Manual de Practicas Quimico Farmaceutico 4 Q.F.B. A y B

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA BENITO JUÁREZ DE OAXACA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO
CLAVE DE LA
CARRERA PLAN DE ESTUDIOS NOMBRE DE LA ASIGNATURA
ASIGNATURA
QUIMICO
MICROBIOLOGIA GENERAL
FARMACEUTIC 2009-2009
TITULAR :Q.B. EDILBERTA GARCIA SANTOS
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
ESTERILIZACION DE MATERIAL Y
1 PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
Para poder estudiar el comportamiento de los microorganismos en el laboratorio, el

microbiólogo deberá contar, entre otras cosas, con material y medios de cultivo estériles. La
esterilización es el proceso mediante el cual se destruyen todas las formas de vida de un objeto,
medio o superficie. Para lograr este fin , se cuenta con una variedad de métodos y su elección
dependerá de la naturaleza del material que se va a esterilizar.
Los métodos de esterilización son: calor, ya sea seco o húmedo, filtración, radiaciones y agentes
químicos.
2 OBJETIVOS
Al finalizar el presente ejercicio los alumnos serán capaces de:

• Comprobar la efectividad del proceso de esterilización,
• Elaborar adecuadamente los medios de cultivo deshidratados y por componentes.
• Envasar los medios de cultivo de manera adecuada en los diferentes recipientes de
acuerdo al uso que se les dará.
3 FUNDAMENTO
Por su pequeño tamaño los Microorganismo no pueden estudiarse como individuos sino, que es
necesario manejarlos como poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos e decir, favorecer su
multiplicación in Vitro.
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
• Matraces Erlenmeyer de 250. 500 y 1,000ml

• Tubo de ensaye de 16 X 150 mm y de 22x 175mm
• Pipetas de 1 y 10 ml
• Cajas de petri  Refrigerador
• Probeta de 100ml  Incubadora
• Vaso de precipitado de 250 ml  Esterilizador
• Espátula , gradilla y agitador de vidrio
• Mechero  Balanzas granatarias
• Termómetros
• Extracto y peptona de carne
• Agar exento de inhibidores
• Agua destilada
• Soluciones de HCL y NaOH 0.5 N
• Mezcla crómico
• Solución amortiguadora
• Potenciómetro, autoclave y balanza granataria

B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
1. Lavar toda la cristalería con jabón (de preferencia usar Dextran) para eliminar materia
orgánica. Y Secarlo a temperatura amiente o en una estufa.
2. Envolver con papel las cajas de petri como indique el profesor, anotar en el papel el numero
de caja , la fecha de preparación y el nombre de operario
3. Poner en la boquilla de las pipetas un filtro de algodón, de tal manera que el aire pase
libremente a través de cada pipeta.
4. Envolver con papel cada pipeta y marcar en la envoltura el volumen de cada una de ellas.
5. Cada equipo preparara el volumen del medio de cultivo indicado (caldo nutritivo, agar
nutritivo, gelatina nutritiva, agar EMB, agar sal y manito, agar Mac Conkey).
6. Colocar la mitad del volumen total de agua destilada en el recipiente en donde se va a
preparar el medio de cultivo
7. Pesar en papel cada uno de los componentes del medio.
8. Adicionar la otra mitad de agua y homogenizar el contenido.
9. Los medios líquidos no se calientan en tanto que los medios fluidos y sólidos que llevan agar,
es necesario calentarlos. tapar el recipiente con una torunda de algodón para evitar la perdida
de agua y concentrar el calor, agitar constantemente para evitar que se queme.
10. Colocar los tubos en una gradilla o en un bote y cubrirlos con papel, marcar sobre el
papel el número y el tamaño de los tubos.
11. Meter el material al autoclave dejarla calentar y esperar a que la presión suba hasta
1.1kg/cm2 o 15 lb. /in2 y una temperatura alrededor de 120 'C, mantener en estas condiciones
durante 20minutos.
12. Al termino del ciclo de esterilización, apagar el autoclave esperar a que la presión del
autoclave baje a CERO y sacar el material.
13. Los medios cuya esterilidad haya sido comprobada, podrán ser utilizados en la siguiente
práctica.
14. Los medios en que se haya registrado crecimiento microbiano (contaminados) deben ser
desechados, para ello es necesario primero esterilizarlos.
C CÁLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS
• con base en su bibliografía y el trabajo realizado, indicar si aplico los métodos de

esterilización adecuados para el material y medios de cultivo que preparo
• indicar si el proceso de esterilización aplicado a los medios de cultivo fue eficiente.

5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
6 ANEXOS
CUESTIONARIO
1. ¿Que es un autoclave? Hacer un esquema ilustrando las partes operativas
2. ¿Que tipo de material se recomienda esterilizar en un autoclave? Citar ejemplos.
3. ¿Que otros métodos de esterilización eficaz se pueden utilizar?
4. ¿Por que algunos medios de cultivo se esterilizar y otros no?
5. ¿Como se clasifican los medios de cultivo? Descríbalos.
7 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
ATLAS R. M.
MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
EDITORIAL CECSA
INGRHAM J. L. Y G. A. INGRHAM
INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y II
EDITORIAL REVERTE S.A.
PRESCOTT- HARLEY-KLEIN
MICROBIOLOGIA
EDITORIAL Mc GRAW HIL
8 MECANISMO DE EVALUACIÓN
• Puntualidad y asistencia 20%%
• Conducta 10%
• Reportes 50%
• Aprovechamiento 20%
9 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL
1. limpiar perfectamente la superficie de su mesa con una solución de germicida, al principio y

al final de cada sesión de laboratorio
2. Lleve puesta una bata para protección de su ropa
3. Mantenga su mesa libre de todo lo que no sea esencial.
4. Evite el contacto de la boca con las manos y las operaciones como: fumar, comer, o
humedecer las etiquetas con la lengua.
De cuenta inmediata al instructor de cualquier accidente tales como: cortaduras, quemaduras o
derramamiento de cultivos
10 DISPOSICIÓN DE DESECHOS QUÍMICOS, FÍSICOS Y BIOLÓGICOS.
Esterilización de material contaminados

CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2000-2009 MICROBIOLOGIA GENERAL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NÚMERO DURACIÓN
TECNICAS BASICAS PARAEL CULTIVO DE
2
MICROORGANISMOS 2 sesiones
SIEMBRA Y ESTUDIO DE BACTERIAS
(SIEMBRA DE PLACAS POR ESTRÍAS)
1 INTRODUCCIÓN
Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo de este en medios

de cultivo y condiciones de laboratorio controladas; la población de microorganismos
desarrollada en un medio se denomina cultivo. Cuando este contiene una sola especie de
microorganismo, se denomina cultivo puro, cuando contiene mas de una especie de
microorganismo se denomina cultivo mixto. un cultivo tipo contiene una especie conocida de
microorganismo y es conservada en el laboratorio para realizar diversos ensayos y estudios. Un
cultivo microbiano que ha estado creciendo por cierto tiempo en el mismo tubo o matraz, debe
ser transferido a un medio de cultivo nuevo, de otra manera el crecimiento y sobre vivencia no
pueden continuar. en esta transferencia se deben considerar dos aspectos básicos referentes a :
no introducir microorganismos indeseables contaminantes y concentración o carga microbiana
de la muestra a sembrar inoculo.
Para impedir la contaminación de los cultivos, es necesario que el alumno tenga plena
conciencia de la ubicuidad de los microorganismos, lo que determina que el airea todas las
superficies estén densamente pobladas por microorganismos, de este modo en la transferencia de
una muestra microbiológica a otro recipiente, se deben tener una serie que eliminen los riesgos
de contaminación. Estos incluyen la desinfección del área de trabajo, el lavado de las manos, la
esterilización de todos los utensilios y medios de cultivo a emplear y realizar la transferencia del
microorganismo en una zona estéril ,la que se obtiene trabajando cerca de la flama del mechero.
Al conjunto de procedimientos realizados para prevenir o evitar la contaminación se le llama
técnica aséptica; en el laboratorio de microbiología, la técnica aséptica, constituye la” regla de
oro" dado que el seguimiento cuidadoso y detallado de la misma evita accidentes tales como:
• la contaminación y perdida del cultivo en estudio y
• la salida y dispersión del microorganismo del cultivo, lo que ocasionaría la

contaminación de utensilios, productos y del personal.
2 OBJETIVOS
Mediante esta práctica el alumno lograra.

• Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones.
• Manipular adecuadamente los cultivos puros.
• Organizar e interpretar los resultados del estudio microscópico y microscópico de
bacterias.
3 FUNDAMENTO
Para efectuar el estudio de los microorganismo se han diseñado diversasos métodos que
permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales. Una de las técnicas mas usadas en el
laboratorio consiste n transferir una muestra microbiológica de un ambiente determinado aun
medio de cultivo lo que nos permite obtener cultivos microbianos.
4 PROCEDIMIENTO
• Asas de platino
• Agua destilada  Refrigerador
• Mechero  Incubadora
• Cajas de petri  Esterilizador
• Medio de cultivo (agar y caldo nutritivo)  Balanzas granatarias
• Cepas microbiológicas
• Matraz Erlenmeyer
• Tubos de ensaye
• Frasco de alcohol
A) Siembra de placas por estrías
1. Utilizando el agar nutritivo suministrado, preparar cinco cajas de petri de acuerdo a las
instrucciones de la practica anterior
2. Dejar enfriar y solidificar.
3. Mediante el asa de inoculación, siembre cuidadosamente por estría un cultivo problema
co0nla técnica de estría abierta.
4. Siembra otra placa en estría continua cerrada.
5. Tomar la siguiente placa y sembrar cuidadosamente por estría en cuadrantes.
6. Sembrar la siguiente placa por estría cruzada tomando una pequeña muestra del cultivo
proporcionado siguiendo las indicaciones.
7. La última placa reutiliza como control.
8. Se incuba a 37 'C por 24 horas.
Se estudia el crecimiento en las placas de agar durante la incubación. se observan las

diferenciasen el tamaño, forma, aspecto, color y textura de las colonias.
6 REFERENCIAS
ATLAS R. M.
EDITORIAL CECSA
MICROBIOLOGIA

• Conducta 10%
• Reportes 50%
1. limpiar perfectamente la superficie de su mesa con una solución de germicida, al

principio y al final de cada sesión de laboratorio
5. De cuenta inmediata al instructor de cualquier accidente tales como: cortaduras,
quemaduras o derramamiento de cultivo

CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUIMICO
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NÚMERO DURACIÓN
2B
TECNICA DE VACIADO EN PLACA 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
Técnica de la placa vertida: El principio de la técnica de la placa vertida es la dilución

(adelgazamiento) de la muestra en tubos con agar fundido y enfriado. Se necesita hacer diluciones
en más de un tubo para obtener colonias bien aisladas.
Para realizar diluciones de diez en diez, se añade 1 ml de la suspensión bacteriana a 9 ml (le medio
estéril o solución salina, igualmente estéril. Se agita vigorosamente para diluir las células y el proceso se
repite cuantas veces sea necesario. A continuación, se puede proceder de dos maneras diferentes.
En el método de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se vierten
en placa. Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras creceran en la superficie. Las
colonias superficiales se extenderán y serán más grandes
2 OBJETIVOS

• Organizar e interpretar los resultados del estudio microscópico y microscópico de
bacterias
• Organizar el material para su fácil manejo e identificación
3 FUNDAMENTO
En la primera parte de esta practica se realizan una serie de actividades que permitan lograr la
transferencia séptica de M.O utilizando técnicas de siembra diversas y en esta segunda parte
incluye métodos específicos que permitan realizar el cultivo.
4 PROCEDIMIENTO
.MATERIAL Y EQUIPO
 Refrigerador
cantidad descripción características
 Incubadora
1 mechero bunsen normal  Esterilizador
5 cajas de Petri estándar  Balanzas granatarias
2 asas bacteriológicas de estándar
10 platino 15 ml
1 tubos de ensaye estándar
1 medio de cultivo( agar diferentes géneros
nutritivo)
cepa bacteriológica
PROCEDIMIENTO
1. fundan tres tubos de agar nutritivo (12 15 ml) y enfríelos hasta 45 'C
2. Transfiera asépticamente un asa de cultivo microbiano mixto al primer tubo de agar fundido.
Mezcle bien el inoculo.
3. Transfiera dos asas de inoculo mezclado con el agar, del primer tubo al segundo de agar
fundido y mezcle bien.
4. Transfiera tres asas del segundo al tercer tubo de agar fundido y , mezcle perfectamente,
estos pasos deben de realizarse con rapidez para evitar la solidificación del agar.
5. Vierta cada uno de los tubos de agar en una placa de petri diferente, girándola para distribuir
el agar perfectamente y déjalas solidificar.
Incube las placas a 30'C hasta el próximo periodo de laboratorio
Se examinan los tamaños relativos de las colonias en placas con muchas y en placas con pocas
colonias, estas tienden a ser muy pequeñas y a extenderse conjuntamente, de forma que el
crecimiento aparece como una mancha continua.
Las colonias bien separadas son más grandes, con forma, aspecto, color y consistencia diferente
y característica.
Obsérvese también que las colonias que por distribución al azar han crecido sobre la superficie
de la placa, se desarrolla grande y probablemente circular. en contraste, las colonias que se han
desarrollado dentro del agar son relativamente pequeños y presientan generalmente una sección
transversal lenticular, que refleja la limitación física del crecimiento en el interior del agar.
6 REFERENCIAS
ATLAS R. M.
EDITORIAL CECSA
MICROBIOLOGIA
• Conducta 10%
• Reportes 50%


CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUIMICO
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NÚMERO DURACIÓN
2C SIEMBRA EN MEDIO LÍQUIDO 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
En la transferencia de M.O. se emplean agujas, asa de inoculación, hisopos, pipetas ó pipetas

pasteur que deberán esterilizarse previamente.
La utilización de estos dispositivos así como de los diferentes medios de cultivo tienen
aplicaciones especificas por ejemplo los medios líquidos se preparan en tubos o matraces que se
cubren con tapones de algodón o tapas especiales .
2 OBJETIVOS

• Identificar y describir correctamente las caracteristicas en un medio liquido
Organizar e interpretar los resultados del estudio microscópico y microscópico de bacterias
3 FUNDAMENTO
Un cultivo liquido puede ser transferido a través de distinto dispositivos, el inoculo se deposita
dentro del caldo o medio liquido presentado un desarrollo microbiano particular que se manifiste
en la superficie o a través de todo el liquido.
4 PROCEDIMIENTO
• Asas de platino
• Agua destilada  Refrigerador
• Medio de cultivo (agar y caldo nutritivo)  Esterilizador
• Cepas microbiológicas  Balanzas granatarias
• Matraz Erlenmeyer
• Tubos de ensaye
• Frasco de alcohol
1. Esterilizar el asa a la flama

