UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE
FARMACIA Y BIOQUMICA

PROYECTO DE TESIS I
Identificacin

preliminar

de

fitoconstituyentes

de

las

hojas

inflorescencias de Tanacetum parthenium (marihuayta) procedentes del

distrito de Huancaspata - La Libertad.
AUTORES:

Roque Rodrguez, Jorge Luis

Salazar Urbano, Harwin Jhoel

Mg. Soto Vsquez, Maril Roxana.

ASESOR:

TRUJILLLO - PERU
2011

NDICE

I.

GENERALIDADES ....................................................................... Pg.1

1. Titulo .......................................................................................... Pg.1
2. Tipo de investigacin .................................................................. Pg.2
3. Fecha de inicio y trmino del proyecto ........................................ Pg.3
4. Recursos disponibles y no disponibles ......................................... Pg.7
5. Financiamiento .......................................................................... Pg.10

II.

PLAN DE INVESTIGACIN ...................................................... Pg.11

1. Realidad problemtica............................................................... Pg.11
2. Justificacin .............................................................................. Pg.15
3. Problema .................................................................................. Pg.16
4. Hiptesis ................................................................................... Pg.16
5. Objetivos .................................................................................. Pg.16
6. Diseo de contrastacin ............................................................ Pg.17
7. Referencias Bibliogrficas ........................................................ Pg.31
8. Anexos ..................................................................................... Pg.34

PROYECTO DE INVESTIGACIN
I)

GENERALIDADES
1. TTULO
Identificacin preliminar de fitoconstituyentes de las hojas e inflorescencias de
Tanacetum parthenium (marihuayta) procedentes del distrito de Huancaspata La Libertad.

2. PERSONAL INVESTIGADOR
2.1. AUTORES
Roque Rodrguez, Jorge Luis
Estudiante del VI ciclo de la Facultad de Farmacia y Bioqumica
de la Universidad Nacional de Trujillo
N de matrcula: 511102509
Correo electrnico: sky_tk5@hotmail.com
Salazar Urbano, Harwin Jhoel
Estudiante del VI Ciclo de la Facultad de Farmacia y Bioqumica
de la Universidad Nacional de Trujillo
N de matrcula: 0011100409
Correo electrnico: joel_12_90@hotmail.es
2.2. ASESOR
Mg. Soto Vsquez, Maril Roxana

Docente de las Ctedras de Farmacognosia y Farmacobotnica del

Departamento de Farmacotecnia de la Facultad de l Facultad de
Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo.
Cdigo: 5727
Correo electrnico: marilu_roxana@hotmail.com

3. TIPO DE INVESTIGACIN:
3.1 De acuerdo a la orientacin: Bsica.
3.2 De acuerdo a la tcnica de contrastacin: Descriptiva.

4.

RGIMEN DE INVESTIGACIN:
Libre.

5.

AREA DE INVESTIGACIN
Ciencias naturales.

6.

LINEAS Y SUB LINEAS DE INVESTIGACIN

Lnea: Productos naturales
Sub lnea: Plantas medicinales

7.

INSTITUCIN A LA QUE PERTENECE EL PROYECTO:

Universidad Nacional de Trujillo.
Facultad de Farmacia y Bioqumica.
Departamento Acadmico de Farmacotecnia.
Seccin de Farmacognosia.

8.

LOCALIDAD E INSTITUCIN DONDE SE EJECUTAR EL

PROYECTO:
Localidad: Trujillo La Libertad.
Institucin: Universidad Nacional de Trujillo.
Facultad de Farmacia y Bioqumica.
Laboratorio: Farmacognosia y Farmacobotnica.

9.

DURACION TOTAL DEL PROYECTO:

16 semanas.

10. FECHA DE INICIO Y TRMINO:

Supeditado a la aprobacin del proyecto.
11. CRONOGRAMA DE EJECUCION DEL PROYECTO
ETAPAS

TIEMPO DE

HORAS

DURACN

SEMANALES

Recoleccin de Datos

8 semanas

08

Anlisis de Datos

4 semanas

05

Elaboracin del
Informe

4 semanas

05

12. HORAS SEMANALES DEDICADAS AL PROYECTO:

Alumnos: 15 horas.
Asesor: 3 horas.
13. RECURSOS DISPONIBLES:
13.1. PERSONAL
Autores: Roque Rodrguez, Jorge Luis.

Salazar Urbano, Harwin Jhoel.

Asesor:

Mg. Soto Vsquez, Maril Roxana.

13.2. MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO

MATERIAL BIOLGICO:
1 Kg de hojas y 1 kg de inflorescencias de Tanacetum
parthenium (marihuayta) procedentes del distrito de Huancaspata
- La Libertad.

