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FACULDADE DE FARMCIA
UNIVERSIDADE DE COIMBRA
2 - Extraco
2.1. Introduo
Para promover um correcto isolamento de um veneno necessrio conhecer
previamente a sua natureza, nomeadamente as suas propriedades fsico-qumicas
(solubilidade e ionizao), grupos funcionais, etc.
Um txico de natureza mineral isola-se destruindo o substrato orgnico que o
acompanha por um processo de mineralizao.
Se o txico de natureza complexa, orgnica ou mineral, deve-se ter em conta a sua
solubilidade (ou dos seus derivados) em diferentes solventes, relativamente a outras
substncias que o acompanham, bem como a polaridade da sua molcula sob a
influncia de um campo elctrico.
Txicos volteis, ou volatilizveis, so facilmente extrados do meio em que se
encontram, por este ser normalmente fixo.
2.2. Separao de venenos volteis
A separao deste tipo de venenos das amostras de tecidos normalmente efectuada
por destilao por arrastamento de vapor, substituda, na prtica, por uma destilao
simples.
O tecido, triturado e homogeneizado em gua destilada. A mistura acidificada
com cido tartrico e colocada num aparelho de destilao pelo vapor. O destilado
recolhido em 5 fraces (50 ml). Este mtodo permite isolar dos tecidos, lcoois,
aldedos, teres, acetona, fenis, sulfureto de carbono, leos e hidrocarbonetos
volteis, clorofrmio, cido ciandrico, entre outros.
3 - Identificao
3.1. Ensaios prvios
Em Toxicologia no existe um s mtodo para proceder identificao primria e
rpida de um txico desconhecido. O nmero de molculas de tal modo elevado
que necessrio fazer uma pesquisa prvia de modo a prever o tipo de substncia em
causa. O exame do local do acidente, a recolha de recipientes e de informaes
relativas pessoa e ao local, entre outros, so dados que no podem ser descurados
para um procedimento que se quer correcto e rpido, com resultados fiveis.
A ausncia completa de dados prvios levaria a equacionar a possibilidade de um to
grande nmero de substncias, que tornaria a sua identificao impossvel, pelo
menos em tempo til. No entanto, por vezes necessrio efectuar um elevado
nmero de anlises para se tentar encontrar a identidade da substncia em causa.
Uma fonte principalmente eleita para efectuar essas anlises, nomeadamente pela
quantidade disponvel, a urina.
Outro factor a ter em conta o tempo que medeia a recolha da amostra e a sua
anlise efectiva. Devem estas amostras serem correctamente armazenadas, nas
condies de conservao ideais e que no permitam ou provoquem qualquer
alterao das substncias.
As amostras recolhidas, nomeadamente amostras de tecido, devem ser separadas em
vrias fraces, de acordo com o tipo de testes a efectuar e de modo a manter pelo
menos uma fraco de reserva, para prevenir qualquer anomalia ou confirmao dos
resultados.
3.2. Identificao especfica
Aps conhecer, de um modo mais ou menos seguro, a substncia em causa, est-se
em condies de recorrer a tcnicas emanadas das diversas reas cientficas: qumica
analtica, farmacodinamia, etc.
A escolha do mtodo ter de se basear nas caractersticas do prprio mtodo
(reprodutibilidade, proporcionalidade, etc.), da disponibilidade do laboratrio que vai
proceder anlise e do tempo que se dispe para a obteno dos resultados.
Ter tambm de se ter em conta as caractersticas da prpria substncia, no que
concerne ao seu comportamento farmacocintico.
3.3. Anlise de cidos e bases corrosivos
A identificao deste tipo de compostos vem muitas vezes dificultada pelo anterior
uso de antdotos e pela sua instabilidade nos tecidos animais. Alm disso, a
BARBITRICOS
1 - Introduo
O diagnstico desta intoxicao, quando no evidente, pode ser feito graas s
pesquisas toxicolgicas no sangue e na urina. Embora os barbitricos no circulem
livremente no plasma, a sua concentrao no sangue, pelo menos no incio da
intoxicao, muito maior do que na urina, uma vez que a eliminao urinria
fraca no incio da intoxicao; s depois da alcalinizao do organismo que a
concentrao aumenta. O lquido de lavagem gstrico pode ser usado se no tiverem
passado mais de 1-2 horas entre a ingesto da droga e a recolha do lquido.
