NORMA TECNICA COLOMBIA

NTC- 4967

GRASAS
Y
ACEITES
ANIMALES
Y
VEHETALES.
CROMATOGRAFIA DE GASES DE ESTERES METILICOS DE ACIDOS
GRASOS.
PARTE 2: PREPARACION DE ESTERES METLICOS DE ACIDOS GRASOS

1. OBJETO
Esta parte de la norma especfica los mtodos de preparacin de esteres
metlicos de cidos grasos. Incluye mtodos para preparar esteres metlicos
de cidos grasos. A partir de grasas animales y vegetales, cidos grasos y
jabones. Con el fin de cumplir todos los requisitos, se especifican cuatro
mtodos de metilacin, de la siguiente manera:
a) Un procedimiento de transmetilacin rpida, en condiciones alcalinas;
b) Un procedimiento de transmetilacin general, en condiciones alcalinas
y acidas consecutivas;
c) Un procedimiento de transmetilacin BF 3(trifluoruro de boro), y
d) Un procedimiento alternativo utilizando transmetilacin de glicridos
catalizado con cido.
Los esteres metlicos producidos de este modo se usan en varios
procedimientos analticos que requieren de tales derivados, por ejemplo,
la cromatografa de fase gaseosa-liquida GLC (por sus siglas en ingles
Gas-liquidChromatography), la cromatografa en capa fina TLC (por sus
siglas en ingles Thin-layerChromatography) y la espectrometra
infrarroja IR (por sus siglas en inglesInfraredSpectrometry).
2. REFERENCIAS NORMATIVAS
El siguiente documento normativo referenciado es indispensable para la
aplicacin de este documento normativo. Para referencias fechadas, se
aplica nicamente la edicin citada. Para referencias no fechadas, se aplica
la ltima edicin del documento normativo referenciado (incluida cualquier
correccin).
NTC 5033, Grasas y aceites animales y vegetales. Preparacin de la
muestra para ensayo (ISO 661)
3. REACCIONES

Determinar la composicin de los cidos grasos de grasa y aceites es uno

de los anlisis fundamentales para el sector de las grasas y los aceites. Con
este fin, los componentes del cido graso de los lpidos se convierten,
generalmente, en esteres metlicos y luego se analizan con cromatografa de
gases.
El mtodo rpido (vase el numeral 4.2) no deriva tiza los cidos grasos
libres (AGL) presentes en el aceite en esteres metlicos de cidos grasos
(FAME, por sus siglas en ingles de FattyAcidMethylEsters). Si hay presencia
de AGL, usualmente se asume que los AGL tienen la misma distribucin del
cido graso que los triglicridos. Usualmente esto es vlido para aceites
crudos, pero no para aceites fraccionados o refinados.
Exceptuando algunos aceites prensados en frio, como regla general, si la
fraccin en masa de los AGL es <0.5 % indica probablemente una previa
refinacin del aceite; se asume que los aceites con valores mayores son
crudos. La concentracin tolerable de AGL en el aceite depende del aceite
particular que se analiza y tambin del uso previsto de los datos generados
sobre los FAME. La presencia de AGL en el aceite puede introducir picos
adicionales en el cromatograma de gas final y hacer que la identificacin de
los FAME sintetizados, usando el procedimiento de transmetilacin rpida
sea problemtica.
El procedimiento general (vase el numeral 4.3) deriva tiza tanto los AGL
como los esteres de glicerol en FAME (vase el numeral 4.3.1).
Depende del analista decidir si el uso del procedimiento rpido o del
general es adecuado, con base en la naturaleza del aceite sometido a
ensayo. No obstante, como regla general, se sugiere usar el procedimiento
rpido solo si el contenido de AGL es 0.5 % por fraccin de masa. El
mtodo general (vase el numeral 4.3) se sugiere para aceites con
contenido de AGL > 0.5 % por fraccin de masa. Como alternativa, si una
grasa parcialmente hidrolizada se ha de convertir en FAME, se puede usar
el procedimiento de transmetilacin catalizada con cido que se especifica
en el numeral 4.5.
Debido a la toxicidad del BF3. Se recomienda que el mtodo que emplea
BF3 (vase el numeral 4.4) se use nicamente en casos extremos.
4. METODOOGA
ADVERTENCIAEl mtodo especificado involucra el uso de reactivos potencialmente
peligrosos. Se deben tomar las precauciones normales para la proteccin ocular y contra

los peligros de quemadura por sustancias qumicas corrosivas. La solucin metanlica de

potasio es venenosa.

