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CONSEJO MEXICANO REGULADOR DE LA CALIDAD DEL MEZCAL A.C.

LABORATORIO DE CALIDAD
Mtodo de ensayo Determinacin de azcares Reductores Directos y Totales
Mtodo de volumtrico de Lane-Eynon
Fecha de emisin:
2013-05-28
1.

Fecha de revisin:
2013-05-28

Revisin No. 01

Clave: MOE-AR-05

OBJETIVO

Este procedimiento establece el mtodo de ensayo (prueba) para la determinacin de azcares


reductores directos y azcares reductores totales contenidos en las materias primas utilizadas en la
elaboracin de bebidas alcohlicas, en los materiales en proceso de produccin, as como las bebidas
alcohlicas y jarabes, de acuerdo norma NMX-V-006-NORMEX-2013 Bebidas AlcohlicasDeterminacin de Azcares Reductores Directos y Totales.
2.

ALCANCE

Este mtodo aplica en la determinacin de azcares reductores directos y azcares reductores totales
en las materias primas azucaradas, tales como agave crudo y cocido, materiales en proceso de
produccin tales como jugos de agave, mostos, jarabes, azcares , en la bebida alcohlica mezcal en
todos sus tipos y categoras, as como en vinazas del mismo, realizado por el laboratorio de calidad del
COMERCAM, de acuerdo norma NMX-V-006-NORMEX-2013 Bebidas Alcohlicas-Determinacin de
Azcares Reductores Directos y Totales.
3.

TERMINOS Y DEFINICIONES

Azcares reductores: monosacridos que contienen en su molcula un grupo aldehdo, los cuales
pueden ser detectados o estimados cuantitativamente por su oxidacin con CU2+, Ag+ o ferrocianuro,
en un medio alcalino y que pueden ser:
Azcares reductores directos (ARD): son los azcares reductores cuantificables directamente en la
muestra.
Azcares reductores totales (ART): son monosacridos que poseen grupos carbonilos libres, que se
obtienen de la hidrlisis cida y trmica de los polisacridos.
Azcar invertido: Es una mezcla equimolar de glucosa (dextrosa) y fructosa (levulosa) obtenida por la
hidrlisis de la sacarosa.
Factor de Fehling: Es la cantidad en gramos de azcar invertido utilizada para reducir 10 mL de la
mezcla de la solucin de Fehling.
Solucin de Fehling: Mezcla de partes iguales de la solucin A (Sulfato de Cobre) y solucin B
(solucin alcalina de tartrato) preparada para el momento de hacer la determinacin.
Muestra: Consiste de una o ms unidades de producto tomadas de un lote o partida. Estas deben
tomarse estrictamente al azar, sin considerar su calidad. El nmero de unidades de producto en la
muestra corresponde al tamao de la misma.
Muestra representativa: Siempre que sea posible, el nmero de unidades en la muestra se debe
seleccionar en proporcin al tamao de los sublotes o subpartidas o partes que componen el lote o

Elabor: Jefe de Laboratorio

Revis: Coordinador de Calidad

Autoriz: Director General


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LABORATORIO DE CALIDAD
Mtodo de ensayo Determinacin de azcares Reductores Directos y Totales
Mtodo de volumtrico de Lane-Eynon
Fecha de emisin:
2013-05-28

Fecha de revisin:
2013-05-28

Revisin No. 01

Clave: MOE-AR-05

partida, identificadas por un criterio racional. Cuando se desee un muestreo representativo, se


seleccionan las unidades de producto de cada parte del lote o partida estrictamente al azar.
Agave: Planta de la familia de las Amarilidceas, de hojas largas y fibrosas de forma lanceolada, de
color verde cuya parte aprovechable para la elaboracin de mezcal es la pia o cabeza (tallo y base de
sus hojas).
Mosto: Jugo de agave que ser sometido a fermentacin.
Mezcal: Bebida alcohlica regional obtenida por destilacin y rectificacin de mostos preparados
directa y originalmente con los azcares extrados de las cabezas maduras de los agaves permitidos,
previamente hidrolizadas o cocidas, y sometidas a fermentacin alcohlica con levaduras, cultivadas o
no, siendo susceptible de ser enriquecido, para el caso del Mezcal tipo II, con hasta 20% de otros
carbohidratos en la preparacin de dichos mostos, siempre y cuando no se eliminen los componentes
que le dan las caractersticas de este producto, no permitindose las mezclas en fro.
Mezcal tipo II: Es aquel producto que se obtiene de la destilacin y rectificacin de mostos en cuya
formulacin se han adicionado hasta un 20% de otros carbohidratos permitidos por las disposiciones
legales correspondientes. Este tipo de mezcal es joven, reposado o aejo y susceptible de ser
abocado.
Agua grado II: Es el agua con muy poca cantidad de contaminantes inorgnicos, orgnicos o
coloidales y es satisfactoria para los propsitos de sensibilidad analtica requerida, incluyendo la
Espectrometra de Absorcin Atmica y la determinacin de constituyentes en trazas; la cual debe ser
producida, por ejemplo: con destilacin simple, o desionizacin u smosis inversa seguida de
destilacin.
4.