MATERIAL DE LABORATORIO
Material de vidrio
De uso comn en el Laboratorio de Farmacognosia
Material qumico
Reactivos:
cido 3,5 dinitrobenzoico
cido actico
cido ntrico
cido clorhdrico
cido pcrico
cido sulfrico
Alcohol amlico
Anhdrido Actico

Bicloruro de mercurio
Carbonato de sodio cristales
Clorhidrato de hidroxilamina
Cloruro frrico
Hidrxido de potasio
Hidrxido de sodio
Hipoclorito de sodio
Ninhidrina sal
Nitrato de plata
Pentacloruro de antimonio
Resorcina
Subnitrato de Bismuto
Sudn III
Sulfato cprico
Tartrato de sodio y potasio
Tricloruro de antimonio
Tricloruro frrico
Yodo resublimado
Yoduro de potasio
Solventes:
Acetona
Agua destilada

Benceno
Cloroformo
Etanol absoluto
Etanol 96
ter dietlico
Glicerina
Metanol
Tetracloruro de carbono
Equipos:
Balanza analtica OHAUS GA 200
Lmpara UV 254-366nm DESAGA
Cocina elctrica Finely
Refrigeradora Coldex
Bao Mara Memmert
Estufa THELCO H.W. Kessel Model 17.
Molino
Balanza triple brazo OHAUS 700/800 series
13.3. LOCALES:
Laboratorio de Farmacognosia y Farmacobotnica de la Facultad
de Farmacia y Bioqumica. Universidad Nacional de Trujillo.

14. RECURSOS NO DISPONIBLES Y PRESUPUESTO:

CODIGO

DESCRIPCIN

CANTIDAD

PRECIO
UNITARIO

TOTAL

2.3

BIENES Y SERVICIOS

2.3.1 10.1

SUMINISTROS PARA USO AGROPECUARIO, FORESTAL Y

VETERINARIO

2.3.1 10.12

MATERIAL BIOLGICO
Hojas y flores de
Tanacetum parthenium
(marihuayta)

2 Kg

10 .00

10.00

ALIMENTOS Y BEBIDAS PARA CONSUMO HUMANO

2.3.1 1.1 1

2.3.1 5.1

Bebidas (Agua)

2 personas

1.00

50.00

Almuerzos

2 personas

4.00

200

MATERIAL Y TILES DE OFICINA

PAPELERA EN GENERAL, TILES Y MATERIALES DE
OFICINA

2.3.1 5.1 2

Bolgrafo

0.50

2.00

Papel Bond A4

1 millar

------

23.00

Resaltador

2.50

5.00

Corrector

2.50

2.50

Borrador

1.00

2.00

Cinta adhesiva

1.00

2.00

Tijeras

4.00

4.00

Engrapador

10.0

10.00

Etiquetas

1 paquete

------

4.00

Grapas

1 paquete

------

5.00

Flder

0.50

1
1.00
Regla
Plumones tinta
2
3.00
indeleble
ASEO, LIMPIEZA Y TOCADOR

2.50
1.00
6.00

Leja

2.00

4.00

Detergente

2 kg

------

10.00

Papel toalla x 2

1 paquete

------

8.00

Toalla

2.00

4.00

Franela

2.00

4.00

Jabn y jaboncillo

1.50

3.00

Bolsas de plstico

1 paquete

------

1.50

2.3.1 5.3 1

2.3.1 8.2 1

MATERIAL, INSUMOS, INSTRUMENTAL Y ACCESORIOS

MDICOS, QUIRRGICOS, ODONTOLGICOS Y DE LA
LABORATORIO
Algodn

1 Kg

4.00

4.00

Papel filtro Wattman N 1

caja

40.00

40.00

Papel Kraft

3 pliegos

1.00

3.00

2.3.1 99.1 2

PRODUCTOS QUMICOS
Alcohol de 96

2.3.1 99.1 99

15 lts

2 personas

2.3.2 1.2 99

1.00

15.00

------

252.00

75

300

OTROS GASTOS
Transporte Nacional

2.3.2 2.2 1

6.00

PASAJES Y GASTOS DE TRANSPORTE

Transporte

2.3.2 2.2

6.00

OTROS BIENES
Agua destilada

2.3.2 1.2 1

1 lt

2 personas

SERVICIOS DE TELEFONA E INTERNET

SERVICIO DE TELEFONA MVIL
Tarjeta para celular

10.00

40.00

2.3.2 2.2 3

SERVICIO DE INTERNET
Internet

General

------

50.00

2.3.2 2.4

SERVICIO DE PUBLICIDAD, IMPRESIONES, DIFUSIN E

IMAGEN INSTITUCIONAL

2.3.2 2.4 4

SERVICIO DE IMPRESIONES, ENCUADERNACIN Y

EMPASTADO

2.3.2 4.1 99

Impresiones

100

0.20

20.00

Empastados

03
Unidades

20.00

60.00

DE OTROS BIENES Y ACTIVOS

Fotocopia

200

0.10

20.00

Digitacin

General

------

20.00

40

40.00

SOPORTE TCNICO
2.3.2 7.4 3

Memoria de
Almacenamiento
Masivo (USB 4Gb)

