Luz Mara Vias Cern

BIOQUMICA I
15 de marzo de 2015

Captulo 8: Enzimas
Enzimas Reguladoras

Ahora giramos haca

una clase especial de enzimas que representan excepciones a

algunas de las reglas mencionadas a lo largo de este captulo. En el metabolismo celular,

grupos de enzimas trabajan juntas dentro de caminos secuencia para realizar un proceso
metablico dado, tal como la multireaccin de la conversin de glucosa a lactasa en msculos
esquelticos o la multireaccin en la sntesis de un aminocido a partir de precursores simples
en una clula bacteriana. En algunos sistemas de enzimas, la reaccin producida por la
primer encima convierte el sustrato del siguiente, as sucesivamente.
La mayora de las enzimas en cada sistema sigue patrones cinticos ya descritos. Sin
embargo, dentro de cada sistema enzimtico, hay por lo menos una enzima que determina la
tasa de reaccin de todas las secuencias porque limita la tasa de reaccin o es la enzima a la
que pertenece la velocidad limitante. Estas enzimas regulatorias muestran incrementos o
decrementos de su actividad cataltica en respuesta a determinadas seales. Con las acciones
de estas enzimas regulatorias, los procesos metablicos son constantemente ajustados para
satisfacer los cambios en las demandas de energa y biomolculas requeridas en el crecimiento
y reparacin celular. En la mayora de los sistemas multienzimticos, la primera enzima en
canalizar es una enzima regulatoria. En el proceso de catlisis, incluso las primeras reacciones
de una va que conduce a un productor innecesario, desvan energa y metabolitos de otros
procesos ms importantes. Por tanto, un excelente sitio para regular una va metablica es el
punto critico de la va metablica. Las otras enzimas en la secuencia de reaccin usualmente
se presentan en concentraciones que proveen un gran excesos de actividad cataltica, estas
pueden estimular sus reacciones tan rpido como sus sustratos estn saliendo de las reacciones
precursoras.
La actividad de las enzimas regulatoria es modelada mediante varios tipos de molculas
indicadoras, las cuales son generalmente pequeos metabolitos o cofactores. Hay dos clases

TRADUCCIN UNIDAD I

!1

generales de encimas regulatoria dentro de las vas metablicas. Las enzimas alostricas que
actan reversiblemente, mediante una unin no covalente con el metabolito regulatorio
llamado modulador. El termino alostrico proviene del griego allos que significa otros y
setteros que significa slido o figura. Las enzimas alostricas son aquellas que tienen
otras formas u arreglos espaciales inducidos por la unin con los moduladores. La segunda
clase incluye a las enzimas reguladas por modificaciones reversibles de los enlaces covalentes.
Ambas clases de enzimas regulatorias tienen a tener mltiples subunidades, y en algunos
casos, el sitio o sitios regulatorios y los sitios activos son unidades separadas.
Existen por lo menos otros dos mecanismos por los cuales cada actividad enzimtica es
regulada. Algunas enzimas son estimuladas o inhibidas por otras protenas de control que se
unen a ellas y afectan su actividad. Otras son activadas por el desdoblamiento proteico, el
cual, a comparacin de otros mecanismos, es irreversible. Ejemplos importantes de estos dos
mecanismos se pueden observar en procesos fisiolgicos como la digestin, la coagulacin de
sangre, las acciones de las hormonas y la visin.
No hay una sola regla que defina la frecuencia de los diferentes tipos de regulacin
dentro de los diferentes sistemas. En cierto grado, La regulacin alostrica (no covalente)
puede permitir un ajuste de las vas metablicas que son requeridas continuamente pero en
diferentes niveles de actividad, acordes a las cambiantes necesidades celulares. La regulacin
dada por modificaciones en enlaces covalentes tiende a inhibir o permitir totalmente la
actividad enzimtica, sin embargo, ambos tipos de regulacin son estudiados en cierto
nmero de enzimas regulatorias.

Enzimas Alostricas son reguladas por los enlaces no

covalentes de Moduladores
En algunos sistemas multienzimaticos la enzima regulatoria es inhibida especficamente
por el producto final de la reacciones siempre que el producto final exceda las necesidades
celularesm cuando se reduzca la reaccin de la enzima regulatoria, las enzimas subsecuentes
operaran a tasas de reaccin menores debido a que sus sustratos se agotan. As la tasa de
produccin del producto final de las vas enzimticas se encontrara en balance con las
necesidades celulares. Este tipo de regulacin es llamado retroaccin inhibido. La
acumulacin del producto final desacalorar toda la va enzimtica.