4.1 PREPARACIN DE LA MUESTRA DE ENSAYO

La muestra de ensayo debe ser liquida, seca y transparente. Se debe
efectuar la preparacin de acuerdo con lo establecido en la NTC 5033.
4.2 MTODO RPIDO
4.2.1 Aplicabilidad
Este mtodo de transmetilacin rpida, en condiciones catalizadas
con lcalis, se aplica a los anlisis de rutina de grasa y aceites
comestibles que contienen cidos grasos por debajo del cido
butanoico (C4:0) y/o para la determinacin de cido butanoico o
cido hexanoico (C6:0) mediante GLC, usando un estndar
interno.
NOTA 1 Este procedimiento no deriva tiza los AGL en FAME. El analista debera
observar que la presencia de AGL en la solucin final puede afectar la calidad
de la subsecuente cromatografa de gas.
NOTA 2 Segn el documento International Olive Council COI/T.20/Doc.
24:2001, se puede aplicar un procedimiento similar directamente a las muestras
de las siguientes categoras:
a)
b)
c)
d)
e)

Aceite de oliva virgen con acidez inferior a 3,3 %;

Aceite de oliva refinado;
Aceite de oliva (mezcla de aceite de oliva virgen y aceite de oliva refinado);
Aceite de orujo de oliva refinado;
Aceite de orujo de oliva (mezcla de aceite de oliva virgen y de aceite de
orujo de oliva refinado).

4.2.2 Principio
Los esteres metlicos son los formados por transmetilacin con
hidrxido de potasio metanlico. Los cidos grasos libres no se
esterifican mediante este procedimiento.
4.2.3 Reactivos
Se utilizan nicamente reactivos con grado analtico reconocido, a
menos que se especifique de manera diferente.
Los reactivos no deben producir picos que interfieren con aquellos
de los esteres metlicos de los cidos grasos durante la GLC. Todo

lote de reactivo o solvente nuevo se debera verificar utilizndolo

para preparar esteres metlicos de cido oleico puro. Si aparece
algn pico adicional inesperado durante el anlisis final de GLC,
se recomienda rechazar el reactivo.
4.2.3.1
4.2.3.2
4.2.3.3
4.2.3.4

Metanol, que no contenga ms de 0,5 % de agua por

fraccin de masa.
Agua, que cumpla lo indicado en la norma ISO 3696, grado
3.
Sulfato acido de sodio (Hidrogeno sulfato de sodio),
anhidro.
Isooctano
(2,2,4-trimetilpentano),
con
calidad
cromatografca.

ADVERTENCIA El isooctano es inflamable y existe riesgo de incendio. Los lmites de la fraccin

del volumen explosivo en aire son de 1,1 % a 6,0 %. Es toxico por ingestin e inhalacin. Utilice
una campana ventilada que funciones adecuadamente cuando trabaje con este solvente.

4.2.3.5

Hidrxido de potasio, en solucin metanlica, cantidad de

concentracin de la sustancia c 2 mol/L.
Se disuelven, con calentamiento leve, 13,1 g de hidrxido
de potasio (fraccin por masa w = 85 g/100g) en 100 ml de
metanol absoluto.

4.2.3.6

Solucin estndar interno, solo para la determinacin de

cido butanoico y/o cido hexanoico.
Se pesan 250 mg (con aproximacin de 0,1 mg) de ester
metlico de cido valrico (metil pentano ato) en un matraz
o baln aforado de 50 ml con una marca (vase el numeral
4.2.4.4). Se usa isooctano para disolver la muestra y aforar
con el mismo solvente.

