ALTERAES FISIOLGICAS E ENZIMTICAS EM SEMENTES DE CEVADA SOB

DIFERENTES CONDIES DE ARMAZENAMENTO

Lilian Madruga de Tunes1; Pablo Gerzson Badinelli2; Antonio Carlos de Souza Albuquerque Barros1;
3
Maria Alice da Silva de Castro
1

Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel (FAEM), Universidade Federal de Pelotas (UFPel). C. P. 354, CEP: 96001-970 Pelotas RS. e-mail: lilianmtunes@yahoo.com.br; acbarros@ufpel.edu.br
2
Mestre em Fisiologia Vegetal, Programa de Ps-Graduao em Fisiologia Vegetal, UFPel. CEP: 96001-970, Pelotas-RS. e-mail:
pgbagro@yahoo.com.br
3
Tcnica do Laboratrio de Bio Sementes, FAEM, UFPel. email: macastro@ufpel.edu.br

RESUMO: O presente trabalho teve como objetivo avaliar os padres isoenzimticos de -amilase, fosfatase cida
(ACP), malato deshidrogenase (MDH), lcool deshidrogenase (ADH) e glutamato oxalacetato transaminase (GOT)
de duas cultivares de cevada (MN 721 e Scarlett), colhidas em trs pocas com diferentes percentuais de umidade,
armazenadas em cmara fria e ambiente sem controle de temperatura e umidade. A obteno do material vegetal
(sementes) foi da empresa Westermann, localizada no municpio de Piratini/RS, no ano de 2007, onde foi realizado
o cultivo da cevada. Foram analisadas as sementes e as plntulas de todas as cultivares e pocas. Dos resultados
obtidos conclui-se que, a atividade da enzima -amilase aumenta medida que a dormncia das sementes de
cevada superada, durante o perodo de armazenamento. A atividade da enzima GOT estvel durante o
armazenamento em condies ambientais no controladas, independente da poca de colheita. No processo de
germinao a enzima ADH no foi expressiva. O ambiente controlado permitiu a obteno de sementes mais
vigorosas, durante trs meses de armazenamento.
Palavras-chave: Hordeum vulgare L., conservao, vigor, eletroforese

PHYSIOLOGICAL AND ENZIMATIC ALTERATIONS IN SEEDS OF BARLEY STORED UNDER

DIFFERENT CONDITIONS
ABSTRACT: The aim of the present work was to evaluate the patterns isoenzymatic -amylase, acid phosphatase
(ACP), malato deshidrogenase (MDH), alcohol deshidrogenase (ADH) and glutamate oxalacetato transaminase
(GOT) in two varieties of barley (NM 721 and Scarlett) harvested in three seasons with different percentages of
moisture, and stored in cold environment without control of temperature and humidity. Seeds were aquired from the
company Westermann (Piratini / RS), in 2007. We examined seeds and seedlings of all varieties and seasons. From
the results it is concluded that the activity of the enzyme -amylase improved as seed dormency is overcome during
the period of storage. The activity of the enzyme GOT is stable during storage regardless of the time of harvest. In the
process of germination the enzyme ADH. In the controlled environment more vigorous seeds were obtained, for
three months of storage.
Key words: Hordeum vulgare L., storage, vigor, electrophoresis

INTRODUO
A cevada (Hordeum vulgare L.) vem sendo
cultivada no Brasil desde a dcada de 30, sua produo
est concentrada na Regio Sul, com registros de
cultivo tambm nos estados de Gois, Minas Gerais e
So Paulo. Como conseqncia do melhoramento
gentico e do desenvolvimento de tcnicas de manejo
cada vez mais apropriadas, a cultura foi difundida pelo
sul do Brasil, onde se localizam as melhores reas, em

termos de clima e solo, para o cultivo desse cereal

(rias, 1995).
A sua maior utilizao na indstria cervejeira e
na alimentao animal. Esta cultura vem se
constituindo em um dos negcios agrcolas mais
promissores e seguros do pas, pois para a produo de
cerveja, a produo j esta vinculada ao processo de
comercializao, mediante contrato prvio entre o
produtor e a indstria de malte. Em vista disto e da
resposta econmica em relao a outras culturas de

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Tunes et al.