GENERALIDADES

Uno de los factores ms importantes para la elaboracin de bebidas alcohlicas, es el contenido de


azcares reductores directos y totales, siendo su cuantificacin necesaria para controlar la produccin
y la calidad de dichos productos.
Los monosacridos poseen un poder reductor, que deben al grupo carbonilo libre que tienen en su
molcula. Este carcter reductor puede ponerse de manifiesto por medio de una reaccin redox
llevada a cabo entre una solucin de sulfato de cobre (in cprico) y una solucin amortiguadora de
tartrato de sodio y potasio que se calientan en presencia de un monosacrido. Las solucines de esta
sal tienen color azul. La reaccin con el azcar reductor, forma xido de cobre (in cuproso I) de color
rojo. De este modo, el cambio de color indica que se ha producido la citada reaccin y que, por lo
tanto, el azcar presente es reductor.
En el mtodo de Lane-Eynon la oxidacin se sigue por titulometra usando un indicador redox.
5.

CONTROL DE CALIDAD

Elabor: Jefe de Laboratorio

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Clave: MOE-AR-05

El control de calidad se realizar de acuerdo al PR-LAB-20 Aseguramiento de la calidad de los


resultados de ensayo.
Para este mtodo se utiliza la bureta calibrada y materiales de referencia certificados trazables a las
unidades el sistema SI, se mantendrn los parmetros de repetibilidad y reproducibilidad dentro de los
sealados en este mtodo.
a. REPETIBILIDAD DEL MTODO.
La Repetibilidad de los resultados de las mediciones con este mtodo no debe exceder de + 5 %, cuya
determinacin se realizar de acuerdo a los grficos de control (precisin), por duplicados para cada
da o por cada lote de muestras, este valor ser registrado en el registro RC-LAB-20-02 grficos de
control.
b. REPRODUCIBILIDAD DEL MTODO.
La reproducibilidad de los resultados de las mediciones con este mtodo no debe exceder de + 15%,
cuya determinacin se realizar de acuerdo al procedimiento PR-LAB-20 Aseguramiento de la calidad
de los resultados de ensayo e IT-LAB-15-01 Validacin del mtodo.
6.

EQUIPOS E INSTRUMENTOS
6.1 EQUIPO CALIBRADO

Balanza analtica con una resolucin de 0,1 mg


Termmetro -20 a 150C
Bureta de 50 mL con graduacin de 0,1 mL (verificada o calibrada)
Matraces volumtricos clase A de 100, 200, 500 y 1000 mL (verificados)
Pipetas volumtricas clase A de 5 mL y de diferentes capacidades (verificadas).

Registrar el uso del equipo en la bitcora BIT-LAB-16-02 Control de balanza analtica y en la BIT-LAB16-10 Control de termmetro.
Registrar la verificacin de la calibracin de los equipos en el formato RC-LAB-16-06 Verificacin de la
calibracin de los equipos.
6.2 EQUIPO VARIOS

7.

Bao de agua con control de temperatura


Estufa de desecacin con control de temperatura
Refractmetro
REACTIVOS Y MATERIALES

Elabor: Jefe de Laboratorio

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Revisin No. 01

Clave: MOE-AR-05

7.1 REACTIVOS
7.1.1 MATERIAL DE REFERENCIA

Sacarosa (Material trazable a patrones nacionales y/o internacionales).


7.1.2 REACTIVOS

Agua mnimo Grado II para dilucin de patrones (vase anexos).


Agua grado II III para la dilucin de las muestras (ver anexos).
cido Clorhdrico concentrado (36,5 a 38% de pureza)
Solucin de Fehling A
Solucin de Fehling B
Hidrxido de Sodio (NaOH)
Azul de Metileno (solucin al 1%)
Fenolftalena (solucin al 1%)
Alcohol etlico con concentracin mnima de 95% Alc. Vol.

NOTA:
La solucin de Fehling A y solucin de Fehling B pueden ser preparados a partir de sulfato de cobre
pentahidratado (CuSO4.5H2O) y tartrato de sodio y potasio tetrahidratado (KNaC 4O6.4H2O), como se
indica en el punto 9.1 de este procedimiento.
7.2 MATERIALES

8.

