Manual bIR

VOLUMEN IV: MANUAL DE

BIOLOGA MOLECULAR
Autor: Dr. Toms E. Verdura Gonzlez
Editora: Dra. Iliana Perdomo Lpez

Manual BIR.

VOLUMEN IV: MANUAL DE BIOLOGA

MOLECULAR
Autor: Dr. Toms E. Verdura Gonzlez

Iliana Perdomo Lpez (editora).

Depsito legal: DLC 614-2012

Reservado todos los derechos. Est prohibido, bajo las sanciones penales y el resarcimiento civil
previsto en las leyes, reproducir, registrar o transmitir esta publicacin, ntegra o parcialmente por
cualquier sistema de recuperacin y por cualquier medio, sea mecnico, electrnico, magntico, por
fotocopia o por cualquier otro, sin la autorizacin previa por escrito de la editora.

NDICE BIOLOGA MOLECULAR BIR

1.- COMPONENTES DE LOS CIDOS NUCLEICOS
2.- ESTRUCTURA DE LOS CIDOS NUCLEICOS

1
13

2.1- ESTRUCTURA PRIMARIA

14

2.2- PROPIEDADES FISICOQUMICAS DE LOS CIDOS NUCLEICOS.

14

3.- ESTRUCTURA SECUNDARIA

17

3.1- REGLAS DE CHARGAFF

17

3.2.- MODELO DE WATSON Y CRICK: FORMA B DEL ADN

17

3.3.- VARIACIONES EN LA ESTRUCTURA DEL ADN

20

3.4.- PROTENAS DE UNIN AL ADN

26

3.5.- PROTENAS DE UNIN AL ARN

29

4.- ESTRUCTURAS DE ORDEN SUPERIOR DEL ADN Y DEL ARN

31

4.1.- SUPERENROLLAMIENTO DEL ADN (ESTRUCTURA TERCIARIA)

31

4.2.- ESTRUCTURA DE LOS ARNs

35

4.3.- LOS RIBOSOMAS

41

5.- CONDENSACIN DEL ADN Y CROMOSOMAS

43

5.1.- PROTENAS COMPONENTES DE LA CROMATINA

43

5.2.- NIVELES DE CONDENSACIN DEL ADN NUCLEAR EUCARITICO

45

5.3.- EL CROMOSOMA METAFSICO

50

5.4.- DOTACIN GENTICA EN EUCARIOTAS

56

6.- ORGANIZACIN DEL GENOMA DE EUCARIOTAS

57

6.1.- CARACTERSTICAS GENERALES DEL GENOMA. DIFERENCIAS ENTRE

PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

57

6.2.- COMPLEJIDAD DEL GENOMA EUCARITICO

58

6.3.- COMPLEJIDAD DEL GENOMA HUMANO

59

6.4.- ADN DE COPIA NICA, SIMPLE O NO REPETITIVO

60

6.5.- ADN REPETITIVO

60

6.6.- ESTUDIO EXPERIMENTAL DE LA COMPLEJIDAD

66

7.- EL CICLO CELULAR

71

7.1.- CONTROL DEL CICLO CELULAR

72

7.2.- DIVISIN CELULAR

84

7.3.- DIFERENCIAS ENTRE MITOSIS Y MEIOSIS

93

7.4.- LA GAMETOGNESIS

94

8.- GENTICA MENDELIANA Y AMPLIACIN DEL MENDELISMO

97

8.1.- LAS LEYES DE MENDEL

97

8.2.- AMPLIACIN DEL MENDELISMO

104

8.3.- HERENCIA EN RELACIN CON EL SEXO

112

8.4.- COMPROBACIN DE LAS PROPORCIONES MENDELIANAS. PRUEBA

CHI-CUADRADO

116

8.5.- POLIGENIA. HERENCIA MULTIFACTORIAL

117

8.6.- LA HERENCIA NO NUCLEAR

118

9.- LIGAMIENTO Y RECOMBINACIN

121

9.1.- GENES LIGADOS

121

9.2.- LA RECOMBINACIN

124

9.3.- CARTOGRAFA EN ORGANISMOS DIPLOIDES

126

9.4.- SEGREGACIN Y RECOMBINACIN MITTICA

132

9.5.- INTERCAMBIOS ENTRE CROMTIDAS HERMANAS

132

10.- MECANISMOS DE RECOMBINACIN

135

11.- LA REPLICACIN DEL ADN

145

11.1.- CARACTERSTICAS

145

11.2.- ENZIMOLOGA DE LA REPLICACIN

148

11.3.- ETAPAS DE LA REPLICACIN

152

11.4.- REPLICACIN MITOCONDRIAL

159

11.5.- REPLICACIN POR CRCULOS RODANTES

161

12.- LA TRANSCRIPCIN

163

12.1.- CONCEPTO DE GEN

163

12.2.- ENZIMOLOGA DE LA TRANSCRIPCIN

165

12.3.- TRANSCRIPCIN DEL GENOMA MITOCONDRIAL

175

12.4.- INHIBIDORES DE LA TRANSCRIPCIN

175

13.- REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA EN EUCARIOTAS: CONTROL