inverno, muitos produtores mostram interesse na

incluso da cevada em seus sistemas de produo
(Brahma, 2008).
A deteriorao das sementes tem incio logo
aps a maturidade fisiolgica, mesmo antes que seja
realizada a sua colheita. Dessa forma, a antecipao da
colheita pode favorecer a manuteno da qualidade
das sementes, principalmente, quando no final da fase
de maturao, as condies ambientais so adversas
(Barros e Peske 2006).
A manuteno da qualidade da semente durante
o perodo de armazenamento um aspecto a ser
considerado dentro do processo produtivo de qualquer
cultura, visto que o sucesso de uma lavoura depende,
principalmente, da utilizao de sementes com alto
padro de qualidade (Reuss et al., 2003). A qualidade
no pode ser melhorada durante o armazenamento,
mas pode ser preservada quando as condies de
conservao so favorveis (Pdua e Vieira, 2001).
As sementes possuem natureza higroscpica e,
dependendo das condies ambientais, podem ganhar
ou perder gua facilmente. Nesse processo de
hidratao-secagem, geralmente, ocorre danos que
resultam na reduo da qualidade fisiolgica (Copeland
e McDonald, 1995). O armazenamento de sementes de
feijo com teor de gua inicial de 13 % resultar em
danos provocados por mudanas no metabolismo
celular, como o aumento da atividade enzimtica e
respiratria das sementes (Vieira e Yokoyama, 2000).
No armazenamento, a velocidade do processo
de deteriorao pode ser controlada em funo da
longevidade de conservao das sementes, da
qualidade inicial e das condies do ambiente
(Carvalho e Nakagawa, 2000).
Como a longevidade uma caracterstica
gentica inerente espcie, somente a qualidade inicial
das sementes e as condies do ambiente de
armazenamento podem ser manipuladas (Vieira e
Yokoyama, 2000). Durante o armazenamento de
sementes de cevada, em dois ambientes (cmara fria e
condies no controladas), Medeiros Filho et al.
(1996) observaram que, quando as sementes foram
armazenadas em ambiente sem controle de
temperatura e umidade relativa, ocorreu reduo
significativa da germinao e do vigor, durante um
perodo de quatro meses.
Apesar de os mecanismos que levam
deteriorao da semente ainda no estarem
completamente elucidados, sabe-se que a reduo na
qualidade fisiolgica das sementes est relacionada a
alteraes bioqumicas que conduzem ao comprometimento de suas atividades metablicas. Dentre
essas alteraes, destacam-se as mudanas na
atividade enzimtica nos processos de sntese, nos
compostos de reserva e nas membranas celulares
(McDonald Jr., 1999). De acordo com dados de

pesquisa sobre controle de qualidade das sementes, o

monitoramento dessas mudanas pode ser feito com a
ajuda de marcadores moleculares, pois, alm de
fornecerem dados teis sobre a estrutura e diversidade
gentica das populaes de plantas, possibilitam a
visualizao da atividade das enzimas nos diferentes
estdios da planta (McDonald Jr., 1999).
As isoenzimas so produtos da expresso
gnica e conseqentemente, altamente influenciadas
pelo ambiente, pois os genes que controlam a sua
expresso manifestam-se em determinados estdios
do desenvolvimento e em rgos e tecidos especficos,
ou ainda sob um determinado estmulo (Ramrez et al.,
1991). A atividade enzimtica tambm altamente
influenciada pela idade da planta, pois os genes que
controlam a sua expresso manifestam-se em
determinados estdios do desenvolvimento e em
rgos e tecidos especficos. De maneira simplificada,
as isoenzimas podem ser consideradas variaes de
uma dada enzima dentro de um organismo, que
apresentam uma mesma especificidade de substrato,
sendo que a intensidade das bandas e o perfil
isoenzimtico so especficos para uma determinada
parte da planta, tecido e estdio de desenvolvimento,
(Peirce e Brewbaker, 1973).
Diante do exposto, pode-se verificar que
possvel avaliar, de maneira gil e eficiente, a qualidade
fisiolgica das sementes e, desta forma, possibilitar a
tomada de decises referentes colheita,
beneficiamento, armazenamento e comercializao.
Desta forma, o presente trabalho foi realizado
com o objetivo de avaliar as alteraes fisiolgicas que
ocorreram em sementes e plntulas de cevada
armazenadas em dois tipos ambiente e relacion-las
com as variaes bioqumicas, atravs da expresso
de diferentes sistemas isoenzimticos.

MATERIAL E MTODOS
Coleta de sementes
As sementes utilizadas foram obtidas da
empresa Westermann Comrcio e Agropecuria Ltda,
localizada no municpio de Piratini/RS, no ano de 2007,
onde foi realizado o cultivo da cevada. Depois de
colhidas as sementes foram levadas para o Laboratrio
de Anlises de Sementes e Bio-Sementes da
Universidade Federal de Pelotas (UFPel), para a
realizao das anlises. As cultivares estudadas foram
MN 721 e a Scarlett. A MN 721 originada da AMBEV
(Companhia de Bebidas das Amricas), apresenta
ampla adaptao e responde a ambientes de baixa
fertilidade. A cultivar Scarlett de origem argentina,
possui rendimento bastante elevado, superando as
variedades mais produtivas e se adaptada tanto a clima

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Alteraes fisiolgicas e enzimticas em sementes de ...

