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NDICE
Portada0
Introduccin..3
Objetivos.
4
Tcnico
en
Laboratorio
Clnico.5
I.-
NORMATIVIDAD
EN
EL
LABORATORIO.7
Reglas
normas
de
seguridad
en
el
Laboratorio8
Para
ingresar
al
laboratorio.8
Para
permanecer
en
el
laboratorio..8
Para
manipular
instrumentos
y
productos...9
Al
concluir
la
sesin..10
Smbolos
de
riesgo
o
peligrosidad.11
Tabla
de
smbolos
de
riesgo
o
peligrosidad..12
Frases R y S
14
Frases
S
de
seguridad..15
Frases
R
de
riesgo..17
Primeros
auxilios
en
caso
de
accidentes.....19
Cortes y heridas
19
Quemaduras
o
corrosiones...19
Salpicaduras
en
los
ojos..19
Ingestin
de
productos
qumicos.20
II.MATERIAL
LABORATORIO..21
DE
Solvente...47
Soluciones
liquidas
y
gaseosas.47
Diferencia
de
solucin
y
mezcla..47
Clasificacin
de
sustancias.48
Solucin
no
saturada..48
Solucin saturada
48
Solucin
sobresaturada.48
Medidas de concentracin49
Unidades Fsicas de concentracin
49
ANEXOS.
54
A) REACTIVOS
QUIMICOS...55
Reactivos y etiquetas
56
Tipos
de
reactivos
(Slidos,
Lquidos,
Disoluciones
preparadas)
.56
Clasificacin de los reactivos
56
Etiqueta de los reactivos
57
B) COLORANTES
Y
TINCIONES58
Colorantes
59
Concepto..59
Composicin.5
9
Funcin
59
Tinciones
60
Clasificacin..6
0
Qumicos)
.60
Principales Tcnicas de Tincin
61
Tincin
de
Gram.62
Tincin de Wright
64
Tincin
de
ZiehlNeelsen...66
C) MEDIOS
DE
CULTIVO.67
Concepto.68
Clasificacin.6
9
Agar
Sangre.70
Bibliografa
71
INTRODUCCIN
En este presente manual se dan a conocer las normas que se usan en el
laboratorio, los instrumentos de laboratorio bsicos que se utilizan en
prcticas, las soluciones ms comunes y algunos anexos como lo son los
reactivos, colorantes y medios de cultivo.
Es de gran importancia reconocer e identificar los diferentes instrumentos o
herramientas de laboratorio, ya que de esta manera seremos capaces de
utilizarlos adecuadamente y tambin de llamarlos por su nombre y conocer
su utilidad.
A travs de las pginas que vera en este trabajo, presentamos informacin
elemental sobre lo aprendido durante la prctica de laboratorio as como
tambin profundizamos y damos explicaciones sencillas y de gran
importancia sobre cada tema.
Se sabe que la mejor forma de aprender es haciendo y llevando a la prctica
los conocimientos tericos, de manera que podamos enriquecer y fortalecer
nuestra experiencia en el amplio mundo de la qumica.
He tratado de presentar el mayor nmero de imgenes e ilustraciones
posibles para que la lectura resulte amena e interesante y que al mismo
tiempo sea mucho ms fcil comprender lo que se dice y explica.
Deseo que al terminar la lectura de este manual prctico, sea fcil
comprender y tener una idea clara y general de los instrumentos bsicos
que se utilizan en un laboratorio de qumica y algunos experimentos y
explicaciones interesantes que aqu se presentan.
4
OBJETIVOS
Objetivo General
Objetivos Especficos
NORMATIVIDAD EN
EL LABORATORIO
Use zapatos cerrados, de piso y con suela antiderrapante. Use pantaln largo o
falda mediana de fibra natural. Retrese todos los accesorios personales que
puedan comprender riesgos de accidentes mecnicos, qumicos o por fuego,
como son anillos, pulseras, collares y sombreros. Si usa corbata, sujtela con un
pisacorbatas o introducindola a la camisa. Evite peinados con copetes; si usa
copete o cabello largo, recjalo y colquese el protector facial, gorro o
escafandra. Evite usar mangas largas y anchas; en caso de usar manga larga y
ancha, cbrala y sujtela completamente con las mangas de la bata. Evite el
uso de lentes de contacto; use anteojos. Mantenga las uas recortadas y
limpias.
Use la bata cerrada durante toda la sesin y el protector facial, los monogogles,
guantes y respirador en su caso. Colquese la credencial a modo de gafete.
Indique en la credencial su tipo sanguneo e informe de alergias, padecimientos
crnicos o uso de prtesis.
Cuente con el material de uso personal que se enlista abajo para cada sesin
experimental.
Mantenga slo el material requerido para la sesin sobre la mesa de trabajo. Los
frascos de reactivos deben permanecer en las campanas. Los dems objetos
personales o innecesarios deben guardarse o colocarse lejos del rea de trabajo.
No fume en el interior del laboratorio. Todas las fuentes de fuego o calor deben
estar controladas.
Fjate en los signos de peligrosidad que aparecen en los frascos de los productos
qumicos.
Lvate las manos con jabn despus de tocar cualquier producto qumico.
10
Los cidos y las bases fuertes han de manejarse con mucha precaucin, ya que
la mayora son corrosivos y, si caen sobre la piel o la ropa, pueden producir
heridas y quemaduras importantes.