PRETRANSCRIPCIONAL Y TRANSCRIPCIONAL

177

13.1.- CONTROL PRETRANSCRIPCIONAL

177

13.2.- CONTROL TRANSCRIPCIONAL

184

14.- CONTROL POSTRANSCRIPCIONAL O PROCESAMIENTO DEL ARN

191

14.1.- PROCESAMIENTO DEL ARN MENSAJERO

193

14.2.- PROCESAMIENTO DE LOS ARNs RIBOSMICOS Y TRANSFERENTES

200

14.3.- MADURACIN DEL ARN MITOCONDRIAL

200

14.4.- REGULACIN POSTRANSCRIPCIONAL Y PRETRADUCCIONAL

201

15.- EL CDIGO GENTICO

15.1.- CARACTERSTICAS DEL CDIGO GENTICO

203
203

15.2.- DESCIFRAMIENTO DEL CDIGO GENTICO

16.- TRADUCCIN O SNTESIS DE PROTENAS

205
207

16.1.- FASE PREVIA: ACTIVACIN DE LOS AMINOCIDOS

208

16.2.- INICIACIN

209

16.3.- ELONGACIN

212

16.4.- TERMINACIN

214

16.5.- ENRGETICA

215

16.6.- INHIBIDORES DE LA TRADUCCIN

216

16.7.- REGULACIN TRADUCCIONAL

218

17.- MODIFICACIONES POSTRADUCCIONALES

219

17.1.- TRFICO O DESTINO DE LAS PROTENAS

219

17.2.- MADURACIN DEL POLIPPTIDO NACIENTE

221

17.3.- DEGRADACIN DE LAS PROTENAS

230

18.- MUTACIN

233

18.1.- MUTACIONES GNICAS

233

18.2.- MECANISMOS DE ORIGEN DE LAS MUTACIONES GNICAS

236

18.3.- MUTACIONES CROMOSMICAS ESTRUCTURALES

240

18.4.- MUTACIONES CROMOSMICAS NUMRICAS

240

19.- REPARACIN DEL ADN

241

19.1.- SISTEMAS PREVENTIVOS

241

19.2.- REVERSIN DIRECTA DE LA LESIN

241

19.3.- REPARACIN POR ESCISIN

242

19.4.- REPARACIN POSREPLICACIN

245

19.5.- REPARACIN GO

248

20.- ENFERMEDADES GENTICAS. ENFERMEDADES MONOGNICAS Y

MULTIFACTORIALES

249

20.1.- CLASIFICACIN DE LAS ENFERMEDADES GENTICAS

249

20.2.- ENFERMEDADES MONOGNICAS NUCLEARES

251

20.3.- ENFERMEDADES MITOCONDRIALES

260

20.4.- ENFERMEDADES POLIGNICAS, MULTIFACTORIALES, COMPLEJAS

O MIXTAS
20.5.- ENFERMEDADES COMPLEJAS: ENFERMEDAD DE ALZHEIMER
21.- CROMOSOMOPATAS O ENFERMEDADES CITOGENTICAS

261
263
265

21.1.- CARIOTIPO HUMANO Y SISTEMA INTERNACIONAL DE

NOMENCLATURA

265

21.2.- CROMOSOMOPATAS ESTRUCTURALES

267

21.3.- CROMOSOMOPATAS NUMRICAS

278

22.- BASES MOLECULARES DEL CNCER

285

22.1.- GENES RESPONSABLES DEL CNCER

285

22.2.- RUTAS REGULADORAS DE LA PROLIFERACIN CELULAR

288

23.- MTODOS DE HIBRIDACIN

293

23.1.- HIBRIDACIN EN FASE LQUIDA

294

23.2.- HIBRIDACIN EN SOPORTE SLIDO

294

23.3.- HIBRIDACIN IN SITU

296

23.4.- MICROARRAY O MICROCHIP DE ADN

300

23.5.- SINTESIS DE ADNc

303

23.6.- CGH (HIBRIDACIN GENMICA COMPARADA)

303

23.7.- TRANSFERENCIA WESTERN

304

24.- CLONACIN ACELULAR: REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

305

24.1.- OBJETIVO Y APLICACIONES DE LA PCR

305

24.2.- REQUERIMIENTOS

306

24.3.- ETAPAS DEL PROCESO

306

24.4.- CARACTERSTICAS DEL PROCESO

308

24.5.- VARIANTES DEL MTODO

309

25.- TECNOLOGA DEL ADN RECOMBINANTE

313

25.1.- NUCLEASAS

313

25.2.- ENZIMAS DE RESTRICCIN

313

25.3.- CLONACIN CELULAR DE MOLCULAS DE ADN

317

25.4.- GENOTECAS

326

26.- MAPA GENTICO Y FSICO DEL GENOMA

329

26.1.- MAPA GENTICO O DE LIGAMIENTO

329

26.2.- MAPA FSICO

329

26.3.- SECUENCIACIN

334

27.- LOS GENES EN LAS POBLACIONES

341

27.1.- EQUILIBRIO DE HARDY-WEINBERG

341

27.2.- MODIFICACIN DE LAS FRECUENCIAS GNICAS Y GENOTPICAS

343

27.3.- CLCULO DEL COEFICIENTE DE CONSANGUINIDAD INDIVIDUAL

344

BIBLIOGRAFA

345

Biologa Molecular

1.

InspiracleBIR/2014

COMPONENTES DE LOS CIDOS NUCLEICOS.

(2011) 212; (2010)

167, 219; (2009) 260; (2008) 174, 215, 216, 237; (2007) 185, 186; (2005) 241; (2003) 188.
Los cidos nucleicos son macromolculas catenarias compuestas exclusivamente por C,
H, O, N y P y constituidas por monmeros denominados nucletidos. Existen dos tipos de
cidos nucleicos, ADN y ARN, formados cada uno por un tipo de nucletido:
-

ADN (cido desoxirribonucleico) por desoxirribonucletidos.

ARN (cido ribonucleico) por ribonucletidos.

Independientemente de su tipo, cada nucletido consta de tres componentes:

1. Una pentosa.
Aparece en su forma ms estable, la configuracin : la -D-ribofuranosa en el ARN y la
-D-2-desoxirribofuranosa en el ADN.

Fuente: Figura apartado 2.2 (pag 11) del libro Texto ilustrado de Biologa Molecular e Ingeniera Gentica.,
Barcelona, 1 ed., 2008.

2. Una base nitrogenada heterocclica.

Molculas con ms de un tomo de nitrgeno. Pertenecen a dos familias distintas:
- pirimidnicas: derivadas de la pirimidina, formadas slo por un anillo. Son tres: citosina (C),
timina (T) y uracilo (U).
- pricas: formadas por dos anillos condensados. Son dos, adenina (A) y guanina (G).

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

InspiracleBIR/2014

Biologa Molecular

Fuente: Figura apartado 2.31 (pag 12) del libro Texto ilustrado de Biologa Molecular e Ingeniera Gentica.,
Barcelona, 1 ed., 2008.