frio como quente. A rea experimental foi de

aproximadamente 0,5 ha, e as amostras foram
compostas por dez subamostras, retiradas
aleatoriamente de cada rea, homogeneizadas,
obtendo-se em seguida a amostra de trabalho, esta
pesando aproximadamente quatro quilogramas,
separada por data de coleta e cultivar.
As coletas foram realizadas quando as cultivares
atingiram grau de umidade inferior a 30 %, perodo
corresponde a 118, 129 e 140 dias aps a semeadura.
O grau de umidade na ocasio das amostragens foi de
25 % na primeira, 18 % na segunda e 13 % na terceira,
para a cultivar MN 721, e para a cultivar Scarlett foi de
26 % na primeira, 19 % na segunda e 13 % na terceira.
As sementes foram secadas em estufa com circulao
forada de ar, at as amostras atingirem 13 % de
umidade. Aps a secagem, as sementes foram
armazenadas em dois tipos de ambiente: temperatura
de 17 C umidade relativa de 35 % (cmara fria e
seca) e em ambiente sem controle de temperatura e
umidade, por um perodo de trs meses.
Anlise da qualidade fisiolgica
A qualidade fisiolgica das sementes foi avaliada
em duas pocas diferentes, no incio do
armazenamento e aps trs meses. Para tal, foram
realizados os testes de teor de umidade, germinao e
primeira contagem da germinao de plntulas
normais.
O teor de gua das sementes foi determinado
pelo mtodo da estufa temperatura de 105 3 C,
durante 24 horas, com duas amostras por cultivar
(Brasil, 1992).
O teste de germinao foi realizado com quatro
repeties de 100 sementes, semeadas em papel para
germinao (germitest), umedecido com gua
destilada, na proporo de 2,5 vezes o peso do papel
seco. O teste foi conduzido em cmara de germinao,
temperatura constante de 20 C, sendo as contagens
realizadas no quarto e stimo dia aps a semeadura e
juntamente com o teste, foi realizada a primeira
contagem, determinando-se a percentagem de
plntulas normais no quarto dia aps a instalao e os
resultados foram expressos em percentagem de
plntulas normais (Brasil, 1992).
Anlise bioqumica
Foram analisadas as isoenzimas -amilase,
Fosfatase cida (ACP), Malato Deshidrogenase
(MDH), lcool Deshidrogenase (ADH) e Glutamato
Oxalacetato Transaminase (GOT) nas sementes e nas
plntulas pelo teste de geminao de ambas cultivares
e pocas de colheita, em armazenamento controlado e
ambiente aberto, por um perodo de trs meses.

Para a extrao do material biolgico, foram

usadas plntulas com sete dias aps a germinao,
sementes secas, no germinadas, retiradas dos dois
tipos de ambientes estudados.
A metodologia do teste de germinao foi a
mesma citada acima. Dez sementes e plntulas
coletadas aleatoriamente foram maceradas em gral de
porcelana, para cada poca de colheita. De cada uma
das amostras, 200 mg do extrato vegetal foram
colocados em microtubos (eppendorf) acrescidos de
soluo extratora (tampo tris-citrato 0,1 M pH 8,3 +
tampo borato de ltio 0,1 M pH 8,3 + 0,15 % de
2-mercaptoetanol) na proporo 1:2 (p/v). A
eletroforese foi realizada em cubas eletroforticas
verticais mantidas em temperatura ambiente, para tal
foram utilizados gis de poliacrilamida 7 %, colocando
20 L de cada amostra, em orifcios feitos com o auxlio
de um pente de acrlico. Foram utilizadas trs
repeties para cada uma das amostras. Os padres
enzimticos foram analisados pelo sistema de
tampes, descrito por Scandalios (1969). As migraes
eletroforticas foram realizadas com uma diferena de
potencial de 10 Vcm-1, at que a linha de frente formada
pelo azul de bromofenol atingisse a extremidade inferior
do gel. Os gis foram revelados, para os sistemas
enzimticos Fosfatase cida, Glutamato Oxalacetato
Transaminase, lcool Deshidrogenase e Malato
Deshidrogenase, conforme Scandalios (1969) e
Alfenas (1998). Para a deteco da enzima -amilase,
no gel, adicionou-se 0,5 % de amido solvel. Para a
realizao das anlises os gis de eletroforese foram
fixados em soluo de glicerol 10 %.
Delineamento experimental e procedimento
estatstico
Foi utilizado o delineamento experimental
inteiramente casualizado com quatro repeties por
tratamento e as anlises de varincia foram realizadas
separadamente para cada teste e cultivar. Para os
teores de gua nas sementes no foram realizadas
anlises estatsticas. Os dados do teste de germinao
e primeira contagem da germinao foram transformados em arco-seno (x /100)1/2, para os dados em
porcentagens, com o objetivo de normalizar a
distribuio. Os resultados foram submetidos anlise
de varincia e as mdias comparadas pelo teste de
Tukey (=0,05), utilizando o programa de anlises
estatsticas Sisvar (Ferreira, 2000). Nas tabelas, as
mdias foram apresentadas sem transformao. A
interpretao dos resultados foi baseada na anlise
visual dos gis de eletroforese, levando-se em
considerao a presena/ausncia, bem como a
intensidade de cada uma das bandas eletroforticas em
cada sistema isoenzimtico avaliado.