4.2.3.7

Solucin estndar interno de referencia, solo para la

determinacin de cido butanoico y/o cido hexanoico.
Se aaden (vase el numeral 4.2.4.2) 10 ml de solucin
estndar interna a un matraz o baln aforado de 100 ml
(vase el numeral 4.2.4.4) y afore con isooctano. Se calcula
la concentracin de esta solucin de referencia.

4.2.3.8

Solucin de cloruro de sodio. Se disuelven 40 g de

cloruro de sodio en 100 ml de agua.

4.2.4 Equipos
Equipo comn de laboratorio y, en particular, el siguiente:
4.2.4.1

Tubos de ensayo con tapa rosca, de 10 ml con tapa

ajustada con unin de PTFE (politetrafluoroetileno).

4.2.4.2

Pipetas, con capacidad de 0,1 ml, 2 ml y 10 ml, ISO 86552.

4.2.4.3

Viales de vidrio para la muestra, de 3 ml.

4.2.4.4

Matraz o baln aforado, con capacidad de 50 ml y 100 ml,

ISO 1042 Clase A.

4.2.5 Procedimiento
En un tubo de ensayo con tapa rosca de 10 ml (vase el numeral
4.2.4.1) se pesan 0,1 g aproximadamente de la muestra de
ensayo (vase el numeral 4.1). si se van determinar los cidos
grasos cuantitativamente con GLC usando estndares internos, es
esencial pesar la porcin de ensayo con precisin, es decir, con
aproximacin de 0,1 mg. Los resultados se expresan como
fracciones de masa, en porcentaje del cido graso en la grasa o el
aceite. Estos resultados no necesariamente concuerdan con los
resultados que se obtienen mediante normalizacin interna.
Se aaden (vase el numeral 4.24.2) 2 ml de isooctano (vase el
numeral 4.2.3.4) y se agita. En algunos casos, puede que no sea
posible usar el tamao especificado de la muestra de 0,1 g, en
cuyo caso la cantidad de isooctano aadida a la porcin de
ensayo se debera modificar proporcionalmente.
Para determinar de cido butanoico o el cido hexanoico, o
ambos, se pipetean (vase el numeral 4.2.4.2) 2 ml de la solucin
de referencia (vase el numeral 4.2.3.7), en lugar de isooctano. En
algunas circunstancias, puede ser necesario para analizar grasas
y aceites que contiene cantidades bajas de estos cidos grasos.

En este caso, el volumen de la solucin de referencia adicionada a

la muestra de ensayo se puede reducir proporcionalmente.
Se agregan (vase el numeral 4.2.4.2) 0,1 ml de solucin
metanlica de hidrxido de potasio de 2 mol/L (vase el numeral
4.2.3.5), coloque inmediatamente la tapa con unin de PTFE,
apriete la tapa y agite vigorosamente durante 1 min. La solucin
se toma transparente y poco tiempo despus se enturbia
nuevamente, a medida que el glicerol se separa. Se deja en
reposo por 2 min aproximadamente. Se aaden 2 ml
aproximadamente de solucin de cloruro de sodio y se agita
brevemente. Se extrae la capa de isooctano y se transfiere a un
vial para muestra (vase el numeral 4.2.4.3) se aade cerca de 1
g de sulfato cido de sodio (vase el numeral 4.2.3.3) y se agita la
solucin.
La solucin de isooctano es adecuada para el anlisis usando la
GLC segn la norma ISO 12966-4.
NOTA la eficacia de la derivacin usando el procedimiento rpido se puede
determinar mediante TLC, segn se describen en el Anexo (Informativo).