A escolha dos vrios mtodos a usar depende essencialmente do equipamento
existente no laboratrio. A extraco pelo mtodo de Griffon e Le Breton, tanto para
o sangue como para a urina, seguida de identificao do barbitrico em causa por
cromatografia em camada fina (CCF) e a dosagem espectofotomtrica de UV esto
ao alcance de qualquer laboratrio e so tcnicas rpidas e precisas.
1.1. Extraco e Purificao pelo Mtodo de Griffon e Le Breton
No almofariz, adicionar:
1 - Amostra: 20 ml de urina
2 - cido actico puro: V a X gotas (insolubiliza os barbitricos e evita a
passagem dos alcalides para o solvente orgnico. Tem o inconveniente de
favorecer a passagem dos cidos gordos fisiolgicos e sobretudo dos cidos
orgnicos medicamentosos cujos ies H+ podero ulteriormente interferir na
espectroscopia no UV)
3 - Sulfato de sdio anidro: 35 g (promove a desidratao)
Triturar lenta e progressivamente at obteno de uma mistura pulverulenta.
Preparar uma coluna de vidro introduzindo sucessivamente atravs
de um tubo de vidro :
1 - Carvo vegetal activado pulverizado: 0,2 g
(adsorve as impurezas e no os barbitricos)
2 - Magnsia calcinada: 0,2 g
(neutraliza algum cido)
3 - Sulfato de sdio anidro: 2 g
(desidratante)
4 - Mistura pulverulenta
5 - Sulfato de sdio anidro: 2 g
(promove a desidratao, eliminando a fase aquosa
e as impurezas que ela contm)
Padronizao
Fazer as seguintes diluies em tubo de ensaio:
Sol. de Barbitrico a 500 mg/l (ml)
0,8
0,4
0,2
9,2
9,6
9,8
10
100
50
40
20
10
Medir a absoro diferencial a 260 nm, como para a dosagem partindo de 10 ml das
diversas diluies.
Traar a curva padro em - mg de barbitrico / litro.
Resultados
As doses teraputicas variam entre 1 e 10 mg de barbitrico por litro de sangue.
As doses txicas, variam com o tipo de barbitrico (tanto maior quanto mais lenta for
a sua aco) so geralmente 10 vezes a dose teraputica.
A eliminao urinria depende do pH.
Valores inferiores a 50 mg/l podem, por alcalinizao, ser aumentadas para 300 mg/l.
Notas
- As propriedades espectrais dos barbitricos dependem dos 2 grupos NH, entre os 3
grupos C=O. Os barbitricos substitudos no azoto no possuem, logicamente, 2
ionizao.
- A extraco em meio cido impede a extraco de aminas, como a fenotiazina, mas
faculta a extraco dos cidos orgnicos, como o saliclico que possui um espectro de
UV intenso entre 230 e 260 nm. Os cidos so, no entanto, eliminados lavando a fase
orgnica com tampo fosfato.
2 - Introduo
O odor ciandrico (amndoas amargas) facilmente notado em amostras que contm
estes compostos. No entanto, este odor pode desaparecer por hidrlise ou oxidao
do cido ciandrico em amostras expostas ao ar. Pode tambm no ser detectado, uma
vez que uma em cada quatro pessoas devido a um defeito gentico, no detecta o
cheiro. Nestes casos, a amostra deve ser extrada com gua destilada e o extracto
verificado com papel de tornassol. Se a reaco for alcalina (positiva) deve ser
confirmada com o teste do azul da Prssia. As amostras devem ser colocadas, pelo
mdico que realiza a autpsia, em frascos de vidro devidamente selados e enviadas
ao laboratrio sem demora. Se possvel os exames devem fazer-se imediatamente,
uma vez que as possibilidades de identificao diminuem com o tempo, devido
volatilidade do cido ciandrico, possibilidade de combinao com outros
compostos e ainda facilidade com que se hidroliza.
