Procesamiento alternativo de antgenos para MCH 1: Todos los caminos llevan a Roma

La va de complemento convencional es responsable de la mayora de pptidos que terminan en molculas MHC 1 en la superficie celular.
Estos pptidos son liberados por el proteosoma y transportados por el pptido transportador
TAP (transportador asociado al procesamiento de antgenos).
Sin embargo, mltiples caminos llevan a Roma, como es evidenciado por el creciente nmero de vas alternativas de procesamiento reportadas
en aos recientes.
De manera interesante, los individuos deficientes de TAP no sucumben a infecciones virales, sugiriendo que la inmunidad de las clulas TCD8
era suficiente ,tambien es respaldada por vas de procesamiento independientes de TAP.
A la fecha,

un diversidad de pptidos virales y

endgenos independientes de TAP

han sido identificados en las muescas de diferentes alelos de MHC 1.
Algunos de estos pptidos no son expresados por clulas TAP positivas normales y por ende son llamadas
TEIPPs (eptopes de clulas T asociadas con el procesamiento desigual de pptidos
TEIPPs

Son auto antgenos ocultos, derivados de protenas normales de mantenimiento, y procesados por vas poco convencionales.

Por definicin, estas vas independientes de TAP, pero informacin reciente indica que este repertorio an depende de la actividad de
proteosomas y metaloproteasas.
Una excepcin es el pptido C-terminal en la sintasa ceramida Trh4 de la membrana del retculo endoplasmtico (ER) que es sorprendentemente
liberada por la
peptidasa de seal pptidica (SPP)
la enzima protelica involucrada en escindir las secuencias lderes
La SSP intermembranosa escisiva es por ende un contribuyente importante de los pptidos independientes de TAP.
Su familia, al igual que las presenilas relacionadas al Alzheimer, podra contribuir tambin, de acuerdo con nuestra data preliminar.
Finalmente, encontrar rutas peptdicas alternativas es un campo emergente e incluye procesos como

la respuesta de la protena desdoblada,

la degradacin asociada al RE,

y las vas vesiculares asociadas a autofagia.

Estos datos nos convencen de que hay un mundo por descubrir en el campo del procesamiento poco convencional de los antgenos

La va clsica de presentacin de antgeno representa solo un lado de la historia.

Las clulas CTD8 antgeno-especficas reconocen pptidos de 8-10 aminocidos de largo asociados a MHC-I/ complejo 2m.
La expresin superficial de MHC-I/complejos peptdicos 2m es el resultado de un proceso que empieza dentro de la clula donde la protelisis
de :

protenas defectuosas

producto de ribosomas (DRiP)

protenas viejas, malformadas o defectuosas

genera pptidos pequeos.
Potencialmente, una multitud de sistemas proteolticos puede generan pptidos antignicos pero el proteosoma es responsable de la liberacin
de la mayora de ellos.
La inhibicin de la actividad del proteosoma disminuye en gran medida la concentracin de pptidos de unin a MHC-I.
La escisin proteosomal crea usualmente un pptido C- terminal compatible con la unin a MHC-I y los pptidos son usualmente alargados en
su parte N-terminal.
Los pptidos generados en el citosol son transladados al retculo endoplasmtico (ER) por el pptido transportador TAP1/TAP2, donde tienen
acceso al
complejo de carga de pptido (PLC)
localizado dentro del ER.
TA
es un heterodmero de la familia de transportadores cassette vinculante de ATP (ABC la unin con pptidos induce la hidrolisis y
P
transporte del ATP dentro de la membrana del retculo endoplasmtico.
Una vez en contacto con el PLC,la
ER amino peptidasa ERAAP (tambin conocida como ERAP1)
corta los pptidos N-extendidos hasta un largo apropiado para la unin a MHC-I.
La chaperona TAPASINA :

promueve la formacin de MHC-I/complejos peptdicos estables

y acta como un editor.

Adicionalmente, la CALNEXINA :

facilita el plegamiento temprano de las cadenas pesadas de MHC-I

mientras que la CALRETICULINA y ERp57 :

estn relacionados a la carga de pptidos.

Esta va es conocida como la va proteosoma-TAP y es considerada la ruta convencional de procesamiento ya que es la va corriente que opera
en clulas bajo condiciones normales.
Sin embargo, las clulas estn equipadas con rutas alternativas que llevan a la liberacin y carga de pptidos en molculas MHC-I.
Estas rutas son independientes de una o ms molculas de la va convencional como el proteosoma, tapsina o TAP.