4.3 MTODO GENERAL

4.3.1 Aplicabilidad
En este mtodo de transmetilacin/metilacin general, en
condiciones consecutivas de catlisis con lcalis y con cido, se
aplica a todos los aceites y las grasas, incluyendo los aceites
destilados cidos, pero no se recomienda para aceites luricos.
Los esteres metlicos de cidos grasos de cadena corta se pierden
fcilmente durante el reflujo. Para los aceites luricos, se
recomienda el mtodo especificado en el numeral 4.2.
Durante la metilacin, las substancias que contienen las
siguientes configuraciones se pueden descomponer total o
parcialmente:
a) Grupos cetona, epoxi, hidroxilo, hidroperxido;
b) Grupos ciclo propilo y ciclo propenilo, y
c) cidos grasos acetilnicos.

NOTA
segn
el
documento
International
Olive
Council
COI/T.20/Doc.No.24:2001, este mtodo se puede aplicar directamente a
muestras de las siguientes categoras de aceites:

a) Aceite de oliva virgen con acidez superior a 3,3 % y

b) Aceite de orujo de oliva crudo.
4.3.2 Principio
El reactivo alcalino causa la transmetilacin de los esteres de
glicerol en esteres metlicos de cidos grasos; los cidos grasos
libres son convertidos en jabones. El catalizador cido convierte
los jabones en esteres metlicos de cidos grasos.
PRECAUCINLa metilacin se debe llevar a cabo en una campana ventilada.

4.3.3 Reactivos
Solo se utilizan reactivos con grado analtico reconocido. Los
reactivos no deben producir picos que interfieran con aquellos de
los esteres metlicos de los cidos grasos durante la GLC. Todo
lote de reactivo o solvente nuevo se debera verificar utilizndolo
para preparar esteres metlicos de cido oleico puro. Si aparece
algn pico adicional inesperado durante el anlisis final de GLC,
se recomienda rechazar el reactivo.
4.3.3.1

Isooctano
cromatogrfica.

(2,2,4-trimetilpentano),con

calidad

ADVERTENCIA El isooctano es inflamable y existe riesgo de incendio.

Los lmites de la fraccin del volumen explosivo en aire son de 1,1 % a
6,0 %. Es toxico por ingestin e inhalacin. Utilice una campana
ventilada que funciones adecuadamente cuando trabaje con este
solvente.

4.3.3.2

Metanol, que no contenga ms de 0,05 % de agua por

fraccin de masa.

4.3.3.3

Metxido de sodio, solucin metanlica, 0,2 mol/L

Disuelva 8 g de hidrxido de sodio en 1000 ml de metanol.
Esta solucin puede ser preparada con reactivos
comerciales.

4.3.3.4

Fenolftalena, solucin metanlica, 0,2 % de fraccin por

masa.

4.3.3.5

cido sulfrico, solucin metanlica, 1 mol/L

Se aaden 3 ml de cido sulfrico al 96 % a 100 ml de
metanol.

4.3.3.6

Solucin de cloruro de sodio

Se disuelven 40 g de cloruro de sodio en 100 ml de agua.

4.3.3.7

Agua, que cumpla lo indicado en la norma ISO 3696, grado

3.

4.3.4 Equipos y materiales

Equipo comn de laboratorio y, en particular, el siguiente:
4.3.4.1

Baln, con capacidad de 10 ml, con cuello largo, estrecho y

esmerilado y tapn de vidrio esmerilado, ISO 1042 clase A.

4.3.4.2

Condensador de reflujo, ISO 4799 con unin de vidrio

esmerilado que se ajuste en el cuello del matraz.

4.3.4.3

Perlas de ebullicin, libres de grasa.

4.3.4.4

Embudo de vidrio.

4.3.4.5

Pipetas, con capacidad de 0,2 ml, 1 ml y 4 ml, ISO 8655-2

4.3.4.6

Viales de vidrio para la muestra, de 3 ml.