Si tienes que mezclar algn cido (por ejemplo, cido sulfrico) con agua, aade
el cido sobre el agua, nunca al contrario, pues el cido saltara y podra
provocarte quemaduras en la cara y los ojos.
Deje limpio y seco el lugar de trabajo. Coloque los bancos junto a las mesas o
invertidos sobre stas.
11
12
13
F
Fcilment
e
inflamable
T+
Muy
Txico
T
Txico
C
Corrosivo
Xi
Irritante
14
N
Peligro
para el
medio
ambiente
sensibilizacin en caso
de contacto con la piel.
Clasificacin con R43.
En el caso de ser
liberado en el medio
acutico y no acutico
puede
producirse
un dao del ecosistema
por cambio del equilibri
o natural,
inmediatamente o con
posterioridad.
Ciertas
sustancias
o
sus
productos
de
transformacin pueden
alterar
simultneamente
diversos
compartimentos.
FRASESR y S
Las Frases de riesgo y de seguridad, tambin conocidas como frases R/S, son un
sistema de cdigos de riesgo y frases para describir los riesgos de los compuestos
qumicos peligrosos. Las frases R/S consisten de frases indicadoras de riesgos
especficos (R) y consejos de seguridad (S). Estas letras son seguidas de un
nmero, cuya combinacin tiene el mismo significado en diferentes idiomas.
15
Riesgos
R34 Provoca quemaduras
R37 Irrita las vas respiratorias
Seguridad
S26 En caso de contacto con los ojos, lvense inmediata y
abundantemente con agua y acdase a un mdico
S36 sese indumentaria protectora adecuada
S45 En caso de accidente o malestar, acdase inmediatamente al
mdico (si es posible, mustresele la etiqueta)
16
FRASES S DE SEGURIDAD
Frases S simples
S26 En caso de contacto con los ojos, lvense inmediata y abundantemente con agua y
acdase a un mdico.
S28 En caso de contacto con la piel, lvese inmediata y abundantemente con ...
(productos a especificar por el fabricante).
17
S35 Elimnense los residuos del producto y sus recipientes con todas las precauciones
posibles.
S40 Para limpiar el suelo y los objetos contaminados por este producto, sese ... (a
especificar por el fabricante).
S43 En caso de incendio, utilizar ... (los medios de extincin los debe especificar el
fabricante). (Si el agua aumenta el riesgo, se deber aadir: "No usar nunca agua").
S48 Consrvese hmedo con ... (medio apropiado a especificar por el fabricante).
S57 Utilcese un envase de seguridad adecuado para evitar la contaminacin del medio
ambiente.
S63 En caso de accidente por inhalacin, alejar a la vctima fuera de la zona contaminada
y mantenerla en reposo
proveedor
para
obtener
informacin
sobre
su
18
S64 En caso de ingestin, lavar la boca con agua (solamente si la persona est
consciente)
FRASES R DE RIESGO
Frases R simples
R3 Alto riesgo de explosin por choque, friccin, fuego u otras fuentes de ignicin.
R10 Inflamable.
19
R53 Puede provocar a largo plazo efectos negativos en el medio ambiente acutico.
20
POR FUEGO U OBJETOS CALIENTES. No lavar la lesin con agua. Tratarla con
disolucin acuosa o alcohlica muy diluida de cido pcrico (al 1 %) o pomada
especial para quemaduras y vendar.
POR LCALIS, EN LA PIEL. Aplicar agua abundante y aclarar con cido brico,
disolucin al 2 % o cido actico al 1 %. Despus secar, cubrir la parte afectada
con
pomada
y
vendar.
POR CIDOS. Inmediatamente despus del accidente irrigar los dos ojos con
grandes cantidades de agua templada a ser posible. Mantener los ojos abiertos,
de tal modo que el agua penetre debajo de los prpados. Continuar con la
irrigacin por lo menos durante 15 minutos. A continuacin lavar los ojos con
disolucin de hidrgenocarbonato sdico al 1 % con ayuda de la baera ocular,
renovando la disolucin dos o tres veces, dejando por ltimo en contacto
durante 5 minutos.
POR LCALIS. Inmediatamente despus del accidente irrigar los dos ojos con
grandes cantidades de agua, templada a ser posible. Mantener los ojos abiertos,
de tal modo que el agua penetre debajo de los prpados. Continuar con la
irrigacin por lo menos durante 15 minutos. A continuacin lavar los ojos con
disolucin de cido brico al 1 % con ayuda de la baera ocular, renovando la
disolucin dos o tres veces, dejando por ltimo en contacto durante 5 minutos.
21
22
MATERIAL DE
LABORATORIO
23
Madera
Madera
Metal
Metal
Elemento
de fabricacin
fabricacin
Elemento de
Vidrio
Vidrio
Plstico
Plstico
Porcelana
Porcelana
CCLLAASSIFIC
IF ICAACCI
INN DDEELL
IN
INSSTTRRUUMMEENNTA
TALL DDEE LLAABBOORAT
RATOORRIO
IO
Esfricos
Esfricos
UTENSILIOS
UTENSILIOS
Forma
que presentan
Forma que
presentan
Cilndricos
Cilndricos
Rectangulares
Rectangulares
Sostn
Sostn
Uso
Uso especfico
especfico
De
acuerdo a
a su
uso
De acuerdo
su uso
Recipientes
Recipientes
Aparatos
Aparatos basados
basados en
en
mtodos
mtodos mecnicos
mecnicos
APARATOS
APARATOS
Aparatos
Aparatos basados
basados en
en
mtodos
mtodos
electromtricos
electromtricos
Volumtricos
Volumtricos
24
UTENSILIOS
DE
UTENSILIOS DE
LABORATORIO
DE
LABORATORIO DE
ACUERDO
USO
ACUERDO AA SU
SU USO
De
De sostn
sostn
Uso
Uso especfico
especfico
Recipiente
Recipiente
Son
que
Son utensilios
utensilios que
permiten
sujetar
permiten sujetar
algunas
otras piezas
algunas otras
piezas de
de
laboratorio.
laboratorio.