2. Con la mano izquierda tomar el tubo que contiene el cultivo por su extremo inferior
3. Introducir el asa y enfriarla apoyándola en la pared interna del tubo.
4. Tomar una asada del cultivo de Escherichia coli y sacar el asa del tubo manteniéndola cerca
de la flama.
5. Flamear el algodón, la boca del tubo y taparlo.
6. Colocar el tubo en la gradilla y tomar el tubo que va a sembrar
7. Destapar, flamear y mantener el tubo en la forma indicada.
8. Introducir el asa y depositar el inoculo dentro del medio liquido
9. Sacar el asa
10. Flamear el algodón, la boca del tubo y taparlo
11. Flamear el asa al rojo para destruir los microorganismos adheridos a ella.
Repetir el procedimiento inoculando los otros tubos con Racillus subtilis, Staphylococcus aureus
y Micrococcus luteus. el 5º tubo se usa como control o testigo
DESARROLLO EN CALDO NUTRITIVO:
1. Cantidad de desarrollo: escaso, moderado o abundante.
2. Distribución del desarrollo en el caldo: uniformemente distribuido (turbidez), desarrollo

confinado (nata o pelusa), peliculado, anillado o desarrollo que se acumula como sedimento.
3. Olor: pútrido, a frutas o aromático, o imperceptible
6 REFERENCIAS
ATLAS R. M.
EDITORIAL CECSA
MICROBIOLOGIA
• Conducta 10%
• Reportes 50%

CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUIMICO
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NÚMERO DURACIÓN
2D SIEMBRA POR PICADURA 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
Los medios semisólido se preparan en tubos se inoculan con aguja de siembra (asa recta) o con
pipeta pasteur En este último caso es necesario calentar e medio y cuando se encuentra en
estado liquido a una temperatura aproximada de 42ºC se agrega el inoculo se homogeniza y se
deja solidificar . A eta técnica se le conoce como puntura o picadura.
2 OBJETIVOS

3 FUNDAMENTO
Estos medio se emplean para estudiar la movilidad de los microorganismos y para favorecer la su
separación con diferentes requerimientos de oxigeno.
4 PROCEDIMIENTO
• mechero bunsen
 Refrigerador
• asas bacteriológicas rectas
 Incubadora
• tubos de ensaye  Esterilizador
• medio de cultivo( agar nutritivo)  Balanzas granatarias
• cepa bacteriológica
Siguiendo las instrucciones anteriores y con el asa recta, introducirla en la parte central, hasta el
fondo o apenas picando, para inocular los mismos microorganismos en 4 tubos que contengan 6
ml de galosa y 4 tubos que contengan gelatina y estén en posición vertical. el 5º tubo de los dos
medios de cultivo se emplea para control.

4. Tomar una asada del cultivo de Escherichia coli y sacar el asa del tubo manteniéndola
cerca de la flama.
8. Introducir el asa y depositar el inoculo dentro del medio liquido
9. Sacar el asa
11. Flamear el asa al rojo para destruir los microorganismos adheridos a ella.
12. Repetir el procedimiento inoculando los otros tubos con Racillus subtilis, Staphylococcus
aureus y Micrococcus luteus.
DESARROLLO EN GELATINA POR PICADURA:
1. Desarrollo (sin licuefacción) a lo largo de la línea de inoculación. El desarrollo puede estar

limitado a la zona de la picadura o puede haberse expandido.
2. Licuefacción de la gelatina: se puede presentar desde arriba suavemente o adquirir aspectos

varidos de embudos al licuar la gelatina.
6 REFERENCIAS
ATLAS R. M.
EDITORIAL CECSA
MICROBIOLOGIA
• Conducta 10%
• Reportes 50%


CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUIMICO
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NÚMERO DURACIÓN
2E SIEMBRA EN MEDIO INCLINADO 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
Esta técnica esta empleada para mantenimiento de cultivos puros y caracterización.
o .El agar inclinado se utiliza para pruebas de mantenimiento de un cultivo por estría para
caracterización por estría recta se utiliza para pruebas bioquímicas, puede sen en pico
de flauta o mas inclinado.
o Agar vertical El agar vertical se siembra por picadura con agujas o asa de punta, se
hace de dos terceras partes del medio hasta el fondo. Se utiliza para pruebas
bioquímicas, motilidad y caracterización.
2 OBJETIVOS
• Compara el desarrollo microbiano de cultivos puros
3 FUNDAMENTO
Un cultivo microbiano en agar inclinado se utiliza fundamentalmente para conservar cultivos
bacterianos puros .
4 PROCEDIMIENTO
• mechero bunsen
• asas bacteriológicas de platino  Refrigerador
• tubos de ensaye  Incubadora
• medio de cultivo( agar nutritivo)  Esterilizador
• cepa bacteriológica  Balanzas granatarias
4. Tomar una asada del cultivo de Escherichia coli y sacar el asa del tubo manteniéndola
cerca de la flama.
8. Introducir el asa y depositar el inoculo dentro del medio con estría recta
9. Sacar el asa y flamearla
11. Repetir el procedimiento inoculando los otros tubos .

DESARROLLO EN AGAR (INCLINADO) POR ESTRÍAS:
1. Cantidad: escaso, moderado o abundante.,medio

2. Margen o borde de desarrollo: uniforme o presentando varias irregularidades.
3. Consistencia de la masa desarrollada: mantecosa o de mantequilla, fácilmente removibles con
una aguja de siembras.
4. Desarrollo del medio :
• filiforme,
• equinulada,
• perlada,
• risoide
• difusa
• arborescente
Cromogénesis o pigmentación: colonias pueden estar coloreadas o sin color
ANEXOS
CUESTIONARIO
1. Por que no crecen las bacterias (especialmente las formas móviles) por todo el medio de agar
que contiene el 97% de agua?
2. Cuando se utilizan cultivos inclinados para estudiar las características del cultivo, es mejor
inocular con aguja que con asa?¿por que?
3. Cual es la utilidad de cada una de las técnicas utilizadas?
4. Que son las bacterias y como se encuentran distribuidas en la naturaleza?
5. Cuales son los criterios empleados para caracterizar bacterias?
6. por que es importante esterilizar el asa a la flama?
7. Por que el crecimiento de algunos microorganismos origina la formación de un velo o
película?
8. Como se les clasifica a las bacterias de acuerdo a las temperatura de desarrollo?
9. Como se clasifican a las bacterias de acuerdo a sus exigencias de Oxigeno?
6 REFERENCIAS
ATLAS R. M.
EDITORIAL CECSA
MICROBIOLOGIA
• Conducta 10%
• Reportes 50%


CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUIMICO
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NÚMERO DURACIÓN
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
3
(PRUEBAS DE PUREZA) 2 sesiones
AISLAMIENTO POR MÉTODOS FÍSICOS
1 INTRODUCCIÓN
La separación de microorganismos presentes en una población mixta puede lograrse de

varias maneras: separando a los microorganismos físicamente mediante diluciones, o por
agotamiento de un pequeño inoculo en un medio de cultivo sólido : utilizando medios de cultivo
selectivos para inhibir a los microorganismos no deseados; aprovechando las características
particulares de algunos microorganismos, como la formación de esporas, el metabolismo
anaerobio y/o facultativo, la capacidad de utilizar sustratos poco comunes, etc.
Con mucha frecuencia, se emplean combinaciones de estas técnicas para facilitar el proceso y
para obtener mejores resultados.
La elección de la técnica y del medio de cultivo depende del origen de la muestra y de las
características del microorganismo que se desea aislar. Por ejemplo, para muestras con
poblaciones muestras con poblaciones muy grandes siempre se recomiendan hacer diluciones, en
tanto que para muestras en donde los microorganismos se han sometido a condiciones adversas,
como desecación, congelación o falta de nutrientes, conviene hacer un enriquecimiento antes de
aislar.
2 OBJETIVOS
Al finalizar esta práctica, los alumnos serán capaces de:

• Explicar el fundamento de las técnicas mas utilizadas para el aislamiento de
microorganismos: agotamiento, diluciones, medios selectivos y aprovechamiento de
características especiales.
• Obtener cultivos puros de macroorganismos a partir de muestras con poblaciones mixtas.
• Comprobar la pureza de los cultivos obtenidos y conservarlos adecuadamente durante el
resto del curso.
3 FUNDAMENTO
Al someter una mezcla de M.O. a un método de aislamiento no garantiza que este se logre . es
necesario verificar cuidadosamente si se ha obtenido un cultivo puro antes de conservarlo como
tal, para ello es necesario realizar pruebas de pureza después del aislamiento
4 PROCEDIMIENTO
• muestra con población mixta

• mechero  Refrigerador
• asa y porta asa  Incubadora
• gradilla  Esterilizador
• tubos de ensayode22x 175 con 18 ml de agar nutritivo,  Balanzas granatarias
fundido y mantenido
• portaobjetos
• cajas de petri
• baño a temperatura 45 º C
Por agotamiento
1- Con el lápiz graso, marcar cuadrantes en la base de las dos cajas que contienen agar nutritivo
2.-Tomar una asada de la muestra y sembrar, en el primer cuadrante de la caja, mediante una
estría muy cerrada, del perímetro hacia el centro.
3.-Manteniendo el asa dentro de la zona aséptica, cerrar la caja y girarla para colocar el siguiente
cuadrante en posición adecuada, sembrar en igual forma.
3.- Con la misma asada repetir la operación para inocular los otros dos cuadrantes y los cuatro de
la otra caja.
4.- Incubar las placas invertidas durante 24 a 48 horas, a la temperatura optima del
microorganismo que se desea aislar.
Por diluciones
1.-Marcar los dos tubos con el medio fundido y mantenido a 45 º C, con los números 1 y 2;
Marcar de igual forma las cajas de petri estériles.
2.- Tomar una asada de la muestra y sembrar en el tubo 1 , transferir al tubo 2 y mezclar el
contenido.
3.-En la zona aséptica, vaciar el contenido de los tubos 1 y 2 en las respectivas cajas de petri
estériles, homogeneizar y dejar solidificar
nota: esterilizar los tubos vacíos antes de lavarlos.
4.- Incubar las placas invertidas durante 24 a 48 horas, a la temperatura optima del
macroorganismo que se quiera aislar
6 REFERENCIAS
ATLAS R. M.
EDITORIAL CECSA
MICROBIOLOGIA

• Conducta 10%
• Reportes 50%


CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUIMICO
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NÚMERO DURACIÓN
3b
AISLAMIENTO EN MEDIOS SELECTIVOS Indefinido
1 INTRODUCCIÓN
Medios selectivos. Son aquellos que favorecen por su diseño el crecimiento específico de un
microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de
microorganismos a partir de una población microbiana mixta. Ejemplo: CO2 como fuente de carbono
es selectivo para autotrofos; adiccionando cristal violeta se inhibe el crecimiento de los Gram (+);
utilizando maltosa como única fuente de carbono sólo crecerán los que usen maltosa. Un medio
selectivo favorece el crecímiento de ciertos microorganismos, mientras suprime el crecimiento de
otros. Los medios selectivos se utilizan para aislar especies particulares a partir de una mezcla
compleja. Por ejemplo, se utiliza un medio selectivo, para aislar Salmonella typhi, agente causal de
la fiebre tifoidea, a partir de heces donde existen cientos de microorganismos diferentes. Algunos
medios son selectivos porque contienen un producto químico, como la azida sódíca, el telurito
potásico o el cristal violeta, que inhiben el desarrollo de algunos microorganismos pero no de otros.
El agar SPS (denominado de esta forma porque contiene sulfadiacina y sulfato de polimixina) se
utiliza para identificar Clostridium botulinum, agente causal de una grave intoxicación alimentaria. El
medio SPS permite el crecimiento de esta bacteria, pero inhibe el de otras especies de Clostridium.
otros medios de cultivo selectivos utilizan un valor extremo de pH o una fuente de carbono poco
comun.
2 OBJETIVOS
Al finalizar esta práctica, los alumnos serán capaces de:

• Explicar el fundamento de las técnicas mas utilizadas para el aislamiento de
microorganismos: agotamiento, diluciones, medios selectivos y aprovechamiento de
características especiales.
• Obtener cultivos puros de macroorganismos a partir de muestras con poblaciones mixtas.
• Comprobar la pureza de los cultivos obtenidos y conservarlos adecuadamente durante el
resto del curso.
3 FUNDAMENTO
Para muchos microorganismos de importancia medica existen medios de cultivo

selectivos comerciales, en tanto que para aislar microorganismos quimiolitotrofos se utilizan
medios cuya única fuente de energía es la asimilable para la especie de interés
4 PROCEDIMIENTO
• muestra con población mixta
• mechero  Refrigerador
• asa y porta asa  Incubadora
• gradilla  Esterilizador
• tubos de ensayode22x 175 con 18 ml de agar nutritivo,  Balanzas granatarias
fundido y mantenido
• portaobjetos
• cajas de petri
• baño a temperatura 45 º
METODO
1. sembrar una asada de muestra en el medio selectivo

2. hacer una estría muy cerrada, en una parte muy pequeña de la caja, para descargar el asa.
3. esterilizar el asa y continuar las estrías pero tomando muestra únicamente de la zona de
descarga.
incubar las placas invertidas, a la temperatura optima del microorganismo
CÁLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS
• Con base a los resultados obtenido indicar cual de los métodos fiscos resulto mas
eficiente para lograr el aislamiento de microorganismos
• .Describir las características de las bacterias que aisló en los diferentes medio selectivos
y con base en estas y en las del medio empleado indicar que tipo de bacterias aisló.
• Reportar en una tabla las características coloniales observadas en cada medio (anexos)
6 ANEXOS
Consistencia
Viscosa, Mantecosa, Friable (se disgrega al tocarla)
Densidad (con luz a través de la colonia)

Opaca, Transparente, Traslúcida
Forma
Puntiforme Circular Filamentosa Irregular Rizoide Lanceolada
Elevación
Chata Elevada Convexa Cúpula Umbonada Umbilicada
Margen
Entero Ondulado Lobado Ondeado Filamentoso
7 REFERENCIAS
ATLAS R. M.
EDITORIAL CECSA
MICROBIOLOGIA

• Conducta 10%
• Reportes 50%

CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUIMICO
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NÚMERO DURACIÓN
3D
PREPARACIONES FIJAS Y TEÑIDAS 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
TINCIONES:
Son procedimientos par teñir las bacterias; permitiendo observar coloreadas las bacterias que
normalmente no serían visibles al microscopio óptico, por ser transparentes.
Las tinciones se efectúan generalmente sobre bacterias desecadas y calentadas para coagular
sus proteínas (fijación).
Es la más importante y la que más se emplea para observar a las bacterias; utiliza un colorante
(violeta), un mordente ó fijador de colorante (yodo), un decolorante (alcohol) y otro colorante para
teñir de diferente color a las bacterias que se decoloran en la primer fase de la tinción con el
alcohol (normalmente un colorante rojo).
TINCIÓN SIMPLE: Consiste en aplicar UN solo colorante a la preparación para observar la

agrupación y la morfología de los microorganismos. Se usan colorantes básicos como el azul de
metileno, cristal violeta y safranina.
2 OBJETIVOS
 Que el alumno aprenda a prepara especimenes para observación a microscopio.