Capsula, crisol de porcelana o cualquier otro material para desecar el material de referencia.
Matraces Erlenmeyer de 250 mL
Parrilla elctrica de calentamiento con agitacin magntica
Perlas de vidrio
Goteros color mbar
Cronmetro
Material comn de laboratorio, soporte universal, pinzas, malla de asbesto, vaso de precipitado,
entre otros.
PRECAUCIONES
8.1 MUESTRAS

Las muestras una recibidas en el laboratorio deben analizarse inmediatamente o debern


guardarse en congelacin hasta su anlisis, pare evitar la fermentacin inicie o contine.
8.2 ANALISTA

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9.

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Revisin No. 01

Clave: MOE-AR-05

Emplear el equipo de seguridad necesario y adecuado, lentes de seguridad y guantes para el


manejo de sustancias txicas.
Tomar en cuenta las indicaciones contenidas en las hojas de seguridad de cada reactivo, vase
la carpeta CAT-10 Hojas de seguridad.
PROCEDIMIENTO
9.1. PREPARACIN DE LAS SOLUCINES
9.1.1.

SOLUCIN INDICADORA DE AZUL DE METILENO EN AGUA AL 0,2% M/V AL 1%


(M/V)

Pesar 0,2 g 1,0 g de azul de metileno, transferir y disolver en un matraz volumtrico de 100 mL y
llevar a volumen con agua grado II. Transferir la solucin a un frasco gotero color mbar o utilice la
solucin acuosa de azul de metileno al % adquirida.
9.1.2.

SOLUCIN DE FENOLFTALENA AL 1% (M/V)

Pesar 1,0 g de fenolftalena y transferir a un matraz volumtrico de 100 mL, agregar 50 mL de alcohol
etlico, una vez disuelto, adicionar agua grado II y homogeneizar. Transferir la solucin a un frasco
gotero color mbar o utilice la solucin de fenolftalena al 1% adquirida.
9.1.3.

SOLUCIN DE HIDRXIDO DE SODIO 6 N (6 M)

Pesar 240 g de NaOH (teniendo cuidado, ya que es una reaccin exotrmica), adicionar 200 mL de
agua grado II y transferir a un matraz volumtrico de 1000 mL, llevar a 293 K (20 C) y aforar con agua
grado II a la misma temperatura.
9.1.4.

SOLUCIN DE HCl AL 50% (V/V)

Adicionar de 250 a 300 mL de agua grado II en un matraz volumtrico de 1000 mL, agregar con
cuidado, lentamente y resbalando por las paredes del matraz 500 mL del cido clorhdrico
concentrado, mezclar con movimientos rotatorios y dejar que tome la temperatura ambiente, aforar con
agua grado II.
NOTA: Medir la concentracin de la solucin resultante con brixmetro a 24,85 Brix o con densmetro
a 293 K (20 C) a 1,029 g/mL, ajustar si es necesario.
9.1.5.

SOLUCIN DE FEHLING A O SOLUCIN DE COBRE

Pesar 34,639 g de Sulfato de Cobre pentahidratado (CuSO 4.5H2O), disolver en 100 mL de agua grado
II y transferir a un matraz volumtrico de 500 mL y aforar con la misma agua.
9.1.6.

SOLUCIN DE FEHLING B O SOLUCIN ALCALINA DE TARTRATO

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Revisin No. 01

Clave: MOE-AR-05

Pesar 173 g de tartrato de sodio y potasio tetra hidratado (KNaC 4O6.4H2O), disolver en 100 mL de
agua grado II, pesar 50 g de hidrxido de sodio (NaOH) y disolver con agua grado II, transferir estas
soluciones en un matraz volumtrico de 500 mL y aforar con agua grado II. Dejar reposar la solucin
durante 2 das y volver a aforar con la misma agua.
9.1.7.

SOLUCIN ESTNDAR DE AZCAR INVERTIDO EN AGUA AL 1% (M/V)

Pesar 9, 5 g de sacarosa (en caso necesario hacer ajuste por pureza) desecada previamente a 60 C
durante 2 horas, disolver en aproximadamente 100 mL de agua grado II, adicionar 2 mL de HCl con
una concentracin de 36,5 a 38% 5 mL al 50% v/v para realizar la hidrlisis y obtener los
monosacridos, mediante la siguiente ecuacin:
C12H22O11 + H2O
HCl ENZIMAS
Sacarosa
PM=342,3