Las bases nitrogenadas poseen las siguientes propiedades:

a) Hidrofobicidad. La naturaleza aromtica de los anillos hace que las bases tengan un
marcado carcter apolar, sean hidrofbicas y poco solubles en agua a pH celular. A pH
cido o alcalino adquieren carga y se hacen ms solubles en agua.
b) Existencia de dipolos. Salvo la adenina, todas las bases poseen tomos de nitrgeno y
oxgeno, lo que determina que se formen entre ellas enlaces polares como los puentes de
hidrgeno.
c) Disposicin coplanar de los enlaces de cada anillo.
d) Tautomera. Consiste en el desplazamiento de un H desde un tomo de N o de O nuclear
hacia otro extranuclear y viceversa. Hay dos tipos de tautomeras:
d.1. Tautomera ceto-enol. El grupo ceto forma parte de un enlace amida cclica o lactama.
Al migrar el tomo de H desde el N nuclear al O del grupo ceto, se convierte en el tautmero
lactima (enol). Esta tautomera afecta a T, G, C y U.

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

InspiracleBIR/2014

Biologa Molecular

g) Superficie de la molcula. Todo a lo largo se forman dos surcos, uno mayor y otro menor,
que van girando de forma helicoidal y dejan espacio suficiente para que molculas externas
puedan interaccionar con las bases.
h) Idoneidad para la replicacin. Este modelo permite explicar de una forma muy simple la
duplicacin del ADN y la reparacin de mutaciones.

3.3. VARIACIONES EN LA ESTRUCTURA DEL ADN

La molcula de ADN es flexible y dinmica. Gracias a la capacidad de rotacin
alrededor de los enlaces de los nucletidos, el ADN puede adoptar in vivo diversas formas
distintas de la forma B, como son:
-

conformaciones A y Z. Descubiertas por difraccin de rayos X.

variaciones conformacionales locales en torno a la forma B.

interaccin de regiones especficas del ADN con estructuras caractersticas de

algunas protenas.

3.3.1. Conformaciones A y Z.
Forma A del ADN
No se encuentra en condiciones fisiolgicas, sino en disoluciones muy concentradas
con una humedad relativa por debajo del 75%. Es la forma que adopta el ARN cuando
posee regiones de doble hebra, as como los hbridos ADN-ARN.
Es ms ancha (mayor dimetro), ms corta para un mismo nmero de nucletidos
(menor distancia entre pares de bases) y tiene mayor nmero de pares de bases por vuelta.
Las bases se disponen inclinadas con relacin al eje y ms separadas de l. El surco mayor
es ms estrecho y muy profundo y el menor casi no se aprecia por ser ancho y poco
profundo.
Comparacin entre los tres tipos estructurales bsicos de DNA en doble hebra
TIPO DE HLICE
Sentido de giro de la hlice
Forma y tamao
Dimetro de la hlice
Distancia entre bases (d)1
Pares de bases por vuelta (n)
Rotacin por cada base (360 ln)2
Longitud vuelta de hlice (n/d)3
Inclinacin del plano de los pares
de bases4
Surco mayor o grande
Surco menor o pequeo
Enlace N-glicosdico

Notas:

A (deshidratada)
Dextrgiro
La ms ancha y corta
2,55 nm (25,5 )
0,23 nm (2,3 )
11
+ 32,7
2,53 nm (25,3 )
19
(gran inclinacin)
Estrecho, profundo
Amplio, no profundo
Anti

B (Watson-Crick)
Dextrgiro
Intermedia
2,37 nm (23,7 )
0,34 nm (23,4 )
10,4
+ 34,6
3,54 nm (35,4 )
1,2 (casi perpendicular al
eje de la hlice)
Ancho, profundidad media
Estrecho, profundidad
media
Anti

Z (Rich-Dickerson)
Levgiro
La ms estrecha y larga
1,84 nm (18,4 )
0,38 nm (3,8 )
12
-30
4,56 nm (45,6 )
9
(ligera inclinacin)
Plano, sin profundidad
Estrecho, profundo
Anti (C, T) y Sin (G)

Distancia entre pares de bases, medida a lo largo del eje de la hlice.

2
Rotacin por cada par de bases, o giro respecto al par anterior (+ dextrgiro, - levgiro).
3
Longitud de la vuelta de hlice, medida a lo largo del eje; coloquialmente paso de rosca o paso de hlice.
4
Inclinacin respecto al plano perpendicular al eje de la hlice.

Fuente: Tabla apartado 6.1 (pag 52) del libro Texto ilustrado de Biologa Molecular e Ingeniera Gentica., Barcelona,
1 ed., 2008.

20

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

Biologa Molecular

InspiracleBIR/2014

Fuente: Figura apartado 6.1.1 (pag 53) del libro Texto ilustrado de Biologa Molecular e Ingeniera
Gentica., Barcelona, 1 ed., 2008.

Fuente: Figura apartado 6.1.1 (pag 53) del libro Texto ilustrado de Biologa Molecular e Ingeniera
Gentica., Barcelona, 1 ed., 2008.

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

21

InspiracleBIR/2014

Biologa Molecular

Fuente: Figura apartado 7.3.2.2 (pag 80) del libro Texto ilustrado de Biologa Molecular e Ingeniera
Gentica., Barcelona, 1 ed., 2008.

