GUA DE PRCTICAS DE MICROBIOLOGA VETERINARIA I

PRACTICA N 01
RECONOCIMIENTO DE EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO
I.INTRODUCCION:
Uno de los factores que nos permiten obtener un resultado confiable en un Laboratorio de
Microbiologa, es que los equipos e instrumentos funcionen correctamente y podamos
asegurar que los valores que indican son los reales.
En la presente practica el estudiante se familiarizara con los equipos y material utilizado
en un laboratorio de Microbiologa que es muy variado y depende fundamentalmente de las
lneas de trabajo a las que est dedicado; evidentemente, no se precisa el mismo
equipamiento en un centro de investigacin con un alto grado de especializacin.
Por tanto, aqu slo nos referiremos al material bsico que se suele encontrar en un
laboratorio mnimamente dotado
II. OBJETIVOS:

Familiarizar al estudiante con los implementos usados en la sala de practicas de

microbiologa veteriniaria.
Capacitar al estudiante para adquirir habilidad en el manejo de los equipos y

materiales usados en la sala de praqcticas de microbiologa veterinaria.

Instruir al estudiante en las reglas bsicas de comportamiento y seguridad dentro de
la sala de practicas de microbiologa veterinaria.

III. MARCO TERICO:

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A. BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO: Conjunto de medidas preventivas

reconocidas internacionalmente que protegen la salud y la seguridad de riesgos
como los agentes fsicos, qumicos y mecnicos.
1. Es imprescindible el uso de bata de laboratorio.
2. Al iniciar y finalizar las prcticas, el estudiante se lavar las manos con agua y
3.

jabn.
El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Antes de comenzar
cada prctica es conveniente desinfectar la superficie de trabajo. Los

4.

desinfectantes ms habituales para este propsito son la leja y el etanol 70-96.

Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama. Se deben
evitar los desplazamientos innecesarios por el laboratorio, ya que crean

corrientes que originan contaminaciones o pueden producir accidentes.

5. Durante las prcticas est prohibido comer, beber y fumar. Cuando se
manipulan microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz,
ojos...
6. Libros, carpetas, abrigos y cualquier otro material que no se utilice en la
realizacin de la prctica eben ser apartados del lugar de trabajo.
7. Para deshacernos del material contaminado utilizaremos los recipientes
adecuados. Estos recipientes sern esterilizados posteriormente. Nunca se debe
tirar nada por el fregadero o la basura comn
8. Bajo ningn concepto debe sacarse ninguna muestra contaminada del
laboratorio.
9. El suministro de gas para los mecheros Bunsen requiere las precauciones
propias de estas instalaciones. Los escapes de gas son muy peligrosos, por lo
que hay que cerrar todas las llaves de paso de gas al finalizar la prctica, evitar
la presencia de sustancias inflamables y revisar peridicamente las
conducciones.
10. En las prcticas en que se trabaje con luz ultravioleta debe tenerse en cuenta
que la exposicin a este tipo de radiacin es peligrosa, ya que tiene poder
mutagnico. Por tanto, nunca se debe mirar directamente la fuente de luz. Es
conveniente el uso de gafas, guantes y mscaras.
11. No se debe pipetear nunca con la boca. Utilizar siempre pipeteadores manuales.
12. En caso de accidente (ruptura de material, derramamiento de
microorganismos...) se comunicar inmediatamente al instructor

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B. EQUIPOS:
1. MICROSPOCIO BINOCULAR: Los microscopios magnifican la imagen y
aumentan nuestra capacidad para ver detalles que de otro modo no podramos
percibir, es un instrumento que sirve para observar objetos demasiado pequeos
para el ojo humano o detalles de los mismos mediante un proceso de ampliacin.
PARTE MECNICA

Pie o soporte: sirve como base al microscopio y en l se encuentra la fuente de

iluminacin.

Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se

encuentra un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un sistema
de pinza o similar, para sujetar el portaobjetos con la preparacin, y unas escalas
que ayudan a conocer qu parte de la muestra se est observando. La platina
presenta 2 tornillos, generalmente situados en la parte inferior de la misma, que
permiten desplazar la preparacin sobre la platina, en sentido longitudinal y
transversal respectivamente.

Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte
de oculares y objetivos.

Revlver portaobjetivos: estructura giratoria que contiene los objetivos.

Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomat el
microscopio para trasladarlo de lugar.

Tornillo macromtrico o de enfoque grosero: sirve para obtener un primer enfoque

de la muestra al utilizrse el objetivo de menor aumento. Desplaza la platina
verticalmente de forma perceptible.

Tornillo micromtrico o de enfoque fino: sirve para un enfoque precidso de la

muestra, una vez que se ha realizado el enfoque con el macromtrico. Tambin
desplaza verticalmente la platina, pero de forma prcticamente imperceptible. Es
el nico tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el primer enfoque, al
ir cambiando a objetivos de mayor aumento.

PARTE PTICA
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Oculares: son los sistemas de lentes ms cercanos al ojo del observador, situados en
la parte superior del microscopio. Son cilindros huecos provistos de lentes
convergentes cuyo aumento se resea en la parte superior de los mismos
(normalmente 10X en los microscopios que se utilizarn en esta prctica).
Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los microscopios pueden se mono o
binoculares.

Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la parte inferior del
tubo, mediante el revlver.

Condensador: sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los
concentra sobre la preparacin, de manera que proporciona mayor o menos contraste.
Se regula en altura mediante un tornillo

Fuente de iluminacin: en los microscopios a utilizar, el aparato de iluminacin est

constituido por una lmpara halgena de bajo voltaje (12V) situada en el pie del
microscopio. La luz procedente de la bombilla pasa por un reflector que enva los
rayos luminosos hacia la platina.

Diafragma o iris: sobre el reflector de la fuente de iluminacin. Abrindolo o

cerrndolo permite graduar la intensidad de la luz.

Transformador: ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red, es

necesario para enchufar el microscopio. Algunos modelos ya lo llevan incorporado en
el pie del microscopio. Adems, el transformador dispone de un potencimetro para
regular la intensidad de la luz.

2. MICROSCOPIO ESTEREOSCOPIO: El microscopio estereoscpico tiene dos lentes

objetivos y posee una profundidad de foco mucho mayor que la del microscopio
compuesto; ambas caractersticas le permiten producir imgenes tridimensionales. Las
partes de este microscopio son prcticamente las mismas que las discutidas para el
microscopio compuesto

El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo

general forma de Y o bien es rectangular

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El tubo. Tiene forma cilndrica y est ennegrecido internamente para evitar las
molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan

los oculares.
El revlver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los
objetivos. Al girar el revlver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en

posicin de trabajo, la cual se nota por el ruido de un pin que lo fija.

La columna, llamada tambin asa o brazo, es una pieza colocada en la parte
posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porcin superior y por el extremo

inferior se adapta al pie.

La platina. Es una pieza metlica plana en la que se coloca la preparacin u objeto
que se va a observar. Presenta un orificio en el eje ptico del tubo que permite el
paso de los rayos luminosos a la preparacin. La platina puede ser fija, en cuyo caso
permanece inmvil; en otros casos puede ser giratoria, es decir, mediante tornillos

laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.

Carro. Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la
preparacin con movimiento ortogonal de adelante hacia atrs y de derecha a

izquierda.
El tornillo macromtrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del
microscopio, deslizndose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos

movimientos largos permiten el enfoque rpido de la preparacin.

El tornillo micromtrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al
deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nitido de la preparacin.
Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para
precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.
3. ESTUFA O INCUBADORA: La incubadora crea condiciones de temperatura,
la humedad y otras condiciones en grado ptimo, tales como el contenido
dedixido de carbono (CO2) y de oxgeno en su atmsfera interior necesarios
para el desarrollo de un cultivo microbiano.
4. REFRIGERADOR: son indispensables para conservar los medios de cultivo,
productos biolgicos y patolgicos, as como mantener la supervivencia de
algunos microorganismos. Su temperatura oscila alrededor de los 2-10
5. CONGELADOR: alcanzan temperaturas entre -20 y -70 C y son indispensables
para conservar determinados productos biolgicos (sueros, microorganimos).
Nos permite darles un tiempo mas prolongado de almacenamiento.

