL-6 e fator de proliferao de granulcitos/maccrfagos (GMCSF); de enzimas inflamatrias
como ciclo-oxigenase 2 e sintease indutvel do xido-ntrico (iNOS); e quimiocinas como RANTES,
MIP1 e IL-8, portanto, limitando o curso da resposta inflamatria pela reduo da ativao e
recrutamento de vrias clulas (MOORE et al., 2001). O efeito inibitrio da IL-10 tambm est
associado liberao de receptores solveis de TNF- e do antagonista do receptor da IL-1 (JENKINS
et al., 1994; JOYCE et al., 1994).
Uma caracterstica chave de capacidade imunossupressiva da IL-10 a eficcia em inibir a
ativao de clulas T durante a apresentao de antgeno, atravs da inibio de expresso de MHC-

II (complexo de histocompatibilidade principal), CD80 (B7-1) e CD86 (B7-2) em macrfagos e clulas

dendrticas (DE WAAL et al., FIORENTINO et al, 1991; DING et al., 1993; CHANG et al., 1995). Alm
destes efeitos indiretos sobre as clulas T, via inibio da funo das clulas apresentadoras
profissionais (APCs), a IL-10 apresenta efeitos diretos sobre esta clula. Atividades inibitrias foram
mostradas em linfcitos T CD4+ pela supresso da produo de IL-2, IFN-, IL-4 e IL-5 (DE WAAL et al.,
1993; TAGA et al., 1993; SCHANDENE et al., 1994). Esta citocina apresenta ainda um papel direto na
diferenciao de clulas T regulatrias (T reg), e esse papel parece ser controlado por APCs que
produzem IL-10 e expressam molculas estimulatrias tolerognicas (WAKKACH et al., 2003).
Os efeitos da IL-10 em clulas B so mais estimulatrios. IL-10 aumenta a sobrevivncia e
um potente cofator para a proliferao de precursores de clulas B e clulas B maduras (ROUSSET et
al., 1992). Alm disso, essa citocina tambm atua na diferenciao e na escolha de isotipos nestes
linfcitos. (BURDIM et al., 1995).
Camundongos deficientes em IL-10 apresentam uma resposta altamente polarizada para Th1
e desenvolvem colites fatais, sustentando o papel essencial desta citocina no balano de citocinas
(ETLING et al., 2007). A administrao de IL-10 diminui a mortalidade de camundongos durante a
endotoxemia induzida atravs da inibio de super-expresso de TNF- (GERARD et al., 1993). A
potncia dos efeitos antiinflamatrios da IL-10 tem sido demonstrada em vrios outros modelos
experimentais de inflamao como artrite induzida por colgeno (WALMSLEY et al., 1996) e
encefalite auto-imune (CUA et al., 1996)
Devido a essa propriedade de inibir respostas inflamatrias dominantemente Th1, esta
citocina foi por muito tempo considerada como uma citocina do padro Th2. Atualmente, sabe-se
que, a IL-10 uma das principais citocinas produzidas por clulas T regulatrias que so clulas com
funes imunossupressores e so capazes de inibir tanto o desenvolvimento de respostas de clulas
Th2 quanto o desenvolvimento de respostas de clulas Th1 efetoras (COTTREZ et al., 2000; AKDIS et
al., 2004)
Estudos na tentativa de esclarecer o papel das clulas T reguladoras e da IL-10 tm sido
realizado em diversas situaes e patologias. Como a associao da IL-10 alergia alimentar, estudo
realizado por Scott-Taylor e colaboradores (2005) citado por VAN DER VELDEN, et al., 2001 que ao
extrair linfcitos de crianas sensibilizado a diversos alimentos e ao estimular estes linfcitos in vitro
com outras substncias constataram reduo nos nveis de IL-10 e IFN-G. Contrastando a essa
diminuio, houve aumento significativo da IL-4. Corroborando com esta hiptese outra pesquisa
avaliando o risco de crianas desenvolverem doenas atpicas constatou reduo dos nveis de IL-10.
Estudos demostram que o polimorfismo da IL-10 na posio -571 tem relao com altas
concentraes de IgE, levando a uma alterao na resposta inflamatria e desencadeando
fenmenos alrgicos. (HOBBS et al., 1998). Trabalho desenvolvido por Turner e colaboradores

(1997), relata que os nveis da IL-10 tm influencia do polimorfismo da IL-10 nas posies -1082 e 819. Tambm h registro de uma pesquisa com crianas japonesas no qual avaliariam a relao dos
nveis da IL-10 com a gravidade da alergia alimentar e eczema atpico, no qual constataram baixa
expresso dessa citocina associada com concentraes de IgE e gravidade na alergia alimentar.
(NEGORO et al., 2006)

IL-12

A gerao de imunidade mediada por clulas contra diversos agentes infecciosos envolve a
produo de interleucina-12, um sinal chave do sistema imune inato. No entanto, para muitos
patgenos, as molculas que induzem a produo de IL12 por macrfagos e os mecanismos pelos
quais eles assim permanecem indefinidos. Brightbill et ai. (1999) demonstraram que as lipoprotenas
microbianas so potentes estimuladores de produo de IL12 por macrfagos humanos e que a
induo mediado pelos receptores toll-like (TLR). Vrias lipoprotenas estimulam a transcrio
dependente de TLR-induzvel da xido ntrico sintase e a produo de xido ntrico. Ativao de TLRs
pelas lipoprotenas microbianas pode iniciar mecanismos de defesa inata contra patgenos
infecciosos.
O gene candidato da IL-12 um candidato codifica as citocinas Th1, que diferencia as clulas
NK e TCD4+ e secreo de IFN-. (TRINCHIERI, 2003). Estudo em modelos de camundongos, foi
mostrado que a IL-12 no somente inibe a tumorignese como tambm induz a regresso do tumor
por promover a imunidade adaptativa por resposta citotxica. (SANGRO et al., 2005).
A IL-12 um heterodmero (IL-12 p70) composto por duas subunidade (p35 e p40), localizada
no cromosso 5q31 - q33 codificada pelos genes do polimorfismo da IL12A e IL12B (MAILLIARD et al.,
2003). Estudo da associao gentica destes dois loci esta relacionada com vrias desordens imunes,
infeces, auto-imunidade e ao cncer. (HOFFMAN et al., 2008) . Uma alterao de nucleotdeo da
1188 A para 1188 C na regio 3 no tradutora do locus IL12B (HUANG; CANCILLA; MORAHAN, 2000)
est associada com a produo diminuda de citocinas (STANILOVA; MITEVA; PARAKOVA, 2007) e foi
associada com a susceptibilidade do cncer cervical em vrios grupos de populao (HAN, et al.,
2008; CHEN et al., 2009; KORDI; SHEKARI; SURI, 2009).
Tambm h trabalho no qual o alelo C da IL-12 +1188 aumenta o risco da incidncia do
carcinoma nasofaringe (WEI, 2009). Este polimorfismo tinha sido mostrado previamente para ser
funcionalmente relevante , o tipo IL-12 1188 AA gentipo selvagem est relacionado com a
expresso relativamente mais elevada de IL -12 de citocina do que com os gentipos AC e CC no ma
infeco pelo Epstein Barr (MORAH et al., 2001) e em pacientes com cncer (ZHAO, 2009).

FCGAMMA

As imunoglobulinas da classe G (IgG) realizam vrias funes biolgicas devido a sua

interao com diversos tipos celulares. Sendo que isso acontece pela ligao com os domnios Fc
(fragmento cristalizvel) da IgG com receptores especficos (FcR: Fcgamma receptors) presentes nas
membranas das clulas do sistema imune. (Binstadt et al. 2003, Nimmerjahn & Ravetch 2006).
Os FcR so glicoprotenas de membrana, descritas h mais de 30anos. No homem, todos os
FcR fazem parte da superfamlia das imunoglobulinas e as trs principais identificadas so: FcRI
(CD64), FcRII (D32) e FcRIII (CD16). Estas classes de FcR so codificadas pro oito genes distintos
localizados no cromossomo 1, nas bandas 1p13 e q21 (FcRI), na banda 1q22 (FcRII e FcRIII).
(DAERON, 1997). Todos os FcR de cadeia so receptores de baixa afinidade (FcRIIb, FcRIIa/c e
FcRIIIb).
Durante a dcada passada aumentou o interesse no papel do FcR em leuccitos, uma vez
que estes receptores oferecem uma importante ponte entre a resposta imune humoral e celular.
Dependendo da ligao da IgG aos FcR estimula uma variedade de respostas biolgicas, que
dependem do tipo celular, do tipo de receptor Fc e da natureza do complexo de IgG. (VAN DE
WINKEL; CAPEL, 1993). Estas respostas podem agir sobre a eliminao de antgenos atravs da
fagocitose, citotoxidade celular dependente de anticorpo, gerao de espcies reativas de oxignio,
liberao de enzimas lisossomais, depurao de imunocomplexos e regulao da produo de
anticorpos (DAERON, 1997). Conforme estudos, a funo do FcR tambm depende do polimorfismo
gentico que ocasiona variaes entre os indivduos (RASCU et al., 1997), bem como gerao de
formas solveis de FcR (GALON et al., 1995) e ao sinergismo com outros receptores. (ZHOU;
BROWN, 1994).
Os FcR participam da regulao imunolgica na patognese de reaes alrgicas, autoimunes e inflamatrias (KIMBERLY; SALMON; EDBERG, 1995). Em consequncia da sua importncia
ao sistema imune, h um grande interesse cientfico e clnico, na busca de descobertas sobre a
susceptibilidade s doenas, a fisiopatologia e a interveno teraputica. (RASCU et al., 1997;
KIMBERLY; SALMON; EDBERG, 1995)
Entre as trs categorias de FcR de baixa afinidade (FcyRI, FcyRII e FcyRIII), o polimorfismo
na FcRII tem sido estudado extensivamente pois amplamente distribudo entre as clulas. (VAN
DE WINKEL; CAPEL, 1993; WARMERDAM et al., 1991). Existem trs genes (A, B e C) para este
receptor e seis RNAs-m diferentes (a1, a2, b1, b2, b3 e c) so transcritos. Porm somente o FcRIIa2
(solvel), o FcRIIa1 (transmembrana) e duas isoformas do FcRIIb (b1 e b2) tm sido demonstrados
in vivo. (BROOKS et al., 1989).