Esto queda claro gracias a estudios con clulas con una va convencional deficiente.
En esta revisin, discutiremos qu se sabe hasta la fecha sobre enzimas y rutas alternativas para los compartimientos de carga de pptidos
generados endgenamente que alimentan la va directa de MHC-I, sumamente importante en caso de que falle la va convencional.
No hemos incluido literatura interesante sobre vas de presentacin cruzada para pptidos MHC-I.

Vas independientes de proteosoma: enzimas remplazantes de actividad proteosomal para la liberacin

de pptidos
Hace ms de 10 aos, muchas investigaciones descubrieron que una larga oligopeptidasa, llamada
tripeptidil peptidasa II (TPPII)
, participa en la actividad endoproteolitica del citosol y compensa parcialmente el dficit de actividad proteosomal.
La aumentada actividad de TPPII incluso permiti a la clula sobrevivir a condiciones letales de inhibicin del proteosoma.
En estas condiciones, la actividad de TPPII restaur parcialmente la presentacin de pptidos en molculas MHC-I y se especul que esto
podra causar la generacin de algunos eptopos independientemente en cooperacin con el proteosoma.

Un trabajo de Seifert et al. mostr que TPPII participaba en la generacin de un eptopo del

factor negativo de la protena (Nef)

del virus de inmunodeficiencia humana (HIV).
-Luego de eso, un creciente nmero de enzimas proteolticas ha sido implicado en la generacin de eptopos ppticos independientes del
proteosoma.
-La
enzima degradadora de insulina (IDE)
genera un eptopos a partir del antgeno de melanoma humano MAGE-A3.
La
oligopeptidasa Thimet (TOP)
y la nardilisina son necesarios para la fabricacin de 3 eptopos de CTL clnicamente relevantes:

el antgeno tumoral PRAME,

un eptopos de la protena EBNA3C del virus Epstein-Barr (EBV)

y un eptopos de la protena melanmica MART-1.

Estas enzimas son parte de una gamma de endo- y exo- proteasas citoslicas que complementa la actividad proteosomal y degrada los productos
del proteosoma en aminocidos.
De manera importante, la liberacin de pptidos del contexto de la protena est inevitablemente asociada a la va de destruccin y a todas las
proteasas mencionadas anteriormente adems destruye algunos pptidos antignicos.
Los pptidos que son rescatados de la destruccin total son transportados por el TAP al RE y pueden, potencialmente, unirse a molculas
MHC-I.

Las secuencias lderes son liberadas por peptidasa seales y pptido peptidasa seales
En clulas eucariotas, las protenas de secrecin y de membrana contienen una secuencia seal esencial para las protenas cuyo objetivo
(targeting) es el RE, la entrada a la va secretora.
Esta secuencia de seales son usualmente compuestas por 3 dominios:

un centro hidrofbico (regin h), de 6 a 15 aminocidos,

un final C-terminal polar (regin c) con pocos aminocidos sin carga,

y una regin polar N-terminal (regin n) con carga positiva.

Despus de ingresar al canal de conduccin proteica, las seales ppticas son usualmente escindidas por una
peptidasa seal (SP)

que son pequeos dominios y estn atrapadas en la membrana del RE, pueden ser sometidos a protelisis intramembranosa
por escisin en la regin transmembrana por asprtico proteasas tipo presenilina pptido peptidasa seal (SPP).

Los pptido ligando adecuados para la unin con MHC-I se cree son generados despus de la protelisis intermembrana por SPP que promueve
la liberacin de fragmentos de pptido seal de la membrana del RE.
Los fragmentos escindidos por SPP en las proximidades del citosol pueden acceder al l de nuevo, ser procesado por el proteosoma y
transportado por el TAP hacia dentro del RE.
La mayora de molculas HLA clase I donan su secuencia lder para unirse al HLA-E no clsico, la escisin de esta secuencia seal es mediada
por SP y SPP.
Estos pptidos lderes son incluso la mayor fuente de pptidos para el HLA-E.
La adecuada expresin de superficie de HLA-E previene la accin citotxica de las clulas NK que continuamente advierten la presencia de
complejos de pptido/HLA-E a travs de sus receptores CD94/NKG2,
la ausencia de estos complejos en la superficie celular resulta en la falla de interaccin con los receptores CD94/NKG2A, las cuales activan a
las clulas NK que matarn a sus objetivos.