Como as doses letais so mnimas, e o tempo que medeia entre a ingesto e a morte
curto, no vulgar fazer anlises em produtos excretados. Pelo contrrio, no
estmago e na primeira parte do intestino que se encontra a maior parte do veneno
aps a morte. Alm do estmago e duodeno, as anlises podem ser feitas no sangue,
nos rgos ricos em sangue e, em casos de suspeita de intoxicao por inalao, nos
3 - Ensaios prvios
3.1. Pesquisa de ferricianetos alcalinos
Fundamento
Em meio cido, o ferricianeto alcalino liberta o anio que, com o sulfato ferroso,
origina o azul de Turnbull (ferricianeto ferroso), mais ntido em meio clordrico.
K3Fe(CN)6
Tcnica
1- Num tubo de ensaio adicionar um pouco de amostra lquida.
2- Adicionar alguns cristais de sulfato ferroso, aquecer ligeiramente e juntar umas
gotas de HCl.
A formao de uma cor azul esverdeada traduz a presena de ferricianetos alcalinos
3.2. Pesquisa de ferrocianetos alcalinos
Fundamento
Em meio cido, o ferrocianeto alcalino liberta o anio que, com o cloreto frrico
origina o azul da Prssia (ferrocianeto frrico), mais ntido em meio clordrico.
K4Fe(CN)6 ------> [Fe(CN)64- + 4 K+
Fe(CN)64- + Fe3+ -----> Fe4[Fe(CN)6]3
(Azul da Prssia)
Tcnica
1- Num tubo de ensaio deitar um pouco de amostra lquida.
2- Adicionar uns cristais de cloreto frrico, aquecer ligeiramente e juntar umas gotas
de HCl.
A formao de uma cor azul traduz a presena de ferrocianetos alcalinos. Por vezes
forma-se uma cor esverdeada que resulta da mistura da cor azul do precipitado com
a cor amarela da soluo. Por filtrao pode ver-se o precipitado azul.
3.3. Pesquisa de cianeto de mercrio
Fundamento
O cianeto de mercrio solvel em gua quente. Por aco do gs sulfdrico d um
precipitado branco de sulfureto de mercrio que imediatamente passa a negro e que
insolvel em cido aztico e solvel em gua-rgia.
Hg(CN)2 + H2S
Tcnica
1- Tomar um pouco de amostra lquida para um tubo de ensaio e aquecer.
2- Fazer borbulhar atravs da amostra uma corrente de gs sulfdrico.
FeS + 2HCl -----> FeCl2 + H2S
Se o cianeto de mercrio estiver presente, forma-se um precipitado branco que
enegrece rapidamente passando por amarelo.
3- Confirmar a insolubilidade do precipitado em HNO3 e a solubilidade em guargia (HCl conc. + HNO3 conc. 1:1).
Em amostras que contm cianeto de mercrio, o uso de gs sulfdrico permite libertar
o HCN.
4.2. Destilao
Fundamento
O cido ciandrico, em soluo cida, arrastado pelo vapor de gua. O cido
tartrico que tem por fim acidificar o meio, usa-se por ser um cido fixo no
passando para o destilado. Alm disso, ao contrrio de outros cidos minerais fortes,
no decompe os txicos.
Tcnica
1- Tomar um pouco de amostra (4 g) para um balo, adicionar gua destilada,
suficiente para evitar ebulio tumultuosa e carbonizao da amostra (200ml) e
cido tartrico a 5%, suficiente para acidular.
2- Fazer a destilao, recolhendo o destilado num balo, onde se coloca previamente
gua destilada e onde se mergulha o tubo de recolha, de modo a evitar que se percam
as primeiras pores de HCN. Destilar cerca de metade do volume.
3- Com a gua de lavagem do condensador e da alonga, completar o volume de 200
ml e proceder aos ensaios qualitativos e de dosagem.
Para evitar qualquer perda de HCN, o destilado deve ser recolhido em banho de gelo
ou mesmo em NaOH 10%.
-------->
Fe4[Fe(CN)6]3
(Azul da Prssia)
Fundamento
Os sais de cobre reagem com a benzidina, em presena de cianetos e halogenetos,
para dar azul de benzidina.
A reaco tem lugar porque o potencial de oxidao dos ies de cobre II aumenta
quando os ies de cobre I resultantes so gastos na formao do cianeto cuproso
insolvel.