 Aprenderá el manejo adecuado del microscopio,
 Diferenciará bacterias Gram + y Gram- así, como la morfología celular bacteriana.
3 FUNDAMENTO
Debe aclararse que el procedimiento de la tinción de gram es una tinción positiva. La

designación de gram positivo y gram negativo se refiere a la capacidad de un organismo
especifico para resistir la decoloración y no al tipo de procedimiento empleado.
Gram – se tiñen de rojo

Gram + se tiñen de azul-violeta
4 PROCEDIMIENTO
• mechero
 Refrigerador
• asa y portasa
 Incubadora
• portaobjetos  Esterilizador
• cultivo de microorganismos.  Balanzas granatarias
• Equipo de Tincian de Gram
METODO
1. Colocar las gradillas, tubos cajas portaobjetos y todo lo necesario, sin movimientos bruscos a
fin de evitar accidentes contaminación de los cultivos.
2. Lavar los portaobjetos meticulosamente con agua y jabón, enjuagar varias veces con alcohol al
95%, ponerlos a secar y flamearlos 2 o 3 veces.
3. En los portaobjetos limpios y desengrasados colocar la muestra del microorganismo a estudiar,
para ello.
4. Esterilizar el asa en la flama del mechero, tomar el tubo de la muestra por su extremo inferior
con la mano izquierda para destaparlo, sujetar la torunda de algodón entre el meñique y la palma
de la mano derecha y girar el tubo hasta que salga la torunda, flamear la boca del tubo
manteniéndola cerca de la flama del mechero.
5. Introducir el asa en el tubo, apoyarla en la pared del tubo hasta que se enfrié proceder a tomar
una asada del cultivo y sacarla del tubo
6. Flamear la boca del tubo, taparlo y colocarlo en la gradilla.
7. Aplicar el asa al portaobjetos marcado y extenderla muestra en la zona centra, si el cultivo esta
en medio sólido, colocar antes una gota de agua destilada en el centro del portaobjetos y
suspender en ella la asada del cultivo.
8. Esterilizar el asa.
9. Dejar secar al aire el frote y fijarlo a la flama, pasándolo 4 o 5 veces a ella. el frote esta listo
para teñir.
METODO DE TINCION DE GRAM
1. hacer un frote de cada uno de los microorganismos en estudio marcando con su nombre.
2. Cubrir la preparación fija con cristal violeta de Gram. y dejarlo actuar durante un minuto,
moviendo suavemente el portaobjetos para favorecer el contacto del colorante con las células.
3. Cubrir la preparación con lugol de Gram. y dejarlo actuar durante un minuto escurrir el exceso
de reactivo y lavar.
4. Decolorar agregando mezcla de alcohol- acetona a la preparación, mientras se sostienen
ligeramente inclinada para que el colorante resbale lentamente por ellos.
5. Cubrir la preparación con safranina y dejarlo actuar durante un minuto escurrir el exceso de
reactivo y lavar.
1. Observar con objetivo de 1,000 X y describir los resultados.

1. Con base en los resultados obtenidos, indicar cual de los métodos físicos resulto mas eficiente
para lograr el aislamiento de macroorganismos
2. Describir las características de las bacterias que aisló en los diferentes medios selectivos e
indicar que tipo de bacterias aisló.
3. Cual de los métodos empleados para el aislamiento resulta ser más eficiente.
Identificar de acuerdo al esquema siguiente la morfología celular
6 ANEXOS
CUESTIONARIO.
1. ¿Cuáles son las técnicas de aislamiento más comunes?
2. Citar ejemplos de medios de cultivos selectivos, fundamentar la aplicación de cada uno de

ellos
3. ¿En que consisten las pruebas de pureza de un cultivo?
4. ¿Cuáles son los cuidados preliminares para el aislamiento de un microorganismo?
5. ¿Qué diferencia existe entre un medio de cultivo selectivo y un medio de cultivo diferencial
7 REFERENCIAS
ATLAS R. M.
EDITORIAL CECSA
MICROBIOLOGIA
• Conducta 10%
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CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUIMICO
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NÚMERO DURACIÓN
SIEMBRA Y ESTUDIO DE HONGOS
4 MICROSCOPICOS 2 seiones
(Microcultivo)
1 INTRODUCCIÓN
. Los hongos son células eucariota, carecen de clorofila y tienen una pared celular rígida; pueden
ser unicelulares o multicelulares, microscópicos o microscópicos. Se reproducen sexual o
asexualmente. Presentando cuerpos fructíferos distintos, asi como estructuras fácilmente
observables al microscopio como hifas y esporas.
Los hongos tienen hábitat muy diversos, algunos son acuáticos viviendo principalmente
en agua dulce, pero también se conocen algunos cuantos marinos, la mayoría son terrestres y
habitan en el suelo, sobre materia orgánica muerta (saprofito), otros muchos son parásitos,
algunos son parásitos de animales incluyendo el hombre.
Al cuerpo de los hongos se le denomina talo y este puede ser unicelular, de forma ameboidea u
ovoide; ejemplo: ejemplo las levaduras; o bien puede ser pluricelular con aspecto filamentoso,
esponjoso o carnoso; a los filamentos se les conoce como mohos.
Algunos hongos presentan dimorfismo, es decir bajo ciertas condiciones ambiéntales se

desarrollan como levaduras, en tanto que cuando se cambia la temperatura, o la concentración o
tipo de algún nutriente, se desarrollan en forma filamentosa.
2 OBJETIVOS
Mediante esta práctica el alumno lograra
:
⇒ Manejar las técnicas básicas para el cultivo e identificación de hongos
Aplicar las técnicas de preparación y tinción adecuadas para el estudio microscópico, así como
reconocer y describir las características morfológicas y estructurales de hongo
3 FUNDAMENTO
 Los microcultivos permiten hacer el seguimiento del desarrollo de hongos en estudio.
Los cultivos en placa se obtienen sembrando por picadura el centro de las cajas que contienen
diferentes medios.
4 PROCEDIMIENTO
• 2 cajas de pedir conteniendo: un disco de papel filtro,

 Refrigerador
una varilla de vidrio en forma de V, debe quedar
 Incubadora
ajustada a los bordes de la caja y dos  Esterilizador
portaobjetos(esterilizar)  Balanzas granatarias
• Agua glicerinada
• 1 caja de petri con agar Sabouraud.
• Asa mitológica
• Bisturí estéril y Pinzas
• 1 frasco de alcohol
• Cubreobjetos
• Solución de formol al 10%
• Azul de algodón.
• 3 cajas de koplin
• Xilol, alcohol, acetona
• Microscopio
Cultivos de 7 días de los siguientes hongos: Aspegillus Níger,m

Penicillum sp., Rhizopus sp., Alternaria sp., y Geotrichum
METODO
1. En una zona aséptica, con el bisturí estéril costar el Agar Sabouraud en cuadros de
aproximadamente de 1 cm.
2. Colocar en el centro de uno de los portaobjetos contenidos en la caja de Petri, un cuadro de
Agar Sabouraud.
3. Con el asa sicológica(o con el asa bacteriológica recta), inocular cada uno de los lados del
cuadro.
4. Con ayuda de unas pinzas flameadas, colocar sobre esta preparación el segundo portaobjetos
estéril.
5. Para mantener la humedad, agregare aproximadamente 10 ml de agua glicerinada, teniendo
cuidado de saturar el papel, evitando la inundación para que el liquido no inunde el cultivo.
6. Incubar durante 7 días.
7. En condiciones de asepsia, sacar los portaobjetos de la caja.
8. Observar el desarrollo de l hongo que se presenta alrededor de los cuadros de agar