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Tunes et al.

RESULTADOS E DISCUSSO
Em cevada, as sementes logo depois de
colhidas, apresentaram certo grau de dormncia
(Tabela 1), o que indispensvel para evitar a
germinao ainda na espiga. Esta situao pode
ocorrer em locais caracterizados por climas que
apresentam perodos midos e chuvas prolongadas
que coincidem com o momento colheita, a exemplo da
regio sul do Brasil. Esse um fenmeno comum, onde
as sementes no germinam logo aps a colheita devido
aos mecanismos internos, de natureza fsica ou
fisiolgica, que bloqueiam a germinao. Dessa forma,
a fim de superar esta dormncia, aps a colheita, as
sementes foram secas at a umidade prxima a 13 % e
armazenadas nos dois ambientes estudados, por um
perodo de trs meses.
Na Tabela 1, esto apresentadas as mdias da
germinao das sementes logo depois da colheita, com
menor intensidade de dormncia inicial na primeira
colheita para a cultivar MN 721 e para a cultivar Scarlett
na terceira colheita, provavelmente em virtude das
condies ambientais reinantes durante o perodo de
maturao das sementes, de acordo com Barros e
Peske, (2006). Segundo Tunes (2008), ao se observar a
mdia da germinao, pode-se concluir que as
cultivares MN 721 e Scarlett possuem alto grau de
dormncia em todas as pocas de colheita, havendo a
necessidade de tratamento especfico para a utilizao
dessas sementes, logo depois de colhidas. A cultivar
MN 721 apresentou aumento de dormncia conforme o
avano no retardamento da colheita, o que poderia ser
um estmulo da prpria planta para evitar a germinao
na espiga, fato que poderia comprometer o vigor das
sementes produzidas, pois alm do consumo de
reservas, afeta diretamente a sua qualidade fisiolgica.
Este comportamento no se repete na cultivar Scarlett,
visto que h uma alta percentagem de sementes que
poderiam germinar na espiga, tendendo a aumentar
com o retardamento da colheita. As temperaturas
mdias observadas na regio e a umidade que as
sementes apresentaram no momento de cada coleta,
podem ter influenciado o metabolismo das sementes,
considerando que fatores ambientais podem induzir a
germinao.
Nas Tabelas 2 e 3 esto apresentados os dados
obtidos para o teor de gua das sementes. Pode-se
verificar que estes so semelhantes para as diferentes
pocas de colheita para cultivares MN 721 e Scarlett,
com variao de at 0,72 pontos percentuais, valor este
inferior amplitude mxima aceita que de 1 a 2 pontos
percentuais (Marcos Filho, 1999a). Segundo Marcos
Filho et al. (1987) e Loeffler et al. (1988), este fato
importante na execuo dos testes, pois se considera
que a uniformizao do teor de gua das sementes
imprescindvel para a padronizao das avaliaes e

obteno de resultados consistentes. Ainda na Tabela

2, pode-se observar que as diferentes pocas de
colheita foram estatisticamente semelhantes para a
cultivar MN 721 nos testes de germinao e primeira
contagem da germinao, ou seja, estes testes no
apresentaram diferena estatstica significativa quanto
ao vigor. As sementes da cultivar Scarlett apresentaram
diferena na germinao durante os perodos de
collheita, onde, o maior percentual foi obtido na primeira
colheita, o mesmo ocorreu com a primeira contagem de
germinao, apresentando-se as plntulas mais
vigorosas. Na Tabela 3, pode-se verificar que ambas as
cultivares apresentaram maior percentual de sementes
germinadas na primeira colheita. Na primeira contagem
da germinao, as sementes da cultivar MN 721 no
apresentaram diferenas estatsticas. No entanto, para
a cultivar Scarlett, as sementes mais vigorosas foram
verificadas na primeira e terceira colheita (118 e 140
dias aps a semeadura (DAS).
Tabela 1 - Mdias do teste de germinao (%) em
sementes de cevada das cultivares MN 721
(MN) e Scarlett (SC), aos 118, 129 e 140
dias de colheita. Piratini, RS, safra 2007.
Cultivar
MN
MN
MN
CV (%): 2,53
SC
SC
SC
CV (%): 2,08