RESUMEN DEL PRESUPUESTO

CODIGO

CLASIFICADOR DE SERVICIOS

PRECIO

2.3.1 10.12

Material biolgico

10.00

2.3.1 1.1 1

Alimentos y bebidas para consumo humano

250.00

2.3.1 5.1

Material y tiles de oficina

69.00

2.3.1 5.3

Aseo, limpieza y tocador

34.50

2.3.1 8.2 1

Material, insumos, instrumental y accesorios

mdicos, quirrgicos, odontolgicos y de la
laboratorio

47.00

2.3.1 99.1 2

Productos qumicos

6.00

2.3.1 99.1 2

Otros bienes

15.00

2.3.2 1.2 1

Pasajes y gastos de transporte

252.00

2.3.2 1.2 99

OTROS GASTOS

300.00

2.3.2 2.2

Servicios de telefona e internet

90.00

2.3.2 2.4

Servicio de publicidad, impresiones, difusin e

imagen institucional

80.00

2.3.2 4.1 99

De otros bienes y activos

40.00

2.3.2 7.4 3

Soporte tcnico

40.00

TOTAL

1233.5

15. FINANCIAMIENTO:
Los recursos no disponibles sern financiados por los investigadores y los
disponibles por la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad
Nacional de Trujillo.

10

II) PLAN DE INVESTIGACION:

1. REALIDAD PROBLEMTICA
Las plantas medicinales son vegetales que elaboran productos denominados
fitoconstituyentes, que ejercen accin beneficiosa y/o perjudicial, en el
organismo vivo. Su utilidad primordial, es aliviar la enfermedad y
restablecer la salud; es decir, que tienden a disminuir o neutralizar el
desequilibrio orgnico en el organismo enfermo (1).
Los fitoconstituyentes son producto de la fotosntesis a partir de un
metabolito primario (protenas, cidos grasos, polisacridos, carbohidratos,
lpidos, triglicridos, etctera.), tienen distribucin restringida en ciertas
plantas, a veces es caracterstico de un gnero o una especie, se le atribuye
propiedades teraputicas, son sumamente complejos y en algunos casos an
se desconoce su naturaleza qumica; otros son aislados y purificados e
incluso sintetizados (2)(3).
De los principales fitoconstituyentes podemos encontrar: Los flavonoides
(tambin conocidos como antoxantinas), son compuestos fenlicos que
suelen encontrarse bajo la forma de glucsidos con una o dos unidades de
azcar. Las cumarinas, se presentan a menudo en forma: libre, mezcladas o
glucsidos. Los esteroides de encuentran como glucsidos formando las
llamadas saponinas triterpenoidales y esferoidales. Los alcaloides,
constituyen el grupo ms grande de metabolitos secundarios que pueden

11

encontrarse en estado libre, como glucsido o formando sales con cidos

(4).
Para conocer los fitoconstituyentes responsables de la accin fisiolgica, se
les debe extraer con mtodos adecuados, aislar, determinar su estructura
qumica, as como tambin disear mtodos de sntesis, proponer
modificaciones y disminuir su toxicidad; dando a conocer a la humanidad
sobre estos resultados beneficiosos (2).
Probablemente ms del 90 por ciento de los principios activos que si bien
es cierto, actualmente son sintetizados por las industrias farmacuticas; su
naturaleza qumica fue descubierta en diferentes especies vegetales. Esto
hace ver la urgencia de nuevas e intensas investigaciones de nuestra flora,
para buscar principios activos que nos permitan hacer frente a las mltiples
enfermedades que da a da cobran ms vctimas.
Para alcanzar el nivel de cuantificacin de fitoconstituyentes debe
asegurarse la presencia de estos a travs de mtodos de extraccin
especficos (secuencia lgica de extraccin con solventes apropiados,
aplicacin de pruebas de coloracin y precipitacin). Una de las tcnicas
que se emplea es del Tamizaje Fitoqumico de la Dra. Miranda Martnez M.
y Cuellar A. (5)
Nuestro pas, el Per, es considerado el tercer pas mega diverso del
planeta, lo que implica que en nuestro territorio existe un gran potencial de
estudio de especies vegetales, 50000 para ser exactos, lo que constituye el

12

20% de las especies del planeta, de las que 2000 han sido utilizadas con
fines curativos. (6)
El Per presenta un gran riqueza en su flora, de la cual hay miles de
especies conocidas y cientos por descubrir, con menos del 10% estudiadas;
nuestro pas se caracteriza por s variedad geogrfica y diversidad de climas
que favorecen la existencia de numerosas plantas medicinales, sin embargo
uno de los mayores problemas es el poco conocimiento de su verdadera
actividad teraputica. Es indudable que existen muchas especies de plantas
que contienen sustancias de valor medicinal, pero poco a poco nada se ha
hecho por comprobar su eficacia en la terapia convencional y utilizarlas
como recursos naturales orientadas a solucionar problemas de salud (7)(8).
Muchas de estas plantas son usadas como remedios no oficiales y circulan
solo por la reputacin que el uso popular le ha conferido; tal es el caso del
Tanacetum parthenium que se conoce en nuestros medios andinos como
marihuayta
El Tanacetum parthenium, originaria del este de Europa, se encuentra
ampliamente distribuida de forma espontnea por todo el mundo. Pertenece
a la familia Asteraceae. Es una planta herbcea perenne y sufructicosa,
aromtica, de hasta 1 m de altura, hojas aovadas a oblongo aovadas de unos
12 cm, las inferiores pinnadas y pinnaticectas, superiores pinnatipartidas;
segmentos 2 o 4 pares, dentados, obtusos. Cabezuelas muchas, de hasta 2
cm de dimetro; el disco amarillo, las flores radiadas blancas. (7)

