INFORME PRCTICA #6

OBTENCIN DE PENICILINA Y COMPROBACIN DE SU ACCIN ANTIBITICA

Por:
Nathalie Zapata Gaviria
Ana Maria Henao Arango
Mara Alejandra Muoz Castrillon

Profesor:
Juan Martin Delgado

Asignatura:
Laboratorio de Biotecnologa l
Mircoles jueves
12 - 14

Universidad de Antioquia
Facultad de ciencias farmacuticas y alimentarias
Departamento de alimentos
Medelln
2015-1

OBJETIVOS

General: Obtener penicilina a partir de una cepa esporulada de Penicillum

Chrysogenum en medio de cultivo sumergido y comprobar su accin

antibitica a partir de un antibiograma.

Especficos:
Garantizar el proceso de fermentacin del Penicillum Chrysogenum para la

obtencin de penicilina
Favorecer el crecimiento micelar para favorecer la excrecin de la penicilina

en el medio de cultivo
Controlar y condicionar las condiciones ambientales para el crecimiento del

Penicillum Chrysogenum en medio de cultivo sumergido.

Identificar y comparar la accin antibitica de la penicilina obtenida y un
tipo de penicilina comercial mediante un antibiograma, utilizando como
microorganismo de prueba una cepa de Bacillus Subtilis.

DESCRIPCIN DEL PROCEDIMIENTO

Inicialmente se obtuvo una cepa esporulada de Penicillum Chrysogenum
cultivada en agar saburaud, a continuacin

se prepararon para los seis

equipos de trabajo, mil quinientos mililitros (1500 mL) de caldo que contena
(45 gramos de lactosa, 15 gramos de glucosa, 60 gramos de extracto de
levadura, 4.5 gramos de nitrato sdico, 0.75 gramos

deshidrogenofosfato

sdico, 0.45 gramos de fenilacetato, 0.375 gramos de sulfato magnsico y la

punta de la esptula de sulfato de zinc), estos componentes tenan como
funcin ser fuente de carbono, de nitrgeno molecular, de nitrgeno proteico,
fosforo, azufre y otros minerales; despus de homogenizada la mezcla de los
componentes del caldo, se ajust el pH ( pH:5) para favorecer la esterilidad del
medio de cultivo, adems de al crecimiento micelar del hongo. Posteriormente
se racion para cada equipo doscientos cincuenta mililitros (250mL) de caldo
recibidos en erlenmeyer; a continuacin se esterilizaron los medios en
autoclave a 121C y 15 minutos. Al da siguiente se inocularon las esporas de
Penicillum Chrysogenum, de la siguiente manera, en cabina para evitar
cualquier tipo contaminacin ambiental, se adicion al tubo de ensayo que
contena al hongo cinco mililitros (5 mL) de agua estril en dos oportunidades y
se agit suavemente para liberar las esporas, y posteriormente se adicionaron

al erlenmeyer previamente esterilizado con mechero que contena el caldo,

luego se tapo el erlenmeyer que garantizaba un espacio de cabeza suficiente
para la presencia de oxigeno necesario para el hongo aerobio con un tapn de
algodn

y se dej desarrollar el micelio del Penicillum Chrysogenum por

quince das en agitacin orbital para garantizar la homogeneidad del medio.

Antibiograma
Inicialmente se sembr una suspensin bacteriana de Bacillus Subtilis
(organismo de prueba) en un agar de ensayo para bacterias indicadoras que
contena

(glucosa,

peptona,

extracto

de

levadura,

agar

agua

desmineralizada), posteriormente se llev la placa a la incubadora (45C por 20

minutos) para secarla y que el calor ayudara a la incorporar el microorganismo
al agar y no quedara solo en la superficie, a continuacin, se dividi la placa en
dos secciones y en la cabina se ubicaron en una de las mitades tres discos de
papel humedecidos con un tipo penicilina comercial y un blanco ( disco de
papel sin penicilina), y en la otra mitad se ubicaron un blanco y tres discos de
papel humedecidos con el caldo que contena el micelio del Penicillum
Chrysogenum, ya que en el caldo era donde se encontraba la penicilina
excretada por el hongo. Esta placa de ensayo se incub a 28C por dos das y
transcurrido ese tiempo se realizo la medicin del dimetro del halo de
inhibicin formado alrededor de los discos.
RESULTADOS
Tabla 1. Medidas de los dimetros del halo de inhibicin tanto para penicilina
comercial como para la penicilina obtenida a partir de Penicillum Chrysogenum.