42

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

InspiracleBIR/2014

Biologa Molecular

heterocromticas de los cromosomas 1, 9 y 16 y en los satlites de los acrocntricos, que

dan una tincin variable.
Las bandas oscuras del bandeado G y las fluorescentes o brillantes del bandeado Q
representan regiones cuyo ADN es rico en el par A-T. De manera que su coloracin es
proporcional a la concentracin de A + T. Esto ha sido corroborado por los resultados
obtenidos con sustancias estrictamente especficas por su afinidad por pares A-T, como la
daunomicina y el Hoescht 33258. Las sustancias que se unen preferentemente al par G-C,
como la cromomicina A3, dan un patrn de bandeado fluorescente inverso al bandeado Q y
al G.
Adems de ser ricas en A-T, las bandas G se caracterizan porque su ADN se replica
en la segunda mitad (tarda) del perodo S del ciclo celular; aunque no tan tardamente como
las regiones de heterocromatina constitutiva, como los centrmeros. Tambin se
corresponden con los crommeros o grumos de cromatina de los cromosomas meiticos.
Por ltimo se considera que contienen relativamente pocos genes en comparacin con las
bandas claras (no coloreadas) y que las protenas que contienen son diferentes de las que
integran las bandas claras.
Se ha propuesto que el patrn de bandas G o Q respondera a un empaquetamiento
diferencial de las regiones cromosmicas axiales. Estas regiones constituyen la base de los
lazos de cromatina y se unen a protenas no histnicas del armazn cromosmico rico en
la enzima topoisomerasa II. Son regiones pobres en genes, slo contienen el 20% del total
de ellos y funcionalmente tienden a la represin gnica.
Bandeo R: Se desnaturaliza con calor el ADN rico en AT y luego se tie con Giemsa.
Aparecen bandas oscuras, bandas R, que coinciden con las bandas G y Q claras. Del patrn
reverso deriva el nombre. Se consigue el mismo patrn empleando olivomicina, un colorante
con afinidad por los pares GC. Con cromomicina A3 las bandas R son fluorescentes. Las
bandas R contienen ADN rico en GC (50 -60%) poco condensado y activo
transcripcionalmente.
Bandeo T: Identifica un subconjunto de bandas R concentradas en los telmeros, las
de tincin ms intensa, que se visualizan aplicando un tratamiento trmico severo antes de
teir los cromosomas con Giemsa o con una combinacin de tinciones y fluorocromos.
Para situaciones particulares se emplea:
-

Bandeo C: tie slo la heterocromatina constitutiva, compuesta por ADN de tipo

satlite, muy repetitivo. Slo tie las regiones centromricas y los bloques de
heterocromatina C de los cromosomas 1, 9 y 16 y del brazo largo del cromosoma Y. El
material cromosmico se desnaturaliza y se extrae con lcali y se incuba en solucin salina
para teirlo despus con Giemsa u otros colorantes. Como las regiones de bandas C son

52

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

Biologa Molecular

InspiracleBIR/2014

altamente polimrficas en la poblacin humana, este bandeado est indicado para la

bsqueda de polimorfismos de heterocromatina.
Bandas cromosmicas del cariotipo de acuerdo con el sistema internacional

Tincin N o NOR: para la regin organizadora del nucleolo que contiene los genes

del ARNr 18S y ARNr 28S. Tie las constricciones secundarias en los cromosomas 13-15 y
21-22. El patrn es totalmente diferente al clsico (Q y G) puesto que se basa en la
presencia de protenas argentafines en esas regiones, que se tien con nitrato de plata.
-

Bandeo de profase y prometafase o de alta resolucin: sobre cromosomas

detenidos en una etapa temprana de la mitosis en un estado relativamente descondensado

en el que su mayor longitud permite apreciar ms detalles.
-

Hibridacin in situ con fluorescencia (FISH): emplea sondas de ADN clonado

especficas para regiones cromosmicas o para cromosomas individuales que permiten

identificar reordenamientos particulares o la existencia de un nmero anormal de
cromosomas. Es la tcnica de mayor potencialidad para el anlisis cromosmico.

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

53

Biologa Molecular

InspiracleBIR/2014

pierdan su forma habitual y adopten una forma esfrica. La actina y miosina se dispersan
por toda la clula y los microtbulos se fragmentan y reorganizan para formar el huso
acromtico.
Los cromosomas profsicos aparecen como delicados filamentos extendidos o
enrollados dentro del ncleo. Cada uno de ellos est compuesto por dos filamentos
denominados cromtidas, que se encuentran estrechamente asociados todo a lo largo. A
medida que la profase progresa, las cromtidas van acortndose y engrosndose. Esto se
debe a una espiralizacin de la cadena de nucleosomas, producindose una condensacin
de las histonas, que pierden agua y sufren una serie de cambios como acetilacin y
fosforilacin (hasta 6 fosfatos por molcula de histona H1) por las protenas quinasas
mitticas, y tambin a cambios en la concentracin inica (Ca++, Mg++) del citoplasma. Un
cromosoma de 10 m de largo y 1 m de ancho tiene 80.000 m de longitud de ADN, lo que
significa que el empaquetamiento es de 8.000 veces.
Hacia el final de la profase, los cromosomas tienden a acercarse al borde del ncleo.
En este momento el acortamiento y engrosamiento de la cromatina es mximo y los
cromosomas alcanzaron su configuracin completa.
El nucleolo va disgregndose en cuerpos pequeos progresivamente.
Tiene lugar la formacin del huso acromtico. Hacia la mitad de G1 los dos centrolos
comienzan a separarse, iniciando la duplicacin a finales de G1 o principios de S y
finalizndola a finales de G2, dando lugar a una pareja doble de centrolos. Rodeando los
centrolos hay un ster, una estrella de microtbulos cortos y una zona clara perifrica,
donde no penetran los microtbulos del ster, que se llama centrosfera. A microscopio
electrnico se observa un material denso del que salen los microtbulos. Esta matriz
pericentriolar es el verdadero centro organizador de microtbulos. Uniendo ambas parejas
de centrolos hay un haz de microtbulos, denominados microtbulos polares, que va
alargndose a medida que las parejas de centrolos comienzan a separarse. Uno de los
pares de centrolos permanece en su lugar, mientras que el otro par, describe un trayecto
semicircular de 180 alrededor del ncleo para alcanzar el polo opuesto. Al final, cada pareja
de centrolos, con su ster, queda en un polo de la clula.
Los microtbulos estn en constante renovacin, perdiendo tubulinas por sus
extremos en los polos e incorporando tubulinas por sus extremos + en la zona ecuatorial.
Los haces se solapan en la zona ecuatorial, donde se interconectan con protenas motoras
del tipo quinesinas, que contribuyen a estabilizar su posicin.
Las mitosis cuyo aparato acromtico contiene centrolos, steres y husos, se
denominan astrales o anfiastrales.

