Universidad de Chile

Facultad de Ciencias Fsicas y Matemticas

Departamento de Ingeniera Civil Qumica y Biotecnologa
BT3401-1 Biologa y Biotecnologa

Produccin de etanol
en una fermentacin
batch

Integrantes

: Constanza Garcs
Joaqun Morales
Luis Rodrguez

Profesores
Mara

: Juan Asenjo, Ana

Ronco, Oriana

Salazar
Profesora
Auxiliar

: Daniela Vaismann

Ayudantes

: Lisset Manzano

Fecha
2012

: 14 de Mayo del

RESUMEN
En el presente trabajo se analiz el crecimiento y cintica de
formacin de etanol por la levadura Saccharomyces ovarum en una
fermentacin anaerbica a una temperatura de 25C y pH 7,0 en un cultivo
tipo batch en un fermentador Biostat B-2. Utilizando un modelo matemtico
y una regresin polinmica, se obtuvieron diversos parmetros de
fermentacin. Se encontr que la velocidad de crecimiento especfica
mxima
era
0,690 [h]-1 correspondiente a t=0, mientras que la
concentraciones mximas de biomasa y etanol eran 8,23 [gr/l] en t = 37,02
[h] 88,13 [gr/l] en t = 43,27 [h] respectivamente. La velocidad de
produccin de etanol mxima era 2.78 [gr/lh] en t= 14,27 [h]. Por otra
parte, se estudi el rendimiento de etanol en glucosa y el de biomasa en
glucosa, y se observ que el primero aumente en el tiempo, mientras que el
segundo disminuye.

NDICE
INTRODUCCIN
PGINA 4

------------------------------------------------------------------------------

1.1. OBJETIVOS GENERALES--------------------------------------------PGINA 5

1.2. OBJETIVOS ESPECFICOS ------------------------------------------PGINA 5
MATERIALES Y MTODOS -------------------------------------------------------------------PGINA 6
2.1 ORGANISMOS Y MEDIO DE CULTIVO ---------------------------PGINA 6
2.2 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL -------------------------------PGINA 6
2.3 MTODOS ANALTICOS --------------------------------------------PGINA 6
RESULTADOS -----------------------------------------------------------------------------------PGINA 8
DISCUSIN -------------------------------------------------------------------------------------PGINA 10
CONCLUSIONES -------------------------------------------------------------------------------PGINA 11
BIBLIOGRAFA ----------------------------------------------------------------------------------PGINA 12
ANEXO 1 ----------------------------------------------------------------------------------------PGINA 13

1.

INTRODUCCIN

La mayora de los organismos vivos obtienen la energa necesaria para

sustentar la vida desde la oxidacin por oxigeno molecular de sustancias
orgnicas, en el proceso de respiracin celular. Bajo condiciones
anaerbicas, muchos organismos, incluyendo levaduras, obtienen energa
mediante el proceso de fermentacin; lctica o alcohlica.
Las levaduras son cuerpos unicelulares (2 a 4 m) presentes de forma
natural en algunos productos como las frutas, cereales y verduras. Se
denominan organismos anaerbicos facultativos, es decir que pueden
desarrollar sus funciones biolgicas sin oxgeno
En la fermentacin alcohlica, caracterstica de muchas especies de
levaduras, ente ellas la Saccharomyces uvarum, la reaccin comienza con
una molcula de azcar de seis carbonos (glucosa) y termina con dos
molculas de alcohol de dos carbonos (etanol), dos molculas de CO 2 y dos
molculas de ATP que consumen los propios microorganismos en
su metabolismo:

C6H12O6 + 2 Pi + 2 ADP

Levadur
a

2 CH3-CH2OH + 2 CO2 + 2 ATP +

25.5 kcal
La secuencia de transformaciones para degradar la molcula de
glucosa hasta dos molculas de alcohol es un proceso complejo.
Cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo
apropiado, los mismos comienzan a dividirse activamente (crecimiento
exponencial) empleando los nutrientes que le aporta el medio de cultivo
para aumentar su nmero. Este proceso contina hasta que algn nutriente
del medio de cultivo se agota (sustrato limitante) y el crecimiento se
detiene. Tambin puede detenerse el crecimiento por acumulacin de
alguna substancia inhibidora formada por los mismos microorganismos.[1]
Para evaluar esta transformacin se utiliza el rendimiento de etanol

Y
[ E]
en glucosa ( [G ] )

Y
[B]
y el de biomasa en glucosa ( [G ] ) .