O FcRII liga IC de IgG1 e IgG3, mas interage de maneira fraca com a IgG4. Dependendo da
ligao IgG2 do polimorfismo do FcRIIa, quer apresenta duas variantes alotpicas: o FcRIIa- R131
(arginina) e o FcRIIa H131 (histidina 131). A troca de um aminocido na posio 131 do segundo
domnio EC interfere na ligao da IgG ao receptor. (WARMERDAM et al., 1991). A IgG2 humano ligase eficientemente a FcIIa-His/His131 mas no FcRIIa-Arg/Arg131, embora ambos os alotipos
FcRIIa interagir com IgG1 e IgG3. FcRIIa particularmente importante neste contexto, uma vez que
nenhuma das outras classes FcR ligam IgG2 humana de forma eficiente (VAN DE WINKEL; CAPEL,
1993; WARMERDAM et al., 1991).
O polimorfismo do FcRIIa (CD32) muito estudado devido as suas implicaes clnicas.
Principalmente pela variao allica pela mutao de um nico aminocido na posio 131, sendo
crtico para a ligao da IgG2. O Polimorfismo de um nico nucleotdeo do FcRIIa localizado no
cromossomo 1q23 (Callanan et al., 2000) pode resultar em variaes na resposta imune e conferir
risco para algumas doenas (KYOGOKU et al, 2002).
As diferenas na distribuio da FcRIIa alotipos foram identificados atravs diferentes
grupos tnicos (RASCU et al., 1997) . Essa diferena levanta a importncia que este polimorfismo no
gene FcRIIa humana nas populaes, bem como o impacto do polimorfismo na evoluo da infeco
e manifestao clnica da doena . A importncia clnica do polimorfismo FcRIIa foi avaliada por
infeces bacterianas encapsuladas, em que a IgG2 desempenha um papel crtico na defesa do
hospedeiro . Vrios estudos de caso-controle de base hospitalar recentes tm mostrado uma
associao entre FcRIIa-His/His131 e proteo contra infeces por bactrias encapsuladas,
enquanto a IgG2 de ligao FcRIIa-Arg/Arg131 est associado com o aumento da suscetibilidade a
esses patgenos (MUSSER; KROLL; GRANOFF, 1990; SANDERS et al., 1994; YEE et al., 200). Apesar de
sua associao com susceptibilidade aumentada a infeces bacterianas encapsulados , a frequncia
do FcRIIa - Arg/Arg131 gentipo permanece relativamente estvel em populaes humanas.
A subclasse IgG2 essencial para a proteo do indivduo contra bactrias encapsuladas
(Neisseria meningitidis e Haemophilus influenzae). (KIMBERLY; SALMON; EDBERG, 1995). Os
neutrfilos de indivduos homozigotos para FcRIIa H/H131 fagocitam bactrias opzonizadas por
IgG2 significativamente melhor do que as clulas FcRIIa R/R 131(SANDERS et al., 1995).
O polimorfismo do FcRIIa correlaciona-se com a atividade da nefrite e os nveis sricos de
imunocomplexo. Havendo associao significativa entre o altipo R/R 131 e a nefrite lpica. (DUITS
et al., 1995). Algumas manifestaes do lpus eritematosos sistmico (LES), tais como anemia
hemoltica auto-imune e hipocomplementemia pronunciada, foram observadas com maior
frequencia em pacientes com o altipo R/R 131 (RASCU et al., 1997)
O polimorfismo do FcIIa tem sido descrito tambm para o risco de trombocitopenia induzida
por heparina. Caracterizada pela ativao das plaquetas mediada por FcRIIa na presena do soro do

paciente e heparina. A frequncia do altipo H/H 131 foi significativamente maior em pacientes
com trombocitopenia induzida por heparina (34,4%), comparada

com os pacientes no

trombocitopnicos. (BRANDT et al., 1995).

iNOS

O xido ntrico (NO) uma molcula mensageira, com diversas funes em todo o corpo. Est
implicado na neurotoxicidade associada a doenas neurodegenerativas, acidente vascular cerebral e
de regulao neural do msculo liso, incluindo o peristaltismo, ereo peniana, responsvel pelo
relaxamento vascular e regulao da presso sangunea. Em macrfagos, NO tem a aes
tumoricidas e bactericidas, como indicado pelo fato de que os inibidores da NO sintase (NOS)
bloqueiam estes efeitos. (Lowenstein et ai., 1992)
O gene NOS2 Foi mapeado por Marsden et al . (1994 ) ao cromossoma 17 , que refinados a
atribuio para 17q11.2 - q12.

1. HIPTESE
Devido a novos estudos, acredita-se que o polimorfismos em genes de citocinas podem ter
importncia protegendo ou colaborando para a patognese da cardiopatia chagsica crnica.
Esclarecendo a razo de alguns indivduos soropositivos permanecerem assintomticos, enquanto
outros progridem para situaes crnicas sintomticas.

Tnf

O fator de necrose tumoral alfa (TNF-), uma das mais importantes citocinas pr-inflamatrias, tem
papel essencial na patognese na resposta inflamatria aguda (reao de fase aguda) e est
envolvido na inflamao sistmica. (BEUTLER; GRAU, 1993). O gene do TNF- est localizado no
cromossomo 6p21.3, tem comprimento de aproximadamente 3 kb e contm quatro xons que
produzem protena transmembrana tipo II com 212 aminocidos e disposta em homotrmeros
estveis. (NEDWIN et al., 1985). Alm disso, o TNF- tem vrias funes na imunopatologia humana,
desde produzir inflamao, proliferao e diferenciao celular, tumorignese, replicao viral at
induzir a morte celular por apoptose. No nvel in vivo, observou-se um aumento nos nveis de TNF aps desafio com endotoxinas em voluntrios saudveis13 (MICHIE et al., 1988) e tambm em
pacientes com choque sptico devido tanto a bacteremia gram-postiva quanto a bacteremia gram-

negativa (CALANDRA et al., 1990). Por meio dessas anlises, principalmente em populaes
caucasianas, foi possvel identificar o principal polimorfismo gentico presente nas regies
reguladoras do gene que codifica o TNF-: -308 (GA). Essa transio de guanina para adenina
localizada no par de bases -308 do local de incio da transio foi observada em vrios estudos in
vitro, demonstrando que essa alterao polimrfica est associada a um aumento na secreo de
TNF- por macrfagos aps estmulo com lipopolissacardeo e que esse aumento potencial pode
conferir uma resposta semelhante, levando sepse clnica in vivo. (LOUIS et al., 1998).
Considerando ser amplamente aceito o fato de que o polimorfismo gentico varia entre grupos
tnicos, quaisquer estudos comparativos devem ser realizados dentro do mesmo fundo gentico19.
Contudo, continua sendo importante rever todos os principais polimorfismos relatados em qualquer
populao, a fim de demonstrar se possvel utilizar esses marcadores genticos como um risco
gentico universal para uma determinada condio clnica. Nesse sentido, realizamos o primeiro
estudo prospectivo em uma populao do sudeste asitico a avaliar se existe uma associao entre o
polimorfismo -308A do TNF e o desenvolvimento de sepse e choque sptico em pacientes peditricos
tailandeses.

Justificativa

A Doena de Chagas manifesta-se influenciada por muitos fatores ainda no totalmente

esclarecidos, e desencadeia em uma variedade de quadros clnicos. Vrias citocinas so detectadas
em pacientes chagsicos nas diversas formas da doena. Muitas destas tm efeito protetor e outras
esto relacionadas com gravidade da leso. Dessa forma, avaliamos a presena de polimorfismos
genticos para IL-4, IL-10, IL-12, FcRIIa, iNOS e TNF-, de cada indivduo para correlacionar a
presena ou ausncia do polimorfismo dos genes candidatos nos indivduos infectados e no
infectados e avaliar no grupo infectado a forma cardaca e indeterminada nos pacientes crnicos.
Assim, poderemos contribuir com o processo de entendimento dos principais genes
envolvidos na resposta ao T. cruzi.

Objetivos
OBJETIVO GERAL

Investigar a importncia de polimorfismos genticos (SNP) nos genes da IL- 4, IL-10, IL-12,
TNF-, FcRIIa e iNOS no desenvolvimento das formas clnicas da Doena de Chagas.

OBJETIVOS ESPECFICOS
Analisar a freqncia dos polimorfismos genticos (SNPs) comparando os grupos infectados
e controle; e no grupo de pacientes infectados, comparando os com forma Cardaca e Indeterminada
da Doena de Chagas em cada uma das posies dos seguintes genes:
+ 33 C/T do gene IL-4 (rs 2070874)
- 819 C/T do gene IL-10 (rs 1800871)
-1082 A/G do gene IL-10 (rs 1800896)
+ 1188 C/A do gene IL-12B (rs 3212227)
+ 131 A/G do gene FcRIIa (rs1801274)
1173 C/T do gene iNOS (rs1113283)

- 308 A/G do gene TNF - (rs 1800629)

Metodologia
Amostra de Estudo
Foram includos neste estudo 670 indivduos (sendo 295 do gnero masculino e 361 do sexo
feminino), todos maiores de 30 anos, que residem ou residiram em rea endmica para Doena de
Chagas (regio do Tringulo Mineiro), acompanhados no Ambulatrio de Cardiologia/Marcapasso e
Doena de Chagas do Hospital de Clnicas da UFTM. No perodo de Fevereiro de 2011 Abril de
2013. Foram excludos indivduos com sorologia positiva para HIV e doena autoimune.

Aspectos ticos
Este trabalho foi aprovado pelo Comit de tica em Pesquisa (CEP) da Universidade Federal
do Tringulo Mineiro (UFTM), sob protocolo nmero 2013.Todos indivduos envolvidos receberam
esclarecimentos a respeito da pesquisa e assinaram o termo de consentimento (Anexo 1).

Coleta sangunea e avaliao clnica e laboratorial

De cada paciente foram coletadas duas amostras de sangue (10mL e 5mL em cada tubo) por
TM

meio de puno venosa perifrica com agulhas e tubos de coleta a vcuo (BD VACUNTAINER ),

sendo um tubo contendo EDTA como anticoagulante e outro sem aditivo, respectivamente. A
presena ou ausncia da infeco por T. cruzi foi avaliada por hemaglutinao passiva (Wiener,
Brasil), ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) (Abbott, Brasil) e Imunofluorescncia Indireta.
Os testes foram realizados conforme descrio do fabricante e os resultados foram expressos
quantitativamente.
O grupo controle foi composto por 243 Indivduos com sorologias negativas e residentes em
rea endmica. Foram includos como casos positivos para T. cruzi os 372 indivduos com sorologia
positiva para pelo menos dois testes (citados acima), conforme normas vigentes do Ministrio da
Sade. Estes pacientes tiveram seus pronturios avaliados e, quando necessrio, foram realizados
exames complementares de eletrocardiograma, raio-X de trax, esofagograma, raio-X contrastado de
intestino e ecocardiograma. Em seguida, foram classificados nas formas clnicas da doena de
Chagas: cardaco, digestivo, indeterminado ou misto (cardiodigestivo). A caracterizao clnica dos
portadores da Doena de Chagas foi realizada pelo Dr. Maurcio Manuel Lhaguno Lazo de acordo
com os critrios estabelecidos no Consenso Brasileiro de Chagas, em 2005.

Purificao do DNA genmico

O DNA foi extrado do sangue dos pacientes utilizando o kit QIAamp DNA blood Maxi
(QIAGEN), seguindo instrues do fabricante. O sangue total (10 mL) colhido com EDTA foi
transferido para um tubo falcon de 50 mL, no qual foi adicionado 500 L de protease e
homogeneizado por inverso durante um minuto. Foram adicionados 12 mL de tampo de lise e o
tubo foi vortexado por 1 minuto. Aps incubao de 10 minutos em banho-maria a 70C, foram
adicionados 10 mL de Etanol 92% sob agitao. Em novo tubo falcon, foram colocadas as colunas de
extrao e a suspenso lisada previamente foi ento transferida para as colunas. Aps centrifugao
por 3 minutos a 3000 rpm. Acrescentou-se o tampo de lavagem 1 e centrifugou-se por 5000 rpm por
um minuto. O filtrado foi descartado, e adicionado 5mL do tampo de lavagem 2 na coluna e
centrifugao a 5000rpm por 15 minutos. A coluna foi transferida para um tubo falcon novo de 50mL,
acrescentou-se 350 uL de gua ultra pura (MILLIPORE) filtrada em filtro de 0,22 m e autoclavada.
Aps 20 minutos a temperatura ambiente, as amostras foram centrifugadas a 5000 rpm por 5
minutos. Repetiu-se novamente a adio da gua e a centrifugao. O filtrado foi ento retirado a
quantidade de DNA presente foi avaliada por absorbncia em equipamento GeneQuant II e
armazenamos a -20C para realizao do PCR em Tempo Real

qPCR e genotipagem
Para a genotipagem dos polimorfismos propostos foi utilizado o sistema TaqMan SNP
Genotyping Assays(Applied Biosystems, EUA), de acordo com as recomendaes do fabricante. As
amostras foram processadas pelo sistema de PCR Real-Time-7300 (Applied Biosystems) no
Laboratrio Multiusurio da UFTM.
Os polimorfismos escolhidos foram:
Gene da IL-4: rs2070874 posio 33 C/T (C -16176215-10; Applied Biosystems)

 Gene da IL-10: rs1800871 posio -819 T/C (C - 1747362-10; Applied Biosystems)

Gene da IL-10: rs1800896 posio -1082 A/G (C - 1747360-10; Applied Biosystems)
Gene do IL-12B : rs 3212227 posio 1188 C/A (C 2084793-10; Applied Biosystems)
Gene do FcRIIa : rs 1801274 posio 131 A/G (C 9077661-20; Applied Biosystems)
Gene da iNOS : rs1113283 posio 1173 C/T (C 1748189-10; Applied Biosystems)
Gene do TNF: RS 1800629 posio -308 A/G (C 7514879-10; Applied Biosystems)
As amostras anteriormente quantificadas foram ajustadas para concentrao de 5 ng/L. O
protocolo para a realizao do mix para PCR em tempo Real foi padronizado para uso em nosso
laboratrio. O mix continha:
- gua MILLI-Q estril, filtrada em filtro de 0,22m (0,5 L)
- Mix para sonda: Taqman Universal Pcr Master Mix (1,875 L)
- Sonda/primers especficos para os polimorfismos alvo (0,125 L)
Foi colocado 2,5 L do mix de PCR em Tempo Real em cada poo da placa (de 96 poos) e
adicionado 2,5 L de DNA no respectivo poo, homogenizando a amostra. A placa foi selada e
centrifugada rapidamente. Logo depois ela foi introduzida no aparelho de PCR em Tempo Real PCR
7300. E o programa foi configurado para a amplificao do fragmento de interesse, e escolhemos o
programa para realizao da curva e para a discriminao allica.
O programa de amplificao do fragmento de interesse se deu nas seguintes condies:
desnaturao inicial a 95C por 10 minutos, seguido de 40 ciclos sendo a desnaturao a 92C por 15
segundos e a hibridizao/extenso a 60C por um minuto.

