i

NORMA SUELI BONACCORSO

APLICAO DO EXAME DE DNA NA ELUCIDAO DE CRIMES

Dissertao
apresentada
para
obteno do ttulo de Mestre em
Medicina Forense
Orientadora: Profa. Dra. Irene
Batista Muakad

Faculdade de Direito da Universidade de So Paulo

So Paulo
2005

ii

NORMA SUELI BONACCORSO

APLICAO DO EXAME DE DNA NA ELUCIDAO DE CRIMES

Dissertao
apresentada

Faculdade
de
Direito
da
Universidade de So Paulo para
obteno do ttulo de Mestre em
Medicina Forense
rea de concentrao: Direito
Penal,
Medicina
Forense
e
Criminologia
Orientadora: Profa. Dra. Irene
Batista Muakad

So Paulo
2005

iii

Ficha Catalogrfica elaborada pelo Centro de Informao Tecnolgica do

Instituto de Pesquisas Tecnolgicas do Estado de So Paulo - IPT

B697a

Bonaccorso, Norma Sueli

Aplicao do exame de DNA na elucidao de crimes. / Norma Sueli
Bonaccorso. -- So Paulo, 2005 - 156p.
Dissertao (Mestrado) - Universidade de So Paulo. Faculdade de Direito.
Departamento de Direito Penal. rea de concentrao: Direito Penal, Medicina
Forense e Criminologia.
Orientadora: Profa. Dra. Irene Batista Muakad
1. Exame de DNA 2. Identificao humana 3. Crime 4. Anlise forense
5. Biologia molecular 6. Medicina legal 7. Direito penal 8. Tese
I. Universidade de So Paulo. Faculdade de Direito. Departamento de Direito Penal
II. Ttulo

05-59

CDU 575.113:343.232(043)

iv

NORMA SUELI BONACCORSO

APLICAO DO EXAME DE DNA NA ELUCIDAO DE CRIMES

Dissertao apresentada Faculdade de Direito da Universidade de So

Paulo para obteno do ttulo de Mestre em Medicina Forense
rea de concentrao: Direito Penal, Medicina Forense e Criminologia

Orientadora:

________________________________
Profa. Dra. Irene Batista Muakad
Professora de Medicina Forense da
Faculdade de Direito da USP

_________________________________
Prof. Dr.

__________________________________
Prof. Dr.

minha querida irm Rose,

por seu apoio incondicional.

vi

AGRADECIMENTOS

Agradecimentos pstumos ao Prof. Dr. Jos Lopes Zarzuela, colega e

inesquecvel mestre na Academia de Polcia de So Paulo e na Faculdade de Direito da
Universidade de So Paulo, pela forte influncia exercida em minha formao.

Agradecimento ao Prof. Dr. Mrio Hiroyuki Hirata da Faculdade de

Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo, pela oportunidade dada para a
retomada e o aprofundamento de nossos estudos sobre Biologia Molecular aplicada.

Especial agradecimento Profa. Dra. Irene Batista Muakad, pela amizade,

ensinamentos, ateno e, principalmente, pelo estmulo durante a orientao.

vii

RESUMO
Bonaccorso, N. S. Aplicao do exame de DNA na elucidao de crimes. So Paulo,
2005. 156p. Dissertao (Mestrado) Faculdade de Direito. Universidade de So
Paulo.
O amplo emprego do exame de DNA em aes de investigao de paternidade levou
divulgao macia de sua eficcia pelos meios de comunicao que acabou por lhe dar
uma aura de infalibilidade, colocando em descrdito os mtodos analticos mais antigos.
Enfocado pela mdia como tcnica suprema, foram omitidas do grande pblico as
limitaes existentes quando aplicada Criminalstica, seu alto custo e a complexidade dos
processos tcnicos exigidos para que sejam auferidos resultados confiveis. No meio
jurdico brasileiro, o tema ainda discutido de forma superficial, marginalizando os
operadores do direito dos conhecimentos tcnico-cientficos necessrios para a
interpretao dos resultados probabilsticos oferecidos pelos exames de DNA. Este
trabalho procura, de certa forma, diminuir esta lacuna tcnico-cientfica e esclarecer os
reais alcances e limitaes da aplicao desta tcnica nas investigaes forenses como
auxiliar na elucidao de crimes e na identificao de pessoas. Inicia-se pelo estudo da
evoluo das tcnicas empregadas na Medicina Forense para a identificao humana,
discutindo-se a propalada sobrepujana da anlise de DNA em relao aos tradicionais
exames periciais. feita uma abordagem sobre o desenvolvimento da Biologia Molecular,
principiando-se pelo estudo da estrutura do DNA e pela forma de transmisso da
informao gentica, para, em seguida, tratar da deteco de polimorfismos presentes nesta
molcula propiciadores, em ltima instncia, da obteno de padres genticos indivduoespecficos que vm sendo empregados na identificao de suspeitos em casos de crimes
sexuais; na identificao de cadveres de vtimas de crimes ou de grandes catstrofes; e no
estabelecimento de vnculo entre suspeitos e locais de crime, entre um local de crime e
outro, e entre instrumento lesivo e vtima. D-se tambm grande nfase coleta de
materiais e as precaues para garantir a cadeia de custdia das amostras que sero
estudadas, ressaltando-se ainda aspectos ticos e jurdicos que envolvem a questo da
coleta de materiais biolgicos de suspeitos luz do direito brasileiro. So tambm
abordados os procedimentos laboratoriais utilizados para a extrao, quantificao,
amplificao e deteco do DNA dos materiais analisados, bem como os mtodos
estatsticos empregados para a correta interpretao dos resultados auferidos e as
recomendaes existentes para elaborao do laudo pericial e para o necessrio controle de
qualidade das anlises de DNA. So discutidos aspectos atinentes ao uso das informaes
sobre o DNA, quer em suas repercusses sociais quer como prova na justia penal, pela
abordagem de caractersticas de seu contraditrio e de seu real valor para a formao da
culpabilidade. ainda apresentado o trabalho pericial realizado no Laboratrio de DNA do
Instituto de Criminalstica de So Paulo e tambm exposto um estudo estatstico sobre a
eficcia tcnica das anlises realizadas neste laboratrio. Conclui-se que a anlise de DNA,
mesmo sendo uma poderosa ferramenta, est longe de ser uma condio sine qua non em
estudos forenses. A prova de DNA deve ser sempre considerada dentro de um conjunto de
variadas evidncias e o papel do geneticista forense no o de fazer presunes de
culpabilidade ou de inocncia, mas o de fornecer informaes exatas para melhor aplicao
da justia.
Palavras-chave: identificao humana; exame forense de DNA; valor da prova do DNA;
Medicina Forense; Biologia Molecular; crimes.

viii

ABSTRACT
Bonaccorso, N. S. DNA exam application in crime elucidation. So Paulo, 2005. 156p.
Dissertao (Mestrado) Faculdade de Direito. Universidade de So Paulo.
The wide application of the DNA exam in paternity investigation led to the massive
divulgation of its efficiency through the communication channels, earning it a reputation of
infallible result, and jeopardizing the credit of older analytical methods. While focused by
the media as the most supreme technique, several limitations were omitted regarding its
use in criminal matters, such as its high cost and the complexity of technical processes
demanded for trustworthy results. The theme is still discussed in a superficial way among
the Brazilian juridical scenario, which leaves the law related individuals with a lack of
technical and scientific knowledge required to the interpretation of results offered by DNA
exams. The goal of this report is to, in a way, diminish this technical and scientific gap and
clarify the real accomplishments and limitations of this technique, while applied to forensic
investigations as an auxiliary alternative to crime solving and people identifying. We begin
with the study on the evolution of the techniques applied in Legal Medicine to human
identification, discussing the surpass of DNA analysis in relation to other traditional
exams. The development of Molecular Biology is featured with basis on the DNA structure
and the way the genetic information is transmitted, followed by the polymorphisms
detection in this molecule and obtainment of specific genetic patterns which have been
used for identifying suspects of sexual crimes; identification of crime and catastrophe
victims, and in the establishment of a link between suspects and crime scenes, one crime
scene and another, and a wound object and a victim. Great emphasis is given to the
collecting of material and precaution used to ensure the custody of samples to be analysed,
enhancing the ethic and legal aspects involving the collection of biological material of
suspects brought to light as per the Brazilian Law. Laboratory procedures utilized to the
extraction, amplifying and detection of DNA analysed material are outlined, and statistics
methods applied to the correct interpretation of results and existing recommendations to
elaborate the expert report, and to the necessary quality control of DNA analysis. Several
aspects referent to the use of information about DNA are discussed, as whether in relation
to its social repercussions or as a penal proof, through the characteristics of its
contradictory and real value to elaborate culpability. An expert essay formulated at the
So Paulo Criminal Institute DNA Laboratory is presented along with a statistics study
on the technical efficacy of samples analysis made in that lab. The conclusion is that the
DNA analysis, despite being a powerful tool, is far from being a sine qua non condition in
forensic studies. The DNA proof must always be considered within an ensemble of various
evidences, and the role of the legal genetic expert is not to make presumptions of
culpability of innocence, but to provide accurate information to help the applicable law.
Key words: human identification; DNA forensic exam; DNAs proof value; Legal
Medicine; Molecular Biology; crimes.

ix

ABREVIATURAS E SIGLAS
AABB - Associao Americana de Bancos de Sangue
AAFS - American Academy of Forensic Science
AICEF - Academia Iberoamericana de Criminalstica y Estudios Forenses
AmpFLP - polimorfismo do comprimento amplificado do fragmento de DNA
ASO - oligonucleotdeos alelo-especficos
CNE Conselho Nacional de tica
CODIS - Combined DNA Index System
CQ - controle de qualidade
EDNAP European DNA Profiling
EDTA - cido etilenodiamino tetractico
EL equilbrio de ligao
ENFSI - European Network of Forensic Science Institute
FBI - Federal Bureau Investigation
FSS Forensic Science Service
GEP-ISFG Grupo Espaol y Portugus de la ISFG
GITAD Grupo Iberoamericano de Trabajo en Anlisis de DNA
GQ - garantia de qualidade
CNS Conselho Nacional de Sade
HW - Hardy-Weinberg
IC Instituto de Criminalstica de So Paulo
IMESC - Instituto de Medicina Social e Criminologia de So Paulo
Inmetro Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade Industrial
Interpol Polcia Internacional
IP - ndice de paternidade
IPC - ndice de paternidade cumulativo
ISFG - International Society of Forensic Genetics
ISFH - International Society for Forensic Haemogenetics
LCN-DNA - DNA com baixo nmero de cpias
LR - likelihood ratio ou razo de verossimilhana
MPL - sonda multilocal
mRNA RNA mensageiro

mtDNA - DNA mitocondrial

NIST - National Institute of Science and Technology
NRC National Research Council
PCR Polymerase Chain Reaction ou reao em cadeia da polimerase
PE - probabilidade de excluso
PP - probabilidade de paternidade
RFLP - restriction fragment length polymorphism ou polimorfismo de tamanho de
fragmentos de restrio
RT-PCR - PCR em tempo real
SBML - Sociedade Brasileira de Medicina Legal
SENASP/MJ - Secretaria Nacional de Segurana Pblica - Ministrio da Justia
SGM - segunda gerao de multiplex
SLP sonda para lcus nico
SNP - single nucleotide polymorphism ou polimorfismo de nucleotdeo nico
SSO - sondas especficas para seqncias oligonucleotdicas
SSP Secretaria de Segurana Pblica de So Paulo
STR - short tandem repeats ou repeties curtas consecutivas
SWGDAM Scientific Working Group DNA Analysis Methods
VNTR - variable number of tandem repeats ou nmero varivel de repeties consecutivas
Y-SNP SNP presente no cromossomo Y
Y-STR STR presente no cromossomo Y

xi

SUMRIO
RESUMO
ABSTRACT
ABREVIATURAS E SIGLAS
INTRODUO ............................................................................................................

11

Captulo I EVOLUO DAS TCNICAS UTILIZADAS NA

IDENTIFICAO HUMANA
1. Histrico e consideraes gerais .............................................................................

16

2. Medicina Forense e Gentica ..................................................................................

17

2.1. Principais sistemas sangneos eritrocitrios .....................................................

18

2.2. Sistema sangneo leucocitrio ............................................................................

20

2.3. O uso do DNA na identificao humana .............................................................

21

3. Vantagens do exame de DNA sobre os testes tradicionais ...................................

22

4. Anlises de DNA coadjuvantes ...............................................................................

24

Captulo II O DNA
1. Estrutura e funo ...................................................................................................

26

2. Transmisso da informao gentica .....................................................................

32

3. Regies hipervariveis .............................................................................................

32

4. Tipos de polimorfismos ...........................................................................................

34

5. Mtodos de deteco ................................................................................................

35

Captulo III PROCEDIMENTOS TCNICOS PARA ANLISE DE DNA

1. Aspectos gerais ........................................................................................................

43

2. Coleta de materiais ..................................................................................................

44

2.1. Cadeia de custdia ................................................................................................

53

2.2. Resoluo SSP 194/99 ...........................................................................................

55

2.2.1. A coleta de materiais e a Constituio Federal ...............................................

59

xii

2.2.2. Princpios ticos relacionados coleta de materiais .......................................

61

3. Extrao do DNA .....................................................................................................

62

4. Quantificao do DNA extrado .............................................................................

67

5. Amplificao do DNA ..............................................................................................

69

6. Formas de deteco do DNA amplificado .............................................................

75

7. Significncia e interpretao dos resultados .........................................................

80

7.1. Freqncia de gentipos e perfis na populao .................................................

80

7.2. Freqncias como probabilidade e razo de verossimilhana .........................

85

7.3. Investigao de paternidade e identificao de cadveres ................................

89

8. Elaborao de laudo pericial ou relatrio de anlises ..........................................

91

9. Controle de qualidade ............................................................................................. 101

Captulo IV O LABORATRIO DE DNA DO INSTITUTO DE
CRIMINALSTICA DE SO PAULO
1. Introduo ................................................................................................................ 117
2. Anlises realizadas ................................................................................................... 118
3. Projetos e pesquisas em andamento ....................................................................... 126
Captulo V O EXAME DE DNA APLICADO AO PROCESSO PENAL E O
SEU IMPACTO SOCIAL
1. A prova do DNA no sistema legal ........................................................................... 129
2. A tipagem do DNA e a sociedade ............................................................................ 140
CONCLUSES ............................................................................................................ 144
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ....................................................................... 147
GLOSSRIO ................................................................................................................ 157
ANEXOS ....................................................................................................................... 161
NDICE REMISSIVO ................................................................................................. 187

11

INTRODUO

A anlise de DNA (cido desoxirribonuclico) evoluiu no sentido de se

tornar indispensvel como parte da rotina para estudos de casos forenses, por empregar
tcnicas extremamente sensveis. Com ela, suspeitos podem ser ligados a locais de crime
ou um local de crime ser ligado a outro, atravs do estudo de pequenos vestgios biolgicos
oriundos, por exemplo, da saliva impregnada em tocos de cigarro, clulas da pele em
volantes de automveis ou plos e cabelos em roupas. Grandes bancos de DNA podem
rapidamente indicar a combinao de perfis encontrados no cenrio do crime, ou mesmo,
pela combinao parcial, se aproximar de parentes do perpetrador. Casos de crimes sexuais
considerados insolveis1 esto comeando a ser resolvidos dcadas aps sua investigao
pela anlise de DNA degradado contido em swabs2 ou lminas de microscopia que foram
guardados. Vtimas de desastre em massa como acidentes areos, atos de terrorismo e
catstrofes naturais, onde a identificao fsica impossvel, podem ser identificadas sem
qualquer dvida em dias (JOBLING; GILL, 2004).

A proeminncia adquirida por esta tcnica pauta-se no desenvolvimento da

Biologia Molecular e na estabilidade qumica e trmica do DNA que, mesmo aps longo
perodo de tempo - meses, e, s vezes, anos -, permite a obteno de padres genticos
indivduo-especficos que podem ser comparados com aqueles da vtima ou suspeito em
casos de infrao penal.

As condies e disposio das diversas amostras biolgicas no local dos

fatos possibilitam reconstituir, com bastante exatido e segurana, a dinmica do evento
criminal derivada da atividade pericial forense, no que se refere, s seguintes reas:

Autoridades de Nova York planejam revisar sistematicamente as evidncias biolgicas de centenas de

crimes sexuais no solucionados com base em seus perfis de DNA, com a inteno de indiciar agressores
no identificados antes de se esgotar o prazo de 10 anos imposto pelo estatuto de limitaes, atravs do
John Doe Indictment Project [projeto de indiciamento do joo ningum] (RASHBAUM, W. K., 2003).
Chumao de algodo, ou outro material absorvente, preso a uma extremidade adequadamente esterilizada
de uma haste, e que se emprega ou para aplicao de medicamento, ou para coleta, por atrio, de material
destinado a estudos. Por ainda no ser unnime nos dicionrios de lngua portuguesa consultados a
adaptao deste termo para suabe, preferimos adotar sua grafia original na lngua inglesa, forma consagrada
entre os tcnicos do meio forense [s. m. s. swab; pl. swabs].

12

a. identificao de suspeitos em casos de crimes sexuais como estupro,

atentado violento ao pudor e congneres; investigao de paternidade
nos casos de gravidez resultante de estupro;

b. identificao de partes e rgos de cadveres mutilados, de cadveres

carbonizados e em decomposio ou j esqueletizados, inclusive
para esclarecimento de outros crimes3;

c. estabelecimento de relao entre suspeitos e locais de crimes, de um

local de crime e outro e entre instrumento lesivo e vtima, por
produo de perfis de DNA a partir de material biolgico (sangue,
esperma, plos, pele e outros) encontrado na cena do crime ou
presente em objeto relacionado ao crime.

Deve-se ainda ressaltar, face aos exames tradicionais mormente limitados

anlise sangnea, a diversidade de materiais biolgicos que podem ser utilizados na
determinao do perfil gentico alm das amostras sangneas: esperma, saliva, urina,
tecidos moles, plos e outros anexos drmicos, dentes, ossos, secrees e outros fluidos
relacionados a ocorrncias criminais.

Assim disposto, entende-se que a genotipagem forense se presta, no ncleo

principal de sua finalidade, a estabelecer os correspondentes vnculos genticos entre
amostras-questionadas, vestgios de origem biolgica desconhecida, e amostras-referncia,
de origem biolgica conhecida, concluindo-se pela determinao da origem individual de
cada vestgio e, a partir desse ponto e mesmo coligado a outros meios de prova,
eventualmente reconstruir parcial ou totalmente a dinmica do ato infracional.

Ressalte-se ainda, a exemplo de outros pases, a criao de banco de dados

com perfis genticos dos vestgios analisados e de criminosos condenados que vem
contribudo na elucidao de delitos.

Neste sentido inclui-se a necessidade da prova de filiao nos casos de infanticdio (MUAKAD, 2002).

13

Por estas razes, o emprego do exame de DNA como ferramenta auxiliar na

elucidao de crimes e na identificao de pessoas tema de grande repercusso na
sociedade. Entretanto, por ser sobejamente empregado nas aes de investigao de
paternidade, a divulgao macia da eficcia deste exame pelos meios de comunicao
acabou por lhe dar uma aura de infalibilidade, colocando em descrdito os mtodos
analticos mais antigos. Enfocada pela mdia como tcnica suprema, foram omitidas do
grande pblico as limitaes existentes quando aplicada Criminalstica e Medicina
Forense, bem como os custos e a complexidade dos processos tcnicos exigidos para que
sejam auferidos resultados confiveis.

No intuito de diminuir a exacerbada exaltao desta tcnica, faz-se mister o

esclarecimento de sua real potencialidade como contribuinte para o estabelecimento da
relao de causalidade nos crimes de resultado dolosos ou culposos. Alm disto, em nosso
meio acadmico o tema necessita ser mais bem discutido de forma a possibilitar aos
operadores do direito os conhecimentos tcnico-cientficos necessrios para a correta
interpretao dos resultados oferecidos pelos exames de DNA.

O tratamento da aplicao do exame de DNA na elucidao de crimes

poderia tambm ensejar estudos pormenorizados sobre os aspectos ticos e jurdicos
pertinentes ao assunto. Sem desprezar esses e outros relevantes desdobramentos que o
tema sugere, e que eventualmente podero ser considerados no desenvolvimento do
trabalho, o propsito central deste estudo a abordagem de questes relacionadas a:

1. contribuio da Biologia Molecular no aperfeioamento dos testes

de identificao humana;

2.

regies polimrficas do DNA mais adequadas s anlises forenses;

3. cuidados na coleta e custdia de amostras forenses;

4. caractersticas do laudo pericial de exames de DNA;

5. controle de qualidade e garantia de qualidade das anlises forenses

de DNA;

14

6. caracterizao da rotina laboratorial e dos procedimentos tcnicos

adotados pelo Laboratrio de DNA do Instituto de Criminalstica de
So Paulo e estimativa do xito alcanado em suas anlises;

7. custo fiscal e vantagens do emprego da anlise de DNA no meio

forense;

8. possveis distores na valorao do exame de DNA na investigao

e na instruo criminal brasileiras, frente complexidade da tcnica;

9. medidas e aes que podem contribuir para a excelncia dos exames

de DNA;

10. preparao dos operadores de direito para o uso das informaes

contidas nas provas de DNA, bem como para o esclarecimento dos
alcances e limitaes desta tcnica;

11. efetividade do papel do analista forense para a distribuio de

justia;

12. possibilidade de erros na elaborao de exames forenses de DNA e

13. aplicabilidade da anlise de DNA no sistema legal.

Partindo destas preocupaes, a exposio ser iniciada com captulo em

que se pretende fazer uma reviso da aplicao dos conhecimentos da Gentica na
Medicina Forense e ressaltar o DNA como objeto de anlise forense.

O captulo seguinte ser dedicado ao estudo da molcula de DNA, nela

destacando regies polimrficas caractersticas que permitem, na identificao humana, a
individualizao tal qual uma impresso digital gentica.

15

Na seqncia, j no estudo dos procedimentos tcnicos para anlise de

DNA, dar-se- nfase ao estudo metodolgico da coleta de materiais biolgicos que sero
submetidos a exame, dos procedimentos empregados para a extrao, quantificao e
amplificao do DNA destas amostras, bem como dos protocolos utilizados para a anlise
comparativa dos perfis genticos obtidos. Sero destacados ainda neste captulo os clculos
estatsticos pertinentes anlise dos perfis genticos, as peculiaridades do laudo pericial
concernentes a este tipo de anlise e a importncia do controle de qualidade laboratorial.

O quarto captulo cuidar da apresentao do trabalho pericial realizado no

Laboratrio de DNA do Instituto de Criminalstica de So Paulo e tambm da exposio de
levantamento estatstico realizado sobre o sucesso das anlises nele realizadas, no perodo
compreendido entre janeiro de 2003 e agosto de 2004.

No ltimo captulo sero abordados os aspectos relevantes sobre a utilizao

das informaes sobre o DNA na esfera judicial e suas repercusses na sociedade.

As concluses constaro no encerramento da apresentao. Como o tema

sugere, desde o incio da pesquisa, estas no sero definitivas, pois a evoluo tecnolgica
e cientfica nos impele a constante atualizao.

Desta forma, o objetivo da pesquisa o de contribuir, ainda que

parcialmente, para que os aplicadores do Direito, em especial, do Direito Penal, tenham um
referencial para responsabilizao objetiva dos autores de crimes.

16

CAPTULO I
EVOLUO DAS TCNICAS UTILIZADAS NA IDENTIFICAO
HUMANA

1. Histrico e consideraes gerais

A evoluo da gentica forense foi conduzida pela anlise das variaes

genticas, comeando h mais de um sculo com as descobertas de Karl Landsteiner sobre
grupos de polimorfismos do sistema ABO no sangue humano e pela rpida compreenso
que estas variaes poderiam ser aplicveis na resoluo de crimes. Para que se possa
melhor compreender os importantes passos deste desenvolvimento, necessrio retomar
algumas notaes dos primrdios da Gentica.

Em 1865, Gregor Mendel comunicou Sociedade de Brnn para o Estudo

da Cincia, na antiga Tchecoslovquia, os resultados obtidos sobre seus experimentos com
ervilhas. Tais estudos, iniciados em 1856 e terminados em 1864, foram intitulados
Experincias sobre Hbridos de Plantas e estabeleciam regras previsveis para o processo
da hereditariedade.

Mendel concluiu que, durante o processo de reproduo, ocorria uma

passagem de elementos fsicos controladores de caractersticas hereditrias distintas dos
genitores para a prole. Tais elementos foram, posteriormente, denominados genes.

Mendel demonstrou experimentalmente que a propagao dos caracteres

genticos est sujeita s leis gerais de segregao e recombinao independentes por meio
de propores estatsticas de mono e poliibridismo e que mais tarde, no incio do sculo
XX, foram limitadas pelas descobertas, principalmente atribudas a Thomas Morgan, da
ligao e da permuta intercromossmica, fenmenos conhecidos, respectivamente, por
linkage e crossing-over, durante os processos de mitose e meiose.

As descobertas de Mendel no foram imediatamente reconhecidas, em parte

por serem de difcil compreenso e em parte porque outro tema instigante ocupava a mente

17

de leigos e cientistas da poca: a teoria da evoluo biolgica de Charles Darwin. Os

trabalhos de Mendel foram ento arquivados e esquecidos nas bibliotecas europias. Suas
pesquisas s foram verdadeiramente reconhecidas em 1900, passando, a partir de ento, ser
considerado o pai da Gentica (BROWN, 1999).

A definio de Gentica como a cincia da hereditariedade e da variao foi

proposta por Batelson em 1905. Porm, j em 1885, Weissman havia reconhecido a base
fsica da Gentica ao distinguir somatoplasma e germoplasma, classificando assim os
diferentes tecidos que compem o organismo daqueles relacionados com as clulas
germinativas, vulos e espermatozides, que garantem a continuidade gentica do
indivduo (CALABREZ, 1999).

Partindo destes pressupostos, em 1909, Johansen, ao distinguir fentipo de

gentipo, lanou os postulados bsicos da Gentica que acabaram por debelar a teoria de
Jean Lamarck, baseada na herana dos caracteres adquiridos. Como fentipo, Johansen
incluiu o conjunto de caractersticas estruturais e fisiolgicas que podem ser observadas em
um indivduo. Como gentipo, a configurao gentica portadora da informao com
capacidade de produzir variaes no fentipo em interaes com os fatores ambientais.

Atualmente definida como um ramo da Biologia que estuda as leis da

transmisso dos caracteres hereditrios nos indivduos, e as propriedades das partculas que
asseguram essa transmisso, a Gentica pode tambm ser sinteticamente entendida como o
estudo do processo pelo qual as caractersticas individuais so passadas dos genitores para
a prole, de modo que todos os seres vivos assemelham-se aos seus ancestrais (ALBANO,
2004).

2. Medicina Forense e Gentica

A Medicina Forense e a Criminalstica, conhecidas em alguns pases como

cincias forenses, so especialidades que tm como objetivo ajudar juzes e jurados a
resolver questes legais no apenas na rea criminal, como o caso da Criminalstica, mas
tambm aquelas pertencentes rea cvel. O campo de estudo destas disciplinas tem
grande amplitude, abrangendo conhecimentos da biologia, qumica, fsica e matemtica,

18

incluindo variadas disciplinas como botnica, balstica, papiloscopia, documentoscopia e

outras.

Entretanto, nos ltimos vinte anos uma ferramenta particular da biologia

tem revolucionado as investigaes forenses a anlise de DNA. Como todos os seres
vivos contm DNA e todo DNA exibe variabilidade entre espcies diferentes e dentro de
uma mesma espcie, qualquer material associado com um caso legal pode levar a
informaes sobre sua origem (JOBLING; GILL, 2004).

O processo de recombinao gnica proporciona um alto grau de

variabilidade entre os organismos vivos. Cada indivduo da espcie humana possui uma
configurao genotpica nica, com exceo de gmeos monozigticos que compartilham
do mesmo gentipo.

Inmeras caractersticas hereditrias humanas permitem aferir, at certo

grau, esta individualidade gentica, fato este de importncia forense. Com efeito, a histria
da Medicina Forense possui estreita ligao com a descoberta dos antgenos eritrocitrios
determinantes dos vrios sistemas de sangneos humanos, largamente utilizados na
identificao gentica dos indivduos.

2.1. Principais sistemas sangneos eritrocitrios

Em 1900, Landsteiner demonstrou que os seres humanos podiam ser

agrupados conforme a capacidade de seus soros aglutinarem, ou no, as hemcias de seus
semelhantes. Observou ainda que a aglutinao decorria da presena de anticorpos no soro,
os quais reagiam com antgenos correspondentes das hemcias. Verificou tambm que o
soro de um indivduo, normalmente, no continha os anticorpos correspondentes aos
antgenos de suas prprias hemcias. Com este trabalho, que lhe valeu o prmio Nobel
trinta anos depois de sua publicao, Landsteiner no s iniciou os estudos para o emprego
cientfico do sangue como agente teraputico, mas tambm fomentou a Imunohematologia,
cujas contribuies so inestimveis Medicina e Gentica Humana (BEIGUELMAN,
1972).

19

A possibilidade de identificar os antgenos das hemcias atravs dos testes

de aglutinao permitiu que os sangues humanos pudessem ser classificados em grupos.
Por outro lado, a anlise da distribuio familiar dos diferentes grupos sangneos
possibilitou interpretar a existncia de numerosos antgenos nas hemcias, como
decorrentes da ao de genes.

O sistema de antgenos eritrocitrios conhecido como ABO possibilitou

estudos iniciais de parentesco. Basicamente constitudo por dois antgenos, esse sistema
compe os quatro grupos sangneos encontrados: A, B, AB e O. Em 1910, Von Dungern
e Hirszfeld demonstraram a utilidade do sistema ABO na determinao da paternidade com
base na herana mendeliana (RACE; SANGER, 1968). Entretanto, apesar de sua utilizao
na determinao de parentesco, o sistema ABO no suficientemente informativo, pois
apresenta apenas uma probabilidade de incluso de paternidade de 13% (SILVER, 1982).

Em 1927, Landsteiner e Levine descreveram o sistema MN, constitudo por

dois antgenos, M e N, e que determinam trs gentipos MM, MN e NN. Entretanto, deuse, em 1939, outra grande contribuio para o estudo dos sistemas sangneos: a
descoberta de Levine e Stetson da incompatibilidade materno-fetal causada por anticorpo
imune, decorrente de antgeno eritrocitrio fetal, reconhecido como fator Rhesus ou Rh por
Landsteiner e Levine em 1940. A complexidade gentica deste novo sistema foi
desvendada por Fisher em 1943 (RACE; SANGER, 1968).

Aps a segunda Guerra Mundial, com a introduo de testes antiglobulina prova de Coombs - uma srie de sistemas de grupos sangneos geneticamente
independentes foi descoberta. Dentre eles, destacam-se os grupos sangneos Kell, Duffy e
Kidd, tambm utilizados nos estudos de parentesco, apesar de serem pouco informativos na
determinao (incluso) de paternidade quando empregados individualmente. Entretanto,
ganharam reconhecimento pelo valor de excluso, pois, ao serem associados aos sistemas
ABO, MN e Rh, tornam possvel excluir aproximadamente 70% dos indivduos acusados
de paternidade (SILVER, 1982).

20

2.2. Sistema sangneo leucocitrio

A demonstrao da ocorrncia de um sistema de histocompatibilidade,

conhecido por complexo HLA (histocompatibility leucocyte antigen), em 1954, trouxe
grandes prstimos Medicina Forense e marcou uma segunda fase na evoluo da
Imunogentica.

O sistema HLA um conjunto de genes co-dominantes, localizados no

cromossomo 6 da espcie humana e que se expressam como molculas de glicoprotenas
na superfcie das clulas, quando so conhecidas como antgenos leucocitrios humanos
(JOBIM; JOBIM; BRENNER, 1999). Tais antgenos so descritos nas seguintes classes:
HLA-A, HLA-B, HLA-DR, HLA-DQ e HLA-DP (JOBIM et al., 1996).

A anlise desses antgenos realizada com anticorpos anti-HLA

provenientes do soro humano e propicia a determinao da individualidade gentica com
acentuado poder de discriminao. Quando analisado individualmente, dependendo do
nmero de anticorpos utilizados para a tipagem, a probabilidade de incluso na
identificao humana de 90 a 95% (SILVER, 1982).

No sculo passado, at o incio dos anos 80, a avaliao de vnculo familiar

era pautada na anlise dos antgenos do sistema HLA ou por conjuntos de protenas
polimrficas (haptoglobinas, fator C do complemento e enzimas polimrficas como a
fosfatase cida, a esterease D e a fosfoglucomutase - PGM) e sistemas antgenos
eritrocitrios que, quando associados, propiciavam grande probabilidade de incluso de
parentesco. Entretanto, mesmo assim, para alguns casos, eram limitados, tornando-os
inconclusivos.

Os avanos da Biologia Molecular favoreceram o aperfeioamento e o

desenvolvimento dos testes de identificao. Com o surgimento de tcnicas moleculares
para avaliao das caractersticas genticas dos indivduos atravs do DNA, os testes
tradicionais foram sendo sistematicamente substitudos, dando-se assim o incio da terceira
e talvez a mais significativa fase do desenvolvimento da Medicina Forense.

21

2.3. O uso do DNA na identificao humana

A revoluo do DNA, do qual trataremos detalhadamente no prximo
captulo, comeou em 1984, com a descoberta, por Alec Jeffreys, em Leicester - Reino
Unido, de loci hipervariveis conhecidos por minissatlites (JEFFREYS; WILSON;
THEIN, 1985a)4 e que produziam uma espcie de impresses digitais de DNA
(JEFFREYS; WILSON; THEIN, 1985b).

A aplicabilidade potencial da tipagem de DNA em amostras forenses foi

demonstrada por laboratrios do Reino Unido, Estados Unidos e Canad, em meados da
dcada de 1980. Esse trabalho demonstrou que o DNA estava presente nas amostras
forenses em quantidade suficiente para ser testado (NRC, 1992). A tabela abaixo inserida
ilustra a quantidade de DNA presentes nestas amostras.
TABELA 1 Contedo de DNA nas amostras biolgicas (NRC, 1992).
Tipo de amostra

Quantidade de DNA*

Sangue
mancha com 1 cm2 de rea
mancha com 1 mm2 de rea
Smen
esfregao vaginal ps-coital

20.000 40.000 ng/mL

cerca de 200 ng
cerca de 2 ng
150.000 300.000 ng/mL
0 3.000 ng

Cabelo
arrancado
desprendido
Saliva
Urina

1 750 ng/fio
1 12 ng/fio
1.000 10.000 ng/mL
1 20 ng/mL

*A quantidade de DNA fornecida em nanogramas (ng); 1 ng = um bilionsimo de grama (10 -9g).

A tipagem molecular de material gentico foi utilizada oficialmente pela

primeira vez, em 1985, para a resoluo de um problema de imigrao (JEFFREYS;
BROOKFIELD; SEMEONOFF, 1985). Um ano aps, Jeffreys tambm empregou esta
tcnica para identificar o verdadeiro estuprador e assassino de duas vtimas. A partir deste
caso, que ficou conhecido como Enderby (Queen v. Pitchfork), a Criminalstica e a
Medicina Forense tm empregado a tcnica de tipagem molecular de DNA como potente

Descreve a descoberta de hipervariveis de DNA e um mtodo de deteco que sensvel o suficiente para
permitir anlise de pequenas quantidades de DNA que podem ser encontradas em estudos de casos
forenses.

22

arma no esclarecimento de diversos delitos e na identificao humana (MOURA-NETO,

1998).

3. Vantagens do exame de DNA sobre os testes tradicionais

No aspecto forense, a caracterizao do material biolgico tem por objetivo
limitar ou reduzir o nmero de indivduos que poderiam ser a fonte do material. A
populao sob suspeita algumas vezes limitada ou muito prxima, permitindo assim a
resoluo, mesmo com marcadores genticos de baixo poder discriminatrio. Contudo, nos
casos em que a populao no limitada pelas circunstncias do caso, os mtodos de maior
poder discriminatrio tornam-se recursos importantes. A sorologia convencional (sistemas
ABO, Rh, MN, PGM, HLA, entre outros) pode rotineiramente gerar nmeros de apenas
um em dois ou um em alguns milhares. Com o estudo do DNA, o poder discriminatrio
pode atingir o limite necessrio para inferir a identificao (KIRBY, 1990).

Vrias vantagens do DNA sobre a sorologia tradicional foram descritas por

Weedn; Swarnen (1998). A primeira e principal delas reside na possibilidade de sua
aplicao sobre toda e qualquer fonte de material biolgico. Uma ampla variedade de
lquidos corporais pode ser encontrada nos exames de vestgios. Todavia, um exame
sorolgico completo pode ser realizado apenas em sangue e no em outros tecidos ou
lquidos corporais. Porm, com estudos de DNA, pequena quantidade qualquer material
biolgico, incluindo sangue, cabelos, saliva smen, tecido, urina ou qualquer outro fluido
biolgico, pode ser analisada para associar um suspeito ao crime.

A segunda e mais amplamente propalada vantagem do exame de DNA seu

potencial discriminatrio. Em alguns casos, os estudos de DNA podem revelar a
identificao positiva, comparativamente aos exames envolvendo o grupo sangneo ABO,
que tem a capacidade de discriminar aproximadamente um em trs indivduos na
populao geral, e, mesmo com marcadores sorolgicos adicionais, os valores tpicos so
de um em alguns milhares, enquanto que com o DNA, os valores podem chegar a um em
alguns bilhes ou mais.

23

A sensibilidade do exame de DNA constitui a terceira grande vantagem

deste mtodo. A tipagem do polimorfismo do DNA atravs da reao em cadeia da
polimerase (PCR), que estudaremos mais adiante, pode ser efetuada com o DNA de
algumas poucas clulas, de longe superando a sensibilidade dos exames tradicionais.

A quarta vantagem do DNA sua resistncia aos fatores ambientais. O

DNA uma molcula robusta, relativamente resistente a cidos, lcalis e detergentes,
diferentemente dos determinantes proticos, lipdicos e carboidratos. As protenas podem
ser desnaturadas de forma relativamente mais fcil e sua estrutura terciria conformacional,
que importante na tipagem sangnea, facilmente desnaturvel. A informao da
tipagem do DNA, por sua vez, encontrada na seqncia nucleotdica, que independe da
conformao da molcula. Conseqentemente, os exames com DNA, diferentemente dos
marcadores sorolgicos tradicionais, podem ser realizados com maior segurana em
amostras muito antigas e que estiveram expostas a maiores agresses ambientais.

Finalmente, a quinta vantagem do DNA reside na possibilidade de se

separar o DNA da clula espermtica de qualquer outro DNA celular. Um dos problemas
histricos nos estudos de vestgios de violncia sexual a presena, quase que
exclusivamente, de uma mistura de smen e outro lquido corporal, o que representa um
problema srio para os exames sorolgicos tradicionais de tipagem, pois em
aproximadamente dois teros dos casos, no h possibilidade de se identificar o smen do
doador pelo fato de a mistura dos fluidos biolgicos resultar em uma mistura de tipos
sorolgicos (DAVIES, 1982). Todavia, o DNA do esperma pode ser separado do DNA
no-espermtico por lise diferencial de membranas, o que permite a individualizao da
fonte do smen, sem que se confunda com os dados do no-smen contidos no vestgio.
Nestes estudos, bem como nos relativos a outros tipos de crimes, de fundamental
importncia a utilizao do sistema amelogenina que propicia a determinao do sexo da
pessoa que deu origem amostra que est sendo analisada (AKANE et al, 1991).

As vantagens acima enumeradas fizeram robustecer o emprego da tipagem

do DNA nas anlises forenses. A partir dela, no decorrer de quase vinte anos de seu
emprego, novas reas de estudo foram abertas para complementar o rol das ferramentas
empregadas na elucidao de crimes, como veremos a seguir.

24

4. Anlises de DNA coadjuvantes

Quando um perfil gentico oriundo de uma cena de crime no encontra

combinao com as amostras-referncia ou com as contidas em um banco de dados,
qualquer informao que possa ser deduzida deste DNA sobre seu doador ser til. Um
item bsico a informao sobre o sexo do doador. Contudo, duas novas reas populao
de origem e caractersticas fenotpicas tm sido investigadas e utilizadas para ajudar as
investigaes criminais.

Grandes variaes genticas so encontradas nas populaes humanas. No

entanto, indivduos de diferentes populaes so, na mdia, ligeiramente mais diferentes
entre si do que indivduos da mesma populao, permitindo, assim, que conjuntos de
marcadores genticos sejam usados para predizer a populao de origem e isto pode ser
aplicado para analisar amostras oriundas de locais de crime (BAMSHAD et al., 2004).

Uma forte predio da populao de origem pode indicar alguns aspectos

fenotpicos, dentre os quais a cor da pele. Contudo, testes genticos diretos podem ser mais
teis. Muitos fentipos humanos, por exemplo, estatura, caractersticas faciais e
pigmentao, tm um forte componente gentico. Entretanto, apenas investigaes sobre a
pigmentao tm sido levadas a srio, apesar da possibilidade de mutao que podem levar
ao albinismo. Nesta rea, o gene que tem sido mais estudado o MC1R (melanocortin 1
receptor), ligado produo de melancitos. Testes com este gene tm sido teis como
ferramentas de investigao em populao como a do Reino Unido, onde pessoas ruivas
so encontradas em apreciveis freqncias. Outros genes relacionados com a pigmentao
vm sendo testados com menos sucesso, como o caso dos relacionados com a cor dos
olhos. Contudo, a complexidade da herana quantitativa associada a estes genes e o
conjunto de variaes introduzidas por diferenas ambientais e nutricionais que podem
influenciar na expresso gnica fazem com que estes testes no sejam determinativos
(JOBLING; GILL, 2004).

Uma outra srie de estudos genticos sobre espcies no humanas alvo de

interesse da investigao forense. Anlise de DNA tem sido usada quando material animal
(usualmente plos) encontrado em cenas de crime e em investigaes sobre comrcio
ilegal de espcies. Materiais vegetais podem tambm estar associados com o cenrio dos

25

fatos e proporcionar informaes vitais para a investigao criminal, como tambm em

disputas cveis que versem sobre a identificao da origem de valiosas espcies cultivadas
comercialmente ou ilegalmente, como o caso da Cannabis sativa. Microrganismos
podem ser fontes de evidncia em contaminao de gneros alimentcios em casos de
negligncia mdica envolvendo infeces, bem como em situaes de deliberada
contaminao, como foi o caso de inalao de antraz que levou pelo menos cinco pessoas
morte nos Estados Unidos em 2001. Nestes casos, o objetivo do analista forense o de
demonstrar a origem do material no humano e para isto a anlise de DNA tem lugar de
destaque (JOBLING; GILL, 2004).

26

CAPTULO II
O DNA

1. Estrutura e funo

Os cidos nuclicos foram descobertos, em 1869, por Friedrich Miescher,

um mdico suo de 22 anos de idade. Atravs de tcnicas, notavelmente avanadas para a
poca, Miescher isolou, dos ncleos de clulas de pus e de esperma de salmo, uma
macromolcula, nunca antes identificada, qual deu o nome de nuclena, posteriormente
denominada cido nuclico. Anos aps a descoberta de Miescher, o bioqumico Kossel
evidenciou a existncia de dois tipos de cidos nuclicos: o cido desoxirribonuclico
(ADN ou DNA) e o cido ribonuclico (ARN ou RNA) (GRIFFITHS et al., 2000).