Estudios pioneros por Peter Cresswell y Victor Engelhard en 1992

revelan que la mayora de pptidos presentes en la superficie de clulas deficiente en TAP s derivan de secuencias seales, regiones proteicas
especficas en la parte N-terminal de las protenas.
En consecuencia las partes de los pptidos lderes en la membrana del RE que estn ms cerca al lumen del RE son liberadas ah y pueden
acceder a las muescas independientes de proteosoma MHC-I o al TAP (Figura 1).
Luego de la escisin de las secuencias transmembrana por la SPP, los fragmentos de pptido son liberados y pueden asociarse con molculas
emergentes MHC-I/2m.
Se cree que esta protelisis por SPP intermembranosa es importante para el despeje de la membrana del ER ya que remueve pequeas
protenas remanentes ancladas en la membrana hacindolas susceptibles a la subsiguiente degradacin.
El corte por SPP intramembrana se ve favorecida por la topologa de SPP que oculta el centro cataltico dentro del plano de la membrana.
Los dos residuos asprticos necesarios para la actividad proteoltica de SPP se encuentran dentro conservados en las secuencias de aminocidos
(Y / F) D y G (L / F / I) GD en dos dominios transmembrana adyacentes.

En cuanto a un corte de secuencia de SPP, ningn sitio de escisin consensuada se ha descrito.

Sin embargo, SPP demuestra una fuerte preferencia por los sustratos con residuos hlice-desestabilizantes en su dominio transmembrana.
Aminocidos como

la asparagina,

serina,

y cistena
perturban una conformacin alfa-helicoidal perfecta del dominio transmembrana y por lo tanto se conocen como residuos "hlice-inclinantes" o
"rompe-hlice".
Los pptidos seal se ha demostrado que contener aminocidos con capacidad "rompe-hlice" dentro de su regin h, que influyen crticamente
su procesamiento proteoltico por SPP .
La perturbacin de la -hlice causada por estos residuos se piensa sirve para facilitar la protelisis intramembranosa.
Este y otros temas serian aclarados con la resolucin atmica de esta proteasa, pero esto an no es posible debido a sus dificultades tcnicas.
Podemos tener una aproximacin de esto observando homlogos de la estructura cristalina de la presenilina/ SPP recientemente publicado.
JR1 es un homlogo de SPP de las arqueobacterias Methanoculleus marisnigri que alberga nueve hlices transmembrana, similar a lo que est
previsto para SPP, con TMD 6 y TTM 7 conteniendo la secuencia YD y GxGD, respectivamente.
Los dos residuos de aspartato cataltico estn situados cerca uno del otro y a aproximadamente 8 en la membrana lipdica.
La actividad proteoltica se produce en presencia de molculas de agua que acceden a los aspartatos catalticos a travs de una gran cavidad entre
dos dominios terminales.
La estructura tridimensional de un presenilina humana comprendida en el complejo -secretasa tambin se ha descrito .
Para el futuro cercano, podemos esperar ms informacin sobre la actividad cataltica de esta familia de proteasas, incluyendo SPP, que es sin
duda un factor importante de pptidos para la presentacin de MHC-I.