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

85

Biologa Molecular

InspiracleBIR/2014

10. MECANISMOS DE RECOMBINACIN. (2013) 95.

La fuente primaria de variabilidad es la mutacin, sin embargo, en los organismos
con reproduccin sexual la produccin de individuos con nuevas combinaciones de alelos a
partir de los ya existentes en la poblacin, es el mecanismo ms importante de produccin
de variabilidad gentica. Existen diferentes tipos de recombinacin:
-

recombinacin homloga general.

recombinacin especfica de sitio.

transposicin.
En eucariotas la recombinacin gentica se produce por la distribucin independiente

de los cromosomas durante la meiosis y por la existencia de un intercambio fsico de

segmentos cromosmicos entre dos cromtidas no hermanas de dos cromosomas
homlogos, a travs del entrecruzamiento que tiene lugar en la profase I de la meiosis. En
procariotas la recombinacin gentica se lleva a cabo mediante fenmenos parasexuales:
conjugacin, transformacin, transduccin y sexduccin.
MECANISMOS MOLECULARES DE LA RECOMBINACIN GENERAL HOMLOGA
1. MODELO DE HOLLIDAY
El primer modelo aceptado fue propuesto por Holliday en 1964 para procariotas.
Consiste en un proceso de ruptura de dos molculas de ADN homlogas en el mismo lugar
de una sola cadena en cada doble hlice, seguido de un intercambio de fragmentos entre
ellas y una reconstitucin

de dos molculas que contienen partes intercambiadas. Los

pasos bsicos son los siguientes:

- Apareamiento de los cromosomas homlogos mediado por el complejo sinaptonmico. Las
dobles hlices implicadas en el entrecruzamiento rotan de manera que queden enfrentadas
con la misma polaridad.
- Produccin de cortes en las dos cadenas de la misma polaridad y desenrollamiento de la
doble hlice. Este paso lo lleva a cabo el complejo RecBCD con actividad nucleasa y
helicasa, que genera cadenas sencillas. La actividad nucleasa reconoce el sitio chi, una
secuencia constituida por 8 pb (5-GCTGGTGG-3) y que se encuentra en multitud de sitios
del genoma. La cadena sencilla originada, una vez estabilizada por la protena Ssb
desencadena el proceso.
- Los extremos rotos invaden la doble hlice contraria: una hlice sencilla desplaza a la
cadena de su misma polaridad y la otra hace lo mismo. Las cadenas desplazadas se unen a
RecA, que reconoce el ADN de cadena sencilla y promueve la invasin de esta cadena
hacia una doble hlice que est en su proximidad. Si encuentra homologa desplaza a la
cadena de igual polaridad. El que se mueve es siempre el extremo 3-OH. La cadena

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

135

InspiracleBIR/2014

Biologa Molecular

desplazada formara un bucle D. Las cadenas invasoras buscan la posibilidad de

apareamiento y cuando encuentran la zona con bases complementarias se fijan
estableciendo puentes de hidrgeno entre ellas. Finalmente los huecos que se han originado
son sellados mediante una ligasa. Este es el intermediario de Holliday: dos dobles hlices
entrecruzadas por una de sus cadenas.
- Migracin: el intermediario de Holliday crea un cruce entre las cadenas que puede moverse
a lo largo del heterodplex (doble hlice hbrida). Este movimiento se origina desde el punto
en que se produjo la invasin y, en su movimiento, incrementa la regin de ADN
heterodplex. Las protenas RuvA y RuvB son responsables de la migracin. RuvA es un
tetrmero que reconoce especficamente el punto de entrecruzamiento y, entonces, dos
molculas de RuvB la flanquean, constituyendo un complejo hexamrico. El complejo se
desplaza abriendo la hlice en direccin 5 y cerrndola por detrs (3).
- Resolucin del intermediario de Holliday: Tiene lugar por un corte y posterior unin entre
las dos cadenas originales o de las cadenas intercambiadas. En el primer caso, el corte no
da lugar a cromtidas recombinantes entre los marcadores flanqueantes A y B. Sin
embargo, en el segundo caso, el corte origina recombinacin, cambiando las relaciones de
ligamiento de los marcadores (aB/Ab). Los cortes son realizados por RuvC, una
endonucleasa que realiza dos cortes simtricos en cadenas que no se crucen. Parece que
tambin podran intervenir en el corte RecG y Rus.

136

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

InspiracleBIR/2014

Biologa Molecular

TRANSPOSICIN
Descubiertos por McClintock, los elementos genticos transponibles son elementos
genticos capaces de moverse de una posicin a otra del mismo cromosoma o a otros
cromosomas y se han detectado por las alteraciones que producen en los genes a los que
se mueven. La entrada y salida del elemento se realiza por recombinacin, pero no hay
homologa de secuencias ni sitios especficos, es una recombinacin al azar. Hay diferentes
tipos en los distintos seres vivos.
Elementos genticos transponibles bacterianos
1. Secuencias de insercin (IS): Son los elementos transponibles ms simples. Su tamao
va de 768 pb a ms de 5000.Contienen slo los genes necesarios para la movilizacin: el
gen de la transposasa (enzima necesaria para la transposicin) rodeado de repeticiones
invertidas. Cuando se insertan provocan la repeticin directa de una de una secuencia diana
corta. La transposicin de una secuencia de insercin puede provocar mutaciones de
insercin. Tambin pueden producirse deleciones e inversiones por entrecruzamiento entre
IS repetidas en el genoma.