No incio do sculo XX, biologistas reconheceram que os genes esto nos

cromossomos, at ento conhecidos como estruturas filiformes do ncleo da clula
eucaritica e que se tornam visveis no comeo da diviso celular.

Mais tarde, quando a anlise bioqumica se tornou possvel, notou-se que os

cromossomos so basicamente constitudos de DNA e protenas. Como se imaginava que o
DNA era uma molcula de relativa simplicidade molecular, primeiro se acreditou que os
genes eram compostos de protenas por terem estas maior diversidade qumica. Entretanto,
apesar de sua simplicidade, a estrutura e as propriedades qumicas do DNA fizeram-no a
matria-prima ideal para os genes.

Os genes de cada clula so feitos de DNA e a compreenso da relao entre

DNA e genes5 veio de experimentos feitos com larga variedade de organismos. A primeira
forte evidncia de que os genes so constitudos de DNA veio em 1944, quando se
demonstrou que, ao se adicionar DNA purificado em uma bactria, ele modificava suas
propriedades e estas mudanas eram passadas para as geraes bacterianas subseqentes.
Hoje, o fato de o DNA ser considerado o material gentico to fundamental ao
5

Desde a descoberta do DNA por Friedrich Miescher, em 1869, muito tempo se passou at que suas funes
primordiais de conter e transmitir a informao gentica fossem sugeridas, em 1944, por Avery, MacLeod e
MCCarty e, definitivamente comprovadas, em 1953, por Hershey (SCHRANK, 1996).

27

pensamento biolgico que difcil conceber a enorme lacuna intelectual que esta
descoberta preencheu (ALBERTS et al., 1998).

No comeo dos anos 50 do sculo passado, o DNA foi examinado pela

primeira vez por difrao de raios X, uma tcnica para determinao da estrutura atmica
tridimensional de uma molcula. Os primeiros resultados indicavam que o DNA era
composto por duas fitas compondo uma hlice.

A observao que o DNA era uma dupla fita foi de importncia crucial para
a proposio, em 1953, de um modelo correto para a estrutura de DNA. Somente quando o
modelo da estrutura do DNA de Watson-Crick foi proposto6, seu potencial para replicao
e informao codificada tornou-se aparente.

A molcula de DNA consiste em duas longas cadeias longas de

polinucleotdeos compostos por quatro tipos de nucleotdeos. Cada uma destas cadeias
conhecida como uma fita de DNA. As duas cadeias esto unidas por pontes de hidrognio
entre as bases de cada nucleotdeo.

Os nucleotdeos so compostos por um acar de cinco carbonos, uma

pentose,

denominado

desoxirribose

(2dexosi-D-ribose);

uma

base

nitrogenada

(heterocclica) ligada ao carbono 1 da pentose; e um at trs grupos fosfato (PO4-), ligados

ao carbono 5 da pentose. As bases nitrogenadas podem ser purinas, adenina (A) e guanina
(G) ou pirimidinas, citosina (C) e timina (T). As bases se ligam ao carbono 1 da pentose
atravs de uma ligao glicosdica . Estas letras (A, C, G e T) so tambm utilizadas os
quatro diferentes nucleotdeos, isto , as bases ligadas aos grupos acar e fosfato.

O modo pelo qual os nucleotdeos esto ligados d fita de DNA uma

polaridade qumica. Se imaginarmos que cada nucleotdeo tem um boto (o fosfato) e um
cavado (veja Figura 1), em cada fita completa, formada pelo conjunto boto e cavado, ter-

A competio pela descoberta da estrutura do DNA, repleta de emoes e intrigas, envolveu trs grupos de
cientistas: a) Watson e Crick, les enfants terribles, do Laboratrio Cavendish, em Cambridge; b) Wilkins e
Rosalind, do Kings College, em Londres; e c) Linnus Pauling, considerado poca como o maior qumico
do mundo, da CalTech, na Califrnia. Wilkins e Rosalind descobriram o modelo espacial e formularam a
estrutura helicoidal do DNA, em 1953, mas apenas Watson e Crick foram agraciados com o Prmio Nobel
de Fisiologia e Medicina, nove anos depois por esta descoberta (ALBANO, 2004; OLIVEIRA, 2004).

28

se-, em todas as subunidades, uma linha com a mesma orientao. Alm disto, os dois
finais de cada fita podero ser facilmente distinguidos, um como boto e o outro como
cavado. A polaridade na fita de DNA indicada pelas referncias 3 para uma extremidade
e 5 para a outra. Esta conveno baseada em detalhes da ligao qumica entre os
nucleotdeos.

Figura 1 - DNA e sua construo em blocos. O DNA feito de quatro tipos de

nucleotdeos que so ligados covalentemente. A molcula de DNA composta por duas
fitas de polinucleotdeos unidas por pontes de hidrognio entre os pares de bases.
(adaptado de ALBERTS et al., 1998).

As duas fitas de polinucleotdeos no DNA de dupla-hlice esto ligadas por

pontes de hidrognio entre as bases nitrogenadas das diferentes fitas. Todas as bases esto,

29

portanto, dentro da hlice, e a cadeia de acar e fosfato, do lado externo. Contudo, estas
bases no se pareiam aleatoriamente: A sempre se pareia com T e G com C, qual seja, uma
base pirimidina sempre se pareia com uma base purina, conforme ilustra a Figura 2.

Figura 2 - Complementaridade das bases na dupla-hlice de DNA. A forma e a estrutura qumica das bases
permitem formar pontes de hidrognio somente entre A e T e entre C e G. Duas pontes de hidrognio so
formadas entre A e T, e trs entre G e C. As bases podem se parear somente se as duas fitas de
polinucleotdeos forem antiparalelas (adaptado de ALBERTS et al., 1998).

Esta complementaridade de pareamento permite que o par de bases tenha

um arranjo favorvel no interior da dupla-hlice. Neste arranjo, cada par de bases possui
uma largura similar e isto mantm a cadeia de acar e fosfato em igual distncia ao longo
da molcula de DNA. Alm disto, as duas cadeias de acar e fosfato se espiralam, de
modo a formar a dupla-hlice, conforme ilustra a Figura 3.

30

Figura 3 A dupla-hlice de DNA. (A) Modelo da dupla-hlice. O espiralamento das duas fitas cria duas
cavidades na dupla-hlice. Conforme indica a figura, a mais larga chamada de cavidade maior e a outra de
cavidade menor. (B) Curto fragmento da dupla-hlice mostrando quatro pares de bases. Os nucleotdeos
esto unidos por ligaes covalentes entre o grupo 3 hidroxila (-OH) de um acar e o grupo 5 fosfato
(P). Assim, cada fita de polinucleotdeos tem polaridade qumica, isto , suas duas extremidades so
quimicamente diferentes. A extremidade 3 contm o grupo OH ligado posio 3 da pentose; a
extremidade 5 contm um grupo fosfato livre ligado posio 5 da pentose. (adaptado de ALBERTS et al.,
1998).

Outras foras atuantes so tambm responsveis pela estabilidade da duplahlice. Elas devem ser fortes suficientemente para manter a integridade da molcula,
entretanto devem tambm permitir certa flexibilidade na conformao da molcula,
essencial para suas atividades. Foras atuantes mais fracas, como o efeito hidrofbico e
foras de Van der Waals, estabilizam o pareamento. Cargas negativas das cadeias de
acar e fosfato interagem com ctions em soluo, o que neutraliza a repulso entre as
cadeias e contribui para a estabilidade da dupla-hlice (SCHRANK, 1996).

Os elementos de cada par de bases podem somente se ajustar na duplahlice se cada fita da hlice for antiparalela, isto , somente se a polaridade de uma fita
estiver orientada em oposio outra fita. A conseqncia disto que cada fita da
molcula de DNA contm uma seqncia de nucleotdeos que exatamente complementar
seqncia da outra fita. Isto de importncia crucial para a replicao do DNA.

31

Nos animais, o DNA encontrado abundantemente no ncleo das clulas

compondo os cromossomos, mas tambm encontrado nas mitocndrias. As mitocndrias
so corpsculos esfricos ou em forma de bastonetes, relacionados com a respirao
celular, que aparecem imersos no citoplasma. So encontradas em todas as clulas de
organismos eucariotos aerbios. A quantidade de mitocndrias por clula varia em funo
de suas necessidades energticas, sendo que uma nica clula pode chegar a possuir mais
de 5.000 cpias desta organela (JOBIM; JOBIM; BRENNER, 1999). As mitocndrias so
formadas pela diviso de outras preexistentes. O processo acontece graas existncia de
DNA em seu interior. Este DNA circular7 com regies codificantes e uma regio
hipervarivel denominada controladora ou ala-D.

A quantidade de material gentico no uniforme nos diferentes rgos e

tecidos, existindo uma variao da quantidade de DNA neles. A tabela abaixo inserida
ilustra esta variao.
TABELA 2 Quantidade de DNA encontrada em diferentes rgos e tecidos, segundo estudos de Kobilinski
(1992).
Fonte

Quantidade aproximada de DNA

Lquido amnitico

65 ng/mL (1 x 104 cel/mL na 16 semana de gestao)

Sangue (mamferos)

30 a 60 g/mL (1 g = 4 x 103 a 11 x 103 clulas, equivalendo uma

clula ntegra a 6,6 pg de DNA)

Raiz de cabelo

250 ng/raiz de cabelo arrancado

Fgado

15 g/mg

Msculo

3 g/mg

Pele

15 g/mg

Esperma

3,3 pg/cel

Clula diplide humana

5 a 6 pg

Smen

480 g/mL

A teoria endossimbionte, proposta por Lynn Margulis, em 1981, defende a idia de que os eucariotos teriam
surgido de eventos de endossimbiose entre uma clula hospedeira e clulas procariticas, que deram origem
s mitocndrias e aos cloroplastos. Esta teoria, que durante anos foi rejeitada, atualmente largamente
aceita, pois vrias evidncias a apiam, como: as organelas possurem genoma prprio, as protenas nelas
presentes serem mais semelhantes aos seus anlogos procariticos do que aos eucariticos, serem semiindependentes, com capacidade de replicao, possurem membrana dupla (membrana interna de origem
procaritica, membrana externa de origem eucaritica) e o DNA das mitocndrias ser circular, como o das
bactrias (COLLUCCI, 2002).

32

2. Transmisso da informao gentica

A transmisso da informao gentica pauta-se nos trabalhos de Gregor

Mendel que resultaram em leis fundamentais para a Gentica atual (MCKUSICK, 1992). O
enunciado da primeira lei de Mendel pode ser assim apresentado: "Cada carter
determinado por fatores (genes) que se separam na formao dos gametas, indo um
fator do par para cada gameta".

A segunda lei de Mendel a da segregao independente, onde os dois

membros de um par de genes, os alelos, jamais so encontrados no mesmo gameta, pois se
segregam e se distribuem para gametas diferentes, independentemente um do outro. Assim,
por este princpio, quando dois genes pertencentes a duas regies diferentes do genoma so
analisados, por exemplo para a identificao humana, a herana de cada uma das regies
so independentes, ou seja, cada alelo herdado de uma regio sem ter relacionamento
algum com outro alelo herdado de uma segunda regio, situada em qualquer lugar, no
mesmo ou em diferentes cromossomos (GRIFFITHS et al., 2000).

Se dois ou mais eventos so independentes, a chance de que eles ocorram ao

mesmo tempo o produto de sua probabilidades separadas. Esta regra de herana
mendeliana denomina-se regra do produto ou regra da multiplicao, universalmente
utilizada para avaliar estatisticamente se existe vnculo gentico familiar (NRC, 1992).

Trataremos, com maiores detalhes, do emprego da regra da multiplicao ao

abordar, mais adiante, os clculos estatsticos utilizados na determinao da existncia de
vnculos genticos.

3. Regies hipervariveis
Os genomas dos eucariotos apresentam, na sua organizao gnica, alguns
aspectos comuns: eventuais interrupes na seqncia de genes individuais; existncia de
mltiplas e, s vezes, idnticas cpias de algumas seqncias particulares e existncia de
grandes pores do genoma sem nenhuma funo codificante ou regulatria aparente.

33

Tanto entre eucariotos como entre procariotos, o tamanho do genoma varia

de espcie para espcie. Por isso, a quantidade total de DNA presente no genoma
(haplide) uma grandeza caracterstica de cada espcie vivente. Essa grandeza, expressa
em pares de bases (pb), chamada de valor C. Para procariotos, os valores de C variam
entre 5 x 105 e 107 pb, enquanto, para eucariotos, esses valores variam dentro de limites
muito mais amplos: desde 107 at 1011 pb (FERREIRA, 1996).

Nota-se na natureza que, em geral, para o aumento da complexidade, um

aumento no tamanho do genoma. Esta relao, entretanto, fica obscura em muitos casos,
especialmente na medida em que se avana na escala evolutiva. o caso de organismos
muito relacionados, como, por exemplo, anfbios, pertencentes a uma mesma classe, que
podem ter variaes de at 100 vezes no tamanho dos seus genomas, enquanto organismos
to distantes evolutivamente como insetos e mamferos ou crustceos e rpteis podem ter
genomas com tamanhos similares. Esta impossibilidade de correlacionar o tamanho do
genoma diretamente com a complexidade das caractersticas morfolgicas do organismo
foi chamado de paradoxo do valor C.

O paradoxo do valor C uma conseqncia direta de um fato observado em

todos os genomas eucariticos at agora analisados: h um aparente excesso de DNA em
relao quantidade estimada como necessria para conter todos os seus genes. Disto
infere-se que a maior parte do genoma de um eucarioto no funcional, ou tem outras
funes que no a de codificar protenas ou de participar na regulao direta desse
processo (FERREIRA, 1996).

Estudos sobre a cintica de renaturao de seqncias complementares de

DNA possibilitaram a identificao de diferentes classes de seqncias presentes nos
genomas dos eucariticos: DNA no repetitivo; DNA moderadamente repetitivo e DNA
altamente repetitivo (BROWN, 1999).

A grande maioria dos genes estruturais faz parte do DNA no repetitivo,

incluindo-se nesta classe os genes que codificam protenas. J as seqncias repetitivas no
so codificantes e suas funes, se existentes, no esto esclarecidas. No DNA repetitivo
so encontradas seqncias com repetio em tandem que podem determinar regies
hipervariveis classificveis por polimorfismos (FERREIRA, 1996).

34

4. Tipos de polimorfismo

Os polimorfismos das regies hipervariveis do DNA podem ser agrupados

em dois tipos: polimorfismos de comprimento e polimorfismos de seqncia

Os polimorfismos de seqncia so compostos de diferentes nucleotdeos

em uma determinada localizao do genoma. Estas variaes em seqncia podem ser
manifestadas como regies de alelos alternativos ou substituies, adies ou delees de
bases, mas a maioria dos polimorfismos de seqncia so meras mutaes pontuais
(WEEDN; SWARNEN, 1998), como veremos ao estudar o seqenciamento do DNA
mitocondrial e os SNPs (single nucleotid polimorphism) polimorfismo de nucleotdeo
nico.

J os polimorfismos de comprimento so seqncias de nucleotdeos que se

repetem, sendo denominadas VNTRs (variable number of tandem repeats) ou nmero
varivel de repeties consecutivas.

As regies com repeties da seqncia bsica maiores que 8 pares de bases

(pb) foram denominadas de minissatlites ou regies com repeties em tandem longas
(LTRs). Aquelas com repeties da seqncia bsica de aproximadamente 2 a 8 pb so
denominadas de regies microssatlites ou STRs (short tandem repeats) (BROWN, 1999;
JOBIM; JOBIM; BRENNER, 1999).

Os minissatlites so formados por seqncias de vrios nucleotdeos, por

exemplo, (ATGCGAGCTACTGAGCC)n, repetidas em nmeros diferentes em cada
indivduo, dando-lhe uma caracterstica nica. Um lcus de minissatlite pode ter muitos
alelos em funo do nmero de vezes (n) em que esta estrutura repetida ao longo do
DNA, deixando a populao polimrfica em relao ao lcus (JEFFREYS; WILSON;
THEIN, 1985a).

Os loci de microssatlites (STRs) ou repeties curtas consecutivas se

assemelham aos minissatlites, porm com estrutura repetida menor, como, por exemplo,
na seqncia (GATA)n (JOBIM; JOBIM; BRENNER, 1999; NRC, 1992). O nmero de

35

repeties bsicas nos minissatlites e microssatlites pode variar em diferentes indivduos

criando um polimorfismo de comprimento (WEEDN; SWARNEN, 1998).

O polimorfismo dos mini e microssatlites traduzido pela possibilidade de

se ter diversos alelos na populao. Como conseqncia desta possibilidade, os achados de
similaridades entre duas pessoas podem ter significncia para o estabelecimento de uma
relao de parentesco entre elas.

As freqncias dos alelos so tambm importantes para a individualizao,

uma vez que um alelo do qual a maior parte da populao portadora no se presta
diferenciao de indivduos. Para cada lcus polimrfico existem diversos alelos, porm
cada indivduo poder ter no mximo dois deles, herdados de cada um dos pais.
importante ainda ressaltar que nem todos os loci de mini e microssatlites podem ser
utilizados nos estudos forenses, sendo os melhores aqueles que se apresentam com maior
polimorfismo e mais alto grau de heterozigosidade (JOBIM; JOBIM; BRENNER, 1999).

5. Mtodos de deteco

O primeiro mtodo de deteco de regies polimrficas do DNA denominase RFLP (restriction fragment length polymorphism) ou polimorfismo de tamanho de
fragmentos de restrio. Nas anlises clssicas de RFLP, fragmentos de DNA contendo
VNTRs (minissatlites) so cortados do DNA cromossmico por enzimas de restrio. Um
determinado comprimento de fragmento conhecido como alelo. Assim, so analisados os
fragmentos de corte (restrio) do DNA que diferem (so polimrficos) em tamanho
(comprimento) entre os indivduos (WEEDN; SWARNEN, 1998).

O desenvolvimento de sondas de DNA para os loci VNTR foi a chave para

a aplicao das anlises de RFLP na Medicina Forense. A sonda original de Jeffreys;
Wilson; Thein (1985a, 1985b), que originou o termo padro de impresses digitais de
DNA (fingerprint of DNA), uma sonda multilocal (MLP). Uma sonda multilocal liga-se
a vrias seqncias de DNA e produz inmeras bandas. A auto-radiografia resultante
destas bandas assemelha-se a um cdigo de barras comercial de difcil interpretao.
Posteriormente, foram desenvolvidas sondas para loci nicos (SLP) que se ligam a um

36

nico lcus do DNA. Os sistemas de SLP passaram ento a ser adotados para identificao
humana, devido alta sensibilidade do mtodo e maior facilidade de interpretao dos
resultados. (THOMPSON; KRANE, 2003).

As sondas SLP so elaboradas de modo a se ligarem a uma localizao-alvo

em cada conjunto cromossmico. Estas sondas so tipicamente especficas para humanos
ou primatas. Os fragmentos de DNA ligados sonda variam em tamanho e, portanto, so
visualizados como bandas que variam em posio em uma auto-radiografia. Geralmente
so geradas duas bandas para cada sonda de lcus nico, correspondendo aos alelos
maternos e paternos, a menos que estes sejam compartilhados (WEEDN; SWARNEN,
1998).

Aps a extrao e quantificao do DNA retirados das amostras biolgicas

em estudo, as anlises de RFLP compreendem seis passos: (1) digesto, (2) eletroforese,
(3) southern blotting, (4) desnaturao e hibridizao, (5) auto-radiografia e (6) anlise dos
dados obtidos (NRC, 1992, 1996).

Em relao a estas sondas, atualmente, somente as SLP so empregadas e,

na grande maioria das vezes, apenas em testes de determinao de paternidade e por
pouqussimos laboratrios. Esta tcnica possui grande poder discriminatrio na
individualizao de pessoas, discriminando um indivduo entre muitos milhes ou mesmo
entre alguns bilhes, apenas com a anlise de quatro diferentes loci (THOMPSON;
KRANE, 2003). Entretanto, laboriosa, complexa e morosa, podendo uma anlise
demandar de quatro a seis semanas, alm de exigir DNA ntegro e em grande quantidade
para sua aplicao. Por esta ltima razo, o uso de sondas, ainda que SLP, no
recomendado para anlises voltadas elucidao de crimes, devido escassez e,
mormente, ao estado de degradao das amostras.

A partir de 1990, novos mtodos de anlise de DNA foram introduzidos e,

praticamente, relegaram os testes por RFLP ao esquecimento por serem capazes de
produzir resultados em curto espao de tempo (um ou dois dias) e por serem mais
sensveis, isto , ter capacidade de tipificar o DNA de pequenas amostras degradadas. Estes
novos testes usam um procedimento baseado na PCR, o qual pode produzir bilhes de
cpias de fragmentos de DNA de um ou mais loci. Os fragmentos do DNA amplificado

37

pela PCR so chamados amplicons e podem ser tipificados usando-se diferentes mtodos
que incluem os sistemas dotblot, AmpFLPs (polimorfismos do comprimento amplificado
do fragmento de DNA), STRs (repeties tandem curtas) e seqenciamento direto do DNA
mitocondrial (mtDNA).

A PCR foi descrita pela primeira vez em 1985, por Kary Mullis que, em
1993, recebeu o prmio Nobel em qumica por seu feito. Desde o incio, a PCR foi
reconhecida como a melhor resposta em potencial para quantidade trao de lquido
biolgico freqentemente encontrado na rea forense (veja Tabela 1). Amide, estas
amostras so diminutas para serem utilizadas com os mtodos de RFLP (JEFFREYS et al,
1988).

As tecnologias da PCR so principalmente insensveis degradao, uma

vez que os loci de DNA-alvo so pequenos e apenas algumas poucas cpias da seqnciaalvo precisam estar intactas na amostra de DNA antes da amplificao. As anlises por
RFLP, ao contrrio, so extremamente sensveis degradao uma vez que a fragmentao
do DNA atinge exatamente o cerne do mtodo analtico (WEEDN; SWARNEN, 1998). A
PCR alm de propiciar uma tipagem rpida do DNA, elimina a necessidade de utilizao
de southern blot e radioistopos, permitindo assim a automao.

A tecnologia da PCR muito poderosa, mas tem suas desvantagens. Como

um todo, os sistemas genticos analisados por PCR so menos discriminatrios
(informativos) que os sistemas genticos RFLP. Contudo, o poder discriminatrio
aceitvel tendendo a aumentar com sistemas adicionais (COMEY, 1988).

Segundo Erlich (1989), a suscetibilidade inibio por vrios fatores como

a poro heme do sangue uma outra desvantagem da PCR.

A amplificao preferencial de um alelo sobre o outro pode ocorrer e

resultar em excluso allica. Os alelos de maior peso molecular no so detectados se o
DNA amostrado estiver extremamente degradado, tal qual ocorre em RFLP (WEEDN;
SWARNEN, 1998).

38

Na PCR, iniciadores especficos podem ser mais eficientes com um alelo do

que com outro, gerando um aumento na produo do alelo favorecido. A extrema
sensibilidade do sistema PCR resulta em um potencial de contaminao cruzada e, por esta
razo, devem ser tomadas as precaues adequadas (COMEY, 1988; REBOUAS, 2004).

Como dito anteriormente, a anlise dos produtos de amplificao da PCR

inclui diversos mtodos, os quais passaro a ser analisados.

Dotblot constitui o prottipo das tcnicas de deteco do polimorfismo de

seqncia. Em 1991, a Perkin-Elmer, uma empresa de biotecnologia hoje denominada
Applied Biosystems, desenvolveu um teste em forma de kit para amplificao e tipagem de
polimorfismo de seqncia, conhecido como DQ-alpha gene, com seis marcadores
genticos. Em 1993, a mesma empresa lanou no mercado um novo kit denominado
Polimarker/DQ-alpha test com onze marcadores genticos. Apesar da praticidade e da alta
sensibilidade destes kits, isto , necessitar de poucas clulas humanas para a obteno de
resultados, o poder discriminatrio inferior ao das anlises de RFLP.

A tipagem dotblot envolve uma srie de sondas de DNA para a deteco das
seqncias-alvo. As sondas so especficas para as seqncias oligonucleotdicas (SSO),
tambm denominadas oligonucleotdeos alelo-especficos (ASO). Nos formatos dotblot
tradicionais, uma poro do DNA amplificado ligado a uma membrana e sondado com
uma sonda SSO e as sondas no ligadas so eliminadas por lavagem. Um resultado
positivo visualizado por uma reao de cor com a enzima ligada sonda. Os kits
comerciais utilizam um dotblot reverso no qual a sonda ligada membrana e ento
adicionada a amostra de DNA amplificado. Os resultados so visualmente determinados
como positivos ou negativos para a presena de uma dada seqncia; assim, o padro de
mancha (spots) azuis em uma tira indica um gentipo especfico. HLA-DQA1 e
Amplitipo-PM (polimarcador) so sistemas de dotblot reverso utilizados na cincia forense
e, usados em combinao, tm um poder discriminatrio aproximado de 1 em 2000
(WEEDN; SWARNEN, 1998).

As anlises de AmpFLP envolvem a separao eletrofortica por tamanho

dos fragmentos polimrficos do DNA, produzidos por amplificao, ao invs de exciso
como ocorre nas anlises RFLP. Os loci VNTR usados para anlises AmpFLP so

39

necessariamente menores que os loci RFLP uma vez que a reao de PCR no amplifica,
com muita segurana, fitas grandes do DNA. Os gis usados para eletroforese em AmpFLP
so de poliacrilamida e podem ser corados pela prata. Com a eliminao de southern blot e
de auto-radiografia, as anlises em AmpFLP podem ser executadas em poucos dias, ao
invs de vrias semanas necessrias para as anlises por RFLP (COMEY, 1988).

No final dos anos 90, aps a validao pelo FBI - Federal Bureau
Investigation de 13 loci de STRs para testes forenses, foram desenvolvidos testes
comerciais para anlises das STRs. Estes testes, combinando a alta sensibilidade
propiciada pela PCR e um poder discriminatrio aproximado de um em trilhes,
rapidamente suplantaram as anlises RFLP e os testes HLA-DQA1/Amplitipo-PM nos
laboratrios de anlises de vestgios de crimes e de identificao de cadveres
(THOMPSON; KRANE, 2003).

As anlises STR no automatizadas empregam gis de poliacrilamida que

so, mormente, corados pela prata para evidenciar os fragmentos de DNA. J as anlises
automatizadas usam produto amplificado de DNA marcado com corantes fluorescentes e a
leitura e interpretao de seus gis de eletroforeses se d automaticamente em aparelho
prprio.

Em aparelhagem mais sofisticada, os fragmentos STR de DNA so

detectados na medida da migrao no gel atravs de um detector. Diferentes fluorforos,
agentes qumicos fluorescentes, so utilizados em uma dada coluna. Alm disto, vrios
fragmentos STR so suscetveis a amplificaes simultneas como conjuntos multiplex,
permitindo a deteco simultnea de vrios sistemas genticos. Inmeros sistemas STR
esto disponveis e com nmeros suficientes de sistemas genticos os quais so testados
simultaneamente e dos quais se obtm poderes discriminatrios semelhantes aos
alcanados nos testes de RFLP (WEEDN; SWARNEN, 1998).

Muitos laboratrios tm desenvolvido testes para examinar reas

polimrficas do cromossomo Y, contribuindo, assim, para aumentar o painel de loci STR
autossmicos utilizados para a identificao humana. Estes testes podem ser utilizados em
estudos genealgicos e em crimes sexuais que envolvam mistura de fluidos biolgicos
masculino e feminino. Nestes casos, se existe mais material proveniente da vtima do que

40

do violador, torna-se difcil a tipagem do DNA masculino pelos testes convencionais de

STR. Os testes Y-STR focam-se apenas no DNA de homens, tornando mais fcil a
deteco e a tipagem do componente masculino. As desvantagens destes testes so o baixo
poder discriminatrio, quando comparados aos testes convencionais de STR, e a no
distino de homens de mesma linha paternal. Uma classe de marcadores de polimorfismo
de nucleotdeo nico do cromossomo Y (Y-SNPs) tem sido alvo de interesse nas
investigaes forenses pois muitos deles mostram especificidade regional propiciando
informaes teis sobre a origem geogrfica de um sujeito ou de um vestgio sob
investigao (ALESSANDRINI et al., 2005).

Para anlise de polimorfismos do mtDNA e dos SNPs, emprega-se a

metodologia de seqenciamento do DNA. Nos estudos de DNA mitocondrial utiliza-se um
sistema de seqenciamento direto de duas reas especficas do genoma mitocondrial. Os
analistas forenses descrevem um perfil de mtDNA pelas diferenas entre a sua seqncia e
a de uma referncia padro chamada seqncia de Anderson. (THOMPSON; KRANE,
2003) ou de Cambridge (BUDOWLE; BROWN, 2001).

O mtDNA uma pea circular de DNA com 16.569 pb de comprimento.

Uma vez que no existem regies significantes de DNA repetitivo no mtDNA, somente as
seqncias polimrficas sero detectadas. Diferentemente do DNA nuclear, presente em
pares de cromossomos, somente uma nica seqncia de mtDNA est presente na clula
(homoplasmia). Conseqentemente, tambm de forma diferente do DNA nuclear, no h
recombinao (LUTZ et al., 1996; VIGILANT et al., 1989).

A regio de mtDNA analisada na identificao humana uma regio nocodificadora conhecida como ala de deslocamento (ala-D) ou regio de controle. Este
lcus se estende por 1.100 pb e contm duas regies hipervariveis. O grau de
polimorfismo na regio da ala-D to grande que o seqenciamento direto pode ser o
mtodo mais eficiente, embora o desenvolvimento um mtodo comercial dotblot
(WEEDN; SWARNEN, 1998).

Os testes de DNA mitocondrial so altamente sensveis e podem produzir

resultados em amostras no convenientemente analisveis por outras metodologias, tais
como fios de cabelos com bulbo degradado, ossos e dentes antigos. O mtDNA est

41

presente em centenas ou milhares de cpias por clula e, por isto, se conserva mais que o
DNA nuclear de amostras antigas e degradadas. Amostras muito antigas, como os ossos do
Czar Nicholas II da Rssia8, podem ser analisadas atravs da tipagem do mtDNA.

Os testes de DNA mitocondrial tm menor poder discriminatrio que os

testes STR, discriminando apenas um em centenas. Acrescente-se ainda que, por ser o
mtDNA oriundo de herana matrilinear, os testes geralmente no podem distinguir
indivduos de mesma linhagem maternal. Pequenas variaes so algumas vezes
encontradas em perfis de mtDNA de diferentes clulas da mesma pessoa devido a
mutaes. Este fenmeno, conhecido como heteroplasmia, complica o processo para
determinar se dois perfis encontrados em diferentes amostras so realmente coincidentes
ou no. Os testes de mtDNA tm custo elevado e requerem equipamentos laboratoriais
especficos para anlise. Por isto, ainda poucos laboratrios forenses realizam estes testes e
ainda os empregam apenas quando no obtm sucesso com os testes tradicionais. Contudo,
melhoramentos tcnicos devero certamente ampliar e facilitar o uso dos testes de mtDNA
em casos forenses, conforme indicam estudos que vm sendo realizados com microchips
(DIVNE et al., 2005).

Os SNPs em DNA autossmico tambm apresentam baixo poder

discriminatrio, quando comparado ao dos STRs. Entretanto, o estudo dos SNPs para
anlise de materiais extremamente degradados pode ser de grande utilidade, como ficou
demonstrado nos trabalhos de identificao das vtimas dos ataques terroristas ao World
Trade Center, em 11 de setembro de 2001. (MARCHI, 2004) e em estudos antropolgicos
(PETKOVSKI et al., 2005).

O primeiro caso histrico de investigao criminal baseado de DNA foi realizado em 1994 quando ossos,
supostamente pertencentes famlia real russa (Romanov), executada na Revoluo Bolshevik, em 1918,
foram analisados usando uma combinao de seqenciamento de DNA mitocondrial, tipagem de sexo e
clonagem de STR por PCR. As amostras sseas tinham mais de 70 anos e ainda produziram perfis de STR
autossmico consistentes com a presena de um grupo familiar e as seqncias de mtDNA coincidiam com
as de parentes matrilineares: Prncipe Philip, Duque de Edinburgh, coincidiam com as da suposta Czarina e
suas filhas; as seqncias oriundas do Duque de Fife e da Princesa Xnia Cheremeteff-Sfiri coincidiam com
o suposto Czar Nicholas II, exceto por discrepncia em uma das bases. A clonagem em PCR do mtDNA do
suposto Czar mostrou duas molculas diferentes e foi concludo ser um exemplo de heteroplasmia, tido
poca como raro. Isto levou a especulaes sobre a validade dos resultados. Contudo, em uma anlise
independente, realizada pelo laboratrio de DNA das Foras Armadas em Rockville, Maryland, em 1996,
em restos do irmo do Czar, Georgij Romanov, descobriu-se que ele possua uma heteroplasmia na mesma
posio no mtDNA, dissipando efetivamente qualquer dvida sobre a identificao da famlia. Aps
consideraes sobre as evidncias pautadas no DNA e em anlises antropolgicas, autoridades russas
reconheceram os restos mortais como sendo dos Romanovs (JOBLING; GILL, 2004).

42

Microchips de hibridizao de DNA vm sendo empregados para estudo de

SNPs e mtDNA em casos forenses (DIVNE et al., 2005; PETKOVSKI et al., 2005) e os
avanos alcanados no desenvolvimento desta tcnica podem faz-la despontar em um
futuro prximo como metodologia de eleio, haja vista sua simplicidade e eficincia.

Mtodos de amplificao total do genoma, denominados genericamente por

amplificao de mltiplo deslocamento, tm um valor potencial nos estudos forenses
quando a quantidade de DNA que se quer examinar extremamente pequena. Contudo, a
amplificao desbalanceada de alelos tem sido observada para amostras com menos de 50
picogramas de DNA e trabalhos adicionais sero necessrios para determinar se existe
qualquer vantagem sobre os mtodos convencionais utilizados para tipagem de DNA com
baixo nmero de cpias.

Novos estudos tambm esto sendo desenvolvidos no sentido de auxiliar os

analistas forenses em face do grande desafio que pode vezes se tornar a identificao de
fluidos corpreos e a determinao da causa mortis. Tais estudos tm se dirigido para a
identificao de manchas de sangue, smen e saliva atravs da anlise especfica de RNAs
mensageiros (mRNAs) que possuem surpreendente estabilidade. Estudos com marcadores
genticos relacionados com o metabolismo de drogas (CYP2D6) e com as causas da
arritmia cardaca (long QT syndrome) vm sendo desenvolvidos e no futuro podero
auxiliar os patologistas no diagnstico molecular da causa mortis (JOBLING; GILL,
2004).

43

CAPTULO III
PROCEDIMENTOS TCNICOS PARA ANLISE DE DNA

1. Aspectos gerais
Quando um teste de DNA feito, vrios passos bsicos so realizados
independentemente da metodologia aplicada e do tipo de amostra que est sendo analisada.
Os procedimentos bsicos incluem: 1) o isolamento do DNA da amostra que contm DNA
de origem desconhecida e, geralmente mais tarde, o isolamento da amostra, por exemplo,
sangue de um indivduo conhecido; 2) o processamento do DNA para que os resultados do
teste possam ser obtidos; 3) a determinao dos resultados do teste ou tipagem de regies
especficas do DNA; e 4) a comparao e interpretao dos resultados dos testes, da
amostra de origem biolgica desconhecida (amostra questionada) e da amostra de origem
conhecida (amostra-referncia), para determinar se o indivduo conhecido est excludo
(no ) como a fonte do DNA ou est includo como a possvel fonte do DNA encontrado
na amostra questionada.

Devido baixa qualidade e exigidade das amostras biolgicas que

costumeiramente aportam em um laboratrio de DNA forense voltado elucidao de
delitos e identificao de pessoas, a metodologia preferencialmente aplicada a baseada
na anlise de STRs atravs da PCR. Assim sendo, neste trabalho, centraremos mais nossa
ateno nesta metodologia, cujos procedimentos envolvem vrias etapas como abaixo
enumeradas e as quais estudaremos a seguir:

a. coleta dos materiais;

b. extrao do DNA;

c. quantificao do DNA extrado;

d. amplificao do DNA pela PCR;

e. anlise comparativa dos perfis genticos obtidos;

44

f. clculos estatsticos, se cabveis;

g. elaborao de laudo ou relatrio das anlises realizadas.

2. Coleta de materiais
O objetivo do geneticista forense o de identificar com maior certeza
possvel a origem de uma amostra biolgica. A alta quantidade de variantes
(polimorfismos) atualmente acessveis no DNA extremamente informativa e,
conseqentemente, o grau de certeza auferido na identificao humana pode ser alto.
Contudo, isto nem sempre se mostra uma tarefa simples e direta, principalmente em
decorrncia de dificuldades a serem superadas durante a marcha analtica em funo de
caractersticas dos vestgios coletados.

A coleta de um vestgio em local de crime depende da habilidade do coletor

em vislumbrar sua utilizao na investigao. Existem centenas de variedades de vestgios
que podem ser colhidos e submetidos a anlises nos laboratrios forenses. No entanto, os
vestgios que podem ser submetidos anlise de DNA so apenas aqueles de natureza
biolgica como sangue e smen, in natura ou em manchas ou crostas; tecidos, clulas,
ossos, dentes e rgos; plos e cabelos; urina, saliva e outros fluidos corpreos.

Estes vestgios biolgicos podem ser usados para ligar uma pessoa a outro
indivduo, a um objeto ou a um lugar. Podem tambm ser utilizados para desvincular um
indivduo de um crime. De acordo com Lee (1999), os vestgios biolgicos geralmente so
transferidos de duas maneiras: por deposio direta ou por transferncia secundria.

Por deposio direta, sangue, smen, tecido corpreo, osso, dente, plo,
cabelo urina e saliva podem ser transferidos para o corpo de um indivduo ou para roupas,
ou para um objeto ou diretamente para o local do crime. Depois que os lquidos biolgicos
so depositados, eles se transformam em manchas e aderem a uma superfcie ou a um
substrato. Vestgios biolgicos no fluidos, tais como tecidos, ossos, dentes, plos ou
cabelos, podem tambm ser transferidos pelo contato direto ou depositados.

45

O depsito direto ou transferncia pode resultar de qualquer uma das

seguintes situaes: material biolgico do suspeito depositado no corpo ou na roupa da
vtima, em um objeto ou em um local; material biolgico da vtima depositado no corpo ou
na roupa do suspeito, em um objeto ou em um local; ou material de uma testemunha,
depositado no suspeito ou na vtima ou em objeto ou local.

Por transferncia secundria, sangue, smen, tecido corpreo, plo, cabelo,

urina e saliva podem ser transferidos para a vtima, suspeito, testemunha, objeto ou local,
atravs de um meio intermedirio. Na transferncia secundria existe a fonte original
(doadora do vestgio biolgico) e a superfcie alvo. Um transferidor intermedirio pode ser
uma pessoa, um objeto ou mesmo um local. Vestgios oriundos de transferncia indireta
no fornecem necessariamente prova positiva de vnculo direto de um indivduo com um
crime especfico.

A obteno de sucesso na anlise do DNA retirado de um vestgio oriundo

de um local de crime em muito depende do tipo das amostras colhidas e de como elas
foram preservadas. Assim, a tcnica utilizada para coletar e documentar o vestgio, a
quantidade e o tipo de vestgio a ser colhido, o modo que o vestgio deve ser manuseado e
embalado, e como o vestgio deve ser preservado so alguns pontos crticos para o exame
de DNA.

Se o vestgio no for apropriadamente documentado, coletado, embalado e

preservado, ele poder no cumprir os requisitos cientficos e legais para ser admitido
como prova perante a justia. Se o vestgio que deu origem ao exame de DNA no for
apropriadamente documentado antes da coleta, sua origem pode ser questionada. Se no
for bem coletado, sua atividade biolgica pode ser perdida. Se for inapropriadamente
embalado, pode ocorrer contaminao exgena ou cruzada e, se no for apropriadamente
preservado, pode ocorrer decomposio e degradao. Qualquer destes efeitos poder
afetar seriamente a tipagem do DNA.

As orientaes gerais que devem ser seguidas para a documentao, coleta,

embalagem e preservao de vestgios biolgicos a serem submetidos anlise esto nas
recomendaes comumente encontradas em manuais editados por rgos ou entidades

46

internacionais9 que fomentam ou procedem a anlises forense de DNA.

Amostras adequadas para anlises de DNA:

a.

sangue: pode se encontrar em qualquer lugar do delito, em forma de

poas, gotas, salpicaduras, manchas ou crostas. o indcio biolgico mais habitual no local
do crime e nos vestgios;

b.

smen: com espermatozides , como o sangue, uma boa fonte de

DNA e um vestgio habitual nos crimes sexo-relacionados. Diferentemente do sangue,

possvel que o smen no deixe uma mancha detectvel a olho nu. Existem vrias tcnicas
para detectar estas manchas, entre elas se encontram o emprego de luz ultravioleta e
anlises qumicas;

c.

saliva: nela o DNA se encontra nas clulas da pele da boca e nos

leuccitos. As manchas de saliva nem sempre so visveis, mas podem ser encontradas em
guimbas, mordaas, mscaras, recipientes de bebida ou comida, goma de mascar, escovas
de dente e selos nos quais foi utilizada saliva para engom-los;

d.

plos e cabelos: somente plos e cabelos, independentemente da

origem, tm valor para a anlise de DNA nuclear, uma vez que este se encontra nas clulas
que rodeiam o bulbo. Plos e cabelos carentes de bulbo podem servir para anlise de DNA
mitocondrial;

e.

clulas da pele: podem ser encontradas em raspaduras de unhas,

quando, por exemplo, algum arranha com violncia suficiente para que haja sangue ou
mesmo carne sob as unhas. s vezes se encontra material celular em luvas ou gorros.
Algumas partes de roupas, como cava de uma camisa, podem conter uma mistura de suor e
clulas corporais que podem servir para anlise de DNA;

f.

urina: nela podem ser encontradas clulas de revestimento da uretra

FBI Federal Bureau of Investigation Handbook of Forensic Service DNA Examinations, 2003;
GITAD Grupo Iberoamericano de Trabajo en Anlisis de DNA Recogida de Pruebas Y Muestreo de
ADN, 2002; GEP-ISFG Grupo Espaol y Portugues de la ISFG, 2000.

47

e leuccitos;

g.

secrees nasais: podem ser encontradas em lenos usados;

h.

marca de mordidas: deve ser fotografada ao lado de uma escala,

devendo ser passado um swab umedecido pela zona alvo para se extrair a saliva;

i.

restos humanos: os cadveres dos quais se retiram amostras para

anlise gentica podem ser de vtimas de delitos ou acidentes ou de pessoas no

identificadas. Podem ser colhidas amostras de sangue das cavidades cardacas, mechas de
cabelos retirados desde a raiz, fragmento de msculo ou se o cadver se apresenta em
putrefao generalizada, devem ser retiradas amostras sseas e dentrias, se existentes.
Preferencialmente devem ser coletadas amostras de ossos longos como fmur e tbia e
secundariamente outros ossos na seguinte ordem: costela, mero, rdio, crnio, vrtebra e
ossos da mo e p. Dos dentes devem ser colhidos alguns elementos de cada tipo na
seguinte ordem preferencial: molar, pr-molar, canino e incisivo no restaurados e,
secundariamente, molar, pr-molar, canino e incisivo restaurados.

