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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERA

FACULTAD DE CIENCIAS

ESTUDIO RADIOBIOLGICO DE LAS LEUCEMIAS AGUDAS


MEDIANTE RADIACIONES GAMMA

TESIS

PARA OPTAR EL GRADO ACADMICO DE MAESTRO EN CIENCIAS


CON MENCIN EN FISICA MEDICA

ELABORADO POR
BERTHA MILAGROS GARCIA GUTIERREZ

ASESOR
Dr. JAVIER SOLANO (ASESOR INTERNO)
DR. MAYER ZAHARIA (ASESOR EXTERNO)

LIMA PER
2014
1

DEDICATORIA
A mis padres, hermanos, sobrinos y cuadas
que son el incentivo y la razn de seguir
adelante.

AGRADECIMIENTOS:

Dr. Mayer Zaharia


Dr. Modesto Montoya.
Dr. Javier Solano.
Blgo. Cesar Saravia.
Dr. Luis Pinillos.
Dr. Alfredo Moscoll.

Instituto Nacional de Enfermedades Neoplsicas INEN


Departamento de Radioterapia del INEN
Laboratorio de Trasplante de Mdula sea (TAMO) del INEN
Universidad Nacional de Ingeniera. UNI
Instituto Peruano de Energa Nuclear (IPEN)
Centro Superior de Estudios Nucleares (CSEN) del IPEN

INDICE:
INTRODUCCION.

I.

MARCO TEORICO 8
I.1.RADIOTERAPIA..

I.1.1. Aceleradores lineales

10

I.1.2. Equipo de radioterapia de Cobalto

12

I.2. DESCRIPCIN DE LA UNIDAD DE 60Co


THERATRON-80.

13

I.2.1. Caractersticas de una fuente de Cobalto

16

I.2.2. Decaimiento de una fuente de Cobalto..

16

I.2.3. Propiedades fsicas de una fuente de Cobalto

17

I.3: RADIACIN ELECTROMAGNTICA

18

I.3.1: Ionizacin.

21

I.3.2: Radiacin ionizante..

21

I.4.RADIACIN GAMMA. 25
I.4.1: Interaccin de los rayos X con la materia

26

I.1.4.A: Efecto fotoelctrico

26

I.1.4.B: Dispersin compton.

27

I.1.4.C: Creacin de pares electrnicos.. 28


I.4.2: Dosimetra de tcnicas sencillas.

30

I.4.3: Dosis en profundidad regin build up..

30

I.4.4: Porcentaje de dosis en profundidad (PDD)

31

I.5. RADIOBIOLOGIA.

33

I.5.1.Relacin dosis respuesta

35

I.5.2.Clasificacin de radiacin en radiobiologa

36

I.5.3.Ciclo y muerte celular

37

I.5.4.Irradiacin de clulas

38

I.5.5.Dao celular causado por accin directa

38

I.6. RADIOSENSIBILIDAD CELULAR 39


I.6.1. Caractersticas de los efectos de las radiaciones
4

ionizantes..

39

I.6.1.A. Aleatoriedad..

39

I.5.1.B. Rpido depsito de energa

39

I.6.1.C. No selectividad.

39

I.6.1.D. No especificidad lesiva...

39

I.6.1.E. Latencia....

39

I.7. RADIOSENSIBLIDAD Y RESISTENCIA DE LAS


CELULAS TUMORALES 39

II.

I.7.1. Escala de radiosensibilidad.

40

I.7.2. Ley de la radiosensiblidad..

40

I.7.2.1. Ley de Bergonie y Trinbodeau

40

I.8. LEUCEMIA.

41

I.6.1. Las leucemias crnicas

42

I.6.2. Las leucemias agudas.

42

I.6.3.Tipos comunes de leucemia..

43

I.6.4.Leucemia en el Per

44

I.6.5. Diagnstico de leucemia.

45

I.8. VIABILIDAD CELULAR

47

I.9. AZUL DE TRIPN

47

I.9.1. Antecedentes y qumica del azul de tripn..

48

MATERIALES Y METODOS.... 49
II.1. AISLAMIENTO DE CELULAS. MONONUCLEARES....
II.1.1. Coleccin de muestras biolgicas..

49
49

II.2. CRIOPRESERVACIN.

