Inhibicion de Escherichia Coli y Salmonella con Anemopsis Californica.
Alumnos: Misael Montenegro, Jocelin Jazmin C. Sarellana
Esbeidy Inzunza, Minerva Conde Lopez. Agosto 2015 Biotecnologa Resumen
El objetivo de este estudio era observar el comportamiento en tres compuestos abundantes: metilo eugenol, timol, y mirtenol en Escherichia coli y Salmonella, esto tambin se ha observado en otras bacterias. La composicin qumica de los aceites esenciales de Anemopsis californica en Ensenada Baja California, Mxico se ha estudiado y se ha encontrado que tres de los elementos contienen propiedades antibacterianas. La metodologa utilizada para este estudio fue el aislamiento de Escherichia coli y Salmonella. Sobre la base de (Normas Oficiales Mexicanas NOM-112-SSA1-1994) de Escherichia coli y el (Normas Oficiales Mexicanas NOM-114-SSA11994) por Salmonella y tambin era un extracto, por las hojas colocando en alcohol al 95% durante siete das. Con este extracto se realiz un antibiograma para probar los efectos de estos compuestos en las bacterias aisladas. Palabras clave: Escherichia coli, Salmonella, Anemopsis califrnica.
ABSTRACT The objective of this study was to observe the behavior in three abundant compounds: Methyl Eugenol, Thymol, and Myrtenol in Escherichia Coli and Salmonella, this has also been observed in other bacteria. The chemical composition of the essential oils of Anemopsis californica in Ensenada Baja, Mexico has been studied and has been found that three of the elements contain antibacterial properties. The methodology used for this study was the isolation of E. coli and Salmonella. On the basis of (Official Mexican Standards NOM-112-SSA1-1994) by E. coli and the (Official Mexican Standards NOM-114-SSA1-1994) by Salmonella and it was also an extract, by placing leaves in 95% alcohol for seven days. With this extract was made an antibiogram to test the effects of these compounds in the isolated bacteria. Keywords: Escherichia Coli, Salmonella, Anemopsis califrnica.
ndice
Introduccin .
Introduccin
Escherichia Coli es un microorganismo
anaerobio facultativo que se mueve por accin de flagelos que se distribuyen en todo el cuerpo de la bacteria (pertricos). (Carlos A. Eslava Campos 2011). En el centro del citoplasma, hay un nucletido que contiene el ADN genforo, generalmente circular y no asociado a histonas ni a ninguna protena bsica de la clula bacteriana. Sin embargo, las eubacterias tienen una protena del tipo de las histonas, denominada HU en Escherichia Coli. El ADN est unido a la membrana celular durante la replicacin y la separacin. En ciertas bacterias, hay adems plsmidos, o pequeos ADN circular. A veces encontramos inclusiones citoplasmicos. El mesosoma es una pequea invaginacin de la membrana plasmtica donde se realiza la sntesis del ATP. El mesosoma contiene tambin las ADN-polimerasas tiles durante la replicacin. Salmonella, son bacilos gramnegativos mviles que no fermentan la lactosa, aunque la mayora producen sulfuro de hidrgeno o gas por fermentacin de los hidratos de carbono. Inicialmente, se agruparon en ms de 2000 especies (serotipos) en funcin de sus antgenos somticos (O) y flagelares (H). (Escartin EF et al., 2002) Anemopsis califrnica tiene sustancias como el timol, mirtenol y eugenol que tienen propiedades antibacterianas y desinfectantes. (Moredo, 2010)
Materiales y mtodos
El aislamiento de Escherichia Coli y
Salmonella se realiz en la Universidad Tecnolgica de Tijuana, Unidad acadmica de Ensenada, en un laboratorio con nivel 2 de bioseguridad siguiendo lo establecido en las normas mexicanas establecidas para el aislamiento de dichas bacterias. Para la realizacin de estas metodologas se necesitaron tubos de ensaye, cajas Petri, distintos agares los cuales fueron; Hektoen, Verde Brillante, XLD, Muller Hinton, Esquema para el aislamiento de Escherichia Coli (Basado en la norma oficial mexicana NOM-112-SSA1-1994) (Figura 1.0)
Diagrama de procesos para el aislamiento de
Salmonella. (Basado en la norma oficial mexicana nom-114-ssa1-1994) (Figura 2.0)
(Figura 1.0)
(Figura 2.0)
(Figura3.0)
Para realizar el antibiograma se consigui la
planta Anemopsis Califrnica, la cual predomina en la regin de Baja California y especialmente en Ensenada. Se realiz un extracto en el cual el nico reactivo utilizado fue alcohol, y para obtener este extracto se utiliz el mtodo de destilacin. (Figura 3.0)
L1= Alcohol S2= Planta S/L3= Planta y
Alcohol S4= Gadazo L5= Extracto y Alcohol L6= Extracto de hierba del manso L7= Alcohol
Interpretacin: se colocaron 100 mililitros de
alcohol al 96% y 25 gramos de la planta Anemopsis californica, dejndose fermentar una semana. Se filtro el extracto desechando !$!$ de solidos y se pasaron 106 mililitros de alcohol y extracto al destilador. Se continuo con el proceso de destilacin, 4h a 70 C fueron las condiciones del destilado dando como resultado 91 mililitros de alcohol y 15 de extracto y agua.
Esquema de la realizacin del antibiograma,
el procedimiento fue el mismo en Escherichia Coli y Salmonella. (Figura 4.0)
(Figura 5.0) (Figura 4.0)
(Figura 6.0)
Discusiones y Conclusin Resultados En las siguientes imgenes se muestran los resultados obtenidos en el antibiograma tanto de Escherichia Coli (Figura 5.0) como de Salmonella (Figura 6.0).
Los procedimientos se siguieron al pie de la
letra, gracias a eso se logr con xito el aislamiento de Escherichia Coli y Salmonella. -A pesar de que los componentes que se encuentran en Anemopsis califrnica tiene propiedades antispticas y antibacterianas no se logr inhibir en esta ocasin a ninguna de las dos bacterias antes mencionadas.
Referencias bibliogrficas
Norma Oficial Mexicana NOM-114SSA1-1994
Norma Oficial Mexicana NOM-112SSA1-1994 Biologa molecular, Cochabamba, Bolivia, abril 2006http://genemol.org/biomolespa/b acterias/E-coli-01.html Department of Plant and Environmental Sciences, MSC 3Q, New Mexico State University, Las Cruces, NM 88003, USA Ryan KJ; Ray CG (editors) (2004). Sherris Medical Microbiology (4th ed. edicin). McGraw Hill. ISBN 08385-8529-9