Colheita (dias)
118
129
140

Germinao (%)
59 A
22 B
9C

118
129
140

50 C
55 B
64 A

Mdias seguidas das mesmas letras nas colunas, no diferem

entre si pelo teste de Tukey a 5 % de probabilidade. CV =
coeficiente de variao

As sementes das duas cultivares, armazenadas

tanto em cmara fria como em ambiente aberto,
apresentaram germinao semelhante e superior ao
mnimo estabelecido para a comercializao de
sementes de cevada no Estado Rio Grande do Sul, 80
%, segundo as recomendaes do Sistema Nacional de
Sementes e Mudas SNSM. A utilizao de lotes com
estas caractersticas essencial para a conduo de
testes de vigor, a fim de atender ao objetivo bsico para
a identificao de diferenas quanto ao potencial
fisiolgico de lotes com poder germinativo semelhante,
conforme salientou Marcos Filho (1999b). Apesar disso,
verifica-se que enquanto o avano no perodo de
armazenamento reduziu linearmente o percentual de
germinao das sementes armazenadas em ambiente
aberto, as que foram mantidas em condies
controladas (cmara fria) praticamente no tiveram
alterao na germinao. Medeiros Filho et al. (1996)
tambm constataram o mesmo comportamento

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Alteraes fisiolgicas e enzimticas em sementes de ...

durante o armazenamento de sementes de cevada, os

autores puderam verificar reduo significativa da
germinao quando as sementes foram armazenadas
em ambiente sem controle de temperatura e umidade
relativa. Freitas et al. (2000), Pdua e Vieira (2001) e
Pdua et al. (2002) tambm verificaram que a reduo
na germinao de sementes foi mais acentuada com o
aumento do perodo de armazenamento sem controle
de umidade e temperatura.
A partir da anlise dos cinco sistemas
isoenzimticos utilizados foi possvel verificar que
houve variao significativa na intensidade da
expresso isoenzimtica conforme o estdio do
processo de germinao das sementes e entre os dois
tipos de armazenamento (Figuras 1 a 5). Os padres
dos cinco sistemas isoenzimticos analisados
apresentaram variaes na expresso, em funo
disso, cada sistema foi abordado e analisado
individualmente.
Na Figura 1 est representado o gel revelado

para a enzima -amilase das sementes e plntulas de

cevada, colhidas em trs pocas distintas. A atividade
dessa enzima pode ser evidenciada pelas bandas
acromticas em fundo azulado devido reao do iodo
com a amilase, tratando-se de uma revelao negativa.
Desta forma, o amido foi hidrolisado nos locais em que a
enzima estava presente. A colorao dos gis nas
figuras citadas no ficou azulada por que as fotos so
preto e branco. A enzima -amilase apresentou baixa
atividade nas sementes, durante os trs meses de
armazenamento tanto em cmara fria (ambiente
controlado) como no ambiente aberto. Observou-se
ainda, um aumento na atividade da -amilase, que
coincidiu com um aumento no porcentual de
germinao e reduo de sementes dormentes (Figura
1), para aquelas amostras de sementes armazenadas
nos dois tipos de ambientes analisados. Para a cultivar
Scarlett no armazenamento em ambiente aberto, as
sementes colhidas com teor de gua em torno de 13 %
de umidade, consideradas mais secas, apresentaram

Tabela 2 Determinao do teor de gua (TA), germinao (G), primeira contagem da germinao (PC) de
sementes de cevada MN 721 (MN) e Scarlett (SC), e resultados das comparaes das pocas de
colheita, separadas para cada uma das cultivares armazenadas por trs meses em ambiente com
temperatura e umidade controladas. Piratini, RS, safra 2007.

TA

Cultivar

Colheita (dias)

MN
MN
MN
CV (%)
SC
SC
SC
CV (%)

118
129
140

12,04
12,03
12,01

118
129
140

12,40
12,27
12,01

PC

%
98 A
98 A
98 A
1,02
98 A
96 B
97 AB
0,84

91 A
90 A
92 A
2,55
93 A
90 B
90 B
0,89

Mdias seguidas das mesmas letras nas colunas, no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade. CV =
coeficiente de variao.

Tabela 3 - Determinaes do teor de gua (TA), germinao (G), primeira contagem da germinao (PC) de
sementes de cevada MN 721 (MN) e Scarlett (SC), e resultados das comparaes das pocas de
colheita, separadas para cada uma dessas duas cultivares, armazenadas por trs meses em ambiente
sem controle da temperatura e umidade. Piratini, RS, safra 2007.

TA
Cultivar
MN
MN
MN
CV (%)
SC
SC
SC
CV (%)

Colheita (dias)
118
129
140

12,95
12,81
12,48

118
129
140

12,83
12,44
12,23

PC

98 A
94 B
96 B
3,01
96 A
90 B
90 B
2,54

90 A
89 A
90 A
1,01
90 A
87 B
90 A
1,87

Mdias seguidas das mesmas letras nas colunas, no diferem entre si pelo teste de Tukey a 5 % de probabilidade. CV =
coeficiente de variao.