RESULTADOS
1. Elaborar un cuadro de registro de resultados, incluir la información de si guía de

observación, comparar las características de los hongos estudiados con su guía de observación.
2. Hacer esquemas de cada uno de los hongos en estudio, consultar su guía y localizar en sus
preparaciones estructuras características de cada uno, señalar las estructuras identificadas
3. Comparar los resultados de las observaciones, efectuadas en los micro cultivos y en las
preparaciones en fresco e indicar en donde logro una mejor observación
6 REFERENCIAS
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MICROBIOLOGIA
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CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUIMICO
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NÚMERO DURACIÓN
4B SIEMBRA DE HONGOS EN PLACAS 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
En el aislamiento y cultivo de la mayoría d los hongos (patógenos o saprofitos) se aprovecha

ciertas característica especiales, tales como; su tolerancia a pH ácido, su preferencia `por medios
de cultivo con gran cantidad de azúcar fermentable.
2 OBJETIVOS
Mediante esta práctica el alumno lograra
:
• Manejar las técnicas básicas para el cultivo e identificación de hongos
Aplicar las técnicas de preparación y tinción adecuadas para el estudio microscópico, así como
reconocer y describir las características morfológicas y estructurales de hongo
3 FUNDAMENTO
Para estudiar a los hongos se dispone de dos tipos especiales de cultivos; el cultivo en
portaobjetos o micro cultivo y el cultivo en las cajas de petri.
4 PROCEDIMIENTO
MATERIAL
• 2 cajas de pedir conteniendo: un disco de papel filtro,
una varilla de vidrio en forma de V, debe quedar  Refrigerador
ajustada a los bordes de la caja y dos  Incubadora
portaobjetos(esterilizar)  Esterilizador
• Agua glicerinada  Balanzas granatarias
• 1 caja de petri con agar Sabouraud.
• Asa mitológica
• Bisturí estéril
• Pinzas
• 1 frasco de alcohol
• Cubreobjetos
• Solución de formol al 10%
• Azul de algodón.
• 3 cajas de koplin
• Xilol, alcohol, acetona
• Microscopio
• Cultivos de 7 días de los siguientes hongos:

Saccharomyces cereviciae, Rhodutorula sp. Aspegillus
Níger,m Penicillum sp., Rhizopus sp., Alternaria sp., y
Geotrichum
METODO
1. con el asa mitológica y en condiciones de asepsia, tomar una muestra del cultivo de
Aspergillus Níger, procurando tomar únicamente esporas, transferirlas a un tubo con agua
estéril y agitar paras homogeneizar la muestra.
2. Con el asa en ángulo recto, tomar una muestra de la suspensión de esporas e inocular por
picadura en el centro de las placas que contienen Sabouraudy y Czapek
3. Invertir las cajas e incubar a 28 ºC durante 5 – 7 días.
4. Observar las características de las colonias de los diferentes hongos desarrollados, consultar
la guía de observación y describir sus resultados.
5. A partir de los cultivos de levaduras, preparar Frotes fijos y teñirlos con azul de metileno.
6. En un portaobjetos, colocar una gota de lactofenol azul de algodón.
7. Colocar en el ultimo tercio del asa mitológica un pedacito de diurex de 1.5 cm. de largo.
Enrollado ligeramente.
8. En condiciones de asepsia destapar la caja que contiene el cultivo de Aspergillus Níger,
introducir el asa con el diurex y presionar ligeramente sobre una fracción de la colonia.
9. Depositar la muestra en el portaobjetos con el colorante, extender el diurex y colocar encima
de un cubreobjetos.
10. Observar en un microscopio con los objetivos de 10X y 40X.
11. Repetir el procedimiento de tinción húmeda con los hongos y hacer las observaciones
correspondiente
RESULTADOS

6. Comparar los resultados de las observaciones, efectuadas en los micro cultivos y en las
6 REFERENCIAS
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CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2009-2009 MICROBIOLOGIA GENERALL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NÚMERO DURACIÓN
OBTENCION DE COLONIAS Y OBSERVACION
5 MICROSCOPICA DE LEVADURAS 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
Las levaduras han servido al hombre durante muchos siglos para fermentar jugos de frutas, pan
o elaborar muchos y nutritivos alimentos su importancia es aun mayor en la actualidad, porque
se les utiliza en muchos proceso fermentadito y por sintetizar algunas vitaminas grasa y propinas
partir de azucares simples y amoniaco
n
2 OBJETIVOS
.
 Diferenciar morfológicamente ala levaduras
 Cultivar adecuadamente algunas levaduras de importancia industrial y clínica
3 FUNDAMENTO
En las levaduras el talo unicelular desempeña las funciones vegetativas y reproductivas estas se
reproducen asexualmente por bipartición o por gemación y en la reproducción sexual 2 células
levaduriformes se unen y como resultado formas ascosporas. En algunas levaduras la gema o
brote formado queda como adherido a la célula madre
4 PROCEDIMIENTO
 Refrigerador
MATERIAL  Incubadora
 Esterilizador
 Balanzas granatarias
• 9 Cajas de Petri con Agar Sabouraud y 9 de Agar
Czapek
• Mechero, Asa mitológica, Gradilla
• 9 Tubos de 16 X 150 con 5ml de agua esterilizada
• Cultivos de los siguientes hongos, Saccharomyces
cereviciae,
• Microscopio
• Portaobjetos y cubreobjetos
• Lacto fenol azul de algodón

METODO
1. En condiciones de asepsia tomar una muestra de cultivo de Saccharomyces y suspenderla en

un tubo que contenga agua estéril y agitar.
2. Con la suspensión de Levaduras obtenida sembrar por estría una de las cajas que contiene
Sabouraudy una caja que contiene medio Czapek.
GUIA PARA EL ESTUDIO DE CULTIVO DE HONGOS Y LEVADURAS
A) Características microscópicas
- Tipo de colonias: Levaduriformes, Filamentosas.

- Observar en las colonias fúngicas:
Levaduriformes Filamentosas
Características superficiales Algodonoso laxo,

Algodonoso compacto
Aspecto: liso, rugoso, cerebrifonne. Lanoso, aterciopelado
Consistencia: cremosa seca, húmeda
Desarrollo: escaso, regular, abundante radial, concéntrico, difuso.
Color: verde, azul, naranja, etc.
Segmento: circunscrito a la colonia o difuso en el medio.
Características del micelio profundo (observar el reverso de la caja)
Desarrollo: 1.-homogéneo
2.-por zonas (anillos concéntricos de diferente color y estructura)
3.-sectorial (colonia gigante con un sector circular diferente al . .
resto de la colonia)
Color: pardo, amarillo.
Modificación en el medio: color, turbiedad.
B) Característica microscópicas
Tipo de hifas: cenocitica, septad uninucleada septada multinucleada.

Tipo de cuerpo fructífero: oidioforo, conidioforo, esporangionoforo, zoosporangio, basidia
Tipo de esporas: oidias, conidias, esporangiosporas, zoosporas, ascosporas, basidiosporas.
C) Características de las esporas:
Color: Hialinas, brillantes, amarillo verdes azuladas oscuras.