142

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

Biologa Molecular

InspiracleBIR/2014

2.Transposones: Son elementos transponibles ms complejos. Contienen los genes

necesarios para la transposicin y generalmente otros genes que confieren resistencia a
determinadas drogas. Algunos fagos se comportan como transposones, por ejemplo el fago
Mu. Hay dos tipos:
Transposones compuestos: Flanqueados por dos elementos IS del mismo tipo. Ejemplos:
Tn9, Tn10
Transposones no compuestos: No terminan en elementos IS pero s estn flanqueados
por repeticiones terminales invertidas y tambin dan lugar a la duplicacin directa de la
secuencia diana. Ejemplo: Tn3, contiene tres genes: tnpA, gen de la transposasa, tnpB, gen
de la resolvasa, y bla, gen de la b-lactamasa, que confiere resistencia a ampicilina.
Mecanismos de transposicin
a) Transposicin replicativa: el elemento se duplica, una copia permanece en la posicin
original y otra se mueve a otro lugar. Ejemplo: Tn3, modelo del cointegrado.

b) Transposicin conservativa (no replicativa): el elemento cambia de posicin sin dejar una
copia en la posicin original

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

143

InspiracleBIR/2014

Actividades
enzimticas

Biologa Molecular

ADN polimerasa I

ADN polimerasa II

ADN polimerasa III

1. Polimerasa 53.

1. Polimerasa 53.

1. Polimerasa 53.

Elongacin.
2. Exonucleasa 35.
Correctora de pruebas.

Elongacin.

Elongacin.

2. Exonucleasa 35.
Correctora de pruebas.

3. Exonucleasa 53.

2. Exonucleasa 35.
Correctora

de

pruebas.

Eliminacin del cebador y

traslacin de la mella.
Funcin

en

la clula

Eliminacin del Cebador y

Reparacin.

Replicacin

(sntesis

Extensin de los fragmentos

continuada de las dos

de Okazaki.

hebras).

Velocidad

-16-20 nucletidos/segundo.

- 2-7 nucletidos/seg.

- 250 -1000 nucl/seg.

de

- Procesividad baja: 3-200

- Procesividad media:

- Procesividad muy alta:

replicacin

nucletidos aadidos antes

10.000

5 10

de su disociacin.

aadidos.

nucletidos

nucletidos

aadidos.

Las ADN polimerasas IV y V intervienen en la ruta de reparacin sntesis de

ADN propensa al error a travs de la lesin (Respuesta SOS). Carecen de actividad 3
exonucleasa correctora por lo que reducen la fidelidad de la replicacin a un error cada 1000
nucletidos.

150

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

Biologa Molecular

InspiracleBIR/2014

Formacin y composicin de la holoenzima ADNpol III

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

151

InspiracleBIR/2014

Biologa Molecular
perifrico) y leucemia mieloide.
NF-2

Relacionado con meningioma y ependinoma (encfalo) y

schwanoma (nervios perifricos)

Genes de protenas nucleares

MTS1

Codifica para la protena p16, uno de los frenos del sistema de

control del ciclo celular. Relacionada con muchos cnceres.

RB

Codifica para la protena RB (retinoblastoma). Esta protena es uno

de los principales frenos en el ciclo celular.

p53

Codifica para la protena p53, la cual detiene la divisin celular e

induce a las clulas anormales al suicidio (apoptosis). Relacionado
con la mayora de los cnceres .

WT1

Relacionado con el Tumor de Wilms del rin.

Genes que codifican protenas de ubicacin an no determinada

BRCA1

Relacionado en cnceres de mama y ovario.

BRCA2

Relacionado con cncer de mama.

VHL

Relacionado con cncer de clulas renales.

22.2. RUTAS REGULADORAS DE LA PROLIFERACIN CELULAR.

Las tres rutas que regulan la proliferacin celular y cuya alteracin

conduce al

cncer son:
1. La transduccin de seales extracelulares al interior celular hasta conectar con
el ciclo celular.
2. La regulacin del ciclo celular.
3. La apoptosis o muerte celular programada.

22.2.1.

La transduccin de la seal extracelular al interior celular.

El mecanismo de activacin en el que interviene la protena Ras, causante de

numerosos procesos cancerosos, es un paso esencial en la transduccin de seales
producidas por muchos factores de crecimiento.
1.- La molcula seal acta como ligando al interaccionar, con gran afinidad y de modo
reversible, con el dominio extracelular de una protena receptora especfica, cuyo dominio
transmembrana

hidrofbico est

insertado en la bicapa lipdica

de la membrana. El

nmero de receptores de un tipo concreto en cada clula es muy variable, desde cientos
a millones. En

el caso de la ruta que activa

receptores: para el factor de crecimiento

Ras, la seal procede de diversos

derivado de plaquetas

(PDGF), el factor de

crecimiento epidrmico (EGF), la insulina, etc.

2- Al unirse el ligando al receptor, ste se estimula.En el caso del receptor de PDGF,
forma un dmero y se activa una actividad protena quinasa intrnseca, concretamente del
tipo tirosina quinasa, fosforilando con gasto de ATP, el dominio intracelular propio o bien
otras protenas.

288

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

Biologa Molecular

InspiracleBIR/2014

3- La 1 cascada de transmisin de la seal , puede realizarse por varias vas en las que,
se producen modificaciones en la conformacin de una protena que a su vez permiten la
interaccin con otras protenas adaptadoras o su fosforilacin.
4- La propagacin de la seal contina mediante la activacin de la protena Ras, una
protena G monomrica (tambin llamada p21Ras, por su masa de 21 kDa). Las protenas
G actan en numerosos procesos como interruptores moleculares, al poder pasar de su
forma inactiva, unida a GDP, al estado activo , unida a GTP. El complejo activo Ras :GTP
trasmite la seal mediante su interaccin con otras protena quinasas citoplasmticas
(protenas efectoras), activndolas, con lo que comienza una 2 cascada de transmisin
de la seal. La consiguiente hidrlisis del GTP por Ras devuelve a sta al estado
inactivo, interrumpiendo as la transmisin de seal hasta que haya un nuevo estmulo.
Existen otras protenas relacionadas que forman la familia Ras e intervienen en varios
procesos celulares ( como Rab, Rho y Arf).
Una alteracin frecuente en una proporcin elevada de tumores (especialmente de
colon y pncreas ) es la mutacin del gen ras, dando lugar a una protena Ras incapaz
de hidrolizar

GTP,

y que permanece

siempre

en su forma activa

Ras: GTP,

desencadenando una seal de proliferacin continua.