Funciones adicionales para la peptidasa pptido seal

Nuestros datos recientes revelaron un papel adicional para la protelisis
intramembranosa por SPP.
Independientemente de su nombre, SPP tambin parece liberar un pptido Cterminal, independiente de la actividad proteosomal.
El procesamiento de las regiones C-terminal de una protena de tipo II insertada
en la membrana del RE conduce a la presentacin de pptidos independiente de
proteasoma y TAP.
La regin C-terminal de la ceramida sintasa, Trh4 que es una protena que
atraviesa la membrana mltiple en el RE
contiene un eptopo de 9-mer pptido que se encuentra en el extremo C-terminal
final de la protena y sobresale en el lumen de la RE.
La protena Trh4 tiene una funcin de limpieza y se expresa de forma ubicua.
La inhibicin de la actividad SPP bloquea la generacin del pptido Trh4.
Los experimentos con formas mutantes de la protena Trh4 indicaron que la
escisin por SPP intramembranosa se produce en la regin directa del eptopo
de clulas T dentro de la bicapa lipdica.
Especulamos que la actividad SPP en la membrana del RE es suficiente para
liberar lo necesario del pptido 9-mer C-terminal y la liberacin de este pptido
en el lumen del RE.
Otras enzimas proteolticas, tales como aminopeptidasas, eran prescindibles.
El procesamiento adicional carboxi-terminal no era necesario ya que el eptopo
est situado en el extremo C-terminal final de la protena.
La liberacin directa del pptido libre en el lumen del RE es muy probable,
debido a la orientacin transmembrana de tipo II de la cola protena Trh4
(extremo N-terminal a la orientacin C-terminal).
El mecanismo exacto de carga de la pptida membrana Trh4, sin embargo, queda
por determinar.
Qu provoca la escisin de Trh4 por SPP?no se conoce todava.
Adems de su funcin de liberacin de sustratos transmembrana pequeas, SPP
se ha demostrado en asociacin con protenas de membrana mal plegadas en los
complejos donde se representa a SPP como un monmero, dmero, o multmero.
Se sugiri que tales complejos de alto peso molecular actan como chaperones
para disponer de agregados de membrana.
El papel de la SPP en esta maquinaria de degradacin podra ser la de liberar a esos agregados de la membrana del RE.
Estos descubrimientos se basan en las protenas virales US2 y US11, que marc exitosamente molculas MHC-I en el RE en el transporte
retrgrado para empujar esta protena de vuelta al citosol para la degradacin por los proteasomas .
Curiosamente, el miembro de la familia SPP, la presenilina 2, tambin parece estar asociada con esta protelisis de membrana.
Ya que SPP y presenilina 2 tienen preferencias opuestas por orientaciones transmembrana tipo I y tipo II, un "degradoma" de este tipo podra
ser responsable de limpiar las membranas del ER.
Este tipo de maquinaria es llamada la
va de degradacin asociada al retculo endoplsmico (ERAD)
es un sistema de control de calidad del retculo endoplsmico el cual monitorea la integridad de las protenas nacientes o residentes
ERA
del retculo endoplsmico y marca a las protenas plegadas incorrectamente o mal ensambladas para ser degradadas
D
La eliminacin de las cadenas pesadas del MHC-I mal ensambladas tambin ocurre durante la va ERAD en ausencia de una interferencia viral.
Claramente, los virus toman ventaja de estas vas existentes y las piratean, para as evadir el reconocimiento inmune de las clulas T citotxicas.

Otro rol de SPP en ERAD ha sido visto en un artculo reciente describiendo la escisin por SPP del regulador de la respuesta a protenas
desplegadas (UPR): XBP1u. XBP1u es una protena de membrana tipo II, que experimenta una escisin intramembranosa en un dominio
transmembrana tipo II conservado mientras est integrado en un complejo conteniendo
SPP,
la proteasa Derlin-1,
y la E3 ligasa TRC8, que antecede a SPP para la escisin de XBP1u.
Se piensa que la mudanza de un
ectodominio
porcin de una protena de membrana que est expuesta al espacio extracelular
de sustratos de SPP anterior a la escisin por SPP es requerida y normalmente ejecutada por SP en seales de secuencia, pero tal escisin es
innecesaria en el caso de CBP1u, similarmente a como hemos descrito para Trh4.
En general, la UPR induce una fuerte regulacin hacia la disminucin de molculas de MHC-I en la superficie celular.
En consecuencia, la actividad de SPP parece tener un impacto directo en la presentacin de pptidos por la MHC-I, por la escisin de
secuencias lderes de protenas nacientes y la liberacin de algunos extremos COOH para la carga de MHC-I.
Un rol ms indirecto que influye en la presentacin de MHC-I ha sido revelado y ocurre durante una va ERAD.
Esto tambin es respaldado por un reciente estudio usando una estrategia de nivel de sistemas [systems level strategy] reportando la intervencin
de SPP en la red que coordina la respuesta ERAD.