Anlise Estatstica:
Foi montado um banco de dados no programa MS-Excel, cujos dados foram usados para
anlise estatstica com uso do programa GrandPrisma. As freqncias dos gentipos e alelos entre
os grupos foram analisadas pelo teste Chi-quadrado. Odds ratios (OR) com 95% de intervalo de
confiana foi calculado para uma tabela de contingncia 2x2.

Resutlados
Caracterizao das Amostras

Nesse estudo, foram analisados 670 indivduos provenientes de regio do Tringulo Mineiro,
classificados de acordo com a sorologia para T. cruzi em positiva ou negativa. Sendo 427 (63,7%)
soropositivos e 243 (36,3%) soronegativos para a doena de Chagas. Aqueles com sorologia positiva
para T. cruzi foram classificados de acordo com a forma clnica, segundo os critrios estabelecidos no
Consenso Brasileiro de Chagas em 2005. Dentre os 427 indivduos chagsicos, 238 (55,8%) foram
classificados em cardacos, 8 (1,9%) digestivos, 45 (10,5%) mistos, 130 indeterminado (30,4%) e 6
(1,4%) no puderam ser classificados por ausncia de exames complementares. Devido ao pequeno
nmero de indivduos com forma digestiva e por 6 indivduos no ter sido possvel classificar a forma
clnica, eles foram excludos das anlises. Considerando o nmero de indivduos soropositivo de 413.
Visto que os pacientes com a forma mista apresentam leso cardaca neste estudo eles
foram considerados no grupo cardiopata.

Do total de 656 indivduos, 361 (55 %) foram do gnero feminino e 295 (45%) do gnero
masculino. Dos indivduos do gnero feminino, 219 (33,4 %) apresentaram sorologia positiva e 142
(21,6 %) sorologia negativa para T. cruzi. Dos indivduos do gnero masculino, 194 (29,6 %) foram
soropositivo e 101 (15,4 %) soronegativo para T. cruzi (tabela 01).

Tabela 01 - Distribuio das frequncias das sorologias positiva e negativa para T. cruzi em relao
ao gnero dos indivduos da amostra.
Sorologia
Positiva

Negativa

Total

Gnero

Feminino

219

33,4

142

21,6

361

55,0

Masculino

194

29,6

101

15,4

295

45,0

Total

413

63,0

243

37,0

656

100

A mdia de idade da amostra foi de 62 anos, com desvio padro de 15,39. Tanto o grupo
chagsico como controle a mdia de idade foi similar. Inclusive no houve diferena entre os gneros
masculino e feminino. Dessa forma no houve diferena estatstica em relao a idade gnero ou
sorologia.
Classificados de acordo com gnero foram observados na forma cardaca, 113 (27,3 %)
indivduos do gnero feminino e 125 (30,3 %) do gnero masculino, na forma indeterminada 78 (18,9
%) femininos e 52 (12,6 %) masculinos e na forma mista, 28 (6,8 %) femininos e 17 (4,1 %)
masculinos (tabela 02).

Tabela 02 - Distribuio das frequncias das formas clnicas da doena de Chagas crnica, em
relao aos gneros feminino e masculino dos indivduos da amostra.
Formas Clnicas
Cardaca
Gnero

Indeterminada

Mista

Total

Feminino

113

27,3

78

18,9

28

6,8

219

53,0

Masculino

125

30,3

52

12,6

17

4,1

194

47,4

Total

238

57,6

130

31,5

45

10,9

413

100

Interleucina 10 (IL-10) regio promotora -1082

Realizado o polimorfismo da IL-10 posio -1082 G/A, obtivemos resultado para 519
indivduos. Sendo a frequncia para AA, AG e GG respectivamente, 218 (42%), 225 (43,4%) e 76
(14,6 %). A figura 1 ilustra a representao grfica dos resultados obtidos.

Figura 1 Distribuio allica da Interleucina -10 regio promotora -1082

Indivduos com sorologia negativa para a Doena de Chagas (n=171) apresentou a

distribuio dos gentipos: 78 (45,6%) AA; 57 (33,4%) AG e 36 (21%) GG. Mostrando significncia
(P<0,05) ao comparar com a sorologia positiva (n= 348) dos quais 140 (40,2%) eram AA; 168 (48,3%)
AG e apenas 40 (11,5%) foi GG. Frente a esta distribuio com significante diferena estatistica,
determinou-se o fator de risco o ORAG x AA= 1,642 (95% CI=1,0912,471). (Tabela 3)
Observando a frequncia dos alelos no houve diferena significativa entre as frequncias do
alelo A, nos grupos com sorologia positiva (64,4%) e sorologia negativa (62,3%). O alelo G
apresentou frequencia de 35,6% nos indivduos com sorologia positiva e 37,7% nos com sorologia
negativa.
Tabela 3 Distribuio da frequncia dos gentipos e dos alelos do polimorfismo da Interleucina 10
(IL-10) na regio promotora 1082 em indivduos com sorologia positiva e negativa para o
Trypanosoma cruzi.
Positivos
Polimorfismo

AA

-1082

AG

GG

Negativo

(n = 348)

(n = 171)

Gentipo

Frequncia

Gentipo

Frequncia

(%)

Alelos

(%)

Alelos

140

64,4 %

78

(40,2%)

(45,6%)

168

57

(48,3%)

(33,4%)

40

35,6%

36

Gentipo
2

Valor X p

Alelos
Valor

62,3%

0,0010*

37,7%

0,511

(11,5%)

(21,0%)

*ORAG x AA= 1,642 (95% CI=1,0912,471). Estatstica significativa para distribuio da frequencia dos
2

gentipos avaliandos usando o teste x . GraphPad Prism vero 5.00 para Windows, San Diego
California USA. O nvel de significncia adotada foi P<0,05.

No se observou diferena significativa quando a distribuio dos gentipos foi analisada pela
forma clnica nos pacientes positivos. Nos grupos dos pacientes com sorologia positiva e
apresentando alterao cardaca os gentipos AA, AG e GG, foram de 39% (92), 49,6% (117) e
11,4% (27), respectivamente. Similar resultado foi encontrado para o grupo indeterminado, onde os
gentipos AA, AG e GG apresentaram frequncia de 43,6% (51), 45,3% (53) e 11,1% (13),
respectivamente. Tambm no observou-se diferena signiicativa para os alelos em relao a forma
clnica. Na forma Cardaca a frequncia do alelo A foi de 63,8% e para o Alelo G de 36,2%. Resultado
parecido foi para o grupo dos indeterminados, cuja frequncia do alelo A foi de 66,2% e para o alelo
G de 33,8%.

Tabela 4 Gentipo e frequncia dos alelos para polimorfismo da Interleucina 10 (IL-10) na regio
promotora -1082 em indivduos com alterao cardaca e forma indeterminada para infeco por
Trypanosoma cruzi.

Polimorfismo

Indeterminada

(n = 236)

(n= 117)

Gentipos

Frequncia

Gentipo

(%)

Alelos

(%)

Alelos

92

63,8%

51

66,2%

AA

-1082

Alterao Cardaca

AG

GG

(39,0%)

(43,6%)

117

53

(49,6%)

(45,3%)

27

13

(11,4%)

36,2%

(11,1%)

Frequncia

Gentipo
2

Valor X p

0,6996

Alelos
Valor

0,5186

33,8%
2

Estatstica significativa para distribuio da frequencia dos gentipos avaliandos usando o teste x .
GraphPad Prism vero 5.00 para Windows, San Diego California USA. O nvel de significncia
adotada foi P<0,05.

IL-10 (-819)

Para o polimorfismo da Interleucina -10 regio promotora -819 T/C houve resultado para 504
indivduos. Sendo a frequncia para TT, TC e CC respectivamente, 65 (12,9%), 230 (45,6%) e 209
(41,5%). possvel constatar que a frequncia do alelo Y (gentipo CC) e para ambos (TC) foram
encontrados com maior frequncia.
Avaliando a sorologia verificou que indivduos negativo (n=170) o gentipo ficou 21 (12,4%)
TT, 82 (48,2%) TC e 67 (39,4%) CC. No havendo significncia (P<0,05) ao comparar com os

indivduos de sorologia positiva (n= 334) dos quais 44 (13,2%) eram TT, 148 (44,3%) TC e 142
(42,5%) foi CC. (grfico 5)
Observando a frequncia dos alelos no houve significncia entre positivo e negativo. Sendo
a frequncia do alelo T de 35,3% para sorologia positiva e 36,5% para a sorologia negativa. J o alelo
C ficou de 64,7% para os indivduos com sorologia positiva e 63,5% para os de sorologia negativa.

Tabela 5 Gentipo e frequncia dos alelos do polimorfismo da Interleucina 10 (IL-10) na regio

promotora -819 em indivduos com sorologia positiva e negativa para o Trypanosoma cruzi.
Positivos
(n = 334)

Polimorfismo

TT

TC

-819

CC

Negativo
(n = 170)

Gentipo

Frequencia

Gentipo

Frequencia

(%)

Alelos

(%)

Alelos

44

35,3 %

21
(12,4%)

148

82

(44,3%)

(48,2%)
64,7%

(42,5%)

Valor X p

Alelos
Valor

36,5%

(13,2%)

142

Gentipo

67

0,7045

0,7207

63,5%

(39,4%)
2

Estatstica significativa para distribuio da frequencia dos gentipos avaliandos usando o teste x .
GraphPad Prism vero 5.00 para Windows, San Diego California USA. O nvel de significncia
adotada foi P<0,05.

Os gentipos da forma clnica nos pacientes positivos, tambm no foram observados

diferena. No grupo dos pacientes com sorologia positiva e apresentando alterao cardaca o
gentipo TT, TC e CC, ficou respectivamente: 8,5% (29), 29,2% (99) e 28,9% (98). Similar resultado
foi encontrado para o grupo indeterminado para os gentipos TT, TC e CC, respectivamente: 4,7%
(16), 14,8 % (50) e 13,9 % (47). Tambm no houve diferena para os alelos em relao a forma
clnica. Alterao Cardaca a frequncia do alelo T foi de 34,7% e para o Alelo C de 65,3%. Resultado
parecido foi para o grupo dos indeterminados, cuja frequncia do alelo T foi de 36,3% e para o alelo C
de 63,7%.

