Manual de Prcticas de Microbiologa

Blgo. Luis Cartagena S.

Prctica:

Accin de los Agentes Qumicos sobre

los Microorganismos
Las sustancias qumicas pueden actuar sobre los microorganismos en varias
formas, dependiendo de la composicin fsico-qumica del medio ambiente, la
concentracin, la temperatura y el tiempo que dura el contacto.
Pueden actuar mostrando una accin bactericida mediante la eliminacin total
de los microorganismos, o accin bacteriosttica mediante inhibicin temporal del
crecimiento bacteriano.
Objetivo: Determinar la accin de algunos agentes qumicos sobre los microorganismos.
Muestra Biolgica:
Cultivo bacteriano en
Staphylococcus aureus.

caldo

de:

Escherichia

coli,

Pseudomonas

sp.

Material y Medio de cultivo:

Guantes, Mechero con ron de quemar y fsforo
Placas de Petri con Agar Mller-Hinton
Discos de papel de filtro estriles en una placa
Torundas estriles dentro de un tubo
Pinza de metal estril
Plumn de tinta indeleble.
Reactivo:
Frascos con agentes qumicos: Alcohol al 70 %
Fenol al 1 %
Mercurio cromo al 2 %
Cristal Violeta 1/1000
Merthiolate 1/1000,
Leja 10 %,
Tintura de Yodo 10 %, etc.
Procedimiento:
Encienda el mechero, protjase (guantes), acerque los materiales necesarios
Introduzca una torunda estril dentro del cultivo microbiano y al retirar presione el
algodn sobre las paredes del tubo para evitar que salga chorreando
Siembre en toda la superficie del medio en la placa
Luego de unos 5 minutos, previa sealizacin de los lugares donde se colocaran los
discos (promedio entre 5 6 por placa)
Con la pinza estril coja un disco de papel de filtro e introduzca en un agente qumico
(tenga cuidado de no impregnar los discos demasiado), luego colquelo sobre el lugar
predestinado y presione suavemente (no reubicar el disco desplazndolo)
Haga lo mismo con los dems desinfectantes o agentes qumicos
Incube las placas a 37 C por 24 48 horas y observe lo obtenido.

Manual de Prcticas de Microbiologa

Blgo. Luis Cartagena S.

Resultados:
Realice la medicin del dimetro de los halos de inhibicin formados y registre en la
siguiente tabla:
AGENTE
QUMICO

TAMAO DE DIMETRO DEL

HALO DE INHIBICIN DE CRECIMIENTO BACTERIANO

Escherichia coli

Pseudomonas sp

Staphylococcus aureus

Alcohol al 70 %
Fenol al 1 %
Mercurio cromo al 2 %
Cristal Violeta 1/1000
Merthiolate 1/1000
Leja 10 %
Tintura de Yodo 10 %
Interpretacin:
Generalmente el agente qumico desinfectante que muestre mayor dimetro de halo de
inhibicin de crecimiento ser el que tenga mayor efectividad.
Haga el esquema de lo observado.

Cuestionario:
Mencione cual es el mecanismo de accin del Alcohol, Fenol, Mercurio Cromo,
Cristal Violeta y Merthiolate?
Mencione 3 sustancias colorantes de accin antibacteriana y 3 antimictica?
Cmo organizara un enfrentamiento de agentes qumicos pero frente a hongos?

Manual de Prcticas de Microbiologa

Blgo. Luis Cartagena S.

Prctica:

El Antibiograma
En los ltimos aos se ha observado diferentes comportamientos de resistencia
bacteriana a los antibiticos, por ello es necesario establecer programas nacionales e
internacionales de vigilancia de la resistencia de las bacterias a los antibiticos,
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos comparables. La
informacin microbiolgica y epidemiolgica disponible ayudar a los clnicos a
seleccionar el agente antimicrobiano ms apropiado para tratar cada infeccin.
Objetivo: Evaluar la capacidad de los antibiticos para inhibir in vitro el desarrollo
bacteriano, tanto por el mtodo de difusin como por el mtodo de dilucin.
Muestra Biolgica:
Cultivo bacteriano en caldo de: Escherichia coli, Pseudomonas sp.
Staphylococcus aureus comparables con el Tubo N 3 de la escala de Mc. Farland.