A conservao adequada das amostras, desde a coleta at a chegada ao

laboratrio, fundamental para todos os vestgios, mas em especial para os vestgios
biolgicos que so muito vulnerveis deteriorao do DNA em poucas horas.
fundamental que os vestgios midos sejam secos temperatura ambiente, protegidos da
luz solar e do calor e serem, aps a secagem, prontamente embalados separadamente em
papel ou caixa de papelo. As amostras de sangue lquido devem ser conservadas e
transportadas sob refrigerao a 4C. Tecidos moles e rgos devem ser congelados. Todos
os materiais utilizados para embalagem, seja papel, tubos ou caixas devem ser devidamente
identificados para garantir a origem das amostras.

Como procedimentos gerais para a coleta de amostras em locais de crime,

devem ser adotados os seguintes:

a.

fotografao de cada vestgio antes de sua coleta;

b.

considerao da presena de outros tipos de vestgios fsicos de

48

interesse forense como, por exemplo, impresses digitais, antes de recolher e embalar os
elementos utilizveis na anlise de DNA;

c.

utilizao de kits especiais para diferentes tipos de amostras que

possibilitem condies timas para armazenamento e transporte;

d.

recolhimento de vestgios lquidos com seringas estreis; no caso de

sangue, deve ser utilizado EDTA (cido etilenodiamino tetractico) como anticoagulante.
Estes vestgios tambm podem ser recolhidos com papel absorvente, algodo, gaze ou
swab estril, deixando-os secar temperatura ambiente antes do armazenamento para
evitar a proliferao de bactrias e fungos, tpica em ambiente mido. Se, dadas as
circunstncias, as amostras no puderem ser secas, podero, ento, ser imediatamente
congeladas para inibir a ao dos microrganismos;

e.

as manchas encontradas em objetos transportveis no devem ser

extradas in loco, mas todo o objeto deve ser entregue para exame. Os objetos contendo
manchas de sangue mido devem ser secos antes de embalados para que sejam entregues
ao laboratrio para anlises;

f.

as manchas encontradas em objetos no transportveis devem ser

colhidas com swab levemente umedecido ou, se possvel, raspar a mancha com
instrumento limpo, depositando o raspado em papel. Pequenas gotas podem tambm ser
retiradas com fitas adesivas. Manchas contidas em tapetes, carpetes e grandes estofados
podem ser retiradas recortando-se o suporte. Deve tambm ser coletada uma poro do
suporte no manchada de forma a servir de amostra de controle. A mancha e a amostra
controle, quando for o caso, devem ser secas temperatura ambiente e embaladas
separadamente;

g.

plos e cabelos devem ser recolhidos com pinas e colocados em

envelopes estreis;

h.

tecidos, rgos, ossos e dentes no devem ser secos, mas apenas

congelados antes do envio ao laboratrio, sem adio de qualquer conservante.

49

A seguir, passamos a abordar algumas recomendaes especficas que se

fazem necessrias para a correta coleta, devido a caractersticas peculiares do tipo de
vestgio biolgico, de sua quantidade ou do suporte que o contm:

a.

sangue seco: manchas secas em objetos pequenos ou transportveis

em geral, neste tipo de amostra, o objeto deve ser enviado ao laboratrio em um envoltrio
de papel; manchas secas contidas em objetos grandes ou no transportveis a coleta deste
tipo de mancha vai depender do tipo de suporte sobre o qual se encontra a mancha. Se o
suporte no for absorvente, por exemplo, parede, vidro, madeira, as amostras podem ser
coletadas por raspagem efetuada com um bisturi estril sobre um papel que deve ser
cuidadosamente dobrado e colocado em um envelope de papel ou, ento, pode ser utilizado
um swab, levemente embebido em gua destilada, que deve ser friccionado sobre a mancha
que, se possvel, dever ser recolhida em apenas um swab. Este swab dever ser seco
temperatura ambiente, protegido da luz solar e do calor e embalado em papel antes de ser
enviado ao laboratrio. Se o suporte que contm a mancha for absorvente como, por
exemplo, estofados e tapetes, recomenda-se recortar a mancha com bisturi ou tesoura e
coloc-la em envelope de papel devidamente identificado;

b.

sangue lquido: se estiver em grande quantidade, deve ser recolhido

em um tubo estril que contenha anticoagulante EDTA. Estes vestgios devem ser
mantidos e transportados sob refrigerao a 4C, corretamente identificados e enviados,
com a maior presteza possvel, ao laboratrio. Se a quantidade for pequena, o sangue deve
ser coletado com um swab estril que deve ser seco, embalado e identificado do modo
descrito no item anterior;

c.

smen: caso esteja sobre uma pessoa, deve ser levado em conta que a

maioria dos indcios que se encontram nestes casos tm uma contaminao cutnea em
maior ou menor grau. Restos de sangue, saliva ou smen de uma pessoa, encontrados sobre
outra, vo, obviamente, conter restos do portador. Desta forma, qualquer vestgio biolgico
depositado nas cavidades anal, oral ou vaginal vai estar intensamente contaminado por
clulas do portador. Toda vtima de uma suposta violao sexual deve ser imediatamente
examinada por um mdico especialista que deve tomar, com muita precauo,
primeiramente amostras dos genitais externos e posteriormente da cavidade vaginal,
sempre com swabs estreis, tomando o cuidado para no introduzir espermatozides que

50

estejam nos genitais externos ao interior da vagina por arrastamento. Os cuidados so os

mesmos para casos de suposta violao anal. Para colher amostras da cavidade bucal,
devem ser friccionados minuciosamente swabs no interior da boca e, posteriormente,
devem ser limpos os dentes e os espaos entre eles. Tambm devem ser guardadas, em
embalagens independentes, todas as roupas da vtima, especialmente as peas ntimas. Nos
crimes sexo-relacionados, os plos merecem um estudo especial, j que, sobretudo nas
violaes vaginais, comum mesclarem-se plos pubianos do agressor e da vtima. Para a
coleta destes plos, penteia-se a zona pubiana com um pente fino e limpo, recolhendo-se
todos os fios que vo caindo em um papel limpo. Caso smen lquido seja encontrado no
local do delito, este deve ser recolhido com um chumao de algodo ou swab que dever
ser previamente seco, em temperatura ambiente, antes de ser embalado em envelope de
papel, evitando-se sempre a utilizao de sacos plsticos. Se o smen estiver contido em
preservativo, toda pea deve ser colhida e colocada em um tubo limpo e seco que dever
ser congelado. Para grandes quantidades de smen j seco, dever ser, se possvel,
recortado o suporte que contenha a mancha. conveniente, nestes casos, que seja tambm
seja recortada uma amostra do suporte no manchada para controle. Cada uma destas
amostras dever ser independentemente embalada e identificada. Caso o smen esteja seco,
mas se encontre em pequenas quantidades, dever se proceder coleta com os mesmos
cuidados dispensados para vestgios de sangue seco;

d.

saliva ou urina: se o vestgio estiver mido sobre a pessoa ou no

local do crime, dever se proceder tal como na coleta de smen lquido. Se vestgios de um
destes fluidos estiverem em forma de manchas em objetos transportveis, dever se
proceder como no caso de sangue e smen, transportando-se o objeto. Se as manchas j
estiverem secas, o procedimento recomendado para a coleta o mesmo empregado para
sangue e smen secos;

e.

unhas: primeiramente deve ser observado se nas unhas da vtima

esto presentes fibras, plos, sangue, ou carne, para posteriormente cortar a borda superior
de cada uma delas. de suma importncia que a coleta dos fragmentos se d
separadamente para cada uma das unhas de ambas as mos. Cada fragmento ungueal
dever ser isoladamente embalado em papel e devidamente identificado. Uma forma
alternativa para coleta do material subungueal prope a utilizao de swab, levemente
umedecido em gua destilada, para a retirada de possveis vestgios contidos sob cada uma

51

das unhas;

f.

plos e cabelos: devem ser recolhidos com pinas estreis ou

descartveis, procurando-se no romper o fio e nem tocar na raiz. Cada fio deve ser
colocado sobre um papel ou podem ser postos em fita adesiva, desde que o bulbo no seja
tocado;

g.

vestgios midos: os vestgios mais comuns encontrados nas roupas

so manchas midas de sangue ou de smen. Nestes casos, as peas devem ser secas em
temperatura ambiente em lugar protegido da luz solar e do calor, sobre uma superfcie
limpa. Uma vez secas, as peas devem ser isoladamente envoltas por papel, identificadas e
acondicionadas em envelopes, sacos de papel ou caixas de papelo, antes de serem
remetidas ao laboratrio para anlises.

Os materiais biolgicos sobre os quais no paira qualquer dvida sobre a

origem

(referncia) podero ser coletados

de vtimas, suspeitos,

testemunhas

contaminantes e familiares. A coleta de material-referncia da vtima de crucial

importncia para os exames de DNA, uma vez que imprescindvel, no momento de
interpretao, conhecer sua contribuio para os resultados. Quando existir suspeitos
necessrio colher amostras indubitadas dos mesmos para que se compare seu perfil
gentico com aquele que aparece nos vestgios. Quando na amostra analisada h a presena
de DNA de mais de uma pessoa e se suspeita que existiu, por manipulao inadequada,
contaminao do vestgio com material biolgico do manipulador (testemunha
contaminante), dever ser coletada amostra-referncia deste, para que se conhea seu perfil
gentico. Pode-se recorrer aos familiares da vtima quando no se tenha seu materialreferncia ou mesmo, com certas ressalvas jurdicas, aos familiares de um suspeito, quando
no se tem acesso ao seu material-referncia. Nos casos de identificao de cadveres de
pessoas desconhecidas ou de vtimas de grandes catstrofes, imprescindvel a coleta de
materiais dos supostos familiares.

A amostra-referncia por excelncia utilizada para a tipagem de DNA o

sangue. Em pessoas vivas podero ser extradas, por puno venosa, amostras em tubos do
tipo vacunteiner contendo EDTA como anticoagulante. Estas amostras devero ser
devidamente identificadas, mantidas sob refrigerao (4C) e transportadas o mais

52

rapidamente possvel ao laboratrio para anlises. Amostras sangneas de pessoas vivas

tambm podero ser obtidas por puno digital. Com uma lanceta cirrgica perfura-se a
polpa de um dos dedos da mo e as gotas de sangue podem ser depositadas em um papel
absorvente ou em um carto do tipo FTA10, devendo estas amostras ser secas
temperatura ambiente e protegidas da luz solar e do calor. J as amostras sangneas
coletadas post-mortem, por puno cardaca, devem ser colocadas em recipientes
apropriados que devero ser devidamente identificados, refrigerados a 4C e encaminhados
ao laboratrio o mais prontamente possvel.

Amostras de saliva podero ser obtidas pelo emprego de swabs que devero
ser friccionados na parte interna da boca. Devem ser colhidas, com um swab, amostras da
bochecha direita e com outro, da esquerda. Ambos os swabs devero ser secos
temperatura ambiente, e devidamente identificados. fundamental que eles no sejam
embalados se no estiverem totalmente secos, j que na saliva existem bactrias que
proliferam com a umidade, produzindo decomposio do DNA. Uma vez secos, devero
ser separadamente embalados em papel.

Plos ou cabelos podero ser tambm colhidos como amostras-referncia,

devendo, para isto, ser arrancados desde a raiz e depositados sobre um papel.

Em cadveres, o tipo de amostra-referncia a ser coletada vai depender do

estado de conservao cadavrico. Em cadver recente, ou seja, naquele que no esto
claramente presentes os fenmenos putrefativos, preferencialmente se selecionam
fragmentos de tecido muscular que devem ser remetidos ao laboratrio de DNA
congelados em recipientes plsticos sem conservantes. De cadveres em decomposio ou
j esqueletizados, devem ser enviadas amostras de tecidos duros (ossos e dentes). A ordem
preferencial para a coleta das peas sseas e dentrias anteriormente relatada deve ser
seguida, lembrando-se sempre que o melhor material dental aquele que no possua
restauraes.

Uma questo de primordial importncia na coleta de materiais biolgicos a

contaminao, uma vez que as tcnicas de anlise de DNA atuais so extremamente
10

Nome comercial de um carto que permite o acondicionamento e a preservao de material sangneo em

temperatura ambiente por mais de dez anos, segundo seu fabricante, Whatman BioScience.

53

sensveis. Por isto, deve-se exigir para a coleta uma perfeita deteco, identificao e
isolamento dos vestgios para evitar a contaminao de ndole biolgica ou qumica. A
contaminao por contato fsico pode ser evitada pela utilizao de mscaras e luvas pelo
coletor que dever manipular as amostras com pinas. Os manipuladores devem trocar as
luvas sempre que estas tenham sido contaminadas. A contaminao qumica pode se dar
pela presena de produtos como tintas, corantes, leos e terra, entre outros. A presena
destes produtos que dificultam ou mesmo inviabilizam os processos de anlises pode,
muitas vezes, ser inevitvel, uma vez que comum encontr-los no substrato onde os
vestgios biolgicos so encontrados. A contaminao biolgica prpria de vestgios
humanos e resulta de uma mistura com DNA no pertencente ao vestgio. Ela pode ser
evitada pela limpeza sistemtica dos instrumentos utilizados para a coleta (tesoura, pina,
bisturi e outros) com algodo embebido em lcool, imediatamente aps a utilizao,
deixando que o lcool se evapore antes de se proceder coleta de um outro vestgio. O
coletor deve tambm evitar tossir, espirrar ou mesmo falar sobre o material da amostra,
devendo fazer uso de mscara.

Como vimos, a qualidade, exatido e confiabilidade dos resultados obtidos

na anlise de DNA em vestgios coletados ou relacionados a ocorrncias criminais depende
de procedimentos prprios que devem ser rigorosamente adotados nas etapas do
isolamento do local do delito e do levantamento das amostras biolgicas a serem
encaminhadas para a unidade orgnica responsvel pela genotipagem forense.

Logo, o tipo, a integridade e a preservao dessas amostras constituem-se

em fatores essenciais consecuo de perfis genticos bem caracterizados e definidos, prrequisito para produo de laudos periciais de excelente nvel tcnico-cientfico. Assim, a
tcnica usada na coleta e documentao do vestgio, sua natureza e quantidade, bem como
seu acondicionamento e encaminhamento, so alguns dos pontos crticos para um
programa de execuo dos exames de material gentico.

2.1. Cadeia de custdia

Devido ao usual exerccio do contraditrio por parte da defesa com

argumentos contra a admisso no processo ou sobre a validade dos resultados dos testes de

54

DNA, imperativo que os centros forenses mantenham a cadeia de custdia de amostras,

atravs de registros que possam acompanh-las desde a coleta at sua disposio final, de
forma a comprovar que tomou todas as precaues para prevenir a falsificao, quebra,
perda ou contaminao das amostras.

Cadeia de custdia um conceito oriundo da jurisprudncia estrangeira que

se aplica manipulao de amostras e vestgios e integridade destes. A cadeia de
custdia tambm se refere documentao que serve para o rastreamento da amostra,
atravs da demonstrao de todos os passos por ela percorridos. Este conceito surgiu tendo
em vista que vestgios ou indcios podem ser usados em juzo para a condenao de
pessoas pela prtica de crimes e, por isto, devem ser assegurados, de forma escrupulosa, os
cuidados para se evitar alegaes tardias que possam alterar ou comprometer a
argumentao da acusao ou da defesa.

Para a manuteno desta cadeia, uma pessoa identificvel deve sempre ter a
custdia fsica de todo o vestgio ou da parte dele que segue para a percia. Quando for o
caso, isto , se existir abundncia, a parte restante deste vestgio deve ser depositada em
um rgo prprio para armazenamento em lugar seguro e isento, podendo assim servir para
eventual realizao de contraprova11, 12.

Didaticamente a cadeia de custdia pode ser dividida em duas fases: a da

custdia externa, que se preocupa com a amostra desde o local da coleta at chegada ao

11

Faz-se mister aqui esclarecer a diferenciao dos termos contraprova, contrapercia e nova percia, muitas
vezes empregados no meio forense sem qualquer discriminao. O primeiro termo diz respeito realizao
de exame em parte ntegra remanescente de material que fora depositado em local seguro e isento, cuja
outra parte dele, anteriormente examinada, deu origem a uma prova que est sendo contestada. O termo
contrapercia refere-se elaborao de uma nova percia em material remanescente da percia
anteriormente realizada. O termo nova percia diz respeito realizao de outra percia em material j
periciado anteriormente ou no, entretanto, atinente mesma ocorrncia. A contraprova mormente
praticada na Justia Desportiva em exames de doping. Na Justia Criminal brasileira, tendo em vista a
ausncia de rgos prprios para a custdia de material para eventual contraprova ou mesmo pela escassez
do vestgio coletado, realiza-se, em casos de contestao, nova percia ou contrapercia.
12
No sentido de incrementar a cadeia de custdia dos materiais destinados no apenas a exames de DNA,
com o apoio e parceria de instituies privadas, a Superintendncia da Polcia Tcnico-Cientfica de So
Paulo est implementando a instalao de um centro de custdia. Trata-se de um organismo centralizador
de segurana, destinado guarda de materiais, substncias, instrumentos e objetos a serem periciados, j
periciados ou com percia em andamento que, por muitas vezes, devido a interesses econmicos ou mesmo
escusos, podem sofrer extravios (BONACCORSO; PERIOLI, 2001) e, no tocante sua experimentao, o
Laboratrio de DNA do Instituto de Criminalstica de So Paulo vem servindo como prottipo deste
centro.

55

laboratrio e a da custdia interna, que se preocupa desde o recebimento da amostra pelo

laboratrio, dados de transferncia e armazenamento, at a sua destinao final.

Cada operao sucessiva entre a coleta do vestgio e sua utilizao em juzo,

deve ser completa e cronologicamente documentada a fim de suportar contestaes legais
quanto sua autenticidade. A documentao deve incluir as circunstncias sob as quais o
vestgio foi coletado, a identidade dos manipuladores, a durao da custdia, a segurana
da armazenagem do vestgio, e como o vestgio foi transferido aos curadores subseqentes
em cada elo da cadeia (WIKIPEDIA, 2004).

Os registros da cadeia de custdia devem tambm indicar dados sobre o

tratamento a que foi submetido o vestgio imediatamente aps a coleta, identificao dos
lacres utilizados para sua embalagem, detalhes sobre sua preparao para os testes a que
foi submetido e sobre o processo de sua disposio final, quer seja estocagem ou
devoluo13 de parte do material remanescente, quando for o caso.

Enfim, todos estes dados devem integrar a documentao e, toda vez que a
amostra for manuseada, devero ser concomitantemente feitas anotaes de cada ato do
manuseio com a assinatura completa de quem o realizou. A completa descrio da custdia
d amostra certificao de sua origem14 e destinao e, conseqentemente, empresta ao
laudo pericial, resultante de sua anlise, credibilidade e robustez suficientes para propiciar
sua admisso no elenco probatrio.

2.2. Resoluo SSP 194/99

Devido importncia vital da correta manipulao das amostras biolgicas
para o sucesso das anlises e frente necessidade de adoo dos cuidados para assegurar a

13
14

Por fora dos artigos 6, II e 170 do Cdigo de Processo Penal.

Recentemente foi contestada na Justia Desportiva a certificao da origem de amostras analisadas, cujos
resultados indicavam doping por uso de anabolizantes esterides. Apesar da existncia de documentao
demonstrando a manuteno da cadeia de custdia durante toda marcha analtica para a realizao da
prova e da contraprova, a atleta alegava que a urina analisada no era a mesma que ela havia cedido para a
realizao dos exames. Para a demonstrao da autenticidade das amostras examinadas e da inexistncia
de falhas na cadeia de custdia, os analistas procederam anlise de DNA mitocondrial de clulas
descamativas presentes na urina e o confrontaram com material sangneo cedido pela atleta,
comprovando ter sido ela a doadora da urina utilizada no controle antidoping (MARQUES et al., 2005).

56

manuteno da cadeia de custdia, o Instituto de Criminalstica de So Paulo, baseado em

recomendaes nacionais (SBML, 1999) e internacionais (BRINKMAN, 1999;
BUDOWLE, 1996; FSS, 1994; ISFH, 1992; LEE et al., 1998, 1991), forneceu elementos
tcnicos necessrios para a edio da Resoluo 194, pela Secretaria de Segurana Pblica,
estabelecendo normas para coleta e exame de materiais biolgicos para identificao
humana, a qual est reproduzida no ANEXO 1 deste trabalho.

Esta Resoluo, editada em 1999, foi pioneira na Amrica do Sul e, por

contemplar de forma sistemtica e didtica todas as recomendaes para a correta coleta e
custdia de materiais biolgicos destinados anlise de DNA, dever ser adotada como
parmetro no Projeto de Implantao de Laboratrios Regionais de DNA da Secretaria
Nacional de Segurana Pblica do Ministrio da Justia, iniciado em 2003.

Entretanto, pela repetio de problemas surgidos, quer no tocante coleta

de materiais, seu acondicionamento, envio e custdia das amostras, quer na realizao da
anlise de DNA propriamente dita, foi necessria a edio das seguintes alteraes na
Resoluo SSP 194/99. So elas:
1)

Referentes ao termo de coleta, previsto no art. art. 6, que dever

tambm conter:

a.

informao sobre a etnia (raa) do doador para fins de

clculos estatsticos e formao de banco de dados prprio;

b.

informao clara sobre o grau de parentesco do doador com

o cadver, nos casos de identificao humana;

c.

informao do nmero do lacre que fecha a embalagem

contendo o material coletado.

2)

Referentes ao anexo das Disposies Preliminares: todo material

biolgico encaminhado para a anlise dever estar, de acordo com
suas caractersticas, apropriadamente preservado e acondicionado
em embalagem lacrada, devendo o nmero de seu lacre

57

necessariamente constar do documento que o acompanha;

Referentes ao anexo da Coleta, Acondicionamento, Preservao

3)

e Encaminhamento de Material Biolgico para Anlise Biolgica

de Identificao:
a.

nos casos de crimes sexuais, a amostra biolgica de eleio a

ser enviada para anlise aquela colhida em swab, devendo
tambm necessariamente ser encaminhado, alm dos swabs
coletados, amostra-referncia da vtima (sangue), vez que
mormente h mistura de materiais masculino e feminino nas
amostras;

b.

amostras post-mortem: os rgos e tecidos ideais so, em

ordem de preferncia ditada pelo estado de conservao do
cadver: sangue por puno cardaca ou parte de um dos rins,
para cadver recente; msculo cardaco ou bao (3cm3 no
mnimo), para cadver em estgio inicial de decomposio; e
cabea de um dos fmures ou outro fragmento de osso chato
e dentes molares ntegros para cadver em avanado estado
de decomposio. Tais materiais devero ser apenas
congelados (-20C) e livres de qualquer conservante;

c.

no se deve usar lcool ou formol como conservante de

fetos, vsceras, msculos, ossos ou de qualquer outro tecido,
devendo os materiais biolgicos ser apenas congelados ou
refrigerados de forma assptica;

d.

as amostras de sangue de pessoa viva devem ser colhidas

com EDTA (anticoagulante) em tubo do tipo Vacutainer
(tampa roxa) e mantidas sob refrigerao a 4oC ou em carto
do tipo FTA que permite armazenagem em temperatura
ambiente.

58

Cabe aqui ainda comentar outros aspectos peculiares da Resoluo SSP

194/99. As anlises de DNA realizadas no Instituto de Criminalstica de So Paulo dizem
respeito exclusivamente a materiais relacionados, direta ou indiretamente, a ilcitos penais
e por ser a anlise de DNA estritamente comparativa, o art. 2 da Resoluo exige o
acompanhamento de padres biolgicos para confronto. Contudo, no 1 do art. 4 existe a
previso para o recebimento de amostras sem padro de comparao para futura
identificao, em casos de justificado interesse judicirio. Tal dispositivo veio para atender
s exigncias de, por exemplo, crimes em srie de estupro, com o mesmo modus operandi,
nos quais a investigao policial no aponta ainda para qualquer suspeito. Desta forma,
nestes casos, as amostras retiradas das vtimas e que contenham smen sero preservadas
para futuro confronto com amostras de sangue de possvel suspeito ou suspeitos.

Um termo de coleta de material biolgico de pessoa viva, previsto no art. 6

da Resoluo, deve ser lavrado perante testemunhas. Nele deve estar contida a declarao
do doador de no haver recebido transfuso sangnea nos ltimos 90 dias ou ter se
submetido a transplante de medula ssea, pois, caso contrrio, haveria, nas amostras de
sangue colhidas, material gentico alheio ao do doador, o que comprometeria, em ltima
instncia, a anlise.

Devem ser colhidas duas amostras de sangue perifrico, em respeito ao art.

170 do Cdigo de Processo Penal que prev a necessidade de reserva de material para
eventual nova percia, bem como em respeito s boas prticas laboratoriais que exigem a
repetio dos exames das amostras, quando os resultados encontrados apontarem para uma
excluso.

prevista ainda neste termo a declarao de que o doador est fornecendo o

material de livre e espontnea vontade e, por ltimo, deve constar do termo de doao a
declarao do rgo coletor de que o material biolgico colhido ser utilizado nica e
exclusivamente para exames relacionados com a ocorrncia criminal que se est apurando
e no em outras passadas ou futuras. Por estas previses possurem implicaes jurdicas e
ticas, passaremos, ento, a coment-las.

59

2.2.1. A coleta de materiais e a Constituio Federal

A Declarao Universal dos Direitos dos Homens estabelece em seu artigo

1. inciso XI, que todo o homem acusado de um ato delituoso tem o direito de ser
presumido inocente at que a sua culpabilidade tenha sido provada de acordo com a lei, em
julgamento pblico no qual lhe tenham sido asseguradas todas as garantias necessrias
sua defesa. Neste sentido, a Constituio Federal de 1988, atravs de seu artigo 5. inciso
LV, assegura ao acusado direito ao contraditrio e ampla defesa.

Pela mesma Carta, so tambm assegurados outros direitos e garantias ao

acusado. Dentre eles podemos citar os contidos nos incisos X, XLIX, LIV, LVII e LXIII
do artigo 5.: direito intimidade, garantia aos presos de respeito integridade fsica e
moral; garantia do devido processo legal; garantia de serem inadmissveis contra ele provas
obtidas por meios ilcitos; garantia do princpio de presuno de inocncia e o direito de
permanecer calado.

Estas garantias aliadas ao princpio nemo tenetur se detegere (ningum est

obrigado a fazer prova contra si mesmo), princpio processual ligado ao devido processo
legal, que se realiza pelo exerccio do direito ao silncio, se aplicam como garantias de no
estar o acusado obrigado a fazer prova contra si. Em relao ao direito ao silncio, pode-se
entender ainda que se o silncio do ru no pode ser mais interpretado em prejuzo da
defesa, o mesmo devendo acontecer em relao sua recusa em doar material para o
exame de DNA. Diante da presuno de inocncia, no se pode constranger o acusado ao
fornecimento de provas, nem de sua negativa inferir veracidade o fato (GOMES FILHO,
1997).

A coleta forada ou involuntria do material para feitura de exame de DNA

caracteriza uma das formas de obteno ilcita da prova, o que inadmissvel no sistema
legal brasileiro, alm de ferir outras garantias constitucionais acima citadas.

H, porm, um consenso popular em defesa da possibilidade de realizao

compulsria do exame, pela argumentao de que o interesse da defesa social (proteo da
sociedade) justificaria o desrespeito aos direitos e garantias do acusado.

60

No Estado Democrtico de Direito o sistema jurdico dever sempre ser

permeado pelo princpio da razoabilidade. Este princpio coloca em conflito o respeito aos
direitos do acusado, consagrados processual e constitucionalmente, e os interesses da
sociedade.

Em prol do acusado, vale ressaltar que a Constituio Federal de 1988

impe, como um dos fundamentos principais para o Direto Penal, o respeito dignidade
humana, limitando o poder de punir do Estado, determinando, assim, uma nova orientao
na aplicao das normas penais (CAMARGO, 2002).

Encarados sob esta nova orientao, os interesses da sociedade, mesmo que

contemplados pela coleta compulsria, no podem significar uma aspirao de condenao
do acusado, uma vez que, sob este enfoque, no a relao de causalidade, isto , a
comprovao da existncia de um fato, que induz condenao. A responsabilidade
criminal e a pena devem ser analisadas sob o prisma da necessidade e proporcionalidade
(CAMARGO, 2002).

Entretanto, no se pode compactuar com certas vantagens que muitos

acusados podem auferir pela recusa em fornecer material biolgico no decorrer da
persecuo penal e nem com o desrespeito aos dispositivos legais em prol dos interesses da
sociedade. Propomos, ento, mudana legislativa, a exemplo de legislaes estrangeiras,
que pacifique a questo, tornando obrigatrio o fornecimento de material biolgico quando
exista suspeio da prtica de crimes graves que causem danos relevantes a bens jurdicos
protegidos, bem como ainda preveja a possibilidade de formao de dados genticos dos
condenados por estes crimes.

De fato, na sociedade atual, denominada de risco, complexa ou da

comunicao, o interesse do Estado, junto ao respeito s garantias fundamentais, o de
solucionar conflitos. Desta forma, o Direito Penal, integrado ao Processo Penal e
Constituio Federal, h de ser funcional e flexvel, o que justifica o entendimento do
exposto.

Juridicamente a assinatura do termo de coleta pelo acusado garante

formalmente que a prova formada a partir de seu material biolgico foi licitamente obtida,

61

podendo, assim, compor o rol dos elementos colocados disposio do juzo para a
formao da livre convico sobre autoria do crime perpetrado.

2.2.2. Princpios ticos relacionados coleta de materiais

As pesquisas e anlises envolvendo seres humanos devem tambm atender a

exigncias ticas fundamentais, baseadas nos princpios da autonomia, da beneficncia e
no maleficncia e da justia e eqidade. (RESOLUO CNS 196/96).

O princpio da autonomia relaciona-se com o consentimento livre e

esclarecido dos indivduos-alvo, de forma a trat-los em sua dignidade, respeit-los em sua
autonomia e defend-los em sua vulnerabilidade. Sob este prisma, a assinatura do termo de
coleta de material biolgico, previsto na Resoluo SSP 194/99, deve ser precedida de
esclarecimentos de que ele no est obrigado a ceder material biolgico, assegurando-lhe a
inteira liberdade de escolha, sem quaisquer represlias. E, caso haja o assentimento do
acusado, deve ainda existir o esclarecimento de que a prova obtida a partir de seu material
biolgico poder contribuir para a sua condenao.

Os princpios da beneficncia e da no maleficncia, que implicam a

ponderao entre riscos e benefcios, podem ficar comprometidos se houver o
negligenciamento do princpio da autonomia, levando maximizao do risco do prprio
acusado contribuir involuntariamente para a sua condenao judicial.

Os princpios da justia e da eqidade so atinentes relevncia social e

devem promover vantagens para os envolvidos, aqui no caso, a instituio representante
dos interesses da justia e o acusado, bem como minimizar o nus para o sujeito
vulnervel. Estes princpios podem tambm ficar comprometidos, se no existir igualdade
nos interesses dos envolvidos. Caso sejam ocultados do acusado os devidos
esclarecimentos sobre seu direito recusa, existiro gritantes vantagens para a instituio.

62

3. Extrao do DNA

A identificao humana atravs do estudo dos polimorfismos do DNA

empregando a PCR necessita que o DNA extrado das amostras em estudo esteja livre de
contaminantes e interferentes que possam prejudicar a reao. Isto, muitas vezes, poder
implicar, alm de procedimentos de extrao propriamente ditos, os procedimentos de
purificao do DNA extrado.

O primeiro passo para o isolamento do DNA extra-lo das clulas

nucleadas de uma amostra obtida no curso da investigao criminal (amostra questionada),
bem como isol-lo de uma amostra referncia de um tecido ou sangue de uma pessoa em
questo.

O tipo de vestgio biolgico, sua quantidade e seu estado de conservao

vo ter influncia na escolha da metodologia a ser adotada para o isolamento do DNA.
Entretanto, independentemente da escolha feita, os mtodos de extrao e purificao do
DNA consistem em trs etapas. Na primeira delas ocorre a lise ou ruptura das membranas
celulares e solubilizao do DNA. Na segunda etapa emprega-se um mtodo enzimtico ou
qumico para remover as protenas contaminantes e outras macromolculas. Na terceira e
ltima etapa, ocorre a precipitao geralmente alcolica do DNA (HIRATA; HIRATA,
1998).

Alguns mtodos envolvem uma morosa digesto com proteinase K,

utilizao de solventes orgnicos altamente txicos como fenol, clorofrmio e lcool
isoamlico. Ainda que estes mtodos propiciem a extrao do DNA de uma grande
variedade de amostras, eles requerem muitos passos analticos que podem incluir a
transferncia dos extratos de DNA para recipientes adicionais ou procedimentos de
lavagem do material utilizando vrios filtros ou colunas comerciais. Estes passos
adicionais podem dar azo a transferncias cruzadas de amostras ou a introduo de
contaminantes.

63

Outras tcnicas mais simplificadas ditas inorgnicas, como a que emprega

chelex

15

para extrao ou a baseada na precipitao salina (salting out), evitam o uso de

solventes orgnicos de alta toxicidade e digesto pela proteinase K (BUDOWLE, 1996).

O princpio da extrao orgnica (MANIATIS; SAMBROOK; FRITSH,

1996) consiste na remoo dos resduos de protenas do DNA atravs da combinao de
dois solventes orgnicos diferentes: fenol e clorofrmio. O mtodo bsico compreende a
ruptura do tecido com um homogeneizador, a lise celular com um detergente inico, a
extrao fenlica e a precipitao etanlica do DNA.

Outro mtodo orgnico compreende a solubilizao dos tecidos ou clulas

com detergente inico e utilizao de proteinase K para digerir as protenas celulares. O
isolamento do DNA segue basicamente o princpio anterior (HIRATA; HIRATA, 1998).

O princpio da extrao de DNA por precipitao salina, tambm conhecida

por salting out (MILLER; DYKES; POLESKY, 1988) consiste na remoo do sal da
protena celular, atravs da desidratao e precipitao com soluo saturada de cloreto de
sdio.

A metodologia que emprega chelex para extrao de DNA (WALSH;

METZGER; HIGUCHI, 1991; BUDOWLE, 1996) baseia-se no princpio que a presena
desta resina no processo de ebulio do DNA evita sua degradao por complexao ou
quelinitizao de ons metlicos que podem agir como catalticos na quebra do DNA em
altas temperaturas e em solues de baixo contedo inico. Os procedimentos adaptados
para as amostras forenses envolvem a fervura de clulas em uma suspenso de chelex a
5%.

Como anteriormente salientamos, a escolha da metodologia a ser aplicada

para a extrao dever ser pautada no tipo, na quantidade e qualidade das amostras em
anlise. Em funo disto, no decorrer dos vinte anos de aplicao do DNA na elucidao
de crimes e identificao de pessoas, inmeros protocolos de extrao foram desenvolvidos
15

Resina quelante com alta afinidade por ons ou metais polivalentes, composta por polmeros de
divinilbenzeno estireno com ons iminodiacetato com ao quelante (formao de qualquer composto em
que se forma um anel graas a um enlace coordenado entre dois ou mais stios de uma molcula e um on
metlico) (CALABREZ, 1999).

64

e aprimorados para contemplar necessidades especficas, em face da diversidade de

vestgios biolgicos e suas formas de apresentao. Neste sentido, por exemplo, foi editado
um manual sobre protocolos de tipagem de DNA (BUDOWLE et al., 2000) contendo as
metodologias de extrao de DNA adotadas pelo FBI.

A agncia norte-americana preconiza o uso da extrao orgnica, com

emprego de fenol-clorofrmio, em protocolos que incluam precipitao alcolica para
extrao de sangue lquido, manchas de fluidos corpreos, esperma e clulas vaginais.
Indica a extrao orgnica com utilizao de filtro concentrador de DNA para manchas de
sangue, manchas de saliva, swabs vaginais e manchas de smen. A extrao orgnica
tradicional indicada para extrao de DNA contido em abas de envelopes, selos, bitucas
de cigarros, tecidos moles, cabelos, ossos, incluindo vrias alternativas protocolares, e
dentes.

O emprego de chelex recomendado para extrao de DNA de sangue total,

sangue em manchas, smen contido em manchas, saliva contida em swabs, papel de filtro,
abas de envelopes, selos e bitucas de cigarros. Pode ainda o chelex ser aplicado em
cabelos, especificamente para anlise de DNA mitocondrial.

Por ltimo, a agncia recomenda o mtodo inorgnico (salting out) para

extrao de DNA de sangue total. Este manual contm tambm mtodo de preparao para
retirada de DNA imobilizado em carto FTA, mormente empregado para armazenagem e
conservao de sangue em temperatura ambiente.

O DNA extrado de vestgios, oriundos de locais de crime, necrotrios ou os

obtidos em atos exumatrios, se apresenta, amide, em baixa concentrao, deteriorado ou
contaminado e, como vimos, por isso, passvel de anlise, na maioria das vezes, apenas por
mtodos baseados na PCR pelo estudo de STRs ou pelo DNA mitocondrial.

Devido baixa qualidade e quantidade do DNA extrado, tem sido comum o

emprego de filtros concentradores de DNA para otimizao das anlises, bem como o uso
de produtos para sua purificao, uma vez que a presena de contaminantes ou
interferentes pode inibir a reao de PCR. Para ajudar na superao destes problemas,

65

houve o desenvolvimento de kits e produtos por empresas comerciais que so de grande

auxlio aos analistas forenses.

Dentre os vrios produtos disponveis no mercado e que contribuem para a

melhoria na obteno de DNA, podemos destacar o tubo MICROCON YM-100 da
Millipore. Trata-se de uma membrana filtrante que promove a concentrao e a purificao
do DNA. A Promega Corporation tambm oferece vrios produtos para a extrao e
purificao do DNA. Entre eles ressaltamos os sistemas ReadyAmp, DNA-IQ e
Differex.
O sistema ReadyAmp utilizado para o isolamento e purificao do DNA
genmico contido em manchas de sangue altamente degradadas empregando chelex. O
sistema DNA-IQ utiliza partculas paramagnticas para isolar o DNA de inibidores da
PCR. Este sistema pode ser empregado na extrao de vrios tipos de vestgios, porm sua
grande contribuio em nosso entender a de propiciar sensvel melhora na obteno de
DNA de ossos, verdadeiro calcanhar-de-aquiles dos analistas forenses. O sistema recmlanado denominado Differex se prope a substituir a tradicional extrao diferencial
pelo mtodo orgnico, empregada para anlise de vestgios de crimes sexuais, quer por sua
praticidade quer por sua atoxicidade. Entretanto, ainda no temos parmetro para avaliao
da eficincia deste sistema.
A tcnica que o sistema Differex quer superar um procedimento
empregado praticamente sem modificaes h quase vinte anos. Desenvolvida por Gill,
Jeffreys e Werret (1985), a extrao diferencial pelo mtodo orgnico laboriosa, porm
de grande eficincia, valendo a pena tecer alguns comentrios sobre ela.

Nos crimes sexuais, espermatozides podem estar misturados com clulas

epiteliais da vtima. Os analistas geralmente tentam separar o material masculino do
feminino em dois extratos ou fraes, usando um procedimento chamado lise diferencial16
16

Laboratrios forenses que dispem de equipamentos para estudos de mtDNA podem obter informaes
acerca da origem tnica de um estuprador desconhecido. Isto possvel atravs do seqenciamento das
regies da ala de deslocamento (ala-D) do mtDNA extrado dos espermatozides aps lise diferencial
incompleta, ou seja, sem a total separao dos espermatozides das clulas femininas. Estudo recente
demonstrou que a lise incompleta impede a perda dos flagelos dos espermatozides evitando com isso a
concomitante perda da informao mitocondrial dos espermatozides, fenmeno comum na lise completa
(ANSLINGER et al., 2005).

66

que emprega detergentes fracos para liberar DNA das clulas epiteliais, seguidos da
utilizao de detergentes fortes para liberar o DNA dos espermatozides. Isoladas as
fraes, ambas so submetidas extrao por fenol-clorofrmio (THOMPSON; KRANE,
2003).

Os principais protocolos utilizados para extrao pelo Laboratrio de DNA

do Instituto de Criminalstica de So Paulo (ANEXO 2) empregam quatro metodologias: 1)
extrao de DNA pelo iodeto de sdio, rotineiramente empregada para sangue in natura e
bem conservado; 2) extrao de DNA com fenol-clorofrmio, utilizada para ossos e dentes
ou para manchas de sangue ou sangue in natura em pssimo estado de conservao; 3)
extrao de DNA de osso usando DNA-IQ, empregada para ossos em pssimo estado de
conservao e 4) extrao diferencial de DNA pelo mtodo orgnico, utilizada para
manchas, lminas e swabs contendo esperma.

No campo do isolamento do DNA, devemos ainda registrar o emprego de

sistemas automatizados. A introduo de dispositivos robticos se deu h mais de duas
dcadas para processamento de amostras lquidas de espcimes clnicos e nos dez ltimos
anos esta tecnologia foi transferida aos laboratrios forenses. A automatizao foi
empregada originalmente nos laboratrios criminais para ajudar no processamento de
milhares de amostras de sangue lquido e de swabs orais usados como referncia nos casos
estudados, bem como para alimentar os bancos de dados de perfis genticos de
condenados, tal qual o CODIS - Combined DNA Index System, norte-americano. O sistema
robotizado propicia a extrao, amplificao e tipagem automticas do DNA.

O uso da robtica para anlise de vestgios criminais encontra vrios

obstculos. O primeiro deles a etapa de extrao de DNA, uma vez que estas amostras
normalmente sofrem insultos ambientais, alm de serem encontradas em qualquer tipo de
suporte imaginvel que pode, muitas vezes, acrescentar inibidores ao extrato. Alm disto,
os casos mais comuns submetidos aos laboratrios de DNA so aqueles relacionados com
crimes sexuais em que a separao do esperma das amostras pode ser um desafio. Outro
obstculo a ser vencido pela robotizao a quantificao destas amostras, pois
diferentemente da amostra-referncia, elas devem ser necessariamente quantificadas
(CROUSE; CONOVER, 2004).

67

Considerando estas dificuldades, o uso da robtica para anlise de vestgios

encontrados em locais de crime comeou h poucos anos e vem sendo incrementado
medida que os cientistas forenses fazem ensaios de validao de protocolos para extrao e
quantificao de DNA para este tipo de plataforma.

O incremento na incorporao da robtica deve-se tambm ao fato dela

propiciar a reduo da necessidade de trabalho intenso com fenol-clorofrmio, reagentes
de alta toxicidade, nas extraes de DNA (MONTPETIT; FITCH; ODONNELL, 2005).

4. Quantificao do DNA extrado

A quantificao de DNA um passo procedimental aplicado aos extratos de
DNA antes da reao de PCR e subseqente genotipagem. Ela serve a dois propsitos:
assegurar uma diluio adequada para os extratos concentrados de DNA de modo a
adequ-los a concentraes compatveis para a reao de PCR e eliminar extratos que
contenham apenas traos de DNA que falhariam na etapa de amplificao, salvando-se,
assim, tempo e recursos. Obviamente, dos ensaios de quantificao tambm se obtm
informaes relevantes para a escolha do tipo de marcador a ser utilizado na amplificao
frente concentrao de DNA aferida.

A acurcia da quantificao de DNA produz tambm impacto na qualidade

da tipagem de STRs, particularmente quando uma mistura de material analisada (KLINE
et al., 2005).