Morfología: esférica, oval, cilíndrica, reniforme, fusiforme, acicular, helicoidal.
Aspecto externo: lisas, punteadas, verrugosas, equinuladas, acirculadas, rugosas, estriadas.
Tamaño: longitud y diámetro.
RESULTADOS

3. Comparar los resultados de las observaciones, efectuadas en los microcultivos y en las

6 ANEXOS
CUESTIONARIO
1. ¿Cómo se clasifican los medios de cultivos para hongos?

2. Hacer una comparación de las condiciones de desarrollo entre bacterias
3. ¿Cuáles son las estructuras específicas de los hongos?
4. ¿Cuáles son los colorantes utilizados para la identificación de las estructuras . de
hongos
5. ¿Cuál es la importancia del cultivo de hongos?
6. Estructuralmente como esta constituida una levadura
7. Investigar algunos géneros de hongos patógenos
8. ¿Cuáles son los criterios para la clasificación de las levaduras?
7 REFERENCIAS
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MICROBIOLOGIA
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CLAVE DE LA
ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2009 – 2009 MICROBIOLOGIA GENERAL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NÚMERO DURACIÓN
6
EFECTO DE LAS RADIACIONES 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
Muchas formas de radiación electromagnética son muy perjudiciales para los microorganismos
en el caso de la radiación ionizante puede provocar que los átomos pierdan electrones.
Niveles bajos de radiación ionizante producirán mutaciones que pueden causar directamente la
muerte de los microorganismos mientras que niveles superiores son letales.
La radiación UV puede destruir la mayor parte a los microorganismos debido a su longitud de
onda corta aunque llega muy poca radiación de UV por debajo de los 2090-300 nm a la
superficie terrestre, la radiación cercana del UV entre 325-400 nm también puede dañar a los
macroorganismos. Aunque la luz visible es beneficiosa ya que es la fuente de energía de la
fotosíntesis a una intensidad suficiente puede dañar o destruir células microbianas. Todos los
microorganismos celulares poseen pigmentos como la clorofila, bacterioclorofila, citocromos y
flavinas que pueden absorber energía lumínica, pueden excitarse o activarse y actúa como
fotosensibilizadora.
2 OBJETIVOS
• Determinar el efecto de radiaciones en bacterias
3 FUNDAMENTO
La luz UV cubre un espectro de 100-4000 A las longitudes menores a 3100 A tienen un alto poder
mutagénico y germicida, se ha determinado que la de 2650 A es particularmente absorbida por el
ADN y algunos ácidos aromáticos como el triptofano, tisosina y fenilalanina. En donde la
activación de las moléculas origina reacciones químicas.
4 PROCEDIMIENTO
MATERIAL
• Mechero
• Lápiz graso o marcador  Refrigerador
• Círculos de cartón negro cuyo diámetro sea ligeramente  Incubadora
mayor que el de una caja de petri y a la que se le debe  Esterilizador
cortar la cuarta parte de su superficie  Balanzas granatarias
• Papel aluminio
• Una pipeta de 1.0 ml estéril
• Una varilla doblada en ángulo recto y un vaso de
precipitado con 100 ml de alcohol
• 2 cajas de petri con gelosa simple
• Lámpara con longitud de onda de 2,650 Aº ( luz UV)
• Cultivos
METODO
1. Divida la parte externa de las dos cajas de petri en cuatro partes iguales. Marque los
cuadrantes con T (testigo), 10, 30 y 60 segundos.
2. Con una pipeta estéril y en condiciones de asepsia, inocular las dos cajas, colocando en el
centro de cada una 0.1 ml de cultivo del microorganismo.
3. Con una varilla de vidrio, previamente flameada, distribuir el cultivo en forma homogénea en
las superficies de las cajas (10.4.a)
4. Dejar que el cultivo se absorba en el agar y cuando se observe la superficie seca proceder a :
5. Colocar las cajas bajo las lámparas de luz ultravioleta, a 15 cm. de la fuente de luz (nota:
proteger los ojos con los lentes durante la irradiación).
6. Cambiar las tapas de la caja de petri por los círculos de cartulina que deberán cubrir las ¾
partes de la caja, permitiendo incidir la luz en la parte restante, durante 10 segundos.
7. Girar el circulo 45º, permitiendo que el segundo cuadrante quede expuesto a la luz durante 30
segundos
8. Repita el giro del circulo 45º, e irradiar el tercer cuadrante durante 60 segundos. El cuadrante
T no debe ser expuesta a la luz UV
9. Tapar las cajas con sus cajas correspondientes, envolver inmediatamente en papel aluminio
una de las cajas.
10. Exponer la segunda caja irradiada a la luz solar durante 40 minuto después envolver también
en papel aluminio.
11. Incube las cajas en posición invertida a la temperatura de 28 o 37 º C de acuerdo al tipo de
microorganismos en estudio.
12. Registre sus resultados en la tabla correspondiente.
• Comparar el desarrollo obtenido en el cuadrante sin irradiar y en aquellos irradidos por

diferente periodos .
• Indique de forma cualitativa el número de colonias presentes en cada cuadrante
• Comparar las características culturales e indicar las variaciones que observo
• Con base a los resultado indicar si logro comprobar el efecto de foto reactivación y como
se manifestó este proceso,
• Indicar en que casos se observo un efecto letal y en cuales un efecto mutagenico
6 ANEXOS
CUESTIONARIO
1. ¿Qué es la radiación ionizante y cuales son sus formas?

2. Que efectos causan las radiaciones ionizantes en las células?
3. Que se entiende por foto reacción
4. Enumere los tipos de radiación electromagnética en orden decreciente o de aumento de
longitud de onda.
5. ¿Cómo se protegen los microorganismos frente al daño ocasionados por la UV y visible?
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ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2009 – 2009 MICROBIOLOGIA GENERAL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NÚMERO DURACIÓN
EFECTO DE FACTORES QUIMICOS
7
EFECTO DE LOS ANTIBIÓTICOS 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
GENERALIDADES
El control de los microorganismos es crucial para la prevención y el tratamientote las

enfermedades. Los microorganismos crecen también en la superficie y el interior de otros
microorganismos y la colonia microbiana puede causar enfermedades.
La mayoría de los agentes son antibióticos, productos microbianos o sus derivados que pueden
matar a los microorganismos sensibles i inhibir su crecimiento.
Características generales de los fármacos antimicrobianos.
El éxito de un antimicrobiano depende de su toxicidad selectiva, debe matar al

microorganismo patógeno causando el menor daño posible en el huésped el grado de toxicidad
selectiva se puede expresar en términos de:
1.- dosis terapéutica o nivel de fármaco necesario para el tratamiento clínico de una
infección determinada.
2.- la dosis toxica o nivel de fármaco al que el agente se vuelve excesivamente toxico
para el huésped.
Los fármacos pueden clasificarse basándose en el grupo general de microorganismos contra el
que actúan.
1.- antibacterianos
2.- antimicóticos
3.- antiprotozoarios
4.- antivirales
Algunos agentes pueden emplearse contra mas de un gripo, ejemplo: las sulfonamidas,
antimicrobianos, bacteriostáticos y bactericidas.
La concentración mínima inhibidora (CMI) proporciona cierta concentración mas baja de un
fármaco que impide el crecimiento de un determinado patógeno.
Propiedades de un antibiótico útil
Para que un antibiótico sea útil como agente quimiotarapeutico debe reunir las siguientes
cualidades:
1. Ser capaz de destruir inhibir muchas especies de microorganismos patógenos.
2. debe impedir la aparición de formas resistentes del parásito.
3. No debe producir efectos colaterales indeseables en el huésped, como reacciones de
insensibilidad o alergia.
4. no debe eliminar la flora normal del huésped.
Tipos de antibióticos
Los antibióticos se pueden dividir en bactericidas, (capaces de eliminar bacterias) o

bacteriostáticos (bloquean el crecimiento y reproducción celular)
Los antibióticos que lesionan la membrana celular producen una liberación de los metabolitos
celulares al exterior y por tanto su muerte. Tales compuestos como las penicilinas o
cefalosporinas, son por tanto bactericidas.
Inhibición por antibióticos
Los antibióticos inhiben o matan a los microorganismos por diversas vías:
1. inhiben la formación de la pared celular

2. dañan la membrana celular
3. interfieren en la síntesis de las proteínas
4. inhiben el metabolismo del ácido nucleótido
Pruebas de susceptibilidad
La susceptibilidad de un microorganismo a un antibiótico y otros agentes quimioterapeuticos se

determina por la técnica de dilución en tubo o por la de discos en placa.
Por la técnica de dilución en tubo se puede determinar la cantidad mas pequeña del agente
quimioterapeutico requerida para inhibir el desarrollo del organismo in Vitro.
El método de disco en placa se agar es la que se usa comúnmente para determinar la
susceptibilidad de los microorganismos a los agentes quimioterapéuticos.
2 OBJETIVOS
• Determinar la sensibilidad de algunas bacterias a sustancias químicas.