4.3.5 Procedimiento
Se transfieren 50 mg de la muestra de ensayo (vase el numeral
4.1) en un baln volumtrico y cuello de vidrio esmerilado con
capacidad de 10 ml (vase el numeral 4.3.4.1).
Con la ayuda del embudo (vase el numeral 4.3.4.4), se aaden 2
ml de metxido de sodio de 0,2 ml/L en metanol (vase el numeral
4.3.3.3) y las perlas de ebullicin (vase el numeral 4.3.4.3).
Ajuste un condensador de reflujo (vase el numeral 4.3.4.2), agite
y lleve a ebullicin. Realice el reflujo de la mezcla hasta que la
solucin se torne transparente. Para la mayora de los aceites,
esto tarda cerca de 5 min, pero para aceites saturados ms duros
o de cadena larga, puede tardar hasta 20 min.

NOTA 1 Los esteres de esterol tambin se saponifican.

Se retira el baln de la fuente de calor, se espera hasta que el flujo

se detenga, se retira el condensador y se aaden dos gotas de
solucin de fenolftalena (vase el numeral 4.3.3.4). Se agrega
suficiente cido sulfrico de 1mol/L en solucin de metanol (vase
el numeral 4.3.3.5) hasta que la solucin se torne incolora y luego
se agregan (vase el numeral 4.3.4.5) 0,2 ml adicionales.
Se ajusta el condensador y se lleva a ebullicin nuevamente
durante 5 min. Se retira el baln de la fuente de calor y se enfra
bajo una corriente de agua. Se retira el condensador (vase el
numeral 4.3.4.5) y se aaden 4 ml de solucin de cloruro de sodio
(vase el numeral 4.3.3.6) y se agita.
NOTA 2 Los tiempos de reflujo prolongados en condiciones cidas pueden
exacerbar las prdidas de cido dodecanoico.

Se aade 1 ml de isooctano (vase el numeral 4.3.4.5), se tapona

el baln y se agita vigorosamente durante 15 s. Se deja en reposo
hasta que se haya separado las dos fases. Se agrega de nuevo
solucin de cloruro de sodio, hasta que la capa acuosa alcance el
extremo inferior del cuello del baln. La capa superior que
contiene los esteres metlicos llena el cuello del baln.
La capa superior de isooctano es idnea para el anlisis usando
GLC segn la norma ISO 12966-4.
NOTA 3 La eficacia de la derivatizacin, usando el procedimiento rpido se
puede determinar mediante TLC, segn se describe en el Anexo A (Informativo).

4.4 TRANSMETILACIN CON CATALIZADOR DE TRIFLUORURO DE BORO

(BF3)
El mtodo especificado involucra el uso de reactivos potencialmente peligrosos. Se deben
tomar las precauciones normales para la proteccin ocular y contra los peligros de
quemadura por sustancias corrosivas.
IMPORTANTE El trifluoruro de boro es venenoso. Por esta razn no se recomienda que el
analista prepare la solucin metanlica de trifluoruro de boro a partir de metanol y trifluoruro
de boro.

4.4.1 Principio

En la primera fase, catalizada con lcalis, los triacilgliceroles, TAG

se transmetilan con hidrxido de sodio metanlico para formar
FAMEs. Los FFAs (por su sigla en ingls, cidos grasos libres)
presentes se convierten en jabones. En la segunda fase,
catalizada con cido los jabones se convierten en esteres
metlicos mediante reaccin con un complejo de trifluoruro de
boro- metanol.
Es consecuencia, para el anlisis de cidos grasos puros y
jabones, la primera fase, catalizada con lcalis, es innecesaria y
los FAME se pueden preparar directamente, mediante reaccin
con trifluoruro de boro.

4.4.2 Aplicabilidad
Este mtodo es aplicable a la mayora de aceites, grasas y
derivados (cidos grasos, jabones) con excepcin de grasas
lcteas y grasas que contengan cidos grasos con grupos
especficos.
Durante la metilacin, las sustancias que contienen las siguientes
configuraciones se pueden descomponer total o parcialmente:
a) Grupos cetona, epoxi, hidroxilo, hidroperxido;
b) Grupos ciclo propilo y ciclo propenilo, y
c) cidos grasos acetilnicos.
Si la materia grasa contiene tales sustancias solo en cantidades
muy pequeas (por ejemplo, el aceite de semilla de algodn), se
puede aplicar el mtodo, de lo contrario se deberan usar los
mtodos especificados en los numerales 4.2 y 4.3.
Para la GLC, la recuperacin ptima de los esteres metlicos, a
partir de la mezcla de reaccin se obtiene usando isooctano. Sin
embargo, solo se recupera cerca de 75 % del caproato de metilo
presente.
4.4.3 Reactivos
Solo se utilizan reactivos con grado analtico reconocido.

