BIOLOGA MOLECULAR 2015 A 1

TALLER 4: REPARACIN DEL DNA Y PCR

Pretaller:
1. Relacione cada tipo de reparacin del DNA con las respectivas enzimas
implicadas:
Tipo de reparacin
1. Reparacin directa de lesiones en
las bases sin remocin de la base
afectada
2. Reparacin por eliminacin de
bases
3. Reparacin por eliminacin de
nuletidos
4. Correccin inmediata de errores de
apareamiento durante la replicacin
5.
Reparacin
de
errores
de
apareamiento postreplicativos

Enzimas
A. Uvr, endonucleasa
DNApolimerasa

B.
DNApol
III/
DNApol
delta/epsilon
C.
Fotoliasas,
protenas
desalquilantes
D.
DNA
Glicosilasa
AP
endonucleasa ADN polimerasa I
E. Polimerasas adicionales de
translesin (bypass)
Recombinasas, protenas SSBP
like
6. Reparacin de emergencia (cortes F.
Mut
Dam
metilasa
en la doble cadena y aparicin de DNA Endonucleasas DNapol III
de cadena sencilla)
2. a. La separacin de las dos cadenas de ADN de doble cadena en una clula
es llevada a cabo por las helicasas, en una reaccin de PCR, qu causa la
separacin de las cadenas?
b. En una reaccin de PCR, qu componentes deben estar presentes para que haya
amplificacin de un fragmento de ADN?
c. Cules son las etapas necesarias durante un ciclo de PCR? Por qu se deben
emplear diferentes temperaturas? Qu caracterstica debe tener la DNA polimerasa
usada en PCR?

TALLER
1. El ADN es una molcula qumicamente estable pero a su vez no est
totalmente aislada del medioambiente ni tampoco del metabolismo celular
por lo que factores qumicos, fsicos y biticos pueden constantemente
alterar la estructura qumica y la informacin gentica contenida en el ADN.
Para mitigar estos efectos, existen numerosos sistemas de reparacin
dirigidos a diversos tipos de alteraciones en la molcula de ADN:
a. Explique la diferencia entre lesin y mutacin en el ADN.
b. Qu caractersticas tienen en comn el sistema de reparacin por
escisin de bases (BER) con el de reparacin por escisin de
nucletidos (NER)? Identifique enzimas en comn con la replicacin.

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c. Cul es la diferencia entre la reparacin por escisin de nucletidos
(NER) global y la acoplada a la transcripcin? Identifique la
importancia de contar con ambos mecanismos.
d. Durante la replicacin del ADN, qu mecanismo asegura la fidelidad
de la replicacin (ausencia de errores de apareamientos)? Son todos
estos errores corregidos?
e. Despus de la replicacin del ADN, qu mecanismos existen entonces
en la clula para corregir estos errores de apareamiento (mismatch)?
f. Cmo podra este mecanismo diferenciar entre la cadena vieja y la
cadena recin sintetizada en caso de presentarse un mismatch como
resultado de un error en la replicacin?
2. Un ciclo de PCR produce dos molculas de ADN a partir de cada molcula
original. Cuntas molculas de ADN se producirn a partir de una molcula
molde de ADN despus de cuatro ciclos?

3. En el anterior diagrama se representa una regin cromosmica y varios

iniciadores/primers representados como flechas que indican la polaridad 5-3
de los mismos. Se realizan varias PCR combinando varios primers en la
reaccin. Posteriormente los productos de PCR obtenidos se analizan
mediante electroforesis mostrada en la figura
a. Con base en el fundamento de la electroforesis y las
bandas observadas en la figura del gel de la izquierda,
indique las parejas de primers que permiten las
amplificaciones observadas en los carriles:
A __________ B __________ C __________
b. A qu posibles combinaciones de primers podran
corresponder los carriles D y E?
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