49

II.3. IRRADIACIN DE LAS MUESTRAS

50

II.4. PRUEBAS DE VIABILIDAD CELULAR.

50

II.5. CALCULO DE LA VIABILIDAD CELULAR


CORREGIDA

51

II.6. ANLISIS ESTADISTICO.

51

II.7. ASPECTOS TICOS.

51
5

III.

RESULTADOS. 52

IV.

DISCUSIN 55

V.

REFERENCIAS..

56

INTRODUCCIN:
6

La fsica y los efectos de las radiaciones en los organismos vivos son tema de gran
inters cientfico. Las caractersticas y los efectos de las radiaciones son estudiadas por
diferentes profesionales como los Fsicos Mdicos y Radionclogos principalmente.
El trmino radiacin significa bsicamente transferencia de energa de una fuente a
otra. Los efectos que causa esta energa a la clula estn englobados dentro del rea de la
Fsica Mdica que comprende la Radiobiologa, es dentro de este contexto que se
desarrolla el presente trabajo de investigacin, en el cual se introduce trminos de
radiosensibilidad y radioresistencia de las clulas y la diferencia que existen en las
respuestas a la radiacin de las clulas sanas y clulas neoplsicas, lo que se conoce como
biologa de las clulas tumorales, estas respuestas varan de un tipo de neoplasia a otra, lo
que da lugar a la clasificacin en agresividad tumoral.
La leucemia aguda, es un tipo de cncer que se origina en la mdula sea por la
proliferacin incontrolada de las clulas madres del sistema hematopoytico, esta
proliferacin incontrolada de las clulas, sustituye los elementos normales de la mdula
sea e invade la sangre perifrica, pudiendo infiltrar rgano o tejido del cuerpo humano
formando los llamados cloromas [1].
En el presente trabajo, estudiaremos especficamente las leucemias agudas
(linfoblsticas y mieloblsticas), que a travs de la historia, constituyen uno de los grupos
de enfermedades neoplsicas ms interesantes, por su evolucin y respuesta al tratamiento
con radiaciones ionizantes [1].

I.

MARCO TEORICO:
7

Los diferentes tipos de leucemias agudas, presentan una biologa diferente, lo que
podra traducirse en distinta radiosensibilidad a las radiaciones ionizantes. El objetivo de
esta investigacin, fue evaluar el efecto de una dosis de radiacin ionizante, en la
viabilidad celular, en diferentes subtipos de leucemias agudas.
El uso de la radioterapia en el tratamiento del cncer, se fundamenta en los efectos
citotxicos de las radiaciones ionizantes sobre las clulas malignas, que originan como
consecuencia, la muerte celular.
Las complicaciones del tratamiento radiante, surgen como resultado de la destruccin
de las clulas que integran los tejidos normales [2]. La llamada especificidad de la
radioterapia, se basa sobre todo en principios fsicos ms que biolgicos, por ejemplo, un
plan de tratamiento bien diseado va a permitir la administracin de una dosis apropiada al
tumor, reduciendo al mnimo posible la irradiacin de los tejidos normales, con el objetivo
de prevenir posibles complicaciones. Sin embargo, los conceptos de radiobiologa deben
ser tomados en cuenta al seleccionar esquemas de fraccionamiento, en la determinacin de
las dosis mximas tolerables, en la planificacin del tratamiento adyuvante, y cuando se
plantea el uso de otras modalidades teraputicas en combinacin con la radioterapia [3].
Las leucemias agudas se caracterizan por la proliferacin, acumulacin anormal y
detencin de la maduracin de los precursores hematopoyticos [1].
Existe una variacin a nivel biolgico y clnico entre los diferentes tipos de
leucemias. En lo referente a leucemias agudas, estas se caracterizan por la presencia de un
nmero elevado de clulas inmaduras, un cuadro clnico de comienzo agudo y evolucin
ms agresiva de la enfermedad [2]. Las clulas eucariotas poseen una maquinaria
compleja, responsable de la reparacin de su material gentico a las radiaciones ionizantes.
Las protenas involucradas en el desarrollo de la leucemia incluyen a P53, ATM,
BRCA2, P21, entre otras [3]. La radioterapia en el tratamiento de leucemias, es aplicada a
los rganos de riesgos infiltrados por la enfermedad generalmente en el sistema nervioso, y
a los focos extra medulares de leucemia. El sitio ms importante en la leucemia
linfoblstica aguda es el sistema nervioso central, las clulas neoplsicas infiltran la piel, el
globo ocular y otros depsitos tisulares que son sitios de desarrollo de focos
extramedulares de clulas leucmicas [1].