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6. CENTRIFUGA: Es un instrumento que utiliza la fuerza centrifuga para separar

estratos (capas) de diferente densidad. Ejemplo suero de los globulos rojos en la
sangre.
7. HOMOGENIZADOR VORTEX: Se utiliza

para mezclar

lquidos

preparar disoluciones y suspensiones, a travez de vibraciones, ideal para agitar

tubos de ensayo. para un solo tubo de ensayo con cabezal de goma
intercambiable.
8. CUENTA COLONIAS: Un contador de colonias es un instrumento utilizado
para contar colonias de bacterias o de otros microorganismos que crecen en
unaplaca de agar. Los primeros contadores slo eran superficies iluminadas
sobre las que se colocaba la placa, con las colonias marcadas con
un rotulador en la superficie externa de la placa mientras el operador realizaba el
recuento manua
9. BALANZA: Se denomina con el trmino de balanza al instrumento que sirve y
se utiliza para medir o pesar masas.
10. JARRA DE ANAEROBIOSIS: La jarra de anaerobiosis, es un recipiente ideal
para realizar incubaciones en anaerobiosis ya que en su soporte de acero
inoxidable se pueden instalar las bolsas de generacin de atmsfera libre de
oxgeno.
11. ESTUCHE DE PLACA PETRY Y DE PIPETAS: Son utilizados para realizar la
esterilizacin.
12. EQUIPO DE SIEMBRA
a. Mechero de bunsen: Nos brinda un margen de esterilidad de 10-15 cm de
dimetro
b. Asa de kolle: Compuesto de un mango y alambre de micrn que termina en
argolla, utilizado para realizar siembras por estria.
c. Aguja de Kolle: Posee un mango y un alambre de micrn que termina en
punta, que se utiliza para realizar las siembras por puncion o picadura.
d. Espatula o sas de drigalsky: Es de material de vidrio y termina en una
forma triangular, sirve para realizar una siembra por diseminacin.
EQUIPO DE ESTERILIZACIN:
1. HORNO ELCTRICO: La esterilizacin puede llevarse a cabo mediante calor
seco y en este caso se realiza en una estufa denominada. La destruccin
microbiana se produce por oxidacin de los componentes celulares y
desnaturalizacin de protenas. Este es un proceso menos eficaz por la ausencia
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de agua y por lo tanto deben incrementarse tanto las temperaturas como los
tiempos de exposicin. 180C -200C(1 hora)
2. AUTOCLAVE: El calor hmedo por medio de utilizacin de vapor de agua es el
agente esterilizante ms frecuentemente utilizado. Este mecanismo destruye
eficazmente los microorganismos por desnaturalizacin de protenas y enzimas,
y desestabilizacin de membranas. Deben llegar a una temperatura de 121C X
15 min y a presin de 15 libras.
3. FILTRACION: Los microorganismos no son destruidos sino que son retenidos
fsicamente o adsorbidos por los filtros con un tamao de poro adecuado. El
tamao de poro que se considera en la actualidad esterilizante es el de 0,22 m
aunque ms recientemente se tiende a la utilizacin de poros de 0.1 m
a. Filtro de seitz
b. Matraz de kitasato
c. Boma de vacio:
4. POTENCIOMETRO: Equipo que es utilizado para medir el pH de los medios
de cultivo, constituido por un par de electrones sensibles a la concentracin de
hidrogeniones.
5. DESTRILADOR ELCTRICO: se usa para purificar el agua corriente,
mediante procesos controlados de vaporizacin y enfriamiento. Al aplicar
energa trmica al agua en fase lquida, luego de un proceso de calentamiento, se
convierte en vapor de agua. Esto permite separar las molculas de agua, de las
molculas de otras sustancias o elementos que se encuentran mezclados o
diluidos. El vapor de agua se recolecta y
MATERERIALES DE VIDRIO:

1. PROBETA: Este material

permite

medir volmenes, las hay de

vidrio y de plstico y de diferentes capacidades

2. MATRAZ DE ERLENMEYER: vasijas o recipientes de vidrio de diversas
formas que se emplean en el laboratorio para calentar lquidos citando hay
peligro de prdida de vaporacin, o para titular en el anlisis cuantitativa.