Son
Son utensilios
utensilios que
que
permiten
realizar
permiten realizar
algunas
operaciones
algunas operaciones
especficas
especficas yy slo
slo puede
puede
utilizarse
para
ello.
utilizarse para ello.
Son
utensilios que
que
Son utensilios
permiten
permiten contener
contener
sustancias.
sustancias.
Volumtricos
Volumtricos
Permiten
medir
Permiten medir
volmenes
de
volmenes de
sustancias
lquidas
sustancias lquidas
Material
Material Volumtrico
Volumtrico
aforado
aforado
Material
Material Volumtrico
Volumtrico
graduado
graduado
USO
25
Anillo de hierro
Bornes
Gradilla
Pinzas para
cpsula de
porcelana
Pinzas para crisol
Tela de alambre
Tringulo de
porcelana
Tripi
IMAGEN
DESCRIPCIN
Este utensilio presenta dos nueces.
Una nuez se adapta perfectamente al
soporte universal y la otra se adapta a
una pinza para refrigerante de ah se
deriva su nombre. Estn hechos de
una aleacin de nquel no ferroso
Es un anillo circular de Fierro que se
adapta al soporte universal. Sirve
como soporte de otros utensilios
como:
Vasos
de
precipitados.,
Embudos de separacin, etctera. Se
fabrican en hierro colado y se utilizan
para sostener recipientes que van a
calentarse a fuego directo.
Es un utensilio que permite sujetar
cables o lminas para conexiones
elctricas. Estn hechos de acero
inoxidable.
Utensilio que sirve para colocar tubos
de ensayo. Este utensilio facilita el
manejo de los tubos de ensayo.
Permiten
sujetar
cpsulas
de
porcelana.
Permiten sujetar crisoles
Permiten sujetar tubos de ensayo y si
stos se necesitan calentar, siempre
se hace sujetndolos con estas pinzas,
esto
evita
accidentes
como
quemaduras.
Estas pinzas se adaptan al soporte
universal y permiten sujetar vasos de
precipitados.
Es un utensilio de hierro que permite
sostener varios recipientes.
Es una tela de alambre de forma
cuadrangular con la parte central
recubierta de asbesto, con el objeto de
lograr una mejor distribucin del calor.
Se utiliza para sostener utensilios que
se van a someter a un calentamiento y
con ayuda de este utensilio el
calentamiento se hace uniforme.
Permite calentar crisoles.
Son utensilios de hierro que presentan
tres patas y se utilizan para sostener
26
Agitador de vidrio
Alargadera de
destilacin
Aparato de
destilacin
Imagen
Descripcin
Posee 20 cables de varios colores, con
16 alambres de 24 pulgadas de largo
con
piezas
banana
caimn
y
adaptadores para batera.
Estn hechos de varilla de vidrio y se
utilizan
para
agitar
o
mover
sustancias, es decir, facilitan la
homogenizacin.
Este dispositivo presenta un brazo con
un ngulo de 75 grados, en este brazo
se conecta un condensador.
Consta de tres partes:
a) Un matraz redondo de fondo plano
con salida de un lado con boca y
tapn esmerilado.
27
Bao mara
cromado
Calormetro
Cpsula de
porcelana
Crisol de
porcelana
Cristalizador
Cuba
hidroneumtica
Cucharilla de
combustin
Este
aparato
se
utiliza
para
extracciones slido-lquido.
Es un dispositivo circular que permite
calentar
sustancias
en
forma
indirecta. Es decir permite calentar
sustancias que no pueden ser
expuestas a fuego directo.
Es un dispositivo que permite
determinar el calor especfico de
algunas sustancias.
Este utensilio est constituido por
porcelana y permite calentar algunas
sustancias o carbonizar elementos
qumicos, es un utensilio que soporta
elevadas temperaturas.
Al usar la capsula de porcelana se
debe tener en cuenta que esta no
puede estar vencida, pues de lo
contrario, podra llegar a estallar.
Este utensilio permite carbonizar
sustancias, se utiliza junto con la
mufla con ayuda de este utensilio se
hace la determinacin de nitrgeno.
Este utensilio permite cristalizar
sustancias.
Es una caja cromada con saluda
lateral. Es un utensilio que tiene 30
cm de largo por 10 cm de altura. Se
utiliza para la obtencin de gases por
desplazamiento de agua.
Es un utensilio que tiene una varilla
de 50 cm de largo. Se utiliza para
28
Desecador
Embudo de
Buchner
Embudo de
polietineno
Embudo de
seguridad recto
Embudo de
separacin
Embudo estriado
de tallo corto
Embudo estriado
de tallo largo
Escobilln para
bureta
Escobilln para
matraz aforado
Escobilln para
tubo de ensayo
29
Esptula
Manmetro
abierto
Matraz de
destilacin
Matraz Kitazato
lavarlos.