TRADUCCIN UNIDAD I

!2

Uno de los primeros ejemplos descubiertos de la inhibicin por retroaccin alostrica

fue en un sistema enzimasico bacteriano que cataliza la conversin de L-Treonina a LIsoleucina. En este sistema, la primera enzima, treonina deshidratasa* es inhibida por la
isoleucina, el producto de la ultima reaccin del conjunto de reacciones enzimaticas. La
isoleucina es bastante especfica como inhibidor, ningn otro intermediario en esta secuencia
de reacciones inhibe la Treonina deshidratasa, as como ninguna otra enzima en la secuencia
de reacciones lo hace. La isoleucina no se une al sitio activo, sino a otro sitio especifico en la
molcula enzimtica: el sitio regulatorio. Este enlace es no covalente y, por tanto, fcilmente
reversible; si la

concentracin de isoleucina decrece, la tasa de accin de la reinan

deshidratasa aumenta, as la actividad de la treonina deshidratasa responde rpida y

reversiblemente a las fluctuaciones de las concentraciones de isoleucina en la clula.

Enzimas Alostricas son la excepcin a muchas reglas

generales.
Los moduladores para las enzimas alostricas pueden ser inhibidores o estimuladores.
Un activador es con frecuencia un sustrato por s mismo, y las enzimas reguladoras, para las
cuales el sustrato y el modulador son idnticos, son llamadas homotrpicas. Cuando el
modulador es otra molcula diferente al sustrato, la enzima es heterotrpica. Algunas
enzimas tienen dos o ms moduladores.
Como ya habrn notado, las propiedades de las enzimas alostricas son
significativamente diferentes a las simples de las enzimas no regulatoria, discutidas en el
captulo anterior. Algunas de estas diferencias son estructurales. En adicin a sitios activos o
catalticos, las enzimas alostricas tienen generalmente un o ms sitios regulatorios o
alostricos para el enlace del modulador. As como el sitio activo de las enzimas es especfico
para su sustrato, el sitio o alostrico es especfico para su modulador. Enzimas con varios
moduladores tienen generalmente sitios especficos de enlace para cada uno. En las enzimas
homotrpicas el sitio activo y el sitio regulador son el mismo.
LAs enzimas alostricas son generalmente ms largas y complejas que las enzimas
simples. La mayora de ellas tiene dos o ms

cadenas o subunidades polipeptdicas. El

aspartarto transcarbomolasa, quin cataliza la primer reaccin de la biosntesis de los

nucletidos pirimidicos, tienen doce cadenas polipeptdicas organizadas dentro de
subunidades catalticas y regulatorias.

TRADUCCIN UNIDAD I

!3

Otras diferencias entre enzimas no reguladas y enzimas alostricas involucra sus

propiedades cinticas. Las enzimas alostricas muestran relacin entre V0 y [S], que difieren
de la normalidad del comportamiento de Michaelis-Menten. Estas exhiben saturacin con el
sustrato cuando [S] es suficientemente alto, pero para algunas enzimas alostricas, cuando V0
esta en un punto intermedio, no podemos referimos con la designacin Km porque la enzimas
no sigue la relacin hiperblica de Michaelis-Menten. En su lugar, el sbolo [S]0.5 o [K]0.5 es
frecuentemente usado para representar la concentracin de sustrato dada a la mitad de la
velocidad mxima de la reaccin canalizada por una enzimas alostrica.

El comportamiento cintico sigmoideo refleja generalmente interacciones cooperativas entre

las mltiples subunidades proteicas. En otras palabras, los cambios de una sub-unidad son
trasladados en cambios estructurales de subunidades adyacentes, un efecto que es mediado
por interacciones no covalentes en la interfase entre las subunidades. Los principios son
similares a los discutidos en la cooperacin del oxgeno al momento de unirse a la
hemoglobina.
Las enzimas alostricas homotrpicas generalmente tienen mltiples subunidades. En
muchos casos el mismo sitio de unin en cada subsidiad funciona como sitio activo y
regulador.

El sustrato puede funcionar como un activador porque las unidades actan

simultneamente. La unin de una molcula del sustrato a un sitio

de unin altera la

conformacin de la enzimas y mejora considerablemente la unin de subsecuentes molculas

de sustrato; esto explica

porque se forma la grfica sigmoidea, en lugar del incremento

hiperblico en V0 con el incremento de [S].

Con respecto a las enzimas heterotrpicas, en las cuales el modulador es un
metabolismo distinto al propio sustrato, es difcil generalizar la condicin de la curva de
saturacin del sustrato. Un activador puede hacer que la curva de saturacin de sustrato se
haga casi hiperblica, con un decremento en K0.5 pero manteniendo constante Vmax , lo que
da lugar a un incremento de la velocidad de reaccin a una concentracin constante de
sustrato. [V0] es mas alto que cualquier valor de [S]. Otras enzimas alostricas responden a
un activador mediante un incremento de Vmax , con un pequeo cambio en K0.5. Por lo tanto,
las enzimas alostricas muestran diferentes tipos de respuesta en sus curvas de actividad con el
sustrato, debido a que algunas tienen moduladores inhibitorios, otras activadores, y algunas
otras ambos.

