UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSE DE CALDAS

BIOQUIMICA -DETERMINACION DE AZUCARES EN ORINA MEDIANTE

PRUEBAS DE TUBO Y FORMAION DE CRISTALES.
Grupo 1: Ochoa L* Roa D* Otalora L*.
------------------------------------------------------------------------------------------------------------------PRUEBA BENEDICT
Este ensayo es usado para determinar azucares reductores,todos los
monomeros contienen funciones quimicas (aldehidos y cetonas)que pueden
reducir otras sustancias,el fundamento de la tecnica es la reducion del
complejo cuprico para dar paso a la formacion de acidos de azucares
tornando la solucion de un azul a un color rojo ladrillo o en este caso amarillo
turbio,los tubos de ensayio que tienen coloracion verde contienen rectivo en
exceso pero por el cambio observado se toma como prueba positiva,segun la
figura
1,las
pruebas
positivas
fueron
la
fructosa,arabinosa,xilosa,ribosa,xilulosa,glucosa,lactosa,galactosa
y
la
muestra problema .
Figura1.Pruebas
de
tubo
Benedict:
Blanco,control,fructosa,
(xilosa,ribosa),xilulosa,glucosa,lactosa,galactosa,muestra
24,muestra
problema.

Figura 2.Reaccion de la glucosa con reactivo benedict.

PRUEBA MOLISCH

Este ensayo es usado para la identificacion de hidratos de carbono que al ser

puesta en accion con el acido sulfurico se produce una accion deshidratante
sobre los enlaces glucosidicos que precipitan por la accion de alfa naftol,la
reaccion se considera positiva al evidenciarse formacion de un anillo rojo
violaceo o purpura.Como se muestra en la figura 3 la prueba fue positiva
para maltosa y debia ser positiva para lactosa y sacarosa,la muestra
problema presenta prueba positiva.
Figura 3. Prueba de tubo Molisch:
Blanco,muestra de 12 h,muestra 24,Lactosa,sacarosa,maltosa.

Figura 4.Reaccion del monomero con H2SO4 concentrado y Reaccion del

derivado furfural con el alfa naftol.

PRUEBA SELIVANOFF
La prueba se usa para identificacion de aldosas y cetosas siendo las primeras
mas eficientes en la reaccion con acido sulfurico para la formacion del
furfural y posteriormente con el resorcinal.La cetosas pueden sufrir procesos
de deshidratacion dando un anillo de furfural o hidroximetilfurfural deacuerdo
al monosacarido sea pentosa o hexosa estos furfurales se condensan dando
coloraciones rojas,a traves de esta prueba es posible diferenciar cetosas al
ser mas rapidas en reaccion,la fructosa debia dar prueba positiva sin
embargo hubo interferencia y no se dio la reaccion,por su parte la sacarosa al
contener en su configuracion la fructosa da tambien prueba positiva lo que se
confirma con los resultados que se muestran en la figura 5. segun la cual la
prueba resulto positiva para la sacarosa y la muestra de 24 h.
Figura 5.Pruebas de tubo Selivanof
Blanco,muestra
12h,muestra
problema,fructosa,xilulosa,sacarosa,glucosa

24h,muestra

Figura 6.Reaccion de las cetohexosas con el reactivo de selivanof

PRUEBA BIAL
El reactivo empleado en esta prueba contiene acido clorhidrico que permite
la deshidratacion de las pentosas de esta manera se generan los furfurales
que reaccionan con orcinol y hierro ,la coloracion resultante debe ser azulverdoso,la prueba no se presento positiva como se esperaba en
arabinosa,ribosa,xilulosa,xilosa por diferentes interferencias aunque si se
evidencio un cambio significativo de color , la muestra problema si fue
positiva.ver figura 7.
Figura 7.Pruebas de tubo Bial:
blanco,control,24 h,arabinosa-xilosa,xilulosa,ribosa.

Figura 8.Reaccion de las pentosas con reactivo Bial

PRUEBA FEHLING
Esta
prueba
permite
la
identificacion
de
azucares
reductores,glucosa,ribosa,eritrosa etc,el fundamento del ensayo consiste en
una reaccion redox en la que el grupo aldehido es oxidado a su acido
correspondiente por el cobre que pasa de estado +2 a +1.
La prueba se considera positiva si existe un precipitado amarillo o si el color
amarillo es levemente anaranjado,asi mismo un precipitado rojo tambien es
positiva.Al observar los resultados consignados en la figura 9 se concluye
Figura 9.Pruebas de tubo Fehling:
blanco,muestra de 12 h ,muestra
arabinosa,glucosa,ribosa,galactosa.

24

h,muestra

problema,xilosa-

Figura 10.Reaccion de los carbohidratos con el reactivo de Fehling.