C6H12O6 + C6H12O6
Glucosa + Fructosa
PM=180,16 PM=180,16

La hidrlisis se puede llevar a cabo de acuerdo a cualquiera de las siguientes condiciones:


a. Almacenar a temperatura de 285 - 288 K (12 - 15 C) durante 7 das.
b. Almacenar durante 3 das a una temperatura de 293 - 298 K (20 - 25 C) o
c. Calentar durante 15 min a una temperatura de 341 - 343 K (68 -70 C).
Una vez que la mezcla esta invertida y a temperatura ambiente llevar a volumen de aforo de 1 litro con
agua grado II. Esta solucin es estable por tres meses. Un mililitro de esta solucin equivale a 0,01 g
de azcares reductores.
La solucin estndar de azcar debe ser preparada a tal concentracin que el gasto sea ms de 15 mL
y menos de 50 mL sean requeridos para reducir todo el cobre; por lo que se tiene que realizar la
siguiente dilucin:
9.1.8.

SOLUCIN ESTNDAR DE AZCAR INVERTIDO EN AGUA AL 0,2% (M/V)

Tomar una alcuota de 50 mL de la solucin anterior, transferirla a un matraz Erlenmeyer o a un matraz


volumtrico de 250 mL, aadir 3 gotas de fenolftalena como indicador y neutralizar con solucin de
NaOH 1 N hasta obtener el color rosado dbil o neutralizar potenciomtricamente hasta un pH de 7 a
8, transferir cuantitativamente a un matraz aforado de 250 mL y llevar a la marca de aforo con agua
grado II. Un mililitro de esta solucin equivale a 0,002 g de azcares reductores.
9.2.

ESTANDARIZACIN DE LA SOLUCIN DE FEHLING

9.2.1. Medir volumtricamente 5 mL de solucin de Fehling A (de Sulfato de Cobre) y transferirlos en


un matraz Erlenmeyer de 250 mL. Hacer lo mismo con la solucin Fehling B (de tartrato de
sodio y potasio) colocndola en el mismo matraz formando as 10 mL de la mezcla de solucin
Fehling.

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Revisin No. 01

Clave: MOE-AR-05

9.2.2. Adicionar al matraz que contenga la mezcla de solucin Fehling 20 mL de agua grado II y
aadir algunas perlas de ebullicin para mantener la ebullicin uniforme.
9.2.3. El matraz Erlenmeyer con la mezcla de la solucin de Fehling se coloca sobre la parrilla de
calentamiento y calentar la mezcla hasta ebullicin.
9.2.4. Enjuagar la bureta con la solucin de azcar invertido y llenarla con la misma solucin.
9.2.5. Adicionar 24 mL de la solucin estndar de azcar invertido al 0,2% (m/v) al matraz Erlenmeyer
y mantener la ebullicin moderada por 2 minutos, tener la precaucin de que el cuerpo de la
bureta no est en contacto directo con los vapores de la muestra.
9.2.6. Sin quitar de la fuente de calentamiento, adicionar 1 mL de solucin de azul de metileno al 0, 2
% m/v de 3 a 4 gotas de solucin al 1 % m/v; completar la titulacin dentro de un tiempo total
de ebullicin de 3 minutos con adiciones pequeas (de 2 a 3 gotas) de la solucin de azcar
hasta decolorar el indicador (mantener la salida del vapor continuamente lo cual previene la
reoxidacin del cobre o el indicador).
9.2.7. Luego de completar la reduccin del cobre, el azul de metileno es reducido a un compuesto
incoloro y la solucin toma el color rojo ladrillo de CU 2O que tena antes de la adicin del
indicador.
9.2.8. El tiempo total para hacer la titulacin no debe exceder de 3 minutos, de los cuales 2 minutos
para agregar casi la totalidad de la solucin de azcar invertido y 1 minuto ms para agregar el
indicador y concluir dicha titulacin.
9.2.9. Hacer dos determinaciones y los volmenes de solucin de azcar invertido gastado no debe
diferir en ms de 0,1 mL.
9.2.10. El volumen gastado en la estandarizacin debe ser de 25.6 mL, obtenido por duplicado, de ser
menor adicionar sulfato de cobre a la solucin de Fehling A y valorar nuevamente hasta obtener
un gasto de 25.6 mL. Si gasta ms 25.6 mL, debe diluirse la solucin de Fehling A con agua e
iniciar el proceso de estandarizacin de nuevo.
9.2.11. Con la solucin estandarizada de la forma anteriormente descrita, se puede utilizar las
siguientes tablas:
9.2.12. Usar la tabla No. 2 para conocer la concentracin de los diferentes tipos de azcares en mg de
azcar / 100 mL cuando se utilizan 10 mL de la mezcla de la solucin de Fehling.
NOTAS:
a) Si no se desea estandarizar la mezcla de solucin de Fehling con la solucin de azcar
invertido se debe calcular el factor de Fehling para cada tipo de azcar a cuantificar.