13

Se usa tradicionalmente para el tratamiento de la fiebre (de ah su

denominacin inglesa, feverfew), las artritis y la prevencin y tratamiento
de la migraa (9) (10) (11). Se atribuyen a esta planta cualidades como
revulsiva, tnica y estomacal Se trata de una planta muy utilizada en el
medio rural espaol para trastornos digestivos (12).
El tamizaje fitoqumico de esta planta, realizado por Steanovich M (1980)
en Inglaterra, mostro la presencia de polifenoles esteroidales insaturados.
La planta entera contiene 0.02-0.07% de un aceite esencial compuesto por
L-alcanfor, L-borneol, ortocarsina y terpenos y otros compuestos tales
como los sesquiterpenos magnolialida partenofilo, reynosina, santamarina y
tanacetina. Las partes areas, flor y semilla contienen partenolido. La hoja
contiene

los

sesquiterpenos

artecanina,

epoxiartemorina,

canina,

partenolido, y perxido de tanatarpina (13).

En el estudio realizado por Won YK (2005), del extracto de la planta, al
cual se ha desprovisto de una sesquiterpenolactona parthenlido, el cual
parece proteger experimentalmente la piel de la radiacin UV y de otras
agresiones externas. Segn el autor, el parthenlido sensibilizara a las
clulas para estimular la apoptosis por medio de los rayos UV tipo B (14).
Un extracto etanlico de T. parthenium realizado por Jger AK, Krydsfeldt
K, Rasmussen HB (2009) ha mostrado una alta afinidad por los receptores
GABA(A) - benzodiazepina. La sustancia responsable de esta accin es la
apigenina (15).

14

Un estudio realizado por Kar HK, Langar S, Arora TC, Sharma P, Raina A,
Bhardwaj M. (2009) a 28 pacientes con dermatitis de contacto a diversas
plantas medicinales, result que un total de 72.7% tenan alergia a la
Matricaria, con lo que los autores concluyeron que la matricaria es una
agente ambiental significativo en el desarrollo de dermatitis por contacto al
aire libre (16).
Un ensayo clnico aleatorio realizado por Diener H, Pfaffenrath V,
Schnitker J. (2005), de 16 semanas de duracin, doble ciego, multicntrico,
controlado frente a placebo con 170 pacientes que padecan migraa,
registr una reduccin significativa del nmero de ataques (17).
Estudios realizados por Lesiak K, Ohguchi K, Ito M y Pajak B (2008-2010)
sobre la sesquiterpenolactona parthenlido ha mostrado tener efecto contra
clulas cancerosas humanas de melanoma. Este efecto podra deberse a la
inhibicin de la lactona sobre la expresin de la tirosinasa o,
indirectamente, por medio de una modificacin gentica (18), (19), (20).
2. JUSTIFICACIN
La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) ha determinado que
alrededor del 80% de la poblacin mundial utiliza la medicina tradicional
para atender las necesidades primarias de asistencia mdica. Analizando el
inters por el estudio y empleo de medicina tradicional en la asistencia
mdica y el reconocimiento de la importancia de las plantas medicinales
para el sistema de salud de pases en desarrollo, es que a travs del

15

presente trabajo de investigacin se pretende contribuir con el

conocimiento y proporcionar informacin de los fitoconstituyentes que
presenta la especie Tanacetum parthenium (marihuayta) utilizado de
manera tradicional por los pobladores de Huancaspata para aliviar sus
dolores e inflamaciones.
Segn lo expuesto anteriormente nos planteamos el siguiente problema:
3. PROBLEMA:
Cules son los fitoconstituyentes presentes en las hojas e inflorescencias
de Tanacetum parthenium (marihuayta) procedentes del distrito de
Huancaspata - La Libertad?
4. HIPOTESIS:
Implcita
5. OBJETIVOS:
5.1 OBJETIVO GENERAL:
Determinar los fitoconstituyentes de las hojas e inflorescencias de
Tanacetum parthenium (marihuayta)

procedentes del distrito de

Huancaspata - La Libertad.

5.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS:

Extraer los fitoconstituyentes de las hojas e inflorescencias de
Tanacetum parthenium (marihuayta) procedentes del distrito de
Huancaspata - La Libertad.