5-

Cada protena

efectora

activada por

Ras produce a continuacin cambios de

conformacin o fosforilaciones en sucesivas protenas componentes de la 2 cascada

de seales, entre las que cabe citar Raf, MEK y MAP quinasas.
6- Finalmente, algunas de estas protena quinasas de la 2 cascada actan sobre un
factor

de transcripcin, al que

fosforilan. Como

consecuencia, ste

cambia

su

conformacin, lo que le permite unirse al DNA y activar o reprimir la transcripcin de

genes especficos que codifican las protenas que regulan el ciclo celular y la apoptosis.

22.2.2.

La regulacin del ciclo celular.

El gen supresor del retinoblastoma (Rb)

El descubrimiento de una predisposicin hereditaria para sufrir retinoblastoma, un
tipo infrecuente de cncer que afecta a los ojos, permiti identificar un gen (denominado Rb
) cuyo producto gnico, la protena del retinoblastoma ( Rb, pRb), se encuentra presente y
acta en el control de todo tipo de clulas normales.
La protena Rb experimenta cambios de fosforilacin a lo largo del ciclo celular,
que modulan su actividad como freno en el punto de control G1/S. Esta actividad se debe
a la asociacin de Rb no fosforilada con una gran cantidad de otras protenas necesarias
para la proliferacin celular, en especial factores de transcripcin inducibles como Myc y
E2F.

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

289

InspiracleBIR/2014

Biologa Molecular

Poseen una gran especificidad de reconocimiento de una secuencia corta de ADN

dplex, e hidrolizan un enlace fosfodister en cada hebra en secuencias concretas llamadas
sitios de reconocimiento o de restriccin. Los fragmentos de ADN originados son tiles
para realizar la clonacin, elaborar mapas fsicos de restriccin, detectar polimorfismos. . .
Hay 3 familias de enzimas de restriccin:
Tipo I y Tipo III
- Tienen actividad endonucleasa

(cortan) y metilasa, en distintas subunidades de una

misma protena.
- Necesitan como coenzimas o cosustratos: ATP para moverse a travs de la molcula de
DNA, desde el lugar de reconocimiento hasta el sitio del corte; Mg2+ y S-adenosilmetionina.
- Cortan a cierta distancia de la secuencia de reconocimiento:
Las tipo I cortan lejos de la secuencia de reconocimiento, a unos 1000 pb upstream
o downstream y corta las dos hebras en puntos cercanos entre s y poco especficos.
Las tipo III cortan las dos hebras en puntos distales entre s 2 3 nt, situados a 2426 pb del sitio de reconocimiento.
- El punto de metilacin est dentro de la secuencia de reconocimiento. En el tipo I en
ambas hebras y en el tipo II es una adenina presente slo en una hebra.
- Estructura proteica: en el tipo I hay 3 subunidades, la S de reconocimiento, la R de
restriccin y la M de mutilacin. En el tipo II hay 2 subunidades: MS de reconocimiento y
mutilacin y la R de restriccin.
- El sitio de reconocimiento no es palindrmico. En el tipo I consta de 2 partes separadas (ej.
TGA(N)8TGCT).
Tipo II
-

Slo tienen actividad endonucleasa.

Es una sola subunidad, aunque acta como homodmero.

Slo requieren Mg++ como cofactor.

El sitio de reconocimiento es palindrmico, de 4-8 pb. Los ms frecuentes tienen 6 pb.

Corta las 2 hebras en puntos equivalentes, muy especficos, dentro de la secuencia de

reconocimiento.
-

El punto de metilacin es una adenina o un citosina muy especfica dentro de la

secuencia de reconocimiento, en ambas hebras.

314

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

Biologa Molecular

25.2.2.

InspiracleBIR/2014

Papel biolgico del sistema metilacin-restriccin

Los sistemas de restriccin-modificacin o metilacin-restriccin son un

mecanismo de defensa bacteriano frente a fagos.
El ADN propio de la bacteria es metilado de una forma caracterstica especfica de
cada especie en secuencias reconocidas por la restrictasa y por la metilasa. La metilacin
de las bases impide la unin de la enzima de restriccin, con lo que el ADN propio no es
hidrolizado. Si en la clula entra ADN de otro organismo, no metilado o con un patrn de
mutilacin distinto, es degradado por la nucleasa.
Si est metilada una sola hebra de ADN, el sitio no es reconocido por la enzima de
restriccin, pero s por la metilasa, que aade el grupo metilo a la otra hebra. Esto ocurre al
final de la replicacin. La metilacin afecta principalmente a citosinas y adeninas de la
secuencia reconocida y las metilasas utilizan como donador del grupo metilo el compuesto
S-adenosilmetionina.

25.2.3.

Enzimas de restriccin de tipo II.

Son las empleadas en ingeniera gentica como tijeras para cortar el ADN. El sitio de
restriccin es sitio de reconocimiento y de hidrlisis. El enlace hidrolizado es siempre el 3-P
(tipo a) y no necesitan ATP.
Algunas enzimas cortan ambas hebras justo en el centro de simetra del palndromo
y resultan dos fragmentos de ADN dplex cuyos extremos no contienen bases
desapareadas. Se denominan extremos romos. Ejemplo de estas endonucleas es Hae III.

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

315

InspiracleBIR/2014

Biologa Molecular

Una vez calculadas las frecuencias allicas, se comprobar mediante una prueba de
2

X con 1 grado de libertad, si el nmero de individuos esperado de acuerdo con H-W y el

nmero observado difieren o no significativamente.