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3. MATRAZ AFORADO O FIOLA: Instrumento de vidrio de cuello largo y

angosto se usa para preparar soluciones.
4. VASO DE PRECIPITACIN:
5. PLACA PETRI: son recipientes de vidrio o de plstico de forma cilndrica
compuestos de caja y tapa, recipientes destinados a contener medios de cultivos
slidos cuando se desea disponer de una gran superficie
6. PIPETA: Son instrumentos de vidrio que se usan para medir los lquidos con
mayor exactitud.
7. PROBETA GRADUADA: Instrumento de vidrio, que se emplea, para medir el
volumen de los lquidos.
8. TUBOS DE ENSAYO: para disolver, calentar o hacer reacciones pequeas
cantidades de sustancias lquidas o slidas y preparacin de cultivos. Estos
pueden ser grandes medianos y pequeos.
9. VARILLA DE VIDRIO: sirve como agitador, son de vidrio para que no se
oxiden, corroen ni reaccionan con las sustancias y miden de 20 a 30 cm
10. PORTAOBJETOS: son lminas rectangulares de vidrio, de bordes biselados
que miden 76 mm de largo, 26 mm de ancho y 1 mm de espesor. Son utilizados
para realizar preparaciones microscpicas coloreadas o sin colorear.
11. CUBREOBJETOS: son laminillas delgadas de vidrio, de tamaos variados, de
forma cuadrada o redonda, son empleados para cubrir preparaciones y facilitar
la observacin microscpica del material que se desea examinar.
12. EMBUDO: Sirve para trasvasar lquido de un recipiente a otro, evitando que se
derrame lquido, tambin se utiliza en operaciones de filtracin.
13. TRPODE: este puede ser fijo o desmontable, se utiliza para colocar matraces y
recipientes en observacin, o para poner estos al fuego y aumentar su
temperatura.
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MEDIOS DE CULTIVOS Y REACTIVOS:

1. MEDIO DE CULTIVO: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes,
factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones
necesarias para el desarrollo de los microorganismos
2. BATERIAS DE COLORACIN DE GRAM: Los colorantes que lo componen
son el cristal violeta, lugol, alcohol acetona y safranina.
3. BATERIA DE COLORACIN ACIDO RESISTENTE: La batera esta
compuesto por: fucsina bsica fenolada, alcohol acido y azul de metileno.
4. ALCOHOL ISOPROPILICO: Utilizado para limpiar los objetivos del
microscopio ptico.
5. PEROXIDO DE HIDROGENO: Es un desinfectante, adems se usa para
realizar pruebas bioqumicas por ejemplo la prueba de la catalasa
6. REACTIVO DE INDOL: Utilizado para realizar prueba de indol, para
identificar las especies bacterianas.

MATERIAL FUNGIBLE:
1. PAPEL DE CRAF: Papel utilizado para cubrir las placas Petri, tubos de ensayo,
para llevarlos al proceso de esterilizacin por calor hmedo.
2. GASAS: Nos sirve para elabora los tapones de los mataces de Erlenmeyer.
3. PABILO: Material utilizado para sujetar materiales.
4. JABON CARBLICO
5. PAPEL TOALLA
IV. MATERIALES Y METODOS:
1. El estudiante har un reconocimiento a conciencia de todos los implementos que se
usan, as como las precauciones que se deben tomar durante su manejo, lo anterior
debe quedar consignado en el informe que entregara al profesor.
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2. El profesor har una demostracin experimental de la forma como se llenan las

pipetas
V.RESULTADOS
pudimos poner en practica nuestros conocimientos sobre los utensilios que se usaran en futuras
practicas y as sera mas fcil las actividades

VI. CONCLUCIONES
Es muy importante haber reconocido todos los materiales a utilizar en el
laboratorio y saber su utilidad para la prctica. Tambin era necesario para
prevenir cualquier accidente no provocado y no lamentar consecuencias.
Conocer la calidad de las principales herramientas a utilizar como los tubos
de ensayo, las pipetas, las cajas petri, los matraces, etc.

