Universidad Mariano Glvez

Facultad de Ciencias Mdicas y de la Salud

Carrera de Mdico y Cirujano

TINCION DE GIEMSA, ESPECIAL PARA PROTOZOO SANGUINEOS Y

TISULARES
PRACTICA 5
1.

Introduccin

Los protozoos sanguneos y titulares, estn ntimamente relacionados con los parsitos
intestinales, en prcticamente todos los aspectos, excepto en lo que se refiere a la localizacin
de la infeccin.
Con respecto a la identificacin de los parsitos de mayor trascendencia a nivel del pas
(Plasmodium sp. y/o Leishmania sp.), pueden ser identificados por varios mtodos.
La microscopia es un mtodo sensible, especifico para la identificaron de especies y estadios de
los protozoos sanguneos y titulares, puede adems proporcionar informacin sobre la viabilidad
de los parsitos y esto sumado al conteo de parasitemia, es til para evaluar la respuesta al
tratamiento.
2.

Objetivos
Que el estudiante:

3.

Aprenda a realizar una correcta toma de muestra, especialmente para aquellos

pacientes sospechoso de paludismo.

Desarrolle la habilidad en la identificacin de los protozoos sangunea y tisular en

sus diferentes estadios.

Alcance

Conocer la morfologa de los diferentes protozoos en los diferentes estadios adems de los
elementos que conforman la sangre, que se observa en los diferentes tipos de muestras
(leucocitos polimorfos nucleares, linfocitos, monolitos, plaquetas y eritrocitos normales)
4.

Antecedentes

Para el diagnostico de Plasmodium sp, la sangre circulante de los pacientes infectados,

enfermos portadores, es la muestra de eleccin, para la realizacin de un diagnostico de
laboratorio oportuno, rpido y confiable.
Para el diagnostico de Malaria, existen dos tipos de preparaciones una de ellas es la Gota
Gruesa y la otra Frotis o extendido de sangre completa, debe hacerse en el momento que se
presenta la fiebre y antes de la administracin de medicamentos.
Para la identificacin de Leishmania sp, donde el diagnostico de certeza es evidenciar la
presencia directa o indirecta del parsito, puede realizarse por diferentes tipos de material
humano, segn la localizacin de la enfermedad: aspirado de medula sea, para Leishmaniasis
visceral, raspado de ulcera para leishmaniasis cutnea y se puede utilizar varios mtodos como:
frotis, cultivo y biopsia.
El mtodo del Frotis, es rpido de bajo costo, alta sensibilidad y especifico, es el mtodo de
eleccin para el diagnostico confirmatorio de la Leishmaniasis cutnea, por la facilidad de la

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toma de muestra (raspado de lesin cutnea), la coloracin y su anlisis en la observacin

microscpica.
5.

6.

Materiales y equipo

Microscopio compuesto

Portaobjetos limpios y desgrasados (4 / A)

Marcador indeleble para vidrio

Cubreobjetos limpios

Beacker con metanol

Colorantes: Giemsa y solucin amortiguadora

Papel limpialentes

Lentes de proteccin

Pizeta de alcohol al 70% (5.0 ml/A)

Pizeta de cloro al 5% (5ml/A)

Guantes de ltex

Papel mayordomo

Torundas de algodn (1/A)

Beackers con cloro ( 1 por mesa con 20 ml de cloro)

Lanceta

Bolsas para descarte de basura

Pipetas pasteur estriles

Goteros

Perilla pequea, de goma

Laminas ya preparadas y coloreadas

Aceite de inmersin

Procedimiento
PARTE I. Preparacin de frotis o extendido sanguneo
a.

Tenga a la mano todos los materiales necesarios para la toma de la muestra.

b.
Frote enrgicamente con un algodn humedecido con alcohol al 70%. La yema
del dedo de su compaero de trabajo (paciente) de preferencia el tercer dedo de la mano
izquierda.
c.

Detenga la mitad de la lanceta estril que va a utilizar con el paciente.

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d.

Detenga firmemente el dedo del paciente, con ayuda de su mano izquierda.

e.