Los reactivos no deben producir picos que interfieran con aquellos

de los esteres metlicos de los cidos grasos durante la GLC. Todo
lote de reactivo o solvente nuevo se debera verificar utilizndolo
para preparar esteres metlicos de cido oleico puro. Si aparece
algn pico adicional inesperado durante el anlisis final de GLC,
se recomienda rechazar el reactivo.
4.4.3.1

Agua, que cumpla con lo indicado en la norma ISO 3696,

grado 3.

4.4.3.2

Hidrxido de sodio, solucin metanlica, 0,5 mol/L.

Disolver 2 g de hidrxido de sodio en 100 ml de metanol
que no contenga ms de 0,5 % de agua por fraccin de
masa.
NOTA Si la solucin se va almacenar por tiempo prolongado, se puede
formar una pequea cantidad de precipitado blanco de carbonato de
sodio; este no tiene efecto alguno en la preparacin de los esteres
metlicos.

4.4.3.3

Trifluoruro de boro (BF3), solucin metanlica, de 12 %

hasta 15 % por fraccin de masa.

4.4.3.4

Isooctano (2,2,4-trimetilpentano), calidad cromatogrfica.

ADVERTENCIA El isooctano es inflamable y existe riesgo de incendio.
Los lmites de explosin en aire son de 1,1 % a 6,0 %. (de la fraccin
del volumen); es txico por ingestin e inhalacin. Utilice una campana
extractora que funciones adecuadamente cuando trabaje con este
solvente.

4.4.3.5

Cloruro de sodio, solucin acuosa saturada.

4.4.3.6

Sulfato de sodio, anhidro.

4.4.3.7

Nitrgeno, con contenido de oxigeno < 5 mg/kg.

4.4.3.8

Hexano, calidad
metlicos secos.

cromatografica,

solo

para

esteres

NOTA Se puede usar ter de petrleo, con rango de ebullicin entre 40

C y 60C, redestilado y sin residuos y con un valor de bromo interior a
1.

4.4.3.9

Rojo de metilo, solucin de 1 g/L en 60 % de etanol por

fraccin en volumen.
NOTA En el comercio estn disponibles soluciones de 14 %, 20 % y 50
%.

4.4.4 Equipos
Equipo comn de laboratorio y , en particular, el siguiente:
4.4.4.1

Baln volumtrico, con capacidad de 50 ml o 100 ml,

cuello esmerilado y ajustado con tapn de vidrio
esmerilado, ISO 1042 clase A.

4.4.4.2

Condensador de reflujo, ISO 4799 con longitud efectiva

de 20 cm a 30 cm, unin de vidrio esmerilado que se ajuste
en el cuello del baln (vase el numeral 4.4.4.1).

4.4.4.3

Perlas de ebullicin, libres de grasa.

4.4.4.4

Pipetas graduadas, con capacidad de 10 ml, ISO 835,

equipadas con bulbo o pera de caucho, o pipetas
automticas con capacidad de 10 ml, ISO 8655-2.

4.4.4.5

Viales, con tapa rosca.

4.4.4.6

Embudos separadores, con capacidad de 250 ml, ISO

4800, solo para esteres metlicos secos.

4.4.4.7

Evaporador rotatorio.

4.4.4.8

Balanza analtica, con precisin de lectura de 0,001 g

4.4.5 Procedimiento
ADVERTENCIA Debido a la naturaleza txica del trifluoruro de boro, realice la
metilacin bajo una cmara extractora. Es esencial lavar toda la cristalera con
agua inmediatamente despus del uso.