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Tunes et al.

menor expresso enzimtica. Estes resultados so

coerentes com aqueles encontrados por Das e SenMandi (1992), os quais trabalhando com sementes de
arroz concluram que a atividade da -amilase
necessria para a germinao das sementes.
A cultura da cevada usada principalmente para
a fabricao de cerveja, onde o processo de maltagem
tem por objetivo ativar a amilase, enzima necessria na
transformao do amido do cereal em acares
fermentveis e dextrinas. A cevada no possui sistema
enzimtico desenvolvido necessrio para a
transformao do amido em acares fermentveis
(maltose e glicose). Essa transformao vital, pois as
leveduras encarregadas da fermentao precisam
deles para seu crescimento e multiplicao durante o
processo de fermentao do mosto para a produo de
cerveja. As leveduras no so capazes de atacar
diretamente o amido. O sistema enzimtico do malte
tem sua formao iniciada na germinao e definido
com a secagem, na qual o teor da enzima fixado
(Brahma, 2008). A -amilase uma enzima
fundamental na decomposio do amido em acares
mais simples.
Pela anlise dos padres enzimticos de
sementes e plntulas de cevada pode-se observar uma
maior expresso da enzima malato desidrogenase
(MDH) nas sementes (Figura 2). Sua atividade foi mais
intensa nos primeiros estdios do processo de
germinao onde a sntese de novos tecidos da
semente requer mais energia para o crescimento.
Assim, nas plntulas a enzima MDH se apresentou com
um menor nmero e intensidade de bandas, em ambas
as cultivares estudadas, indicando menor atividade
respiratria nessa condio. No ambiente aberto, a
intensidade da expresso dessa enzima foi bastante
reduzida, quando comparado com o ambiente
controlado. A enzima malato desidrogenase catalisa a
converso de malato a oxaloacetato, tendo uma
importante funo de produo de NADH para o Ciclo
de Krebs e gerao de oxaloacetato para biossnteses
de aminocidos. Segundo Spinola et al. 2000, por se
tratar de uma enzima importante durante o processo
respiratrio celular, o aumento da sua atividade pode
ser devido ao aumento da expresso desta em
diferentes compartimentos celulares e/ ou pela induo
da atividade da enzima expressa pela maior
intensidade das bandas, isto pode ter ocorrido devido
ao aumento da respirao nas sementes que se
encontravam em processo deteriorativo ou no, uma
vez que as enzimas envolvidas na respirao podem
ser ativadas em sementes de menor qualidade. Notouse que as cultivares mais vigorosos tiveram sua
atividade enzimtica estvel (ambiente controlado) ou
diminuda (ambiente aberto). J as cultivares menos
vigorosas, tiveram maior influncia das variantes

159

ambientais durante o armazenamento em condies de

ambiente aberto.
A expresso da enzima Fosfatase cida (ACP)
nos diferentes tratamentos pode ser observada na
Figura 3. Foram detectadas bandas de ACP em todos
os tratamentos avaliados, porm, nas sementes, com
uma intensidade muito baixa. J nas plntulas a
expresso foi bastante intensa na cultivar MN 721 (de
ciclo mais curto) e na cultivar Scarlett primeira colheita,
diminuindo gradativamente durante o perodo de
colheita. Essa enzima tem sido amplamente
caracterizada em plantas, e sua atividade aumenta em
plantas que apresentam deficincia de fsforo. No
ambiente aberto a sua atividade foi bem mais
expressiva nas plntulas de ambas as cultivares
analisadas. Essa enzima participa em reaes de
hidrlise de steres e pode provocar a peroxidao dos
fosfolipdios de membrana. Segundo Camargo et al.
(2000), est envolvida tambm na manuteno do
fosfato celular e sua atividade pode afetar o
metabolismo do fosfato em sementes, como os nveis
de ATP e nucleotdeos. Plntulas da cultivar MN 721
mantiveram a atividade constante para esta enzima
durante o armazenamento (Figura 3), em ambiente
controlado e aberto. J as plntulas da cultivar Scarlett,
sofreram reduo da atividade desta enzima em
ambiente controlado e no apresentaram ao da
mesma em ambiente aberto. Segundo Roberts (1973),
enzimas hidrolticas tm sua atividade incrementada
com a perda da viabilidade das sementes. Autores
como Brando Junior et. al. (1999) e Vieira (1996)
somente verificaram atividade da fosfatase cida nas
sementes de milho e algodo que se apresentavam em
avanado grau de deteriorao. De acordo com Tunes
(2008), a atividade da Fosfatase cida maior nas
plntulas, consequentemente maiores danos por
embebio e maior peroxidao lipdica podem ter
ocorrido.
Analisando os gis do sistema glutamato
oxalacetato transaminase (GOT) (Figura 4), tambm
no foi observada variao da intensidade de bandas
nas sementes. A expresso e a intensidade variaram
em plntulas, na cultivar MN 721 na terceira colheita e
na cultivar Scarlett na segunda e terceira colheita, onde
apresentaram duas bandas ao invs de uma, no
ambiente controlado. Tambm foi verificado, que a
intensidade da expresso aumentou consideravelmente medida que o processo de colheita foi mais
tardio, ou seja, com umidade prxima a 13 %. No
entanto, para o ambiente aberto (sem controle), no
ocorreu praticamente diferena da expresso dessa
enzima, tanto para as sementes como para as plntulas
colhidas nas trs pocas distintas. Ocorreu o
aparecimento de uma segunda banda nas sementes,
no entanto de forma bem sutil, antes de iniciarem o

Magistra, Cruz das Almas-BA, v. 21, n. 3, p. 154-164, jul./set., 2009.