Tabela 6 Gentipo e frequncia dos alelos para polimorfismo Interleucina 10 (IL-10) na regio
promotora -819 em indivduos com alterao cardiaca e forma indeterminada para infeco por
Trypanosoma cruzi.
Alterao Cardaca
Polimorfismo

-819

TT

Indeterminada

(n = 226)

(n = 113)

Gentipos

Frequncia

Gentipo

Frequncia

(%)

Alelos

(%)

Alelos

29

34,7%

16

36,3%

Gentipo
2

Valor X p

0,9238

Alelos
Valor

TC

CC

(8,5%)

(4,7%)

99

50

(29,2%)

(14,8%)

98

65,3%

(28,9%)

0,6907

47

63,7%

(13,9%)

Estatstica significativa para distribuio da frequencia dos gentipos avaliandos usando o teste x

GraphPad Prism vero 5.00 para Windows, San Diego California USA. O nvel de significncia
adotada foi P<0,05.

Fator de necrose tumoral (TNF-) regio promotora -308

Realizando o PCR em Tempo Real para o polimorfismo do TNF posio -308 G/A obtivemos
resultado para 580 indivduos. Sendo a frequncia para AA, AG e GG respectivamente, 16 (2,7%),
254 (43,8%) e 310 (53,5%). Conforme a distribuio da frequncia do gentipo observamos
frequncia para o alelo 2 (gentipo GG) e para ambos (gentipo heterozigoto AG).
Indivduos com sorologia para Chagas negativo (n=203) o gentipo ficou 7 (3,5%) AA, 64
(31,5%) AG e 132 (65%) GG. Havendo significncia devido ao P der dado <0,0001 (P<0,05) ao
comparar com os indivduos de sorologia positiva (n= 377) dos quais 9 (2,4%) foi AA, , 190 (50,4%)
AG e 178 (47,2%) GG. (grfico 7)
Como observado houve diferena entre os gentipos dos indivduos com sorologia positiva e
sorologia negativa. Diante disso, foi realizado o Odds do gentipo. Comparando odds entre gentipo
AA e gentipo GG do TNF-, foi encontrado odds de 1,602 com 95% confiana 1,194 at 2,150. J
odds entre AG e GG, foi de 2,202 com confiana 1,533 at 3,162. Tambm houve resultado ao
agruparmos os indivduos com o gentipo AA e AG comparando com os indivduos GG, cujo odds
ratio foi de 2,078 com confiana entre 1,461 at 2,956
Observando a frequncia dos alelos houve significncia entre positivo e negativo. Sendo a
frequncia do alelo G de 35,3% para sorologia positiva e 36,5% para a sorologia negativa. J o alelo
A ficou de 64,7% para os indivduos com sorologia positiva e 63,5% para os de sorologia negativa.

Tabela 7 Gentipo e frequncia dos alelos do polimorfismo do Fator de Necrose Tecidual (TNF) na
regio promotora 308 em indivduos com sorologia positiva e negativa para o Trypanosoma cruzi.
Positivos
Polimorfismo

-308

AA

Negativo

(n = 377)

(n = 203)

Gentipo

Frequencia

Gentipo

Frequencia

(%)

Alelos

(%)

Alelos

27,6 %

37,5%

Gentipo
2

Valor X p

Alelos
Valor

(2,4%)

(3,4%)

190

64

(50,4%)

(31,6%)

AG

GG

178

72,4%

0,0001*
0,0016*

132

(47,2%)

62,5%

(65,0%)

*ORAA x GG= 1,602 (95% CI=1,1942,150); ORAG x GG= 2,202 (95% CI=1,5333,162) e ORAA + AG

x GG=

2,078 (95% CI=1,4612,956) Estatstica significativa para distribuio da frequencia dos gentipos
2

avaliandos usando o teste x . GraphPad Prism vero 5.00 para Windows, San Diego California USA.
O nvel de significncia adotada foi P<0,05.

Os gentipos da forma clnica nos pacientes positivos, no foram observados diferena. No

grupo dos pacientes com sorologia positiva e apresentando alterao cardaca o gentipo AA, AG e
GG, ficou respectivamente: 2,4% (6), 50,6% (129) e 47,0% (120). Similar resultado foi encontrado
para o grupo indeterminado para os gentipos AA, AG e GG, respectivamente: 2,5 % (3), 50% (61) e
72,5% (58). Tambm no houve diferena para os alelos em relao forma clnica. Alterao
Cardaca a frequncia do alelo G foi de 72,4% e para o Alelo A de 27,6%. Resultado parecido foi para
o grupo dos indeterminados, cuja frequncia do alelo G foi de 72,5% e para o alelo A de 27,5%.

Tabela 8 Gentipo e frequncia dos alelos para polimorfismo do Fator de Necrose Tecidual (TNF) na
regio promotora 308 em indivduos com alterao cardiaca e forma indeterminada para infeco
por Trypanosoma cruzi.
Alterao Cardaca
Polimorfismo

(n = 255)

(n = 122)

Gentipos

Frequncia

Gentipo

Frequncia

(%)

Alelos

(%)

Alelos

AA

-308

Indeterminada

AG

GG

27,6%

(2,4%)

(2,5%)

129

61

(50,6%)

(50,0%)

120
(47,0%)

72,4%

58

Gentipo
2

Valor X p

Alelos
Valor

27,5%

0,9932

0,9569

72,5%

(47,5%)
2

Estatstica significativa para distribuio da frequencia dos gentipos avaliandos usando o teste x .
GraphPad Prism vero 5.00 para Windows, San Diego California USA. O nvel de significncia
adotada foi P<0,05
Interleucina 12

Para a IL-12 posio 1188 A/C de obteve resultado para 258 indivduos. Sendo a frequncia
para CC, CA e AA respectivamente, 21 (8,1%), 117 (45,4%) e120 (46,5%). (Figura 4)

Indivduos com sorologia para Chagas negativo (n=38) o gentipo ficou 2 (5,3%) CC, 21
(55,2%) CA e15 (39,5%) AA. No havendo significncia (P<0,05) ao comparar com os indivduos de
sorologia positiva (n= 220) dos quais, 19 (8,7%) foi CC, 96 (43,6%) CA e 105 (47,7%) eram AA.
(grfico 9)
Observando a frequncia dos alelos no houve significncia entre positivo e negativo. Sendo
a frequncia do alelo T de 35,3% para sorologia positiva e 36,5% para a sorologia negativa. J o alelo
C ficou de 64,7% para os indivduos com sorologia positiva e 63,5% para os de sorologia negativa.

Tabela 9 Gentipo e frequncia dos alelos do polimorfismo da Interleucina 12 (IL-12) na regio

promotora 1188 em indivduos com sorologia positiva e negativa para o Trypanosoma cruzi.
Positivos
Polimorfismo

AA

1188

AC

CC

Negativo

(n = 220)

Gentipo

(n = 38)

Gentipo

Frequencia

Gentipo

Frequencia

(%)

Alelos

(%)

Alelos

105

69,5 %

15

67,1%

(47,7%)

(39,5%)

96

21

(43,6%)

(55,2%)

19

30,5%

(8,7%)

Valor X p

Valor

0,6705

0,3880

Alelos

32,9%

(5,3%)

Estatstica significativa para distribuio da frequencia dos gentipos avaliandos usando o teste x

GraphPad Prism vero 5.00 para Windows, San Diego California USA. O nvel de significncia
adotada foi P<0,05

Os gentipos da forma clnica nos pacientes positivos, tambm no foi observada diferena. No grupo
dos pacientes com sorologia positiva e apresentando alterao cardaca o gentipo AA, AC e CC,
ficou respectivamente: 49% (76), 41,3% (64) e 9,7% (15). Similar resultado foi encontrado para o
grupo indeterminado para os gentipos AA, AC e CC, respectivamente: 41,4% (29), 52,9 % (37) e 5,7
% (4). Tambm no houve diferena para a frequncia dos alelos em relao forma clnica.
Alterao Cardaca a frequncia do alelo T foi de 34,7% e para o Alelo C de 65,3%. Resultado
parecido foi para o grupo dos indeterminados, cuja frequncia do alelo T foi de 36,3% e para o alelo C
de 63,7%.

Tabela 10 Gentipo e frequncia dos alelos para polimorfismo Interleucina 12 (IL-12) na regio
promotora 1188 em indivduos com alterao cardiaca e forma indeterminada para infeco por
Trypanosoma cruzi.
Alterao Cardaca
Polimorfismo

(n = 155)
Gentipos

Frequncia

Indeterminada

Gentipo

(n = 70)

Valor X p

Gentipo

Frequncia

Alelos
Valor

(%)
AA

AC

1188

CC

Alelos
76

(%)

69,7%

Alelos
29

(49%)

(41,4%)

64

37

(41,3%)

(52,9%)

15

30,3%

67,9%

0,2309

(9,7%)

0,6988

32,1%

(5,7%)
2

Estatstica significativa para distribuio da frequencia dos gentipos avaliandos usando o teste x .
GraphPad Prism vero 5.00 para Windows, San Diego California USA. O nvel de significncia
adotada foi P<0,05
FCGAMA (-)
Dos 656 indivduos estudados, foi realizado o polimorfismo do FcGAMMA posio 131 A/G de
270. Sendo a frequncia para AA, AG e GG respectivamente, 39 (14,4%), 126 (46,7%) e 105
(38,9%).
Indivduos com sorologia para Chagas negativo (n=39) o gentipo ficou 6 (15,4%) AA, 14
(35,9%) AG e 19 (48,7%) GG. No havendo significncia (P<0,05) ao comparar com os indivduos de
sorologia positiva (n= 231) dos quais 33 (47,7%) eram AA, 112 (43,6%) AG e 86 (8,7%) foi GG.
(tabela 11)
Observando a frequncia dos alelos no houve significncia entre positivo e negativo. Sendo
a frequncia do alelo A de 38,5% para sorologia positiva e 33,3% para a sorologia negativa. J o alelo
G ficou de 61,5% para os indivduos com sorologia positiva e 66,7% para os de sorologia negativa.

Tabela 11 Gentipo e frequncia dos alelos do polimorfismo do FcGAMMA na regio promotora 131 em indivduos com sorologia positiva e negativa para o Trypanosoma cruzi.

Polimorfismo

AA

Positivos (n = 231)

Negativo (n = 39)

Gentipo

Gentipo

Frequencia

Gentipo (%)

Valor X p

(%)

Alelos

33 (47,7%)

38,5 %

Frequencia

Valor

Alelos
6

Alelos

33,3%

(15,4%)
131

AG

112 (43,6%)

14

0,3177

(35,9%)
GG

86 (8,7%)

61,5%

19 (48,7%)

0,3814
66,7%
2

Estatstica significativa para distribuio da frequencia dos gentipos avaliandos usando o teste x .
GraphPad Prism vero 5.00 para Windows, San Diego California USA. O nvel de significncia
adotada foi P<0,05
Os gentipos da forma clnica nos pacientes positivos, tambm no foi observada diferena.
No grupo dos pacientes com sorologia positiva e apresentando alterao cardaca o gentipo AA, AG
e GG, ficou respectivamente: 14% (23), 51,2% (84) e 34,8% (57). Similar resultado foi encontrado
para o grupo indeterminado para os gentipos AA, AG e GG, respectivamente: 16,7% (12), 43 % (31)

e 40,3 % (29). Tambm no houve diferena para a frequncia dos alelos em relao forma clnica.
Alterao Cardaca a frequncia do alelo A foi de 39,6% e para o Alelo G de 60,4%. Resultado
parecido foi para o grupo dos indeterminados, cuja frequncia do alelo A foi de 38,2% e para o alelo
G de 61,8%.