Pinche de forma rpida, la parte lateral de la yema del dedo de eleccin.

f.

Limpie la primera gota de sangre, con un algodn seco.

Con la mano derecha, tome el portaobjeto, extienda la sangre a manera de formar un

rectngulo de grosor uniforme (forme una banderita), de la siguiente forma: coloque delante
de la gota de sangre, el borde angosto del segundo portaobjeto, sobre el primero, formando
un ngulo de 30 grados, dejando la gota a su lado derecho. Mueva hacia atrs el segundo
portaobjeto hasta que toque la gota de sangre, y entonces se desliza hacia delante, para que
la sangre que esta atrs se extienda. La gota debe ser pequea, de tal manera que sea
totalmente extendida antes de llegar al final del portaobjeto, ese extremo del extendido debe
tener el grosor de una sola capa de eritrocitos.
PARTE II. Preparacin de la Gota Gruesa
a.

Repita los pasos del numero 1 hasta el numero 6.

b.

Con la mano derecha, tome el portaobjeto, sostenindolo por los bordes.

c. Con la mano izquierda oprima levemente el dedo para extraer la tercera gota, la cual
deber caer en el centro del portaobjeto sostenido con la derecha.
d. Extendida la sangre con la esquina de otro portaobjeto, hasta lograr un circulo de
aproximadamente 1 cm. de dimetro y haga que el espesor de la capa sea uniforme.
e.

Deje secar a temperatura ambiente.

PARTE III. Coloracin para identificacin de Protozoos

a. Cubra el extendido seco, con 2 o 3 gotas de alcohol metilico, por 2 minutos, escurra y
deje secar a temperatura ambiente.
b. Agregue 3 o 4 gotas de Colorante Giemsa, hasta cubrir la preparacin, por termino de
5 a 7 minutos.
c. Escurra el colorante
d. Lave la lamina con solucin amortiguadora o agua de chorro.
e. Escurra y deje secar al aire.
Nota: Tanto el Frotis o extendido, como la Gota Gruesa, para Malaria y los frotis o extendidos
para Leishmania, se colorean de la misma forma.
PARTE IV. Observacin al Microscopio
a. Lleve al microscopio lminas ya preparadas y coloreadas.
b. Agregue una gota de aceite de inmersin y observe en 100X.
c. Esquematice
d. Reporte las estructuras

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7.

Cuidados y otros aspectos relevantes de seguridad

a. Lvese las manos despus de realizar cualquier tarea dentro de laboratorio de
microbiologa.
b. No dejar por ningn motivo cajas, tubos o cualquier otro material contaminado, en
lugares que no corresponda al rea de trabajo.
c. NINGUN EQUIPO DE PROTECCIN SUSTITUYE EL CUIDDO, ORDEN Y
PRECAUCIN QUE DEBE TENER CADA ESTUDIATE AL REALIZAR SU TRABAJO

8.

Cuestionario

Resuelva las siguientes preguntas

a. Qu diferencia encontr entre la preparacin del extendido y la Gota Gruesa, para el
diagnostico de malaria?
b. Cual considera que es la ms apropiada y por qu?
c. Qu diferencia encuentra entre las muestras para malaria y las de Leishmaniasis?
d. Cul recomendara ms til y rentable para hacer el diagnostico y por qu?
9.

Formato de presentacin de resultados

a. Esquematice las observaciones realizadas de cada una de las lminas
b. Conteste el cuestionario y realice la investigacin.

10. Informe final

Investigue sobre: El porque de los diferentes tipos de muestra, en el caso de Leishmaniasis
cutnea, muco cutnea y visceral.
11. Bibliografa de referencia
Macalup S. 1997. Procedimientos de Laboratorio Edicin nica. Editorial Impresora Amarilys
e.i.r.l. Lima, Per.
Kaminsky R. 1996. Manual de Parasitologa. 2 Edicin. Editorial Rossany Auceda Tegucigalpa,
Honduras.
Botero D. 1992. Parasitosis Humana 2 Edicin. Carvajal S.A Impreso en Medelln Colombia.

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