160

Alteraes fisiolgicas e enzimticas em sementes de ...

processo de germinao. Esta enzima responsvel

pela oxidao de aminocidos, fornecendo energia
para o Ciclo de Krebs ou reduo do -cetoglutarato
para a sntese de novos aminocidos, como fonte de
energia ao embrio em desenvolvimento. Chauhan et
al. (1985) e Tunes (2008) observaram incremento de
bandas para a enzima GOT com o envelhecimento das
sementes. Segundo os autores, essas mudanas que
ocorrem em cevada, em relao ao nmero de bandas,
so devidas a um aumento na atividade metablica
durante o processo de deteriorao. De acordo com
Conn e Stumpf (1980), essa enzima participa no
processo de degradao e sntese de aminocidos
apresentando um importante papel na germinao de
sementes, o que vem confirmar os resultados obtidos
neste trabalho. Em funo desta enzima estar

diretamente envolvida no metabolismo do N, possvel

que variaes ocorram medida que acontece a
sntese e degradao de aminocidos durante o
processo de germinao. Sem dvida, a enzima GOT
tem uma participao fundamental no metabolismo
protico, no somente durante a germinao, mas,
durante todo o ciclo de vida da planta.
A expresso da enzima lcool deshidrogenase
(ADH) nas sementes foi bastante pronunciada (Figura
5), o que sugere intensa atividade de respirao
anaerbica. No entanto, nas plntulas em geral no foi
observado a sua atividade. No ocorreram diferenas
na expresso dessa enzima tanto em sementes como
em plntulas, quando avaliados os resultados do
armazenamento em ambiente aberto, por um perodo
de trs meses.

A
Plntulas

Sementes
1

Sementes
5

Plntulas
1

160

Figura 1 - Padro eletrofortico obtido com o sistema isoenzimtico -amilase em sementes e emergncia de
plntulas de duas cultivares de cevada (MN 721 e Scarlett) colhidas em trs pocas distintas (7,118, 129
e 140 dias aps a semeadura - DAS). 1- MN 721 118 DAS, 2- MN 721 129 DAS, 3- MN 721 140 DAS, 4Scarlett 118 DAS, 5- Scarlett 129 DAS e 6 - Scarlett 140 DAS. Laboratrio de Bio Sementes/UFPel
Pelotas, 2007. A: ambiente com umidade e temperatura controlada; B: ambiente aberto (temperatura e
umidade ambiente).

Sementes
3
4
5

A
6

Plntulas
3
4
5

Sementes
6

Plntulas
2

Figura 2 - Padro eletrofortico obtido com o sistema isoenzimtico Malato Desidrogenase (MDH) em sementes e
emergncia de plntulas de duas cultivares de cevada (MN 721 e Scarlett) colhidas em trs pocas
distintas (7, 118, 129 e 140 dias aps a semeadura DAS). 1- MN 721 118 DAS, 2- MN 721 129 DAS, 3MN 721 140 DAS, 4- Scarlett 118 DAS, 5- Scarlett 129 DAS e 6 - Scarlett 140 DAS. Laboratrio de Bio
Sementes/UFPel Pelotas, 2007. A: ambiente com umidade e temperatura controlada; B: ambiente
aberto (temperatura e umidade ambiente).
Magistra, Cruz das Almas-BA, v. 21, n. 3, p. 154-164, jul./set., 2009.

161

Tunes et al.

Sementes
1

Sementes

Plntulas
5

Plntulas

Figura 3 - Padro eletrofortico obtido com o sistema isoenzimtico Fosfatase cida (ACP) em sementes e
emergncia de plntulas de duas cultivares de cevada (MN 721 e Scarlett) colhidas em trs pocas
distintas (7, 118, 129 e 140 dias aps a semeadura DAS). 1- MN 721 118 DAS, 2- MN 721 129 DAS, 3MN 721 140 DAS, 4- Scarlett 118 DAS, 5- Scarlett 129 DAS e 6 - Scarlett 140 DAS. Laboratrio de Bio
Sementes/UFPel Pelotas, 2007. A: ambiente com umidade e temperatura controlada; B: ambiente
aberto (temperatura e umidade ambiente).
A