Liberacin de Pptidos en la Ruta Secretora: Furina

Hace ms de una dcada atrs, el grupo de doctor Yewdell mostr que pptidos localizados en el extremo COOH de protenas cuyo blanco
es el retculo endoplasmtico, son generadas muy eficientemente y presentadas en el MHC-I.
Fue esencial que la localizacin del pptido sea al final del extremo COOH de la protena, sin requerir un recorte del extremo COOH, teniendo
en cuenta el hecho de que hay poca actividad carboxipeptidasa en el retculo endoplasmtico.
Ellos describieron la presentacin de pptidos -independientes TAP por parte de una protena residente del RE, Jaw1; y protenas en la va
secretora, como ovoalbmina y CD23.
En cada caso, los pptidos fueron eficientemente liberados del mismo extremo COOH por medio de la actividad de endoproteasas an sin
definir, para ser generadas como ligandos de clase I.
Basados en esta va de liberacin de pptidos, los autores proveyeron el trmino C-end rule [regla C-final, en referencia al extremo
COOH] para resaltar la capacidad de las proteasas residentes en el retculo endoplasmtico de liberar ligandos de clase I de los extremos COOH
de las protenas cuyo blanco es el retculo endoplasmtico.
La liberacin de pptidos sin la intervencin del proteosoma puede ocurrir tambin en la red trans-Golgi.
Se mostr que la principal enzima proteoltica involucrada es la furina, una proteasa conocida de la red trans-Golgi, normalmente requerida para
la maduracin de protenas secretadas (por ejemplo, factores de crecimiento y neurotransmisores) mediante la escisin en tramos precisos de tres
o cuatro residuos bsicos.
La furina es parte de una familia de proprotenas convertasas que abarcan nueve miembros en total.
Tres miembros (PC5/6, PACE4, and PC7) incluyendo furina son ampliamente expresados y juntos toman accin en una variedad de diferentes
procesos que ocurren en la red trans-Golgi, superficie celular, o endosomas.
Esto lleva a la activacin o inactivacin de :

receptores,

ligandos,

enzimas,

glicoprotenas virales,

factores de crecimiento.
La furina tambin tiene funciones importantes durante el desarrollo, mediante el proceso de sustratos como la
protena morfognica sea 10 (BMP10)
, un miembro de la superfamilia TGF- que desempea un papel crtico en el desarrollo del corazn.
La furina procesa una gran variedad de protenas precursoras a partir del residuo de arginina en el extremo COOH en la secuencia de consenso
preferido ArgXArg/LysArgX (X es cualquier aminocido y indica la posicin de la escisin).
Inicialmente, esta va fue estudiada con el uso de un pptido modelo en el extremo COOH de la protena HBe secretada en hepatitis.
Los antgenos procesados por furina cuyo objetivo es la ruta secretora fueron presentados por MHC-I en la superficie celular y pudieron
provocar respuestas funcionales de clulas T CD8 in vivo en un ambiente independiente de TAP.
Por tanto, el extremo COOH terminal de protenas secretoras o localizas en el RE parece ser procesado para la presentacin a clulas T CD8.
(Figura 1)

Vas Independientes de TAP: Enrutamiento Alterno a Compartimientos de Carga de MHC- I

La generacin de ligandos MHC-I descrita arriba define diferentes vas alternativas para generar ligandos pptidos sin la intervencin del
proteosoma.
Estas representan vas inusuales para la generacin de pptidos.
Ahora, discutiremos una limitacin diferente en la va de la presentacin antignica convencional relacionada al bloqueo de la entrada de
pptidos en el RE debido a deficiencia de
TAP (transportador asociado con la presentacin del antgeno)
En seres humanos, el sndrome de la deficiencia de TAP ha sido descrito en varias familias independientes y es el resultado de mutaciones en
cualquiera de las subunidades del transportador de pptido, TAP1 y TAP2.
Interesantemente, estos individuos deficientes de TAP no sucumben ante infecciones virales, lo que sugiere que la inmunidad por
clulas T CD8 es sostenida de forma suficiente por vas alternas -independientes deTAP.
A la fecha, una cierta diversidad de pptidos TAP-independientes endgenos y virales ha sido identificada en las muescas de diferentes alelos de
MHC- I.
De forma importante, estos pacientes deficientes- TAP- contienen un repertorio policlonal de clulas CD8 que es capaz de reconocer pptidos
del EpsteinBarr virus, como la protena LMP2, encontrada en clulas deficientes de TAP.
La va de procesamiento independiente TAP- es capaz de generar suficientes complejos MHC- I/pptido como para mantener la
inmunovigilancia y el control de infecciones virales.

