INSTITUTO TECNOLOGICO DE MAZATLAN

CINETICA QUIMICA
Docente Dr. Miguel ngel Franco Nava

EXPERIMIENTO DE CINETICA BIOLOGICA

Carnero Lerma Tania

Carvajal Portillo Jocelyn
Figueroa Daz Liliana
Franco Torres Amayrani
Lizarraga Duarte Izamary

Mazatln, Sin. 05 de junio del 2015

Introduccin
Las levaduras se han definido como hongos microscpicos, unicelulares, la
mayora se multiplican por gemacin y algunas por escisin. Este grupo de
microorganismos comprende alrededor de 60 gneros y unas 500 especies.
Histricamente, los estudios sobre microbiologa enolgica se han centrado en
las levaduras pertenecientes al gnero Saccharomyces, que son las
responsables de la fermentacin alcohlica (Leveau, 2000).
El papel de las levaduras como agentes fermentadores no fue reconocido sino
hasta 1856 por Luis Pasteur (Leveau, 2000).
Luis Pasteur, propuso la teora vitalstica y demostr que las clulas viables de
levaduras causan fermentacin en condiciones anaerobias; durante la cual el
azcar presente en el jugo es convertido principalmente en etanol y CO2
(Kendrick, 2000).

Crecimiento de bacterias

La mayora de las bacterias se reproducen por medio de una fisin binaria. El

tiempo que tardan en formarse 2 clulas de una clula comn se llama tiempo
de generacin (Moreno, 1996).
Factores que afectan el crecimiento y la biodegradacin (Moreno, 1996).
Nutrientes
Los nutrientes deben estar disponibles de acuerdo a las necesidades de
crecimiento de las clulas.
PH
El PH afecta en forma muy significativa la actividad microbiana. Cada
organismo tiene un rango de PH dentro del cual es posible el crecimiento y
normalmente posee un PH ptimo muy bien definido.
Temperatura
La temperatura es uno de los factores ambientales ms importantes que
afectan al crecimiento y a la supervivencia de los microorganismos.

Disponibilidad de agua
El agua es el componente principal de las clulas, por lo tanto un suministro de
agua adecuado es indispensable para lograr el mantenimiento y crecimiento
microbiano.

Cmara de Neubauer
La cmara

de

Neubauer

es

un

instrumento

utilizado

en medicina y biologa para realizar el recuento de esporas y clulas en un

medio lquido, que puede ser; un cultivo celular, sangre, orina, lquido
cefalorraqudeo, lquido sinovial, etc (Tortora, 2007).
Esta cmara de recuento est adaptada al microscopio de campo claro o al de
contraste de fases (Tortora, 2007).
Un biorreactor es

un recipiente o

sistema

que

mantiene

un

ambiente

biolgicamente activo. En algunos casos, un biorreactor es un recipiente en el

que se lleva a cabo un proceso qumico que involucra organismos o sustancias
bioqumicamente activas derivadas de dichos organismos. Este proceso puede
ser aerbico o anaerbio (Tortora, 2007).
Un biorreactor puede ser tambin un dispositivo o sistema empleado para
hacer

crecer clulas o tejidos en

operaciones

de cultivo

celular.

Estos

dispositivos se encuentran en desarrollo para su uso en ingeniera de tejidos

(Tortora, 2007).

Material y Mtodos
1. Se lava el birreactor perfectamente con agua y jabn y posteriormente
se desinfecta con cloro. Teniendo limpio el birreactor se monta para
despus agregarle 8 litros del medio de cultivo a seleccionar y proceder
a inocularlo con la muestra.
2. Se diluye una muestra de levadura (Saccharomyces cerevisiae) dentro
de un vaso de precipitado que contenga agua destilada. Se deja reposar
3.

un tiempo y se le agrega azcar al medio.