Blanco
Disco de papel 1
Disco de papel 2
Disco de papel 3

Penicilina Comercial
Dimetro (cm)
0,6
1,7
1,1
1,4

ANLISIS DE RESULTADOS

Penicilina Obtenida
Dimetro (cm)
0,6
0,7
0,6
0,6

A partir de los resultados obtenidos (Tabla 1) del dimetro del halo de inhibicin
para penicilina comercial y la obtenida en el laboratorio mediante la
fermentacin del Penicillum Chrysogenum se concluye que el dimetro los
halos de inhibicin para la penicilina obtenida son menores en comparacin de
la penicilina comercial. La penicilina comercial produjo un halo de un dimetro
visible alrededor del disco de papel mientras que la obtenida se quedo solo en
la superficie, por lo que concluimos que la penicilina obtenida en el laboratorio
debido a que se encontraba dispersa y en solucin junto con el micelio del
hongo y no se someti a proceso de purificacin la concentracin no fue
suficiente para producir un dimetro de halo mayor en comparacin con la
penicilina comercial, la cual fue sometida a una serie de procesos para su
obtencin debido a que esta se realiza con mayor aislamiento y control del
proceso, entre otros factores que pueden mejoran el producto final. El efecto
que produjo la penicilina sobre el Bacillus Subtilis fue un rompimiento o lsis de
la pared celular del microorganismo, produciendo una inviabilidad celular a
medida que la penicilina se iba expandiendo a lo largo del disco de papel. Al
ser una bacteria Gram (+), indica que su tamao de su pared celular es mayor
en comparacin con las Gram (-) por esta razn la penicilina necesitaba ms
tiempo para producir la lisis y por lo tanto tampoco se logr obtener un mayor
dimetro

de

hablo

de

inhibicin

teniendo

en

cuenta

tambin

las

concentraciones. Los compuestos adicionados en el medio de cultivo como

fuente de fosforo y nitrgeno fueron indispensables, el nitrgeno para la
formacin y fuente de aminocidos esenciales para la produccin de la
penicilina y el fosforo como interventor en la fermentacin; adems con la
adicin de la fuente de fenilacetato se garantizo que la penicilina obtenida fuera
penicilina G, esto debido a que para obtener un tipo determinado de penicilina
este tipo de compuestos se debe adicionar inicialmente ya sea fenilacetato o
fenoxiacetato.

CONCLUSIONES

El medio cultivo favoreci la fermentacin del Penicillum Chrysogenum

debido a la presencia de glucosa y lactosa, pero adems gracias a la
presencia de los dems nutrientes se ayudo y se garantiz una produccin

significativa de penicilina.
El tamao del micelio de Penicillum Chrysogenum obtenido en el medio de
cultivo favoreci la excrecin del la penicilina en el medio de cultivo
consumido que adems contena los dems metabolitos resultantes del
proceso oxido-fermentativo favorecido por la presencia de oxigeno

representado en el espacio de cabeza.

Se logr diferenciar mediante el antibiograma la accin antibitica de la
penicilina comercial en comparacin con la penicilina obtenida en el
laboratorio, debido a las diferencias de concentraciones y a las condiciones

fsicas de cada una.

Se pudo reconocer que la penicilina no solo ejerce su accin antibitica
sobre agentes o microorganismos que producen virulencia o que no solo
puede ser utilizada para prevenir o solucionar enfermedades de salud, sino
que tambin puede ser aplicada en otro tipo de microorganismos no
patgenos, por lo que podra tener otras aplicaciones industriales.

BIBLIOGRAFA

COOMBS, J. Diccionario de biotecnologa. Editorial Labor, S.A. 1 edicin

1989. Espaa.
CRUEGUER, Anneliese. Manual de Microbiologa Industrial. Editorial Acribia

S.A. Zaragoza Espaa. 3 edicin. 1989.

JAGNOW, Gerhard. Biotecnologa Introduccin con experimentos modelo.

Editorial Acribia S.A. Zaragoza Espaa. 1991.

STIEL, Nstor. Blog. Produccin de penicilina. Esquema y proceso. Capitulo
9. Disponible en: www.academia.edu