PRUEBA TOLLENS
El ensayo de reactivo de tollens consiste en una reaccion de oxidacion,con
esta prueba se identifica las aldosas pues en teoria las cetosas no
reaccionan.En la reaccion el reactivo se oxida completamente y genera
espejo de plata pues el ion de plata se reduce a plata elemental.Los azucares
en presencia de un medio basico generan el ion carboxilato para formar el
espejo,segun la figura 11 se evidencia prueba positiva para
xilosa,ribosa,glucosa,lactosa,galactosa,la prueba control y muestra de 24h.
Figura 11.Pruebas de tubo Tollens:
control,muestra
problema,xilosa,ribosa,glucosa,lactosa,galactosa.

24h,muestra

Figura 12.Reaccion de los carbohidratos con el reactivo de Tollens

PRUEBA BRADFOED
Este analisis permite distinguir entre monosacaridos y disacaridos,la
velocidad de reaccion para reducir el ion Cu+2 por accion del monomero es
mas rapida que la del disacarido,tambien es limitada por el tamao de la
molecula siendo consecuentemente con la naturaleza de la molecula.Se

considera una reaccion positiva cuando existe precipitado ladrillo debido a la

formacion de oxido de cobre.Segun la figura 13 se evidencia muestra positiva
para lactosa,galactosa,maltosa,ramnosa,control,muestra 24 h y muestra
problema.
Figura 13.Pruebas de tubo Bradfoed:
blanco
,control,muestra
problema,Lactosa,Galactosa,Maltosa,Sacarosa.

24h,muestra

Figura 14.Reaccion de los carbohidratos con el reactivo de Bradfoed.

PRUEBAS DE OSAZONAS
Las aldosas y cetosas reaccionan con la fenilhidrazina para formacion de
fenilhidrazonas,si existe un exceso se forma la osazona que contendra
consecuentemente dos residuos de fenilhidrazina y una tercera molecula del
reactivo se convierte en anilina y amoniaco.
Figura 15. Formacion de osazonas.

Cristales patron pruebas osazona y pruebas mucico

Arabinosa

Galactosa

Fructosa

Manosa

Xilosa

Glucosa

Lactosa

Ribosa
Pruebas mucico

Lactosa

Galactosa

Glucosa

Glu
Pruebas de osazona
muestra de 12h

existencia de fructosa (confirmado por prueba tollens,por ser hidroxicetona)

glucosa (confirmado por prueba fehling,tollens,bradfoed)
Prueba 24 osazona

Prueba galactosa positiva,cristales en forma de rombo

Prueba lactosa positiva
Ribosa prueba positiva (prueba bial,tollens,bradfoed,selivanof)
Osazona muestra problema

Presencia de Lactosa cristales en disposicion radial en forma de x,agujas o

prismas largos
Presencia de fructosa cristales en agujas.

Pruebas mucico
Mucico 12 horas

Presencia de galactosa
Presencia de Lactosa forma de arboles
Presencia de glucosa (confirmado prueba fehling,tollens,bradfoed)
Mucico Muestra problema

Presencia de lactosa
Mucico 24 horas

presencia de lactosa cristales en forma de arbolitos

Galactosa (cristales rombicos o vistos a poco aumento esferas)

Analisis de resultados
La presencia de galactosa en la orina nos puede detectar una enfermedad
muy conocida como la galactosemia que indica un desorden preocupante en
la incapacidad que tienen las personas para metabolizar de moda adecuada
la galactosa a glucosa. Esto se debe a la deficiencia de tres enzimas
principalmente,las cuales son galactosa 1-fosfato uridiltrasferasa (GALT),
galactocinasa y UDP- galactosa-4- epimerasa. Causando enfermedades como
la galactosemia, cataratas en adultos o producir sntomas leves.ver Ruta
metabolica de la galactosa[1].
La fructosa en la orina puede ser una deficiencia enzimtica que es causada
por la fructoquinasa ya que esta se trasforma muy lentamente de fructosa a
fructosa 6 fosfato. Por dicha razn solo es detectada cuando se busca
azucares reductores en la orina.
Lactosuria es la segunda azcar que es eliminada con mayor frecuencia en
la orina no es peligrosa y se encurta en personas que estn embarazadas,
aunque no es el caso que pasa en nuestro informe se puede ser confundida
con la galactosuria creando un falso diagnostico que puede no prevenir la
diabetes Mellitus gestacional
Grandes presencia de ribosa puede ser un indicador de alarma, ya que al
detectar D- ribosa puede revelar una enfermedad llamada distrofia muscular
la cual evita una buena funcin motriz. Pero esta presencia de estas
pentosas puede ser por el consumo de cerezas, moras o ciruelas.
Ruta metabolica de la galactosa [1]