Sementes
1

Plntulas
5

Plntulas

Sementes
5

Figura 4 - Padro eletrofortico obtido com o sistema isoenzimtico Glutamato Oxalacetato Transaminase (GOT)
em sementes e emergncia de plntulas de duas cultivares de cevada (MN 721 e Scarlett) colhidas em
trs pocas distintas (7, 118, 129 e 140 dias aps a semeadura DAS). 1- MN 721 118 DAS, 2- MN 721
129 DAS, 3- MN 721 140 DAS, 4- Scarlett 118 DAS, 5- Scarlett 129 DAS e 6 - Scarlett 140 DAS.
Laboratrio de Bio Sementes/UFPel Pelotas, 2007. A: ambiente com umidade e temperatura
controlada; B: ambiente aberto (temperatura e umidade ambiente).
A ADH uma enzima que atua no processo
respiratrio, removendo substncias txicas s
sementes, como acetaldedo e etanol, que so
produzidos quando as clulas passam a respirar
anaerobicamente (Faria et al., 2003). Durante os
estgios iniciais da germinao, a degradao do
amido realizada num processo quase que totalmente
anaerbico, at que o tegumento da semente rompido
pela sada do eixo embrionrio (Aldasoro e Nicols,
1980. Confirmando estas evidncias no padro
isoenzimtico para ADH, foi observada alta atividade,
com expresso exclusiva nas sementes, evidenciando
que medida que o processo de germinao avana e
o processo aerbico de gerao de energia comea a
ser predominante, a enzima ADH no mais
necessria. De acordo com Tunes (2008), a expresso
desta enzima diminuiu praticamente a zero com o
processo de emergncia das plntulas de cevada. Bock

(1999), estudando sementes de soja, verificou o

aumento na respirao em funo do acrscimo no
grau de hidratao das sementes. Este aumento na
atividade celular ocorre com a presena das
substncias de reserva das sementes, que so
transformadas em energia para a manuteno dos
tecidos vivos e de novos compostos para o reparo de
estruturas danificadas pelo processo de deteriorao.
Os resultados revelaram que, dependendo do
sistema enzimtico utilizado, ocorre uma diferenciao
em nvel de protenas. Em funo disso, a anlise
conjunta de vrios sistemas isoenzimticos, realizando
a extrao das protenas em dois estdios de
desenvolvimento (semente e plntula), recomendvel, pois permite verificar modificaes que ocorrem
da semente para as plntulas, a influncia da umidade
durante a colheita e tambm a relao dos diferentes
tipos de armazenamento.

Magistra, Cruz das Almas-BA, v. 21, n. 3, p. 154-164, jul./set., 2009.

162

Alteraes fisiolgicas e enzimticas em sementes de ...

Sementes
1

Sementes

Plntulas
5

Plntulas
5

Figura 5 - Padro eletrofortico obtido com o sistema isoenzimtico lcool Deshidrogenase (ADH) em sementes e
emergncia de plntulas de duas cultivares de cevada (MN 721 e Scarlett) colhidas em trs pocas
distintas (7, 118, 129 e 140 dias aps a semeadura DAS). 1- MN 721 118 DAS, 2- MN 721 129 DAS, 3MN 721 140 DAS, 4- Scarlett 118 DAS, 5- Scarlett 129 DAS e 6 - Scarlett 140 DAS. Laboratrio de Bio
Sementes/UFPel Pelotas, 2007. A: ambiente com umidade e temperatura controlada; B: ambiente
aberto (temperatura e umidade ambiente).
Segundo Carvalho et al. (2000), os testes mais
sensveis para determinar o comportamento das
sementes sob diferentes mtodos de armazenamento
so aqueles que medem a atividade de determinadas
enzimas associadas com a degradao das reservas
e/ou biossnteses de novos tecidos. Com base nos
resultados obtidos neste estudo e com os relatos de
Vieira (1996), Spinola et al. (2000) e Carvalho et al.
(2000), as isoenzimas podem ser utilizadas no
monitoramento da deteriorao e no controle de
qualidade de sementes, pois a integridade e o
metabolismo celular esto relacionados com a grande
variedade de enzimas e protenas estruturais de cada
espcie.

5. O ambiente controlado favoreceu sementes

mais vigorosas, durante trs meses de armazenamento.

AGRADECIMENTOS
Empresa Westermann, do Municpio de
Piratini, RS, pelo fornecimento da rea para a pesquisa,
que possibilitou a concretizao dos resultados obtidos;
ao Laboratrio de Didtico de Anlise de Sementes
Professor Flvio Rocha, do Departamento de
Fitotecnia, Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, da
Universidade Federal de Pelotas; Capes, pelo apoio e
financiamento do projeto de pesquisa.

CONCLUSES
1. H variaes no padro de expresso das
enzimas -amilase, ACP, MDH, ADH e GOT entre as
sementes e as plntulas da mesma cultivar.
2. A atividade da enzima -amilase aumenta
medida que a dormncia das sementes de cevada
superada, durante o perodo de armazenamento em
ambas cultivares.
3. A atividade da enzima GOT estvel durante o
armazenamento em condies ambientais no
controladas nas cultivares MN 721 e Scarlett,
independente da poca de colheita.
4. No processo de germinao, a enzima ADH
no foi expressiva nas duas cultivares estudadas.

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Recebido: 13/05/2008
Aceito:16/12/2008

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