As metodologias empregadas para estimar a concentrao do DNA extrado

so baseadas em espectrofotometria de absoro no ultravioleta ou em espectrometria de
fluorescncia. A quantificao por espectrofotometria acurada se na amostra em teste no
existir contaminao por protenas, fenol, EDTA e outros cidos nuclicos. Caso haja
contaminao,

recomenda-se

quantificao

por

fluorescncia.

Aparelhos

de

espectrofotometria recentemente lanados possuem limite de deteco prximo a 2 ng/mL

e, ao contrrio dos equipamentos tradicionais, possuem maior potencial de absorbncia,
prescindem de diluio para a maioria das amostras, alguns deles no empregam cubetas e

68

capilares para leitura e realizam a quantificao exigindo apenas de 1 a 2 L da amostra, o

que de grande importncia para o exame de vestgios oriundos de locais de crime.

A quantificao de DNA por fluorescncia pode se dar por vrios

procedimentos. No mais tradicional deles, o DNA submetido eletroforese em gel de
agarose. A visualizao do DNA se d pela intercalao ou ligao sua molcula de um
corante fluorescente. Atravs da medida da intensidade da fluorescncia, estima-se a
quantidade de DNA. A quantificao de DNA em gel de agarose tcnica de menor
preciso, porm de grande valia por sua simplicidade, sendo mormente empregada apenas
como instrumento para averiguao de xito na etapa de extrao.

Vrios kits comerciais baseados em fluorescncia esto disponibilizados e

dentre eles tm destaque os que possibilitam especificamente a quantificao do DNA
humano extrado. Isto fator relevante nas anlises forenses, uma vez que comum a
contaminao de fungos e bactrias em materiais coletados em locais de crime. E, como
tal, contaminao de DNA oriundos de outras espcies deve ser ignorada na quantificao
do componente humano do DNA total (MANDREKAR et al., 2001).

Amostras coletadas em locais de crime podem estar degradadas devido a

fatores ambientais e outros e, por isso, no conter DNA suficientemente detectvel para
propiciar a identificao humana. Baseadas na tecnologia de PCR em tempo real (RTPCR) ou sistema de deteco de seqncias (SDS), empresas comerciais lanaram kits que
permitem a quantificao de DNA humano total em nveis inferiores a 100 pg,
quantificao especfica de material humano masculino (cromossomo Y) e quantificao
de DNA mitocondrial humano.

A tecnologia de RT-PCR para a quantificao consiste em utilizar um

sistema que detecta o aumento da quantidade de DNA no tubo de reao, atravs da
medida do aumento da emisso fluorescente, medida que a reao est ocorrendo. O
nvel de fluorescncia emitida pela amostra excitada por um laser ou por uma lmpada de
halognio associada a um filtro especfico detectado a cada ciclo e enviada para uma
unidade processadora. Para deteco do produto da PCR ao longo de cada ciclo preciso
marcar o DNA amplificado com algum tipo de molcula fluorescente. O termociclador
utilizado para quantificao em tempo real est equipado com cabos de fibra ptica que

69

direciona a luz do laser para cada um dos poos do bloco onde so colocadas as amostras
(REBOUAS, 2004).

5. Amplificao do DNA
A qualidade e a quantidade de DNA contido nos vestgios oriundos de
locais de crime ou de atos exumatrios podem ser fatores limitantes anlise. O advento
da PCR, do ingls Polymerase Chain Reaction, aumentou significativamente a
possibilidade de anlise das variaes gnicas nestes tipos de vestgios, tornando-se tcnica
de eleio nos laboratrios forenses.

A PCR propicia a amplificao exponencial especfica de seqncias do

DNA in vitro, prestando-se como poderoso instrumento na avaliao da individualizao
humana. O princpio da tcnica (MULLIS; FALOONA, 1987) baseado na estrutura e na
seqncia do DNA. Basicamente trata-se de uma reao enzimtica catalisada por uma
polimerase (termoestvel17), cuja atividade depende de ons Mg++, e ocorre em trs etapas:
desnaturao (melting) que consiste na separao da dupla fita do DNA a ser amplificado;
anelamento (annealing) ou hibridizao, com ligao do iniciador ou primer ao DNA a ser
amplificado; e extenso (extension), quando ocorre a polimerizao propriamente dita
(HIRATA; HIRATA, 1998).

Desde sua descrio, o procedimento da PCR vem sendo aperfeioado de

modo a permitir sua automao em aparelhos termocicladores. Microtubos contendo os
componentes essenciais reao18 so colocados em um termociclador previamente
programado para repetio de ciclos de variao de temperatura, sendo cada um deles
composto de trs passos.

17

O que tornou a reao de PCR possvel foi a descoberta, em 1976 por Thomas D. Brock, das enzimas DNA
polimerases termestveis, ou seja, enzimas que apresentam seu timo de atividade sob temperaturas ao
redor de 70oC. Estas enzimas so isoladas de bactrias (Thermus aquaticus) que habitam fontes termais e
crateras de vulces submarinos, onde convivem confortavelmente em temperaturas entre 90 o e 100oC
(HIRATA; HIRATA, 1998).
18
DNA molde ou template; um par de oligonucleotdeos para iniciar a sntese de DNA (primers), enzima
DNA-polimerase termoestvel; dNTPs ou nucleotdeos contendo as bases nitrogenadas A, T, C e G; ction
divalente, usualmente Mg++; tampo para manuteno do pH; e ctions monovalentes, usualmente K +
(KCl) (REBOUAS, 2004).

70

No primeiro passo ocorre a desnaturao, isto , a separao das duas fitas

do DNA a ser amplificado. Isto se d pela elevao da temperatura entre 90 e 95C. O
aquecimento aumenta a agitao trmica das molculas propiciando a quebra das pontes de
hidrognio. No segundo passo, em temperatura inferior da desnaturao (45 a 60C),
ocorre a etapa de anelamento com o pareamento ou ligao dos iniciadores a regies
especficas do DNA molde. O DNA uma molcula com polaridade, possuindo uma
extremidade 5-P e outra 3-OH. Os iniciadores so pequenos fragmentos sintticos de
DNA de fita simples, usualmente com extremidade 5-OH, e complementares seqncia
do segmento de DNA de interesse. No terceiro e ltimo passo, a 72C, inicia-se a atuao
da enzima polimerase que propicia o pareamento dos nucleotdeos livres, a partir dos
iniciadores, s fitas do DNA, promovendo o alongamento ou extenso da cadeia, no
sentido 5 3. Todas as fitas de DNA sintetizadas durante a PCR tm a seqncia de um
dos primers na extremidade 5 e a seqncia complementar ao outro primer na
extremidade 3.

O conjunto das reaes de desnaturao, anelamento e extenso chamado

de ciclo. A execuo de um ciclo resulta na amplificao da seqncia desejada de DNA.
O produto de um ciclo serve como molde para o prximo, dobrando-se, assim, a
quantidade de DNA produzido a cada ciclo consecutivo. Sob condies tericas, os
produtos de PCR obedecem a equao N = No x 2n, onde N nmero de molculas
amplificadas; No nmero inicial de molculas e n nmero de ciclos de amplificao
(HIRATA; HIRATA, 1998). A repetio destes ciclos, entre 25 e 35 vezes, leva
amplificao exponencial da regio alvo, ou seja, do lcus que se quer estudar, alcanandose bilhes de cpias. A figura abaixo inserida ilustra esquematicamente a reao de PCR.

71

Figura 4 - Esquema da reao de PCR (adaptado de REBOUAS, 2004).

A cintica da PCR tem trs fases. Nos ciclos iniciais ou fase de screening,
os primers procuram o DNA molde com as seqncias que lhes so complementares,
encontrando-as com certa facilidade uma vez que esto em excesso em relao ao
template. Na fase intermediria o processo de amplificao est ocorrendo e existe
acmulo exponencial do fragmento de DNA. Agora o pareamento do primer com a
seqncia que lhe complementar est facilitado pela existncia de vrias cpias da
seqncia alvo. Na fase tardia ou tambm denominada plat, a amplificao j est abaixo
do timo, em decorrncia da limitao dos reagentes e competio dos produtos gerados.
O crescimento linear do nmero de cpias ocorre at um determinado nmero de ciclos,
ocorrendo, ento, o chamado efeito plat. Este efeito pode ter vrias causas como a falta de
disponibilidade ou mesmo a perda da atividade das polimerases, acmulo de produtos que
tendem a parear entre si e outras (REBOUAS, 2004).

Alguns parmetros so importantes para a otimizao da PCR. Dentre eles

podemos destacar a temperatura do annealing dos primers, o regime dos ciclos e a
composio do tampo. Aditivos como glicerol, albumina e detergentes no inicos podem
aumentar a especificidade e o rendimento da PCR. Entretanto, a presena de contaminantes
na amostra de DNA pode inibir fortemente a reao de PCR. Amostras contaminadas por
polissacardeos ou por corantes podem no ser amplificadas. Fenol, proteinase K, agentes
quelantes como EDTA, hemoglobina e outras protenas das hemcias, detergente forte

72

como SDS (dodecil sulfato de sdio) e elevadas concentraes de sal podem tambm inibir
a reao enzimtica (REBOUAS, 2004).

Um problema muito comum na anlise do produto da PCR o aparecimento

de um smear, uma espcie de mancha ou rastro que tem como causas mais freqentes
condies pouco especficas para o annealing dos primers ou DNA de m qualidade,
fragmentado ou com contaminante. Uma das solues para contornar o aparecimento de
smears a aplicao de nested-PCR, utilizando-se os produtos iniciais da amplificao que
geraram o smear (REBOUAS, 2004).

A tcnica da PCR to sensvel que capaz de amplificar uma molcula de

DNA e tal a sua especificidade que uma simples cpia de gene pode ser extrada de uma
mistura complexa da seqncia genmica de forma rotineira e ser visualizada como uma
simples banda em um gel de agarose.
A sensibilidade19 e a especificidade que o mtodo pode oferecer algo
singular. A PCR utilizando DNA polimerases termoestveis foi descrita pela primeira vez
por Kary Mullis e patenteada nos Estados Unidos sob os ns. 2.683.195 e 4.683.202, em
julho de 1987. Mullis; Faloona (1987) e Saiki et al. (1986) introduziram as diversas
aplicaes da PCR para a comunidade cientfica e atualmente inesgotvel a sua aplicao
prtica tanto na pesquisa bsica como na aplicada (HIRATA; HIRATA, 1998).

Os loci analisados atravs da reao de PCR so muitos. A pesquisa bsica

forneceu as seqncias das regies de centenas de microssatlites de importncia em
hemogentica forense. Os loci de microssatlites conhecidos por STRs apresentam alelos
ou fragmentos de DNA de 100 a 300 pares de bases e so os preferidos na anlise pericial
forense (JOBIM; JOBIM; BRENNER, 1999).

19

Qualquer procedimento que usa a PCR suscetvel ao erro causado pela contaminao, podendo levar
amplificao do DNA errado. O processo de amplificao to eficiente que algumas molculas perdidas
de DNA contaminante podem ser amplificadas juntamente com o DNA que se quer analisar. A maioria
destes erros prontamente detectada aps a anlise por PCR, porque o DNA contaminante fornece um
padro fraco que difere do padro predominante (NRC, 1992).

73

Estes loci podem ser analisados individualmente ou em grupos, atravs de

sistemas chamados mltiplos ou multiplex que permitem o estudo simultneo de diversos
loci.

A evoluo destes sistemas acompanhou o desenvolvimento dos formatos

de deteco dos produtos de amplificao que veremos posteriormente. A amplificao de
loci STRs progrediu de reaes para estudos de um nico lcus para trs, quatro, oito, nove
loci, alcanando a amplificao simultnea de dezesseis loci em um nico microtubo,
incluindo amelogenina para determinao do sexo (LINS et al., 2000).

O primeiro multiplex largamente utilizado foi um quadriplex (KIMPTON et

al.,1993) constitudo de quatro simples STRs. Contudo, devido ao seu baixo poder
discriminatrio (aproximadamente 1 em 10.000), o primeiro caso criminal envolvendo
STR autossmico foi resolvido em conjugao com sondas SLP. Adies subseqentes de
dois complexos de STRs aumentaram o poder discriminatrio para, aproximadamente, 1
em 50 milhes. Esta segunda gerao de multiplex (SGM) tambm inclui ensaios para
amelogenina. Ela propicia a anlise de LCN-DNA (DNA com baixo nmero de cpias)
pela sujeio das amostras a um nmero aumentado de ciclos, objetivando maximizar os
produtos da PCR obtidos de amostras com menos de 100 pg de DNA (GILL et al., 2000).

Esta gerao deixou claro que ensaios com STRs so mais sensveis que os
outros mtodos ao permitir o estudo dos alelos sem ambigidades, sendo convenientes para
o desenvolvimento de bancos de dados20. Em 2000, quatro novos loci foram adicionados
ao sistema SGM, passando a denominar-se SGM Plus, aumentando o poder discriminatrio
para aproximadamente 1 em 10.000.000.000.000 (COTTON et al., 2000), sendo
recomendado por organizaes como ENFSI European Network of Forensic Science
Institutes e Interpol.

Os caminhos acima traados foram os percorridos no Reino Unido.

Contudo, em outros locais o emprego dos sistemas STRs se deu de outra forma e
20

Tais bancos combinam a cincia forense e a tecnologia da informtica proporcionando uma efetiva
ferramenta de informao para o desenvolvimento da investigao criminal. As bases de dados de DNA
podem ser utilizadas para a busca de perfis de DNA que ajudem na resoluo de um grande nmero de
crimes violentos, atravs da comparao eletrnica de perfis, estabelecendo nexos entre casos criminais e
delinqentes condenados (BUDOWLE; BROWN, 2001).

74

globalmente hoje existe um grande nmero de sistemas diferentes que, apesar de tudo, tm
muitos loci em comum. O CODIS, coordenado pelo FBI, contm 13 STRs mais
amelogenina para determinao do sexo, porm com um poder discriminatrio menor que
o do sistema adotado pelo Reino Unido (JOBLING; GILL, 2004).

Tipicamente, dois sistemas multiplex so separadamente usados tanto nos

Estados Unidos (MORETTI et al., 2001) como em outros pases, como o caso do Brasil.
Porm, para aumentar a eficincia das anlises, novos sistemas multiplex que amplificam
16 loci (incluindo a amelogenina) foram introduzidos no mercado (GREENSPOON et al.,
2004), conforme ilustra a tabela abaixo inserida.

TABELA 3 - Loci STRs recomendados pelos principais bancos de dados de DNA e os sistemas multiplex
disponveis atualmente no mercado.
cromossomo

loci recomendados
ENFSI
CODIS
INTERPOL

principais kits comerciais

SGM Plus

PowerPlex 16

D2S1338

TPOX

D2S1338

TPOX

3
4

D3S1358
FGA

D3S1358
FGA

7
8
11
12
13
15
16
18
19

D8S1179
TH01
vWA

D16S539
D18S51
D19S433

D3S1358
FGA
D5S818
CSP1PO
D7820
D8S1179
TH01
vWA
D13S317

D16S539
D18S51

D3S1358
FGA
D5S818
CSP1PO
D7820
D8S1179
TH01
vWA
D13S317
Penta E*
D16S539
D18S51

D21S11
Penta D*

21

D21S11

D21S11

D21S11

D8S1179
TH01
vWA

D16S539
D18S51

* pentanucleotdeo importante

AmpFlSTR
D2S1338
TPOX
D3S1358
FGA
D5S818
CSP1PO
D7820
D8S1179
TH01
vWA
D13S317

D16S539
D18S51
D19S433

D21S11

para o estudo de casos com

mistura de materiais

X/Y

amelogenina

amelogenina

amelogenina

amelogenina

amelogenina

Foram tambm desenvolvidos sistemas multiplex para anlise de loci STRs

do cromossomo Y, com aplicao corrente nos estudos de vestgios de crimes sexuais. Os
principais loci analisados deste cromossomo so: DYS393, AMELY-sex-test, DYS19,
DYS391, DYS389I.II, DYS390, YCAII, DYS385, DYS392.

75

6. Formas de deteco do DNA amplificado

A identificao dos fragmentos amplificados pode ser realizada em gel de

poliacrilamida. Uma frao de cada uma das diferentes amostras de DNA a ser analisado,
bem como amostras j conhecidas de DNA para servirem como controle e indicadores de
posio dos possveis alelos a serem encontrados, so submetidos a um processo de
eletroforese que promove, sob um campo eltrico, a migrao diferencial dos fragmentos
de DNA determinada pelo tamanho deles, sendo maiores as distncias percorridas pelos
fragmentos mais curtos.

Aps a eletroforese, de acordo com os reagentes utilizados na amplificao

do DNA, a identificao dos fragmentos pode se dar pela colorao do gel em prata ou
pela deteco de sinal de fluorescncia dos primers marcados com fluorocromos que
permitem sua identificao por analisadores automticos com tecnologia laser. Os
resultados da deteco do DNA pela colorao do gel por precipitao de prata so bandas
que correspondem aos alelos identificados. J na deteco por fluorescncia atravs de
analisador automtico, os alelos podem ser apresentados em bandas ou em picos, conforme
ilustram as Figuras 5, 6, 7 e 8.

76

Figura 5 Sistemas STR triplex de deteco por prata. Os sistemas multiplex CTT, FFv, e
SilverSTRIII so mostrados nos painis A, B e C, respectivamente. Cada uma das linhas
numeradas de 1 a 4 contm individualmente amostras de DNA amplificado e as linhas
denominadas como L contm uma escada allica 21 para os respectivos loci em cada sistema
multiplex. Os fragmentos amplificados e as escadas allicas foram separados em gel de
poliacrilamida 4% e detectados por um sistema de colorao por precipitao de prata (adaptado de
LINS et al., 2000).

21

Allelic ladder: marcador utilizado para identificar os alelos de um lcus STR especfico. Tais alelos so
gerados por amplificao em PCR.

77

Figura 6 Sistemas STR quadriplex de deteco por fluorescncia. Os sistemas multiplex CTTv,
FFFL, e GammaSilverSTR so mostrados nos painis A, B e C, respectivamente. Cada uma
das linhas numeradas de 1 a 6 contm individualmente amostras de DNA amplificado e as linhas
denominadas como L contm uma escada allica para os respectivos loci em cada sistema
multiplex. Os fragmentos amplificados e as escadas allicas foram separados em gel de
poliacrilamida 4% e detectados por scanner Hitachi FMBIOII fluorescente (adaptado de LINS
et al., 2000).

78

Figura 7 Sistema GenePrint PowerPlex 1.1. Seis amostras de DNA (linhas de 1 a 6) foram
amplificadas usando o sistema PowerPlex 1.1, separadas em gel de poliacrilamida 4% e
detectadas por scanner Hitachi FMBIOII fluorescente. O painel A mostra a imagem do gel
escaneado em trs cores. As cores da imagem foram separadas em escaneamento individuais
(painis B, C e D). O painel B representa os loci que so marcados com fluorescena (D16S539,
D7S820, D13S317 e D5S818) que so mostrados em verde no painel A. O painel C representa os
loci marcados com o corante fluorescente TMR (CSF1PO, TPOX, TH01 e vWA) que so
mostrados em vermelho no painel A. O painel D representa o padro interno CRX e est
representado em azul no painel A. As linhas denominadas L contm a escada allica para os
respectivos loci em cada cor (adaptado de LINS et al., 2000).

79

Figura 8 Eletroferograma22 obtido em anlise do Sistema GenePrint PowerPlex 1.2. Uma

nica amostra de DNA foi amplificada usando o sistema PowerPlex 1.2 e detectadas pelo
analisador automtico ABI PRISM. O painel superior mostra os loci que so marcados com
fluorescena (D5S818, D13S317, D7S820 e D16S539). O painel central mostra os loci marcados
com o corante fluorescente TMR (vWA, TH01, amelogenina, TPOX e CSF1PO) e o painel
inferior mostra o padro interno CRX (adaptado de LINS et al., 2000).

Atualmente, dado o grande volume de anlises nos laboratrios forenses,

mormente os sistemas multiplex so analisados e tipificados pela utilizao de analisadores
automticos. Para facilitao do processo analtico, tem-se optado pela escolha de sistemas
de eletroforese capilar com multicanais para deteco e que so combinados, nos
laboratrios de grande porte, com sistemas robotizados e sistemas de gerenciamento de
informaes, incluindo cdigo de barra das amostras para reduzir erros de operao.

22

Grfico resultante da eletroforese em analisador automtico, mostrando a intensidade da fluorescncia

como uma funo do peso molecular; o pico em um determinado comprimento de onda (cor) corresponde
a uma molcula especificadamente marcada e de tamanho particular.

80

A automao reduz custos e aumenta o ritmo de obteno de resultados. A

interpretao dos resultados, ou seja, a definio do perfil allico, mais difcil de
automatizar. Contudo, tem havido progresso em se converter a tradicional e subjetiva
interpretao do analista forense em regras heursticas para programas de informtica,
conhecidos como expert systems (WERRETT; PINCHIN; HALE, 1998). Estes programas
levam em conta o tamanho (medido com acurcia por meio do padro interno e da escada
allica); a altura e a rea dos picos do eletroferograma, com avaliao do balano
heterozigtico23; e incluem, ainda, uma checagem automtica para interpretao de
artefatos da PCR como os stutters (JOBLING; GILL, 2004).

A qualidade do DNA oriundo de amostras-referncia geralmente boa e isto

faz com que a automao da tipagem e da identificao sejam relativamente simples. Nas
amostras questionadas, uma avaliao preliminar vital para determinar o melhor mtodo
de processamento, porm a automao mais dificultosa porque a qualidade e a
quantidade de DNA so variveis e tambm porque misturas so freqentemente
encontradas, bem como perfis anmalos provenientes de mutaes podem tambm
aparecer, complicando a interpretao. Deve-se levar em conta ainda que se os mtodos
usados so sensveis o suficiente para detectar molculas de LCN-DNA (baixo nmero de
cpias de DNA), ento, a contaminao, seja por um ou por mltiplos alelos, apesar de
severas precaues laboratoriais para evit-la, possui forte possibilidade de ocorrncia e
para lidar com ela so necessrias determinadas estratgias para interpretao.

7. Significncia e interpretao dos resultados24

7.1. Freqncia de gentipos e perfis na populao

A anlise dos fragmentos de DNA pode conduzir verificao de que duas

amostras diferem em seus perfis, levando concluso de que vieram de pessoas diferentes.
23

Proporo entre dois alelos de um heterozigoto, expressa pela razo entre a rea do menor pico e a rea do
maior pico em um eletroferograma.
24
Na abordagem dos itens 7.1 e 7.2 optamos por seguir basicamente as diretrizes propostas pelo Conselho
Nacional de Pesquisa (National Research Council - NRC) para o assunto, uma vez que as recomendaes
desta entidade norte-americana so referncias mundialmente aplicadas e revistas por comits sobre DNA
na Cincia Forense, compostos por grandes expoentes da matria. O primeiro comit do NRC se reuniu em
1989 e emitiu seu relatrio em 1992. O segundo comit, com algumas alteraes em seu corpo, se reuniu
em 1994 e emitiu seu ltimo relatrio em 1996, reformulando ou completando alguns conceitos do
relatrio anterior.

81

Porm, se os perfis genticos combinarem, nos deparamos com duas possibilidades: as

duas amostras vieram da mesma pessoa (ou de gmeos idnticos) ou elas vieram de
pessoas diferentes cujos padres de DNA nos loci estudados so os mesmos.

Ao considerar a combinao entre o DNA proveniente, por exemplo, de

uma amostra encontrada em local de crime e a de um suspeito, temos que levar em conta
que se o perfil deste DNA for comum na populao, o vestgio pode ter sido originado por
outra pessoa que no o sujeito. Entretanto, se for incomum, a combinao entre os perfis
certamente no ter sido mera coincidncia , pois quanto mais raro for perfil, ser menos
provvel que as duas amostras de DNA tenham vindo de pessoas diferentes.

Cada teste adicional, isto , a anlise de um lcus ainda no testado,

propicia uma outra oportunidade de um resultado de excluso, se o indivduo conhecido
que est sendo usado para a comparao no for a fonte do DNA do vestgio. Entretanto, se
o indivduo for a fonte biolgica do vestgio, devero ser analisados loci em nmero
suficiente que comprove no somente que ele no possa ser excludo como fonte do DNA,
mas tambm que se comprove virtualmente que fica excluda toda a populao mundial.
Somente assim, ser tida como nica a identificao daquele indivduo como fonte do
DNA (NRC, 1996).

A avaliao da probabilidade de que o DNA de uma pessoa escolhida ao

acaso tenha o mesmo perfil que o DNA do vestgio analisado implica o conhecimento da
freqncia deste perfil na populao. Esta freqncia determinada por comparao a um
banco de dados, sendo necessrio usar as freqncias individuais dos alelos para estimar a
sua freqncia.

Esta abordagem exige algumas suposies sobre a forma pela qual a

populao se une. Em estruturas populacionais animais mais simples, as unies ocorrem
aleatoriamente. J na espcie humana, as pessoas freqentemente escolhem seus parceiros
por seus atributos fsicos e comportamentais como altura e personalidade, o que no
implica a escolha pelos marcadores nos estudos forenses como VNTRs e STRs (NRC,
1996). Assim, apesar das populaes no se unirem aleatoriamente, o estudo das
freqncias destes marcadores genticos em diferentes populaes de um mesmo pas pode
demonstrar proporcionalidade de gentipos.

82

Considera-se unio aleatria a preferncia de escolha de parceiros

independentemente do gentipo nos loci relevantes e independentemente da ascendncia.
As propores esperadas aps unies aleatrias so chamadas propores Hardy-Weinberg
(HW) que consideram que: a proporo de pessoas com duas cpias do mesmo alelo
(homozigotos) o quadrado da freqncia deste alelo [AiAi: Pii = Pi2] e a proporo de
pessoas com dois alelos diferentes (heterozigotos) o dobro do produto das duas
freqncias [AiAj: Pij = 2PiPj, i j].
Se uma populao no exibe propores HW, o que pode ocorrer quando a
unio na gerao ou geraes anteriores no foi aleatria, apenas uma nica gerao, com
unies aleatrias, ser necessria para produzir propores HW, pois as propores dos
gametas que se unem para produzir indivduos da gerao seguinte dependem somente da
freqncia dos alelos e no do gentipo dos pais da gerao atual. Esta propriedade eleva
muito a utilidade das equaes acima descritas, pois aumenta a probabilidade delas serem
exatas (NRC, 1996).

Populaes de diferentes partes do mundo com diferentes freqncias de

alelos podem ser homogeneizadas em uma nica gerao, desde que a unio seja aleatria.
Certamente unies perfeitamente aleatrias so pouco provveis, mas as equaes so
suficientemente exatas para muitas finalidades prticas e o grau de variabilidade causado
pelo afastamento das propores de unies aleatrias pode ser estimado, como veremos
mais adiante.

Afastamentos das propores HW nas populaes podem ocorrer por trs

razes principais: existncia de parentesco, subdiviso da populao e processo de seleo.

A primeira delas se d pelo parentesco entre os pais, levando

consanginidade que diminui a proporo de heterozigotos com um aumento compensativo
dos homozigotos.

A segunda pode ser decorrente da subdiviso da populao em grupos

raciais importantes como afro-descendentes, caucasianos, hispnicos, ndios e outros. Em
geral, as freqncias dos alelos so bem diferentes entre grupos raciais, levando
confeco de bancos de dados separados. Dentro de uma mesma raa existe ainda

83

possibilidade de haver subdivises pela miscigenao. Uma conseqncia da subdiviso

populacional que os parceiros podem ter ancestrais comuns, tendo tambm como
conseqncia a diminuio dos heterozigotos e aumento dos homozigotos.

A terceira razo decorrente do processo de seleo que porm aqui no

ser considerada, uma vez que na anlise forense os loci tradicionalmente estudados so
considerados seletivamente neutros (NRC, 1996).

Com unies aleatrias, os alelos em diferentes loci, mesmo inicialmente em

ligao no mesmo cromossomo, se separam por recombinao e com o tempo atingem o
equilbrio de ligao (EL)25. Assumindo HW e EL, a proporo esperada de um perfil
especfico pode ser facilmente computada pela multiplicao das freqncias dos gentipos
em cada lcus. Na literatura forense, este procedimento de clculo chamado de regra da
multiplicao ou regra do produto26.

Em geral, o clculo da freqncia de um perfil deve ser feito com a regra do

produto. Se a raa da pessoa que deixou o vestgio de DNA for conhecida, o banco de
dados contendo a freqncia dos alelos da raa desta pessoa deve ser usado. Caso
contrrio, devem ser feitos clculos para todos os grupos raciais aos quais ela possa
pertencer. Para loci mltiplos, afastamentos do EL no so suficientemente grandes para
causar erros. Entretanto, discordando das recomendaes do relatrio NRC de 1992,
baseadas no princpio provisrio da freqncia allica mxima, para uma estimativa
conservadora, considerando os possveis afastamentos do HW, o relatrio do NRC de 1996
recomenda que, em sistemas como o das STRs onde gentipos exatos podem ser
determinados, a frmula [2PiPj] deva ser mantida para os loci heterozigotos e a frmula [P2
+ P(1 P)] deva ser usada para a freqncia no lcus homozigoto aos invs de [P2],
considerando 0,01 como um valor conservador para , para a populao dos Estados
Unidos e 0,03 tendo em vista a maior variabilidade dos marcadores baseados na PCR.
25

Quando se trata da anlise de herana dos alelos em dois loci diferentes no mesmo cromossomo, eles s
podem ser transmitidos independentemente se houver uma distncia suficiente entre eles denominada
equilbrio de ligao. Caso estes loci estejam localizados prximos demais, os alelos destes dois stios
podem ser transmitidos conjuntamente, ocorrendo o fenmeno chamado desequilbrio de ligao,
caracterizando-se em um desvio da herana independente postulada por Mendel. Quando regies do
genoma humano so utilizadas para fins de identificao humana, estas devem estar em equilbrio de
ligao para no sofrer influncia na segregao, facilitando a anlise da herana (KIRBY, 1990).
26
Se dois ou mais eventos so independentes, a chance de que eles ocorram ao mesmo tempo o produto de
suas probabilidades separadas (NRC, 1992).

84

Certas vezes existem indcios de que o suspeito e outras fontes possveis do

vestgio analisado pertenam ao mesmo subgrupo, como uma aldeia isolada, fazendo-se
necessria uma modificao no procedimento anterior. Nestes casos a recomendao do
NRC de 1996 a de que, se a subpopulao da qual a prova veio for conhecida, as
freqncias dos alelos para o subgrupo especfico devem ser usadas conforme descreve a
recomendao anterior. Entretanto, se as freqncias dos alelos para o subgrupo no
estiverem disponveis, embora estejam os dados para toda a populao, ento os clculos
devem usar as equaes (abaixo inseridas) da estrutura populacional para cada lcus, e os
valores resultantes devem ento ser multiplicados.

Homozigoto: P AiAi AiAi

2 1 Pi 3 11 Pi
1 1 2

Heterozigoto: P AiAi AiAi

2 1 Pi 11 Pi
1 1 2

O relatrio do NRC de 1996 recomenda tambm que, se a pessoa que

contribuiu com a amostra da prova pertence a um grupo ou tribo para os quais no existe
banco de dados adequado, dados de vrios outros grupos ou tribos que so considerados
estreitamente relacionados a ela devam ser usados. A freqncia do perfil deve ser
calculada para cada grupo ou tribo, conforme descreve a primeira recomendao.

Por ltimo, no tocante gentica populacional, o relatrio do NRC de 1996

recomenda que nos casos em que existam evidncias de que um ou mais parentes do
suspeito so os possveis criminosos, os perfis destes parentes devem ser obtidos. Se estes
perfis no puderem ser obtidos, a probabilidade de encontrar o perfil do vestgio nestes
parentes deve ser calculada com as seguintes frmulas:

85

Gentipo do suspeito

Probabilidade do mesmo
gentipo em um parente

Homozigoto: AiAi

Pi2 + 4Pi(1 Pi)F

Heterozigoto: AiAj

2PiPj + 2(Pi + Pj 4PiPj)F

Para pais e filhos, F = 1/4; para meio-irmos, 1/8; para tio e sobrinho, 1/8,
para primos em primeiro grau, 1/16.

Irmos, sendo bilineares ao invs de unilineares, requerem frmulas

diferentes:
AiAi: (1 + 2Pi + pi2)/4
AiAj: (1 + Pi + Pj + 2PiPj)/4
Nestes casos, pressupe-se que a populao est nas propores de HW.
Como os loci forenses no esto ligados e parecem estar prximos a EL, a probabilidade
condicional de um gentipo multilocos em um parente o produto das probabilidades
condicionais de lcus nico pertinentes.

7.2. Freqncias como probabilidade e razo de verossimilhana

Vistas as formas de estudo das freqncias dos gentipos e perfis na

populao,

passemos

abordagem

da

interpretao

destas

freqncias

como

probabilidades e razes de verossimilhana e de questes estatsticas. Ao tratar deste

tpico, o relatrio do NRC de 1996 salienta que dois aspectos importantes com relao
variabilidade devem ser considerados na avaliao estatstica do DNA como prova. Um
deles o problema da subpopulao e o outro est associado s caractersticas de um banco
de dados, como seu tamanho e representatividade adequada da populao que poderiam
implicar variaes das inferncias baseadas nos valores dele derivados.

86

Segundo Jobim; Jobim; Brenner (1999), para composio de um banco de

dados, pelo menos 100 indivduos no relacionados so necessrios para gerar freqncias
allicas de um determinado grupo. A freqncia de um alelo dentro das amostras em uma
populao randmica determinada em porcentagem, pela contagem observada do nmero
de vezes que o alelo aparece na populao. Para ilustrar a composio de um banco de
dados, reproduzimos no ANEXO 3 um estudo realizado por Figueiredo et al. (2004) sobre
as freqncias allicas observadas para 15 loci STR do sistema PowerPlex 16 para 100
caucasianos da populao brasileira.

Supondo que uma amostra de DNA retirada de um vestgio encontrado na

cena do crime e outra de um suspeito sejam comparadas e os perfis combinarem em todos
os loci estudados, pode-se inferir que o suspeito a fonte de DNA ou outra pessoa a seja.
Para se avaliar a probabilidade de que este perfil no pertena ao suspeito, deve-se calcular
a freqncia do perfil na populao. Esta freqncia chamada de probabilidade de
combinao aleatria e a estimativa da probabilidade de que uma pessoa que no a do
suspeito, escolhida ao acaso na populao, tenha este perfil. Quanto menor for esta
probabilidade, maior ser a verossimilhana de que duas amostras de DNA sejam oriundas
da mesma pessoa (EVETT; WEIR, 1996).

De acordo com o relatrio do NRC de 1996, uma alternativa seria calcular a

razo de verossimilhana (LR) (likelihood ratio) que uma medida de fora da prova,
considerando a hiptese que os dois perfis tiveram a mesma origem. A LR a recproca da
probabilidade de uma combinao aleatria que pode ser assim expressa: LR = 1/P(x). A
razo de verossimilhana uma forma de resumir a prova do DNA. Se a LR for 10.000, a
probabilidade de que os perfis sejam os mesmos ser 10.000 vezes maior se as amostras
vierem da mesma pessoa do que se elas tivessem vindo de pessoas diferentes.

Um grande problema que os analistas forenses enfrentam o de avaliar a

verossimilhana em casos onde exista mistura de materiais, algumas vezes encontrada em
casos criminais envolvendo vestgios de sangue e smen. Uma mistura apresenta um perfil
procedente de mais de um indivduo evidenciada, na maioria dos loci investigados, pela
presena de mais de duas bandas ou picos. Alm disto, freqentemente as diferentes
bandas que aparecem para o mesmo marcador gentico costumam estar desbalanceadas
com picos de intensidade maior que os outros.

87

Gill, Sparkes; Buckleton, (1998) e Clayton et al. (1998) descreveram os

passos para identificao de uma mistura. O primeiro deles a determinao dos alelos
sem ambigidade, eliminado os componentes que esto abaixo do rudo de fundo, tais
como artefatos especficos (sttuters) e inespecficos, resultantes da amplificao de DNA
no humano ou os resultantes do software utilizado para deteco; contaminao extra ou
intralaboratorial; supresso ou promoo da eficincia da amplificao e bandas mltiplas
decorrentes de anomalias genticas como mutaes somticas, translocaes ou trissomias.
O segundo passo a designao dos picos allicos por comparao escada allica. O
terceiro passo a identificao do nmero de possveis contribuintes. O nmero mximo
de alelos para qualquer lcus para uma mistura com material de duas pessoas quatro,
levando-se em conta que nenhum fenmeno gentico ocorra. Misturas mais complexas so
de ocorrncia relativamente rara. O quarto passo o de estimar a proporo relativa, ou
seja, a razo das contribuies individuais para a mistura pela comparao com as
amostras-referncia. O quinto e ltimo passo o de considerao de todas as possveis
combinaes genotpicas, valorando os resultados atravs de clculos estatsticos.

O parmetro estatstico na anlise de misturas a razo de verossimilhana.

Para sua estimativa, sempre se supe que exista independncia dos loci (EL), que os
marcadores estejam em equilbrio de HW e que no exista relao de parentesco gentico
entre os indivduos da mistura.

Nas misturas de materiais de dois indivduos somente trs LRs diferentes

so possveis. A primeira delas, usualmente empregada em crimes sexuais, leva em conta
duas hipteses mutuamente excludentes. A amostra uma mistura da vtima e do suspeito
ou a amostra uma mistura da vtima e de uma pessoa desconhecida. Aqui a LR ser:

LR(1)

vtima suspeito
vtima desconheci do

A segunda LR, empregada quando no se tem certeza da existncia de

material da vtima na mistura, leva em conta duas hipteses mutuamente excludentes. A
amostra uma mistura da vtima e do suspeito ou a amostra uma mistura de duas pessoas
desconhecidas:

88

LR(2)

vtima suspeito
dois.desconheci dos

A terceira LR empregada quando na mistura se detecta um perfil que no

compatvel com nenhuma das amostras-referncia analisadas. Aqui as duas amostras
mutuamente excludentes so: a amostra uma mistura do suspeito e de um desconhecido
ou a amostra mistura de dois desconhecidos:

LR(3)

suspeito desconheci do
dois.desconheci dos

As frmulas empregadas para os clculos destas LRs esto contidas na

tabela abaixo inserida.
TABELA 4 Alguns dos clculos para as LRs possveis dependendo do nmero de alelos detectados na
mistura (PEREIRA; MALAGHINI, 2004).

alelos da
mistura
3 abc
V=a
S = bc
3 abc
V = ab
S=c
2 ab
V = ab
S = ab
2 ab
V=b
S = ab

LR(1)

LR(2)

LR(3)

vtima suspeito
vtima desconheci do

vtima suspeito
dois.desconheci dos

suspeito desconheci do
dois.desconheci dos

1/P1[c/abc]
1/pc(pc+2pb+2pa)

1/P2[abc/abc]
1/12papbpc(pa+pb+pc)

1/P1[bc/abc]
1/2pbpc

1/P2[abc/abc]
1/12papbpc(pa+pb+pc)

1/P1[ _/ab]
1/(pa+pb)2

1/P2[ab/ab]
1/2papb(2pa2+3papb+2pb2)

1/P1[a/ab]
1/pa(pa+2pb)

1/P2[ab/ab]
1/2papb(2pa2+3papb+2pb2)

P1[ab/abc]/p2[abc/abc]
2papb/12papbpc(pa+pb+pc)
1/6pc(pa+pb+pc)
P1[a/abc]/p2[abc/abc]
Pa(pa+2pb+2pc)/
12papbpc(pa+pb+pc)
1/P1[ _/ab]/p2[ab/ab]
(pa+pb)2/
2papb(2pa2+3papb+2pb2)
1/P1[ _/ab]/p2[ab/ab]
(pa+pb)2/
2papb(2pa2+3papb+2pb2)

Apesar do alto poder discriminatrio oferecido pela anlise das STRs, a

interpretao dos resultados em juzo pode gerar controvrsias. Um conhecido exemplo
disto o sofisma do promotor (JOBIM; JOBIM; BRENNER, 1999; JOBLING; GILL,
2004; THOMPSON; SCHUMANN, 1987), baseado em um crime cometido em uma
cidade com sete milhes de habitantes e com um vestgio pautado em DNA indicando
combinao de perfis com LR de 1 em um milho. Dada a combinao entre o perfil
gentico do acusado com o do vestgio, o promotor alega qua as chances (odds) so de um

89

milho a 1 a favor de o acusado ser condenado. Porm, devido o tamanho da populao,

espera-se que 7 pessoas tambm tenham o perfil coincidente com a amostra analisada,
podendo ser argido pela defesa que as chances so 7 a 1 em favor da inocncia. Contudo,
esta falcia da defesa erroneamente assume que cada uma das 7 pessoas tem a mesma
probabilidade de condenao, o que no verdade pois a prova de DNA no utilizada
isoladamente.

Este problema de lgica pode ser resolvido enfocando-se a razo de

verossimilhana atravs de probabilidades condicionais baseadas nas teses da acusao e
da defesa. O trabalho do juzo baseado na avaliao de provas pautadas no apenas pelo
DNA, isto , firmando-se em todas as evidncias, decisivo para o veredicto de culpa ou
inocncia. Sob um cenrio com diferentes variveis, sistemas bayesianos, como grficos
que podem mostrar hipteses considerando relaes probabilsticas entre as variveis, so
uma poderosa ajuda para compreenso dos resultados sem, contudo, suplantar o papel do
jri (JOBLING e GILL, 2004).

7.3. Investigao de paternidade e identificao de cadveres

Neste campo, costumeiramente tambm se faz uso de bancos de dados

adequados s raas das pessoas envolvidas. Nos testes de paternidade, caso o suposto pai
no tenha sido excludo, clculos estatsticos devem determinar a fora da hiptese de ser o
pai biolgico da criana. Para tanto, so calculados o ndice de paternidade (IP), o ndice
de paternidade cumulativo (IPC), a probabilidade de paternidade (PP) e a probabilidade de
excluso (PE).

Para se ter um mtodo uniforme de realizao destes clculos, a Associao

Americana de Bancos de Sangue AABB e o Escritrio Federal de Suporte Criana
Violentada se reuniram com especialistas em paternidade do mundo em Arlie, Virginia, em
1982. Os resultados desta conferncia comearam a ser aceitos inicialmente como mtodo
padro nos Estados Unidos e posteriormente no mundo todo (HUBBELL, DRACKER;
DAVEY, 1998).

90

O IP resume a informao fornecida pelo exame feito. uma razo de

verossimilhana, qual seja, a probabilidade de combinao do perfil me-filho-pai, se o
suposto pai for o verdadeiro, dividido pela probabilidade desta combinao, se um homem
aleatoriamente escolhido for o pai. Para seu clculo, leva-se em conta que, em uma
populao em equilbrio de HW, a probabilidade de que um homem qualquer transmita um
alelo especfico para a criana em questo igual freqncia deste alelo na populao. O
IP de cada um dos loci dos sistemas mltiplos utilizados na avaliao deve ser calculado e
o produto dos IPs estudados (regra do produto) o IPC.

O IPC d a idia da fora da prova de DNA, indicando se est mais de

acordo com a hiptese de que o suposto pai seja o pai biolgico da criana ou com a
hiptese de que qualquer outro homem o seja.

A PP indica o quantum de credibilidade se pode atribuir hiptese de que o

suposto pai o pai biolgico da criana. Ela baseada no teorema de Bayes, utilizado para
o clculo da probabilidade a posteriori e pautada nos perfis allicos encontrados para a
me, a criana e para o suposto pai. No clculo da PP, assume-se uma probabilidade a
priori, baseada em evidncia no gentica como o testemunho da me, de que o homem
testado seja o pai biolgico da criana. A PP pode ser calculada pela seguinte frmula:

PP

IPC P
IPC P 1 P

onde P a probabilidade a priori que normalmente tomada como sendo 0,5.