16

Identificar los fitoconstituyentes de las hojas e inflorescencias de

Tanacetum parthenium (marihuayta) procedentes del distrito de
Huancaspata - La Libertad

6. DISEO DE CONTRASTACIN:
6.1 DISEO DE INVESTIGACIN:
Tipo de diseo: Descriptivo de una sola casilla.
Descriptivo

Donde:
M: Hojas e inflorescencias de

Tanacetum parthenium
O: Fitoconstituyentes

6.2 MATERIALES DE ESTUDIO:

6.2.1 MATERIA L BIOLGICO:
6.2.1.1 Material botnico:
Hojas e inflorescencias de Tanacetum parthenium (marihuayta)
procedentes del distrito de Huancaspata - La Libertad
6.2.1.2 Material de vidrio:
De uso comn en laboratorio
6.2.1.3 Equipos:
Balanza analtica OHAUS GA 200
Lmpara UV 254-366nm DESAGA

17

Cocina elctrica Finely

Refrigeradora Coldex
Bao Mara Memmert
Estufa THELCO H.W. Kessel Model 17.
Molino
Balanza triple brazo OHAUS 700/800 series
6.2.1.4 Reactivos:
De uso comn en marchas fitoqumica
6.3 MTODO
6.3.1

IDENTIFICACIN Y DETERMINACIN TAXMICA

DE LA ESPECIE:
Se llevar un ejemplar de la planta al Herbarium Truxillensis
(HUT)

para

su

identificacin

posterior

verificacin

taxonmica segn el sistema filogentico de la especie.

6.3.2 RECOLECCIN DE LA MUESTRA

1 Kg de las hojas e inflorescencias de Tanacetum parthenium
sern recolectadas del distrito de Huancaspata, ubicada a 3200
m.s.n.m., situado a 48.5 LS y 15 LO de la provincia de Pataz
del departamento La Libertad.

18

6.3.3 ANLISIS FITOQUMICO

6.3.3.1 PREPARACIN DE LA MUESTRA
Seleccin de la muestra: El material recolectado ser
trasportado al laboratorio de Farmacognosia de la
Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad
Nacional de Trujillo, en donde se eliminar las sustancias
extraas presentes en el material vegetal.
Lavado de la droga: Luego de la separacin de las
sustancias extraas, se proceder a lavar el material
vegetal con agua potable a chorro y despus con agua
destilada. Luego se secar con papel toalla.
Secado: Una vez lavado las flores y hojas se colocar
estas sobre papel kraff y se secar a temperatura
ambiente removiendo cada da hasta que el peso sea haga
constante.
Pulverizacin: Una vez secada las hojas y flores estas se
pulverizarn con ayuda de un mortero. Luego se pasar a
travs de una set de tamices hasta obtener partculas de
tamao homogneas.
6.3.3.2 TAMIZAJE FITOQUMICO PRELIMINAR:
El Tamizaje

Fitoqumico

preliminar

se

realizar

siguiendo el mtodo de Miranda M. y Cuellar A (5).

19

Fundamento: De acuerdo con este mtodo

marcha

fitoqumica

Cuellar Cuellar

de

para

la

Miranda Martinez M.

&

A., cada muestra ser sometida a la

accin extractiva de solventes de polaridad creciente:

ter dietlico, Etanol y agua, modificando el pH del
medio con el fin de

obtener

los

metabolitos

secundarios de acuerdo a su solubilidad, para luego

llevar

concentrar

dichos

extractos

destilacin al vaco con lo cual se podr

utilizando
secar

el

extracto. Luego de separar las fracciones se realizar

la identificacin

de los metabolitos secundarios

haciendo uso de reactivos de coloracin y precipitacin.

Mtodo y procedimiento: En este caso se emplear un

esquema general, el cual utiliza una extraccin sucesiva
con solventes de polaridad creciente. De este modo, se
realizar la extraccin sucesiva del material vegetal para
la Aplicacin de Tcnicas de Tamizaje Fitoqumico
detallado en el esquema I (segn Anexo). Posteriormente
en cada extracto por separado se proceder de acuerdo a
los esquemas II, III y IV.
En cada caso, para realizar los ensayos se
proceder de la siguiente forma:

20

ENSAYO

DE

SUDAN:

Permitir

reconocer

compuestos grasos, para ello, a la alcuota de la

fraccin en el solvente de extraccin, se le aadir
1mL de una solucin diluida en agua del colorante
Sudan III. Se calentar en bao de agua hasta
evaporacin del solvente. La presencia de compuestos
grasos se considerar positiva si aparecen gotas o una
pelcula coloreada de rojo en el seno del lquido o en
las paredes del tubo de ensayo.
ENSAYO

DE

DRAGENDORFF:

Permitir

reconocer la presencia de alcaloides, para ello, si la

alcuota del extracto estuviera disuelta en un solvente
orgnico, este se ha de evaporar en bao de agua y el
residuo redisolverse en 1mL de cido clorhdrico al
1%. Si el extracto es acuoso, a la alcuota se le aadir
I gota de cido clorhdrico concentrado, (calentar
suavemente y dejar enfriar). Con la solucin acuosa
cida se realizar el ensayo, se aadir III gotas del
reactivo de Dragendorff.
ENSAYO DE MAYER: Se realizar segn la forma
descrita anteriormente, hasta obtener una solucin
cida. Se aadir luego, una pizca de cloruro de sodio