Diversos parmetros afectan el rendimiento, como son la clase de

microorganismo utilizado, la concentracin de glucosa, concentracin de
etanol, temperatura, pH y la concentracin de nutrientes.
En el presente trabajo, se estudia el crecimiento y cintica de
formacin de producto en una fermentacin anaerobia llevada a cabo por
5

Saccharomyces uvarum a una temperatura de 25C y pH 7.0 en un cultivo

batch, proceso discontinuo por lotes.

1.1

OBJETIVOS GENERALES

Examinar el crecimiento y la cintica de la formacin de producto

(etanol) en una fermentacin anaerobia con levaduras a 25 por 48 horas.

1.2

OBJETIVOS ESPECFICOS

Determinar los siguientes parmetros de fermentacin:

(1) Velocidad de crecimiento especfica mxima.
(2) Concentracin mxima de biomasa.
(3) Concentracin mxima de etanol.
(4) Velocidad de produccin de etanol mxima.
(5) Rendimiento de etanol en glucosa.
(6) Rendimiento de biomasa en glucosa.

(7)

2.MATERIALES Y MTODOS
2.1 ORGANISMOS Y MEDIO DE CULTIVO
Se utiliz Saccharomyces uvarum ATCC 26602, un tipo de levadura
altamente floculante [2].
El crecimiento se llev a cabo en un fermentador Biostat B-2 de Braun
Biotechnology, donde todas las aplicaciones necesarias para controlar la
fermentacin, como bombas de dosificacin, agitador de 6 hojas, mdulos
de medida y control de variables, estn combinados en una unidad bsica
que puede funcionar casi de forma automtica.
Las condiciones fijadas para llevar a cabo la fermentacin fueron;
mantener un pH igual a 7.0 y una temperatura de 25C en ausencia de aire
(sin oxgeno), es decir, en un medio anaerbico.
La composicin del medio de cultivo por 1 litro fue: 250 gr glucosa, 10
gr extracto de levadura Oxoid, 6.4 gr de urea, 1.2 gr de KH2PO4, 0.18 gr de
Na2HPO4, 10 ml de una solucin A y 10 ml de una solucin B. La solucin A
contena las siguientes trazas de metales: 5.6 gr de CaO, 2.0 gr de ZnO,
27.0 gr de FeCl3*6H2O, 5.0 gr MnCl2*4H2O, 0.85 gr CuCl2*2H2O, 1.2 gr
CoCl2*6H2O, 0.3 gr de H3BO3 y 65 ml de HCl concentrado 5:1 con agua
destilada. La solucin B contena 50.5 gr de MgO, 225 ml de HCl
concentrado a razn 5:1 con agua [3].

2.2 PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

Colonias simples de levadura fueron tomadas de tubos de cultivo y se
transfirieron a un matriz Erlenmeyer esterilizado [que contena 100 ml con
10% glucosa.] Despus de 24 horas agitando la mezcla a 25C, se transfiri
al fermentador que contena 900 ml del medio de cultivo [3]. Nitrgeno
gaseoso (N2) se introdujo al fermentador por 3 horas antes y despus de la
inoculacin para mantener la anaerobiosis. El cultivo se mantuvo agitado
suavemente para mantener un cultivo homogneo durante todo el proceso.
El pH se mantuvo controlado a un valor de 7.0 con la adicin automtica
(por parte del fermentador) de NaOH 4M. Para mantener la temperatura a
25C y reducir la evaporacin de etanol se recircul agua por la doble
camisa del fermentador.

2.3 MTODOS ANALTICOS

Se tomaron muestras de 10 ml del fermentador a intervalos de
tiempo durante 48 horas para determinar el peso seco de la biomasa. La
cantidad de glucosa fue estimada usando el mtodo del cido
dinitrosaliclico [4]. Para la estimacin del etanol, se sigui el procedimiento
desarrollado por Sawyer y Dixon.
7

Para modelar la variacin de las concentraciones de biomasa, glucosa

y producto en el tiempo a partir de una tabla de datos discretos se realiz
una regresin polinmica de segundo grado para el caso glucosa y de tercer
grado para biomasa y etanol usando una planilla en el programa Office
Excel. Luego, utilizando estas curvas se calcularon los parmetros de
fermentacin pedidos en el intervalo 0-50 horas, usando las siguientes
ecuaciones:

(1) Velocidad de crecimiento especfica:

(2) Concentracin mxima de biomasa:

mx =

1 d [ B]

[B] dt

[ E ] =[E]
d [ E]
dt

( mx )=0

(3) Concentracin mxima de etanol:

[ B ] =[ B]
d [ B]
( mx )=0
dt

(4) Velocidad de produccin de etanol

mxima:

d [E ] d [E ]
=
dt
dt
( mx)=0
d 2 [ E]

dt 2

(5) Rendimiento de etanol en glucosa:

d [E ]
/d [G]
d [ E ] ( t)
dt
Y [ E] =
=
dt
d [ G ] (t)
[G]

(6) Rendimiento de biomasa en glucosa:

d [ B]
/d [G]
d [ B ] (t)
dt
Y [ B] =
=
dt
d [ G ] (t)
[G]

3.RESULTADOS
Las regresiones polinmicas arrojaron las siguientes curvas (grfico 1):
Biomasa
(tercer grado):
Glucosa
(segundo grado):
Etanol
(tercer grado):

[B] = 0,00008t3 - 0,0119t2 + 0,5522t +

0,0718
[G] = 0,0875t2 - 9,403t + 259,08
[E] = -0,0011t3 + 0,0471t2 + 2,103t 1,9341

R =
0,9731
R =
0,9876
R =
0,994

Grfico 1: Ajuste de datos discretos obtenidos mediante curvas polinmicas.

De (1) se obtuvo mx = 0,690 [h]-1 en t = 0
De (2) se obtuvo que la concentracin mxima de biomasa [B] mx = 8,23 [gr/l] en
t = 37,02 [h].
De (3) se obtuvo que la concentracin mxima de etanol [E] mx = 88,13 [gr/l] en t
= 43,27 [h].
De (4) se obtuvo que la velocidad de produccin de etanol mxima d[E]/dt mx =
2,78 [gr/lh] en t= 14,27 [h].
De (5) se obtuvo que el rendimiento de etanol en glucosa se comporta de la
siguiente manera en el tiempo:
9

Y [ E ] ( t)=
[G ]

0,0033 t +0,0942 t2,103

0,175 t 9,403

De (6) se obtuvo que el rendimiento de biomasa en glucosa se

comporta de la siguiente manera:

Y [ B ] ( t)=
[G ]

0,00024 t 2 +0,0238 t0,5522

0,175 t9,403

Los valores obtenidos para los ltimos dos parmetros los podemos
apreciar en los grficos 1 y 2:

Grfico 2: Rendimiento de biomasa en glucosa vs tiempo.

Grfico 3: Rendimiento de etanol en glucosa vs tiempo.

Se adjuntan en la planilla anexa (anexo 1) los valores obtenidos en las funciones
de regresin y los distintos parmetros y su variacin en el tiempo.
10

4.DISCUSIN
Acerca de las valores obtenidos para la fermentacin Batch a 25C se
puede observar que hay un coeficiente de regresin R 2 cercano a 1. Esto
muestra que el modelo matemtico utilizado tiene determinada exactitud.
Los polinomios permiten diferenciar sin mayor dificultad y los clculos
matemticos se limitaron a encontrar races cuadrticas y cbicas.
Los datos hacen sentido: una poblacin de levaduras en crecimiento a
medida que consume glucosa, la utiliza y libera al fermentador su producto
metablico (el etanol). Por otro lado, a medida que el alimento se va
agotando y aumenta la concentracin del alcohol el ambiente alcanza poco
a poco su capacidad de carga al estancarse el crecimiento de Saccaromyces
uvarum e incluso disminuir por dos factores: la falta del azcar y la toxicidad
del etanol.
Existe una aproximada correlacin entre [E] y [B] en el intervalo, tal
como lo seala la ecuacin diferencial vista en clases:

d [E ]
d [B]
=
dt
dt . Es

por eso que se puede afirmar que el etanol es un producto asociado al

crecimiento.
Los parmetros de fermentacin muestran que existe una explosin
reproductiva en la poblacin al comienzo pues el ambiente es rico en
nutrientes y no es txico. Es por eso que es completamente factible que la
mx = 0,690 [h]-1 se obtenga en t = 0. Por su lado, los rendimientos permiten
intuir las siguientes relaciones; la eficiencia metablica de una colonia
disminuye a medida que va aumentando la biomasa; se va liberando cada
vez ms etanol al metabolizar la misma cantidad de glucosa. Tambin se
puede inferir por la tendencia del rendimiento de biomasa en glucosa que
las levaduras utilizan a esta ltima principalmente en reproducirse, pues
una vez que se alcanza la capacidad de carga la colonia disminuye su
consumo considerablemente. Puede atribuirse a que inteligentemente
optimiza su mantenimiento ante la escasez para sobrevivir.