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Fecha de revisin:
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Revisin No. 01

Clave: MOE-AR-05

b) Se debe confirmar la estandarizacin de la mezcla de Fehling para asegurar que el valor sea
correcto.
9.3.

PREPARACIN DE MUESTRAS

9.3.1. MUESTRAS SOLIDAS.


En el caso de muestras slidas, pesar la cantidad de muestra como se indica en la tabla No. 1 (ver
Anexos), realizar la dilucin recomendada en la tabla, tomar una alcuota y transferirla a un matraz
Erlenmeyer de 125 mL, disolverla completamente con 50 mL de agua grado II.
9.3.1.1.

AGAVE CRUDO O COCIDO

Cortar la muestra de agave en trozos pequeos de aproximadamente 5 mm y homogenizar, se pesan


aproximadamente 100 g en un vaso de precipitado de 250 mL.
Vaciar el agave pesado a la licuadora, y adicionar 3000 mL de agua grado III y licuar por 5 minutos,
posteriormente filtrar la muestra, proseguir con la dilucin marcada en la tabla No. 1.
9.3.1.2.

BAGAZO DE AGAVE

Cortar el bagazo en trozos de aproximadamente 5 mm y homogenizar la muestra, pesar


aproximadamente 500 g en una bolsa plstica de acuerdo a la cantidad de bagazo.
Vaciar el bagazo de agave a la licuadora con 4000 mL de agua grado III por 5 minutos y
posteriormente filtrar la muestra, proceder con la dilucin marcada en la tabla No. 1.
Registrar el peso de la muestra en la BIT-LAB-15-01 Datos de anlisis y el uso de la balanza en la
bitcora BIT-LAB-16-02 Control de balanza analtica.
9.3.2. MUESTRAS LIQUIDAS.
En el caso de muestras lquidas, determinar los grados Brix y medir la cantidad de muestra
recomendada en la tabla No. 1 y transferirla a un matraz Erlenmeyer o bien a un matraz volumtrico de
la capacidad adecuada.
9.3.2.1.

JUGO DE AGAVE

Determinar los grados Brix y medir la cantidad de muestra recomendada en la tabla No. 1 y transferirla
a un matraz Erlenmeyer o bien a un matraz volumtrico de la capacidad adecuada.
9.3.2.2.

MOSTO FERMENTADO

Determinar los grados Brix y medir la cantidad de muestra recomendada en la tabla No. 1 y transferirla
a un matraz Erlenmeyer o bien a un matraz volumtrico de la capacidad adecuada.

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9.4.

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Clave: MOE-AR-05

DETERMINACIN DE AZCARES REDUCTORES TOTALES (ART)

9.4.1. Para la determinacin de ART, adicionar 5 mL de cido Clorhdrico al 50% v/v, al matraz que
contiene la muestra.
9.4.2. Colocar el matraz en el bao Mara a temperatura controlada de 341 a 343 K (68-70 C)
introduciendo un termmetro al matraz y esperar a que la muestra llegue a esta temperatura y
mantenindolo as por 5 15 minutos dependiendo del tipo de muestra (consultar la tabla No.
1).
9.4.3. Enfriar a temperatura ambiente la solucin con la muestra ya invertida.
9.4.4. Pasar cuantitativamente la solucin invertida a un matraz volumtrico de la capacidad como se
menciona en la tabla No. 1, agregar 2 3 gotas del indicador de fenolftalena y neutralizar al
vire de color (pH 8,2) con Hidrxido de Sodio 1N, y llevar a la marca de aforo con agua grado
II.
9.4.5. Realizar la titulacin preliminar de aproximacin y posteriormente la titulacin definitiva por
duplicado y registrar el volumen consumido, de acuerdo al punto 9.6 y 9.7. Utilizar el volumen
consumido para los clculos del contenido de ART como en el punto 10.
9.5.

DETERMINACIN DE AZCARES REDUCTORES DIRECTOS (ARD)

9.5.1. Para la determinacin de ARD de debe omitir la hidrlisis de la muestra, (adicin de cido
clorhdrico y tratamiento trmico en bao Mara). Realizar la titulacin preliminar de
aproximacin y posteriormente la titulacin definitiva por duplicado y registrar el volumen
consumido, de acuerdo al punto 9.6 y 9.7. Utilizar el volumen consumido para los clculos del
contenido de ARD como en el punto 10.
9.6.