Material y Medio de cultivo:

Guantes, Mechero con ron de quemar y fsforo
Asa bacteriolgica o de Kolle
Placas de Petri con Agar Mller-Hinton (con aproximadamente 20 mL de medio)
Caldo Nutritivo
Discos de sensibilidad impregnados con antibiticos y quimioterpicos.
Torundas estriles dentro de un tubo
Pinza de metal estril
Tubos de ensayo de 13 x 100 mm estriles (10 tubos por microorganismo)
Pipetas de 5 mL
Gradillas
Plumn de tinta indeleble.
Reactivo:
Solucin de antibiticos.
MTODO DE DIFUSIN:
El mtodo de disco-difusin en agar es una manera sencilla, prctica y rpida para
realizar el antibiograma. El recomendado es el estandarizado por Kirby-Bauer, con el que
se ha logrado uniformizar criterios que toman en cuenta los conceptos de concentracin
mnima inhibitoria (MIC o CIM) y de concentracin promedio en sangre de las drogas
frecuentemente usadas.
Procedimiento:
Encienda el mechero, protjase (guantes), acerque los materiales necesarios
Introduzca una torunda estril dentro del cultivo microbiano y al retirar presione el
algodn sobre las paredes del tubo para evitar que salga chorreando
Siembre en toda la superficie del medio Mller-Hinton en la placa
Luego de unos 5 minutos, previa sealizacin de los lugares donde se colocaran los
discos (promedio entre 5 6 por placa)

Manual de Prcticas de Microbiologa

Blgo. Luis Cartagena S.

Con la pinza estril coja un disco de sensibilidad impregnado con antibitico, luego
colquelo sobre el lugar predestinado y presione suavemente (no reubicar el disco
desplazndolo)
Haga lo mismo con los dems discos con antibiticos o quimioterpicos
Incube las placas a 37 C por 24 horas y observe lo obtenido.

Resultados:
Despus del periodo de incubacin, realice la medicin del dimetro de los halos de
inhibicin formado para cada antibitico ensayado y compare con la Tabla patrn.
TABLA DE INTERPRETACIN DE LOS HALOS DE INHIBICIN
CONCENTRACIN DIMETRO EN mm DE LA ZONA INHIBIT.
ANTIBITICO
DEL DISCO (g) RESISTENTE INTERMEDIO SENSIBLE
10
< 11
12 - 13
14 >
AMICACINA
AMPICILINA
Gram y enterococos
10
< 11
12 - 13
14 >
Estafilococos y resistentes a
10
< 20
21 - 28
29 >
penicilina.
10
<8
9 - 12
13 >
BACITRACINA
CARBENICILINA
50
< 17
18 - 22
23 >
Proteus sp, E. coli
P. aeruginosa
50
< 12
13 - 14
15 >
30
< 14
15 - 17
18 >
CAFELOTINA
30
< 12
13 - 17
18 >
CLORANFENICOL
2
< 14
15 - 16
17 >
CLINDAMICINA
10
<8
9 - 10
11 >
COLISTINA
15
<13
14 - 17
18 >
ERITROMICINA
10
< 12
13 >
GENTAMICINA
30
<
13
14
17
18 >
KANAMICINA
30
< 12
13 - 16
17 >
NEOMICINA
30
< 17
18 - 21
22 >
NOVOBIOCINA
PENICILINA G
10
< 20
21 - 28
29 >
Estafilococos
Otros grmenes
< 11
12 - 21
22 >
300
<8
9 - 11
12 >
POLIMIXINA B
RIFAMPIN
5
< 24
25 >
(slo para N. meningitidis)
10
< 11
12 - 14
15 >
ESTREPTOMICINA
30
< 14
15 - 18
19 >
TETRACICLINA
30
<9
10 - 11
12 >
VANCOMICINA
AGENTE QUIMIOTERAPICO
NITROFURANTOINA *
300
< 14
15 - 16
17 >
AC. NALIDIXICO *
30
< 13
14 - 18
19 >
AC. OXOLINICO
1.25 / 23.75
< 10
11 - 15
16 >
TRIMETROPRIN /
SULFAMETOXAZOL
300
< 12
13 - 16
17 >
TRIPLE SULFA **