Consequentemente, fazendo actuar o cido ciandrico sobre uma soluo de acetato
de cobre - acetato de benzidina, h desenvolvimento instantneo de cor azul.
Tcnica
1- Misturar I gota de soluo em ensaio com I gota de reagente (sol. de acetato de cobre/
acetato de benzidina ) numa placa de reaco.
-------->
HI + CNI
Tcnica
1- Deitar I gota de soluo em ensaio numa tira de papel de amido iodetado (mergulhar
as tiras de papel de amido numa soluo de iodo N/100).
--------> Ag(CN)2-
-------> Ag(CN)2NH4
Por sua vez, o iodeto de prata precipita em meio amoniacal. O ponto termo ento
dado pela turvao devida formao duma nuvem opalescente branco azulada de
iodeto de prata:
AgNO3 + KI
Tcnica
1 - Tomar 25 ml de destilado para o balo Erlenmeyer.
2 - Juntar 2 ml de amnia conc. e 1 ml de sol. de iodeto de potssio a 10%.
3 - Titular com soluo de nitrato de prata N/200, at aparecimento duma turvao
permanente.
Para se obterem bons resultados, a soluo titulante deve ser adicionada
cuidadosamente prximo do ponto termo. Este mais evidente quando a titulao
realizada na semi-obscuridade fazendo-se passar um feixe de luz horizontalmente
atravs da soluo, ou, mais simplesmente, realizando a titulao sobre fundo escuro.
Clculos:
1000 ml AgNO3 N --------------- 2 x 27 = 54 g HCN
1 ml AgNO3 N/200 -------------- 0,00027 g HCN
n ml AgNO3 N/200 -------------- n x 0,00027 g HCN
n x 0,00027 g HCN ----------------- 25 ml
X g HCN -------------------------- 200 ml
Partimos de 4 g de farinha para a destilao e recolhemos 200ml de destilado.
Os resultados devem vir em g de HCN / 100 g de produto.
Nota: As farinhas no devem libertar mais do que 0,01g de HCN por 100g de
farinha.
6.2. Mtodo de Aldridge
Fundamento
um mtodo de dosagem do cido ciandrico muito sensvel, que se baseia na
reaco de Koenig, e aplicvel a material biolgico (urina, saliva, sangue, plasma ou
soro).
O cianeto convertido a brometo de cianognio pela gua de bromo.
A piridina, em meio alcalino, forma com o brometo de cianognio um sal de
piridnio. A adio a este derivado duma amina aromtica primria abre o ciclo
Tcnica
1- A 6ml do destilado (ou duma diluio na soda 0,1N), juntar sucessivamente:
- 0,5 ml de cido actico conc.
-2 ml de gua de bromo saturada (preparada recentemente)
2- Deixar em banho-maria gelado durante 10 minutos
3- Juntar, agitando:
- 2,5 ml de soluo de arsenito de sdio (3g de meta-arsenito de sdio em 100ml de
NaOH N/5)
- 5 ml de etanol a 95
Nota
Na ausncia de tiocianatos (que reagem de modo semelhante) pode o processo
realizar-se na urina e saliva sem tratamento preliminar, ou no sangue, plasma e soro
depois de desproteinizado pelo cido tricloroactico (1ml de sangue tratado com 2ml de
cido tricloroactico a 5%). Uma vez que o cido tiocinico no voltil mais seguro
LCOOL METLICO
1 - Introduo
A pesquisa toxicolgica do lcool metlico pode efectuar-se no sangue, tecidos
(essencialmente fgado e intestinos), contedo estomacal, vinhos, aguardentes e
outros lquidos suspeitos, ar, etc.
A amostra a analisar acidulada com cido tartrico e gua destilada para a tornar
fluida, destilando-se em seguida.
2 - Ensaios de pesquisa
2.1. Tcnica de Denigs
Fundamento
O lcool metlico reduz muito rapidamente a soluo de permanganato de potssio a
1:1000 em meio cido, oxidando-se a aldedo frmico (o lcool etlico oxida-se
muito lentamente):
2 (MnO4- + 8 H+ + 5 e- -------->
Mn2+ + 4 H2O)
5 (CH3OH --------> HCHO + 2 H+ + 2 e-)
.