A PE a probabilidade de se excluir como pai biolgico da criana um

homem qualquer da populao, baseando-se na informao dos alelos da me e da criana
testadas para seu clculo. A PE refere-se freqncia de todos os homens na populao
que no possuem os alelos que coincidam com o alelo paterno obrigatrio. As frmulas do
teorema de Bayes empregadas para os clculos da PP e da PE esto contidas no ANEXO 4.

Alm da situao envolvendo o trio: me-criana-suposto pai, os testes de

paternidade podem tambm ser realizados na ausncia da me, ou por reconstruo do
perfil gentico do suposto pai falecido atravs de familiares deste, ou ainda ter

91

desdobramentos em questes como, por exemplo, aquelas que envolvam clculos para
determinao de inconsistncias (mutaes) e de ndice avuncular27.

Nos casos de identificao de cadveres pelo DNA nem sempre as amostras

recebidas para anlise completam um trio. No Instituto de Criminalstica de So Paulo
comum o recebimento de amostra-referncia apenas da suposta me ou do suposto pai do
cadver. Nestes casos, devem ser aplicadas as frmulas do teorema de Bayes (ANEXO 4)
prprias para a ausncia de um dos pais. Contudo, quando se encontram presentes amostras
da suposta me e do suposto pai, deve-se proceder ao clculo do ndice de parentesco
reverso (IPR), uma vez que, diferentemente dos corriqueiros casos de investigao de
paternidade, existe dvida tambm sobre a maternidade. As frmulas para este clculo
esto contidas no ANEXO 5.

8. Elaborao de laudo pericial ou relatrio de anlises

De acordo com o disposto no art. 145, caput28 do Cdigo de Processo Civil
brasileiro, laudo o documento apresentado por escrito onde se expe a atividade
desenvolvida pelo perito, geralmente no mbito de um processo, como auxiliar da
administrao da justia, de que se deve socorrer o juiz na instruo da causa em prol da
formao de seu convencimento, quando a prova de fato depender do conhecimento
tcnico ou cientfico. O perito apresentar o resultado dos exames, pesquisas, investigaes
e diligncias que realizar em um instrumento que tem o nomem juris de laudo pericial.

No foro criminal, laudo pericial a pea de instruo que deve conter em

seu cerne os esclarecimentos necessrios que permitam fornecer ao promotor de justia e
ao juiz que preside o feito, condies, qualitativa e quantitativamente, suficientes para que
possa o primeiro tipificar o fato como infrao penal ou conter argumentos consistentes
que comprovem a inexistncia do delito ou contraveno penal e ao juiz oferecer

27

Para detalhes sobre estes testes, pode ser consultada a didtica apostila do Workshop Anlises Estatsticas
para Identificao Humana (PEREIRA; MALAGHINI, 2004), realizado no III Encontro de DNA
Forense, ocorrido em 19 e 20 de outubro de 2004, em Belo Horizonte/MG, promovido pela Dialab
Diagnsticos.
28
Art. 145, caput do CPC Quando a prova do fato depender do conhecimento tcnico ou cientfico, o juiz
ser assistido por perito, segundo o disposto no art. 421.

92

elementos materiais seguros que lhe permitam formar a convico sobre um determinado
evento.

Do ponto de vista de Zarzuela, Matunaga e Thomaz, (2000), laudo pericial

consiste na exposio minuciosa, circunstanciada, fundamentada e ordenada das
apreciaes e interpretaes realizadas pelos peritos, com a pormenorizada enumerao e
caracterizao dos elementos materiais encontrados no local do fato, no instrumento do
crime, na pea de exame e na pessoa fsica, viva ou morta. A percia uma modalidade de
prova destinada a levar ao juiz elementos instrutrios de ordem tcnica, podendo consistir
em uma declarao de cincia, na afirmao de um juzo ou em ambas as operaes
simultaneamente. Apresenta a percia e, conseqentemente, sua materializao
instrumental, isto , o laudo pericial, a peculiaridade de ser uma funo estatal destinada a
fornecer dados instrutrios e formao do corpo de delito. Assim, o exame pericial,
realizado na fase preparatria do inqurito policial, no constitui simples pea de
investigao, apesar de se prestar para integrar a informatio delicti. Quando realizado, em
qualquer fase do processo criminal, o exame pericial representa sempre ato instrutrio
emanado do rgo auxiliar da justia, a fim de procurar a verdade, e sua fora probatria
deriva da capacidade tcnica de quem elabora o laudo pericial.

Ser atravs do laudo que ficaro evidentes ou no todos os cuidados

empreendidos na realizao da percia desde a preservao do local do crime (arts. 6, I 29 e
169 nico30 do Cdigo de Processo Penal); a manuteno da cadeia de custdia dos
vestgios examinados; a metodologia cientfica empregada na realizao da percia; a
eventual guarda de material destinado eventual nova percia, por fora do art. 170

31

do

Cdigo de Processo Penal; a preciso nas respostas aos quesitos, caso existam; at o
oferecimento de suas concluses, transcritas de forma cristalina e didtica, de forma que
levem luz s informaes tcnicas buscadas no processo.

29

30

31

Art. 6, I do CPP Logo que tiver conhecimento da prtica da infrao penal, a autoridade policial
dever: I - dirigir-se ao local, providenciando para que no se alterem o estado e conservao das coisas,
at a chegada dos peritos criminais.
Art. 169, nico do CPP Os peritos registraro, no laudo, as alteraes do estado das coisas e
discutiro, no relatrio, as conseqncias dessas alteraes na dinmica dos fatos.
Art. 170 do CPP Nas percias de laboratrio, os peritos guardaro material suficiente para a
eventualidade de nova percia. Sempre que conveniente, os laudos sero ilustrados com provas
fotogrficas, ou microfotogrficas, desenhos ou esquemas.

93

Os dispositivos legais contidos nos arts. 159, caput32, 160 33 e 179, nico34
do Cdigo de Processo Penal regulam, respectivamente, o nmero mnimo de peritos que
elaboraro a percia e que, conseqentemente, sero signatrios do laudo; o prazo de
elaborao do laudo pericial e certo formalismo em sua apresentao, sem, contudo,
regular um modelo para sua elaborao.

Para darmos incio abordagem das peculiaridades na elaborao de laudos

periciais envolvendo exames de DNA, faz-se mister observar o significado das palavras de
Weedn; Swarnen (1998, p.1435):

Nunca antes uma nova prova cientfica recebeu desafios legais intensos e to
altamente debatidos. A evidncia do DNA to poderosa que a defesa tem
pouco a escolher a no ser atacar as provas com vigor substancial.

Destas palavras devemos pressupor, para que o poder das provas pautadas
em anlises de DNA no se esmaea no exerccio do contraditrio pela formulao direta
ou indireta de quesitos sobre a anlise realizada, que devem os analistas se cercar de
cuidados tcnicos na realizao da anlise e, principalmente, na confeco do laudo
pericial, pois ser atravs desta pea que transparecer todo o esforo por eles empreendido
na elaborao da prova.

Os laboratrios de anlise forense de DNA devem estabelecer

procedimentos e indicaes para certificar que os resultados apresentados aos tribunais
sejam vlidos e exatos em todas as instncias. O laboratrio deve assegurar a custdia das
alquotas das amostras, garantir que os testes sejam realizados de maneira adequada, com
reagentes apropriados, por indivduos qualificados e que os resultados sejam interpretados
por indivduos experientes.

32

33

34

Art. 159, caput do CPP Os exames de corpo de delito e as outras percias sero feitos por dois peritos
oficiais.
Art. 160 do CPP Os peritos elaboraro o laudo pericial, onde descrevero minuciosamente o que
examinarem, e respondero aos quesitos formulados. Pargrafo nico. O laudo pericial ser elaborado no
prazo mximo de 10 (dez) dias, podendo este prazo ser prorrogado, em casos excepcionais, a requerimento
dos peritos.
Art. 179, nico do CPP No caso do art. 160, pargrafo nico, o laudo, que poder ser datilografado,
ser subscrito e rubricado em suas folhas por todos os peritos.

94

Todas as etapas empreendidas para o estudo do DNA, desde a coleta e

anlise at a destinao final dos materiais, sero consubstanciadas no laudo pericial que
servir aos interesses de seus leitores.

Como subespcie de laudo, um relatrio de anlises de DNA poder

fornecer subsdios para auxiliar, por exemplo, na concluso do laudo do perito criminal
que o solicitou. Ou, ento, subsidiar informaes importantes a um mdico legista
responsvel pela identificao de um cadver em decomposio. Contudo, sua elaborao
dever tambm seguir a mesma estrutura utilizada para confeco de um laudo pericial.

Um laudo de anlise de DNA poder auxiliar diretamente a autoridade

policial no esclarecimento de pontos nebulosos de um inqurito policial. Em instncia
final, poder ainda servir, em sua precpua funo, como elemento de convico para
juzes, promotores e advogados nas aes penais.

Os laudos periciais, bem como os relatrios de anlises, no esto imunes de

serem submetidos apreciao de pareceristas, especialistas nas matrias tratadas nos
laudos, e que so contratados pelas partes para avali-los. Ainda que a percia tenha sido
meticulosamente realizada, se o laudo pericial no tiver sido elaborado que forma a
expressar todos os cuidados empreendidos, de modo a consubstanci-lo em um trabalho
verdadeiramente cientfico, sucumbir fatalmente s crticas de seu avaliador, podendo
perder sua credibilidade e acarretar conseqncias danosas aos peritos que o subscreveram.

O ataque contundente s provas de DNA ocorrer se no forem seguidas na

anlise e na elaborao do laudo as recomendaes sugeridas por entidades nacionais e
internacionais, organismos controladores de qualidade e de fomento pesquisa,
responsveis indiretas pelo controle de qualidade das anlises forenses de DNA.

Para iniciar uma abordagem mais direta sobre a forma de elaborao do

laudo pericial da anlise de DNA, vamos comentar um artigo publicado na coluna
Tendncias e Debates do jornal Folha de So Paulo, em junho de 2001, pelo mdico
geneticista forense Luiz Fernando Jobim (2001), onde foram por ele tecidas amargas
crticas a alguns exames de DNA, para em seguida apresentar um prottipo das principais
recomendaes neste mister.

95

As principais crticas apresentadas por Jobim como parecerista sobre laudos

periciais dizem respeito ao no cumprimento de normas que tm por base os padres
internacionais na prtica forense. Ele assevera inexistncia de valor cientfico de um dos
laudos porque nele o perito no comprovou experincia em gentica forense; extraiu DNA
sem equipamento adequado; no apresentou a identificao dos alelos por nomenclatura
internacional; utilizou reagentes feitos in house, ou seja, no validados; no utilizou
equipamentos adequados como seqenciador automtico para deteco dos fragmentos de
DNA; no apresentou imagens dos perfis de DNA obtidos; e por no realizar testes
externos de qualidade.

Ainda no mesmo artigo, fez crticas a outros casos, sendo que em um deles
houve troca de materiais, redundando na priso de um inocente, o que certamente acarretou
ao contra o Estado para a indenizao do prejudicado e apurao de responsabilidades.
Teceu tambm comentrios sobre

a aceitao de incumbncias sem a existncia de

equipamentos necessrios para a anlise, gerando laudos inconclusivos que so facilmente

debelveis por novas anlises.

Os motivos alegados por Jobim para explicar a baixa qualidade dos testes
relacionam-se com o no preenchimento pelo responsvel pelo laboratrio dos critrios
internacionais de qualidade, faltando-lhe treinamento de no mnimo de trs anos em
laboratrio de gentica forense; com a falta de competncia prvia na formao de
laboratrios pelos governos e universidades, sem submisso a controle externo de
qualidade e utilizao de alunos como mo-de-obra; e pelo fato do Poder Judicirio ainda
no ter capacidade de avaliar exames de DNA.

Segundo Jobim, o que falta para melhorar toda esta situao um rigoroso
controle externo de qualidade com treinamento do responsvel tcnico em instituio ou
laboratrio

credenciado;

comprovao

da

utilizao

de

reagentes

validados

internacionalmente; utilizao de equipamentos apropriados; e cuidadoso registro de

amostras esclarecendo quem as entregou, recebeu e as manipulou durante o exame, e qual
o destino final destas amostras.

Em relao observao feita por Jobim quanto utilizao de reagentes

elaborados in house, temos a esclarecer que o autor se refere ao uso de primers

96

desenhados para a reao de PCR, prtica muito comum em laboratrios universitrios

mas reprovvel para anlises forenses. Devido falta de fiscalizao do controle de
qualidade dos laboratrios forenses e ao baixo custo destes reagentes, tem sido comum o
seu uso por pequenos e at por grandes e afamados laboratrios no Brasil, em detrimento
do uso kits comerciais. Quando estes primers no so validados, os perfis allicos obtidos
por seu intermdio no correspondem realidade, sendo, portanto, impassveis de
reprodutibilidade, alm de eivar de erros todos os passos analticos deles subseqentes, o
que leva a desastrosos resultados tcnicos que podem, conseqentemente, conduzir a erros
judiciais.

O exame forense de DNA um exerccio tcnico de grande complexidade.

Os procedimentos para a anlise de DNA envolvem vrias etapas e, dentre as mnimas
recomendaes para a elaborao de um laudo pericial desta anlise com efetiva validade
em nosso sistema judicirio, devem fazer parte de seu contedo: a perfeita identificao do
nmero do inqurito policial ou processo; identificao das partes; informao, quando
possvel, da etnia (raa) dos envolvidos; citao da metodologia empregada na coleta e
armazenamento de materiais e, se necessrio, maiores esclarecimentos sobre os cuidados
empreendidos para manuteno da cadeia de custdia destes materiais.

Deve ainda o laudo conter informaes bibliogrficas sobre as metodologias

utilizadas para a extrao, quantificao e amplificao do DNA; forma de leitura dos
alelos obtidos nos testes; frmulas empregadas para os clculos estatsticos. Se possvel,
devem ser includas fotografias dos testes realizados. Deve ser utilizada a nomenclatura
oficial na identificao dos alelos, como tambm a incluso de suas freqncias.

Como anteriormente fizemos notar, o Cdigo de Processo Penal impe um

certo formalismo na apresentao do laudo pericial, sem, contudo, regular um modelo para
sua elaborao. Por outro lado, em respeito s recomendaes existentes e s
caractersticas especficas dos exames de DNA, a elaborao do laudo pericial vem sendo
consagrada como no prottipo (BONACCORSO, 2001) que passamos a discutir.

Normalmente constam da capa do laudo as seguintes informaes:

a. indicao do distrito policial ou do juzo requisitante;

97

b. nmero do boletim de ocorrncia, do inqurito policial ou do

processo;

c. nmero do laudo que est sendo elaborado;

d. indicao da natureza do exame;

e. identificao das partes, fazendo constar nomes da vtima, suspeito,

indiciado ou ru e de supostos familiares quando for o caso de
identificao de cadver;

f. nome da autoridade requisitante e dos peritos relatores;

g. meno se o laudo elaborado est acompanhado ou no de peas e,

caso partes destas estejam sendo devolvidas, deve tambm ser
consignado o nmero do lacre de sua embalagem.

Com relao ao prembulo, este deve conter:

a. data da designao da percia;

b. nome do diretor responsvel pela designao;

c. nomes dos peritos designados para a percia;

d. meno natureza do exame a ser realizado;

e. nome da autoridade requisitante.

As informaes preliminares devem ser constitudas de um pequeno texto

explicativo e genrico sobre os possveis alcances e limitaes dos testes de DNA. De
acordo com a natureza do exame realizado, tal texto deve tambm esclarecer
especificamente as caractersticas (alcances e limitaes) da tcnica empregada para
anlises de materiais biolgicos voltados a crimes sexo-relacionados, identificao de

98

cadveres, confronto entre vestgios encontrados em local de crime e material referncia ou

determinao de paternidade.

No item objetivo da percia, deve ser indicada de forma sucinta que se

busca a comparao entre a amostra questionada e a amostra referncia, atravs de seus
perfis genticos, na tentativa de se estabelecer se entre elas existe (ou no) um vnculo
gentico.

No tpico dos exames, no tocante aos materiais, deve ser indicado

pormenorizadamente cada material biolgico enviado, referente a cada uma das partes,
citando:

a. todos os cuidados empreendidos na cadeia de custdia;

b.

o nmero do termo de coleta de material biolgico, contendo a etnia

(raa) do doador;

c. relatrio de coleta do vestgio, quando for o caso;

d. identificao e descrio das amostras;

e. nmero do lacre de cada material recebido;

f.

o estado de conservao dos materiais, e, se for o caso, inserir fotos

dos mesmos;

g. notaes sobre a existncia de registro de controle da cadeia de

custdia interna das amostras analisadas.

Ainda neste tpico, no que se refere aos mtodos, devem ser indicadas as
metodologias empregadas, com as respectivas referncias bibliogrficas das seguintes
etapas do exame:

99

a. extrao de DNA, indicando as diferentes metodologias empregadas

de acordo com o tipo de material biolgico analisado;

b. quantificao de DNA, indicando a metodologia e a aparelhagem

utilizadas;

c. amplificao das regies polimrficas de DNA, citando os reagentes

empregados, seus fabricantes e data de validade; o tipo de
termociclador utilizado e o programa empregado na amplificao;

d. deteco

dos

alelos

dos

loci

amplificados,

explicando

resumidamente o ensaio eletrofortico empregado e a forma aplicada

para evidenciar alelos, citando o equipamento utilizado para leitura
dos perfis genticos.

Em relao aos resultados obtidos e sua interpretao, deve ser indicada

sucintamente a obteno de xito ou no para cada uma das etapas. Deve se dar destaque
aos resultados finais estabelecidos para cada uma das amostras em cada marcador
molecular examinado e, se possvel, anexar imagens dos perfis obtidos. Nos casos em que
no se alcance xito em todas as etapas ou xito parcial, deve-se destacar o resultado final
alcanado e serem justificadas as razes ou possveis razes que no levaram a termo a
anlise.

Nos casos em que se alcana xito, nas hipteses de incluso, devem ser
indicadas as freqncias dos alelos obtidos, os clculos estatsticos empregados e o banco
de dados utilizado. Se for caso de excluso, devem ser destacados o embasamento para este
resultado e a informao que anlise foi repetida por equipes independentes do laboratrio.

No item das concluses, deve ser resumidamente repetido o resultado final

obtido, j exposto e discutido na interpretao, relacionando-o com o objetivo da percia e,
se for o caso, dar respostas aos quesitos formulados. Em casos de incluso, o resultado
deve ser sempre exposto em termos probabilsticos ou em razo de verossimilhana.

100

Nos casos de identificao de pessoas atravs de restos mortais, o cadver

no dever ser identificado nominalmente pelo analista de DNA, pois sua anlise limita-se
to somente determinao do vnculo gentico familiar existente entre as amostras,
implicando cabalmente seu carter subsidirio. Geralmente, o analista no possui
elementos informativos suficientes que possam levar a uma identificao nominal
inquestionvel, devendo, portanto, esta concluso ficar a cargo de legistas ou de outras
pessoas que tenham disposio elementos corroborantes como dados antropolgicos e
circunstanciais sobre o cadver examinado, e informaes sobre a ocorrncia de pessoas de
mesmo gnero na linhagem familiar do cadver que pudessem tambm levar mesma
concluso.

O fecho do laudo pericial deve conter:

a. informao do nmero de pginas e, se for o caso, de anexos

(planilha de clculos estatsticos, imagens dos perfis allicos) que o
laudo contenha;

b. citao, se for o caso, que o restante dos materiais no perecveis,

depois da retirada de amostra para eventual nova percia, segue
lacrado e anexado ao laudo, consignando-se tambm o nmero do
lacre;

c. indicao, se for o caso, que o restante ou parte dos materiais

biolgicos perecveis permanece no laboratrio para eventual nova
percia;

d. indicao do responsvel tcnico do laboratrio e sua titulao, bem

como a notao da habilitao para trabalhos com marcadores
genticos moleculares de cada perito subscritor, emitida por
conselho profissional competente.

No ANEXO 6 deste trabalho est contido um exemplo de laudo pericial

emitido por peritos criminais do Laboratrio de DNA do Instituto de Criminalstica de So
Paulo.

101

9. Controle de qualidade

A garantia de padres de excelncia na tipagem do DNA depende da

padronizao das prticas e dos mtodos aceitos para garantir sua qualidade. Cada mtodo
de anlise possui suas vantagens e desvantagens, implicando diferentes graus de
confiabilidade, aplicabilidade e poder discriminatrio (EVETT et al., 1989).

As prticas na tipagem do DNA variam, assim como a experincia dos

tcnicos que realizam as anlises. Aliada a isto, ainda temos a pertinente observao feita
no relatrio NRC de 1992 reconhecendo que, nos laboratrios forenses em geral, a
padronizao da prtica mais problemtica que em outros tipos de laboratrio, pois
analistas exercem pouco ou nenhum controle sobre a natureza, condio, forma ou
quantidade da amostra com que devem trabalhar.

Tendo em vista que os mtodos analticos de DNA se constituem em um

auxiliar extremamente poderoso da cincia forense para a identificao de pessoas e
elucidao de crimes e de grande benefcio para a justia, a padronizao dos
procedimentos laboratoriais se faz necessria para garantir resultados de alta qualidade.

Em princpio, a possibilidade de existncia de resultados falso-positivos na

tipagem de DNA praticamente nula, de forma que os riscos de erro so decorrentes de
prticas laboratoriais ou manipulao precria das amostras, fazendo-se mister que os
laboratrios tenham competncia para garantir que os resultados dos testes sejam
confiveis, reprodutveis e corretos (NRC, 1992).

Para que os padres laboratoriais sejam altamente mantidos, devem existir

rgidos e idneos controles de qualidade (CQ) e de garantia de qualidade (GQ). Em matria
de tipagem de DNA, o CQ diz respeito tomada de medidas assecuratrias no sentido que
os resultados da tipagem satisfaam a padres especficos de qualidade. A GQ
concernente ao monitoramento e documentao do desempenho laboratorial atravs de
testes de qualidade e auditorias regulares, funcionando como uma aferio do CQ do
laboratrio.

102

O relatrio NRC de 1992 props um programa de regulamentao de

tipagem de DNA e indicou alguns componentes de CQ e GQ. So eles:

a. cada analista deve ter instruo, treinamento e experincia

compatveis com a anlise que realiza e o testemunho que oferece;

b. os analistas devem ter ampla compreenso dos princpios, usos e

limitaes dos mtodos e procedimentos aplicados aos testes
realizados;

c. os analistas devem submeter-se, com sucesso, a testes peridicos de

qualidade, e seu equipamento e procedimentos devem satisfazer a
critrios especficos;

d. os reagentes e o equipamento devem ser adequadamente mantidos e

monitorados;

e. os procedimentos usados devem ser geralmente aceitos e apoiados

por dados publicados e revisados, cientificamente coletados e
registrados;

f. controles adequados devem ser especificados nos procedimentos e

devem ser usados;

g. novos procedimentos tcnicos devem ser amplamente testados para

demonstrar sua eficcia e confiabilidade no exame do material da
prova, antes de serem implementados no processo;

h. devem

existir

procedimentos

claramente

redigidos

bem

compreensveis para manipular e preservar a integridade da prova,

para sua segurana no laboratrio e defesa do laboratrio;

103

i. cada laboratrio deve participar de um programa externo de testes de

qualidade que periodicamente avalie a capacidade de seus analistas e
a confiabilidade de seus resultados analticos;
j. registros do caso como observaes, folhas com anotaes, autoradiografias e bancos de dados populacionais e outros dados ou
registros que apiem as concluses dos examinadores devem ser
preparados e arquivados pelo laboratrio, ficando disposio para
inspeo do tribunal, aps reviso da procedncia de uma petio.

O relatrio NRC de 1996 reafirma as diretrizes do relatrio de 1992 e ainda

discute o papel dos testes de qualidade e das auditorias, faz observaes para que erros
sejam evitados, discorre sobre a importncia da repetio de testes, fazendo
recomendaes neste sentido.

Testes de qualidade e auditorias so mecanismos-chave para avaliao do

desempenho de um laboratrio. Para testar a proficincia, exige-se que sejam testadas as
amostras apresentadas ao laboratrio da mesma forma que as amostras rotineiramente
recebidas para anlise. As auditorias so revises das operaes do laboratrio para
determinar se ele est se desempenhando de acordo com um padro definido. Estas
avaliaes podem ser conduzidas interna ou externamente, sendo que bons programas de
GQ utilizam regularmente avaliaes internas e externas.

Em testes abertos de proficincia, o analista tem conscincia de que as

amostras que esto sendo usadas em um teste de qualidade. Ele recebe um conjunto de
amostras de um caso simulado e deve determinar quais amostras tm a mesma origem.
Testes de excelncia pblicos avaliam os mtodos analticos e a interpretao dos
resultados, identificam problemas sistemticos devido a equipamentos, materiais, ambiente
do laboratrio (como contaminao) e erros de julgamento do analista. Estes testes so
conduzidos por entidades externas e uma vantagem que muitos laboratrios podem testar
o mesmo conjunto de amostras, permitindo assim comparao, entre os laboratrios, do
desempenho e da avaliao estatstica dos resultados. Na implementao de programas de
GQ, pode ainda ser realizada uma segunda modalidade de teste de excelncia. Trata-se de
um teste totalmente sigiloso, onde o analista no sabe que o teste est sendo conduzido. Tal

104

modalidade talvez fornea uma avaliao mais fidedigna da proficincia funcional.

Entretanto, podem impor custos e demanda de tempo excessivos s instituies que fazem
cumprir a lei (NRC, 1996).

Testes de qualidade na monitorao do desempenho laboratorial so

complementados por auditorias regulares, a fim de comparar o desempenho real de um
laboratrio com os regulamentos e os objetivos de qualidade que ele declara ter. As
auditorias, alm de examinar todas as fases das operaes laboratoriais relacionadas com o
desempenho, tratam de outros assuntos no cobertos pelos testes de qualidade, como
registro de controle de casos e esquemas utilizados na calibrao de equipamentos. O
objetivo dos testes de excelncia e das auditorias o de melhorar o desempenho
laboratorial atravs da identificao de problemas que precisam ser corrigidos.

Algum risco de erro sempre inerente a toda atividade humana. Existem

fontes potenciais de erro durante todo processamento de um vestgio, desde sua coleta at a
interpretao dos resultados de sua anlise, sendo preocupante a ocorrncia de erros que
possam levar a condenaes injustas.

Para que os resultados analticos sejam precisos, devem ser tomados

cuidados e ateno a detalhes, e se proceder a verificaes independentes em todas as
etapas da marcha analtica. Misturas ou identificao incorreta das amostras ou resultados
podem ocorrer em qualquer ponto em que a amostra manipulada ou dados so
registrados, podendo levar a falsos resultados. A proteo contra a manipulao incorreta
da amostra em campo, qual seja, no local do crime ou no necrotrio, inclui o treinamento
do pessoal incumbido da coleta e a apresentao preferencial ao laboratrio, quando
possvel, do vestgio como um todo ao invs de recortes ou raspagens. Erros de
manipulao dos vestgios no laboratrio podem ser minimizados determinando-se que
apenas um item seja manipulado a cada vez. Erros ou confuses como os de transferncia
de amostra para tubo incorreto35, colocao da amostra a ser testada em faixa ou clula
incorreta do gel de eletroforese ou falha no registro de dados podem ser mitigadas pelo
35

O Laboratrio de DNA do Instituto de Criminalstica de So Paulo faz uso de uma ficha de controle
interno de procedimentos para a superviso da passagem das amostras de DNA para novos tubos durante a
marcha analtica das diferentes etapas do exame (ANEXO 7). Os tubos contendo DNA so numerados,
devendo esta mesma numerao ser seguida nos novos tubos receptores. Cada transferncia efetuada pelo
auxiliar tcnico acompanhada e conferida, minimizando assim a possibilidade de troca de amostras.

105

rigoroso cumprimento de procedimentos definidos para lidar com as amostras e registrar

dados, conforme j discutimos anteriormente quando abordamos os procedimentos que
consubstanciam a chamada cadeia de custdia que tambm constituem aspectos relevantes
no estabelecimento da poltica de qualidade de um laboratrio forense.

Testes mltiplos em uma mesma amostra podem servir para testar a

compatibilidade ou incompatibilidade de resultados. Testar o gnero (com amelogenina)
em casos que envolvam homens e mulheres pode tambm servir para verificao de
compatibilidade.

Ainda que o analista no observe um resultado incompatvel, um revisor

independente pode detectar falhas de raciocnio analtico e de interpretao, sendo, por
isso, comum e recomendvel uma segunda leitura independente nos laboratrios
forenses36.

A guarda de pores da amostra original, bem como de pores dela em

diferentes estgios dos testes, talvez seja uma proteo definitiva contra os erros de
manipulao ou registro pois oferece a oportunidade de que novos testes sejam realizados e
que qualquer dvida alegada possa ser dirimida.

Problemas com reagentes, equipamentos, controles ou tcnicas podem levar

a testes deficientes e obteno de resultados ambguos. A proteo contra estes
problemas passa pela obedincia de um programa de CQ com monitorao de reagentes e
equipamentos. O uso de padres e de controles positivos e negativos deve ser rotineiro,
servindo para identificao de erros, modificaes nos procedimentos analticos, variao
ou deteriorao de reagentes e equipamentos.

Os relatrios NRC de 1996 e de 1992 do grande ateno ao problema da

contaminao dos vestgios com material humano nos testes forenses de DNA e indicam a
existncia de trs tipos de contaminao.

36

Neste sentido foi instituda no Laboratrio de DNA do Instituto de Criminalstica de So Paulo uma ficha
geral de acompanhamento das anlises (ANEXO 8), com o intuito de favorecer o trabalho do revisor
independente.

106

A primeira delas classificada como contaminao inadvertida que pode

ocorrer durante o manuseio da amostras seja pelo seu coletor ou por pessoas que pertenam
ou no ao laboratrio. As conseqncias deste tipo de contaminao so que as amostras
podem parecer misturas de materiais de vrias pessoas e, na pior das hipteses, que
somente a substncia contaminante possa ser detectada ou se o prprio contaminante viesse
do suspeito. A melhor proteo contra este tipo de contaminao estabelecer
procedimentos rigorosos de manipulao do material desde sua coleta at a chegada ao
laboratrio, bem como manter separadas as amostras questionadas e as de referncia at o
momento em que sero submetidas a eletroforese. Amostras controle ou brancos podem ser
retirados do ambiente de coleta ou de reas adjacentes de manchas de sangue e smen para
serem usados na determinao da existncia de contaminao. Pode-se tambm, como j
enfatizamos ao tratar da coleta de materiais, conhecer os perfis genticos das pessoas que
poderiam ter contribudo para a contaminao do material. Entretanto, a melhor forma para
a verificao da compatibilidade est na redundncia do teste, pois a chance de que
mltiplas amostras estejam todas contaminadas da mesma forma muito remota.

O segundo tipo de contaminao aquele onde as amostras so

contaminadas pela prpria natureza e sendo, por isso, denominadas amostras mistas, como
esfregaos vaginais ps-coito com mistura de smen e fluidos vaginais, e mistura de
sangue derramado por pessoas diferentes. Como vimos, o DNA do esperma pode ser
separado do DNA que no esperma pela extrao diferencial, o que no ocorre,
entretanto, com as amostras mistas de sangue. Nestes casos, testar amostras coletadas em
diferentes reas de uma mancha pode permitir que os tipos genticos presentes sejam mais
claramente diferenciados.

O terceiro e ltimo tipo a contaminao denominada carryover ou

contaminao por transporte do produto da PCR. Esta contaminao ocorre quando um
produto de amplificao por PCR encontra seu caminho na mistura da reao antes que o
DNA-alvo, isto , o DNA que se quer analisar, seja adicionado. O produto carryover pode
ser amplificado juntamente com o DNA-alvo e o resultado pode ser uma tipagem incorreta
da amostra. A proteo contra este tipo contaminao inclui o uso de diferentes locais de
trabalho para manipular amostras pr-PCR e ps-PCR; uso de mscaras, luvas toucas,
aventais e capas protetoras de sapatos; uso de equipamentos aferidos e manuteno de
fluxo unidirecional de material das reas de trabalho pr-PCR para ps-PCR, de modo que

107

os produtos da PCR jamais tenham contato com as amostras a serem analisadas.

Precaues com a esterilizao de instrumentos, equipamentos como pipetas, centrfugas,
vidrarias, tubos, bancadas e reagentes tambm podem servir de proteo contra este tipo de
contaminao. Proceder tipagem da amostra questionada antes da amostra referncia
tambm diminui a possibilidade de contaminao entre elas. O uso de controles-padro
brancos para a deteco de contaminao de reagentes e da rea de trabalho tambm
medida recomendvel, alm da possibilidade de se fazer testes com pores guardadas da
amostra para eliminao de dvidas sobre a contaminao. A figura abaixo inserida
esquematiza a organizao e a montagem de um laboratrio para anlise em PCR, para
evitar contaminao carryover.

Figura 9 Sugesto para organizao e montagem de laboratrio para anlise em

PCR, com separao de reas pr e ps PCR para evitar contaminao carryover
(adaptado de REBOUAS, 2004).

Outras recomendaes e sugestes para impedir a contaminao em

laboratrio que efetuam tipagem de DNA pela PCR esto contidas no ANEXO 9.

Ainda segundo o relatrio NRC de 1996, outro erro que pode ser apontado
so as distores conscientes ou inconscientes causadas pelo analista que geralmente

108

levam ao pecado de omisso ao invs de execuo. Provas com possibilidade de inocentar

podem ser ignoradas ou rejeitadas. Resultados contraditrios nos testes, ou provas de
misturas na amostra, podem no ser levados em conta. Tais distores so de relativamente
simplicidade de deteco se os resultados do teste forem criticamente revistos. Os
procedimentos laboratoriais devem ser planejados de forma a detectar distores e
identificar casos verdadeiros de ambigidade.

A possibilidade de repetio de testes talvez seja a melhor proteo que uma

pessoa erroneamente acusada tenha para no ser falsamente incriminada. Tal oportunidade
deve ser dada sempre que possvel, pois representa uma oportunidade ou talvez a nica
para sanear erros que possam ter sido cometidos no decorrer do exame. Para tanto, as
amostras recebidas para anlise devem ser divididas em duas ou mais partes e uma ou mais
delas devem ser guardadas para a possvel repetio. As amostras guardadas devem ser
colocadas separadamente das amostras analisadas e sob condies que inibam a perda por
deteriorao. Se um novo teste for necessrio, deve ser feito, de preferncia, por um
laboratrio independente, ou por pessoas diferentes.

O rpido desenvolvimento e a aceitao universal da tecnologia baseada em

DNA para identificao humana em casos forenses so em grande parte devido
colaborao ativa entre os grupos internacionais que so coordenados por vrias
instituies acadmicas e patrocinadas por diferentes governos. Recomendaes de
padronizao, edies de programas de CQ e GQ e atividades colaborativas tm sido feitas
em nvel global (JOBLING; GILL, 2004).

Dentre as entidades internacionais que coordenam grupos de gentica

forense, podemos destacar, alm do National Research Council (NRC) - Committee on
DNA Forensic Science, cujas recomendaes foram sobejamente exploradas neste
trabalho, as seguintes:

a.

International Society of Forensic Genetics (ISFG) que coordena a

DNA Commission, o grupo EDNAP European DNA Profiling e o
Paternity Testing Workshop. A proposta desta entidade a de
promover

conhecimentos

de

Gentica

Forense,

atravs

de

109

recomendaes para uso de marcadores de DNA e harmonizar as

tecnologias de DNA empregadas na Europa;

b.

European Network of Forensic Science Institute (ENFSI). Esta

entidade representa principalmente as instituies governamentais
europias. Seu trabalho o de coordenar esforos para o
desenvolvimento de um banco de dados de DNA europeu;

c.

American Academy of Forensic Science (AAFS). um corpo

acadmico formado por cientistas forenses norte-americanos e que
serve de foro para discusses sobre trabalhos com DNA;

d.

Federal Bureau of Investigation (FBI): possui o SWGDAM

Scientific Working Group DNA Analysis Methods. Este grupo norteamericano responsvel por estabelecer padres, dar treinamento e
desenvolver o banco de dados nacional de DNA;

e.

National Institute of Science and Technology (NIST). Este instituto

d suporte tcnico comunidade forense pela organizao
colaborativa de exerccios de proficincia. Possui um banco de dados
que contm as caractersticas dos marcadores de STRs e SNPs teis
para a prtica forense;

f.

Academia Iberoamericana de Criminalstica y Estudios Forenses

(AICEF) possui o Grupo Iberoamericano de Trabajo en Anlisis de
DNA (GITAD). Este grupo congrega laboratrios forenses da
comunidade ibero-americana, estabelecendo estudos de controle de
qualidade e de intercmbio de dados.

Em nvel nacional, a Sociedade Brasileira de Medicina Legal (SBML)

editou, em 1999, recomendaes para laboratrios que realizam testes de paternidade
atravs de DNA. Trata-se de uma tentativa de normatizao de adeso voluntria. Formouse tambm, mesma poca, um Comit Tcnico Especializado de Biologia Molecular

110

(CTLE 04) do Inmetro Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade

Industrial, para o estudo de parmetros de sistematizao voltado para a anlise de DNA.

Programas de credenciamento voluntrio no so suficientes, pois

associaes no tm autoridade regulamentar e os laboratrios forenses poderiam evitar o
credenciamento e mesmo assim oferecer provas pautadas na tipagem de DNA em
processos criminais.
O Projeto de Lei N 2.642/200037, de autoria do ex-Deputado Federal
Zenaldo Coutinho, previa a necessidade de capacitao e aparelhamento dos laboratrios
de anlise de DNA e a sua obrigatoriedade de participao de programa de acreditao e de
controle de qualidade. Este projeto de lei, apesar de haver tramitado por vrias mesas e
37

PROJETO DE LEI N 2642, de 2000.

Dispe sobre as condies para a realizao e anlise de exames genticos em seres humanos.
O CONGRESSO NACIONAL decreta:
Art 1 A anlise de material gentico em seres humanos, para determinao de paternidade, vnculos
biolgicos, doenas genticas e demais casos obedecem ao disposto nesta lei.
Art 2 Para realizar os exames referidos no artigo anterior, o laboratrio deve estar capacitado e aparelhado
para a prtica de gentica molecular, na forma em que dispuser o regulamento, e participar de programa de
acreditao e controle de qualidade do Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e Qualidade
Industrial (Inmetro) e da Sociedade Brasileira de Gentica, que emitiro anualmente licena para seu
funcionamento.
Art 3 A assinatura dos laudos, atestados e resultados de exames provenientes da anlise de material
gentico humano deve ser feita por profissionais graduados em quaisquer das Cincias da Vida e que
possuam ps-graduao ou mestrado em Gentica ou Biologia Molecular, do quadro de funcionrios do
respectivo laboratrio.
Art 4 A utilizao dos dados genticos com a finalidade de proceder ao aconselhamento gentico caber a
mdicos, com ps-graduao ou mestrado em gentica clinica.
Art 5 O laboratrio que descumprir os requisitos desta lei ser interditado at sua adequao s exigncias
elencadas.
Art 6 Esta lei entra em vigor na data de sua publicao.
JUSTIFICATIVA
A evoluo do conhecimento e da tcnica no campo da gentica humana tem sido espantosa, abrindo, a um
s tempo, grandes perspectivas e imensos dilemas profissionais, sociais, econmicos e ticos para a
humanidade. Exemplo eloqente dessa afirmao so as conseqncias que um simples exame de DNA
pode gerar junto famlia e ao patrimnio de um indivduo, com a confirmao ou no da alegada
paternidade. Quem procede, no Brasil, os exames genticos? Quais so os profissionais? Quais as suas
habilitaes? Quais so os laboratrios? Quais os equipamentos e aparelhos utilizados? Quem os controla
e fiscaliza? O ilustre professor Zeno Veloso, civilista renomado no Par e no Brasil, inspirou-me a buscar,
mediante legislao federal, garantias ao cidado usurio destes servios. Para nosso espanto, inmeras so
as denncias de descontrole absoluto da matria. Profissionais desqualificados, laboratrios
desaparelhados, tecnologias ultrapassadas e imprecisas. E, em contrapartida, o Judicirio e a sociedade
como um todo admitem, como verdade inquestionvel, o resultado proveniente desses exames, em razo
das informaes amplamente difundidas sobre a credibilidade desses procedimentos da cincia moderna.
No se leva em conta que nem todos - ou muitos - no dispem do conhecimento e equipamentos que
possam produzir esta verdade. Desse modo, estamos oferecendo proposio no sentido de disciplinar
critrios para os laboratrios e para os profissionais que atuam nessa rea, estabelecendo requisitos de
acreditao e controle de qualidade para aqueles e de formao e de reconhecimento para esses. Cremos
que deste modo estaremos contribuindo para a elevao do padro de qualidade e de confiabilidade dos
procedimentos laboratoriais e dos processos judiciais decorrentes.

111

comisses da Cmara dos Deputados, foi arquivado em 31 de janeiro de 2003 por haver
findado a legislatura do Deputado.

Urge a criao de leis neste sentido, pois as justificativas apontadas pelo

Deputado Zenaldo Coutinho para a criao de seu projeto de lei, apesar de nebuloso em
relao aos laboratrios forenses criminais, so ainda atuais e verdicas. notrio que a
existncia de lei no sentido de assegurar padres elevados no desempenho laboratorial
constituir um grande avano, sem, contudo, representar o efetivo alcance de seus
propsitos, correndo o risco de se transformar em letra morta, haja vista o despreparo geral
para seu cumprimento imediato e qui posterior.

digna de louvor a iniciativa governamental brasileira que, antes de tentar

suprir qualquer lacuna legal, est promovendo um trabalho basal para preparar material e
tecnicamente os laboratrios de rgos periciais responsveis pela anlise forense de DNA
para o cumprimento dos padres de excelncia ditados pelas entidades que acima citamos.
Isto se dar com a implementao do Projeto de Implantao de Laboratrios Regionais de
DNA da Secretaria Nacional de Segurana Pblica do Ministrio da Justia (SENASP/MJ),
iniciado em 2003, que, dada a sua importncia, deve ser ressaltado.

Este projeto tem como objetivo geral a implantao de laboratrios de DNA

forense em todo o territrio nacional, dotando os Estados do RS, RJ, DF, BA, AL, PA e
AM como laboratrios regionais modelos que possibilitem a difuso de atividades de
ensino, pesquisa aplicada e formao de recursos humanos na rea pericial, para
atendimento da demanda de suas reas.

Como objetivos especficos, o projeto tem as seguintes metas:

a. definir tcnicas, metodologias e procedimentos adotados em exames

de DNA aceitos pela comunidade cientfica, que sero adotadas por
todos

os

laboratrios

regionais

nas

reas

de

pesquisa,

desenvolvimento, ensino e execuo de exames periciais;

b. definir critrios para elaborao de um banco de dados nacional de

DNA forense;

112

c. desenvolver atividades de pesquisas conjuntas entre os rgos

periciais e as universidades, nos campos de gentica humana,
gentica forense e biologia molecular;

d. possibilitar o intercmbio entre os profissionais dos institutos de

percias com o corpo docente universitrio, trazendo o implemento
de novas tecnologias na rea de DNA forense;
e. fomentar a multiplicao da cultura do DNA;

f.

promover a validao das metodologias empregadas em todos os

laboratrios.