Tabela 12 Gentipo e frequncia dos alelos para polimorfismo Interleucina FcGAMMA na regio
promotora 131 em indivduos com alterao cardiaca e forma indeterminada para infeco por
Trypanosoma cruzi.
Alterao Cardaca
(n = 164)

Polimorfismo

AA

AC

131

CC

Indeterminada
(n = 72)

Gentipos

Frequncia

Gentipo

Frequncia

(%)

Alelos

(%)

Alelos

23

39,6%

12

(14%)

(16,7%)

84

31

(51,2%)

(43,0%)

57
(34,8%)

60,4%

29

Gentipo
2

Valor X p

Alelos
Valor

38,2%

0,2309

0,6988

61,8%

(40,3%)
2

Estatstica significativa para distribuio da frequencia dos gentipos avaliandos usando o teste x .
GraphPad Prism vero 5.00 para Windows, San Diego California USA. O nvel de significncia
adotada foi P<0,05

Interleucina 4 (IL-4)

Dos 656 indivduos estudados, foi realizado o polimorfismo da Interleucina 4 (IL-4) na posio
33 C/T de 455. Sendo a frequncia para CC, CT e TT respectivamente, 259 (57%), 161 (35,4%) e 35
(7,6%).
Indivduos com sorologia para Chagas negativo (n=173) o gentipo ficou 107 (61,9%) CC, 50
(28,9%) CT e 16 (9,2%) TT. No havendo significncia (P<0,05) ao comparar com os indivduos de
sorologia positiva (n= 282) dos quais 152 (53,9%) eram CC, 111 (39,4%) CT e 19 (6,7%) foi TT.
(tabela 13)
Observando a frequncia dos alelos no houve significncia entre positivo e negativo. Sendo
a frequncia do alelo C de 73,6% para sorologia positiva e 76,3% para a sorologia negativa. J o
alelo T ficou de 26,4% para os indivduos com sorologia positiva e 23,7% para os de sorologia
negativa.

Tabela 13 Gentipo e frequncia dos alelos do polimorfismo da interleucina 4 (IL-4) na regio

promotora 33 em indivduos com sorologia positiva e negativa para o Trypanosoma cruzi.

Positivos
(n = 282)

Polimorfismo

CC

CT

33

Negativo

TT

(n = 173)

Gentipo

Frequencia

Gentipo

Frequencia

(%)

Alelos

(%)

Alelos

152

73,6 %

107

76,3%

(53,9%)

(61,9%)

111

50

(39,4%)

(28,9%)

19

26,4%

(6,7%)

16

Gentipo
2

Valor X p

0,0677

Alelos
Valor

0,3602

23,7%

(9,2%)
2

Estatstica significativa para distribuio da frequencia dos gentipos avaliandos usando o teste x .
GraphPad Prism vero 5.00 para Windows, San Diego California USA. O nvel de significncia
adotada foi P<0,05

Os gentipos da forma clnica nos pacientes positivos, tambm no foi observada diferena.
No grupo dos pacientes com sorologia positiva e apresentando alterao cardaca o gentipo CC, CT
e TT, ficou respectivamente: 53,1% (96), 40,3% (73) e 6,6% (12). Similar resultado foi encontrado
para o grupo indeterminado para os gentipos CC, CT e TT, respectivamente: 54,7% (58), 37,7 %
(40) e 7,6 % (8). Tambm no houve diferena para a frequncia dos alelos em relao forma
clnica. Alterao Cardaca a frequncia do alelo C foi de 73,2% e para o Alelo T de 26,8%. Resultado
parecido foi para o grupo dos indeterminados, cuja frequncia do alelo C foi de 73,6% e para o alelo T
de 26,4%.

Tabela 14 Gentipo e frequncia dos alelos para polimorfismo Interleucina 4 (IL-4) na regio
promotora 33

em indivduos com alterao cardaca e forma indeterminada para infeco por

Trypanosoma cruzi.
Alterao Cardaca
Polimorfismo

CC

33

CT

TT

Indeterminada

(n = 181)

(n = 106)

Gentipos

Frequncia

Gentipo

Frequncia

(%)

Alelos

(%)

Alelos

96

73,2%

58

73,6%

(53,1%)

(54,7%)

73

40

(40,3%)

(37,7%)

12
(6,6%)

26,8%

Gentipo
2

Valor X p

0,8913

Alelos
Valor

0,9207

26,4%

(7,6%)
2

Estatstica significativa para distribuio da frequencia dos gentipos avaliandos usando o teste x .
GraphPad Prism vero 5.00 para Windows, San Diego California USA. O nvel de significncia
adotada foi P<0,05

iNOS

Dos 656 indivduos estudados, foi realizado o polimorfismo da iNOS posio -1173 C/T de
370. Sendo a frequncia para CC, CT e TT respectivamente, 254 (68,6%), 104 (28,1%) e 12 (3,3 %).
Indivduos com sorologia para Chagas negativo (n=103) o gentipo ficou 67 (65%) CC, 33
(32,1%) CT e 3 (2,9%) TT. No observando diferena estatstica significativa (P<0,05) ao comparar
com a sorologia positiva (n= 267) dos quais 187 (70%) eram CC, 71 (26,6%) CT e apenas 9 (3,4%) foi
TT. (tabela 15)
Observando a frequncia dos alelos no houve significncia entre positivo e negativo. Sendo
a frequncia do alelo C de 83,3% para sorologia positiva e 81% para a sorologia negativa. J o alelo
T ficou de 16,7% para os indivduos com sorologia positiva e 19% para os de sorologia negativa.

Tabela 15 Gentipo e frequncia dos alelos do polimorfismo iNOS na regio promotora em

indivduos com sorologia positiva e negativa para o Trypanosoma cruzi.
Positivos
Polimorfismo

CC

-1173

CT

TT

Negativo

(n = 267)

(n = 103)

Gentipo

Frequncia

Gentipo

Frequncia

(%)

Alelos

(%)

Alelos

187

83,3 %

67

81%

(70,0%)

(65%)

71

33

(26,6%)

(32,1%)

9
(3,4%)

16,7%

Gentipo
2

Valor X p

Alelos
Valor

0,4652
0,5763
19%

(2,9%)
2

Estatstica significativa para distribuio da frequencia dos gentipos avaliandos usando o teste x .
GraphPad Prism vero 5.00 para Windows, San Diego California USA. O nvel de significncia
adotada foi P<0,05

Os gentipos da forma clnica nos pacientes positivos no houve diferena. Nos grupo dos
pacientes com sorologia positiva e apresentando alterao cardaca o gentipo CC, CT e TT, ficou
respectivamente: 73,6% (131), 23,6% (42) e 2,8% (5). Similar resultado foi encontrado para o grupo
indeterminado para os gentipos CC, CT e TT, respectivamente: 60,6% (57), 34,1% (32) e 5,3 % (5).
Ao analisar a frequncia dos alelos, houve significncia em os alelos C e T. Indivduos com sorologia
positiva e apresentando alterao Cardaca a frequncia do alelo C foi de 85,4% e para o Alelo G de
14,6%. Para o grupo dos indeterminados, cuja frequncia do alelo C foi de 77,7% e para o alelo T de
22,3%.

Tabela 4 Gentipo e frequncia dos alelos para polimorfismo da iNOS na regio promotora -1173 em
indivduos com alterao cardaca e forma indeterminada para infeco por Trypanosoma cruzi.

Alterao Cardaca
Polimorfismo

CC

-1173

CT

TT

Indeterminada

(n = 178)

(n= 94)

Gentipos

Frequncia

Gentipo

Frequncia

(%)

Alelos

(%)

Alelos

131

85,4%

57

77,7%

(73,6%)

(60,6)

42

32

(23,6%)

(34,1%)

14,6%

(2,8%)

Gentipo
2

Valor X p

0,0814

Alelos
Valor

0,0233*

22,3%

(5,3%)

*ORCC x TT= 1,682 (95% CI=1,0702,643) Estatstica significativa para distribuio da frequencia dos
2

gentipos avaliandos usando o teste x . GraphPad Prism vero 5.00 para Windows, San Diego
California USA. O nvel de significncia adotada foi P<0,05

Discusso

Na Doena de chagas, como em outras situaes de morbidade h fatores associados

que podem estar protegendo ou favorecendo a infeco e o aparecimento de sinais e sintomas.
Dentre esses fatores existem aqueles relacionados ao ambiente, genticos do indivduo e do
microrganismo. Nas doenas humanas, recentemente diversos estudos tm colocado em
evidencia que a susceptibilidade ou proteo esto associados variaes allicas funcionais.
Dessa forma, a identificao de polimorfismos de genes relacionados a diversas doenas
podem contribuir para o desenvolvimento de mtodos de diagnstico precoce e
estabelecimento de medidas preventivas.
Nos ltimos anos, loci polimrficos de genes do sistema imune dentro e fora da regio
do CPH (Complexo Principal de Histocompatibilidade) do ingls MHC (Major
Histocompatibility Complex) tm sido identificados e podem ter efeito no desenvolvimento de
doenas infecciosas (KWIATKOWSKI, 2000). Polimorfismos de um nico nucleotdeo
(SNPs), nestes loci, alteram a resposta imune infeco por modulares a expresso dos genes
nos quais se encontram.
Na doena de Chagas, indiscutvel o papel da resposta imune no processo patognico
e conseqente desenvolvimento da forma clnica. Higuchi (1997) sugere que indivduos que
produzem uma resposta imunolgica eficiente contra o parasito evoluem para a forma
indeterminada, enquanto que, indivduos que respondem de forma ineficiente e hiperrgica
evoluem para a cardiopatia chagsica. A resposta eficiente contra o parasito tem forte carter
Th1, com produo de IL-12, IFN-, TNF- e NO (SILVA et al., 1995; ALIBERTI et al.,
1996; HUNTER et al., 1996; MARTINS et al., 1998, 1999; MICHAILOWSKY et al., 1998;
SILVA et al., 1998; TEIXEIRA et al., 2002).
Vrios

autores

tm

investigado

papel

da

imunogentica

na

suscetibilidade/resistncia a doenas infecciosas (HILL et al., 1991; MCGUIRE et al.,

1994; CABRERA et al., 1995; LEVESQUE et al., 1999; MCGUIRE et al., 1999; CRAIG
et al., 2000; CHEVILLARD et al., 2002; MEYER et al., 2002; COURTIN et al., 2005;
FLORI et al., 2005). Estes trabalhos contriburam para o questionamento do motivo porqu
alguns indivduos no desenvolvem algumas doenas ou as apresentam da forma mais
branda, enquanto outros as apresentam de forma grave ou at fatal. O papel das
caractersticas genticas individuais na suscetibilidade/resistncia a alguns tipos de
doenas trouxe uma explicao plausvel para essas questes.
Vrios mtodos de estudo (familiar, de populao e mapeamento de genes em
modelos experimentais) tm sido utilizados para mapear e identificar genes ou lcus
relevantes, que influenciam na resistncia ou suscetibilidade nas infeces. Alguns tipos de

estudos necessitam da escolha de um gene candidato. Esta escolha se baseia na funo

biolgica e no papel do produto desse gene na patognese da doena estudada. Estes dados
so obtidos a partir de estudos experimentais em cromossomos homlogos ou pela
semelhana com outras doenas (ABEL e DESSEIN, 1997; SEGAL e HILL, 2003).
Diferentes polimorfismos no gene de citocinas podem existir na populao.
possvel que gentipos especficos possam trazer benefcios na imunidade a doenas
infecciosas, por intensificarem mecanismos imuno-efetores que poderiam, no entanto,
predispor a doenas inflamatrias crnicas. Por outro lado, outros gentipos poderiam
resultar em um fentipo imunorregulador, que diminui a intensidade da resposta
proinflamatria, amenizando seus efeitos lesivos nos tecidos que, no entanto, pode
favorecer o escape de agentes infecciosos (CAMPINO et al., 2006).
A influncia da gentica sobre a mortalidade associada a certas doenas infecciosas
vem sendo analisada h muito tempo, desde a dcada de 1980.(SORENSEN et al., 1988).
Sorensen et al., (1988) Relataram que a morte dos pais biolgicos em decorrncia de
infeces aumentou o risco de que seus filhos venham a bito pelo mesmo motivo, o que no
ocorreu no caso de pais adotivos. Nos ltimos 10 anos, aps a finalizao do projeto genoma
humano, vrios estudos, principalmente em populaes caucasianas, demonstraram que existe
uma variao gentica significativa em diversas doenas humanas comuns.(BAYLEY;
OTTENHOFF; VERWEIJ, 2004). Alm disso, descobriu-se que vrias infeces so afetadas
pela variao gentica, incluindo malria, tuberculose, hansenase, e infeces por
Helicobacter pylori, HIV e hepatite B, entre outras. (BURT, 1999)
Apesar de vrios trabalhos terem sido realizados nos ltimos tempos, no esclareceram
totalmente os mecanismos responsveis pela suscetibilidade infeco e nem o curso da
doena. Os marcadores genticos mais utilizados atualmente em estudos de associao so o
polimorfismo de nucleotdeo nico (SNPs), que podem resultar na variao da produo e a
quantidade de uma protena (citocina).
A produo de citocinas em decorrncia da resposta imune frente a infeco por T.
cruzi parece modular a progresso da doena assim como inibir a replicao do parasita. Em
especial, a IL-4 com o perfil Th2 mantm a inflamao na persistncia do parasita (enquanto
que as citocinas Th1 promoveo controle do parasitismo, embora possa contribuir com o
desenvolvimento da miocardite crnica (GOMES et al., 2003).
O gene da IL-4 foi associado com o aumento da transcrio e aumento dos nveis da
IgE em pacientes com asma e atopia, bem como na malria.