4.4.5.1

Porcin de ensayo

Utilice la tabla 1 para seleccionar el tamao adecuado del baln y

los volmenes de reactivos y solventes necesarios para metilar la
masa de porcin de ensayo que se va a tomar de la muestra
(vase el numeral 4.1).

4.4.5.2

Saponificacin

Para grasas y aceites, introduzca la porcin de ensayo

seleccionada segn la Tabla 1 en el baln adecuado (vase el
numeral 4.4.4.1). Aada la cantidad conveniente (vase la Tabla 1)
de la solucin metanlica de hidrxido de sodio (vase el numeral
4.4.3.2) y una perla de ebullicin. Ajuste el condensador (vase el
numeral 4.4.4.2) al baln. Elimine el aire del baln lavndolo con
nitrgeno seco (vase el numeral 4.4.3.7) inmediatamente antes del
reflujo durante pocos minutos. Lleve a ebullicin bajo reflujo hasta
que las gotas de grasa desaparezcan, moviendo suavemente el
baln con movimiento circular cada 30 s a 1min para evitar la
formacin de un anillo slido de hidrxido de sodio alrededor de las
paredes del baln. Esto toma usualmente entre 5 y 10 min, pero en
algunos casos excepcionales puede durar ms.
NOTA En los aceites que son solubles en metanol, como el aceite de ricino, no
se observan gotas de aceite. Por tanto, la transparencia de la solucin no es
prueba de la terminacin de la reaccin.

La materia no saponificable no es removida y, si est presente en

cantidades significativas. Puede interferir con los anlisis siguientes.
Si este es el caso, el mtodo especificado se debe complementar
con las siguientes operaciones:
Diluya con agua (vase el numeral 4.4.3.1) la solucin obtenida
despus de la saponificacin y extraiga la materia no saponificable
con dietil ter, hexano o ter de petrleo. Acidifique la solucin
acuosa y extraiga los cidos grasos con isooctano (vase el
numeral 4.4.3.4) o hexano (vase el numeral 4.4.3.8). Prepare los
esteres metlicos a partir de estos tal como se describe en el
numeral 4.4.5.3.
Aada la cantidad conveniente (vase la Tabla 1) de solucin
metanlica de trifluoruro de boro (vase el numeral 4.4.3.3). A
travs de la parte superior del condensador.

Para cidos grasos y jabones, introduzca la porcin de ensayo

seleccionada segn la Tabla 1 en el baln adecuado. Aada la
cantidad conveniente (vase la Tabla 1) de la solucin metanlica
de trifluoruro de boro. Ajuste el condensador al baln.
Tabla 1. Condiciones para las reacciones de BF3 y gua de
seleccin de los reactivos.

4.4.5.3

Preparacin de esteres metlicos en solucin de

isooctano
Contine la ebullicin durante 3 min. Para aceites con
cidos grasos de cadena larga, como los aceites de
pescado, la ebullicin debe durar 30 min.
Aada la cantidad apropiada (vase la Tabla 1) de
isooctano (vase el numeral 4.4.3.4) a la mezcla de
ebullicin, a travs de la parte superior del condensador.
Retire el baln de la fuente de calor y retire el condensador
de reflujo, inmediatamente, sin dejar que el baln se enfri,
adiciones 20 ml de solucin de cloruro de sodio (vase el
numeral 4.4.3.5). Tapone el baln y agite vigorosamente
por lo menos durante 15 s.
Aada ms de la solucin de cloruro de sodio saturada
para llevar, el nivel del lquido de la mezcla hacia el cuello
del baln. Permita que las dos fases se separen.
Transfiera de 1 ml a 2 ml de la capa superior de isooctano a
un vial de 4 ml (vase el numeral 4.4.4.5) y aada una
cantidad pequea de sulfato de sodio anhidro (vase el
numeral 4.4.3.6), para eliminar cualquier traza de agua.