21

en polvo, se agitar y filtrar. Se ha de aadir II III

gotas de la solucin reactiva de Mayer.
ENSAYO DE WAGNER: Se partir al igual que en
los casos anteriores de la solucin cida, se aadir II
III gotas del reactivo y clasificando los resultados de
la misma forma.
ENSAYO DE BALJET: Permitir reconocer la
presencia de cumarinas. Para ello, si la alcuota del
extracto no se encontrase en alcohol, debe evaporarse
el solvente en bao de agua y redisolverse en la menor
cantidad de alcohol (1mL). En estas condiciones se
adicionar 1mL del reactivo, considerndose un
ensayo positivo la aparicin de coloracin o
precipitado rojo.
ENSAYO

DE

HIDROXAMATO

FRRICO

PARA CUMARINAS: Se colocar una gota del

extracto en una placa de porcelana y se aadir luego,
I gota de clorhidrato de hidroxilamina disuelto en
etanol al 10%. Se aadirn unas gotas de hidrxido de
potasio al 10% en etanol y se calentar a la llama
hasta burbujeo, posteriormente, han de agregarse unas
gotas de cido clorhdrico 0.5mol/L y una gota de

22

cloruro frrico al 1%. La reaccin se considera

positiva si aparece una coloracin violeta.
ENSAYO DE BORNTRAGER: Permitir reconocer
la presencia de quinonas. Para ello si la alcuota del
extracto no se encontrase en cloroformo, el solvente
deber evaporarse en bao de agua y el residuo
redisolverse en 1mL de cloroformo. Se agregar 1mL
de hidrxido de sodio, hidrxido de potasio amonio
al 5%. Se agitar, mezclando las fases y se dejar en
reposo hasta su ulterior separacin. Si la fase acuosa
alcalina (superior) se coloreara de rosado o rojo.
ENSAYO

DE

LIEBERMANN-BURCHARD:

Permitir reconocer la presencia de triterpenos y/o

esteroides. Para ello, si la alcuota del extracto no se
encontrase

en

cloroformo,

el

solvente

deber

evaporarse en bao de agua y el residuo redisolverse

en 1mL de cloroformo. Se adicionar 1mL de
anhdrido actico y se mezcla bien. Por la pared del
tubo de ensayo se dejarn resbalar II a III gotas de
cido sulfrico concentrado sin agitar. Un ensayo
positivo se ha de reconocerse por un cambio rpido de
coloracin:

23

IMPORTANTE: Para realizar este ensayo no puede

haber agua en el medio de reaccin, pues sta con el
cido sulfrico reacciona de forma violenta y puede
ocurrir un accidente.
ENSAYO DE CATEQUINAS: Para ello se tomar I
gota de la solucin alcohlica, con la ayuda de un
capilar se aplicar sobre papel filtro. Sobre la mancha
se aplicar solucin de carbonato de sodio. La
aparicin de una mancha verde carmelita a la luz UV,
ha de indicar un ensayo positivo.
ENSAYO DE RESINAS: Para detectar este tipo de
compuesto, se aadir a 2 mL de la solucin
alcohlica, 10mL de agua destilada. La aparicin de
un precipitado indicar un ensayo positivo.
ENSAYO DE FEHLING: Permitir reconocer en un
extracto la presencia de azcares reductores. Para ello,
si la alcuota del extracto no se encontrase en agua,
deber evaporarse el solvente en bao de agua y el
residuo redisolverse en 1 a 2mL de agua. Se
adicionarn 2 mL del reactivo y se calentar en bao
de agua 5 a 10min. El ensayo se considerar positivo
si la solucin se colorea de rojo o aparece precipitado
rojo.
24

 ENSAYO DE LA ESPUMA: Permitir la presencia

de saponinas. De modo que si la alcuota se
encontrase en alcohol, se ha de diluir con cinco veces
su volumen en agua y se agitar, dicha mezcla,
fuertemente durante 5 a 10min.

El ensayo se

considerar positivo si apareciese espuma en la

superficie del lquido de ms de 2 mm de altura y
persistente por ms de 2min.
ENSAYO DEL CLORURO FRRICO: Permitir
reconocer la presencia de compuestos fenlicos y/o
taninos en un extracto vegetal. Si el extracto de la
planta se realizara con alcohol, el ensayo determinar
tanto fenoles como taninos. A una alcuota del
extracto alcohlico se le han de aadir III gotas de una
solucin de tricloruro frrico al 5% en solucin salina
fisiolgica. Si el extracto es acuoso, el ensayo
determinar

fundamentalmente

taninos.

una

alcuota del extracto se aadir acetato de sodio para

neutralizar y III gotas de una solucin de tricloruro
frrico al 5% en solucin salina fisiolgica, un ensayo
positivo puede dar la siguiente informacin general:
o Coloracin rojo-vino: compuestos fenlicos en
general.