Las clulas neoplsicas se caracterizan porque presentan alteraciones en el ciclo


celular, en la activacin de la va de apoptosis y deficiencias en la reparacin del DNA;
siendo la ltima caracterstica la ms importante para los tratamientos basados con
radiacin [2].
La radiobiologa en el tratamiento del cncer, se fundamenta en el estudio de los
efectos citotxicos, causadas por las radiaciones ionizantes sobre las clulas malignas, que
traen como consecuencia la muerte celular. De ese modo, la radioterapia se convierte en un
arma para tratar al cncer, en nuestro caso la leucemia [3].
Los distintos tipos de leucemias, presentan diferentes anormalidades en su biologa
molecular, lo que puede conllevar a otros tipos de respuestas en el tratamiento oncolgico,
por este motivo es importante discriminar subtipos de neoplasias, que pueden responder
mejor a un determinado tratamiento [1].
El objetivo de este estudio, fue evaluar el efecto de una dosis de radiacin ionizante
en la viabilidad celular, en diferentes subtipos de leucemias agudas.
Las respuestas de las clulas frente a las radiaciones adsorbidas, varan de acuerdo a su
linaje, tipo de clulas, fase celular, tiempo de duplicacin y otros factores, en el caso de
clulas leucmicas la respuesta segn G. Steel, son clulas muy sensibles a la radiacin,
por lo que permite obtener un estudio en muy corto tiempo, adems podemos verificar si la
tcnica de viabilidad celular, es factible para la determinacin de la radioresistencia y
radiosensibilidad en los cultivos celulares [3].

I.1 RADIOTERAPIA:
La radioterapia se utiliza como tratamiento hace ya ms de un siglo. Uno de los
primeros informes de su uso data de 1899, poco despus de 1895 cuando Roentgen
descubre los rayos X, seguidamente en 1898 cuando Marie Curie descubri el 226Ra.
Es en 1922 cuando la oncologa se establece como disciplina mdica. Desde ese
momento, la radioterapia, al igual que el resto de las tcnicas utilizadas para tratar el
cncer, ha evolucionado mucho. La invencin del equipo de teleterapia con

60

Co por

Harold E. Johns en Canad en la dcada de 1950, proporcion un gran impulso en la


bsqueda de energas fotnicas superiores y coloca la unidad de Cobalto en la vanguardia
de la radioterapia por algunos aos [5]. El 60Co es un isotopo radiactivo que se usa con
9

fines mdicos por su energa y alta actividad especfica.

La primera mquina de

radioterapia que utiliza el 60Co con fines mdicos es llamada bomba de cobalto, se utiliz
por primera vez en un paciente el 27 de octubre de 1951; el equipo se encuentra
actualmente en exposicin en la University of Saskatchewan, tal como lo menciona en su
pgina, ubicada en la ciudad de Saskatoon - Canad.
Posteriormente en los aos 1940 apareci un equipo especial, que mediante
diferentes componentes y partes hace que el equipo cree su propia energa ionizante con
altas dosis de radiacin llamado acelerador lineal de electrones, que es un equipo que emite
energas del orden de 4 hasta 22 megaelectronvoltios (MeV). El uso de fuentes radiactivas
como el 60Co y el acelerador lineal de electrones son los dos tipos de equipos que ms se
usa en el tratamiento de cncer utilizando radiaciones ionizantes.
Por lo general los equipos de 60Co usados en radioterapia utilizan partculas u ondas
de alta energa, llamados rayos gamma, que se utiliza para eliminar o daar las clulas
cancerosas. La radioterapia se conoce adems como terapia de radiacin [6].
La radioterapia es uno de los tratamientos ms comunes contra el cncer. La
radiacin a menudo es parte del tratamiento contra ciertos tipos de cncer, tales como los
cnceres de cabeza y cuello, vejiga, pulmn, leucemias, entre otros. Adems, muchos otros
tipos de cncer son tratados con radioterapia.
La mayora de las clulas del cuerpo crecen y se dividen para formar nuevas
clulas, sin embargo, las clulas cancerosas lo hacen ms rpidamente que muchas de las
clulas normales a su alrededor. La radiacin acta sobre el ADN que se encuentra dentro
de las clulas produciendo pequeas roturas [7]. Estas roturas evitan que las clulas
cancerosas crezcan y se dividan, que a menudo causan la muerte. Puede que tambin las
clulas normales cercanas se afecten con la radiacin, pero la mayora se recupera y vuelve
a tener una funcin normal [8].
Para entender las diferentes maneras como se imparte la radiacin ionizante, es
necesario describir las distintas modalidades de irradiacin, dependiendo del tipo de equipo
de teleterapia, por esta razn decimos que los tratamientos de radioterapia, se realizan
usando un acelerador lineal o un equipo de teleterapia, que tiene una fuente de