Estudios con ratones con TAP1 inactivado [TAP1-knockout mice] han mostrado que los niveles de expresin en superficie de MHC- I son
ciertamente menores, pero los complejos restantes s que inducen un repertorio extenso y policlonal de clulas T CD8.
El uso de TCR fue probado de ser bastante compatible a comparacin de aquel del ratn silvestre y ratones con TAP1 inactivada fueron capaces
de ensamblar respuestas antivirales por parte de clulas T CD8.
Junta, esta informacin muestra que, aunque daado, el repertorio de pptidos presentados por MHC-I en ausencia de TAP, es suficiente para
armar una inmunidad basada en clulas T CD8.

Eptopos de Clulas T TAP Independientes: TEIPP

Interesantemente, los pptidos emergentes de rutas independientes de TAP alternativas parecen ser inmunognicos.
Con continuas inmunizaciones en ratones con clulas tumorales -deficientes TAP, las clulas T CD8 especficas fueron inducidas para
reconocer clulas -deficientes TAP, pero no clulas normales.
Estos eptopos de clulas T parecan ser selectivamente presentados por clulas deficientes- TAP pero no bajo condiciones normales.
Este repertorio alternativo de pptidos surge debido al procesamiento de defectos y por lo tanto, estos pptidos se denominan
"eptopos de clulas T asociados con el procesamiento alterado del pptido " (TRIPP).
La identificacin molecular de algunos pptidos de TRIPP revel que pueden variar en :

longitud (de 9-mer a 18-mer),

composicin de aminocidos,

y de unin a MHC-I,
como algunos son presentados por molculas MHC-I y otros por la molcula de MHC no clsica HLA-E y el homlogo de ratn Qa-1b (Tabla
1)
Se derivan de protenas de limpieza normales con expresin ubicua, pero sorprendentemente no son cargadas en el MHC-I en clulas con una
maquinaria intacta de antgeno-procesado.
Ellos constituyen pptidos propios normales (no mutado, no patgenos o especfico de tumor) y pueden ser considerados como verdaderos neoantgenos.
Existe la inmunogenicidad de pptidos TEIPP porque no se presentan por las clulas normales, incluyendo el timo.
Durante el desarrollo tmico, las clulas T se someten a dos procesos subsecuentes llamados seleccin positiva y negativa .
La seleccin negativa es necesaria para el mantenimiento de la autotolerancia ya que induce la eliminacin o inactivacin de los timocitos
potencialmente autorreactivos .
Recientemente hemos demostrado que clula TCD8 TEIPP especficos no se someten a la seleccin negativa y estn ah disponibles para la
explotacin teraputica.
Dado que los pptidos reconocidos por TEIPP-CTL especficos se derivan de protenas de mantenimiento, tratamos de entender por qu TEIPPs
no se presentan mediante el procesamiento de clulas intactas.

En conjunto, nuestros datos muestran que los pptidos TEIPP son en realidad producidos dentro de las clulas que dominan el procesamiento,
pero de alguna manera o no estn suficientemente presentado por molculas de MHC-I.
Tomando el pptido derivado de Trh4 TEIPP como modelo, hemos analizado la expresin del gen Trh4 en varias poblaciones epiteliales
aisladas de la quimiocina TAP1.
Este anlisis revel el mismo nivel de RNA transcriptasas entre lo normal y las poblaciones eliminadas, lo que sugiere niveles de protena
comparables tanto en clulas tipos .
La liberacin del pptido Trh4 es realizado por SPP, que es INTAP positivo activo, as como objetivos en TAP negativo.
La sobreexpresin del gen Trh4 en las clulas TAP positivas conduce a la presentacin en la superficie en MHC-I , todava de una manera
independiente de proteosoma.
Por otra parte, la inhibicin del proteosoma en clulas TAP-positivas resulta en la presentacin del pptido endgeno Trh4 (56), lo que indica
que, efectivamente, este Pptido TEIPP se genera en todas las clulas, pero pierde competencia con la abrumadora cantidad de pptidos TAPimportados en clulas TAP- positivas.
Algunos pptidos alternativos, como los derivados de las protenas de EBV, mostraron ser presentados en clulas TAP-positivas en medida
comparable, aunque con el uso de vas alternativas.
Por otra parte, nuestros datos sugieren que la cantidad limitada de pptido eptopo de Trh4 en el ER es la razn principal de la presentacin
selectiva en clulas- deficientes de TAP.
Curiosamente, el aumento gradual de la sobreexpresin estuvo relacionada con el grado de reconocimiento por el clon de CTL especficos de
TEIPP, lo que implica que el transporte TAP en realidad constituye una fuerte barrera para los pptidos TEIPP. El estudio de los antgenos
TEIPP humanos corrobora estos hallazgos.
Un pptido antignico es codificado por el gen CALCA humana y se deriva de la secuencia de seal de la
protena preprocalcitonina (PPCT).
Esta se libera en el lumen del Re por SP y SPP, independientemente de proteasomas (Tabla 1).
La presentacin del pptido PPCT a CTL especficos se encontr en pulmn humano y los carcinomas tiroideos medulares que tenan muy baja
expresin de TAP.
La presentacin del pptido PPCT ocurri tambin en clulas no transformadas normales, como las clulas dendrticas (PED), despus de
derribar de TAP.