Genotipo N esperado por H-W N observado

A1A1

p2 x total

Nmero de individuos A1A1

A1A2

2pq x total

Nmero de individuos A1A2

A2A2

q2 x total

Nmero de individuos A2A2

Si no hay diferencias significativas ser un indicio de que la poblacin est en

equilibrio.
2- Genes autosmicos con dominancia
Si no se distinguen los homocigotos dominantes (AA) de los heterocigotos (Aa), no
se pueden calcular directamente las frecuencias allicas. Una forma indirecta de estimarlas
es suponer que la poblacin est en equilibrio (el nmero de individuos observado y
esperado coinciden) y como la frecuencia de homocigotos recesivos (aa) es q 2, la frecuencia
del alelo recesivo ser
q = frecuencia de aa
3 - Genes ligados al X (o al Z) codominantes o con herencia intermedia
Hay que tener en cuenta la estructura genotpica de la poblacin;
Hembras
A1A1, A1A2
2

p ,

2pq ,

Machos
A2A2 A1 o A2
q2

o q

La frecuencia de los fenotipos de los machos da directamente la frecuencia de los

alelos. Si la poblacin est en equilibrio, no se detectarn diferencias significativas en las
hembras entre el nmero observado y el esperado, teniendo en cuenta las frecuencias
allicas de los machos.
Para una estima conjunta de las fecuencias allicas hay que tener en cuenta que en
las hembras se encuentran las 2/3 partes de los alelos de un gen dado y el clculo se hace
segn la frmula:
A2 = q = (2Q + H + S) / 3

Siendo

Q = frecuencia de A2A2
H = frecuencia de A1A2
S = frecuencia de A2Y

342

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

Biologa Molecular

InspiracleBIR/2014

27.2. MODIFICACIN DE LAS FRECUENCIAS GNICAS Y GENOTPICAS.

Las excepciones al modelo de H-W permiten averiguar las causas que modifican el
equilibrio en las poblaciones reales y que dan lugar a cambios en las frecuencias.
a. Un alelo presente en la poblacin desaparece y se convierte en otro por mutacin, con el
consiguiente cambio de las frecuencias allicas. Puede establecerse el equilibrio:
u

A1 (p) A2 (q)

A1 (p) A2 (q)

en donde u es la tasa de mutacin directa de A1 a A2 , y v,la tasa de mutacin retrgrada de

A2 a A1. El equilibrio se alcanzar cuando el nmero de alelos A1 que pasa a A2 (p x u) sea
igual al nmero de alelos A2 que pasa a A1 (q x v). Sustituyendo q = (1 p) o p = (1 q),
tenemos:
p = v / (u+v)

q = u / (u+v)

Debido a que las tasas de mutacin, por gen y por generacin, son muy bajas, los
cambios en las frecuencias allicas por mutacin son lentsimos.
b. La migracin de los individuos de una poblacin puede aumentar o disminuir la
frecuencia de los alelos de la misma. Tiene efectos similares a la mutacin pero a gran
escala. Si emigran individuos desaparecen sus alelos en la poblacin y si entran individuos
aparecen nuevos alelos. La tasa de cambio por gen y por generacin depende del
porcentaje de migrantes y de la frecuencia de sus alelos.
c. La seleccin natural puede disminuir la frecuencia de ciertos alelos que confieren menos
eficacia a sus portadores, permitiendo que aumenten otros. En el modelo ms simple, un
gen con dos alelos, si la seleccin (s) acta en contra de un alelo recesivo (referido a la
eficacia biolgica), disminuir el nmero de los genotipos A2A2 en una fraccin s.
d. Las poblaciones son de tamao finito, lo que hace que por azar pueden pasar a la
siguiente generacin ms alelos de un tipo que de otro y sus frecuencias pueden variar
aleatoriamente, lo que recibe el nombre de deriva gentica. En una poblacin el efecto de
la deriva ser mayor cunto menor sea su tamao y puede dar lugar a que un alelo
desaparezca y otro quede fijado. En un conjunto de muchas poblaciones, lo que variar
sern las frecuencias genotpicas, aumentando los homocigotos, sin que varen las
frecuencias allicas en el conjunto.
e. Los individuos no se aparean totalmente al azar sino que lo hacen siguiendo criterios de
semejanza, apareamiento selectivo, o de parentesco, apareamiento consanguneo. El
apareamiento no aleatorio, selectivo o consanguneo, al igual que la deriva, modifica las
frecuencias genotpicas, aumentando los homocigotos sin que varen en conjunto las
frecuencias allicas. Es una consecuencia del tamao finito de las poblaciones.

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

343

Biologa Molecular

InspiracleBIR/2014

BIBLIOGRAFA
-

FERNNDEZ PIQUERAS, J. et al: Gentica. Ariel Ciencia, 1 ed., 2002.

GRIFFITHS, A., SUZUKI, D., LEWONTIN, R., MILLER, J.: Gentica. McGrawHill Interamericana. 7 ed., 2002.

KLUG, W.S., CUMMINIGS, M.R. y SPENCER, C.A.: Conceptos de Gentica.

Pearson Prentice Hall. Madrid, 8 ed. 2006.

LUQUE, J. y HERREZ, A.: Texto ilustrado de Biologa Molecular e ingeniera

gentica. Barcelona, 1 ed. 2008.

MENSUA, J. L.: Gentica: Problemas y ejercicios resueltos. Pearson Prentice

Hall. 2002.

NELSON, D.L. y COX, M.M.: Lehninger. Principios de Bioqumica. Ediciones

Omega, Barcelona, 4 ed., 2006.

PANIAGUA GMEZ LVAREZ, R.: Citologa e histologa vegetal y animal.

McGraw-Hill Interamericana.4 ed., 2007.

SOLARI, A. J.: Gentica humana: fundamentos y aplicaciones en medicina.

Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires, 3 ed., 2004.

TAMARIN, R. H.: Gentica. Editorial Revert, S. A. Espaa, 4 ed., 1996.

BROWN, T.A. Genomas Editorial mdica Panamericana. 3 edicin. 2008.

Pginas web
-

http://www.ucm.es/info/genetica/grupod

http://www.drscope.com/pac/mg/b1/index.htm

http://www.es.embnet.org/-Imc/

http://genmolecular.wordpress.com/ligamiento

MELVIN MANUEL MORALES AGUILERA

345