TRADUCCIN UNIDAD I

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Dos Modelos que explican el Comportamiento Cintico de las

Enzimas Alostricas
La dependencia sigmoidal de V0 sobre [S] refleja subunidades cooperativas, y ha
inspirado a dos modelos a explicar estas interacciones cooperativas. En el primer modelo ( el
modelo simtrico), propuesto por Jacques Monod y colegas en 1965, una enzima alostrica
puede existir solamente en dos conformaciones, la activa y la inactiva. Todas las subunidades
estn en la forma activa o bien todas estn en la forma inactiva. Toda molcula de sustrato
que se une incrementa la posibilidad del estado inactivo al activo.
En el segundo modelo, propuesto por Koshland en 1996, hay dos conformaciones, pero
las subunidades pueden experimentar cambios conformacionales individualmente. La unin
de sustrato incrementoa la probabilidad de un cambio conformacional. Un cambio
conformacional en una subsidiad provoca un cambio similares la subunidad adyacente, as
como la unin de una segunda molcula de sustrato, y as sucesivamente. Hay ms estados
intermediarios posibles en este modelo que en el modelo simtrico, ambos modelos no son
mutuamente excluyentes. El modelo simtrico puede verse como un sistema activo o no
activo, limitando el modelo secuencial.
El mecanismo preciso de las interacciones alostricas no ha sido establecido. Diferentes
enzimas alostricas pueden tener diferentes mecanismos en sus interacciones cooperativas.
Otrosmecanismosdelasenzimasreguladoras

Otros mecanismos de la Enzima Reguladora

En otra clase importante de enzimas reguladoras , la actividad es regulada por

modificaciones
covalentesde
en enzimas
la enzima.
La modificacin
de grupos
incluidopor
el
En
otra clase importante
reguladoras,
la actividad
es regulada
fosfato, la
adenosina
monofosfato,
monofosfato,
modificaciones
covalentes
en la
enzima. La uridina
modificacin
de gruposribosa
incluyedeel adenosin
fosfato, la
bifosfato,
y grupos
metilo.
Estos son
generalmente
unidosy y
separados
adenosina
monofosfato,
urdiran
monofosfato,
ribosa
adenosin bifosfato,
grupos
metilo.
Estos covalentementedelaenzimareguladoraporenzimasseparadas.
son generalmente unidos y separados covalentemente de la enzima reguladora por

enzimas
Unsepardas.
ejemplo importante de regulacin mediante la modificacin de enlaces
Un
ejemplo importante de regulacin mediante
la modificacin de enlaces colvalentes
covalenteseslaglicgenofosforilasa(M
94,500)demsculoehgado,elcual
r

es la glicgeno
fosforilasa (Mr 94,500) de msculo e hgado, el cul cataliza la reaccin:
catalizalareaccin:
(Glucosa)n+Pi
Glicgeno
TRADUCCIN UNIDAD I

(Glucosa)n1+Glucosa1Fosfato.

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La glucosa1fosfato formada puede degradarse hasta lactato en msculo o ser

convertidaenglucosayliberadaenelhgado.Laglucgenofosforilasaactade

Glicgeno

La glucosa1fosfato formada puede degradarse hasta lactato en msculo o ser

Laconvertidaenglucosayliberadaenelhgado.Laglucgenofosforilasaactade
glucosa-1-fosfato formada puede degradarse hasta lactato en msculo o ser

dosen
formas:
forma activa
fosforilasa
y la relativamente
forma
inactiva
b
convertida
glucosaLa
y liberada
en el hgado.
El glucgeno
fosforilasa acta
de dos
formas:
fosforilasa.Lafosforilasatienedossubunidades,cadacualesconunespecifico
La forma
activa -fosforilasa y la relativamente forma inactiva -fosforilasa. La -fosforilasa
tratamientodesuresiduoqueesfosforiladoenelgrupohidroxilo.Estosresiduos
tiene dos
subunidades, cada cuales con un especfico tratamiento de su residuo que es
fosforilado
en el grupo
hidrxilo.
Estos residuos para
de serina
sonactividad
indispensables
una
de serina
fosfato
son indispensables
unafosfato
mxima
de lapara
enzima.
mximaLosgruposfosfatopuedenserremovidosmediantehidrlisisdelafosforilasa
actividad de la enzima. Los grupos fosfato pueden ser removidos mediante hidrlisis
de la -fosforilasa
por una enzima separada llamada fosforilasa fosfatasa:
porunaenzimaseparadallamadafosforilasafosfatasa:

fosforilasa+2H2O

bfosforilasa+2Pi

(Masactiva)