La sobreexpresin del gen CALCA en clulas tumorales en DCs y TAP-positivo dio como resultado el reconocimiento del clon especfico de
CTL (97).
La identificacin de antgenos humanos de TEIPP adicionales a nivel molecular permitir que las clulas TCD( tengan como objetivo variantes
tumorales CTL- resistentes TAP- negativos (98, 99).
En conjunto, estos resultados apoyan el modelo de la competencia de pptidos en el RE como un factor que impide la presentacin de pptidos a
partir de fuentes alternativas, y forma la imagen de las vas de procesamiento alternativos que emergen tras la aparicin de defectos en la va
convencional (Figura 1).

Cmo alcanzar pptidos cargando complejos cuando se hace un Bypass TAP?

El mecanismo de carga precisa de pptidos seal-TAP independiente en molculas MHC-I no se conoce, ya que el procesamiento por Spand
SPP se cree que tienen lugar fuera del PLC.
Esta maquinaria sofisticada para la optimizacin de la longitud del ligando y la calidad y facilitar la carga pptido a las molculas MHC de clase
I naciente facilita en gran medida la carga peptdica por puente de transportadores fsicos a chaperones para la carga y tambin "edita" el
repertorio de pptidos unidos a maximizar su afinidad .
La molcula PLC Tapasin ata molculas MHC de clase I para el transportador de pptido que acta junto con el calreticulina chaperona y la
oxidorecutasa ERp57.
La Tapasina es sensible a la calidad de los complejos peptdicos unidos a MHC-I, y permite rondas sucesivas de unin peptdica hasta llegar a
un cierto nivel de afinidad.
El recorte de los peptdicos entrantes a travs de ERAAP puede ser necesario para obtener una longitud peptdica correcta antes de la seleccin
por el alelo definido de MHC-I.
Un artculo reciente asevera que las molculas de MHC-I inicialmente se unen a una variedad de pptidos, incluyendo a algunos de baja
afinidad o N-terminales extendidos, pero luego se disocia rpidamente de la molcula, seguida por una seleccin de los candidatos ms aptos.
Sin embargo, los pptidos lderes independientes de TAD no llegan al ER (retculo endoplasmtico) va TAP, y por tanto carecen estas
chaperonas de edicin y optimizacin.
En la ausencia de transportadores TAP, el descargo de pptidos en MHC-I ocurre sin una PLC completamente funcional a mano.
En este aspecto, una carga ineficiente de los pptidos lderes en clulas TAP-positivas puede esperarse, mientras que en clulas que carecen de
TAP, este mecanismo alternativo de entrada al RE permite la emergencia de estos pptidos.
As que aqu, el PLC flota en la membrana de RE y es despachado del sitio de entrada de pptidos.
El anlisis del espectrmetro de masa mostro una presentacin mejorada de los pptidos lderes en las clulas que carecan del transportador
peptdico.
Despus de todo, las molculas de MHC-I son cargadas con el repertorio disponible, de fuentes convencionales o no convencionales.
Pero como es que estos pptidos sin explotar encuentran su camino a molculas de MHC-I? Se ha mostrado que el cargado de pptidos en
MHC-I puede ocurrir con los mnimos componentes de los complejos tapasina-ERp57-MHC-I, pero debemos asumir que las chances de que
un pptido encuentre la maquinaria PLC en el RE son escasas.
Por otra parte, las clulas deficientes de TAP contienen ms molculas pptido-receptivas clase I comparadas con las clulas normales.
Estos pptidos podran ser activamente chaperonados hacia estas aberturas.
Las chaperonas del RE con una alta capacidad de afinidad peptdica son protenas de shock trmico (por ejemplo HSP969 (heat shock protein)) y
PDI, una isomerasa que se une eficientemente a pptidos libres.
Es posible que los pptidos independientes de TAP son capturas por estas molculas y chaperonados a las MHC-I.
Estudios recientes sugieren que la molcula TAPBR (similar a tapasina) se une a protenas MHC-I que no se unen a Tapasina en el PLC, por lo
que podemos plantear la hiptesis que este grupo pptido-receptivo puede funcionar para cargar pptidos lderes.
Sin embargo, esto an necesita ser investigado.
Otras vas para acceder a MHC-I pptido receptivos han sido propuestas y estar relacionada con el trfico intracelular de pptidos hidrofbicos.
Estudios con mltiples eptopos de la protena LMP2 del EBD ha mostrado que pptidos que poseen un ndice alto de hidrofobia fueron
presentados en una forma independiente de TAP.
El mecanismo propuesto describe la generacin de estos pptidos fuera del ER, ya que la actividad del proteosoma es necesario para su
presentacin, y su difusin libre subsecuente a travs de la membrana del ER debido a su alta hidrofobia. Estos pptidos pueden atravesar la
membrana espontneamente o a travs de transportadores de membrana alternativamente.
Autofagia: Pptidos MHC-I cargando en compartimentos vesiculares
Un reciente estudio por Tey et al.
Mostro que el procesamiento del antgeno peptdico de la protena asociada a la latencia del
cytomegalovirus humano (HCMV)
pUL138, ocurre enteramente en la va vesicular y es mediada por la autofagia.
Adems, otros ejemplos de autofagia mejorada por la presentacin a MHC-I de antgenos virales fue reportada.
Durante la autofagia, largas porciones de contenido citoplasmtico, incluyendo protenas y organelas, son encapsuladas en vesculas de doble
membrana denominadas autofagosomas.
Se ha propuesto que la membrana autofagosomal proviene del RE y las molculas MHC-I pptido-receptivas pueden estar presentes en
autofagosomas, permitiendo la carga de pptidos en estos compartimentos vesiculares.
En adicin, las molculas recirculantes de MHC-I desde la membrana celular termina en endosomas y pueden tener contacto con autofagosomas
antes de retornar a la red endoctica.
El trnsito de protenas asociadas a membrana entre autofagosomas y endosomas ha sido observado a travs de imagen en vivo de clulas. A
dems, los pptidos generados por el proteosoma parecen tener acceso a la va vesicular endoctica.