60

Co. A

continuacin, describimos rpidamente el equipo acelerador lineal de electrones.


I.1.1: Aceleradores lineales (AL): En estos tipos de equipos, los electrones se
producen en un ctodo incandescente los cuales son acelerados hasta un cuarto de
10

la velocidad de la luz en el can, usando un campo elctrico pulsado. El producto


de estos electrones, son introducidos en la gua de onda, en la cual el chorro de
electrones se va acelerar segn la energa que se va a trabajar. En esta gua
aceleradora existe un campo electromagntico de alta frecuencia y alta potencia, el
cual se encarga de transportar al chorro de electrones. Se crean pequeos paquetes
que son acelerados aproximadamente al 99 % de la velocidad de la luz. As los
electrones acelerados pueden utilizarse directamente o en caso de formar haz de
fotones frenarlos, hacindolos chocar contra un blanco de material pesado, para que
cedan su energa cintica en forma de fotones de rayos X.
Con los equipos de radioterapia pueden alcanzarse energas muy altas. En su

uso clnico son del orden de la decena de MeV ( 100 veces mayor que los equipos

de rayos X y 10 veces mayor que los rayos del

60

Co. En este caso el equipo

acelerador lineal, de uso clnico, Fig. 1, es isocntrico y gira completamente 360.


Los aceleradores lineales muchas veces generan haces de fotones y de
electrones con varias energas, esto permite cubrir todas las necesidades de uso en
el servicio de radioterapia. Adems presenta una gran cantidad de accesorios, como
colimadores asimtricos y multilminas, dispositivos de imagen portal, cuas
dinmicas, aplicadores para radiociruga, etc.
Por todo esto son mquinas que requieren gran preparacin y mucho
tiempo, tanto para la puesta en marcha como para el programa de garanta de
calidad y el mantenimiento.

11

FIG. 1. Cabezal de un acelerador lineal. Ref. [5]

I.1.2: Equipo de radioterapia de Cobalto: Los equipos para terapia de uso mdico que
usan una fuente de

60

Co, emiten rayos gamma y se utilizan para el tratamiento de

enfermedades como el cncer. Debido a que las mquinas de

60

Co, Fig. 2 requieren de

mantenimiento especializado, por la energa que emiten, promedio de 1.25 MeV, hace que
su fuente est alojada en un sitio llamado recinto, que es blindado con plomo u otro
material, segn la marca del equipo, para evitar que la radiacin salga a travs del cabezal
del equipo cuando se est tratando al paciente, denominada radiacin dispersa, que es la
radiacin que se genera fuera del haz primario y contribuye a dosis menores en otras partes
del cuerpo del paciente, durante su tratamiento, o cuando est apagado el equipo, que es la
radiacin que genera la fuente de 60Co durante su decaimiento y que atraviesa el recinto
blindado, este tipo de radiacin, contribuye en dosis al personal ocupacionalmente
expuesto y constantemente est emitiendo radiacin de fuga a diferencia del acelerador
lineal que no la presenta, el promedio de radiacin de fuga y contaminacin se mide en
Kerma (kinetic energy released per unit mass), que es la energa liberada por unidad de
masa en un punto [9] se define as:

K=
La unidad del Kerma es el Joule/Kilogramo (J/Kg). El nombre de la unidad de Kerma es el
gray (Gy) donde 1J/Kg = 1 Gy
Las unidades de 60Co producen rayos estables, dicromticos de 1,17 y 1,33 MeV, lo
que resulta en un promedio de energa del haz de 1.25 MeV. La fuente contenida dentro del
equipo debe sellarse para que pueda resistir temperaturas altas por posibles incendios en el
edificio o centro clnico.
La fuga del cabezal [10] con la fuente en posicin Blindada es hasta 20 Gy h-1 a 1
metro de la fuente o hasta 200 Gy h-1 a 5 cm de la fuente.
Esto puede contribuir a una proporcin significativa de la dosis mxima permisible
para el personal.
12

FIG. 2. Equipo de Cobalto Theratron-80. Ref. [6]

I.2. DESCRIPCIN DE UNIDAD DE 60Co - THERATRON-80:


El equipo Theratron-80 cuenta con una fuente de 60Co de 1.5 cm de longitud que se
encuentra alojada dentro de un contenedor que se ubica a un extremo del gantry cuando el
equipo est en posicin de apagado, en la Fig. 3 se observa el gantry (forma de brazo) en
cuyo extremo se encuentra conteniendo al colimador y al indicador de posicin la fuente, a
todo esto se llama cabezal del equipo su funcin es alojar a la fuente dentro de un
contenedor que es capaz de desplazarse en el interior blindado con plomo a travs de un
embolo, de forma que tienen dos posibles estados, si la fuente est en el interior del
blindaje se dice que es la posicin de reposo (OFF), si se encuentra alineada con los
colimadores del cabezal y expuesta al paciente se dice que est en posicin de irradiacin
(ON). En el extremo opuesto del cabezal se encuentra una lmpara que sirve como
indicador de la posicin de la fuente, se enciende de color rojo cuando se est irradiando y
se enciende de color verde cuando no se est irradiando es decir la fuente est dentro del
cabezal. El movimiento del contenedor se consigue con un sistema hidrulico llamado
13

embolo el cual hace que la fuente se desplace de un lado hacia otro colocndola en
posicin de exposicin (ON) y no exposicin (OFF).
FIG. 3. Cabezal de la Unidad Theratron-80. Ref. [6]

El cabezal del equipo est instalado sobre un brazo llamado gantry, que es capaz de
girar de 0 a 360 sobre un nico punto llamado isocentro. En un extremo dentro del
Gantry se encuentra el colimador, Fig. 4 que gira 360 en referencia al punto central del
volumen tumoral del paciente, a este punto tambin se le denomina isocentro Fig. 6, que es
un punto donde se cruzan el giro del grantry o brazo, eje de giro del colimador,eje de giro
de la mesa y eje de giro del punto central del volumen tumoral del paciente. Teniendo una
tolerancia de precisin de 0.2 cm.
El colimador presenta una bandeja donde se coloca los accesorios modificadores
del haz como cuas fsicas con ngulos de 15, 30, 45 y 60. Estas cuas tienen la
funcin de homogeneizar el haz cuando la superficie del paciente es poco homognea,
adicionalmente en el porta bandeja Fig. 4, se puede colocar los moldes del paciente en
caso lo requieran para proteger los rganos de riesgos que pudieran estar dentro del campo
de tratamiento. Estos moldes son confeccionados para cada paciente y para cada haz de
irradiacin, est elaborado de un material llamado Cerrobend que es una aleacin
14

compuesta de 50 % de bismuto, 26,7% de plomo, 13,3% de estao, y 10,0% de cadmio, y


se fusiona a una temperatura de 70C; presenta una densidad de 9,64g/cm3, este material
es el ms usado para la fabricacin de los moldes y protecciones por ser reusable.
La mesa del equipo; Fig. 4, es el dispositivo donde se coloca al paciente y gira
sobre un eje fijo, y presenta movimientos de derecha a izquierda, adelante y atrs, arriba y
abajo ademas de rotar isocentricamente en todos sus puntos. Sus componentes estn
elaborados de fibra de carbn ya que son radiotransparentes a las radiaciones al momento
de irradiar al paciente, o al momento de girar el gantry y entregar dosis en un angulo
diferente a 0.
El equipo Theratron-80; presenta mandbulas asimtricas es decir presentan
movimientos independientes en los ejes X y Y, su distancia de tratamiento fija al centro del
volumen a tratar es de 80 cm refirindose a esta distancia DFI (distancia fuente isocentro).
La mxima entrega de dosis en profundidad que alcanza la fuente de Cobalto en un
medio, es de 0.5cm llamndose a esta distancia dmax (distancia mxima), por este motivo
es necesario colocar varios haces de radiacin en el tratamiento de un paciente.