2 MnO4- + 5 C2O42- + 16 H+
Tcnica
1- Num tubo de ensaio deitar 2,5 ml do destilado e adicionar 0,5 ml da mistura
oxidante (KMnO4 3g; H3PO4 85% 15 ml; gua destilada qbp 100 ml).
2- Aps 10 minutos temperatura ambiente, descorar com 1,5 ml de soluo de
cido oxlico a 5% em cido sulfrico a 50%.
3- Juntar 2,5 ml de reagente de Schiff ( fucsina bsica 0,2 g em 120 ml de gua destilada
quente; arrefecer e juntar sulfito de sdio anidro 2 g dissolvido em 20 ml de gua destilada; por fim 2
ml de HCl concentrado) e esperar 10 minutos. A formao da cor violeta dentro de 10
3 - Dosagem
3.1. Mtodo colorimtrico
Fundamento
O lcool em presena da soluo de permanganato de potssio em meio cido, sofre
uma oxidao a aldedo frmico.
O bissulfito de sdio tem uma aco anloga indicada para o cido oxlico na
pesquisa.
O cido cromotrpico em soluo cida concentrada liga-se ao aldedo originando
um composto de cor prpura, com uma absoro ptima no comprimento de onda de
570 nm. O cido estvel em meio sulfrico.
Tcnica
Oxidao a formaldedo
1- Em balo aferido de 10 ml mergulhado em banho de gelo, introduzir
sucessivamente 2 ml de destilado, 0,5 ml de cido fosfrico a 85% e 0,05 ml de
soluo aquosa de KMnO4 a 5%.
2- Deixar no banho de gelo durante 5 minutos, agitando ocasionalmente.
3- Descorar por adio de quantidade suficiente de soluo saturada de bissulfito de
sdio (HSO3Na) evitando qualquer excesso de reagente, o que poderia provocar uma
opalescncia ou um enfraquecimento da cor.
Dosagem espectrofotomtrica do aldedo frmico
4- Juntar por pequenas pores de 1 ml, arrefecendo depois de cada adio, 5 ml de
reagente cromotrpico (cido cromotrpico 5g/100ml em gua destilada. Na altura do emprego,
diluir 4 ml desta soluo com cido sulfrico 15 M, ou seja a 80% em volume at perfazer 100 ml).
570 nm.
Nota
Para a curva de calibrao usar metanol puro isento de acetona, purificado por
destilao sobre xido de clcio, rejeitar o primeiro 1/3 do destilado recolhendo as
fraces de 64,5 - 65 C.
FLOR
1 - Pesquisa de flor e fluoretos na gua
---------->
BaSiF6 + 2 CH3COOH.
Tcnica
1- Em cadinho de porcelana deitar 10-20 ml de gua em anlise e evaporar secura
em bico de Bunsen.
2- Juntar ao resduo um cristal de sulfato de prata e algum vidro pulverizado.
Misturar.
3- Adicionar um pouco de HCl concentrado.
4- Tapar com vidro de relgio, no qual se coloca previamente pela parte inferior, I
gota de soluo de acetato de brio 10%.
5- A presena de flor ou fluoretos revela-se por um anel de slica e na parte central,
cristais incolores de fluossilicato de brio visveis ao microscpio.
SoluoMe
guaemanlise
HClconc.
Reag.deBOER
guadestilada
Tubo 1
2ml
1ml
1ml
11ml
Tubo 2
4ml
1ml
1ml
9ml
Tubo 3
6ml
1ml
1ml
7ml
Tubo 4
8ml
1ml
1ml
5ml
Tubo 5
10ml
1ml
1ml
3ml
1ml
1ml
3ml
10ml
Tubo 6
525nm.
TESTE DE REINSCH
Permite a deteco de uma forma rpida e fcil, ainda que no definitiva, de certos
metais, como o arsnio, mercrio, bismuto e antimnio (As, Hg, Bi, Sb), por
deposio do metal superfcie de uma espiral de cobre, em solues fortemente
cidas. A grande vantagem de que os metais podem assim ser separados dos fluidos
e dos tecidos sem prvia destruio da matria orgnica.