O projeto estabelece como laboratrio mnimo aquele no qual a quantidade

de equipamentos e insumos necessrios para que opere com capacidade de realizar 900
exames (reaes) de DNA.

Em relao capacitao de pessoal, dever ser realizado curso de

especializao em gentica forense de 360 horas, com objetivo de especializar cerca de
dois peritos de cada Estado e seis da Polcia Federal. Ser ainda realizado um curso prtico
avanado de 120 horas que constar de treinamento e trabalho nos laboratrios regionais
para cerca de 90 peritos, 60 dos quais tenham freqentado o curso anterior e cerca de 30
que j possuam conhecimentos em DNA.

Ao laboratrio regional caber a realizao de pesquisas, desenvolvimento

de tecnologia, e execuo de exames de DNA criminais oriundos de sua rea de
atendimento. Atender no mximo dois peritos simultaneamente, devidamente capacitados
para realizarem os exames periciais de DNA, de cada Estado de sua regio de atendimento.
A SENASP/MJ poder deslocar peritos de outros Estados, fora da regio de atendimento,
para laboratrios regionais com condies de atendimento.

113

Os laboratrios regionais obedecero a critrios e procedimentos adequados

de coleta, cadeia de custdia e recebimento de amostras de acordo com a Resoluo
SSP/SP 194, de 02.06.99.

Os laboratrios devero possuir estrutura para recebimento, armazenamento

e custdia das amostras criminais de sua competncia.

Sero tambm as instituies responsveis pela multiplicao e fomento da

cultura do DNA no ambiente da investigao criminal.

Sero, ainda, instituies de suporte tcnico-cientfico para a criao de um

banco de dados de perfis genticos criminais, e da criao de uma massa crtica de dados
para a formao do banco de dados de DNA criminal nacional.

Para o bom andamento dos trabalhos podero ser publicadas normas locais
como resolues, instrues normativas, manuais, livros e artigos, sem prejuzo dos demais
Estados de sua rea de atendimento.

O coordenador do laboratrio regional poder:

a. negar o recebimento de amostras que no se enquadrem nas normas

estabelecidas anteriormente (coleta inadequada, cadeia de custdia
inadequada, outros);

b. fiscalizar a capacitao tcnico-cientfica dos peritos que atuaro em

seu laboratrio, de acordo com os cursos acima estabelecidos ou
com experincia comprovada;

c. organizar, de forma a maximizar, o atendimento a cada Estado de

sua rea de atendimento.

Em relao tecnologia laboratorial, para os laboratrios regionais do

Distrito Federal, Bahia e Amazonas ser aportado um laboratrio mnimo padro, que
propiciar a realizao de cerca de 900 anlises. Para os laboratrios regionais que

114

possuem equipamentos adquiridos ou estejam em funcionamento (Rio de Janeiro e Rio

Grande do Sul) sero aportados recursos para que os mesmos sejam nivelados aos demais.

Pretende-se estabelecer padronizao de procedimentos, principalmente no

que concerne gerao de perfis allicos, tendo em vista a alimentao de um banco de
dados de perfis genticos de mbito nacional, a ser desenvolvido e utilizado no futuro.

Ser preferencialmente adotada a deteco os fragmentos de DNA por meio

de fluorescncia, com a utilizao de analisadores genticos (seqenciadores) com quatro
capilares, com capacidade de ler pelo menos cinco fluorescncias diferentes. Esta definio
justifica-se pela compatibilidade desses equipamentos com os kits comerciais de
identificao humana de mais de um fabricante e pela compatibilidade com softwares de
interpretao.

Com relao genotipagem, seqenciamento e comparao de seqncias

de DNA, sero utilizadas escadas allicas certificadas, adotadas internacionalmente;
controle de qualidade peridico com trocas de amostras entre os laboratrios para
experimentos do tipo duplo cego; realizao de procedimentos para validao das tcnicas
a serem utilizadas nos laboratrios e exames de polimorfismos de fragmentos de DNA e de
seqncias.

Os sistemas (multiplex) a serem utilizados sero aqueles validados,

divulgados e utilizados pela comunidade cientfica internacional e permitiro a produo
de dados que sejam intercambiveis com as polcias internacionais.

Os laboratrios regionais disporo de um pulverizador de amostras com

nitrognio lquido, de tal forma a estarem aptos a trabalhar com amostras mais difceis
como ossos e dentes, e prestarem suporte regional aos demais Estados.

Para a manuteno das atividades dos laboratrios regionais aps a

execuo deste projeto, sero necessrios novos aportes financeiros. Estes aportes podero
ser feitos pelos Estados da rea de atendimento para seus respectivos laboratrios regionais
por meio de dotaes oramentrias especficas.

115

Podero ser estabelecidos convnios estaduais entre universidades e rgos

de percia, por meio de fundaes, para o intercmbio de equipamentos, recursos humanos
e verbas.

Tambm sero estabelecidos convnios entre a SENASP/MJ e as Secretarias

de Segurana Pblica dos Estados, com possibilidade de participao do Ministrio da
Cincia e Tecnologia e de universidades.

Especificamente em relao a exerccios colaborativos e controle de

qualidade, os laboratrios regionais e demais laboratrios interessados participaro de
exerccios anuais, definidos pelos laboratrios regionais em parceria com universidades.

Para estes propsitos, o projeto sugere a adoo das seguintes fases:

a. formulrio de procedimentos;

b. recebimento de amostra e tipagem e

c. visita de certificao (auditoria) a cada dois anos.

No intuito de promover o intercmbio entre profissionais dos institutos

periciais e das universidades, ser criada uma pgina na Internet pela equipe do
Laboratrio de DNA da Universidade Federal de Alagoas (UFAL). A concepo da pgina
ser com rea restrita, mediante o uso de senha, para disponibilizao de protocolos,
artigos, informaes, novidades, tabelas de freqncias allicas e haplotpicas, entre outras,
de forma a constituir uma revista eletrnica.
Com o objetivo de discutir as estratgias de disseminao da cultura do
DNA, ser constitudo um grupo de discusses de gentica forense que poder
comunicar-se atravs de mensagens eletrnicas na presena de um moderador, ou por meio
de discusses on-line (reunies virtuais) espordicas. Este grupo ser denominado de Rede
Nacional de Gentica Forense e ter como objetivo integrar os laboratrios universitrios e
os laboratrios periciais. Contudo, a questo mais importante a ser discutida pelos
profissionais que integraro a rede, ser a criao de bancos de dados de perfis genticos,

116

cuja concepo, criao, normalizao e alimentao devero levar em conta a opinio de

diversos especialistas em DNA e em Direitos Humanos.

Idealiza-se ainda a criao de um banco de dados nacional de perfis

genticos que, a princpio, imagina-se poder comportar dados sobre criminosos
(condenados), vestgios encontrados em locais de crime ou retirados de vtimas de crimes
sexuais, pessoas desaparecidas ou restos mortais no identificados.

117

CAPTULO IV
O LABORATRIO DE DNA DO INSTITUTO DE CRIMINALSTICA
DE SO PAULO

1. Introduo

Desde maro de 1999 o Instituto de Criminalstica de So Paulo (IC)

disponibilizou oficialmente os servios de seu Laboratrio de DNA. Alm de pretender
auxiliar nas anlises antropolgicas para identificao de cadveres realizadas pelo
Instituto Mdico Legal de So Paulo (IML), a implantao deste laboratrio teve por
objetivo principal oferecer investigao policial e judicial elementos que pudessem
objetivamente contribuir no apenas para a excluso de suspeitos, mas para a determinao
da autoria de crimes cometidos.

Houve necessidade de treinamento de sua equipe de peritos. Foram

realizados estgios com marcadores genticos moleculares nos laboratrios da Faculdade
de Cincias Farmacuticas da Universidade de So Paulo, da Polcia Civil do Distrito
Federal e do Sheriffs Office de West Palm Beach, na Flrida.

A equipe de peritos composta por profissionais com formao em cincias

biolgicas, biomdicas e farmacuticas, todos com especializao em biologia molecular
reconhecida pelos respectivos conselhos profissionais. Os tcnicos de laboratrio tm
graduao em cincias biolgicas e os estagirios selecionados so geralmente estudantes
das cincias da vida.

Durante os primeiros passos de nosso treinamento, antes mesmo de dar

princpio ao atendimento de casos, fornecemos os fundamentos tcnicos, jurdicos e ticos
para a edio da Resoluo SSP 194/99 que trata de coleta, acondicionamento e custdia
dos materiais biolgicos que sero submetidos anlise.

No incio do funcionamento do laboratrio, as anlises de DNA eram

realizadas pelo estudo de loci de sistemas monoplex, triplex, e quadriplex, revelados por
precipitao de prata. Atualmente so empregados sistemas multiplex, detectados por meio

118

de plataformas de anlise fluorescente da Hitachi Genetic System e da Applied

Biosystems, no sendo ainda realizadas anlises em DNA mitocondrial.

O Laboratrio de DNA do IC segue as recomendaes do NRC feitas nos

relatrios de 1992 e 1996, cabveis metodologia empregada e adota uma poltica de
qualidade seguindo as orientaes do GITAD, ao qual so filiados alguns de seus peritos.

2. Anlises realizadas

Desde sua fundao at julho de 2005, foram recebidos 1.638 casos,

resultando na anlise de mais de 4.000 perfis genticos. As formas de apresentao dos
materiais biolgicos recebidos para anlise so variadas. Entretanto, as percias realizadas
pelo laboratrio podem ser assim classificadas:

a.

identificao de cadveres: exames feitos em amostras cadavricas

como ossos, dentes, msculos, vsceras e outras, e sangue de
supostos familiares;

b.

confrontos genricos: realizados entre amostra questionada,

geralmente coletada em local de crime, e amostra-referncia do
suspeito, da vtima ou de ambos;

c. crimes sexo-relacionados:

futuro confronto: exame para a constatao da presena de

espermatozides e obteno antecipada de perfis genticos,
realizado em peas de vesturio, swabs e esfregaos em lminas
de microscopia;

confronto: entre materiais da vtima (amostra questionada e

amostra-referncia) e sangue do suspeito e companheiro sexual,
quando for o caso;

teste de paternidade: exame realizado com amostras da vtima

de estupro, da criana e do suspeito.

119

A ttulo de colaborao, realizamos ainda testes de paternidade envolvendo

restos mortais para a Justia Cvel gratuita, uma vez o Instituto de Medicina Social e
Criminologia de So Paulo - IMESC, rgo estatal responsvel pelos testes de DNA
oriundos de litgios cveis, somente procede a anlises de materiais biolgicos de pessoas
vivas. Em algumas oportunidades, efetuamos graciosamente testes de identificao em
cadveres para a Justia Criminal de outros Estados da Federao.

Para ilustrar o presente trabalho, realizamos um levantamento de dados nos

registros dos laudos emitidos pelo Laboratrio de DNA do IC sobre anlises de sistemas
multiplex, expedidos entre janeiro de 2003 e agosto de 2004, compreendendo um perodo
de 20 meses. Foram analisados 599 casos e os dados obtidos em nossa pesquisa sero a
seguir comentados.

No perodo analisado, foram recebidos 238 casos referentes identificao

de cadveres. Entretanto, dada a complexidade da metodologia empregada para a anlise
de ossos e dentes, resolvemos por bem isolar os dados dos casos que continham estas
amostras. Assim, foi apurado que dos 150 casos envolvendo vestgios sseos e dentrios,
73 deles foram conclusivos, indicando a existncia de vnculo gentico familiar em 61
casos e 12 excluses deste tipo de vnculo. A percia foi inconclusiva para 77 casos. A
Figura 10 ilustra percentualmente os dados obtidos nestas anlises.

150 casos de identificao de cadveres pelo DNA

extrado de ossos e dentes
conclusivos com
incluso
41%
51%
8%

conclusivos com
excluso
inconclusivos

Figura 10 Resultados obtidos nas anlises de 150 casos de

identificao de cadveres, realizadas pelo Laboratrio de DNA do
IC, no perodo de janeiro de 2003 a agosto de 2004.

O alto nmero de percias inconclusivas nestes casos pode ser explicado, na

maior parte das vezes, pelo estado de conservao e pelo tempo de existncia dos materiais
encaminhados que implicam a degradao do DNA. Para o exame de materiais sseos ou

120

dentrios muito antigos recomendada a tecnologia de anlise de DNA mitocondrial,

ainda no disponvel do IC. A Figura 11 ilustra em termos percentuais a taxa de sucesso
alcanado nas percias dos 150 casos de identificao cadavrica.

Eficincia nas anlises de identificao de

cadveres com DNA extrado de ossos e dentes

49%
51%

casos conclusivos
casos inconclusivos

Figura 11 Taxa de sucesso nas anlises de 150 casos de

identificao de cadveres, realizadas pelo Laboratrio de DNA do
IC, no perodo de janeiro de 2003 a agosto de 2004.

Dos 238 casos recebidos referentes identificao de cadveres, 88 deles

diziam respeito a cadveres recentes e, por isso, continham amostras de sangue ou de
vsceras ou mesmo de tecido muscular, facilitando a anlise de DNA. Em conseqncia
disto, foram agrupados com outros casos recebidos concernentes anlise de vestgios
oriundos de locais de crime e que exigiam o mesmo tratamento analtico. Desta forma,
estes 88 casos foram integrados a um grupo maior, perfazendo 177 casos. Dos 177 casos
envolvendo a anlise de DNA extrado de sangue, bulbos capilares, vsceras e outros
tecidos, 131 deles foram conclusivos, indicando a existncia de vnculo gentico familiar
ou combinao de perfis genticos em 92 casos e 39 excluses de qualquer de vnculo
gentico. A percia foi inconclusiva para 46 casos. A Figura 12 ilustra percentualmente os
dados obtidos nestas anlises.

121

177 casos de identificao humana atravs da

anlise de DNA extrado de sangue, bulbos
capilares e vsceras
conclusivos com
incluso

26%
52%
22%

conclusivos com
excluso
inconclusivos

Figura 12 Resultados obtidos nas anlises de 177 casos de

identificao em restos cadavricos e outros vestgios, realizadas
pelo Laboratrio de DNA do IC, no perodo de janeiro de 2003 a
agosto de 2004.

Aqui o nmero de percias inconclusivas pode ser explicado pela deficincia

na conservao das amostras, pela exigidade do material encaminhado ou ainda pela
presena de contaminantes inibidores da PCR. A Figura 13 ilustra em termos percentuais a
taxa de sucesso alcanado nas percias dos 177 casos analisados.

Eficincia nas anlises de identificao humana

com DNA extraido de sangue, bulbos capilares e
vsceras

26%
casos conclusivos
casos inconclusivos

74%

Figura 13 Taxa de sucesso nas anlises de 177 casos de

identificao em restos cadavricos e outros vestgios, realizadas
pelo Laboratrio de DNA do IC, no perodo de janeiro de 2003 a
agosto de 2004.

Dos 599 casos recebidos no perodo analisado, 272 deles foram referentes a
crimes sexuais. Os casos deste tipo costumam ser separados pelo Laboratrio de DNA do
IC pela existncia ou no de amostras que permitam o confronto pretendido. Quando
presente a amostra-referncia do suspeito, so classificados como casos fechados e na
ausncia dela, futuro confronto. Dos 272 casos relativos a crimes sexuais, 116 deles foram
de futuro confronto. Destes, 91 foram conclusivos, sendo que 49 deles indicaram a

122

possibilidade de confronto e 45 no. A percia foi inconclusiva para 25 casos. A Figura 14

ilustra percentualmente os dados obtidos nestas anlises.

116 casos de anlise de amostras para verificao

da possibilidade de futuro confronto de DNA
conclusivos com
possibilidade

22%
42%

conclusivos sem
possibilidade
inconclusivos por
exigidade

36%

Figura 14 Resultados obtidos nas anlises de 116 casos de futuro

confronto em crimes sexo-relacionados, realizadas pelo
Laboratrio de DNA do IC, no perodo de janeiro de 2003 a agosto
de 2004.

O nmero de percias inconclusivas nestes casos pode ser explicado pela

exigidade do material encaminhado ou mesmo pela ausncia de qualquer material
biolgico detectvel. Interessante notar que estes casos inconclusivos se diferenciam
daqueles conclusivos, sem possibilidade de futuro confronto. Nestes ou material biolgico
masculino est ausente ou a impossibilidade da anlise se d pela presena de interferentes
inibidores da PCR, o que comum ocorrer com lminas coradas. A Figura 15 ilustra em
termos percentuais a taxa de sucesso alcanado nas percias dos 116 casos analisados.

Eficincia nas anlises para verificao da

possibilidade de futuro confronto de DNA

22%
casos conclusivos
casos inconclusivos

78%

Figura 15 Taxa de sucesso nas anlises de 116 casos de futuro

confronto em crimes sexo-relacionados, realizadas pelo
Laboratrio de DNA do IC, no perodo de janeiro de 2003 a agosto
de 2004.

123

Ainda no que concerne aos crimes sexuais, 156 casos fechados foram
analisados. Destes, 61 foram conclusivos, sendo que 37 deles levaram incluso do
suspeito pela combinao de seu perfil gentico com aquele encontrado no vestgio
retirado da vtima e 24 deles excluso do suspeito. A percia foi inconclusiva para 95
casos examinados. A Figura 16 ilustra percentualmente os dados obtidos nestas anlises.

156 casos de identificao pelo DNA de suspeitos de

crimes sexo-relacionados

24%

61%

15%

conclusivos com
incluso
conclusivos com
excluso
inconclusivos

Figura 16 Resultados obtidos nas anlises de 156 casos de

confronto em crimes sexo-relacionados, realizadas pelo
Laboratrio de DNA do IC, no perodo de janeiro de 2003 a agosto
de 2004.

Aqui o altssimo nmero de percias inconclusivas pode ser esclarecido por

trs causas concorrentes: a) o insucesso das anlises pelas mesmas razes apontadas para
os casos de futuro confronto que resultaram inconclusivos por exigidade de material ou
conclusivos sem possibilidade de confronto; b) pela demonstrao grfica considerando
como inconclusivos a somatria de casos com exigidade de material e casos sem
possibilidade de confronto; e c) pelo pssimo estado de conservao que as amostras
questionadas so encaminhadas ao laboratrio. Esta ltima causa se d pelo no
encaminhamento imediato destas amostras ao laboratrio, remanescendo por longo tempo,
sem o devido acondicionamento, em distritos policiais no aguardo da apario de um
suspeito. A Figura 17 ilustra em termos percentuais a taxa de sucesso alcanado nas
percias dos 156 casos analisados.

124

Eficincia nas anlises para identificao de

suspeitos de crimes sexo-relacionados

39%

casos conclusivos
casos inconclusivos

61%

Figura 17 Taxa de sucesso nas anlises de 156 casos de

confronto em crimes sexo-relacionados, realizadas pelo
Laboratrio de DNA do IC, no perodo de janeiro de 2003 a agosto
de 2004.

Dos 599 casos recebidos, nos 20 meses analisados, 238 deles foram
referentes identificao de cadveres; outros 89 concernentes anlise de vestgios
oriundos de locais de crime e os 272 restantes foram relativos a crimes sexuais. A Figura
18 ilustra percentualmente os tipos de anlises realizadas e a Figura 19 informa os
percentuais da taxa de sucesso geral alcanado nestas percias.

Tipos de anlises de DNA realizadas

40%

45%

identificao de
cadveres
vestgios de locais
de crime

15%

crimes sexorelacionados

Figura 18 Classificao das anlises realizadas pelo Laboratrio

de DNA do IC em 599 casos, no perodo de janeiro de 2003 a
agosto de 2004.

125

Eficincia nas anlises de DNA dos 599 casos

estudados

41%

casos conclusivos

59%

casos inconclusivos

Figura 19 Taxa geral de sucesso nas anlises de 599 casos

realizados pelo Laboratrio de DNA do IC, no perodo de janeiro
de 2003 a agosto de 2004.

Acreditamos que a taxa geral de sucesso das anlises realizadas pelo

Laboratrio do IC esteja dentro dos ndices esperados para um laboratrio de DNA voltado
elucidao de crimes e identificao de pessoas, onde, por mais que se queira, no se tem
escolha sobre o tipo e a qualidade das amostras recebidas. Um trabalho didtico mais
profundo junto aos responsveis pela coleta, acondicionamento e envio destas amostras,
bem como o aperfeioamento de metodologias e de reagentes por certo ajudariam a elevar
o ndice de sucesso nas anlises. Contudo, sempre restaro questes de ordem prtica no
tratamento analtico de materiais no ideais.

Quanto ao nmero de casos analisados, em mdia 30 por ms no perodo

analisado, este se mostra condizente com a capacidade de atendimento de um laboratrio
de pequeno porte como o do IC. Contudo, julgamos que este nmero no seja
representativo frente aos notrios ndices de violncia e criminalidade no Estado de So
Paulo. Temos notcias que cerca de 6.000 cadveres so inumados por ano como
desconhecidos. Mesmo levando em conta que grande parte deles no reclamada e que
muitos so identificados posteriormente por tcnicas antropolgicas diferentes do DNA, o
nmero dos identificados atravs do estudo do DNA muito reduzido.

O mesmo ocorre em relao aos crimes sexuais. O nmero de atendimentos

internamente divulgado nesta rea ultrapassa 5.000 casos por ano, somente na Grande So
Paulo, contrapondo-se a uma mdia de 160 casos recebidos por ano de todo o Estado para
anlise de DNA no perodo analisado.

126

Em relao anlise de vestgios coletados em locais de crime, no

podemos fazer ilaes concretas em virtude da enorme diversidade dos crimes cometidos,
cujos vestgios deixados podem dar azo a exames de DNA. Entretanto, podemos afirmar
com convico que a mdia de apenas 54 casos recebidos por ano no perodo analisado
indubitavelmente irrisria, fazendo-nos crer que providncias urgentes devam ser tomadas
no sentido de promover mudanas no critrio de eleio dos vestgios a serem coletados.

3. Projetos e pesquisas em andamento

Paralelamente ao atendimento de casos, os componentes da equipe do

Laboratrio de DNA do IC realizam algumas pesquisas e tecem parcerias com outras
entidades.

Na rea dos crimes sexo-relacionados, o laboratrio j realizou estudos para

facilitao e melhoria da coleta e armazenamento de amostras-referncia e ensaios para a
determinao do nmero mnimo necessrio de espermatozides para o sucesso no exame
de DNA. Atualmente faz estudos sobre diferentes metodologias de coleta de material
vaginal de vtimas de estupro, principalmente do lavado vaginal, de modo a tornar o
material coletado mais rico em espermatozides. Esta pesquisa vem sendo desenvolvida
em parceria com o Programa Bem-Me-Quer da Secretaria de Segurana Pblica de So
Paulo, voltado ao atendimento de vtimas de abuso sexual. Encontram-se ainda em
andamento, estudos para validao de metodologia para anlises do cromossomo Y e
ensaios para introduo de novos testes confirmatrios para a presena de smen, baseados
na P-30 e na quantificao da fosfatase cida, dado o grande nmero de homens
vasectomizados na atualidade.

No tocante anlise de plos e cabelos, o laboratrio possui um projeto para

determinao do nmero mnimo necessrio de bulbos para a aplicao da metodologia
disponvel e melhor forma de conservao destes materiais.

No campo da identificao de cadveres, o Laboratrio de DNA do IC

participa de alguns projetos. O primeiro deles foi elaborado em conjunto com a Faculdade
de Cincias Farmacuticas da Universidade Estadual Paulista UNESP de Araraquara,

127

para a formao de um banco de dados civil contendo informaes genticas de cadveres

desconhecidos e supostos familiares. Este projeto ainda se encontra sob anlise da
Fundao de Amparo Pesquisa de So Paulo FAPESP, porm avanos significativos j
foram feitos no desenvolvimento do software que administrar as comparaes dos perfis
genticos.

O segundo projeto do qual o laboratrio de DNA participa foi recentemente

desenvolvido pelo Instituto Oscar Freire da Faculdade de Medicina da USP e , em parte,
semelhante ao primeiro. Denomina-se Projeto Caminho de Volta: Busca de Crianas
Desaparecidas no Estado de So Paulo. Este projeto tem o objetivo de contribuir na
identificao de crianas, otimizando o atual sistema de busca, registro de dados, troca de
informaes e apoio s famlias dos desaparecidos. A contribuio do Laboratrio do IC
ser a de realizar anlise de DNA nas ossadas infantis encontradas.

O terceiro projeto est sendo desenvolvido pela Faculdade de Odontologia

da USP e pretende o aperfeioamento de metodologia para estudos de DNA mitocondrial
em material dentrio, bem como a criao de um banco de dados. A contribuio do
Laboratrio de DNA do IC neste caso ser apenas a de ceder material cadavrico.

Foi realizado nas dependncias do Laboratrio de DNA do IC um teste de

validao, com 1291 amostras oriundas de casos criminais e de paternidade, em conjunto
com tcnicos da Dialab Diagnsticos, da Amersham Pharmacia, da UNESP de Araraquara
e peritos criminais do Paran, Minas Gerais e Distrito Federal, para o uso do kit
PowerPlex 16 da Promega Corporation no analisador capilar MegaBace da Amersham
Pharmacia.

No sentido de auxiliar a implementao do Centro de Custdia de Vestgios

e Provas de que est sendo instalado na sede da Superintendncia da Polcia TcnicoCientfica de So Paulo, o Laboratrio de DNA do IC vem participando ativamente deste
esforo, servindo como prottipo de suas atividades.

Pelo que foi exposto, patente que as pesquisas realizadas pelo Laboratrio
de DNA do IC so aplicadas e buscam apenas a melhoria imediata dos servios prestados,
uma vez que a demanda destes servios no permite que se alcem vos maiores.

128

Entretanto, a descentralizao futura dos servios do laboratrio em plos regionais de

Ncleos do Instituto de Criminalstica do Interior talvez torne mais cleres suas anlises e
permita o aprofundamento de suas pesquisas.

Apesar do volume dos servios prestados por este laboratrio no ser

significativo ante aos ndices de criminalidade no Estado de So Paulo, pode-se concluir
que seus esforos no sentido de auxiliar na identificao de cadveres desconhecidos e na
elucidao de crimes conferem-lhe certa relevncia social, uma vez que tem contribudo
para o oferecimento de um servio policial e judicial mais eficiente e preciso aos cidados.

129

CAPTULO V
O EXAME DE DNA APLICADO AO PROCESSO PENAL E O SEU
IMPACTO SOCIAL
1. A prova do DNA no sistema legal

A introduo de novas tecnologias causa preocupao em relao a seu

impacto sobre a sociedade. A tecnologia da tipagem do DNA revolucionou as cincias
forenses, tornando-se um marco divisrio tanto para a Criminalstica como para a
Medicina Forense. O seu surgimento veio abalar as convices e os critrios utilizados
para o estabelecimento da certeza jurdica nas relaes de filiao, campo do Direito Civil,
e na formulao da culpabilidade, campo do Direito Penal (BONACCORSO, 2002).

As informaes advindas desta tecnologia tm, alm dos reflexos de ordem

jurdica, outros que recaem sobre dados que a maior parte das pessoas reputa como
extremamente particulares. Disto resulta que a utilizao destas informaes no sistema
legal, principalmente nos processos criminais, envolve questes de ordem tica38.

Os mtodos forenses utilizados para individualizao, assim como a

tipagem do DNA, exigem habilidade e acurcia para poder precisar origens. Para que os
exames resultantes da aplicao destes mtodos sejam teis judicialmente, necessrio o
emprego de procedimentos cientificamente aceitveis para garantir que comparaes
adequadamente realizadas possam distinguir possveis origens. A aceitao cientfica do
mtodo laboratorial para comparar amostras e o fato de que as caractersticas estudadas no
laboratrio comprovam a identidade so questes distintas. Conseqentemente, trataremos
de abord-las separadamente.

No sistema adversarial, adotado pela tradio anglo-americano, a iniciativa

probatria incumbe preponderantemente s partes, entende-se que o melhor caminho para
se alcanar a verdade a contraposio das verses das partes, atravs da tcnica do cross38

Os dados genticos resultantes de pesquisa associados a um indivduo identificvel no podero ser

divulgados nem ficar acessveis a terceiros, notadamente a empregadores, empresas seguradoras e
instituies de ensino, e tambm no devem ser fornecidos para cruzamento com outros dados
armazenados para propsitos judiciais ou outros fins, exceto quando for obtido o consentimento do sujeito
da pesquisa (RESOLUO CNS 340/04).

130

examination, onde as partes formulam suas questes diretamente s testemunhas. Neste

sistema, inclusive, o perito ouvido como testemunha da parte, sujeitando-se a todas as
regras aplicveis a elas. Uma preocupao neste sistema a idoneidade das informaes
cientficas trazidas pelo perito ao jri, de forma que somente as teorias genericamente
aceitas pela comunidade cientfica podem embasar as opinies periciais apresentadas,
bastando que o juiz determine em cada caso se a tcnica permitida vlida e que pode
auxiliar os jurados no julgamento (GOMES FILHO, 1997).

A tecnologia usada para examinar VNTRs, STRs ou outros loci deve

satisfazer aos padres necessrios das provas cientficas. Nos Estados Unidos, existem dois
padres importantes para que se decida se os achados cientficos sero admitidos como
prova: teste da aceitao geral e padro da metodologia consistente (NRC, 1996).

O padro aceitao geral foi articulado pela primeira vez em um importante

caso federal em 1923, Frye v. Estados Unidos. Em jurisdies que seguem este padro o
proponente da prova cientfica deve demonstrar que a teoria e a metodologia subjacentes
so geralmente aceitas por setores relevantes da comunidade cientfica. O padro da
metodologia consistente teve origem no estatuto das regras federais sobre provas. Em
Daubert v. Merrell Dow Pharmaceuticals, a Suprema Corte determinou que essas regras
implicitamente alijassem a aceitao geral como um pr-requisito absoluto para a
admissibilidade da prova cientfica. Contrariando o teste Frye, a corte preceituou um
modelo mais amplo para decidir se o testemunho proposto tinha suficiente validade e
confiabilidade cientficas para ser admitido como conhecimento cientfico relevante que
auxiliaria quem julga o caso (NRC, 1996).

A aplicao de padres para admissibilidade da prova de DNA produziu

resultados divergentes. A primeira onda de casos criminais envolvendo identificao pelo
DNA comeou em 1986. O enfoque estava nos problemas criados com a transferncia de
tecnologia da moderna Biologia Molecular dos laboratrios mdicos e de gentica para o
laboratrio forense que lida com material biolgico degradado, escasso e, por isso,
geralmente utiliza sistemas multiallicos complexos. No obstante, a teoria subjacente, de
que a determinao dos perfis de DNA capaz de ajudar a identificar a origem de uma
amostra nunca foi colocada em dvida, o depoimento de peritos raramente foi contestado e
os tribunais admitiram de imediato os achados laboratoriais (THOMPSON e FORD, 1989).

131

Aps estes primeiros casos, especialistas de vrias disciplinas passaram a examinar

trabalho de laboratrios comerciais e governamentais. Como resultado disto, um grande
nmero de questionamentos sobre os procedimentos e anlises laboratoriais fez surgir uma
segunda onda de casos em que vrios tribunais excluram alguns aspectos do DNA como
prova. Contudo, a maioria dos tribunais continuou a considerar, apesar dos depoimentos
conflitantes entre os peritos, admissveis as combinaes e probabilidades do DNA.

Aps 1992, houve uma terceira onda de casos nos quais foram localizados
menos os mtodos laboratoriais para caracterizar e combinar o DNA, e mais os mtodos
estatsticos para interpretar a significncia das semelhanas nas amostras do DNA. A
difuso dos mtodos baseados na PCR no campo forense fez chegar uma quarta onda de
casos, envolvendo investidas contra os procedimentos para assegurar a preciso destas
anlises e questes sobre a interpretao quantitativa a tipagem gentica. Mais uma vez a
teoria subjacente no foi seriamente questionada, bem como, pelo menos em princpio, a
habilidade dos laboratrios em obter resultados informativos. Os questionamentos giraram
em torno da dvida se os protocolos usados para o trabalho forense seriam suficientes para
evitar resultados falso-positivos e sobre os procedimentos para estimar as freqncias dos
gentipos que so detectados aps a amplificao pela PCR (NRC, 1996).

A maior parte das contestaes sobre a admissibilidade dos resultados do

DNA baseou-se em consideraes como a de que os protocolos ou procedimentos seguidos
pelos laboratrios no eram adequados para reduzir suficientemente o risco de erro, que
no obedeceram aos protocolos estabelecidos ou que no conseguiram demonstrar sua
capacidade para tipagem das amostras com exatido em uma srie de testes de qualidade.
Assim mesmo, os tribunais mostraram pouca inclinao para excluir provas considerando
esses fatos. Uma exceo importante ocorreu em Nova York, em 1989, no caso O povo v.
Castro, no qual um tribunal concluiu que a teoria que fundamenta a tipagem do DNA
geralmente aceita pelos cientistas da gentica e reas relacionadas, que a tipagem de DNA
tambm aceita e confivel, mas que a tcnica, conforme aplicada neste caso em
particular, tinha tantas falhas que no era possvel afirmar que havia uma combinao de
padres de DNA. Havia vrias falhas na declarao do laboratrio sobre a combinao
entre duas amostras, por inmeras razes, incluindo a presena de vrias bandas anmalas.
O tribunal no deu crdito explicao do laboratrio sobre as razes das anomalias e
criticou o seu insucesso em realizar um segundo teste adequado. Alm disto, o tribunal

132

concluiu que o banco de dados da freqncia populacional utilizado no podia fornecer

uma estimativa precisa da probabilidade de que ru era a origem do DNA (NRC, 1992). Os
equvocos deste caso levaram criao de organismos com a finalidade de examinar
cuidadosamente os diversos problemas na aplicao forense da tipagem do DNA, inclusive
criando-se mecanismos seguros para um controle de qualidade (FRANA, 2000).

O progresso da cincia no garante uma pesquisa imune a erros e seus

mtodos, aceitos pela generalidade dos estudiosos, em um determinado momento, podem
parecer errneos no momento seguinte (DENTI, 1972). Uma das mais srias preocupaes
com relao evidncia cientfica, recente ou no, que ela possui uma aura de
infalibilidade que pode influenciar as faculdades crticas de um jri.

O extraordinrio desenvolvimento cientfico e tecnolgico, propiciando o

acesso a conhecimentos cada vez mais especializados e seguros, tem apresentado
significativas repercusses no campo da prova na tarefa de reconstruo dos fatos no
processo, a ponto de se afirmar que a percia teria conquistado o reinado antes atribudo s
confisses39. Esse arsenal informativo de alta especializao pode servir para uma
apurao mais exata da verdade, porm torna maior o risco40 de que eventuais distores
da realidade, neste tipo de prova, no sejam percebidas pelo juiz e pela sociedade devido
complexidade das provas (GOMES FILHO, 1997).

Dadas as possibilidades de erro, o ru deve ou deveria ter direito a examinar

a prova fsica apresentada no processo, incluindo-se a o direito de testar novamente uma
amostra que se encontra sob controle o sistema judicial ou policial. Entretanto, no tocante
aos testes forenses de DNA, nem sempre isto possvel, tendo em vista a usual exigidade
39

40

Neste mesmo sentido: Em relao prova pericial pautada na tecnologia do DNA, a rainha das provas
suplantou todas as percias hematolgicas empregadas at ento no debate judicirio civil e penal. O
desenvolvimento da gentica na ltima dcada abriu novos horizontes para a pesquisa cientfica, para as
intervenes no campo biomdico e no campo das prticas jurdicas, que nos interessa mais
particularmente [...] muitos operadores e usurios do direito assumem uma posio de adorao, quase
chegando s raias do fanatismo e religiosa submisso aos laudos periciais e o emprego ilimitado desta
prova espetacular comea a dar sinais de esgotamento e provoca questionamentos de ordem tica, social e
jurdica (LEITE, 1999).
Neste mesmo sentido: Mas temos que alertar para os grandes riscos e perigos que se corre com esta
confiana cega, irrestrita, absoluta, nos testes genticos. A venerao, a sacralizao, a divinizao do
DNA (e sem, mesmo, ter-se conhecimento de quem faz ou de como foi feito o exame) atitude
desarrazoada, que tem causado transtornos e desvios. A questo ainda est envolvida de muita incerteza e
insegurana. Em pases muito mais desenvolvidos do que o nosso, os prprios cientistas tm sugerido que
se tenha cuidado com a supervalorizao dos testes de DNA (VELOSO, 2000).

133

das amostras coletadas em cenas de crime. Da que, quando testes posteriores no so

exeqveis, tornam-se particularmente importantes, para aferio da manuteno da cadeia
de custdia, as informaes contidas no registro documental de todos os estgios do
processo analtico.

Alm das possibilidades de erro laboratorial, outros problemas tambm

fizeram os tribunais norte-americanos inicialmente hesitar em admitir plenamente a prova
pelo DNA. Estes problemas, entre outros, implicaram discusses sobre os mtodos para
caracterizar o grau observado de semelhana nos gentipos de DNA, em questionamentos
sobre a representatividade dos bancos de dados utilizados para as estimativas das
freqncias dos gentipos, e em controvrsias sobre a subestrutura populacional. No
obstante, estas questes foram, de certa forma, pacificadas, em parte graas a estudiosos,
cujos trabalhos so convertidos em recomendaes em prol da excelncia das anlises de
DNA como um todo, tais quais as que tivemos a oportunidade de discorrer neste trabalho,
e instituio de programas de CQ e GQ, fazendo com que o uso da informao sobre o
DNA no sistema legal de tradio anglo-americana se firmasse como um poderoso auxiliar
na determinao da culpabilidade ou da inocncia. Entretanto, em nossa opinio, a causa
subjacente da excelncia alcanada o tipo de contraditrio ao qual a evidncia de DNA
fica submetida neste sistema que d oportunidades a acirrados debates tcnicos que
indubitavelmente levam ao aprimoramento do modo de realizao das anlises.

O uso das informaes sobre o DNA no sistema legal brasileiro tornou-se

corriqueiro a partir do final da dcada de 1990 em litgios cveis, e, posteriormente,
conforme assinala Dotti (2000), o exame de DNA converteu-se em um dos mais recentes
meios de convico probatria com trnsito livre na investigao criminal, tanto na fase do
inqurito policial como na instruo judicial, ficando sua adoo apenas subordinada aos
princpios gerais de cabimento e realizao das provas.

Percebe-se que, diferentemente do sistema anglo-americano, onde as regras

de admissibilidade de provas so, como vimos, extremamente cautelosas e rgidas, a
introduo das provas pautadas em exame de DNA no sistema legal brasileiro se deu de
forma acrtica, tal qual se passa com as aquisies de produtos culturais estrangeiros em
nossa sociedade.

134

No af da modernidade, importamos a tcnica sem, contudo, importar as

solues propostas para sua adequao e, o que talvez seja pior, principalmente nos
laboratrios pblicos, sem as mnimas condies materiais para desenvolv-la com
excelncia e sem o preparo tcnico exigido para a implementao de uma tcnica de to
grande complexidade.

Talvez, se a forma de exerccio do contraditrio das provas periciais em

nosso sistema se desse de modo mais crtico e vigoroso, pudssemos com maior celeridade
alcanar ao menos os patamares tcnico-cientficos mnimos exigidos para o uso seguro e
adequado no sistema judicial das informaes propiciadas pelo DNA. Assim sendo,
passamos a discorrer sobre as caractersticas gerais de como se d o contraditrio das
provas periciais em nosso sistema, para em seguida pontuarmos nossas assertivas quanto s
melhorias tcnicas no s para a excelncia da prova de DNA, mas para provas periciais
como um todo.

No sistema anglo-americano, o perito introduzido no processo como

testemunha da parte e presta depoimento oral, sujeito s mesmas regras de inquirio da
prova testemunhal comum (inquirio direta e cruzada). Evita-se que ele possa trazer
informaes que no sejam do seu conhecimento pessoal. A parte contrria pode tambm
trazer um especialista que ser inquerido igualmente como testemunha e pode contrariar as
opinies do perito da outra parte.

Ressaltamos como prudente o impedimento de utilizao de informaes

que no sejam da seara de conhecimento pessoal do perito, pois, uma vez evidenciado seu
despreparo pela falta de domnio tcnico, ficar patente a ausncia de credibilidade da
percia por ele realizada. Infelizmente, a forma de contraditrio exercida em nosso sistema
no emprega, como veremos, este tipo de dispositivo, dando azo a um pernicioso
comodismo, redundante em estagnao tcnico-cientfica. E, pelos mesmos motivos,
entendemos como salutar a previso de inquirio do perito por seus pares, em
contraditrio.

No sistema acusatrio que o adotado pelo nosso ordenamento, observa-se

constante preocupao com o contraditrio, devendo todos os atos probatrios respeitar

135

este princpio. Entretanto, na prtica, existem grandes dificuldades para o exerccio pleno
do contraditrio em relao prova pericial. Os peritos so em regra oficiais e
normalmente as percias so realizadas na fase de inqurito policial, onde ainda no existe
a participao da defesa.

Embora se admita o contraditrio posterior, nem sempre as informaes

tcnico-cientficas so elaboradas para uma discusso paritria entre os interessados,
fazendo prevalecer uma verso nica sobre os fatos examinados, normalmente aceita de
forma acrtica no s pelo juiz como tambm pelas prprias partes (GOMES FILHO,
1997).

Para a superao destas dificuldades, seria louvvel uma maior integrao

de conhecimentos entre o Poder Judicirio, o Ministrio Pblico, a Ordem dos Advogados
e os Institutos Oficiais de Percias que mormente seguem alheios s dificuldades das
exigncias processuais. Complementando esta parceria, melhor seria a obrigatoriedade de
disciplinas como Criminalstica e Medicina Forense nos cursos jurdicos, prelecionadas de
modo a propiciar o desenvolvimento de um senso crtico, suficiente ao menos para a
aferio da existncia ou no no laudo pericial dos requisitos mnimos para que ele possa
ser considerado como um trabalho cientfico de qualidade, independentemente de uma
compreenso profunda sobre a matria nele abordada. Por outro lado, faz-se tambm
mister que nos cursos de formao de peritos oficiais sejam ministradas, de forma mais
profunda e integrada, as disciplinas de Direito Penal e Processual Penal, com grande nfase
nos ensinamentos sobre formao da prova e seu contraditrio, tendo-se em conta a
interdisciplinaridade como exigncia desta formao.

O Cdigo de Processo Penal brasileiro, no artigo 176, prev a possibilidade

de formulao de quesitos at o ato da realizao das percias. Assim, quando na fase
processual houver um requerimento de realizao de percia ou a determinao ex-ofcio da
realizao desta, a parte poder formular quesitos, exercendo, neste momento a garantia do
contraditrio.

Poder tambm ser feito pelas partes requerimento para a repetio da

percia j realizada na fase de inqurito policial sem o crivo do contraditrio. Por certo este
entendimento cabe apenas para a realizao de percias que ofeream condies materiais

136

de reexame. Neste sentido, louvvel e prudente a previso contida no artigo 170 do

Cdigo de Processo Penal determinando que nas percias laboratoriais os peritos devero
guardar material suficiente para a eventualidade de nova percia.

No existe no processo penal brasileiro o direito a que as partes possam

produzir, tal qual no processo civil, prova pericial por meio de assistentes tcnicos41. Isto
no impede que a parte, geralmente a defesa, recorra a peritos particulares para anlise da
percia oficial e emisso de parecer tcnico para instruir suas alegaes finais.