Manual de Prcticas de Microbiologa

Blgo. Luis Cartagena S.

* Solamente para infecciones urinarias

** Solamente para infecciones urinarias. Todos los discos de sulfanilamidas de 250 300
g pueden ser interpretados similarmente.
Interpretacin:
La tabla patrn permitir considerar al germen como: SENSIBLE, INTERMEDIO o
RESISTENTE a la accin del antibitico segn corresponda su medida de halo de
inhibicin. Se reportan la valoracin de los antibiticos si sus medidas han cado en ese
orden.
Haga el esquema de lo observado.

Manual de Prcticas de Microbiologa

Blgo. Luis Cartagena S.

Manual de Prcticas de Microbiologa

Blgo. Luis Cartagena S.

MTODO DE DILUCIN:
Para evaluar cuantitativamente la actividad de un antibitico puede agregarse diluciones
de este a un caldo de cultivo o a un medio slido en el que luego se siembra el
microorganismo problema. La concentracin ms baja que impide el crecimiento
bacteriano se considera concentracin inhibitoria mnima (CIM o MIC) del frmaco.
Procedimiento:
Encienda el mechero, protjase (guantes), acerque los materiales necesarios
Diluir el antibitico a la concentracin adecuada para trabajo (200 unidades por mL
500 g por mL segn sea el antibitico)
Colocar 10 tubos de 13 x 100 mm estriles, numerados del 1 al 10
Con una pipeta de 5 mL estril, colocar 0,5 mL de caldo nutritivo en los tubos
marcados del 2 al 10
Agregar 0,5 mL del antibitico al tubo 1 y 2, mezcle el contenido del tubo 2 y
trasvasar (transferir) 0,5 mL al tubo 3, continuando hasta el tubo 9. Retirar 0,5 mL del
tubo 9 y descartar; el tubo 10 no recibe antibitico y sirve como control
Agregar a todos los tubos 0,5 mL de la cepa bacteriana (cultivo bacteriano en caldo)
Incubar a 37 C por 18 a 24 horas, observar lo sucedido.
Resultados:
Realice la lectura e interpretacin de los resultados teniendo en cuenta la concentracin
del antibitico que va desde la mitad de la concentracin dispuesta en la dilucin
obtenida y en forma decreciente desde el tubo 1 al 10. Observar si hay o no crecimiento
bacteriano.
BACTERIA
1

CRECIMIENTO BACTERIANO
EN EL TUBO N (indicar con + -)
2
3
4
5
6
7
8
9

10

Interpretacin:
El tubo con la menor concentracin del antibitico que haya impedido el crecimiento
bacteriano representar el MIC o CIM (Mnima Concentracin Inhibitoria), es decir la
concentracin mnima del antibitico que inhibe el crecimiento bacteriano.
Haga el esquema de lo observado.

Manual de Prcticas de Microbiologa

Blgo. Luis Cartagena S.

Manual de Prcticas de Microbiologa

Blgo. Luis Cartagena S.

Cuestionario:
Citar 5 enfermedades microbianas y el antibitico utilizado en la actualidad?
Los antibiticos muestran actividad eficaz contra infecciones virales, por que?
Qu es la hipersensibilidad a la penicilina?
Cul es el mecanismo de accin del cido nalidixico, cloranfenicol y de las
cefalosporinas?