FIG. 4. Partes del equipo Theratron-80. Ref. [11]

15

La fuente de 60Co, se encuentra encapsulada en un contenedor, el cual posee varias


capas de diferentes materiales, como el acero y plomo para fines de blindaje y proteccin
de la fuente radiactiva, en caso pudiera quedarse expuesta la fuente dentro del contenedor,
este debe ser capaz de no destruirse.
Uno de los motivos adicionales que se hace uso de la fuente de

60

Co, es por su

facilidad de intercambio de una fuente por otra al estar encapsulada, as como por su
decaimiento de la actividad que es lento, ya que su vida media es relativamente mayor, lo
que hace generalmente que la sustitucin de la fuente, sea realizada dentro de una vida
media, mejorando los costos de tratamientos.
I.2.1: Caracterstica de una fuente de 60Co:
Tpicamente la fuente tiene un dimetro de 1.5 cm, y largo de 2.5cm, por ser
pequea favorece en la formacin de una pequea penumbra fsica.
Este tipo de fuente, presenta una actividad del orden de 185 - 370 TBq, y posee una
tasa de dosis tpica a 80 cm de 1 2 Gy/min.
Su vida media es de 5,26 aos; las partculas beta que se forman en su decaimiento,
son absorbidas por la cpsula que protege a la fuente [12].
Cuando la fuente est en exposicin, se prende una luz de color rojo, indicando que
la fuente est en exposicin, y la radiacin como haz primario, est saliendo por el campo
formado por el colimador, que va del rango de apertura de un campo de 5 x 5 cm 2 hasta 35
x 35 cm2.
I.2.2. Decaimiento de una fuente de 60Co:
La fuente de

60

Co decae a travs del decaimiento beta (), estas partculas son

absorbidas por el encapsulamiento de la fuente. En la Fig. 5, hacia el lado derecho, se


puede apreciar que ocurre en 99.9% por decaimiento -, liberando energas de 1,173 MeV
y 1,332 MeV.

16

FIG. 5. Esquema de desintegracin del Co60. Ref. [13]

Obtenindose como producto final al

60

Ni. El decaimiento -

por lo general,

consiste en la transformacin de uno de los neutrones de su ncleo en un protn,


entindase en el proceso que un electrn que es absorbido en la propia fuente, que lo lleva
a ser un tomo de

60

Ni excitado. La energa de excitacin es cedida mediante un

decaimiento gamma () consiguiente en la emisin de un fotn de 1.33 MeV y otro de 1.17


MeV obtenindose una energa media de fotones de 1.25 MeV. para llevar el tomo de
Nquel a un estado estable.
I.2.1: Propiedades fsica de una fuente de Cobalto:
Las propiedades fsicas de la fuente de 60Co son las siguientes [5].

Energa de rayos gamma: 1,17 MeV y 1,33 MeV.

Alta actividad especfica de aproximadamente 9,3 TBq/g.

Periodo de semidesintegracin relativamente alto: 5,3 aos.

Constante de tasa de exposicin: C [R.m2/ (Ci.h)] = 1,31.

Constante de tasa de kerma en aire: C [nGy.m2/ (GBq.h)] = 309.

17

Es importante entender que es el punto isocntrico, debido a que todas las tcnicas de
tratamientos, son isocntricas al volumen tumoral y es en base a la ubicacin del punto
isocntrico, que gira el equipo alrededor del paciente, por eso se define isocentro al punto
donde cruza el eje de giro del brazo, con el eje de giro del colimador y con el eje de giro de
la mesa, Fig. 6. En la unidad de

60

Co, suele estar a 80cm de la fuente. Por lo que la

precisin mecnica del equipo no debe variar de 5 mm de dimetro [10].

FIG. 6. Ubicacin del isocentro de un equipo de Cobalto.