25

o Coloracin verde

intensa:

taninos del tipo

pirocateclicos.
o Coloracin azul, taninos del tipo pirogalotnicos.
ENSAYO

DE

LA

NINHIDRINA:

Permitir

reconocer la presencia de aminocidos libres o de

aminas en general. Se tomar una alcuota del extracto
en alcohol, o el residuo de la concentracin en bao
de agua, si el extracto se encontrase en otro solvente
orgnico, se mezclarn con 2mL de solucin al 2% de
ninhidrina en agua. La mezcla se calentar 5 a 10min
en bao de agua. Este ensayo se considerar positivo
cuando se desarrolle un color azul violceo.
ENSAYO DE SHINODA: Permitir reconocer la
presencia de flavonoides en un extracto de un vegetal.
Si la alcuota del extracto se encontrase en alcohol, se
diluir con 1mL de cido clorhdrico concentrado y un
pedacito de cinta de magnesio metlico. Despus de la
reaccin se esperar 5min, se aadir 1mL de alcohol
amlico, se mezclan las fases y se dejar reposar hasta
que se separen.

Si la alcuota del extracto se

encontrase en agua, se proceder de igual forma, a

partir de la adicin del cido clorhdrico concentrado.
El ensayo se considerar positivo cuando el alcohol

26

amlico se coloree de amarillo, naranja, carmelita o

rojo; intensos en todos los casos.
ENSAYO DE KEDDE: Permitir reconocer en un
extracto la presencia de glucsidos cardiotnicos. Una
alcuota del extracto en etanol se mezclar con 1mL
del reactivo y se dejar reposar durante 5 a 10 min. En
un ensayo positivo se desarrollar una coloracin
violcea, persistente durante 1 a 2 h.
ENSAYO

DE

ANTOCIANIDINAS:

Permitir

reconocer la presencia de flavonoides. Se calentarn

2mL del extracto etanlico 10min. con 1mL de HCl
q.p. se dejar enfriar y se aadir 1mL de agua y 2mL
de alcohol amlico. Se agitar y se dejar separar las
dos fases. La aparicin de color rojo a marrn en la
fase amlica ser indicativa de un ensayo positivo.
ENSAYO DE MUCLAGOS: Permitir reconocer la
presencia de una estructura tipo polisacrido, el cual
formar un coloide hidrfilo de alto ndice de masa
que aumenta la densidad del agua donde se extrae.
Para ello una alcuota del extracto se enfriar en agua
de 0 a 5 C y si la solucin tomase una consistencia
gelatinosa el ensayo es positivo.

27

 ENSAYO

DE

PRINCIPIOS

ASTRINGENTES:

El

ensayo

AMARGOS
se

realizar,

saboreando I gota del extracto acuoso del vegetal y

reconociendo el sabor de cada uno de estos principios,
bien diferenciados al paladar.
ENSAYO DE ACEITE FIJO, SECANTE O
ESENCIAL: Se tomarn 5mL del extracto y se dejar
evaporar sobre una luna de reloj o placa petri a
temperatura ambiente. La aparicin de un lquido
despus de la evaporacin, si dejase manchas de grasa
sobre el papel de filtro indicar presencia de aceite
fijo. Si al evaporarse el disolvente apareciera una
pelcula fina resinosa, sta indicar la presencia de
aceites secantes. Si al evaporarse el disolvente
apareciera un lquido oleoso aromtico que no deje
mancha de grasa sobre el papel de filtro indicar la
presencia de aceite esencial.
ENSAYO DE HIDROCARBUROS: Se tomarn
10mL del extracto y se dejar evaporar al aire, se
disolver el residuo obtenido en acetona calentando
suavemente sobre bao de agua, de ser necesario. Se
dejar algunas horas en el refrigerador. La aparicin

28

de

un

precipitado,

indicar

la

presencia

de

hidrocarburos.
ENSAYO DE CAROTENOS: Si el ensayo de
hidrocarburos resultara positivo, se proceder a filtrar
el precipitado obtenido y disolver el residuo en 2mL
de cloroformo. Se tomar la solucin clorofrmica y
se aadir reactivo de Carr-Price. La aparicin de una
coloracin verde-azulada indicar la presencia de
carotenos.
En el estudio fitoqumico se buscarn los siguientes
componentes:
Alcaloides
Aceites esenciales
Aminocidos
Antocianidinas
Azcares Reductores
Carotenos
Catequinas
Compuestos grasos
Cumarinas
Esteroides

29

 Fenoles
Flavonoides
Glicsidos cardiotnicos
Hidrocarburos
Lactonas
Muclagos
Quinonas
Resinas
Saponinas
Taninos
Triterpenoides
6.- TRATAMIENTO DE RESULTADOS
Los resultados se reportarn en cuadros utilizando el programa de Microsoft
Office , donde se indicar ausencia (-) o presencia (+) de los
fitoconstituyentes.