TITULACIN PRELIMINAR DE LA MUESTRA

NOTA:
Es necesaria esta determinacin para comprobar que la solucin que se prepar con la muestra
problema, nos d un gasto que estar comprendido entre 15 y 50 mL; si la dilucin no gasta esta
cantidad, es necesario preparar otra dilucin de la muestra; adems esta titulacin es para determinar
aproximadamente el gasto para tenerlo en cuenta en la siguiente titulacin definitiva.
9.6.1. Medir volumtricamente 5 mL de solucin de Fehling A (de Sulfato de Cobre) y transferirlos en
un matraz Erlenmeyer de 250 mL. Hacer lo mismo con la solucin Fehling B (de tartrato de
sodio y potasio) colocndola en el mismo matraz formando as 10 mL de la mezcla de solucin
Fehling.
9.6.2. Adicionar al matraz que contenga la mezcla de solucin Fehling 20 mL de agua grado II y
aadir algunas perlas de ebullicin para mantener la ebullicin uniforme.

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Clave: MOE-AR-05

9.6.3. Cargar la bureta con la solucin problema (muestra preparada).


9.6.4. Agregar de la bureta 15 mL de la solucin al matraz Erlenmeyer que contiene el Fehling y
homogeneizar, como en el punto 9.2 Estandarizacin de la solucin de Fehling.
9.6.5. Colocar el matraz Erlenmeyer sobre la fuente de calentamiento, hasta que comience la
ebullicin.
9.6.6. Si el color azul propio de la solucin de Fehling no desaparece y no se torna rojizo al comienzo
de la ebullicin, deber agregarse con precaucin ms volumen de la solucin problema, hasta
que se logre el cambio de color sealado. Mantener en ebullicin por 2 minutos.
9.6.7. Agregar inmediatamente 2 a 3 gotas de Azul de Metileno al 1% m/v o bien 1 mL al 0,2% m/v (el
lquido se colorea de azul).
9.6.8. Continuar con la titulacin gota a gota hasta la desaparicin del color azul y la aparicin del
color rojizo. Este es el fin de la titulacin.
9.6.9. Leer en la bureta los mL gastados, para tenerlos en cuenta en la titulacin definitiva.
9.7.

TITULACIN DEFINITIVA

9.7.1. Adicionar 5 mL de la solucin A, 5 mL de la solucin B y 20 mL de agua grado II, en un matraz


Erlenmeyer de 250 mL, agregar perlas de ebullicin.
9.7.2. Cargar la bureta con la solucin problema.
9.7.3. Agregar de la bureta de 0,5 a 1 mL menos del gasto que result en la titulacin preliminar.
9.7.4. Calentar el matraz Erlenmeyer sobre la fuente de calentamiento, hasta que comience la
ebullicin.
9.7.5. Esperar 2 minutos desde que empieza la ebullicin.
9.7.6. Agregar de 3 a 4 gotas de la solucin de Azul de Metileno al 1% m/v o 1 mL al 0,2% m/V,
inmediatamente se comienza a agregar gota a gota la solucin problema, hasta que
desaparezca el color azul y se torne rojizo.
10.

CALCULOS Y RESULTADOS

Elabor: Jefe de Laboratorio

Revis: Coordinador de Calidad

Autoriz: Director General


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2013-05-28

Revisin No. 01

Clave: MOE-AR-05

10.1.
CLCULOS PARA ART Y ARD UTILIZANDO LA SOLUCION ESTANDARIZADA Y LA
TABLA No. 2. mg/100mL de azcares reductores para 10 mL de solucin de Fehling
(mtodo volumtrico de Lane Eynon)
Con los mililitros gastados en la titulacin definitiva de las muestras, encontrar el valor de mg/100 mL
en la tabla No.2 (Anexo 3), y sustituir este valor en las siguientes ecuaciones, con el uso de esta tabla
se puede obtener de manera directa, el valor de mg de azcar/100 mL utilizando la columna
correspondiente (azcar invertido, glucosa fructosa) y calcular en contenido de ART/ARD:
ART = mg azcar/100 mL (valor de tabla)x FD
100
ARD = mg azcar/100 mL (valor de tabla)x FD
100
FD = volumen total de la dilucin
volumen o masa de la muestra
En donde:
ART = Azcares reductores totales en la muestra expresados en mg/g mg/mL o bien g/Kg g/L
haciendo el ajuste de unidades correspondientes.
ARD = Azcares reductores directos en la muestra expresados en mg/g mg/mL o bien g/Kg g/L
haciendo el ajuste de unidades correspondientes.
FD = Factor de dilucin
100 = Ajuste de unidades
10.2.