Nos termos do artigo 182 do Cdigo de Processo Penal, o juiz no ficar

adstrito s concluses dos laudos periciais e, por conseguinte, nem s dos peritos
extrajudiciais. Ele poder confrontar as concluses dos peritos oficiais com as do parecer
tcnico e at mesmo optar pela orientao deste parecer. Isto devido ao fato que no
processo penal qualquer elemento levado aos autos pode ser utilizado para fortalecer a
presuno de inocncia ou de no culpabilidade em razo, principalmente, do princpio in
dubio pro reo.

Os pareceres tcnicos trazidos aos autos pela defesa tm, em termos de

elementos probatrios intrnsecos, valor oriundo da seriedade e credibilidade de seus
argumentos. O juiz no pode deixar de avali-los desde que no fique adstrito s suas
concluses, como, alis, no fica em relao s percias (GRINOVER; FERNANDES;
GOMES FILHO, 2001). Isto significa que o processo em contraditrio no se esgota no
direito prova e sustentao dos argumentos das partes, mas indica ainda a exigncia de
que o juiz valore atentamente as atividades instrutrias e seus resultados. Os pareceres
tcnicos juntados pela defesa podem ter suas concluses rejeitadas pelo juiz, devido regra
da livre formao de seu convencimento, mas devem ser consideradas analisadas,
sopesadas e, enfim, motivadamente acolhidas ou rejeitadas.

Em resumo, apesar do silncio da lei processual, a melhor doutrina, face aos

princpios constitucionais do contraditrio e da ampla defesa, entende que a participao
dos interessados essencial tambm neste tipo de prova, dando sua participao atravs da

41

de se questionar se o art. 3 do Cdigo de Processo Penal, ao preceituar que a lei processual penal
admitir interpretao extensiva e aplicao analgica, bem como o suplemento dos princpios gerais do
direto, no autorizaria, por analogia ao Cdigo de Processo Civil, a nomeao de assistentes tcnicos.

137

possibilidade de crtica (pareceres) e pedidos de esclarecimento em relao aos laudos j

apresentados ou pela formulao de quesitos antes da realizao da percia.

A ausncia de dispositivos claros e precisos, no sentido da ampla

participao das partes na realizao das percias em nosso sistema, j suscitou projetos
para reforma do Cdigo de Processo Penal. No anteprojeto Jos Frederico Marques, de
1983, previa-se a indicao de assistentes pelas partes, mas sucumbiu.

O Projeto de Lei n. 4205/2001 para reforma do Cdigo de Processo Penal,

elaborado por uma comisso de juristas, no tocante prova pericial, prope simplificar a
realizao das percias, notadamente nas regies mais distantes e desprovidas de recursos,
de modo que se elabore um regramento simples para o caso da inexistncia de perito
oficial na regio. Prope tambm a possibilidade de indicao de assistente tcnico pelas
partes para melhor assegurar o contraditrio, aproximando a disciplina da percia no
processo penal com a j adotada no processo civil42.

Consideramos tais previses como desejveis, pois alm de agilizao

processual, iro propiciar obrigatoriamente, tal qual se existisse um exame cruzado, a
elevao do nvel tcnico e cientfico dos peritos e um reaparelhamento das instituies
periciais, no sentido de adequao s novas exigncias.

O princpio do contraditrio essencial para a existncia do processo,

entretanto no pode ser considerado como indispensvel na formao de todas as
modalidades de prova, uma vez que algumas delas tm gnese pr-processual. Preferimos,
ento, o entendimento de que imprescindvel a existncia de um controle contraditrio
necessrio sobre todas as provas formadas ou no no processo e utilizveis para a deciso.

42

Pelas proposies da reforma, o artigo do Novo Cdigo de Processo Penal ter a seguinte redao: Art.
159. O exame de corpo de delito e outras percias sero, em regra, realizados por perito oficial. 1. Na
falta de perito oficial, o exame ser realizado por duas pessoas idneas, escolhidas, de preferncia, dentre
as que tiverem habilitao tcnica. 2. Os peritos no oficiais prestaro o compromisso de bem e
fielmente desempenhar o encargo. 3. Sero facultadas ao Ministrio Pblico e seu assistente, ao
querelante, ao ofendido, ao investigado e ao acusado a formulao de quesitos e indicao de assistente
tcnico, que atuar a partir de sua admisso pelo juiz (CALMON FILHO, 2001).

138

Desloca-se, desta forma, a problemtica para a qualidade e a eficincia deste

controle contraditrio. Para as provas que se formam no processo, ocorre um contraditrio
ideal e, para aquelas de origem extraprocessual, o possvel (TARUFFO, 1992).

No intuito de maximizar a eficincia deste controle sobre as provas com

formao extrajudicial, como o caso das percias judiciais cautelares, faremos algumas
consideraes.

Ao tratar do tema, em suas observaes sobre nosso inqurito policial,

Gomes Filho (1997, p.146) sugere, ante a impossibilidade de atuao da acusao e da
defesa em fase de inqurito devido rotina da atividade policial, a previso de incidentes
jurisdicionalizados para a coleta de elementos utilizveis para as decises finais.

No mister da busca de eficincia do controle do contraditrio sobre as

provas com formao extraprocessual, entendemos a previso pretendida por Gomes Filho
como absolutamente pertinente e indispensvel. Este controle dever subsistir mesmo se
concretizando a possibilidade de nomeao de assistentes tcnicos pelas partes, prevista
pela reforma do Cdigo de Processo Penal, haja vista que a atuao destes ser facultativa
e impraticvel em algumas percias que versem sobre vestgios com possibilidade de
disperso, como o exame de local de crime.

No

sentido

de

implementar

estes

incidentes

jurisdicionalizados,

despretensiosamente sugerimos que devam ser normalizadas tcnicas rgidas para a

preservao e anlise de locais de crime, coleta, preservao e custdia de amostras, de
forma a garantir s partes, em momentos posteriores, a possibilidade de aferio da
existncia ou no de uma cadeia de custdia no levantamento do local de crime e no
tratamento dos vestgios, o que, em ltima instncia, ir garantir a credibilidade das provas
e a imparcialidade em sua formao.

Estes momentos de aferio podero se dar antes, durante ou aps a

elaborao do laudo pericial. Dar-se- antes, quando se tratar de vestgios a serem
analisados, devendo estes permanecer devidamente depositados em centro de custdia de
vestgios dos rgos periciais e disponveis para exibio. O segundo momento se dar

139

durante o exame dos vestgios, na presena das partes, ainda que leigas. Por ltimo, restar
a possibilidade de aferio atravs do laudo pericial.

Este ltimo momento o mais importante, pois o laudo pericial dever

consubstanciar no apenas os usuais aspectos tcnicos e cientficos ou cuidados
empreendidos e exigidos para garantia de sua credibilidade, mas tambm, e,
principalmente, a demonstrao da efetiva aferio pelos interessados em sua elaborao.

Deste modo, o laudo pericial servir tambm como forma de certificao do

cumprimento dos requisitos mnimos exigidos para sua participao na formao do
conhecimento judicial, no se olvidando a possibilidade e, para alguns casos, a necessidade
de exerccio do tradicional controle contraditrio diferido.

O exerccio da aferio preliminar efetuada pelas partes contribuir para

elevar a eficincia do contraditrio possvel das provas periciais. Entretanto, sua existncia
no eximir o magistrado da observncia de cautelas at mais rigorosas que as empregadas
quando da valorao das provas formadas no processo e sob a gide do contraditrio ideal,
uma vez que sempre dificultoso um controle efetivo dos atos praticados sem a imediao
do juzo e, principalmente, acerca aqueles que versem sobre matria tcnica diferente do
direito.

Mesmo que no aprovada a proposta de reforma do Cdigo de Processo

Penal na ampliao do contraditrio, levando consigo parte de nossas expectativas quanto
elevao do padro tcnico-cientfco das provas periciais em geral, restar, ao menos
para as percias pautadas em DNA, a esperana da rpida e efetiva da implementao do
projeto da SENASP/MJ, anteriormente visto, em prol da excelncia na elaborao destas
provas.

Ainda que haja o alcance desta to almejada excelncia tcnica, ela poder
ser frustrada se os operadores do direito, receptores finais das provas periciais, no
estiverem preparados para o uso das complexas informaes contidas nas provas de DNA e
nem conscientizados do real alcance e das limitaes da tcnica, tida por muitos deles
como absoluta, infalvel e imbatvel.

140

Atitudes coadjuvantes, como eventos de integrao entre rgos periciais e

instituies correlatas a estes operadores, podem promover a oportunidade para quebrar a
aura mtica destas provas e para alertar sobre a possibilidade de ocorrncia de erros
procedimentais. Estes encontros podem servir tambm para explicar o complexo
significado da valorao probabilstica dos resultados dos testes de DNA, bem como a
postura cautelosa que se deve ter de no se desprezar o conjunto dos outros elementos
probantes em prol do DNA que deve apenas ser tido como um referencial a mais.

2. A tipagem do DNA e a sociedade

Conforme expressa o relatrio NRC de 1992, bem como o que acima em

parte j relatamos, a introduo de qualquer tecnologia nova causa preocupaes com
relao a seu impacto sobre a sociedade. Possveis danos a interesses pessoas, custos
financeiros e ameaas liberdade ou privacidade so somente algumas inquietaes
tipicamente expressas quando uma nova tecnologia surge no horizonte. A tecnologia da
tipagem do DNA potencialmente descobre e traz luz inumerveis informaes que a
maioria das pessoas considera extremamente particulares.

O programa genoma humano forneceu uma quantidade enorme de

informaes genticas, gerando novos bancos de dados. Uma preocupao bsica advinda
deste programa a da defesa do sigilo das informaes genticas de uma pessoa. Como
alerta o citado relatrio, com a maior compreenso do genoma humano, aumentar o
potencial para uso indevido das amostras de DNA, coletadas ou preservadas para uso da
justia criminal. Quanto mais bancos de dados de perfis genticos forem estabelecidos,
maior ser o risco de violao do sigilo e de uso indevido das informaes.

O uso forense da tecnologia do DNA vem ocasionando, em nvel mundial,

vrios impactos econmicos. A proliferao do uso de exames de DNA em investigaes e
julgamentos faz exigir um aumento do nmero de especialistas e de laboratrios. O custo
das instalaes fsicas destes laboratrios, bem como o dos equipamentos, dos materiais e
dos recursos humanos j muito grande, sem se olvidar o custo para implantao de
centros necessrios para armazenamento de material para os bancos de dados e para
identificar suspeitos.

141

Custos adicionais relacionados a treinamento, certificao e proficincia

tambm devem ser computados, pois a implementao de qualquer tecnologia nova requer
treinamento e certificao do pessoal. Custos decorrentes do desenvolvimento de
mecanismos que assegurem programas de CQ e GQ nos laboratrios que realizam testes
forenses de DNA devem tambm ser includos.

A tecnologia do DNA acaba por impor, direta ou indiretamente, uma

demanda fiscal sociedade j que o custo da justia criminal aumenta, ainda que este possa
ser aliviado pela excluso precoce de suspeitos inocentados. Pode-se entender estes gastos
como justificveis em vista das vantagens decorrentes do emprego da anlise de DNA no
meio forense, sendo um claro exemplo disto o Projeto Inocncia desenvolvido nos Estados
Unidos com fundos federais. Este projeto, atravs da utilizao da anlise de DNA por
mtodos de altssima sensibilidade, tem permitido a reabertura de casos que tem levado
libertao de prisioneiros (alguns j na fila de execuo) condenados por erros judiciais
(JOBLING; GILL, 2004).

Em relao aos aspectos ticos que envolvem o uso das informaes

advindas da tecnologia do DNA, oportuno aqui ressaltar, complementando e
corroborando nossas colocaes de ordem prtica j feitas, a conciso de idias do relatrio
NRC de 1992 (p.163) sobre o assunto:

As consideraes ticas com relao ao uso da tecnologia do DNA na cincia

forense se sobrepem a vrias questes tratadas nas anlises sociais e legais,
incluindo os direitos reais e processuais das pessoas e os custos e benefcios
globais no financeiros que provavelmente resultam quando se estabelece o uso
da nova tecnologia nos processos nos tribunais.

De tais consideraes, resultaram recomendaes desta entidade para que,

no contexto forense, tal qual no cenrio mdico, a informao contida no DNA seja
considerada pessoal e que a privacidade da pessoa e a necessidade de sigilo devem ser
respeitadas. A liberao de informaes sobre o DNA de uma populao de criminosos,
sem a permisso dos sujeitos e com finalidades outras que o cumprimento da lei, deve ser
considerada uso indevido de informao, e devem ser estabelecidas sanes legais para

142

deter a disseminao no autorizada ou a aquisio de informao sobre o DNA que foi

obtida para finalidades forenses.

Outro impacto social importante causado pela introduo de novas e

poderosas tecnologias a criao de expectativas injustificadas ou irreais sobre elas. Com
a tipagem de DNA no foi diferente. Neste sentido, a fora da mdia no s impressionou
pessoas do cenrio forense como as de camadas mais carentes da populao, normalmente
alheias s notcias de qualquer conquista tecnolgica.

Em relao ao meio forense, dois aspectos contribuem para que sejam

criadas expectativas inadequadas sobre a tecnologia da tipagem do DNA. O primeiro deles
resulta da extraordinria probabilidade de identificao do autor de um crime. O segundo
diz respeito falta de entendimento do alcance e das limitaes da tcnica dada a sua
complexidade, tendendo a levar, em conjunto com o primeiro, ao alijamento de outros
elementos do conjunto probatrio. Impressionados com o propalado poder da tipagem do
DNA, podem os julgadores negligenciar a possibilidade de erros cometidos pelo
laboratrio, o que no ocorreria se suas expectativas sobre o DNA fossem as mesmas
esperadas para outras tcnicas.

A adequao das expectativas aos reais alcances da tecnologia da tipagem

do DNA ser fruto de um processo a ser iniciado no meio forense e que acabar por incutir
em toda sociedade uma cultura do DNA mais apropriada e madura, sendo certo que os
analistas forenses, detentores dos reais conhecimentos sobre a tecnologia, desempenharo
um papel desmistificador preponderante neste processo.

Por ltimo, no rol das recomendaes do relatrio da NRC de 1992,

ratificadas pelo relatrio de 1996, concernentes tipagem do DNA e a sociedade,
encontram-se aquelas relacionadas com a responsabilidade e vigilncia pblica dos
laboratrios que realizam os testes de DNA e com a necessidade de intercmbio
internacional para assegurao de padres.

A primeira destas recomendaes vem da preocupao de que, como a

aplicao da tipagem de DNA na cincia forense deve ser usada a servio da justia,
particularmente importante para a sociedade criar mecanismos para o estabelecimento de

143

responsabilidades

assegurar

uma

vigilncia

pblica

adequada,

ficando

tal

responsabilidade vinculada a testes de proficincia e credenciamento dos laboratrios. A

recomendao vem, ento, no sentido de que devem ser estabelecidos mecanismos para
assegurar a responsabilidade dos laboratrios e do pessoal envolvido na tipagem do DNA e
para tornar possvel uma fiscalizao pblica adequada.

A segunda dessas recomendaes assevera que esforos para cooperao

internacional devem ser envidados para assegurar padres internacionais uniformes e um
intercmbio o mais amplo possvel de conhecimentos cientficos e especializao tcnica.
Estas recomendaes foram j cumpridas pela existncia de slidas entidades
fomentadoras do almejado intercmbio. O cumprimento da primeira delas depender, ao
menos em nosso pas, de grandes esforos governamentais.

144

CONCLUSES
1.

Os avanos da Biologia Molecular favoreceram o aperfeioamento e o

desenvolvimento dos testes de identificao humana. Com o
surgimento de tcnicas moleculares para avaliao de caractersticas
genticas dos indivduos atravs de estudos do DNA, os testes
tradicionais foram sendo sistematicamente substitudos, dando-se,
desta forma, o incio de uma nova e significativa fase do
desenvolvimento da Medicina Forense.

2.

O estudo dos polimorfismos de STRs e o do DNA mitocondrial

baseados na PCR so os mais adequados para as anlises dos vestgios
que rotineiramente aportam nos laboratrios forenses voltados
elucidao de crimes e identificao de cadveres.

3.

Cuidados indispensveis devem ser tomados para a coleta de materiais

e manuteno da cadeia de custdia das amostras que sero estudadas,
no se olvidando tambm dos aspectos ticos e garantias legais dos
acusados que permeiam esta questo.

4.

Para que o poder das provas pautadas em anlises de DNA no se

esmaea no exerccio do contraditrio, os analistas devem se cercar de
cuidados tcnicos na realizao da anlise e, principalmente, na
confeco do laudo pericial, pois, ao menos em nosso sistema legal,
atravs desta pea que transparece todo esforo por eles empreendido
na elaborao da prova.

5.

Os procedimentos laboratoriais utilizados para a anlise de DNA

devem seguir as padronizaes recomendadas por entidades
preocupadas em garantir resultados de alta qualidade, uma vez que h
a possibilidade de erros decorrentes de prticas laboratoriais.

145

6.

A taxa geral de sucesso das anlises realizadas pelo Laboratrio de

DNA do Instituto de Criminalstica de So Paulo est dentro dos
ndices esperados para um laboratrio de DNA voltado elucidao
de crimes e identificao de pessoas. Contudo, apesar do nmero de
casos atendidos ser condizente com o porte do laboratrio, o volume
de servios prestados no significativo frente aos notrios ndices de
violncia e criminalidade no Estado de So Paulo.

7.

O emprego da anlise de DNA no meio forense impe direta ou

indiretamente uma demanda fiscal sociedade. Porm, em
contrapartida, contribui para o oferecimento de um servio policial e
judicial mais eficiente e preciso aos cidados.

8.

O ideal em um sistema de provas, inclusive o brasileiro, considerar o

exame de DNA um meio concreto que poder contribuir para a
reconstruo dos fatos durante o processo. Saliente-se, entretanto, que
sua interpretao e valorao ficam sujeitas a eventuais distores em
vista de sua complexidade.

9.

A ampliao do contraditrio em nosso sistema legal, aliada a

medidas educativas e a aes governamentais, certamente contribuir
para que se alcance a excelncia tcnica necessria para a realizao
das provas de DNA.

10.

Devem ser envidados esforos no sentido de preparar os operadores de

direito para o uso das complexas informaes contidas nas provas de
DNA, bem como conscientiz-los do real alcance e das limitaes da
tcnica, de forma a expurgar qualquer falsa expectativa sobre seu
poder probatrio.

11.

O papel do analista forense no o de proceder a identificaes

nominais de cadveres ou fazer presunes de culpabilidade ou de
inocncia, mas o de fornecer informaes exatas para o sistema
judicial e assim contribuir para melhor distribuio de justia.

146

12.

certo que a norma jurdica precise ir ao encalo dos avanos

cientficos, mas certo tambm que o emprego da prova de DNA
deva se dar com prudncia, pois, apesar do grau de certeza e
segurana que pode gerar, est sujeita a erros.

13.

Assim sendo, entendemos que a anlise de DNA mesmo sendo uma

poderosa ferramenta, est longe de ser considerada condio sine qua
non em estudos forenses, devendo a prova de DNA ser considerada
dentro de um conjunto de variadas evidncias.

147

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157

GLOSSRIO

Alelo uma de duas ou mais formas alternativas de um gene.

Amplicons fragmentos de DNA amplificado por PCR.
Anlise de RFLP tcnica que usa sonda de lcus nico ou multilcus para detectar
variaes em uma seqncia de DNA com base nas diferenas de tamanho dos
fragmentos produzidos cortando-se o DNA com uma enzima de restrio.
Banco de dados ou base de dados de DNA uma coleo de perfis de DNA tipados de
indivduos selecionados ou ao acaso.
Banda representao de um fragmento de DNA.
Codificar - representar, sob a forma de cdigo gentico, uma ou mais etapas da biossntese
de uma protena.
Controle de qualidade atividades internas ou atividades conduzidas de acordo com
padres externos usadas para monitorar a qualidade da tipagem de DNA para alcanar
e satisfazer critrios especficos.
Cromossomo - unidade morfolgica e fisiolgica, constituda por fibras cromatnicas
compostas basicamente por DNA e protena e que contm a informao gentica.
Cromossomos sexuais (cromossomos X e Y) cromossomos envolvidos na determinao
do sexo. Em humanos, XX corresponde a pessoas do sexo feminino e XY ao sexo
masculino. Em testes de STR, tais cromossomos so tipados pelo lcus amelogenina.
Decomposio quebra ou destruio do DNA por ao de fungos e bactrias.
Degradao - quebra ou destruio do DNA por meios fsicos ou qumicos.
Deteriorao estado alterado para pior; estrago causado por processo de decomposio
ou degradao sem necessariamente importar na destruio total do DNA.
Desequilbrio de ligao fenmeno em que um alelo especfico de um lcus est associado
de maneira no casual a um alelo de um outro lcus.
Desnaturao processo de desespiralizao do DNA para formar fitas nicas.
Diplide que tem o dobro do nmero de cromossomos tpico dos gametas normais.
DNA - cido desoxirribonuclico - molcula com informaes genticas, formada por
cadeia de polinucletdeos, constituda de grupo fosfato, de acar (desoxirribose) e de
base nitrogenada (adenina, timina, citosina ou guanina) [Sim.: ADN e (ingl.) DNA].
DNA mitocondrial (mtDNA) DNA encontrado no interior da mitocndria (no associado
aos cromossomos nucleares). Sua transmisso se d somente de me para filho.

158

DNA-template amostra de DNA que ser amplificada pela PCR.

Eletroforese migrao das partculas de uma soluo coloidal sob a influncia de um
campo eltrico.
Eletroforese capilar mtodo de separao que utiliza um estreito tubo preenchido por
polmero para propiciar a separao de DNA por tamanho.
Enzima de restrio enzima que cliva molculas de DNA em uma seqncia particular
de nucleotdeos.
Equilbrio de Hardy-Weinberg condio, para um lcus gentico particular e para uma
populao especfica, com as seguintes propriedades: as freqncias allicas do lcus
so constantes no tempo e no h correlao estatstica entre os dois alelos de cada
lcus na populao; uma aproximao desta condio alcanada em grandes
populaes em que os cruzamentos se fazem ao acaso, na ausncia de seleo,
migrao e mutao.
Eucarioto - organismo composto por uma ou mais clulas que possuem ncleo distinto,
envolvido por membrana nuclear; eucarionte.
Fator C quantidade total de DNA presente no genoma haplide, expressa em pares de
bases (pb).
Fentipo - caracterstica de um indivduo, determinada pelo seu gentipo e pelas
condies ambientais
Freqncia allica ocorrncia relativa de um alelo particular na populao.
Gel matriz (usualmente agarose ou acrilamida) usada na eletroforese para separar
molculas.
Gene unidade hereditria ou gentica, situada no cromossomo, e que determina as
caractersticas de um indivduo; uma seqncia de nucleotdeos do DNA.
Genoma constituio gentica total de um indivduo ou zigoto.
Gentipo o conjunto dos genes de um indivduo.
Haplide - que tem nmero de cromossomos tpico dos gametas normais.
Hapltipo - grupo de alelos situados em regies muito prximas, sendo transmitidos em
conjunto para os descendentes.
Heteroplasmia pequenas variaes algumas vezes encontradas em perfis de DNA de
diferentes clulas da mesma pessoa, devido mutaes.diferentes seqncias de bases.
Heterozigoto indivduo com alelos diferentes em um determinado lcus nos dois
cromossomos.
Homoplasmia - seqncia nica de DNA presente na clula.

159

Homozigoto indivduo com alelos idnticos em um determinado lcus nos dois

cromossomos.
Lcus (pl. loci) posio de um determinado gene num cromossomo.
Marcador gene ou uma estrutura gentica com uma localizao conhecida no
cromossomo e com um fentipo bem definido, que usado como referncia para o
mapeamento de outros loci.
Meiose processo de diviso pelo qual as clulas-filhas tm metade dos cromossomos da
clula-me.
Mitose - processo mediante o qual o material gentico duplicado com preciso, gerando
dois novos conjuntos de cromossomos iguais ao original.
Nucleotdeo - unidade constituinte dos cidos nuclicos que, por hidrlise, fornece um
acar, cido fosfrico e uma base nitrogenada. Nos nucleotdeos do cido
desoxirribonuclico, o acar a desoxirribose e a base nitrogenada pode ser timina,
adenina, citosina ou guanina.
Padres critrios estabelecidos para controle de qualidade e segurana de qualidade;
reagentes conhecidos como, por exemplo, padres de peso molecular.
pb (par de bases) - dois nucleotdeos complementares no DNA; o pareamento de bases
ocorre entre A (adenina) e T (timina) e entre G (guanina) e C (citosina).
PCR (polymerase chain reaction) ou Reao em cadeia da polimerase processo de
amplificao que produz milhes de cpias de desejadas regies do DNA atravs de
repetidos ciclos que envolvem a enzima DNA-polimerase.
Polimrfico um lcus polimrfico se uma populao contiver dois ou mais alelos
detectveis.
Polimorfismo presena de mais de um alelo de um gene em uma populao em uma
freqncia maior do que aquela provocada por mutao nova; operacionalmente , a
populao em que o alelo mais comum em um lcus tem uma freqncia menor que
99%.
Populao um grupo de indivduos que ocupa uma determinada rea em um determinado
momento.
Primer ou iniciador curta seqncia de nucleotdeos (em geral, 17 a 23 bases)
complementares a uma regio do DNA, que delimita a regio que ser amplificada na
reao de PCR.
Procarionte - organismo formado por uma nica clula desprovida de membrana nuclear;
procarioto.

160

RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) polimorfismo de comprimento do

fragmento de restrio; variao do tamanho dos fragmentos de DNA produzidos por
uma endonuclease de restrio que corta o DNA em um lcus polimrfico.
SNP - polimorfismo nucleotdeo nico - uma substituio de base simples dentro da
seqncia do DNA.
Sorologia disciplina que estuda a imunologia dos fluidos orgnicos.
Southern blot membrana de nilon qual o DNA adere aps o processo de Southern
blotting.
Southern blotting tcnica de transferir do gel para a membrana de nilon os fragmento
de DNA que foram separados por eletroforese.
STR (short tandem repeat) repeties curtas repetitivas de bases nitrogenadas.
Stutter produtos de amplificao da PCR que possuem uma ou mais unidades de
repetio a mais ou a menos do tamanho que possui o verdadeiro alelo; artefato.
Tandem - [Do lat. tandem, 'finalmente', pelo ingl. tandem, 'um depois ou atrs do outro'.]
conjunto de unidades alinhadas, uma atrs da outra, consecutivas.
Taq polimerase uma DNA-polimerase usada para formar DNA de dupla fita a partir de
uma mistura de nucleotdeos e um molde de DNA de fita simples, na tcnica
conhecida como PCR.
Teorema de Hardy-Weinberg aplicado para estimar freqncias gnicas e genotpicas
de populaes em equilbrio e para verificar se uma populao est ou no em
equilbrio gentico, ou seja, se est ou no evoluindo.
Testes de proficincia testes para avaliar a competncia de tcnicos e a qualidade do
desempenho do laboratrio; em testes abertos os tcnicos esto cientes que esto sendo
testados, mas em testes cegos eles no esto informados; testes de proficincia internos
so conduzidos pelo prprio laboratrio, enquanto que testes externos so conduzidos
por uma agncia independente do laboratrio que est sendo testado.
VNTR (variable number of tandem repeat) nmero varivel de repeties consecutivas
de bases nitrogenadas.

161

ANEXOS
ANEXO 1
Resoluo SSP-194, de 2-6-99
Estabelece normas para coleta e exame de materiais biolgicos para
identificao humana.
O Secretrio da Segurana Pblica, nos termos do Decreto 42.815, de 19, publicado a 201-98, Considerando:
a) a necessidade de normalizar os servios periciais relativos coleta de materiais
biolgicos para exames de identificao humana, tanto nos locais de crime quanto na
pessoa humana, viva ou morta;
b) que os procedimentos a serem seguidos pelos rgos policiais e periciais oficiais devem
estar em consonncia com os ditames da legislao em vigor, e
c) que imprescindvel correta preservao das amostras para no haver contaminaes
ou outros prejuzos,
RESOLVE:
I - DISPOSIES GERAIS
Artigo 1 - A coleta de material biolgico e os procedimentos preliminares para exame de
identificao humana pela anlise do DNA ou equivalente seguiro as normas e
procedimentos dispostos no ANEXO desta Resoluo.
Pargrafo nico - Por exame de identificao humana entende-se todo e qualquer
procedimento experimental biolgico ou bioqumico tendente a estabelecer a identidade da
pessoa humana, bem como sua incluso ou excluso em anlises de confronto entre o
material coletado e aquele por ela, ou seus parentes, fornecido.
Artigo 2 - As anlises de DNA sero realizadas exclusivamente em materiais
relacionados, direta ou indiretamente, a ilcitos penais, salvo determinao legal em
contrrio, e desde que estejam acompanhadas dos respectivos padres biolgicos para
confronto.
Artigo 3 - As coletas em locais de crimes, mediatos ou imediatos, ou ainda, idneos ou
inidneos, para os exames definidos no artigo 1, sero procedidas, exclusivamente, por
Peritos Criminais, ressalvado o disposto no artigo 5.
1 - Ficam impedidos de proceder s anlises de laboratrio os Peritos que efetuaram a
coleta de material em local.
2 - Os Peritos Criminais que coletaram as amostras elaboraro o respectivo laudo
pericial, do qual far parte o relatrio do exame de identificao requisitado.
Artigo 4 - Somente sero recebidas para anlises biolgicas de identificao humana as
amostras de acordo com as normas aqui estabelecidas.
1 - No havendo condies imediatas de confronto pela ausncia de material padro
para comparao, mas sendo o caso de interesse judicirio para futura identificao, as
amostras que, aps anlise prvia por Perito especialista em identificao humana,
revelarem-se adequadas, sero devidamente selecionadas, etiquetadas e preservadas, pelo
prazo de 90 (noventa) dias, para futuro exame.

162

2 - O interesse judicirio a que alude o pargrafo anterior dever estar devidamente

expresso e justificado na requisio de exame pericial.
3 - Decorrido o prazo aludido no pargrafo anterior, e no havendo nova manifestao
do requisitante, o material ser descartado.
4 - Havendo possibilidade tecnolgica, as amostras a serem preservadas podero ser
analisadas, sendo o resultado desta anlise registrado em computador para futuro
confronto.
Artigo 5 - competncia exclusiva de Mdico Legista a coleta de material biolgico para
fins de identificao de pessoas vivas ou cadveres, nos termos desta Resoluo.
Pargrafo nico - A coleta de material biolgico em pessoas vivas ser feita somente em
locais apropriados e com o expresso consentimento destas.
Artigo 6 - Em toda coleta de material biolgico de pessoas vivas, suspeitas, vtimas ou
parentes consangneos de primeiro grau e de envolvidos em crimes, ser lavrado um
termo de coleta, contendo:
a) nome do doador;
b) nmero da Cdula de Identidade e respectivo rgo expedidor;
c) somente no caso de coleta de amostra de sangue:
l ) declarao de estar doando voluntariamente 02 (duas) amostras de sangue perifrico, a
serem colhidas por puno venosa;
2) declarao de no haver recebido transfuso sangnea nos ltimos 90 (noventa) dias e
no ter sido submetido a transplante de medula ssea;
d) nmero do Boletim de Ocorrncia Policial, Inqurito ou Processo a que se refere o caso,
bem como da Autoridade requisitante;
e) local, data e horrio da coleta;
f) assinatura do doador, do Mdico Legista e de 02 (duas) testemunhas. No caso do doador
ser analfabeto ou incapacitado, alm de sua impresso digital, ser exigida a assinatura de
uma terceira testemunha a rogo;
g) declarao do doador de que est fornecendo o material de livre e espontnea vontade;
h) declarao do rgo coletor de que a coleta ser utilizada exclusivamente para exames
forenses relacionados com a ocorrncia em tela, visando preservar seus direitos de pessoa
humana e evitar imputaes criminosas indevidas.
II - DISPOSIES TRANSITRIAS
Artigo 7 - O Instituto de Criminalstica, atravs do Centro de Exames, Anlises e
Pesquisas, planejar e providenciar o necessrio treinamento para as equipes periciais
designadas estarem aptas coleta de amostras, a iniciar-se no prazo mximo de 30 (trinta)
dias da data de publicao desta Resoluo.
Pargrafo nico - At que a Superintendncia da Polcia Tcnico-Cientfica esteja
estruturada para o treinamento aludido no "caput", a Academia de Polcia Civil fornecer o
necessrio aporte didtico e administrativo.
Artigo 8 - Esta Resoluo entrar em vigor na data de sua publicao, revogando-se as
disposies em contrrio.

163

ANEXO
DISPOSIES PRELIMINARES
I - Durante qualquer coleta de material biolgico imprescindvel a utilizao de luvas
descartveis, para que se evite contaminao exgena.
II - Todos os instrumentos e materiais utilizados na coleta devero ser estreis.
III - Devero ser evitadas coletas de amostras contaminadas por terra, vegetais e outros
elementos orgnicos.
IV - Cada vestgio eleito para coleta dever ser fotografado, ter sua origem descrita em
relatrio individual de identificao, indicando a data e a natureza da ocorrncia; o local, a
forma e as condies da coleta; o horrio em que foi coletado, consignando-se, quando
possvel, o tempo aproximado aps o crime; bem como a forma utilizada para
acondicionamento e preservao.
V - Qualquer material que se destine anlise forense de DNA dever, desde sua coleta at
seu encaminhamento final, ser acondicionado isoladamente e devidamente identificado,
atravs de relatrio preceituado no item anterior.
VI - Todo material mido coletado dever permanecer em embalagem plstica pelo tempo
mximo de duas horas.
VII - Para que se evite a degradao e a contaminao por microrganismos, o material a ser
analisado, quando mido, dever ser necessariamente seco antes de seu acondicionamento
final.
DA COLETA, ACONDICIONAMENTO, PRESERVAO E ENCAMINHAMENTO
DE MATERIAL BIOLGICO PARA ANLISE BIOLGICA DE IDENTIFICAO
A) Amostras relacionadas a locais e instrumentos de crime
1. Fluidos lquidos (sangue, esperma e saliva)
VIII - Os fluidos lquidos devero ser colhidos atravs de dispositivos prprios para coleta
deste tipo de material, composto por haste longa, flexvel, com ponta de algodo
(denominados swab) ou gaze. Devero secar temperatura ambiente em local ventilado e
abrigado da luz solar, acondicionados isoladamente em envelope de papel escuro ou na
prpria embalagem do swab, e armazenados preferencialmente em congelador a vinte
graus Celsius negativos (-20C) ou, na impossibilidade, em geladeira, a quatro graus
Celsius (4C).
2. Demais fluidos lquidos (urina e outros).
IX - Devero ser colhidos com seringa ou pipeta plstica, transferidos para frasco prprio e
armazenados sob refrigerao.
3. Fluidos lquidos contidos em vestes ou em objetos
X - As vestes ou os objetos umedecidos por manchas de fludos biolgicos devero ser
secos temperatura ambiente, em local ventilado e protegido da luz solar, acondicionados
em envelope de papel escuro ou caixa de papelo prpria e armazenados sob refrigerao.
4. Fluidos secos (sangue, esperma, urina, saliva e outros)
XI - Vestgios de material biolgico seco, contidos em pequenas reas de vestes ou em
pequenos objetos, devero, quando possvel, ser enviados em sua totalidade para anlise.
XII - No caso destes vestgios serem encontrados em grandes objetos ou superfcies no
absorventes como metais, paredes e mveis, a mancha de material biolgico dever ser

164

retirada com o auxlio de uma lmina de bisturi ou esptula prpria para raspagem ou,
ainda, com o uso de swab umedecido em gua destilada estril e, neste ltimo caso,
proceder-se- necessariamente, aps a coleta, a secagem do material.
XIII - Em caso dos vestgios estarem contidos em objetos que possam ser cortados como
carpetes, tapetes e madeira, o fragmento com a mancha dever ser recortado com o auxlio
de tesoura ou bisturi.
XIV - Todo vestgio de material biolgico seco, independentemente do mtodo utilizado
para sua coleta, dever ser acondicionado isoladamente em envelope de papel escuro ou
caixa de papelo prpria e armazenado sob refrigerao.
5. Tecidos, rgos, dentes e ossos novos ou antigos
XV - Devero ser retirados fragmentos ou partes inteiras de tecidos, rgos, dentes e ossos
com a utilizao de pinas, evitando-se mistura de materiais que devero ser
acondicionados isoladamente em frasco prprio ou em envelope de papel ou caixa de
papelo, de acordo com o tipo de material e armazenados em congelador (-20C).
XVI - Como regra geral de preservao do material biolgico a ser analisado, no deve, em
hiptese alguma, ser utilizada gua oxigenada, substncias custicas (como soda) ou
clarificantes (como gua sanitria), para limpeza de ossos ou dentes.
6. Plos e cabelos
XVII - Sejam as amostras individuais ou em tufos, se misturadas com fluidos e tecidos
corpreos, os plos ou cabelos, com bulbos, devero ser separados dos componentes da
mistura que os contm.
XVIII - Devem ser evitadas amostras desprovidas de bulbos (razes), cujo exame dependa
da extrao diferenciada de DNA (DNA-mitocondrial).
XIX - No caso de amostras midas, o material dever ser seco temperatura ambiente, ao
abrigo da luz solar e em local ventilado e, em qualquer tipo de amostra, cada grupo de
plos ou cabelos dever ser acondicionado separadamente em envelope de papel escuro e
acondicionado sob refrigerao.
B) Amostras post-mortem (em casos de crimes sexuais)
XX - As amostras da vtima devero ser sempre coletadas em duplicata.
XXI - Nos crimes sexuais, alm da coleta de sangue para identificao da vtima, como
preceituada no item XXVII a seguir, devero ser colhidas, com a utilizao de swab,
amostras da vagina, nus, boca e possveis vestgios contidos sob as unhas.
XXII - Smen contido na face, ou outras reas do corpo, tambm pode ser com swab
umedecido em gua destilada estril. Nestes casos, uma outra rea adjacente, livre de
smen, dever ser tambm esfregada com swab para a obteno de um controle.
XXIII - Aps secagem em temperatura ambiente, ao abrigo da luz solar e em local
ventilado, cada swab dever ser isoladamente acondicionado em sua prpria embalagem e
armazenado sob refrigerao.
Amostras-referncia (de origem conhecida)
1. Em vivos:
XXIV - Precedendo-se coleta de material, o suspeito ou familiar de vtima a ser
identificada dever fornecer por escrito seu consentimento de doao, lavrado em um
"Termo de Coleta de Material Biolgico" que seguir junto s amostras para a aceitao do
material a ser analisado.

165

XXV - Aproximadamente 5,0 mL de sangue perifrico devero ser colhidos em duplicata,

atravs de puno venosa, com seringa hipodrmica descartvel e transferidos para tubos
plsticos com EDTA, devidamente identificados e armazenados em congelador (-20 C).
2. Em cadveres:
XXVI - Amostras sangneas colhidas post-mortem podem sofrer problemas de
contaminao e degradao do material para anlise. Assim sendo, recomenda-se, quando
possvel, a retirada de sangue por puno cardaca ou diretamente da cavidade cardaca ou,
ainda, de vaso de grosso calibre.
XXVII - No caso de cadveres carbonizados, em decomposio ou decompostos, podero
ser retirados como amostras, conforme o caso, fragmentos de fgado, msculos, tufos de
fios de cabelos com bulbos, cogulos de sangue contidos nas cavidades e nos rgos,
dentes e ossos, preferencialmente como crista ilaca, fmur ou costela.
XXVIII - Cada amostra dever ser colhida isoladamente e, de acordo com o seu tipo,
preservada e acondicionada conforme as normas aqui dispostas para cada tipo especfico
de material e armazenadas em congelador (-20 C).

166

ANEXO 2
Alguns dos principais mtodos de extrao adotados pelo Laboratrio de DNA do
Instituto de Criminalstica de So Paulo
1 Para extrao de DNA de sangue in natura e bem conservado
EXTRAO DE DNA COM IODETO DE SDIO44
1. Adicionar 300 L de NaI, 6M a 300 L de sangue in natura;
2. Agitar por inverso;
3. Acrescentar 600 L de soluo de clorofrmio + lcool isoamlico na proporo 24:1;
4. Centrifugar por 5 min a 10.000 rpm;
5. Remover o sobrenadante com pipeta e coloc-lo em um novo tubo (desprezar o
restante);
6. Acrescentar 300 L de lcool isoproplico absoluto gelado e agitar o tubo (observa-se o
DNA na soluo);
7. Centrifugar por 5 min a 10.000 rpm;
8. Remover o sobrenadante, por inverso do tubo;
9. Lavar uma vez com lcool isoproplico a 37% e secar em bomba de vcuo;
10.Suspender com 100 L de TE;
11.Deixar em banho-maria a 56C, por 10 min
12.Utilizar 2 L para uma reao de 50 L de PCR (no caso de sangue) o que corresponde
a aproximadamente 400 ng de DNA.

2 - Para extrao de DNA de ossos, dentes ou para manchas de sangue ou sangue in

natura em pssimo estado de conservao
EXTRAO DE DNA COM FENOL-CLOROFRMIO45
1. Pipetar 50 L de sangue in natura ou de medula ssea em um tubo eppendorf de 1,5
mL;
2. Acrescentar 10 L de proteinase K e 300 L de digestion buffer e agitar suavemente
no vrtex por 10 s;
3. Colocar em banho-maria a 56C por:
a) 2 horas, se a amostra for sangue;
b) overnight (18 a 24 h), se o material for medula ssea;
4. Para medula ssea, aps o banho-maria overnight, acrescentar mais 10 L de proteinase
K e incubar mais 1 h a 56C;
5. Acrescentar s amostras, 300 L da mistura fenol, clorofrmio, lcool isoamlico, na
proporo 25:24:1 e, em seguida, agitar suavemente no vrtex at formar uma mistura
homognea;
6. Centrifugar a 10.000 rpm de 1 a 2 min;

44

45

LOPAREV et. al., An efficient and simple method of DNA extraction from whole blood and cell lines to
identify infectious agents. Journal of Virological Methods, v.34, p.105-112, 1991.
MANIATIS, T.; SAMBROOK, I.; FRITSCH, E. F. Molecular Cloning, 2nd ed. New York: Cold Spring
Harbor. 1996. v.3, E3-E4.

167

7. Separar o sobrenadante (fase aquosa) com uma pipeta (cuidando sempre para no puxar
a interfase) e transferi-lo para um outro tubo de 1,5 mL,
8. Se o sobrenadante no estiver limpo, repetir a operao por uma ou duas vezes,
voltando ao item 5;
9. Acrescentar ao sobrenadante (fase aquosa) 200 L de acetato de amnia, 6M (este item
no obrigatrio);
10.Acrescentar 300 L de etanol absoluto gelado e agitar lentamente por inverso do tubo.
Nesta fase possvel visualizar uma nuvem de DNA que se precipita lentamente.
Caso tal nuvem no seja visvel, colocar a mistura na geladeira (4C) por 1 h, pois a
baixa temperatura ajuda na precipitao;
11.Centrifugar a 5.000 rpm por 1 min e inverter o tubo com cuidado para desprezar o
sobrenadante;
12.Lavar o pellet de 1 a 3 vezes com etanol 70% gelado;
13.Desprezar o sobrenadante por inverso do tubo e deix-lo secar (bomba de vcuo
favorece a secagem);
14.Aps constatao da ausncia de lquido no tubo, acrescentar de 50 a 100 L de TE
para solubilizar o DNA e colocar o tubo em banho-maria a 56C por 15 min e o material
j estar pronto para quantificao ou reao de PCR.
OBS: No ser necessria a precipitao com lcool, caso se utilize filtro MICROCON.