Nota
a) - As espirais de cobre devem estar limpas e brilhantes ( limpar com HCl ou HNO3
diludo 1:1).
b) - Este teste tambm pode aplicar-se a rgos finamente divididos, tais como o
fgado, rim, etc., sem prvia destruio da matria orgnica.
c) - A deposio de bismuto um pouco mais demorada.
d) - O As e o Hg podem encontrar-se por muitos dias na urina. Em exposies
crnicas, possvel encontr-los vrias semanas depois.
e) - Se o fio de cobre permanecer inalterado, pode concluir-se da ausncia de As, Sb,
Hg e Bi ou da sua presena em pequena quantidade.
f) - O aspecto do fio de cobre no pode aceitar-se como definitivo, mas to s como
ponto de partida para mtodos de confirmao especficos.
Tcnica
1 - Num Erlenmeyer (ou num tubo de ensaio) contendo 20 ml de urina (ou contedo
gstrico, alimento, etc.), juntar 3 ml de HCl conc. (fazer paralelamente um ensaio em
branco com urina normal).
2 - Introduzir uma pequena espiral de cobre bem limpa e brilhante.
3 - Colocar em banho-maria fervente, durante cerca de uma hora. Evitar que entre em
ebulio para prevenir a evaporao. Se necessrio, o volume pode ser mantido com
HCl 10%.
4 - Interpretao dos resultados.
Metal
Sensibilidade do
teste (aprox.)
Sensibilidade
Arsnio
Mercrio
Preto
Prateado-brilhante
0,010 mg %
0,075 mg %
0,5 g/ml
2,5 g/ml
Bismuto
Antimnio
Preto-acinzentado
Preto-prpura brilhante
0,030 mg %
0,030 mg %
1,0 g/ml
1,0 g/ml
ARSNIO
O arsnio pode existir normalmente no solo e nos alimentos. Os seus derivados
existem na indstria, nas artes e na fitofarmcia.
As intoxicaes agudas podem ser causadas pela utilizao de arsnio com fins
criminosos, da tentativa de suicdio e de acidentes diversos: alimentos (vinhos
arsenicais, cervejas e alimentos inquinados); origem teraputica e outras
(conservao de peles e animais embalsamados, luta contra parasitas agrcolas e
calcinao industrial de minrios arsenferos).
Na pesquisa e no doseamento de arsnio nos meios biolgicos, podem existir erros
por defeito (volatilizao) e por excesso devido introduo de As pelos reagentes e
pela presena de antimnio (d testes positivos). Na interpretao dos resultados das
anlises deve considerar-se o arsnio normal, o arsnio impureza de substncias
alimentares, o arsnio medicamentoso e o arsnio no solo.
----------> 2 As + 5 Sn4+
2 As3+ + 3 Sn2+
----------> 2 As + 3 Sn4+
----------> As H3 + 5 H2O
H3AsO4 + 4 H2
Tcnica
1 - Num matraz de 100 ml deitar 3ml de soluo em ensaio. Misturar com alguns
gros de zinco e cido sulfrico diludo. (Praticar paralelamente um ensaio em
branco s com os reagentes).
2 - Colocar um tampo de algodo no colo do matraz e suspender uma tira de papel
de filtro embebida em soluo de nitrato de prata a 20%.
Na presena de arsnio, forma-se uma mancha negra.
Cilindro
de
disperso com
vidro poroso
L de vidro
Balo de
Digesto e
Gerador
Fundamento
O princpio em que se baseia esta tcnica, o da reaco da arsina proveniente dos
compostos oxigenados do arsnio com molibdato de amnio em condies
convenientes, e posteriormente reduzido pelo sulfato de hidrazina, com formao
dum complexo de molibdnio, fortemente corado de azul.
Tcnica
A) DIGESTO - mineralizao
O balo do aparelho de Gutzeit pode servir como balo de digesto
1 - Colocar 5-10 ml de sangue, 25 ml de urina ou 5-10 g de tecido, no balo.
2 - Juntar 10 ml de cido ntrico concentrado, 4 ml de cido sulfrico concentrado e 5
ml de cido perclrico 60-70%.
3 - Colocar a mistura da digesto em banho de vapor por vrias horas at que se torne
homognea, transferir para uma placa de aquecimento e aquecer um pouco mais
fortemente at que se libertem fumos de cido perclrico (destruio da matria
orgnica).