CLCULOS PARA ART Y ARD UTILIZANDO EL FACTOR DE FEHLING

Se utiliza el Factor de Fehling, cuando no se realice la estandarizacin la solucin de Fehling. Calcular


el factor de Fehling con la siguiente ecuacin:
F.F= Vs x C
En donde:
F.F = Factor de Fehling
Vs = Volumen gastado de la solucin de concentracin conocida de azcar (azcar invertido, glucosa y
fructosa) en la titulacin de la mezcla de solucin de Fehling.

Elabor: Jefe de Laboratorio

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Autoriz: Director General


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Revisin No. 01

Clave: MOE-AR-05

C = Concentracin de la solucin de azcar (azcar invertido, glucosa o fructosa) en la titulacin de la


mezcla de la solucin de Fehling.
Calcular la concentracin de ARD o ART en la muestra con la siguiente ecuacin:
ART = F.F x FD
V
ART = F.F x FD
V
FD = volumen total de la dilucin
volumen o masa de la muestra
En donde:
ART = Azcares reductores totales en la muestra expresados en mg/g mg/mL o bien g/Kg g/L
haciendo el ajuste de unidades correspondientes.
ARD = Azcares reductores directos en la muestra expresados en mg/g mg/mL o bien g/Kg g/L
haciendo el ajuste de unidades correspondientes.
FD = Factor de dilucin
F.F = Factor de Fehling
V = Volumen gastado de la solucin de azcar en la titulacin definitiva de la muestra.
11.

REGISTROS

11.1. Los resultados obtenidos de esta prueba sern registrados en la bitcora BIT-LAB-15-01 Datos
de anlisis, en el folio que corresponda al elemento ensayado.
11.2.

Para la trazabilidad del resultado obtenido ver RC-LAB-17-02 Carta de Trazabilidad del
equipo/instrumento y el registro RC-LAB-17-01 Carta de trazabilidad del mtodo.

11.3.

Utilizar el formato RC-LAB-22-02 Rastreabilidad de los informes de ensayo donde se resumirn


las evidencias de la aplicacin de esta metodologa operativa de ensayo de acuerdo al folio del
elemento ensayado.

12.

REFERENCIAS

PR-LAB-02 Revisin de solicitudes, ofertas y contratos


PR-LAB-04 Compras de servicios y suministros
PR-LAB-07 Control del trabajo de ensayo no conforme

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Clave: MOE-AR-05

PR-LAB-14 Instalaciones y condiciones ambientales


PR-LAB-15 Mtodos de ensayo y validacin del mtodo
PR-LAB-16 Equipo
PR-LAB-17 Trazabilidad de la medicin
PR-LAB-19 Manejo de los elementos de ensayo
PR-LAB-20 Aseguramiento de la calidad de los resultados de ensayo
PR-LAB-21 Informe de resultados
13.

ANEXOS

Anexo 1. Especificaciones del agua usada en un laboratorio analtico


14.

BIBILOGRAFIA

NMX-V-006-NORMEX-2013 Bebidas Alcohlicas-Determinacin de Azcares Reductores Directos y


Totales.
NOM-070-SCFI-1994 Bebidas alcohlicas-Mezcal-Especificaciones.
NMX-EC-17025-IMNC-2006 Requisitos generales para la competencia de los laboratorios de ensayo y
de calibracin.
Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin y su Reglamento.

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Anexo 1. Especificaciones del agua usada en un laboratorio analtico


DEFINICIONES
A. AGUA GRADO I. Es el agua esencialmente libre de contaminantes coloidales inicos y orgnicos
disueltos y satisfactorio por los ms severos requisitos analticos incluso los de HPLC, la cual debe
ser producida ms all del tratamiento para el agua grado II (por ejemplo osmosis inversa o
desionizacin, seguida por filtracin a travs de una membrana de 0.2 m para la remocin de
materia especfica o la redestilacin por medio de un aparato de slica fundida.
B. AGUA GRADO II. Es el agua con muy poca cantidad de contaminantes inorgnicos, orgnicos o
coloidales y es satisfactoria para los propsitos de sensibilidad analtica requerida, incluyendo la
espectrofotometra de absorcin atmica y la determinacin de constituyentes trazas; la cual debe
ser producida, por ejemplo: con destilacin simple, o deionizacin u osmosis inversa seguida de
destilacin.
C. AGUA GRADO III. Es el agua satisfactoria para la mayora de los laboratorios que trabajan con
qumicos lquidos y reactivos, para preparar solucines, la cual debe ser producida, por ejemplo:
por destilacin simple, desionizacin u osmosis inversa. A menos que por otra parte no se
encuentre especificada, debe ser usada en trabajos analticos ordinarios.
Nota: Para comprobar la calidad del agua a emplear se debe evaluar al menos dos parmetros y
cumplir con las especificaciones que se indican en la siguiente tabla:
ESPECIFICACIONES DEL AGUA
PARAMETRO
pH evaluado a 25C inclusive el intervalo
Conductividad elctrica, mS/m a 25C, mximo
Materia oxidable
Contenido de oxgeno (mg/l) mximo
Absorbancia a 254 nm y 1 cm de longitud ptica
de camino, unidades de absorbancia mximo
Residuos despus de la evaporacin por
calentamiento a 110C (mg/kg), mximo
Contenido de silicio (SiO2) (mg/l), mximo