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CUESTIONARIO

1. Establezca la diferencia entre los siguientes trminos?

Esterilizacin:
El proceso de destruccin de todas las formas de vida en un objeto o material,
incluidas las endosporas, las formas ms resistentes de vida microbiana.
La esterilizacin es absoluta; no hay grados de esterilidad.

Desinfeccin:
El proceso de destruccin de las formas vegetativas de los patgenos, pero no
necesariamente endosporas o virus. Normalmente un desinfectante es un
compuesto qumico que se aplica sobre un objeto o material. Los desinfectantes
tienden a reducir o inhibir el crecimiento; no suelen esterilizar.

Antisepsia:
Desinfeccin qumica de la piel, mucosas u otros tejidos, en vivo.

Higienizacin:
La reduccin del nmero de patgenos que hay en un objeto hasta niveles
aceptables para la salud pblica mediante lavado mecnico o con agentes
qumicos.

Germicida:

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Un agente qumico que mata rpidamente a los microbios, pero no

necesariamente a sus esporas.

Asepsia:
exclusin continuada de microorganismos contaminantes.

Bactericida:
es aquel que produce la muerte a una bacteria. Un efecto bactericida est
producido por sustancias bactericidas. Estas sustancias son secretadas por los
organismos como medios defensivos contra las bacterias.

2. Cul es el mtodo de esterilizacin mas efectivo? Mencione las caractersticas.

El calor hmedo es un mtodo trmico de esterilizacin y mata microorganismos por la

coagulacin de protenas (desnaturalizacin), lo que es causado por la rotura de los
puentes de hidrgeno que son los que mantienen a las protenas en su forma
tridimensional

3. Cul es la funcin de los siguientes equipos y coloque las partes en las

correspondientes flechas?

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4.
es

diferencia entre la congeladora y refrigeradora?

Congeladora :
Refrigeradora:
5. Dibuje el equipo de siembra y mencione cada una de sus funciones?

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Cul
la

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6. Cul es la funcin del microscopio y describa los diferentes objetivos?

La funcin del microscpio es hacer visible al ojo humano cosas que no lo son directamente,
a travs del aumento de la imagen mediante lentes. Las utilidades comprenden todas
aquellas que puedan surgir de la visin de estructuras.

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7. Cuantos placas Petri observamos segn su tamao?

3

8. Dibuje la jarra de anaerobiosis mencione sus partes y funciones?

este aparato sirve para mantener bacterias anaerobias. Tiene unos tubos en
donde se conectan a una maquina que succiona el aire. La tapa tiene un
catalizador
para
facilitar
el proceso.

9. Dibuje el homogenizador vortex y menciones las funciones y partes?

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10. Defina el trmino siembra y medio de cultivo?

En Microbiologa se entiende como siembra el proceso mediante

elc u a l s e d e p o s i t a u n a p e q u e a c a n t i d a d d e m i c r o o r g a n i s
m o s (inculo) en un medio de cultivo estril. El inculo puede
procederd e u n a m u e s t r a o d e u n c u l t i v o p r e v i o . ( a l c r e
c i m i e n t o d e microorganismos obtenido, se le denomina
cultivo)L a f i n a l i d a d d e l a s i e m b r a e s p e r m i t i r l a m u l t i p l i c a c i n d e
l o s microorganismos, al proporcionarles las condiciones ptimas
paras u d e s a r r o l l o , d e n t r o d e l a s c u a l e s , s e d e b e
c o n s i d e r a r : temperatura, nutrientes, pH, disponibilidad de oxgeno, entre otros.

MEDIO DE CULTIVO .consta de un gel o una solucin que cuenta con los
nutrientes
necesarios
para
permitir,
en
condiciones
favorables
de pH y temperatura, el crecimiento de virus, microorganismos, clulas, tejidos
vegetales o incluso pequeas plantas.

VII. BIBLIOGRAFIA:

1. GARCIA Valdez Elena. 2010. Practicas de microbiologa.

2. TORRES Miguel. 1996. Manual practico de Bacteriologia medica.
3. MANUAL DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA GENERAL.2012.

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