11

5.CONCLUSIONES
Los parmetros de fermentacin obtenidos son los siguientes:

mx = 0,690 [h]-1 en t = 0
La concentracin mxima de biomasa [B] mx = 8,23 [gr/l] en t = 37,02 [h].
La concentracin mxima de etanol [E]mx = 88,13 [gr/l] en t = 43,27 [h].
La velocidad de produccin de etanol mxima d[E]/dt mx = 2,78 [gr/lh] en t=
14,27 [h].
El rendimiento de etanol en glucosa se comporta de la siguiente manera en
el tiempo:
2

Y [ E ] ( t )=
[G ]

0,0033 t +0,0942 t2,103

0,175 t9,403

El rendimiento de biomasa en glucosa se comporta de la siguiente manera:

Y [ B ] ( t)=
[G ]

0,00024 t 20,0238t +0,5522

0,175 t9,403

El etanol es un producto asociado al crecimiento de Saccaromyces

uvarum.

12

5.BIBLIOGRAFA
[1]
MARA DE LOURDES ESCAMILLA HURTADO, FRIDA MALPICA SNCHEZ,
ALBERTO REYES DORANTES Y JOS RAMN VERDE CALVO. DEPTO.
BIOTECNOLOGA. DIV. CIENCIAS BIOLGICAS Y DE LA SALUD. UNIDAD
IZTAPALAPA. UNIVERSIDAD AUTNOMA METROPOLITANA. [en lnea]
<http://docencia.izt.uam.mx/mleh/alimentos_fermentados/otros_sitios/C
ontenido.htm> [ULTIMA VISITA 15/05/2012]
[2] ROSE, D., 1976, PROC. BIOCHEM, 11, (2), 10-12.
[3] JAE HEUNG LEE, D. WILLIAMSON
BIOTECHNOLOGY LETTERS, 2, 83-88.

AND

P.L.

ROGERS,

1980,

[4] SAWADA, H AND ROGERS, P.L., 1977, J. FERM. TECHNOL, 55, 297-310.

13

5.ANEXO 1
Tabla 1: Datos entregados por las curvas ajustadas a los valores discretos.

Datos de curvas ajustadas para una fermentacin a

25C
B = 8E-05t3
- 0,0119t2 +
0,5522t +
0,0718

[G] =
0,0875t2 9,403t +
259,08

[E] =
-0,0011t3 +
0,0471t2 +
2,103t 1,9341

=1/
[B]0,00024t
20,0238t+0,5
522

VPE=0,0033t20,0942t+2,1
03

Ye/g= VPE/
(0,175t9,403)

Yb/g=(0,00024t20,0238t+0,5
522)/
(0,175t9,403)

Tiempo
[h]
0

Biomas
a [g/L]
0,8

Glucosa
[g/L]
259,08

Etanol
[g/L]
-2

g/hL]
0,690

VPE
[g/h]
2,103

Ye/g

Yb/g

0,224

0,059

1,6

232

0,297

2,415

0,272

0,054

3,0

206

12

0,141

2,787

0,334

0,050

4,1

182

20

0,086

3,218

0,411

0,046

12

5,1

159

28

0,059

3,709

0,508

0,041

15

5,9

138

36

0,042

4,259

0,628

0,037

20

7,0

106

50

0,025

5,307

0,899

0,029

24

7,6

84

60

0,016

6,265

1,204

0,023

28

8,0

64

69

0,009

7,328

1,627

0,016

34

8,2

41

80

0,002

9,121

2,641

0,006

37

8,3

31

83

0,000

10,106

3,452

0,000

44

8,1

15

86

-0,004

12,637

7,420

-0,018

48

8,0

83

-0,005

14,228

14,185

-0,037

14