4 - Se a mistura comear a ficar castanha, retire-a da placa de aquecimento, arrefeaa e junte 5-10 ml de cido ntrico e 1-2 ml de cido perclrico. Continuar a aquecer
at que a mistura fique clara e ento aquecer fortemente at libertao de fumos de
SO3. Arrefecer.
5 - Juntar 20 ml de gua e 0,1 g de NaHSO3.
6 - Aquecer no banho de vapor por 10 minutos e transferir depois a mistura para a
placa quente aquecendo uma vez mais at libertao de fumos de SO3. A mistura, se
estiver clara e transparente, est pronta para a libertao de arsina depois de
arrefecida.
B) DESTILAO E DOSAGEM DO ARSNIO
Mtodo colorimtrico
1 - Adicionar 1 ml de soluo de SnCl2 40%, e 40 ml de gua
2 - Juntar 2 ml de KI a 15% mistura, deixar ficar 15 minutos antes de introduzir 5 g
de grenalha de zinco activado com Cu SO4 e adaptar o cilindro de disperso do gs.
3 - Deixar borbulhar a arsina libertada por 1 hora atravs de 5 ml de soluo de iodo
0,001 N num tubo de ensaio introduzido em banho de gelo.
4 - Ao fim de 1 hora retirar o tubo com a mistura de iodo.
5 - Juntar 0,5 ml de soluo de molibdato de amnio (a 1% em H2SO4 5N) e 0,2 ml de
soluo de sulfato de hidrazina a15%. Misturar bem depois de cada adio
6 - Colocar a mistura num banho de gua fervente por 10 minutos, arrefecer e ler a
cor azul a 865 nm contra um branco de gua. A cor azul estvel por 24 horas. A
quantidade de arsnio na amostra determinada a partir duma curva previamente
calibrada de arsnio, preparada do mesmo modo.
Interpretao dos resultados
Concentraes aproximadas de Arsnio nos tecidos, expressas em mg/100 g,
segundo vrios autores
Fgado
Adulto saudvel
normal
Tratado com arsenicais
0,001- 0,01
Rim
0,001- 0,01
--
--
0,1
0,02
Envenenamento arsenical
agudo
1 - 50
0,5 - 15
Sangue
Crebro
0 - 0,0030
Urina
0,001
Cabelo
0,020-0,067
0,01 -0,025
--
0,030
--
0,1
--
--
--
inorgnicos
0,1 - 1,5
0,05 - 2,0
0,008 - 0,5
CROMATOGRAFIA
1 Generalidades
2 - Anlise
2 1- Anlise Qualitativa
A identificao de uma amostra por cromatografia GL ou HPLC baseia-se no facto
de, sob idnticas condies de trabalho, os valores de reteno de uma dada
substncia manterem-se constantes.
O tempo de reteno de cada um dos componentes, ou seja, o tempo que decorre
desde a injeco da amostra e a sada da concentrao mxima do composto, uma
constante fsica para determinado componente em condies bem definidas. Este
tempo, que depende exclusivamente do coeficiente de partilha entre a fase mvel e a
fase estacionria, pode ser modificado por alterao de certos parmetros consoante
o tipo de cromatografia GL ou HPLC.
Para que a identificao possa ser possvel, os padres devem ser analisados nas
mesmas condies da amostra. Deve, no entanto, notar-se que uma simples anlise
de cromatografia no identifica completamente uma determinada amostra, uma vez
que existe uma possibilidade real de substncias diferentes apresentarem
comportamento cromatogrfico idntico para um dado sistema, sobretudo quando a
origem e composio da amostra so desconhecidas. Informao mais positiva
obtida pela repetio da anlise (amostra e padro), em outra coluna de polaridade
diferente da primeira, (ou fazendo variar qualquer outro parmetro que influencie o
tempo de reteno), uma vez que bem mais raro o fenmeno de duas substncias se
comportarem identicamente em condies diferentes. Porm a identificao
definitiva e inequvoca de determinada substncia s ser possvel usando um
conjunto de mtodos analticos, como por exemplo, outros mtodos cromatogrficos,
mtodos espectrofotomtricos de I.V., R.M.N. ou pelo acoplamento da cromatografia
a outras tcnicas, como por ex. , espectrometria de massa GC-MS, LC-MS, a
espectroscopia de radiao infravermelha GC-FTIR, LC-FTIR entre outras.