Es un utensilio que permite tomar
sustancias qumicas con ayuda de
este utensilio evitamos que los
reactivos se contaminen.
Este utensilio permite medir la presin
de un gas.
Son matraces de vidrio con una
capacidad de 250 ml. Se utilizan junto
con los refrigerantes para efectuar
destilaciones.
Es un matraz de vidrio que presenta
un vstago. Estn hechos de cristal
grueso para que resista los cambios
de presin. Se utiliza para efectuar
filtraciones al vaco.
Es un utensilio metlico que permite
calentar sustancias.
Mechero de
bunsen
Mortero de
porcelana con
pistilo o mano
Refrigerante de
rosario
30
Refrigerante de
serpentn
Refrigerante recto
Retorta
Taladracorchos
Termmetro
31
Matraz
volumtrico
Pipetas
Imagen
Descripcin
Es un utensilio que permite medir
volmenes, es muy til cuando se
realizan neutralizaciones.
Son matraces de vidrio que se utilizan
cuando
se
preparan
soluciones
valoradas, los hay de diversas
medidas como: de 50 ml, 100 ml, 200
ml, 250 ml, 500 ml,1 L. tc.
Son utensilios que permiten medir
volmenes.
Las
hay
en
dos
presentaciones:
a) Pipetas graduada: Es un
elemento de vidrio que sirve para dar
volmenes exactos, con esta pipeta,
se pueden medir distintos volmenes
de lquido, ya que lleva una escala
graduada.
b) Pipeta volumtrica: Es un
elemento de vidrio, que posee un
nico valor de medida, por lo que slo
puede medir un volumen.
Las pipetas graduadas permiten medir
32
Probeta
Frascos reactivos
Matraz baln
Matraz baln de
fondo plano
Matraz
Erlenmeyer
Piseta
Tubos de ensayo
Imgen
Descripcin
Permite contener sustancias. Posee un
gotero y por esa razn permite
dosificar las sustancias en pequeas
cantidades.
Permiten guardar sustancias para
almacenarlas, los hay de color mbar
y transparentes, los primeros se
utilizan para guardar sustancias que
son afectadas por los rayos del sol, los
segundos se utilizan para contener
sustancias que no son afectadas por
la accin de los rayos del sol.
Es un recipiente que permite contener
sustancias.
Es un recipiente que se utiliza para
contener sustancias es una variacin
del matraz baln.
Es un recipiente que permite contener
sustancias o calentarlas.
Es un recipiente que se utiliza para
contener
agua
destilada,
este
recipiente
permite
enjuagar
electrdos.
Estos recipientes sirven para hacer
experimentos o ensayos, los hay en
varias
medidas
y
aunque
generalmente son de vidrio tambin
los hay de plstico.
33
APARATOS DE LABORATORIO
Son instrumentos que permiten realizar algunas operaciones especficas y slo
puede utilizarse para ello. Se clasifican en: Aparatos basados en mtodos
mecnicos y aparatos basados en mtodos electromecnicos.
APARATOS BASADOS EN MTODOS MECNICOS
Nombre
Balanza analtica
Imagen
Descripcin
Es un aparato que est basado en
mtodos
mecnicos
tiene
una
sensibilidad
de
hasta
una
34
Balanza
granataria
Imagen
Descripcin
Este aparato tiene un agitador
magntico y por esta razn permite
calentar
sustancias
en
forma
homognea.
Es un aparato que permite medir que
tan alcalina (bsica) o cida esta una
sustancia.
Permite calentar sustancias.
Es un aparato que permite desecar
sustancias.
ARTEFACTOS
MS
UTILIZADOS EN EL
LABORATORIO
CLNICO
35
MECHERO DE BUNSEN
36
37
38
EL MICROSCOPIO
Es un instrumento que sirve para ver objetos demasiados pequeos para ser
vistos con claridad por el ojo humano (objetos microscpicos).
Aunque el hombre tenga el sentido de la vista, no puede ver objetos
correctamente demasiados pequeos sin la ayuda de un microscopio.
El microscopio que nosotros vamos a estudiar es el llamado microscopio ptico
o de luz, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del
objeto mediante lentes.
En general, suele atribuirse la paternidad del microscopio simple a Anton Van
Leeuwenhoek (1632-1723), un comerciante holands sin apenas estudios.
Van Leeuwenhoeck construy muchos microscopios a lo largo de su vida, que
segn cuentan, no prest nunca a nadie. Son conocidos sus descubrimientos
pioneros sobre los protozoos, los glbulos rojos, el sistema de capilares y los
ciclos vitales de los insectos.
PARTES DEL MICROSCOPIO
39
40
CENTRIFUGA
La palabra centrfuga proviene de la palabra latina centrum, que significa centro y
de la palabra fugare que significa huir.
La centrfuga es un instrumento de laboratorio que ha sido diseada para utilizar la
fuerza centrfuga que se genera en los movimientos de rotacin, con el fin de
separar los elementos constituyentes de una mezcla. Existe una amplia diversidad
de centrfugas para poder atender necesidades especficas de la industria y la
investigacin.