Despus con ayuda de una micro pipeta y un gotero se toma una
pequea muestra la cual se coloca cuidadosamente por los dos

costados del cubreobjetos el cual se encuentra sobre la cmara de

Neubauer.
4. Cuando la muestra se encuentra bien dispersa por la cmara de
Neubauer se coloca en la platina del microscopio para despus enfocar
empezando por el objetivo ms pequeo (40x) y tratando de localizar el
borde de la cmara de Neubauer. Cuando el borde se encuentra bien
defino se pasa mover la cmara y de igual manera se empiza a cambiar
de objetivo (Nota: no se utiliza el objetivo de 100X, para esto es
necesario aceite de inmersin).
5. Teniendo bien enfocado se pasa tomar un cuadrante de la cmara de
Neubauer; est compuesta por 5 recuadros de 5x5, dentro de cada uno
de los 25 cuadros se encuentran un recuadro de 4x4. Para realizar el
conteo se eligi un recuadro de 4 x 4.
6. Cuando ya se tiene bien fijado el cuadro se procede a contar cada uno
de los cuadros que conforma el recuadro de 4x4, contando un total de
16 cuadros.
7. El conteo final nos tiene que dar 10 millones de clulas por mililitro una
vez obtenido ese resultado se procede a preparar el medio de cultivo el
cual tena una base de azcar (50 g x 1 Litro), agua de garrafn (8
Litros), Sulfato de amonio (2 g x 1Litro) y Fosfato de amonio (4 g x
1litro). Obteniendo as las cantidades siguientes:
Agua de Garrafn 8 Litros
Azcar 400 g
Sulfato de Amonio 16 g
Fosfato de Amonio 32 g
8. Se agrega todo al birreactor y se conecta para que empiece a funcionar.
Se debe revisar que las aspas y la bomba de aire estn funcionando
correctamente.
9. Por ltimo, se toma una muestra de pH.
10. El conteo se realizar por 4 das, haciendo mediciones 2 veces al da,
una por la maana y otra por la tarde, se tomara una muestra del
contenido del birreactor, para poder llevar acabo el conteo y adems
poder tomar su pH.
11. Los datos obtenidos de cada medicin deben anotarse para llevar un
control y poder realizar los clculos correspondientes.

Clculos y Resultados
Cada uno de los conteos se realiz en los cuadros de 4x4.
Conteo Da 1 (26 de Mayo Martes)
pH 6.12
-

14

rea = 0,25mm x 0,25mm = 0,0625 mm2

Volumen = 0,0625mm2 x 0,1 mm = 6,25 x 10-3 mm3 = 6,25 x 10-6 ml
Total Clulas Contadas x 160.000
Concentracin =
Nmero de Cuadrados

14 x 160.000
Concentracin =
16

Concentracin = 140, 000 cel/mL

Conteo Da 2 (27 de Mayo Miercoles)

pH 3.54

26

Concentracin =

26 x 160.000
16

Concentracin = 260, 000 cel/mL

Conteo Da 3 (28 de Mayo Jueves)

pH 2.8
17

16

19

20

26

25

22

29

22

15

22

17

26

15

12

25

328

328 x 160.000
Concentracin =
16

Concentracin = 3, 280,000 cel/mL

Conteo Da 1 (29 de Mayo Viernes)

pH 2.56
25

15

14

17

15

18

27

14

26

23

22

32

29

36

38

26

377

377 x 160.000
Concentracin =
16

Concentracin = 3, 770, 000 cel/mL

Calculo de tiempo de generacin (G)

Se designa como:
x = N de bacterias al tiempo 0
y = N de bacterias al tiempo t
t = tiempo en crecimiento exponencial
Al tiempo 0 y = x
Despus de: 1 generacin y = x.2 - 2 generaciones y = (x.2) 2 =22 x - 3
generaciones y = (22 x) 2= 23 x - n generaciones y = 2n x (1)
Para calcular n = (nmero de generaciones)