INTRODUO
MATERIAL E MTODOS
Equipamento
Cromatgrafo gasoso Varian
Detector de ionizao de chama (FID)
Integrador/ registador Spectra Physics
Coluna de empacotamento com enchimento Porapack Q 150-200 mesh
Seringa Hamilton de 10 L
Reagentes
Etanol, metanol, isopropanol, acetaldedo, acetona e n-propanol Merck
Padres:
Soluo aquosa de etanol - 0,1 mL/100 mL
Soluo aquosa de isopropanol - 0,125 mL/100 mL
Soluo aquosa de metanol - 0,125 mL/100 mL
Condies cromatogrficas
Coluna analtica Porapack Q 150-200 mesh
Temperatura do injector (manual) 210C
Temperatura do forno 158C/ temperatura constante ou isotrmica
Temperatura do detector 220C
Gs transportador Azoto com um fluxo de 30 mL/min
Fluxo para os gases do detector foi de 300 mL/min para o ar e 30 mL/min para o
hidrognio
Procedimento
1- Injectar 2 L de cada um dos padres
2- Injectar 2 L da amostra
3- Analisar os tempos de reteno para identificao dos componentes da amostra
4- Escolher o melhor processo de quantificao (Mtodo do padro interno e/ou
mtodo do padro externo)
5- Programar o integrador para o mtodo escolhido
6- Injectar novamente padres e amostra
Validao
Linearidade Curva de calibrao determinada com solues aquosas de etanol
num intervalo de concentraes de 0,08 a 1,0 g /L, utilizando a
relao rea de pico/concentrao
Especificidade, recuperao, exactido e preciso
Limite de deteco, limite de quantificao e estabilidade
RESULTADOS/CONCLUSO
INTRODUO
MATERIAL E MTODOS
Equipamento
Sistema de filtrao de solventes por vcuo Millipore com membrana de 0,45m
Banho de ultra-sons
Cromatgrafo Gilson equipado com injector Rheodyne e loop de 10 L
Detector Gilson de UV
Integrador/ registador Spectra Physics
Seringa Hamilton de 10 L
Coluna cromatogrfica de fase reversa Varian MCH10, 30x4 mm e 10 m de
tamanho de partcula, precedida de um pr-filtro metlico
Reagentes
Acetonitrilo, Lichrosolv, Merck
Metanol, Lichrosolv, Merck
gua Milli-Q, Resistividade 18 M cm
Padres:
Soluo trabalho do Padro DDT- 0,02 mg/mL
Soluo trabalho do Padro Aldrina- 0,02 mg/mL
Soluo trabalho do Padro Endrina- 0,01 mg/mL
Preparao da amostra
Partindo de 500 mL de gua de um rio, na proximidade de um campo de cultivo da
regio centro, procedeu-se concentrao dos pesticidas utilizando SPE (coluna SepPak C18) com vcuo. O DDT ficou retido na coluna e foi eludo com 1 mL de metanol.
O factor de enriquecimento da amostra foi de 500.
Condies cromatogrficas
Uso de uma coluna de fase reversa C18 para separar, identificar e quantificar
pesticidas
Uma eluio isocrtica/ Temperatura ambiente
A fase mvel escolhida para a eluio destes pesticidas foi uma mistura de metanol:
acetonitrilo: gua (73:10:17 v/v), previamente filtrada e desgaseificada.
O fluxo utilizado durante a anlise cromatogrfica foi de 1,3 mL/min
Deteco com UV/VIS a 224 nm com uma sensibilidade de 0.05 AUFS
Procedimento
1- Injectar 10 L de cada um dos padres
2- Injectar 10 L da amostra
3- Analisar os tempos de reteno para identificao dos componentes da amostra
Validao
Linearidade Curva de calibrao com concentraes de DDT entre 0,01 e 0,2
mg/L, utilizando a relao altura de pico/concentrao
Especificidade, recuperao, exactido e preciso
Limite de deteco, limite de quantificao e estabilidade
RESULTADOS/CONCLUSO
BIBLIOGRAFIA
CASSARETT E DOULL,S