30

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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Catlica del Per. Lima Per. 1994. pp. 15- 35
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5. MIRANDA, M; CUELLAR, A(2000). Manual de prcticas de laboratorio de
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Habana.
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http://www.plantasmedicinales.org/farmacognosia/tecnicas.htm
9. IZUMI E, MORELLO LG, UEDA-NAKAMURA T, YAMADA-OGATTA SF,
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Trypanosoma cruzi: antiprotozoal activity of parthenolide obtained from
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31

10. YAO M, RITCHIE HE, BROWN-WOODMAN PD. A reproductive screening

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11. TASSORELLI C, GRECO R, MORAZZONI P, RIVA A, SANDRINI G,
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nitroglycerin-induced Fos activation: studies in an animal model of migraine.
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12. AKERRETA S, CAVERO RY, LPEZ V, CALVO MI. Analyzing factors that
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32

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19. OHGUCHI K, ITO M, YOKOYAMA K, IINUMA M, ITOH T, NOZAWA Y,
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melanoma cells. Biol Pharm Bull. 2009 Feb; 32(2):308-10.
20. PAJAK B, GAJKOWSKA B, ORZECHOWSKI A. Molecular basis of
parthenolide-dependent proapoptotic activity in cancer cells. Folia Histochem
Cytobiol. 2008; 46(2):129-35.

33

ANEXO

34

ESQUEMA I

EXTRACCIN SUCESIVA DEL MATERIAL VEGETAL PARA LA APLICACIN DE

TCNICAS DE TAMIZAJE FITOQUMICO

MATERIAL VEGETAL
50 g

Extraer con 150 mL de ter dietlico

por maceracin durante 48 horas a
temperatura ambiente
FILTRAR
EXTRACTO DE TER
DIETLICO
Medir volumen y calcular
concentracin

RESIDUO SLIDO
Pesar y secar
EXTRAER CON 3 VECES EL
PESO DEL RESIDUO EN
VOLUMEN CON ETANOL DE 70
POR MACERACIN DURANTE
48 HORAS
FILTRAR

RESIDUO SLIDO
Pesar y secar
EXTRAER CON 3 VECES EL PESO DEL
RESIDUO EN VOLUMEN CON AGUA
DESTILADA POR MACERACIN

EXTRACTO ALCOHLICO DE
70
Medir volumen y calcular
concentracin

FILTRAR

RESIDUO SLIDO
Pesar y secar

EXTRACTO ACUOSO
Medir volumen y calcular concentracin

35

ESQUEMA II
REACCIONES A REALIZAR EN EL EXTRACTO DE TER DIETLICO

EXTRACTO
EXTRACTO
DE DE
TER
TER
DIETLICO
DIETLICO

DIVIDIR EN FRACCIONES

5mL
ENSAYO DE
SUDAN

5mL
ENSAYO DE
BALJET
(Lactonas y
Cumarinas)

10 mL

2 mL

ENSAYO DE
HIDROCARBUROS

ENSAYO DE
CAROTENOS

(Aceites y
Grasas)

15 mL (dividido en 3
porciones)

5 mL

ENSAYOS DE
DRAGENDORFFMAYER
Y WAGNER

ENSAYO DE
LIEBERMANNBUCHART

(Alcaloides)

(Triterpenos Esteroides)

36

5 mL

I gota

ENSAYO DE
ACEITES FIJO,
SECANTE O
ESENCIAL

ENSAYO DE
HIDROXAMATO
FRRICO
(Cumarinas)

ESQUEMA III
REACCIONES A REALIZAR EN EL EXTRACTO ALCOHOLICO AL 70

EXTRACTO ALCOHLICO

DIVIDIR EN FRACCIONES

2 mL

1 mL
ENSAYO
DE
CATEQUINAS

2 mL

ENSAYO DE
FELHING
(Azcares
reductores)

2 mL
ENSAYO
DE
RESINAS

ENSAYO DE
LIEBERMANBOURCHARD
(Triterpenos y
Esteroides)

2 mL
ENSAYO DE
FeCl3
(Fenoles y
Taninos)

2 mL
ENSAYO DE
BORNTRAGER
(Quinonas)

2 mL
ENSAYO DE
KEDDE
(Cardenlidos)

2 mL
ENSAYO DE
NINHIDRINA
(Aminocidos)

2 mL
ENSAYO DE
BALJET
(Lactonas)

2 mL
ENSAYO DE
SHINODA
(Flavonoides)

2 mL
ENSAYO DE
ESPUMA
(Saponina)

37

6 mL en 3
porciones
ENSAYOS DE
DRAGENDORFF
MAYER Y
WAGNER
(Alcaloides)

2 mL
ENSAYO DE
ANTOCIANIDINA

ESQUEMA IV
REACCIONES A REALIZAR EN EL EXTRACTO ACUOSO

EXTRACTO ACUOSO

DIVIDIR EN FRACCIONES

5 mL en 3 porciones

2 mL

2 mL

ENSAYO DE DRAGENDORFF,
MAYER Y WAGNER

ENSAYO DE
SHINODA

ENSAYO DE
ESPUMA

(Alcaloides)
2mL
ENSAYO DE CLORURO FERRICO
(Taninos)

(Flavonoides)

(Saponinas)

2mL
ENSAYO DE FEHLING
(Azcares Reductores)

38

I II gotas
ENSAYO DE
PRINCIPIOS AMARGOS
Y ASTRINGENTES

10mL
ENSAYO DE
MUCILAGOS