Resolviendo la ecuacin (1) para n se tiene:

log y = log x + n log 2
6.5763= 5.1416 + n (.3010)
n = 4.7664 generaciones
El tiempo de generacinT G es igual a t (tiempo transcurrido en fase
exponencial para llegar de x a y) dividido por el nmero de generaciones n, o
sea:
G= t/n
t= 96 Hrs = 5760 min
TG= t/ n
G= 5760 min/ 4.7
TG=1225.53 minutos

Velocidad de crecimiento
Vc= n / t
Vc: Velocidad de Crecimiento
N= generaciones
T= tiempo
Vc= 4.7 / 5760
Vc=0.0008159 generaciones/minutos

Si el tiempo de generacin T es muy grande, el crecimiento

ser lento y si TG es pequeo el crecimiento ser rpido.
Tabla 1. Datos medidosTiempo(da
en das (sacados de las
dos mediciones, tomando solo una de
[Levaduras]
ellas)
s)

140000

280000

560000

1120000

2240000

g= nmero de generaciones
[Levaduras]= N0 x 2g
[Levaduras]= 140000 * 20 = 140000
[Levaduras]= 140000 * 21= 280000
[Levaduras]= 140000 * 22= 560000
[Levaduras]= 140000 * 23= 1120000
[Levaduras]= 140000 * 24= 2240000

[Levaduras]
2500000
2000000
1500000

[Levaduras]

1000000
500000
0
0

0.5

1.5

2.5

3.5

4.5

Ilustracin 1. Curva de crecimiento de levaduras a razn del tiempo en das.

La velocidad de crecimiento tambin se calcul de la siguiente manera:

Tiempo
(hrs)
0

Numero clulas
140000

8
12
28
33
40

170000
280000
6170000
3280000
3770000

y = -2767.2x2 + 238623x 812860

(Funcin Exponencial)
dy/dt= -5534x + 238623
(Velocidad)

Tabla 2. Datos de las mediciones en horas y tomando en cuenta las dos mediciones.

velocidad
en los
tiempos
tiempo
(hrs)

dy/dt celulas/hrs
0
8
12
28
33
40

238623
194351
172215
83671
56001
17263

Ilustracin 2. Desarrollo de las clulas respecto al tiempo (Exponencial)

tiempo
(hrs)
0
8
12
28
33
40

dy/dt celulas/hrs
238623
194351
172215
83671
56001
17263

Tabla 3. Velocidad correspondiente a cada tiempo

Cambios presentes en el medio de cultivo

Mientras ms pasaba el tiempo en que se encontraba la levadura dentro del
biorreactor, el medio de cultivo se fue acidificando. Inicialmente comenz con
un pH de 6.12, cercano a la neutralidad pero a razn de los das este fue
modificndose de manera decreciente es decir que en el da dos pH ya haban
bajado hasta 3.54, en el da tres el pH fue de 2.8 y por ltimo en el da 4 se
obtuvo un pH de 2.56.

Conclusin
Al realizar esta prctica observamos cmo es que gracias al metabolismo de
los microorganismos, estos van creciendo con respecto al tiempo. Existen
variaciones que deben de estar en constante monitorio como es el pH, la
temperatura y en algunos casos la concentracin de nutrientes, con lo que se
puede ver cmo va aumentando el crecimiento de los microorganismos.

De igual manera pudimos observar y conocer los nutrientes necesarios para

que los microorganismo puedan reproducirse y crecer, gracias a esto pudimos
ver que los nutrientes son una parte fundamental para los procesos
metablicos de los microorganismos y el funcionamiento adecuado de los
birreactores.
As pues pudimos ver como las levaduras se reprodujeron y con respecto al
tiempo que pasaron en el birreactor.

Bibliografa
Kendrick, B. 2000. The Fifth Kingdom. 3 ed. Focus Publishing, Newburyport, p
112.
Leveau, J. y Bauix, M. 2000. Microbiologa Industrial. Acribia, Zaragoza, cap 3.
Moreno, S.1996. Diseo de biorrectores y enzimologa. Universidad de Murcia.
pp 91-96.
Tortora, J. 2007. Introduccin a la microbiologa.9 edicin.pp.852.