La centrfuga se a diseado para utilizar la fuerza centrfuga para separar slidos
suspendidos en un medio lquido por sedimentacin o para separar lquidos de
diversa densidad. Los movimientos rotacionales permiten generar fuerzas mucho
ms grandes que la gravedad, en periodos controlados de tiempo.
En el laboratorio las centrfugas se usan generalmente en procesos como la
separacin por sedimentacin de los componentes slidos de los lquidos
biolgicos y, en particular, en la separacin de los componentes de la sangre:
glbulos rojos, glbulos blancos, plasma y plaquetas, entre otros, y para la
realizacin de mltiples pruebas y tratamientos.
Hay diversas clases de centrfugas, entre las que se citan las siguientes:
La
La
La
La
centrfuga de mesa
ultracentrfuga
centrfuga para microhematocrito
centrfuga de pie
ESTUFA DE LABORATORIO
Tambien llamada horno de laboratorio, es un tipo de horno comnmente usado
para deshidratar reactivos de laboratorio o secar instrumentos. El horno
aumenta su temperatura gradualmente conforme pase el tiempo as como
tambin sea su programacin, cuando la temperatura sea la ptima y se
estabilice, el trmico mantendr la temperatura; si esta desciende volver a
activar las resistencias para obtener la temperatura programada; posee un
tablero de control que muestra el punto de regulacin y la temperatura real
dentro del horno, est montada al frente para su fcil lectura, aunque algunos
modelos anteriores no lo tienen, estos cuentan con una perilla graduada la cual
regula temperatura del horno.
Especificaciones tcnicas
Tiene una capacidad para 20 crisoles, aunque tambin hay modelos que
pueden contener hasta 168 crisoles. Est recubierto por mltiples capas de
asbesto que impide que el calor llegue al exterior del instrumento y altere el
experimento o dae al operario. El horno funciona mediante resistencias
elctricas ubicadas en la parte inferior y los laterales de las paredes internas del
41
42
AUTOCLAVE
Una autoclave es un recipiente de presin metlico de paredes gruesas con un
cierre hermtico que permite trabajar a alta presin para realizar una reaccin
industrial, una coccin o una esterilizacin con vapor de agua. Su construccin
debe ser tal que resista la presin y temperatura desarrollada en su interior. La
presin elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a los 100
C. La accin conjunta de la temperatura y el vapor produce la coagulacin de
las protenas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la
reproduccin de stos, hecho que lleva a su destruccin.
Las autoclaves funcionan permitiendo la entrada o generacin de vapor de agua
pero restringiendo su salida, hasta obtener una presin interna de 103 kPa por
encima de la presin atmosfrica, lo cual provoca que el vapor alcance una
temperatura de 121 grados Celsius. Un tiempo tpico de esterilizacin a esta
temperatura y presin es de 15-20 minutos. Las autoclaves ms modernas
permiten realizar procesos a mayores temperaturas y presiones, con ciclos
estndar a 134 C a 200 kPa durante 5 min para esterilizar material metlico;
incluso llegan a realizar ciclos de vaco para acelerar el secado del material
esterilizado.
El hecho de contener fluido a alta presin implica que las autoclaves deben ser
de manufactura slida, usualmente en metal, y que se procure construirlas
totalmente hermticas.
Las autoclaves son ampliamente utilizadas en laboratorios, como una medida
elemental de esterilizacin de material. Aunque cabe notar que, debido a que el
proceso involucra vapor de agua a alta temperatura, ciertos materiales no
pueden ser esterilizados en autoclave, como el papel y muchos plsticos (a
excepcin del polipropileno). Si se puede esterilizar papel en bolsas de nylon,
eso se hace en odontologa para esterilizar los conos de papel absorbente
utilizados en endodoncia.
43
ESPECTROFOTMETRO
Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromtica
(de un largo de onda particular) a travs de una muestra y medir la cantidad
de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite al fisilogo realizar
dos funciones:
1.
Nos da informacin sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra. Esto
podemos lograrlo midiendo la absorbancia (Abs) a distintos largos de onda (l) y
graficar estos valores en funcin del largo de onda, formando un
espectrograma. Como cada sustancia tiene unas propiedades espectrales
nicas, distintas sustancias producen distintos espectrogramas. Esto se debe a
que cada sustancia tiene un arreglo de tomos tridimensional particular que
hace que cada sustancia tenga caractersticas nicas. Al ser expuestos a la luz
del espectrofotmetro, algunos electrones de los tomos que forman las
molculas absorben energa entrando a un estado alterado. Al recuperar su
estado original, la energa absorbida es emitida en forma de fotones. Esa
emisin de fotones es distinta para cada sustancia, generando un patrn
particular, que vara con el largo de onda usado. Dependiendo del largo de
onda, ser la cantidad de energa absorbida por una sustancia, lo que logra
generar un espectro particular al graficar Abs vs l
2.
Nos dice cuanta cantidad de la sustancia que nos interesa est presente
en la muestra. La concentracin es proporcional a la absorbancia, segn la Ley
Beer-Lambert: a mayor cantidad de molculas presentes en la muestra, mayor
ser la cantidad de energa absorbida por sus electrones.