GRADO I

GRADO II

GRADO III

NO APLICA

NO APLICA

NO APLICA

0,01

0,1

0,5

NO APLICA

0,08

0,4

NO
ESPECIFICADO

NO
ESPECIFICADO

0,001

0,01

NO
ESPECIFICADO
NO
ESPECIFICADO

NO APLICA

0,01

0,02

NO
ESPECIFICADO

Anexo 2.

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Tabla No. 1. Cantidad recomendada para la preparacin de muestra en la determinacin de ART


y/o ARD
DILUCIN

TIEMPO DE
HIDRLISIS

Azcar

2 g/ 1000 mL

15 minutos

Azcar Invertido

g/Kg

Piloncillo

2,5 g/1000 mL

15 minutos

Azcar Invertido

g/Kg

Meladura

3,0 a 3,5 g/ 1000 mL

15 minutos

Azcar Invertido

g/Kg

3,5 a 4,0 g/ 1000 mL

15 minutos

Azcar Invertido

g/Kg

Brix 0 a 1,2

100 mL/200 mL

5 minutos

Fructuosa

g/l

Brix 1,2 a 1, 9

50 mL/250 mL

5 minutos

Fructuosa

g/l

Brix 1,9 a 3,9

25 mL/250 mL

5 minutos

Fructuosa

g/l

Brix 3,9 a 8,0

50 mL/1000 mL

5 minutos

Fructuosa

g/l

Brix 8,0 a 14,0

25 mL/1000 mL

5 minutos

Fructuosa

g/l

Brix 14,0 a 18,0

20 mL/1000 mL

5 minutos

Fructuosa

g/l

Brix 18,0 a 25,0

10 mL/1000 mL

5 minutos

Fructuosa

g/l

Brix 0 a 1,2

100 mL/200 mL

15 minutos

Azcar Invertido

g/l

Brix 1,2 a 1, 9

50 mL/250 mL

15 minutos

Azcar Invertido

g/l

Brix 1,9 a 3,9

25 mL/250 mL

15 minutos

Azcar Invertido

g/l

Brix 3,9 a 8,0

50 mL/1000 mL

15 minutos

Azcar Invertido

g/l

Brix 8,0 a 14,0

25 mL/1000 mL

15 minutos

Azcar Invertido

g/l

Brix 14,0 a 18,0

20 mL/1000 mL

15 minutos

Azcar Invertido

g/l

Brix 18,0 a 25,0

10 mL/1000 mL
100 g/3000 mL
50
mL/200 mL
500 g/4000 mL
100 mL/200 mL

15 minutos

Azcar Invertido

g/l

5 minutos

Fructuosa

5 minutos

Fructuosa

Fructosa Pura

3,0/1000 mL

5 minutos

Fructuosa

g/Kg

Fructosa con mezcla de


otros azcares

3,0/1000 mL

5 minutos

Azcar Invertido

g/Kg

3,0/1000 mL
Dependiendo de la
cantidad de extracto
seco realizar la
dilucin
100mL/200 mL
25 mL/500 mL
25 mL/1000mL

5 minutos

Glucosa

g/Kg

15 minutos

Azcar Invertido

g/Kg

MUESTRA

Melaza

LECTURA DE COLUMNA
DE TABLAS

EXPRESIN DE
RESULTADOS

Jugos de Agave:

Jugos Mixtos:

Agave Crudo
Bagazo de Agave

Dextrosa

Bebidas alcohlicas

g/Kg
g/Kg

Anexo 3

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Tabla No. 2. mg/100mL de azcares reductores para 10 mL de solucin de Fehling


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Tabla No. 2. mg/100mL de azcares reductores para 10 mL de solucin de Fehling


(mtodo volumtrico de Lane Eynon) --continuacin--

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Tabla No. 2. mg/100mL de azcares reductores para 10 mL de solucin de Fehling


(mtodo volumtrico de Lane Eynon) --continuacin--

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Tabla No. 2. mg/100mL de azcaresreductores para 10 mL de solucin de Fehling


(mtodo volumtrico de lane eynon) --continuacin--

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