(Menosactiva)

En esta reaccin la -fosforilasa puede activarse a -fosforilasa por la divisin de dos

enlaces Enestareaccinlafosforilasaesconvertidaenbfosforilasaporladivisinde
covalentes de serina-fosfato.
Ladosenlacescovalentesdeserinafosfato.
-fosforilasa puede reactivarse a -fosforilasa mediante otra enzima, la fosforilasa
quintasa, la cual cataliza la transferencia de grupos fosfato del ATP a los hidroxilos de los
La bfosforilasa puede reactivarse a fosforilasa mediante otra enzima, la
residuos especficos en la -fosforilasa.
fosforilasaquinasa,lacualcatalizalatransferenciadegruposfosfatodelATPa

loshidroxilosdelosresiduosespecficosenlabfosforilasa.
bfosforilasa+2ATP

fosforilasa+2ADP

(Menosactiva)

(Masactiva)

La ruptura de glucgeno en el msculo esqueltico y el hgado esta regulada por

Larupturadeglucgenoenelmsculoesquelticoyelhgadoestareguladapor
variaciones
de las proporciones de las dos formas de la enzima. Las formas y de la
variacionesdelasproporcionesdelasdosformasdelaenzima.Lasformas&
fosforilasa
difieren en su estructura, y como consecuencia, cambios en la actividad cataltica
dehay
la interconversiones
fosforilasa difieren
en su estructura cuaternaria, el sitio activo sufre
cada vezb
que
de formas.
cambiosensuestructura,ycomoconsecuencia,cambiosenlaactividadcataltica
Algunas
de las enzimas regulatorias ms complejas se encuentran en los puntos de
cadavezquehaynterconversionesdeformas.
particular
importancia en el metabolismo, para que respondan a los mltiples metablicos
regulatorio a travs de modificaciones alostricas y covalentes, glicgeno fosforilasa es un
Algunas de las enzimas regulatorias
manera alostrica por AMP, el cual
ejemplo, aunque su regulacin primaria es a travs de modificacin covalente, cabe decir que
mas complejas se encuentran en los
es un activador de la b
tambin es modulada no covalentemente, de manera alostrica por AMP, el cual es un
puntos de particular importancia en
fosforilasa, y muchas otras
activador de la -fosforilasa; y muchas otras molculas que son inhibidoras.
elmetabolismo,paraquerespondan
molculasquesoninhibidoras.

los

mltiples

regulatorios
modificaciones

metabolitos
travs

alostricas

de
y

TRADUCCIN
UNIDAD
I
covalentes.
Glicgeno
fosforilasa es

un ejemplo. Aunque su regulacin

LaglutaminasintetasadeE.Coli,una
de las enzimas regulatorias mas
complejas conocidas, proporciona
ejemplos
alosterismo,

de

regulacin

!6

por

modificaciones

La glutamina sintetasa E. Coli, una de las enzimas regulatorias ms complejas

conocidas, proporciona ejemplos de regulacin por aloterismo, modificaciones covalentes
reversibles y de protenas regulatorias. Tiene por lo menos ocho moduladores alostricos.

La activacin de una enzima por divisin proteica es un mecanismo de regulacin un tanto

diferente. Un precursor inactivo de la enzimas, llamado zimgeno o proenzima, se corta para
formar la enzima activa. Muchas promesas del estmago y pncreas son reguladas de esta
forma. La quimotripsina y la triplica son inicialmente sintetizadas como quimotripsingeno y
tripsingeno respectivamente. Rupturas especficas provocan los cambios conformaciones que
expone el sitio activo de la enzima, debido a que este tipo de activacin es irreversible, otros
mecanismos son necesarios para inactiva estas enzimas. Las enzimas proteolticas son
inactividas por protenas inhibidoras

que se unen fuertemente al sitio de la enzima. El

inhibidor de la tripsina pancretica (Mr 6,000) se le une a esta y la inhibe; la 1- antiproteasa

(Mr

53,000) primeramente inhibe la elastasa. Se cree que una insuficiencia de 1-

antiproteasa puede ser causada por la exposicin al humo de cigarrillo, el cual conduce a un
dao pulmonar y a la condicin conocida como enfisema.
Otros ejemplos de activacin de zimgenos suceden en las hormonas, tejido conjuntivo,
y el sistema de coagulacin sanguneo. La hormona insulina es producida a partir de la
ruptura de la proinsulina, el colgeno es inicialmente sintetizada como un precursor soluble
llamado procolgeno, y la coagulacin sangunea es regulada por una compleja cascada de
activaciones de zimgenos.

TRADUCCIN UNIDAD I

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