Abs = K C L
Abs: absorbancia
K: coeficiente de extincin molar
C: concentracin
L: distancia que viaja la luz a travs de la muestra. (Normalmente es de 1 cm)
La cubeta promedio, que guarda la muestra, tiene dimensiones internas de un
centmetro (L). La ecuacin describe una lnea recta, donde el origen es cero. Si
L es constante (1.0 cm) y se conoce el valor de K, podemos calcular C en base
a Abs:
Abs / K L = C
El espectrofotmetro mide la absorbancia de una muestra en los espectros de
luz ultravioleta y visible (200 a 850 nm). El largo de onda es determinado por un
prisma que descompone el rayo de luz de acuerdo al largo de onda escogido.
Luego la luz pasa por una hendidura que determina la intensidad del haz. Este
haz atraviesa la muestra y llega a un tubo fotogrfico, donde es medido. La
cantidad de luz que atraviesa la muestra es el porcentaje (%) de transmitancia.
44
45
SOLUCIONES
QUMICAS
46
FUNDAMENTOS BSICOS
Una solucin es una mezcla homognea de dos o ms componentes. Al que se
encuentra en mayor proporcin se lo conoce como solvente o disolvente; al
que se encuentra en menor proporcin se lo llama soluto. La masa total de la
solucin es la suma de la masa de soluto ms la masa de solvente.
Las soluciones qumicas ms comunes son las lquidas, es decir, aquellas
que el soluto es un slido agregado al disolvente lquido (agua en la mayora
los casos). Tambin hay soluciones gaseosas (gases disueltos en gases) y
gases en lquidos, como oxgeno disuelto en agua. Un ejemplo de soluciones
slidos en slidos son las aleaciones.
en
de
de
de
47
CLASIFICACIN DE SUSTANCIAS
La clasificacin ms importante de los tipos de soluciones qumicas se hace
dependiendo de su concentracin, diferencindose entre las no saturadas
(diluidas o concentradas), saturadas y sobresaturadas.
SOLUCIN
DESCRIPCIN
Solucin no
saturada
Solucin saturada
Solucin
sobresaturada
IMAGEN
48
MEDIDAS DE CONCENTRACIN
Ya sabemos que la concentracin de las soluciones es la cantidad de soluto
contenido en una cantidad determinada de solvente o solucin. Tambin
debemos aclarar que los trminos diluida o concentrada expresan
concentraciones relativas.
Las unidades de concentracin en que se expresa una solucin o disolucin
pueden clasificarse en unidades fsicas y en unidades qumicas.
Definicin
Porcentaje peso a
peso (% P/P)
Porcentaje volumen
a volumen (% V/V)
Se refiere al volumen
de soluto por cada 100
unidades de volumen
de la solucin.
Porcentaje peso a
volumen (% P/V)
Indica el nmero de
gramos de soluto que
hay en cada 100 ml de
solucin.
Formula
49
V 2 C2
9,25
= 8,25 litros
Definicin
Fraccin molar
(Xi)
Se
define
como
la
relacin entre los moles
de un componente (ya
sea solvente o soluto) de
la solucin y los moles
totales presentes en la
solucin.
Molaridad (M)
Es el nmero de moles
de soluto contenido en
un litro de solucin. Una
solucin 4 molar (4 M) es
aquella
que
contiene
cuatro moles de soluto
por litro de solucin.
Formula
En
la
molalidad
relacionamos
la
molaridad del soluto con
el
que
estamos
trabajando con la masa
del disolvente (en kg)
que utilizamos.
Molalidad
La
definicin
de
molalidad es la siguiente:
Relacin entre el nmero
de moles de soluto por
kilogramos de disolvente
(m)
Normalidad
Es
la
cantidad
de
equivalentes qumicos de
soluto por cada litro de
solucin.
N = n eq/V
SOLUBILIDAD
En qumica, la solubilidad mide la capacidad de una determinada sustancia para
disolverse en un lquido.
51
CONCEPTO
La solubilidad es la mayor cantidad de soluto (gramos de sustancia) que se
puede disolver en 100 gramos (g). de disolvente a una temperatura fija, para
formar una disolucin saturada en cierta cantidad de disolvente.
Las sustancias no se disuelven en igual medida en un mismo disolvente. Con el
fin de poder comparar la capacidad que tiene un disolvente para disolver un
producto dado, se utiliza una magnitud que recibe el nombre de solubilidad.
La capacidad de una determinada cantidad de lquido para disolver una
sustancia slida no es ilimitada. Aadiendo soluto a un volumen dado de
disolvente se llega a un punto a partir del cual la disolucin no admite ms
soluto (un exceso de soluto se depositara en el fondo del recipiente). Se dice
entonces que est saturada.
Pues bien, la solubilidad de una sustancia respecto de un disolvente
determinado es la concentracin que corresponde al estado de saturacin a una
temperatura dada.
Las solubilidades de slidos en lquidos varan mucho de unos sistemas a otros.
As a 20 C la solubilidad del cloruro de sodio (NaCl) en agua es 6 M (molar) y en
alcohol etlico (C2H6O), a esa misma temperatura, es 0,009 M (molar). Cuando la
solubilidad es superior a 0,1 M (molar) se suele considerar la sustancia como
soluble en el disolvente considerado; por debajo de 0,1 M (molar) se considera
como poco soluble o incluso como insoluble si se aleja bastante de este valor de
referencia.
La solubilidad depende de la temperatura; de ah que su valor vaya siempre
acompaado del de la temperatura de trabajo. En la mayor parte de los casos,
la solubilidad aumenta al aumentar la temperatura.
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UNIDADES DE MEDIDA
Puesto que la solubilidad es la mxima concentracin que puede alcanzar un
soluto, se medir en las mismas unidades que la concentracin.