O gene IL10 contm cinco xons e localiza-se no cromossomo 1 entre 1q31 e 1q32
(ESKDALE et al., 1997) ocupando aproximadamente 5,1 kb (KIM et al., 1992). A IL-10 tem
potentes efeitos imunomoduladores, mais intensos sobre a resposta Th1, emboramodule
tambm a resposta Th2. Dentre as principais funes da IL-10, est a capacidade de bloquear
a ativao da sntese de citocinas, enzimas e quimiocinas pr-inflamatrias (MOORE et al.,
2001); inibir a expresso de MHC II e molculas co-estimulatrias em APCs (DE WAAL et
al., FIORENTINO et al., 1991; DING et al., 1993; CHANG et al., 1995). Nos linfcitos T
inibe a sntese de algumas citocinas como a IL-2, IFN-, IL-4 e IL-5 (DE WAAL et al., 1993;
TAGA et al., 1993; SCHANDENE et al., 1994 MOSMANN e COFFMANN, 1989). Estas
caractersticas tornam a IL-10 uma importante molcula reguladora do processo inflamatrio
e de funes efetoras como as do macrfago, clulas T e clulas NK (
A presena da base nitrogenada A na posio -1082 foi associada com baixa produo
da IL-10 aps estimulao de clulas T in vitro (TURNER et al, 1997). Esta variante parece
ter aplicabilidade clnica, visto que alguns alelos da regio promotora podem determinar
baixa, intermediria ou alta produo de IL- 10 (ESKDALE et al., 1997). Polimorfismos da
IL-10 ja foram associados a outras doenas infecciosas, dentre elas a Leishmanise cutnea
(SALHI e cols, 2008).
Neste estudo, pacientes com sorologia positiva (63%), apresentavam a base
nitrogenada A, sugerindo uma predisposio infeco quando em contato com o T. cruzi.
Ressaltando que um polimorfismo apenas no determinaria a infeco, pois o combate
imunolgico complexo e envolve diversos fatores. Tambm foi observado, que pacientes
com acometimento cardaco tanto para IL-10 na posio -1082 e -819 apresentavam variantes
no seu gentipo.
Corroborando com nosso resultado, o estudo de Araujo e colaboradores (2011)
reconhecem a importncia das clulas T regulatria na patognese da doena de Chagas, no
qual mostrou que as clulas T podem suprimir o sistema imunolgico ao produzir citocinas
anti-inflamatrias como IL-10 e TGF-. Outro trabalho, envolvendo clulas T regulatrias em
pacientes chagsicos crnicos, constatou um aumento dessas clulas em pacientes
assintomticos quando comparados com os cardacos. Pacientes assintomticos produziam e
secretavam maiores quantidades de IL-10 e TGF-. (ARAUJO et al., 2011).
Trabalho de Costa e outros (2009) constatou que o gene da IL-10 da posio -1082 a
regio promotora altamente polimrfico e que a o alelo A leva a produo reduzida da IL10, associando o alelo A com a forma cardaca para a doena de Chagas. Eles tambm
analisaram os pacientes cardacos e dividiram de acordo com o grau de leso do rgo.

Outro estudo avaliando o polimorfismo da IL-10, no somente o -1082 G/A, mas

tambm o -819 C/T e -592 C/A, no encontrou significncia estatstica, mas sugere que fator
gentico na produo da IL-10 pode influenciar a susceptibilidade e a forma clnica na doena
de Chagas. (FLREZ et al., 2011)
Na literatura, a IL-4, uma citocina com funo anti-inflamatria, podendo estar
contribuindo com a permanncia do parasita em pacientes crnicos. (RIBEIRO; CREMA;
RODRIGUES, 2008). Estudo de Flrez e Gonzlvez (2011) analisou a posio 509C/T da IL4 em pacientes chagsicos colombianos. Esse alelo est associado a um aumento da expresso
da IL-4. Os autores no observaram diferena estatstica no gentipo e frequncia do alelo
quando comparado entre a forma cardaca e paciente assintomtico. Trabalho envolvendo a
populao boliviana tambm para a posio 590 C/T encontrou um aumento da frequncia do
alelo T em indivduos saudveis, sugerindo um marcador gentico protetor contra a infeco
por T. cruzi. Sugerindo que a frequncia do alelo T possa reduzir a produo da IL- 4 e
consequentemente proteger os indivduos, que embora sejam provenientes de rea endmica,
no tm a infeco. Embora nosso estudo analisou a posio 33C/T IL-4, no encontramos
aumento significativo entre indivduos com sorologia negativa em relao aos positivos.
Tm sido sugerido que indivduos com cardiopatia chagsica grave tm uma tendncia
de produzir mais IFN-, comparado com pacientes com forma indeterminada, aps a
estimulao com antgenos parasitrios (GOMES et al., 2003). A correlao com nveis
sricos de TNF- e a ocorrncia de cardiopatia grave tambm tem sido estabelecida
(FERREIRA et al., 2003). Entretanto, outros tm encontrado o oposto em relao a expresso
de IFN- e doena cardaca (LAUCELLA et al., 2004). BAHIA-OLIVEIRA et al, (2000)
demonstraram que nveis de IFN- foram maiores em indivduos curados em relao a
indivduos que receberam quimioterapia e no alcanaram cura parasitolgica.
Considerando a natureza crnica da forma cardaca e o fato que muitos pacientes com
forma indeterminada tambm produzem altos nveis de IFN-, em adio a outras citocinas
inflamatrias (DUTRA et al., 1997; GOMES et al., 2003; DE BARROS-MAZON et al.,
2004), fica claro que mecanismos imunorregulatrios esto presentes na doena e podem
influenciar fortemente na evoluo clnica. Tem sido demonstrado que IL-10 produzida por
indivduos com as formas cardaca e indeterminada da doena (DUTRA et al., 1997) e ainda
que PBMC de indivduos com forma indeterminada produzem mais IL-10 que indivduos com
forma cardaca (BAHIA-OLIVEIRA et al., 1998; GOMES et al., 2003; SOUZA et al.,2004).

Na Doena de Chagas experimental, a IL-10 est associada tanto suscetibilidade

infeco por T. cruzi, atravs da diminuio da eficcia da resposta antiparasitria, quanto
patologia, atravs da inibio de uma resposta Th1 exacerbada (SILVA et al., 1992; REED et
al., 1994).
A partir desses resultados, vrios autores sugerem que, em indivduos com forma
indeterminada, a ao modulatria da IL-10 mantm um balano entre parasitismo e
integridade tecidual, onde o fraco foco inflamatrio se resolve em fibrose focal e a resposta
Th1 continuada pode manter o parasitismo sob um controle relativo. O processo
progressivamente destrutivo da forma cardaca pode resultar da falha no controle da resposta
Th1 pela ao modulatria da IL-10 (DUTRA et al., 2005). Poderamos assim, levantar a
hiptese de que os polimorfismos genticos da IL-10 teriam a capacidade de interferir nos
mecanismos de controle do parasito, assim como no controle da resposta inflamatria com
repercusso no desenvolvimento das formas clnicas da doena.
Alguns estudos tm demonstrado que diferentes gentipos das posies 819 e
1082 do promotor do gene do IL-10 esto associados a vrias doenas (CRAWLEY et al.,
1999; HELMINEN et al., 1999; TAGORE et al., 1999; SHIN et al., 2000; GIBSON et al.,
2001; MIYAZOE et al., 2002; SMOLNIKOVA et al., 2002; DAHER et al, 2003;
GALLAGHER et al., 2003; KNAPP et al., 2003; LOWE et al., 2003; SCHAAF et al., 2001,
HAANPAA et al., 2002; 2003; SCOLA et al., 2003; LECH-MARANDA et al, 2004;
TSIAVOU et al., 2004; HENAO et al., 2006; ORAL et al., 2006). Alm da associao a
doenas, outros autores demonstraram que estes polimorfismos desempenham efeitos na
atividade transcricional da citocina (KEIJSERS et al., 1997, 1998; CRAWLEY et al., 1999;
ESKDALE et al., 1999; MIYAZOE et al., 2002; REES et al., 2002; SUREZ et al., 2003;
WARL et al., 2003). Entretanto, os resultados tm sido contraditrios e ainda no se sabe
com certeza qual hapltipo/gentipo causa alta ou baixa produo de IL-10 (WARL et al.,
2003; OPDAL, 2004).
Em nosso estudo, analisando-se a freqncia de distribuio dos gentipos da
posio 819 do gene da IL-10, no foi evidenciada correlao entre os gentipos C/C, T/C e
T/T e a sorologia. Calculando-se a freqncia dos alelos C e T, no houve diferenas
significativas entre as frequncias dos alelos, entretanto, o alelo T teve preponderncia entre
os soropositivos (38,12%). Comparando-se os gentipos com as formas clnicas, cardaca e
indeterminada, no houve correlao entre o gentipo e a forma clnica desenvolvida pelo
paciente. Em relao s frequncias dos alelos, o alelo T foi mais frequente no grupo de
indeterminados (42,45%) do que entre os cardacos (35,42%), embora sem significncia

estatstica.
A posio -819 no tem sido isoladamente correlacionada com doenas, porm,
junto a outros polimorfismos (posies 592 e 1082), na forma de hapltipos, tem sido
correlacionado a vrias doenas. Alm disso, existem trabalhos mostrando correlaes entre
gentipos da posio -592 e doenas. Este polimorfismo se encontra em total desequilbrio de
ligao com o da posio 819, de forma que os alelos -819C e 592C so herdados juntos, e
o mesmo acontece para 819T e 592A (TURNER et al., 1997; ALBUQUERQUE et al.,
2004).
Summers et al. (2000) encontraram maior freqncia do hapltipo ATA,
especialmente o alelo 592A, em casos de sndrome de morte sbita infantil, enquanto que
Opdal et al. (2003), com uma casustica mais expressiva, encontraram associao entre o
mesmo hapltipo e morte sbita infantil no esperada devido infeco (OPDAL et al.,
2003). O hapltipo ATA foi associado a primoinfeco tardia por EBV em crianas, enquanto
que adultos EBV-soronegativos so na maioria das vezes homozigotos GCC (HELMINEN, et
al., 2001). Na infeco crnica pelo vrus da hepatite B, a freqncia do hapltipo ATA foi
significativamente maior entre portadores assintomticos que em pacientes com doena
crnica e progressiva no fgado (MIYAZOE et al., 2002). O mesmo hapltipo foi
correlacionado infeco pelo vrus do herpes zoster (HAANPAA et al., 2002).
Levando em conta o desequilbrio de ligao entre as regies -819 e -592, alguns
trabalhos podem ser discutidos. Em pacientes com pneumonia grave, admitidos em unidade
de terapia intensiva, foi observada uma correlao entre o alelo 592A e alta mortalidade
(LOWE et al., 2003). Porm, na hepatites C, foi encontrada uma correlao entre o gentipo
592A/A e infeco autolimitada (KNAPP et al., 2003). Indivduos contendo o alelo 592A
apresentaram um risco maior para a infeco por HIV e, depois de infectados, a progredir para
AIDS mais rapidamente que homozigotos 592G/G (SHIN et al., 2000; SMOLNIKOVA et
al., 2002). Coutrin et al, (2006) observou que o alelo 592A confere um risco diminudo de
adquirir tripanossomase africana em indivduos com longos perodos de exposio.
Cada patgeno atua de forma especfica no organismo do hospedeiro. A resposta
imunolgica se desenvolve de forma diferente dependendo da natureza do patgeno
(protozorios, bactrias ou vrus) e determinados compartimentos imunolgicos se tornam
mais eficientes para o controle da infeco. Desta forma, as diferenas observadas entre as
doenas podem decorrer da via de ativao do gene, da natureza das clulas produtoras de IL10 e dos compartimentos teciduais em que a citocina secretada. Desta forma, se torna difcil
a comparao de resultados referentes a diferentes patgenos.