• Probar la asistencia y sensibilidad de algunas bacterias diferentes antibióticos
• Comparar R y S de bacterias Gram + y Gram – a sustancias químicas y antibióticos
3 FUNDAMENTO
Gran número de compuestos químicos en concentraciones apropiadas son capaces de matar o

inhibir los M.O. Estos productos tienen muchas aplicaciones algunos son usados para sencillos
lavados bucales y otros para descontaminar algún vehiculo debido alas grande variaciones en el
ambiente y a la magnitud y diversidad de organismos no es posible prescribir un solo agente
para eliminar o reducir la flora microbiana. Por ello es importante conocer las sustancias
químicas con que contamos, para cada propósito, sus características y eficacia como agentes
antimicrobianos
4 PROCEDIMIENTO
MATERIAL
 Refrigerador
• Gradilla  Esterilizador
• Pinzas de disección de punta roma  Balanzas granatarias
• Marcador
• Varilla acodada
• 1 pipetas de 1.0 ml estéril
• 6 cajas petri con discos de papel filtro estériles
• 6 tubos de 22 x 175 con 20 ml de gelosa
• 6 cajas petri con discos de papel filtro estériles.
• Antibióticos a probar (erytromicina, ampicilina 100mcg

Gram, neomicina 30 mcg, Clornfenicol 30 mg Gram,
amoxicilina 25 mcg, Ciprofloxacin 5 mcg,
Carbenicilina 100 mcg Gram, nitrofurantoina 300
mgGram.
METODO
1. Utilizar las placas anteriormente realizadas.

2. Esterilizar con alcohol y a la flama del mechero las pinzas.
3. Enfriar las pinzas y en condiciones de asepsia tomar un disco del papel filtro e impregnarlo
con el agente químico a probar, eliminar el exceso de solución por escurrimiento y depositar el
disco impregnado en el centro de uno de los segmentos de las cajas inoculadas previamente.
4. Con las pinzas, presionar ligeramente el disco sobre la superficie del agar.
5. Repetir los incisos 1, 2 y 3 con cada uno de los agentes químicos a evaluar.
6. Invertir las cajas e incubar a 28 o 37 º C durante 24 o 48 horas
7. Registrar los resultados en la tabla correspondiente.
6 REFERENCIAS
ATLAS R. M.
EDITORIAL CECSA
MICROBIOLOGIA
BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA
BROCK, SMITH
MICROBIOLOGIA
EDITORIAL P. H. HISPANOAMERICANA
DULVECCO DAVIS
TRATADO DE MICROBIOLOGIA
EDITORIAL SALVAT
KONEMAN ALLEN DOWELL

DIAGNOSTICO MICROBIOLOGICO
TEXTO ATLAS COLOR
EDITORIAL PANAMERICANA
MAC FADDIN, J. F.
PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS DE IMPORTANCIA CLÍNICA
EDICIÓN MEDICA PANAMERICANA, S. A. DE C. V. MEXICO
MADIGAN, M. T., J. M. MARTINKO Y J. PARKER

BIOLOGIA DE LOS MICROORGANISMOS
8 EDICIÓN PRENTICE HALL IBERIA ESPAÑA
PELCZAR Y COL.
MICROBIOLOGIA GENERAL
EDITORIAL Mc. GRAW HILL
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Manual de Practicas Quimico Farmaceutico 4 Q.F.B. A y B

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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA BENITO JUÁREZ DE OAXACA

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

Para poder estudiar el comportamiento de los microorganismos en el laboratorio, el

Al finalizar el presente ejercicio los alumnos serán capaces de:

• Matraces Erlenmeyer de 250. 500 y 1,000ml

• Potenciómetro, autoclave y balanza granataria

C CÁLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

• con base en su bibliografía y el trabajo realizado, indicar si aplico los métodos de

• indicar si el proceso de esterilización aplicado a los medios de cultivo fue eficiente.

2. ¿Que tipo de material se recomienda esterilizar en un autoclave? Citar ejemplos.

3. ¿Que otros métodos de esterilización eficaz se pueden utilizar?

4. ¿Por que algunos medios de cultivo se esterilizar y otros no?

5. ¿Como se clasifican los medios de cultivo? Descríbalos.

9 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

1. limpiar perfectamente la superficie de su mesa con una solución de germicida, al principio y

10 DISPOSICIÓN DE DESECHOS QUÍMICOS, FÍSICOS Y BIOLÓGICOS.

Esterilización de material contaminados

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

Cultivar un microorganismo significa promover intencionalmente el desarrollo de este en medios

• la contaminación y perdida del cultivo en estudio y

• la salida y dispersión del microorganismo del cultivo, lo que ocasionaría la

Mediante esta práctica el alumno lograra.

C CÁLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

Se estudia el crecimiento en las placas de agar durante la incubación. se observan las

• Puntualidad y asistencia 20%%

8 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

1. limpiar perfectamente la superficie de su mesa con una solución de germicida, al

9 DISPOSICIÓN DE DESECHOS QUÍMICOS, FÍSICOS Y BIOLÓGICOS.

Esterilización de material contaminados

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

Técnica de la placa vertida: El principio de la técnica de la placa vertida es la dilución

Mediante esta práctica el alumno lograra.

C CÁLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

8 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

1. limpiar perfectamente la superficie de su mesa con una solución de germicida, al

9 DISPOSICIÓN DE DESECHOS QUÍMICOS, FÍSICOS Y BIOLÓGICOS.

Esterilización de material contaminados

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

En la transferencia de M.O. se emplean agujas, asa de inoculación, hisopos, pipetas ó pipetas

Mediante esta práctica el alumno lograra.

1. Esterilizar el asa a la flama

C CÁLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

DESARROLLO EN CALDO NUTRITIVO:

1. Cantidad de desarrollo: escaso, moderado o abundante.

2. Distribución del desarrollo en el caldo: uniformemente distribuido (turbidez), desarrollo

3. Olor: pútrido, a frutas o aromático, o imperceptible

9 DISPOSICIÓN DE DESECHOS QUÍMICOS, FÍSICOS Y BIOLÓGICOS.

Esterilización de material contaminados

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

MANUAL DE PRÁCTICAS DE LABORATORIO

Mediante esta práctica el alumno lograra.

1. Esterilizar el asa a la flama

C CÁLCULOS Y REPORTE DE RESULTADOS

DESARROLLO EN GELATINA POR PICADURA:

1. Desarrollo (sin licuefacción) a lo largo de la línea de inoculación. El desarrollo puede estar

2. Licuefacción de la gelatina: se puede presentar desde arriba suavemente o adquirir aspectos

8 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL

1. limpiar perfectamente la superficie de su mesa con una solución de germicida, al

9 DISPOSICIÓN DE DESECHOS QUÍMICOS, FÍSICOS Y BIOLÓGICOS.