Actualmente, encontramos al menos un ejemplo de este en nuestro repertorio de TEIPP generado por el proteasoma, pero presentado por el
TAP
independiente. (Tabla 1)
La presentacin de este pptido fue sorprendentemente mejorado por medio del bloqueo de la bomba de protones en los endosomas, lo que hace
ms probable que este antgeno cruce la va vesicular.
Por ltimo, el anlisis de espectrometra de masas del repertorio pptido independiente TAP seal a las protenas localizadas en el
compartimento vesicular como una fuente importante
Se pens que el proceso alternativo y el compartimento de cargas no se han descifrado totalmente, estos datos apoyan firmemente la idea de que
la va vesicular y la va autofagia contribuyen a la presentacin de antgeno por molculas MHC- I.

Conclusin
En resumen, podemos concluir que, a pesar de que la va convencional del proteasoma-TAP representa la principal fuente del repertorio
peptdico de MHC-I, las vas de procesamiento alternativo complementan claramente la reserva total.
Esta multitud de vas de procesamiento del MHC-I se pueden comparar con una paleta de colores donde el pintor combina los diferentes colores
que terminarn en diferentes proporciones y combinaciones en el cuadro final (Figura 2).
En situaciones de infecciones virales, transformacin celular u otros iniciadores de estrs, la contribucin de estas vas alternativas podra cobrar
importancia.
El SPP y tal vez sus familiares son ejemplos convincentes de sistemas proteolticos alternativos que alimentan las rutas alternativas de
presentacin de antgeno.
La precisa identificacin molecular de mecanismos de carga alternativa a molculas de repertorio peptdico MHC-I, ya sea en RE o en
autofagosomas, todava necesitan ser investigados con profundidad.
En lo que respecta, los pptidos pueden andar por varias rutas diferentes antes de llegar a las ranuras de MHC- I y, por lo tanto,