3 Para extrao de DNA de ossos em pssimo estado de conservao

EXTRAO DE DNA DE OSSO USANDO DNA-IQ46
A) SOLUES
1) Soluo de proteinase K 944 L de Bone Incubation Buffer + 56 l de soluo de
PK (volume final 1mL);
2) DTT 1M 5 g de DTT para 32,4 mL de gua;
3) Tampo de lise 1 L DTT 1M + 100 L de Lysis Buffer;
4) 1X Wash Buffer 15 mL etanol 96% + 15 mL de lcool isoproplico + 30 mL de 2X
Wash Buffer.
B) PROTOCOLO
1) Colocar 2 g de osso pulverizado em 3 mL de soluo de proteinase K a 56oC por 1 h
(ou mais);
2) Centrifugar a 5000 rpm por 5 min e transferir a soluo para outro tubo;
3) Adicionar 2X o volume de tampo de lise;
4) Levar ao vrtex o tubo com a resina e adicionar 15 L de resina amostra;
5) Levar ao vrtex a mistura amostra/tampo/resina por 5 s;
6) Deixar temperatura ambiente por 10 min, invertendo o tubo de 1 a 3X;
7) Levar ao vrtex por 5 s e colocar tubo na estante magntica;
8) Remover e descartar a soluo;
9) Colocar 100 L de tampo de lise e levar ao vrtex por 2 s;
10) Transferir a mistura para tubo de 1,5 mL;
11) Levar ao vrtex por 2 s e colocar o tubo na estante magntica;
12) Remover e descartar a soluo;
13) Colocar 100 L de Wash Buffer 1X;
46

Produto de fabricao da Promega Corporation para extrao e purificao de DNA.

168

14) Retirar tubo da estante e levar ao vrtex por 2 s;

15) Colocar tubo na estante, remover e descartar o tampo;
16) Repetir 2X passos 13, 14 e 15;
17) Secar a resina com tubo aberto na estante magntica por 5 min (ateno: no deixar
secar por mais de 20 min);
18) Colocar de 25 a 100 L de Elution Buffer (quanto menor volume, mais concentrado
ficar o DNA);
19) Fechar tubo, levar ao vrtex por 2 s e deixar a 65oC por 5 min;
20) Retirar do banho, levar ao vrtex por 2 s e colocar imediatamente na estante magntica;
21) Retirar a soluo e transferir para outro tubo. Armazenar DNA a mais ou menos 4oC.
Componentes do Kit DNA-IQ:
Elution Buffer 15 mL;
2X Wash Buffer 30 mL;
Lysis Buffer 40 mL;
Resin 900 L;
Bone Incubation Buffer 300 mL.

4 Para extrao de DNA de manchas, lminas e swabs contendo esperma

EXTRAO DIFERENCIAL DE DNA PELO MTODO ORGNICO47
1. Recortar uma pequena poro de tecido contendo a mancha ou do cotonete (swab)
umedecido em gua (usado para retirar o material da lmina). Colocar em um microtubo
de 1,5 mL;
2. Adicionar 501 L de Tampo de Extrao FNE:

400 L de Tris/EDTA/NaCl*;

25 L de Sarkosil 20%;

75 L de H2O;

1 L de Proteinase K (20 mg/mL)

(*) Tris/EDTA/NaCl: 10mM Tris-HCl - 1mM EDTA - 100mM NaCl, pH 8,0
3. Submeter ao vrtex e centrifugar por 10 s;
4. Envolver o tubo com parafilm e deixar incubando em banho-maria a 37C por 2 horas;
5. Na falta de tubo spin-X, retirar o tecido ou o algodo (que podem ser congelado, se
necessrio) e centrifugar a soluo a 12.000 rpm por 5 min;
6. Transferir o sobrenadante (rico em clulas epiteliais femininas = FNE Frao No
Espermtica) para um microtubo estril e guard-lo** em geladeira (4C) at o incio da
extrao propriamente dita (passo 13);
(**) As Fraes obtidas nesta extrao podem durar at uma semana se mantidas a 4C ou
por mais tempo a -20C. No caso de congelamento, antes da utilizao, as Fraes
devero ser submetidas a banho-maria a 56C por 5 min;
7. Ao pellet (ao que restou no tubo aps a retirada do sobrenadante = FE Frao
Espermtica, rica em espermatozides), acrescentar 500 L de Tampo de Lavagem de
Esperma (previamente preparado: 10 mM Tris-HCl - 10 mM EDTA - 50 mM NaCl 2% SDS, pH 7,5) e submeter ao vrtex;
8. Centrifugar a 12.000 rpm por 5 min;
9. Remover e descartar o sobrenadante;
47

FBI Federal Bureau of Investigation. PCR-based typing protocols FBI Laboratory. Albuquerque: FBI,
1994.

169

10.
11.

Repetir os passos 7, 8 e 9 at um total de 3 lavagens;

Adicionar 357 L de Tampo de Extrao FE:
150 L Tris/EDTA/NaCl;
50 L de Sarkosil 20%;
150 L de H2O;
2 L de Proteinase K (20 mg/mL);
7 L de DTT
12.
Submeter ao vrtex e centrifugar por 10 s;
13.
Envolver o tubo com parafilm e deixar incubando em banho-maria a 37C por 2 h;
14.
Adicionar 400 L de Clorofane {fenol/clorofrmio/lcool isoamlico (25/24/1,
v/v)} s Fraes FNE e FE de cada amostra e agitar suavemente no vrtex por 10 s;
15.
Centrifugar a 12.000 rpm por 3 min;
(FASE DE UTILIZAO DE MICROCON YM - 100 Amicon # 42413)48
16.
Transferir cuidadosamente (sem tocar com a pipeta a membrana do filtro) a fase
aquosa (sem contaminao de solventes) para unidades concentradoras (plstico azul)
de MICROCON que j devero conter 100 L de TE-4 (10mM tris-HCl - 0,1 mM
EDTA, pH 8,0) ou gua estril;
17.
Centrifugar a 500g ( 5.000 rpm) at que o volume tenha sido filtrado ( 15 min);
18.
Adicionar 400 L de TE-4 unidade concentradora do MICROCON e centrifugar
a 500g ( 5.000 rpm) at que o volume tenha sido filtrado ( 15 min);
19.
Adicionar de 40 a 100 L de TE-4 (recomenda-se 50 L) ou gua estril unidade
concentradora do MICROCON.
20.
Para recuperar o DNA extrado, remova o concentrador do tubo que contm o
filtrado (a ser desprezado) e cuidadosamente inverter a unidade concentradora do
MICROCON (contendo 50 L de TE-4) em um novo tubo previamente identificado;
21.
Centrifugar a 500g ( 5.000 rpm) por 5 min;
22.
Utilizar o filtrado que contm todo DNA extrado e concentrado e utiliz-lo para
quantificao e amplificao.

48

Filtro concentrador de DNA fabricado pela Millipore.

170

ANEXO 3
Freqncias allicas observadas para 15 loci STR do sistema PowerPlex 16 para
100 caucasianos da populao brasileira (FIGUEIREDO et al., 2004).
alelo
5
6
7
8
9
9.3
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
19.2
20
21
22
23
24
27
28
29
30
30.2
31
31.2
32
32.2
33.2
34.2
35
35.1
homozigosidade*
teste exato**
PD
PE

D3S1358

TH01
0,00500
0,17000
0,23000
0,14000
0,19500
0,22500
0,03500

D21S11

D18S51

0,02500
0,01000
0,08500
0,09000
0,18000
0,15000
0,13000
0,14000
0,05500
0,05500
0,00500
0,04000
0,02000
0,01000
0,00500

0,00500
0,06500
0,30500
0,31000
0,20500
0,09500
0,01500

Penta E
0,06000

D5S818

D13S317

0,10500
0,03000
0,02000

0,00500
0,01000
0,03500

0,11500
0,07500

0,10000
0,17500
0,15500
0,09500
0,06500
0,06500
0,03000
0,01000
0,04000
0,01500

0,05500
0,38500
0,34000
0,14500
0,02500

0,04000
0,30000
0,32500
0,11000
0,03500

0,159
0,017
0,85640000
0,47093924

0,287
0,630
0,91800000
0,56613593

0,02000
0,01000

0,00500

0,495
0,362
0,89740000
0,53064161

0,017
0,041
0,92940000
0,61603724

0,06500
0,16500
0,20000
0,20000
0,04000
0,05000
0,10000
0,01500
0,09500
0,03500
0,01000
0,015000
0,01000
0,263
0,715
0,96200000
0,72804410

0,969
0,473
0,96860000
0,76701342

0,263
0,764
0,97620000
0,79647518

171

continuao
alelo
D7S820
D16S539
CSF1PO
Penta D
2.2
0,015000
6
7
0,01000
0,03000
8
0,16500
0,02000
0,00500
0,05000
9
0,11000
0,16000
0,02500
0,15000
10
0,26500
0,07000
0,21500
0,16000
11
0,24500
0,32000
0,35000
0,19500
12
0,17500
0,21500
0,30500
0,18500
13
0,03000
0,19500
0,06500
0,16000
14
0,01500
0,06000
15
0,00500
0,00500
0,02000
16
17
18
18.2
19
20
21
22
22.2
22.3
23
24
24.2
25
26
27
homozigosidade*
0,857
0,735
0,412
0,242
teste exato**
0,065
0,395
0,785
0,133
PE
0,91900000 0,91380000 0,88720000 0,94880000
PD
0,60128470 0,57664122 0,49523125 0,69194011
PD = poder de discriminao
PE = poder de excluso
*X2ldf baseado em estimativa imparcial de 2000 rearranjos
** teste exato baseado em 2000 rearranjos

vWA

D8S1179

TPOX

FGA

0,00500

0,01000
0,07000
0,18500
0,25500
0,28000
0,14500

0,00500
0,00500
0,10500
0,05500
0,13500
0,25500
0,25000
0,17000
0,02000

0,51500
0,10500
0,07000
0,25500
0,04500
0,00500

0,00500

0,05000
0,00500

0,194
0,046
0,90480000
0,59566631

0,368
0,466
0,93300000
0,62637293

0,074
0,527
0,81300000
0,41488206

0,00500
0,07000
0,14500
0,14500
0,15500
0,01000
0,00500
0,18000
0,13000
0,00500
0,10500
0,03000
0,01000
0,400
0,156
0,95840000
0,73148288

172

ANEXO 4
Frmulas para clculo de ndice de paternidade (IP) ou de maternidade (IM) e
poder de excluso (PE)

tipo

SP

IP

PE

1/p

p(2-p)

PQ

1/2p

p(2-p)

PQ

PQ

1/2q

q(2-q)

PQ

PQ

PQ

1/(p+q)

2(p+q)-(p+q)2

PQ

1/p

p(2-p)

PQ

PQ

1/(p+q)

2(p+q)-(p+q)2

PQ

PQ

1/2p

p(2-p)

PQ

1/q

q(2-q)

PQ

QR

1/r

r(2-r)

10

PR

QR

1/2r

r(2-r)

11

PQ

QR

PR

1/2r

r(2-r)

12

PR

PR

QR

1/[2(p+r)]

2(p+r)-(p+r)2

13

PR

QR

QR

1/2q

q(2-q)

14

PR

QR

1/2r

r(2-r)

15

ausente

PQ

QR

1/4q

2(p+q)-(p+q)2

16

ausente

PQ

1/2q

2(p+q)-(p+q)2

17

ausente

PQ

PQ

(p+q)/4pq

2(p+q)-(p+q)2

18

ausente

QR

1/2q

q(2-q)

19

ausente

1/q

q(2-q)

IM

PE

20

QR

PQ

ausente

1/4q

2(p+q)-(p+q)2

21

PQ

ausente

1/2q

2(p+q)-(p+q)2

22

PQ

PQ

ausente

(p+q)/4pq

2(p+q)-(p+q)2

23

QR

ausente

1/2q

q(2-q)

24

ausente

1/q

q(2-q)

Notas: Probabilidade de Excluso = 1 (poder de excluso); M = me; C = criana; SP = suposto pai.

173

ANEXO 5
Frmulas para clculo de ndice de parentesco reverso (IPR)
(PEREIRA; MALAGHINI, 2004)

SM

SP

numerador

denominador

IPR

AB

0,5

a2

0,5/a2

AB

AB

0,5

2ab

05,/2ab

AB

BC

0,5

2ab

05,/2ab

AB

AB

0,25

a2

0,25/a2

AB

AC

0,25

a2

0,25/a2

BC

AB

AB

0,25

2ab

0,25/2ab

BC

AB

AC

0,25

2ab

0,25/2ab

BD

AB

AC

0,25

2ab

0,25/2ab

1/a2

AB

0,5

a2

0,5/a2

AB

2ab

0,5/ab

BC

AB

0,5

2ab

0,25/ab

AB

AB

AC

0,25

2ab

0,125/ab

AB

AB

0,5

2ab

0,25/ab

AB

AB

AB

0,5

2ab

0,25/ab

Notas: SM = suposta me; C = cadver; SP = suposto pai.

174

ANEXO 6
Exemplo de laudo de identificao humana emitido pelo Laboratrio de DNA do
Instituto de Criminalstica de So Paulo

Neste trabalho sero omitidos todos os dados que possam implicar a

identificao das partes envolvidas, uma vez que no de nosso conhecimento se caso
continua ou no ainda sub judice.

So Paulo

DELEGACIA DE POLCIA DE A/SP

B. O. N 000/04
I. P. N 00/04
PROCESSO N 000/2004 da 1 Vara Criminal de A/SP
LAUDO N 02/130/00000/2004
NBB/LABORATRIO DE DNA
NATUREZA DO EXAME:

Anlise de DNA genmico para pesquisa de

ocorrncia de vnculo gentico familiar em caso de
ENCONTRO DE CADVER

LOCAL:

Rua Jos da Silva, 25 Bairro da Consolao A/SP

DATA:

01/04/04

PARTES:

HORA:

15:00

XX
FRAGMENTO DE FMUR DO CADVER
ENCONTRADO

REQUISITANTE: Dr. Y DD. Delegado de Polcia da Delegacia de Polcia de A/SP

RELATORES: Peritos Criminais Norma Sueli Bonaccorso e Cristina Lekich Gonzalez

NO ACOMPANHA PEA

175

LAUDO
Aos 29 dias do ms de abril do ano dois mil e quatro, na cidade de So
Paulo e no Instituto de Criminalstica da Superintendncia da Polcia Tcnico-Cientfica da
Secretaria da Segurana Pblica do Estado de So Paulo, em conformidade com o disposto
no artigo 178 do Decreto-Lei n 3.689, de 03 de outubro de 1941, foram designados, pelo
Dr. Jos Domingos Moreira das Eiras, Diretor deste Instituto de Criminalstica, os Peritos
Criminais Dra. Norma Sueli Bonaccorso e Dra. Cristina Lekich Gonzalez para procederem
ao exame supracitado, em atendimento requisio do Dr. Y DD. Delegado de Polcia da
Delegacia de Polcia de A/SP.

1 INFORMAES PRELIMINARES
Cada indivduo possui caractersticas genticas comuns que o inclui como
membro da espcie humana, alm das individuais exclusivas que diferenciam uma pessoa
da outra. A este fenmeno, d-se o nome de "polimorfismo gentico". Os exames de
vnculo gentico de filiao so baseados na anlise das caractersticas genticas que so
prprias e exclusivas para cada indivduo. Tais caractersticas so herdadas, pelos filhos,
de seus pais biolgicos, sendo metade delas proveniente da me e a outra metade do pai.
Essa anlise pode ser realizada pelo estudo de marcadores genticos utilizando sistemas de
amplificao de DNA49 que revelam com grande preciso as caractersticas genticas que
foram fornecidas por cada um dos pais biolgicos ao seu filho, tornando possvel avaliar o
vnculo gentico familiar, com preciso de 99,9999%. Isto significa que podemos
determinar os pais biolgicos, analisando as regies especficas do DNA ou loci genticos
onde ocorrem polimorfismos.
Aps a identificao dos alelos como bandas ou picos, possvel assinalar
com certeza os alelos de DNA do material biolgico estudado e compar-los com o
familiar direto, seja ele o pai, a me, o filho ou a filha. Estes devero apresentar metade
dos alelos iguais aos encontrados no DNA do sangue de quem lhe aparentado na relao
pai/me - filho/filha. No caso de irmos, ter-se-, em mdia, metade das bandas ou picos
similares e no caso de av/av - neto/neta, 25%.

49

cido Desoxirribonuclico - molcula que contm a informao gentica, formada por cadeia de
polinucletdeos constituda de grupo fosfato, de acar (desoxirribose) e de base nitrogenada (adenina,
timina, citosina ou guanina) [Sim.: ADN e (ingl.) DNA].

176

A anlise gentica de vestgios biolgicos est diretamente relacionada com

a quantidade, porm, muito mais com a qualidade do DNA obtido de evidncias. Dessa
forma, muitas vezes, pequenas quantidades de material biolgico so suficientes para a
obteno de material gentico, devido s tcnicas avanadas de amplificao do DNA.
Contudo, deve-se levar em considerao que alguns materiais encontrados em local de
crime, coletados no exame de necropsia e preparados com determinados conservantes ou
oriundos de atos exumatrios podem apresentar substncias contaminantes e/ou
interferentes que implicam a no amplificao do DNA extrado e, por conseguinte, na
impossibilidade de obteno de informaes genticas sobre o material questionado, no
todo ou em parte.

2 OBJETIVO DO EXAME
O presente exame tem por objetivo inicial a determinao do padro de
DNA na amostra cadavrica enviada e, caso se alcance xito na obteno deste padro, por
meio da comparao de gentipos, se buscar estabelecer eventual relao de vnculo
familiar com a amostra sangnea de sua suposta me XX.
3 DOS EXAMES
3.1 Materiais e mtodos
3.1.1. Materiais biolgicos
a)

Amostras de sangue de XX, suposta me do cadver, coletadas

sob Termo n 0000/04 e sob lacre n 000000;

b)

Material sseo (tero superior do fmur esquerdo), retirado do

cadver encontrado que se supe ser fulano de tal, sob lacre n
00000.
Todos os materiais recebidos foram devidamente colhidos, identificados e

preservados nos ditames da Resoluo 194, de 02/06/99, da Secretaria da Segurana

Pblica do Estado de So Paulo50.

50

D.O.E.; Poder Exec., Se. I, So Paulo, 109 (104), quinta-feira, 3 jun. 1999 - 3.

177

3.1.2 Mtodos
a) Extrao de DNA
Amostras do material sangneo acima descrito foram submetidas a mtodos
de extrao para retirada de alquotas de DNA genmico, tendo sido empregada a extrao
salina pelo iodeto de sdio (LOPAREV et al., 199151).
Em relao ao material cadavrico, foram empregadas as seguintes
metodologias de extrao de DNA: orgnica por Fenol/Clorofrmio (MANIATIS;
SAMBROOK; FRITSCH, 198652) e modificado com aplicao de diferentes volumes de
EDTA e concentraes de proteinase K, bem como pelo emprego do sistema de extrao e
purificao DNA IQ (Cat. # DC6700 Lot # 142416 Exp. Date JUN 04), da Promega
Corporation, com emprego de filtros concentradores de DNA MICROCON YM 100 da
Millipore (Cat. # 42413 Lot # R3JN96320).
b) Quantificao de DNA
As amostras de DNA total foram quantificadas em gel de agarose 0,7% e
coradas com brometo de etdio.
c) Amplificao das regies polimrficas do DNA (loci)
As amostras extradas contendo DNA em quantidade satisfatria foram
submetidas ao processo de amplificao pelo mtodo da PCR53, com o emprego dos
seguintes sistemas marcadores ou loci: SISTEMA MULTIPLEX - Power Plex 1.1
System: CSF1PO, TPOX, TH01, vWA, D16S539, D7S820, D13S317 e D5S818 (Cat. #
DC6090 Lot# 144227 Exp. Date Jan 05) e SISTEMA AMELOGENINA, para
determinao do sexo, (Cat. # DC5170 Lot# 174805), sendo ambos os sistemas da
Promega Corporation. Para tal propsito, foi utilizado o termociclador PT-100, fabricado
por M. J. Research, programado de forma especfica, segundo protocolos recomendados
pela Promega Corporation.
d) Caracterizao dos alelos dos loci amplificados
Os produtos de amplificao do sistema multiplex e amelogenina foram
caracterizados, aps separao eletrofortica54, em gel de poliacrilamida desnaturante a 6%

51

LOPAREV et. al. An efficient and simple method of DNA extraction from whole blood and cell lines to
identify infectious agents. Journal of Virological Methods, v.34, p. 105-112, 1991.
52
MANIATIS, T.; SAMBROOK, I.; FRITSCH, E. F. Molecular Cloning, 2nd ed. New York: Cold Spring
Harbor. 1996. v.3, E3-E4.
53
Polimerase Chain Reaction - reao em cadeia da polimerase.
54
Mtodo que submete as partculas de uma soluo coloidal influncia de um campo eltrico, promovendo
a sua diferenciao por migrao; anaforese.

178

e deteco por meio de plataforma de anlise fluorescente FMBIO IIe, da Hitachi Genetic
System.

4 ANLISE E INTERPRETAO DOS RESULTADOS OBTIDOS

a) Quantificao de DNA
Os resultados nesta etapa demonstraram que ambas as amostras analisadas
se encontravam em quantidade suficiente para o prosseguimento das anlises.
b) Amplificao das regies polimrficas do DNA (loci)
Os resultados alcanados esto expressos na tabela abaixo reproduzida.
Perfis allicos e suas respectivas freqncias para os loci analisados, obtidos das amostras biolgicas
oriundas da suposta me XX (a) e do material cadavrico (b)
loci

CSF1PO

TPOX

8/11

7/8

0,027

0,012

0,279

0,461

8/11

7/8

0,027

0,012

0,279

0,461

TH01

vWA

D16S539

D7S820

D13S317

D5S818

14/17

11/12

9/13

9/13

11/13

0,087

0,312

0,104

0,085

0,337

0,248

0,246

0,036

0,118

0,177

14/17

12/13

10/13

8/9

0,087

0,246

0,310

0,088

0,248

0,139

0,036

0,085

sexy

amostras

(a)

(b)

7
0,208

7
0,208

13
0,177

XX

XY

Os alelos expostos na tabela acima deixam evidente que o material

cadavrico de origem masculina e que em todos os loci polimrficos analisados, o perfil
gentico do cadver (item 3.b) apresenta os alelos em comum com a suposta me XX (item
3.a), estabelecendo a condio de incluso de maternidade na ausncia do pai.
Para a verificao da condio estabelecida, suficiente calcular-se o ndice
de maternidade55 na ausncia do pai, tomando-se em conta os valores de freqncias dos
alelos identificados pelos marcadores utilizados, segundo os seus bancos de dados
especficos56.

55

O ndice de Maternidade verificado por meio da razo entre a probabilidade das bandas pertencentes ao
perfil gentico do(a) filho(a) e que estejam em coincidncia com o perfil da suposta me, serem oriundas
dessa suposta me, e a probabilidade delas serem oriundas de qualquer indivduo da populao.
56
Lins, A.M. et al. Development and population study of an eight-locus short tandem repeat (STR) multiplex
system. J. Forensic Sci., v.43, p.1168, 1998.

179

Conforme ilustra o ANEXO A, o valor encontrado para o ndice de

maternidade na ausncia do pai de 237.543,6911. A probabilidade de maternidade57 na
ausncia do pai encontrada, baseando-se nos mesmos parmetros, de 99,9996% e a
probabilidade de excluso58 de 99,7174%.

5 CONCLUSO
Os resultados obtidos e expressos na tabela acima reproduzida e no ANEXO
A oferecem condies para que se possa concluir, aps tratamento estatstico, que existe
uma probabilidade mnima de 99,999%, calculada na ausncia do pai e corroborada com
uma probabilidade de excluso de 99,72%, de que XX seja a genitora da pessoa que deu
origem ao material cadavrico aqui analisado.
O presente laudo foi aqui protocolado sob n 02/130/00000/2004, o qual,
rubricado e assinado, digitado no anverso de 06 (seis) folhas deste impresso mais o
ANEXO A e dele fica aqui arquivada cpia devidamente autenticada.
Era o que havia a relatar59
So Paulo, 27 de maio de 2004

57

58

59

NORMA SUELI BONACCORSO

CRISTINA LEKICH GONZALEZ

Perita Criminal
CRB 2780/01-D

Perita Criminal
CRBM 3315

A Probabilidade de Maternidade calculada de acordo com o Teorema de Bayes, a partir do ndice de

Maternidade, e representa a probabilidade de a suposta me ser a me biolgica do cadver (PM =
[IMC/(IMC +1)]*100).
A Probabilidade de Excluso indica a probabilidade de no se encontrar outro indivduo, aleatoriamente
selecionado na populao, que possua o mesmo perfil gentico da me biolgica do cadver.
O restante dos materiais analisados permanece guardado neste Laboratrio de DNA para eventual nova
percia.

180

ANEXO A do laudo 02/130/00000/2004

IM

IMC

1
2
3
4
5
6
7
8

10,1553
21,3756
4,8077
3,8816
1,0163
6,9444
2,9412
2,8249

237.543,6911

Poder de Excluso
0,5184
0,7223
0,3727
0,5578
0,6218
0,5723
0,3161
0,3227

LOCI
CSF1PO
TPOX
TH01
vWA
D16S539
D7S820
D13S317
D5S818

0,0028 PoEC
PM(%)

99,9996

PEC(%)

99,7174

IM = ndice de Maternidade: com frmula especfica derivada do Teorema de Bayes

Poder de Excluso: com frmula especfica derivada do Teorema de Bayes
IMC = ndice de Maternidade Combinado - IMC = (IM1*IM2*IM3*...*IMn)
PM = Probabilidade de Maternidade - PM =[ IMC/(IMC+1) ]*100
PoEC = Poder de Excluso Cumulativo - PoEC = (PE1*PE2*PE3*...*PEn)
PEC = Probabilidade de Excluso Cumulativa - PEC = (1 - PoEC)*100

181

ANEXO 7
LABORATRIO DE DNA DO INSTITUTO DE CRIMINALSTICA DE SO PAULO
CONTROLE INTERNO DE PROCEDIMENTOS
PASSAGENS DE: EXTRAO QUANTIFICAO AMPLIFICAO APLICAO ELETROFORESE
TCNICO _____A_____ SUPERVISOR ______B______
DATA _15_/_04_/_05_ FOLHA N __01__
TUBOS ORIGINAIS

TUBOS RECEPTORES

182

ANEXO 8
INSTITUTO DE CRIMINALSTICA
Perito Criminal Dr.Octvio Eduardo de Brito Alvarenga
CENTRO DE EXAMES, ANLISES E PESQUISAS - CEAP
NCLEO DE BIOLOGIA E BIOQUMICA - LABORATRIO DE DNA
FICHA GERAL DE ACOMPANHAMENTO DAS ANLISES
PERITOS: _________________/______________ CONTROLE CASO N _______
RE/RA _______________________________
ORIGEM _____________________________
ENTRADA _____/_____/____
INCIO _____/_____/____
TRMINO _____/_____/____
OBS. PRAZO: ________________________
________________________
TIPO DE CASO:

VNCULO FAMILIAR
CONFRONTO
CRIME SEXUAL ( CONSTATAO CONFRONTO)

MATERIAIS RECEBIDOS:
(1) _________________________________________________
(2) _________________________________________________
(3) _________________________________________________
(4) _________________________________________________
(5) _________________________________________________
(6) _________________________________________________
OBS. ESTADO DE CONSERVAO/IDENTIFICAO AMOSTRAS/CADEIA DE CUSTDIA:

PRESENA DE LACRE: ________________________________________________________________

IDENTIFICAO: _____________________________________________________________________
PRESERVAO: ______________________________________________________________________
PREPAROS PR-AMPLIFICAO: ________________________________________________________
EXAMES PRELIMINARES:

UV/LUMINOL ________________________________________________________________________
FOSFATASE CIDA ___________________________________________________________________
N ESPERMATOZIDES/LMINA _______________________________________________________
CONSTATAO SANGUE _____________________________________________________________
PROTENA HUMANA _________________________________________________________________
OUTROS _____________________________________________________________________________
EXTRAO (MATERIAIS/N. TENTATIVAS):

LOPAREV _____
FENOL/CLOROFRMIO _____
EXTRAO DIFERENCIAL _____
DNA IQ:
EXTRAO ______
OUTROS KITS _____

PURIFICAO _____

183

continuao
QUANTIFICAO (AMOSTRAS/RESULTADOS OBTIDOS):
(1) ______________________________________________
(2) ______________________________________________
(3) ______________________________________________
(4) ______________________________________________
(5) ______________________________________________
(6) ______________________________________________

AMPLIFICAO (TAQ/KITS UTILIZADOS):

TAQ: _______________

PP 1.1
PP 2.1
PP 16
AMELOGENINA
MONOPLEX _______________________________________________________
CROMOSSOMO Y
ELETROFORESE (OBS. GEL/CORRIDA):
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________

FICHAS DE CONTROLE INTERNO DE PROCEDIMENTOS: __________________________________

LEITURA:

ANEXOS
CLCULOS ESTATSTICOS:

ANEXOS
RESULTADO/CONCLUSO:
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________
_______________________________________________________________________________________

GUARDA DE MATERIAL PARA NOVA PERCIA: ___________________________________________

DEVOLUO MATERIAIS:
ANEXOS: NO

SIM LACRE(S): ________________________________________

184

ANEXO 9
Sugestes para evitar a contaminao em laboratrio que efetuam tipagem de DNA
pela PCR
Rebouas (2004) recomenda que no laboratrio exista a separao de trs
reas distintas. A rea 1 deve ser destinada ao preparo e extrao de DNA das amostras
recebidas. Na rea 2 deve ser destinada para a mistura de reagentes e pipetagem das
reaes. Aqui deve ser lembrado que, sempre que se forem fazer vrias reaes, deve ser
preparado um master mix, para ser em seguida aliquotado em cada tubo de reao. A rea 3
(ps-PCR) fica destinada anlise dos produtos de PCR.

O fluxo de ar deve se dar das reas 1 e 2 para a rea 3, ou estas reas devem
ser completamente independentes para evitar transmisso de aerossis da rea 3 para as
reas 1 e 2.
Micropipetas exclusivas devem ser dedicadas para cada rea especfica,
sendo que as micropipetas utilizadas na rea 2 para pipetar DNA nas misturas de reao
para PCR devem ser dotadas de dispensadores positivos (que no provocam aerossol) e de
ponteiras com filtro que jamais devem ser reutilizadas.

ideal que a rea 2 tenha cmara de segurana com luz ultravioleta. A

exposio da rea de preparo, do material, e mesmo de alguns reagentes luz ultravioleta
danifica o DNA que eventualmente esteja contaminando o local, tornando-o no
amplificvel, reduzindo-se, assim, a contaminao por molculas de DNA contaminante. A
exposio por 4 horas luz ultravioleta reduz em 1.000 vezes o nmero destas molculas.

Materiais plsticos como tubos e ponteiras no devem ser reutilizados. Todo

material plstico empregado deve ser estril, como tambm devem ser autoclavadas as
partes prprias das micropipetas.

Todas as solues devem ser autoclavadas, com exceo do DNA, da

enzima DNA polimerase e dos dNTPs.

As ponteiras devem ter filtro protetor, o que evita contaminao por

formao de aerossol.

185

Deve ser utilizado um avental especfico para as reas 1 e 2 (pr-PCR). O

avental utilizado na rea 3 (ps-PCR) no deve ser usado nas demais reas.

A rea ps-PCR deve estar distante das reas de preparo de amostra e de

pipetagem dos reagentes.

A troca de luvas descartveis deve ser freqente e obrigatria quando o

analista adentrar a rea 1 ou 2, especialmente se estiver vindo da rea 3.

O DNA que se quer analisar deve ser adicionado por ltimo na reao, de
modo a evitar a transferncia de amostras de DNA de um tubo para outro.

Deve sempre ser feito um controle negativo (sem template ou DNA molde).
O tubo do controle negativo deve ser preparado por ltimo para que seja representativo da
manipulao que ocorreu nos demais tubos.

Para que seja evitada a contaminao na fase de eletroforese, as cubas de

eletroforese, as bandejas e os pentes devem ser bem lavados em soluo de HCl 1 M.

Durante a pipetagem de amostras no gel de eletroforese, uma amostra

colocada em um dos poos pode atingir o poo adjacente, acarretando uma mistura de
amostras. Isto pode ser evitado deixando-se alternadamente poos vazios ou se colocando
as amostras que se quer cotejar em faixas em faixas no adjacentes (NRC, 1996).

Como alerta para que se evite a contaminao carryover deve sempre ser
lembrada a estimativa de que aproximadamente 100 mL de uma reao de PCR usual, se
diludos em um volume de gua equivalente ao de uma piscina olmpica, resultam em 400
molculas por 100 mL da gua da piscina (REBOUAS, 2004).

O DNA contaminante pode ser eliminado pelo uso de dUTP nucleotdeo

(deoxiuridina trifosfato) no lugar de dTTP, usualmente empregado em todas as reaes de
PCR. Os produtos da PCR obtidos desta maneira podem ser seletivamente destrudos pela
enzima Uracil-DNA-glicosilase (UNG), que causa exciso da dUTP. Da mesma forma,

186

todas as amostras-problema seriam tratadas com UNG antes da amplificao pela PCR,
para destruir a contaminao por reaes de PCR anteriores (NRC, 1992).

Rebouas (2004) sugere ainda que no preparo que antecede a extrao de

DNA da amostra, esta deve ser separada em fragmentos que possam ser testados de forma
independente. Sugere tambm que se utilizem os mtodos mais simples de extrao, para
evitar manipulao e possvel contaminao do material. Caso exista quantidade suficiente
de DNA ao final extrao, deve ser sempre feita a eletroforese de uma pequena alquota
deste material em gel de agarose para que seja verificada a qualidade do DNA extrado,
pois o efeito de eventuais contaminantes que poderiam interferir na eficincia da reao
pode ser eliminado diluindo-se a amostra, e conseqentemente, os contaminantes. Isso
possvel, visto que 100 molculas alvo j so suficientes para amplificao.

187

NDICE REMISSIVO
AABB, 89
AAFS, 109
cidos nuclicos, 26, 67, 159
AICEF, 109
ala-D, 31, 40, 65
amostras mistas, 106
AmpFLPs, 37, 38, 39, 74
amplificao de mltiplo deslocamento, 42
amplificao preferencial, 37
amplificaes simultneas, 39
analisadores automticos, 75, 79
anlise de RNAs mensageiros, 42
annealing, 69, 71, 72
anomalias genticas, 87
aspectos ticos, 13, 61, 129, 141, 144
ataques terroristas, 41
auto-radiografia, 35, 36, 39, 103
banco de dados, 12, 24, 56, 81, 83, 84, 85, 86, 99, 111, 113, 114, 116, 127, 132, 157
bases nitrogenadas, 27, 28, 69, 160
cadeia de custdia, 53, 54, 55, 56, 92, 96, 98, 105, 113, 133, 138, 144
clculo da freqncia de um perfil, 83
calibrao de equipamentos, 104
catstrofes, 11, 51
centro de custdia, 54, 127, 138
chances (odds), 87
chelex, 63, 64, 65
cintica da PCR, 71
CODIS, 66, 74
coleta forada, 59
combinao de perfis, 11, 88, 120
caso Enderby, 21
confiabilidade, 53, 102, 103, 110, 121
contaminao, 25, 38, 45, 49, 51, 52, 53, 54, 67, 68, 72, 80, 87, 103, 105, 106, 107, 163,
165, 169, 184, 185, 186
contedo de DNA nas amostras, 21
contraditrio, 53, 59, 93, 108, 138, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 144, 145
contrapercia, 54
contraprova, 54, 55
controle externo de qualidade, 95
controles de qualidade (CQ), 101, 102, 105, 108, 133, 141
credenciamento, 110, 143
credibilidade, 55, 90, 110, 134, 136, 138, 139
cromossomo Y, 39, 40, 68, 74, 126
cross-examination, 129
culpabilidade, 59, 129, 133, 145
cultura do DNA, 112, 113, 115, 142
Daubert v. Merrell Dow Pharmaeuticals, 130
deposio direta, 44

188

desastre em massa, 11
desempenho laboratorial, 101, 104, 111
desnaturao, 36, 69, 70, 157
determinao da causa mortis, 42
dotblot, 37, 38, 40
EDNAP, 108
eletroferograma, 79, 80
eletroforese, 36, 39, 68, 75, 79, 104, 106, 158, 160, 181, 185, 186
ENFSI, 73, 74, 109
enzimas de restrio, 35
equilbrio de HW, 82, 83, 85, 87, 90
equilbrio de ligao (EL), 83, 87
erros de manipulao, 51, 101, 104, 105
erros judiciais, 96, 141
escada allica, 76, 77, 80, 87
estrutura do DNA, 27
excelncia, 14, 51, 101, 103, 104, 111, 133, 134, 139, 145
extension, 69
extrao diferencial, 65, 66, 106, 168
extrao orgnica, 62, 63, 64, 66, 67, 71, 166, 169, 177
falcia da defesa, 89
Federal Bureau of Investigation (FBI), 39, 46, 64, 74, 109, 168
fentipo, 17, 24, 158, 159
filtros concentradores de DNA, 64, 177
fingerprint of DNA, 35
fluorforos, 39
formulao de quesitos, 92, 93, 99, 135, 137
Frye v. Estados Unidos, 130
garantia de qualidade (GQ), 101, 102, 103, 108, 133, 141
gel de agarose, 68, 72, 158, 178, 186
gel de poliacrilamida, 39, 75, 76, 77, 78, 158, 177
gmeos idnticos, 18, 81
gneros alimentcios, 25
gentica populacional, 83, 84, 132, 133
genoma mitocondrial, 40
gentipo, 17, 18, 19, 38, 80, 81, 82, 83, 85, 131, 133, 158, 176
GITAD, 46, 109, 118
grupos sangneos, 19
Hardy-Weinberg, 82, 83, 85, 87, 79, 158, 160
heterozigoto, 35, 80, 82, 83, 84, 85, 158
hibridizao, 36, 42, 69
HLA, 20, 22, 38, 39
homoplasmia, 40, 158
homozigoto, 82, 83, 84, 85, 159
identificao de cadveres, 39, 51, 89, 91, 97, 117, 118, 119, 120, 124, 126, 128, 144
identificao nominal, 100, 145
IMESC, 119
in dubio pro reo, 136
incidentes jurisdicionalizados, 138
incompatibilidade de resultados, 105

189

ndice avuncular, 91
ndice de maternidade, 172, 178, 179, 180
ndice de maternidade cumulativo, 179, 180
ndice de parentesco reverso (IPR), 91, 173
ndice de paternidade (IP), 89, 172
ndice de paternidade cumulativo (IPC), 89
inibidores da PCR, 37, 65, 66, 121, 122
Inmetro, 110
interdisciplinaridade, 137
ISFG, 46, 108
justia cvel gratuita, 109
laboratrios regionais de DNA, 56, 111, 112, 113, 114, 115
LCN-DNA, 73, 80
leitura dos alelos, 39, 68, 96, 99, 105
libertao de prisioneiros, 141
lise diferencial, 23, 65
loci VNTR, 34, 35, 38, 81, 130, 160
materiais vegetais, 24
material animal, 24
melancitos, 24
melting, 69
microchips, 41, 42
microssatlites, 21, 34, 35, 72
minissatlites, 21, 34, 35
mistura de materiais, 23, 39, 46, 53, 57, 65, 67, 72, 74, 80, 86, 87, 88, 104, 106, 108, 160,
164, 166, 185
mitocndrias/mtDNA, 31, 37, 40, 41, 42, 46, 64, 65, 68, 118, 120, 127, 144, 157
molcula de DNA, 14, 27, 28, 29, 30 70, 72, 158, 184, 185
mutaes, 24, 41, 80, 87, 91, 158, 159
National Research Council (NRC), 80, 108
nemo tenetur se detegere, 59
nested-PCR, 72
NIST, 109
nova percia, 54, 58, 92, 100, 136, 179
o povo v. Castro, 131
padro da metodologia consistente, 130
pareamento, 29, 30, 70, 71, 159
parentesco, 19, 20, 35, 56, 82, 87, 91, 173
PCR em tempo real, 68
poder discriminatrio, 22, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 73, 74, 88, 101
polimorfismo, 16, 23, 33, 34, 35, 37, 38, 40, 44, 62, 114, 144, 159, 160, 175
populao randmica, 86
possveis contribuintes, 84, 87, 106
primeira lei de Mendel, 32
primer, 69, 70, 71, 72, 75, 95, 96, 159
probabilidade condicional, 85, 89
probabilidade de combinao aleatria, 86
probabilidade a posteriori, 90
probabilidade a priori, 90
probabilidade de excluso/(PE), 86, 89, 90, 172

190

probabilidade de incluso, 19, 20, 81, 84,86, 132, 142

probabilidade de maternidade (PM), 179, 180
probabilidade de paternidade (PP), 89, 90
proficincia, 103, 104, 109, 141, 143, 160
Projeto de Implantao de Laboratrios Regionais de DNA, 56, 111, 112, 114, 115, 139
projeto joo ningum, 11
Projeto de Lei, 110, 111, 137
Projeto Inocncia, 141
proteinase K, 62, 63, 71, 166, 167, 168, 169, 177
prova de Coombs, 19
purificao do DNA, 62, 64, 65, 167, 177
qualidade dos testes, 95
quantidade de material gentico, 31
quantificao por fluorescncia, 67
quantificao por espectrofotometria, 67
raciocnio analtico, 105
razo de verossimilhana (LR), 85, 86, 87, 89, 90, 99
reagentes feitos in house, 95
recombinao gnica, 16, 18, 40, 83
regies hipervariveis, 21, 31, 32, 33, 34, 40
regra da multiplicao ou do produto, 32, 83, 90
regras de admissibilidade de provas, 133
repetio de testes, 58, 103, 108, 135
responsvel tcnico, 95, 100
RFLP, 35, 36, 37, 38, 39, 157, 160
salting out, 63, 64
SBML, 56, 109
segunda gerao de multiplex, 73, 74
segunda lei de Mendel, 32
seqncia de Anderson ou de Cambridge, 40
sigilo das informaes genticas, 140, 141
sistema ABO, 16, 19
sistema adversarial, 129
sistema amelogenina, 23, 73, 74, 79, 105, 157, 177
sistema anglo-americano, 129, 133, 134
smear, 72
SNPs, 34, 40, 41, 42, 109, 160
sofisma do promotor, 88
sonda multilocal, 35, 157
sondas para loci nicos, 35, 36, 73, 157
sorologia tradicional, 22, 160
southern blotting, 36, 37, 160
sttuters, 87
subdiviso populacional, 82, 83
SWGDAM, 109
teorema de Bayes, 89, 90, 91, 179, 180
terrorismo, 11, 41
teste da aceitao, 130
teste Frye, 130
testes de aglutinao, 18, 19

191

testes de paternidade, 89, 90, 109, 118, 119

testes de qualidade, 91, 103, 104, 131
transferncia, 44, 45, 55, 62, 104, 185
translocaes, 87
trissomias, 87
validao, 39, 67, 112, 114, 126, 127
valor C, 33
Y-STR, 40