Es habitual medirla en gramos de soluto por litro de disolucin (g/l) o en gramos
de soluto por cada 100 cc de disolucin (%).
Aunque la unidad de medida se parezca a la de la densidad, no es una medida
de densidad. En la densidad, masa y volumen se refieren al mismo cuerpo. En la
solubilidad, la masa es de soluto y el volumen es de la disolucin, de la mezcla
de soluto y disolvente.
53
ANEXOS
54
REACTIVOS
QUMICOS
55
REACTIVOS Y ETIQUETAS
La pureza de los reactivos es fundamental para la exactitud que se obtiene en
cualquier anlisis. En el laboratorio se dispone de distintos tipos de reactivos
(slidos, lquidos o disoluciones preparadas) tal y como se comercializan.
TIPOS DE REACTIVOS
Reactivos slidos
Reactivos lquidos
Disoluciones preparadas
Hay reactivos que tienen caractersticas y usos especficos como los reactivos
de calidad patrn primario, que se emplean en las tcnicas volumtricas,
o los patrones de referencia.
ETIQUETA DE LOS REACTIVOS
Todo envase de reactivos debe llevar obligatoriamente, de manera legible e
indeleble, una etiqueta bien visible que contenga las distintas indicaciones que
se muestran en las siguientes figuras:
Etiqueta para un
reactivo slido
56
Etiqueta para un
reactivo lquido
Los pictogramas, las frases R de RIESGO y las frases S de SEGURIDAD aparecen
en las etiquetas del producto informando sobre la peligrosidad del mismo
COLORANTES Y
TINCIONES
57
COLORANTES
Un colorante se define como una sustancia capaz de dar color a clulas, tejidos,
fibras, etctera. De acuerdo con su origen, se pueden dividir en: colorantes
naturales, los cuales son extrados de plantas o animales, y colorantes
artificiales, que son aquellos de minerales procesados y manipulados en el
laboratorio.
COMPOSICIN
Qumicamente, el colorante est constituido de un componente cromforo y
un auxcromo. El cromforo es todo grupo aislado, covalente e insaturado,
que tiene una absorcin caracterstica en la regin ultravioleta o visible; dicho
de otra forma, es la capacidad que tiene la molcula para que sus electrones
absorban energa o luz visible, se exciten y emitan diversos colores de acuerdo
con la longitud de emitida como resultado del cambio en el nivel energtico.
Cabe mencionar que esta longitud de onda corresponde al rango de espectro
visible.
FUNCIN
Aunque los microorganismos vivos se pueden observar directamente en fresco
al microscopio ptico, la mayora de las veces es necesario teirlos para que
por medio del uso de colorantes, sea mucho ms fcil su identificacin;
adems, la presencia de ciertas estructuras, as como su reaccin a
determinadas tcnicas, nos permite clasificar a las bacterias.
As pues, los colorantes tienen las siguientes funciones:
1. Permiten hacer visibles a los objetos microscpicos y transparentes.
2. Revelan su forma y tamao.
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TINCIONES
Las tinciones se pueden clasificar como:
Tincin simple cuando toda la muestra se tie del mismo color y se utiliza un slo
colorante (azul de lactofenol o tinta china);
Tincin diferencial, cuando se visualiza ms de un color porque se utiliza ms de
un colorante (Gram o Ziehl-Neelsen);
Tincin especfica, cuando se utilizan anticuerpos marcados con una molcula
fluorescente
para
identificar
una
estructura
celular
en
particular
(inmunocitoqumico).
El control de calidad de los mtodos tintoriales es importante, ya que as se asegura
que la preparacin de la muestra haya sido adecuada, por lo que se recomienda
realizar al mismo tiempo de la evaluacin de la muestra clnica, la tincin de un
agente infeccioso ya identificado mediante esa tincin, el cual funcionar como un
control positivo.
Algunas tcnicas tintoriales como Gram o Ziehl-Neelsen requieren antes de su
proceso la fijacin de las muestras, con la finalidad de preservar la arquitectura
estructural y qumica de las clulas.
Existen dos tipos de fijadores: fsicos y qumicos.
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Desecacin
Calor seco
F I JA D O R E S
Fsicos
Calor hmedo
Ultrasonido
Microondas
xido crmico
cido actico
Oxidantes
cido pcrico
Acetona
Dicromato de
potasio
Qumicos
Formaldehdo
Glutaraldehdo
Reductores
Etanol
Metanol
Paraldehdo
Entre los procesos de fijacin fsicos se tienen los siguientes: desecacin, calor
seco, calor hmedo, ultrasonido y microondas, mientras que los procesos de
fijacin qumicos se pueden clasificar como oxidantes y reductores, de acuerdo
con sus propiedades qumicas. Entre los agentes qumicos oxidantes se
encuentran: xido crmico, cido actico, cido pcrico, acetona, dicromato de
potasio. Los agentes qumicos reductores son: formaldehdo, glutaraldehdo,
etanol, metanol, paraldehdo, etctera.
Quiz el mtodo fsico con mayor utilizacin en microbiologa es el calor seco,
que consiste en exponer directamente la laminilla a la flama del mechero, con
esto se logra detener los procesos vitales de las clulas y los microorganismos.