O polimorfismo da posio -819 do gene da IL-10 tem sido pouco correlacionado a

doenas em relao posio -1082. Alm disso, foi demonstrado que o efeito na expresso
do gene determinado predominantemente pelo alelo 1082 (TURNER et al., 1997). Talvez,
as correlaes demonstradas entre vrios hapltipos e diferentes doenas sejam determinadas
predominantemente pelo polimorfismo da posio 1082.
Analisando-se a freqncia de distribuio dos gentipos da posio 1082 do gene
da IL-10, foi verificada uma correlao estatisticamente significativa entre o gentipo G/G e
sorologia negativa para T. cruzi. Calculando-se a freqncia dos alelos G e C, no houve
diferenas significativas entre as freqncias dos alelos, entretanto, o alelo G teve
preponderncia entre os soronegativos (40,68%) em relao aos soropositivos (34,80).
Comparando-se os gentipos com as formas clnicas, cardaca e indeterminada, houve uma
correlao estatisticamente significativa entre o gentipo A/A e a forma clnica indeterminada.
Em relao s freqncias dos alelos, o alelo A foi mais freqente no grupo de indeterminados
(70,37%) do que entre os cardacos (59,38%), embora sem significncia estatstica.
Alm dos trabalhos correlacionando hapltipos discutidos anteriormente, muitos
estudos tm observado correlaes entre os gentipos (ou alelos G/A) da posio -1082 e
algumas doenas. Em duas populaes diferentes do Norte e Sul da Itlia foi encontrada uma
freqncia significantemente aumentada de 1082A/A entre indivduos com idade avanada
com infarto agudo do miocrdio enquanto que o grupo controle pareado apresentou
freqncia aumentada de1082G/G. O autor sugere que o gentipo -1082G/G protetor
contra o infarto agudo do miocrdio e possivelmente um parmetro determinante para a
longevidade (LIO et al., 2004).
A freqncia allica de 1082G foi significantemente mais comum entre pacientes
com tuberculose em relao a controles saudveis (ORAL et al., 2006) e a progresso na
tuberculose pulmonar foi correlacionada com a diminuio da freqncia do alelo 1082A
(SCOLA et al., 2003). Outro estudo demonstrou associao entre o gentipo 1082 A/A com
tuberculose pleural, que uma forma autolimitada da doena (HENAO et al., 2006). Estudos
com indivduos com pneumonia mostraram que o gentipo -1082G/G est associado com
doena mais grave e maior risco de choque sptico (GALLAGHER et al., 2003; SCHAAF et
al., 2003). O alelo 1082G foi mais presente em indivduos soronegativos para EBV em
relao a soropositivos com infeco aguda e agressiva (HELMINEN et al., 1999). Em
infeco pelo vrus da hepatite C, o gentipo 1082G/G foi associado com infeco
persistente (KNAPP et al., 2003).
Como o efeito funcional desses polimorfismos sobre a expresso do gene ainda no

est claramente definido, a explicao mais consistente com a literatura, para nossos
resultados, seria que a maior freqncia de A/A, encontrada entre os indivduos com forma
indeterminada, poderia ocorrer devido a uma provvel maior expresso de IL-10
desempenhada por esse gentipo (KEIJSERS et al., 1997, 1998; ESKDALE et al., 1999;
REES et al., 2002; WARL et al., 2003; BOZZI et al., 2006). Esta maior expresso permitiria
um maior controle da resposta inflamatria, impedindo o excesso de leses teciduais (DUTRA
et al., 2005).
A correlao entre o gentipo GG e a sorologia negativa para T. cruzi mais
complexa. Deve-se levar em conta que a fase aguda da doena fatal em cerca de 10% dos
casos (COURA, 2003), e este gentipo pode ter alguma correlao com este grupo de
indivduos. Alm disso, aspectos relacionados com a transmisso da doena ainda no esto
bem esclarecidos. Levando em conta que os indivduos do grupo controle so oriundos de
rea endmica e habitavam residncias onde foram identificados indivduos soropositivos,
pode-se inferir que esse grupo tambm estava exposto ao parasito. Estes fatos permitem
levantar a possibilidade de que indivduos soronegativos entraram em contato com o parasito
e, por motivos relacionados a uma maior resistncia, conseguiriam eliminar rapidamente o
parasito. Neste sentido, a associao do gentipo com a sorologia negativa poderia representar
uma maior facilidade destes indivduos em controlar o parasito e manter-se com sorologia
negativa.
Diferentes padres de produo de citocina foram associados a polimorfismos tanto
na forma de alelos, quanto a gentipos e a hapltipos. Entretanto, ainda no se chegou a um
consenso sobre qual fentipo est associado a cada polimorfismo.
Nesse trabalho, foram comparados os nveis de IL-10 produzidos em culturas de
PBMC de pacientes e controles com os gentipos da regio promotora do gene da IL-10
desses mesmos indivduos. Foram realizadas culturas sem estmulos e com estmulos de LPS,
PHA e antgenos de T. cruzi. No foi observada diferena estatstica entre os nveis da citocina
nos diferentes gentipos, tanto para a posio 819 quanto para a posio 1082.
Turner et al. (1997), utilizando culturas de PBMC (isolados de indivduos voluntrios
saudveis) estimuladas com ConA, associou o gentipo 1082G/G com altos nveis de IL-10.
Em um estudo semelhante, Warl et al. (2003) observou o contrrio, sendo que o gentipo
1082G/G foi associado a baixos nveis de IL-10 em relao aos outros gentipos. Em outro
estudo, utilizando menor concentrao de ConA, no foi observada diferena na produo
entre os gentipos (HOFFMANN et al., 2001).

Existe controvrsias na relao entre certos polimorfismos de gene de citocinas e

produo in vitro de citocina. Os trabalhos encontrados na literatura apresentam muitas
diferenas nos mtodos utilizados. Enquanto alguns investigam a ao dos polimorfismos em
indivduos saudveis, outros utilizam grupos de indivduos doentes e expostos a patgenos.
Warl et al. (2003) questionam se possvel determinar contribuio gentica para os nveis
de citocina em indivduos submetidos a certos estmulos ambientais (como doenas,
medicao ou imunossupresso), comparados com indivduos jovens e sadios nos quais a
contribuio gentica pode ser mais facilmente revelada.
Alm disso, para estes estudos, clulas de sangue total, moncitos isolados e PBMC
so utilizados. Certamente, o tipo de clula do ensaio tambm um fator importante para o
padro de expresso da citocina. Variaes no protocolo de cultura tambm so
constantemente observadas, como por exemplo o tipo de estmulo utilizado, concentrao do
estmulo e tempo de incubao. possvel, ento, que a utilizao de diferentes mtodos
sejam causas de resultados conflitantes (WARL et al., 2003).
Surez et al. (2003), utilizando culturas estimuladas por LPS, anlise da produo de
citocina por ELISA e de RNA por RT-PCR, encontraram o hapltipo GCC como maior
produtor de IL-10 e o ATA como menor. Por outro lado, Eskdale et al. (1999), utilizando
culturas de PBMC estimuladas com LPS encontraram associao entre maior produo de
citocina e o alelo 1082A. O mesmo foi encontrado por Keijsers et al. (1997, 1998) utilizando
culturas de sangue total. BOZZI et al. (2006) observaram, por citometria de fluxo, que
indivduos 1082 G/G apresentam quatro vezes menos clulas produtoras de IL-10 que
indivduos G/A e A/A.
Foram realizados ensaios utilizando estratgias de manipulao de genes, nos quais a
regio promotora da IL-10 foi ligada ao gene da luciferase e expressa em clulas de linhagem
monoctica. Crawley et al. (1999) encontraram maior atividade em promotores com alelo
1082G em relao ao 1082A. Porm, Paterson et al, (1999), utilizando ensaios semelhantes
em diferentes tipos celulares, demonstrou que a diferena de transcrio entre os diferentes
hapltipos dependente do tipo celular utilizado. Provavelmente, esta dependncia se deve
aos diferentes fatores de transcrio que existem nos diferentes tipos celulares.
Estratgia de manipulao de genes utilizando expresso em clulas de linhagem
monoctica tambm foram utilizados por Reuss et al. (2002), os quais observaram que
promotores com o hapltipo GCC apresentaram atividade transcricional 20% maior que
promotores contendo ATA. Por outro lado, Rees et al. (2002) utilizando ensaio semelhante,
porm com linhagens de clulas B transformadas, observou que o alelo 1082A confere uma

atividade transcricional duas vezes maior que o alelo 1082G. Para os dois trabalhos, no
houve diferena nos nveis de IL10 em culturas de PBMC estimuladas com ConA para os
diferentes gentipos.
vlido salientar que os trabalhos que analisam a expresso do gene em culturas
celulares e aqueles que utilizam ensaios de manipulao de genes em diferentes tipos
celulares apresentam vantagens e desvantagens. O primeiro deles, realizado na prpria clula
que contm o gene que se quer analisar, permite reproduo fidedigna do que ocorre dentro do
organismo. Todavia, a anlise pode sofrer influncias de outros polimorfismos prximos da
regio analisada (em desequilbrio de ligao) ou mesmo de outros fatores que influenciam a
transcrio, codificados por genes distantes. O segundo modelo permite a anlise de um nico
polimorfismo, entretanto, no reproduz exatamente o que ocorre in vivo, como alteraes de
cromatina e presena de alguns fatores de transcrio. possvel que a falta de um modelo
padro e confivel seja a principal causa desses resultados conflitantes.
O polimorfismo da regio 1082 est localizado entre uma seqncia de ligao a um
fator de transcrio ETS-like (KUBE et al., 1995). Seqncias com o gentipo 1082A
apresentam maior afinidade a fatores nucleares de moncitos que seqncias com 1082G,
sugerindo diferena de afinidade de ligao entre os gentipos (REES et al., 2002). REUSS et
al. (2002) mostraram que um fator de transcrio PU.1, expresso em todas as linhagens de
clulas hematopoiticas, com exceo de Linfcitos T perifricos, se ligam a essa regio e
apresentam maior afinidade ao alelo 1082A. Entretanto, outros fatores, bem como sua ao
nos diferentes tipos celulares, devem ser melhor caracterizados para um maior entendimento
do efeito transcricional (REES et al., 2002).
Analisando os nveis de IL-10 em relao sorologia para T. cruzi, os nveis de IL-10
produzidos em culturas com AtgTc, LPS e PHA foram significativamente maiores entre os
chagsicos em relao aos controles. Aps o estmulo com AtgTc, a maior produo de IL-10
por indivduos chagsicos pode ser explicada pelo repertrio de clulas T destes indivduos
contra os antgenos de T. cruzi. O fentipo alto produtor de IL-10 entre os chagsicos,
evidenciado aps estmulo com LPS e PHA, pode estar associado suscetibilidade infeco
e nos leva novamente dvida lanada anteriormente.
No houve diferena de produo de IL-10 entre cardacos e indeterminados. Porm
esta diferena foi observada por vrios autores, sendo a principal clula responsvel pela
produo moncitos (BAHIA-OLIVEIRA et al., 1998; GOMES et al., 2003; SOUZA et
al.,2004).