Sin embargo, la sobreexposicin, o la exposicin en una zona incorrecta de la
flama (zona fra, zona caliente y zona de fusin) repercutir en el efecto
deseado; es muy comn provocar alteraciones morfolgicas y destruccin
celular. Este mtodo preserva el extendido por poco tiempo, por lo que se
recomienda utilizar un mtodo qumico, que precipite protenas, antes de teir.
Los mtodos qumicos ofrecen mejores resultados para la fijacin, ya que son
lquidos con potencial alto de difusin intracelular y detienen procesos
enzimticos que provocan autolisis.
60
Tincin de Gram
Esta tincin es un procedimiento de gran utilidad empleado en los laboratorios
donde se manejan pruebas microbiolgicas. Es definida como una tincin
diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos
grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas.
Fue desarrollada por el cientfico dans Hans Christian Gram en 1884; hoy en
da, sigue siendo una de las tinciones ms utilizadas universalmente debido a lo
econmico, sencillo y eficaz que resulta.
En microbiologa clnica resulta de gran utilidad, ya que a partir de muestras
clnicas directas provenientes de sitios estriles se puede saber de manera
rpida las caractersticas de la muestra y hacer una diferencia de los
potenciales microorganismos causantes de una infeccin.
Los principios de la tincin de Gram estn basados en las caractersticas de la
pared celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a
cada microorganismo.
La pared celular de las bacterias Gram negativas est constituida por
una capa fina de peptidoglicano y una membrana celular externa.
Las bacterias Gram positivas poseen una pared celular gruesa
constituida por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular
externa.
61
II.
III.
IV.
62
Tincin de Wright
La tincin de Wright es una tcnica que se emplea generalmente para la
diferenciacin de elementos celulares de la sangre y es clasificada como una
tincin policromtica, dado que puede teir compuestos cidos o bsicos
presentes en una clula.
Fue desarrollada por el patlogo James Homer Wright en 1902 a partir de la
modificacin de la ya existente tincin de Romanowsky, utilizada para
diferenciar elementos formes de la sangre.
Esta tincin tiene diversos usos en microbiologa; en la parasitologa, se le
emplea en la bsqueda de hematozoarios como Plasmodium spp. El reactivo de
Wright est compuesto por eosina y azul de metileno, cuando ste se oxida
se conoce como azur B a una concentracin de 0.8 g/L empleando como
solvente alcohol metlico. La eosina es un colorante cido que tiene afinidad por
componentes alcalinos.
Existen dos compuestos conocidos como eosina y que estn intrnsecamente
relacionados: eosina Y, conocida tambin como tetrabromofluorescena o,
comnmente,
eosina
amarilla,
y
la
eosina
B,
conocida
como
dibromodinitrofluorescena o eritrosina B azulada Ambos compuestos son
intercambiables, sin que sean notables las diferencias entre ellos en el
resultado de la tincin, por lo que la preferencia de una sobre otra no sigue un
criterio objetivo.
A pesar de ello, la eosina Y es la ms utilizada en procedimientos rutinarios. Es
un compuesto cido cuya propiedad est basada en su polaridad negativa, lo
que le permite enlazarse con constituyentes celulares de carga positiva; por
esta razn, colorea componentes citoplasmticos y se les conoce como
acidfilos. La tonalidad resultante de la tincin con eosina es rosada-anaranjada
para citoplasmas, y rojo intenso en el caso de los eritrocitos.
El tpico color de los ncleos celulares, mayoritariamente morado, se basa en la
interaccin molecular entre eosina y un complejo azul de metileno-DNA. La
intensidad de la coloracin depende del contenido de azur B y de la relacin con
la eosina amarilla.
El resultado de la tincin puede ser influido por diferentes factores, como el
valor del pH de los colorantes y de la solucin amortiguadora, esto debido a que
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Tincin de Ziehl-Neelsen
La tincin de Ziehl-Neelsen es la tcnica comnmente usada en el diagnstico
rutinario de tuberculosis. Es una tcnica rpida, fcil y de bajo costo, lo que
permite que se pueda realizar en casi cualquier laboratorio clnico.
Esta tincin permite diferenciar a las bacterias en dos grupos: aquellos que son
capaces de resistir la decoloracin con alcohol-cido y aquellos que no lo son.
La sensibilidad de esta tincin para identificar bacilos cido-alcohol resistentes
64
65
MEDIOS DE
CULTIVO
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MEDIOS DE CULTIVO
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos
es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en
el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se
han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial
debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de
humedad y presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto de acidez
o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de
crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares
en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de
muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la
que se aadirn otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de
medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo
y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene
efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que
crecen en l.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que
bastantes bacterias provocan su licuacin.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de
enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc.
Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de
fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la
sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los
microorganismos menos resistentes.
Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas
bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en
pH bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor
ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).
Lquidos
Semislidos
Slidos
Agar Sangre
El agar sangre es una combinacin de un agar base (agar nutritivo) con fuente
proteica (digeridos trpticos, digeridos proteicos de soja) el cual tiene un agregado
de 5 % de sangre ovina, (tambin puede usarse sangre humana, para cultivos en
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BIBLIOGRAFA
http://www.tplaboratorioquimico.com/laboratorio-quimico/materiales-einstrumentos-de-un-laboratorio-quimico/
http://www.profesorenlinea.com.mx/Quimica/Disoluciones_quimicas.html
http://www.quimicaweb.net/ciencia/paginas/laboratorio/material.html
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