Neste trabalho, para a maioria dos gentipos, foi observada correlao positiva entre a
produo de IL-10 aps estmulos com LPS e PHA. Entretanto, para os gentipos TT da
posio -819 e GG da posio 1082 no foi observado correlao. Considerando que LPS e
PHA so estmulos predominantes para moncitos e linfcitos respectivamente, a ausncia de
correlao entre os gentipos TT e GG sugere que a ao destes sobre a expresso gnica
possa ser diferente entre linfcitos e moncitos. Se isto for comprovado, explicaria diferenas
observadas em vrios trabalhos que utilizaram diferentes tipos celulares. Culturas de PBMC e
dosagem de citocina por ELISA provavelmente so mtodos inadequados para a deteco da
diferena de produo entre os gentipos nos diferentes tipos de clulas.
As freqncias dos gentipos observadas neste trabalho foram semelhantes s
observadas em dois trabalhos realizados com voluntrios saudveis, no Rio de Janeiro
(MORAES et al., 2003; ALBUQUERQUE et al., 2004). Entretanto, a freqncia de GG
(posio 1082) foi maior nos indivduos deste estudo em relao aos do Rio de Janeiro. O
fato dos estudos de Moraes e Albuquerque serem realizados com indivduos saudveis e
nosso trabalho com indivduos de rea endmica expostos ao T. cruzi, pode explicar a
diferena observada para o gentipo GG. Alm disso, esse gentipo foi mais freqente entre
indivduos no infectados em relao aos chagsicos.
Para confirmar o efeito destes gentipos na doena de Chagas e elucidar o significado
biolgico destes polimorfismos na doena e na expresso da IL-10, estudos com tcnicas mais
elaboradas, como citometria de fluxo, devero ser realizados em reas endmicas para a
doena de Chagas e em outros grupos populacionais.
Trabalho de Chaabe et al., (2011) avaliando a IL-12p40 na posio 1188 encontraram
que a prevalncia significativa do gentipo CC nos pacientes com carcinoma nasofaringe em
comparao com o grupo controle, conferindo susceptibilidade alelo/gentipo. comportandose como uma susceptibilidade Alelo/gentipo. Tambm foi observado que o gentipo CC
apresentava associao significativa com o estgio mais avanados do tumor

quando

comparados com os pacientes em fase inicial.

Como o FcRIIa, uma importante protena na defesa do hospedeiro contra a
infeco. FcR pertencem famlia de immunereceptors, que inclui receptores de clulas T ,
receptores de clulas B e de receptores natural killer (BRAGA et al., 2005). Estudo realizado
por Maiga et al., 2013 verificaram que a frequncia de gentipo AA apresentava uma defesa
contra a malria, e o gentipo GG se tornavam mais suscetvel. Porm outros estudos
mostraram um efeito protetor para o gentipo 131G/G (alelo G) e reduzindo o risco de alta
densidade parasitemia (SHI et al., 2001; OUMA et al., 2006). Da mesma forma, outros trs

estudos demonstraram uma aumento do risco com 131 gentipo A / A para a malria grave,
cerebral ou da placenta (Omi et al., 2002; BROUWER et al., 2004). Um estudo realizado no
Sudo descobriram que o gentipo 131G /G (alelo G) foi significativamente associada com as
chances de a doena da malria grave quando comparado com o da malria leve (NASR et al.,
2007). Algumas das diferenas nos resultados destes estudos pode ser devida ao desenho do
estudo, onde alguns compararam o efeito entre os grupos tnicos, enquanto outros comparam
a gravidade da doena. Todos concordam que este marcador est associada a malria e
embora o polimorfismo FcRIIa 131 conhecido por ser funcional, a heterogeneidade da os
resultados sugerem que pode haver outros polimorfismos no gene que modificam a resposta.
Alternativamente, uma vez que este receptor sensvel a diferentes subtipos de IgG parte a
heterogeneidade pode ser at que os anticorpos so produzidos por indivduos e eles podem
tambm estar sob um certo nvel de controlo gentico.
Ao estudar 2504 crianas do Gana com malria grave ( 611.162 ) e 2.027 controles
pareados saudveis , Schuldt et al . (2010 ) constataram que homozigose para 131R foi
positivamente associado com malria severa (odds ratio = 1,20 , p = 0,007 , p corrigido para
testes mltiplos = 0,021) . Schuldt et ai. (2010 ) concluram que a variante de ligao de PCR
FCGR2A est associada com anemia malarial , sugerindo um papel para os mecanismos de
defesa de PCR na patognese desta condio.
Moser et al., (1998) encontraram ligao dos mltiplos casos de LES, com o
polimorfismo do gene G131A FCGR2A . De Rose et al . (2005) descobriram que pacientes
com fibrose cstica que possuam o alelo G na posio 131 do FCGR2a apresentaram um
risco quatro vezes maior de contrair a infeco por Pseudomonas aeruginosa crnica ( p =
0,042).
Asano et al., 200J, avaliar am o polimorfismo do fcgr2a encontraram associao de
colite ulcerosa com o alelo G, havendo uma inverso dos estudos anteriores em doenas autoimunes.
Como h estudos que demonstram a importncia do Fcgama em parasitose e, devido
ao escasso material da ao do Fcgamma na doena de Chagas e avaliamos e no obtivemos
resultado significante. No ocorrendo diferena entre os indivduos.
Alguns estudos analisaram o polimorfismo FcRIIa131 em relao gravidez na
malria. Por exemplo, um estudo recente realizado na Arbia Saudita mostrou que o 131H / H
gentipo e H so alelo associado com proteco nos controlos livres de malria , em
comparao com infeco por malria assintomtica em mulheres grvidas que mostrou um
aumento na RR gentipo de alelo e R [ nasr et al., 2013] . Coleta de tais informaes em

nosso meio nos permita ver se este efeito poderia ser replicado em ambas as nossas etnias que
ajudam na implementar e monitorar estratgias de pesquisa da malria em reas endmicas.
Em 193 pacientes japoneses com lpus eritematoso sistmico (LES ; 152.700 ) e 303
controles saudveis , Kyogoku et al. (2002 ) constataram que a homozigose para um
polimorfismo ile232 -to - thr na regio transmembrana do gene FCGR2B ( I232T ;
604.590,0002 ) foi significativamente maior em pacientes com LES em comparao com os
controles.
Su et al. (2004 ) identificaram 10 SNPs no primeiro promotor FCGR2B em 66
pacientes com LES e 66 controles . Eles determinaram que o promotor proximal contm dois
hapltipos funcionalmente distintas . A anlise mostrou que o promotor de luciferase do
hapltipo menos frequentes , que tinha uma frequncia de 9 % , foi associada com o aumento
da expresso do gene. Um estudo de 243 pacientes com LES e 366 controles pareados de
caso-controle demonstraram que o hapltipo mais freqente foi significativamente associada
com o fentipo SLE e no estava em desequilbrio de ligao com FCGR2A e FCGR3A
polimorfismos. Su et al. (2004 ) concluram que uma variante do FCGR2B expresso um
fator de risco para o LES .
Em 190 pacientes americanos europeus com LES e 130 controles europias , Blank et
al . (2005) encontraram uma associao significativa entre homozigose para um polimorfismo
- 343C na regio promotora do gene FCGR2B ( 604.590,0001 ) e LES.
Mueller et al. (2013 ) identificou e designou um gene quimrico , FCGR2B -prime ,
que ocorre como conseqncia da FCGR3B ( 610.665 ) excluso no FCGR3B hapltipos zero
cpia. O gene FCGR2B -prime constitudo por elementos a montante e uma regio 5 -prime
codificao que derivam FCGR2C ( 612.169 ) , e uma regio 3 -prime codificao que deriva
FCGR2B . A sequncia de codificao de FCGR2B - prima idntica do FCGR2B , mas
FCGR2B -prime seria esperado para estar sob o controlo de sequncias de 5 -prime
flanqueamento derivadas FCGR2C . Mueller et al. (2013 ) encontraram por citometria de
fluxo , immunoblotting, e sequenciamento de cDNA que a presena dos quimricos FCGR2B
-prime gene resulta na presena ectpica de Fc- gamma- RIIB em clulas natural killer ,
fornecendo uma explicao para o risco de LES associado reduo do nmero de cpias
FCGR3B . Para prosseguir o mecanismo subjacente da doena LES associao com FCGR3B
variao do nmero de cpia , Mueller et al . ( 2013), a sequncia de referncia alinhada (
GRCh37 ) do bloco proximal do locus de FcgR ( chr1 :161,480,906 -161 , 564,008 ), para que
o bloco de distal ( chr1 :161,562,570 -161 , 645,839 ) . Identificao de informativos
variaes da seqncia parlogas ( PSVs ) habilitado Mueller et al . (2013 ) para restringir a

regio breakpoint potencial para uma regio de 24,5 kb de paralogia ento entre dois
ancestrais blocos duplicados. A ausncia completa de PSVs nonpolymorphic na regio de
24,5 kb impediu a localizao mais precisa dos pontos de interrupo em hapltipos FCGR3B
- excludos ou FCGR3B - duplicado.
Em 193 pacientes japoneses com lpus eritematoso sistmico (LES ; 152.700 ) e 303
controles saudveis , Kyogoku et al. (2002 ) constataram que a homozigose para um
polimorfismo ile232 -to - thr na regio transmembrana do gene FCGR2B ( I232T ;
604.590,0002 ) foi significativamente maior em pacientes com LES em comparao com os
controles.

Su et al. (2004 ) identificaram 10 SNPs no primeiro promotor FCGR2B em 66 pacientes com

LES e 66 controles . Eles determinaram que o promotor proximal contm dois hapltipos
funcionalmente distintas . A anlise mostrou que o promotor de luciferase do hapltipo menos
frequentes , que tinha uma frequncia de 9 % , foi associada com o aumento da expresso do
gene. Um estudo de 243 pacientes com LES e 366 controles pareados de caso-controle
demonstraram que o hapltipo mais freqente foi significativamente associada com o fentipo
SLE e no estava em desequilbrio de ligao com FCGR2A e FCGR3A polimorfismos. Su et
al. (2004 ) concluram que uma variante do FCGR2B expresso um fator de risco para o
LES .
Em 190 pacientes americanos europeus com LES e 130 controles europias , Blank et
al . (2005) encontraram uma associao significativa entre homozigose para um polimorfismo
- 343C na regio promotora do gene FCGR2B ( 604.590,0001 ) e LES.
Mueller et al. (2013 ) identificou e designou um gene quimrico , FCGR2B -prime ,
que ocorre como conseqncia da FCGR3B ( 610.665 ) excluso no FCGR3B hapltipos zero
cpia. O gene FCGR2B -prime constitudo por elementos a montante e uma regio 5 -prime
codificao que derivam FCGR2C ( 612.169 ) , e uma regio 3 -prime codificao que deriva
FCGR2B . A sequncia de codificao de FCGR2B - prima idntica do FCGR2B , mas
FCGR2B -prime seria esperado para estar sob o controlo de sequncias de 5 -prime
flanqueamento derivadas FCGR2C . Mueller et al. (2013 ) encontraram por citometria de
fluxo , immunoblotting, e sequenciamento de cDNA que a presena dos quimricos FCGR2B
-prime gene resulta na presena ectpica de Fc- gamma- RIIB em clulas natural killer ,
fornecendo uma explicao para o risco de LES associado reduo do nmero de cpias
FCGR3B . Para prosseguir o mecanismo subjacente da doena LES associao com FCGR3B
variao do nmero de cpia , Mueller et al . ( 2013), a sequncia de referncia alinhada (

GRCh37 ) do bloco proximal do locus de FcgR ( chr1 :161,480,906 -161 , 564,008 ), para que
o bloco de distal ( chr1 :161,562,570 -161 , 645,839 ) . Identificao de informativos
variaes da seqncia parlogas ( PSVs ) habilitado Mueller et al . (2013 ) para restringir a
regio breakpoint potencial para uma regio de 24,5 kb de paralogia ento entre dois
ancestrais blocos duplicados. A ausncia completa de PSVs nonpolymorphic na regio de
24,5 kb impediu a localizao mais precisa dos pontos de interrupo em hapltipos FCGR3B
- excludos ou FCGR3B - duplicado.

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