Ref. [14]

La utilizacin de 60Co en el tratamiento de enfermedades oncolgicas, constituye


actualmente, una prctica que ha alcanzado amplia difusin en el mundo entero.

I.3: RADIACIN ELECTROMAGNTICA:


Se describe la radiacin electromagntica, como el evento que se propaga desde una
fuente radiactiva a todas las direcciones. Por lo tanto, es una modalidad de propagacin de
energa en el espacio [15].
La radiacin electromagntica es una doble onda, formada por los campos
elctricos y magnticos, as como se muestra en la Fig. 7 que se encuentran en fase y cuyos
planos de propagacin son perpendiculares.

18

FIG. 7. Radiacin electromagntica. Ref. [15]

Toda onda est caracterizada por su frecuencia ( ), que es el nmero de


oscilaciones que efecta el campo electromagntico en cada segundo, se expresa en
hertzios (Hz), y por su longitud de onda () que representa la distancia entre dos puntos
mximos sucesivos de la onda y se mide en unidades de longitud [15].
Adems de la luz visible, tambin las ondas de radio, los infrarrojos, los
ultravioletas, los rayos X y los rayos gamma tambin son radiacin electromagntica y se
diferencian unas de otras en la longitud de onda y en la frecuencia, las cuales estn
relacionadas con la velocidad de propagacin en el vaco.
Cuando una onda electromagntica se propaga en un medio distinto del vaco, se
dice que dicho medio es transparente para dicha onda. Un medio puede ser trasparente para
unas ondas y opaco para otras. Por ejemplo, los tejidos blandos del cuerpo humano son
opacos para la luz visible y relativamente transparentes para los rayos X.
Todas las radiaciones electromagnticas se presentan en un rango de energas,
donde la luz visible se encuentra aproximadamente en el centro. Todas se pueden ordenar
en el espectro electromagntico, de menor a mayor frecuencia (de mayor a menor longitud
de onda), es decir, desde las ondas radioelctricas ms largas hasta los rayos gamma ms
energticos. Observe en la Fig. 8 que la relacin longitud de onda es menor el valor hacia
la derecha y el valor de la frecuencia es mayor.

19

FIG. 8. Espectro de la radiacin electromagntica. Ref. [15]

La radiacin electromagntica es energa pura y no es posible explicar mediante un


solo modelo su Interaccin con la materia y otros fenmenos, por ello que se admite que la
energa que transporta la radiacin electromagntica, esta constituida por pequesimos
paquetes de energa llamados fotones o cuantos de radiacin.
Cada fotn tiene dimensiones muy pequeas, que no cambian al propagarse por el
espacio comportndose como una partcula, aunque la masa sea de material nula. Cada
fotn posee y transporta una determinada cantidad de energa que es proporcional a la
frecuencia:

Donde:
c: velocidad de la luz.
: longitud de onda.
h: constante de Planck

= 6.62 x 10-34 Julios x seg.


= 4.14 x 10-15 eV x seg.

Cada uno de los fotones de la luz visible tiene una energa de unos pocos
electronvoltios; que es mayor que los de luz infrarroja, menor que la luz ultravioleta y
mucho menor que los rayos X o rayos gamma, tal como se aprecia en la figura del espectro
20

electromagntico. Este tipo de radiaciones que tienen energas expresadas en mega


electronvoltios, produce ionizacin en el tomo, por lo que se les llama radiaciones
ionizantes [8].
I.3.1: Ionizacin:
Todo tomo que reciba o interaccione con energa puede pasar a un estado excitado
es decir los electrones pasan a ocupar la vacancia dejada por los electrones que fueron
arrancados de su rbita y lo hacen desplazndose de rbitas de mayor nivel a otras de
menor nivel. Pero si la energa es suficientemente grande, puede arrancar del tomo uno o
varios electrones, entonces el tomo queda ionizado. La energa suficiente para arrancar un
electrn de su rbita se denomina energa o potencial de ionizacin y es caracterstica de
cada tomo Fig. 9.

FIG. 9. Ionizacin. Ref. [16].

I.3.2: Radiacin ionizante:


Toda la materia est formada por molculas y tomos, as mismo los tomos consta
de dos partes, una parte que es la rbita en donde giran los electrones cargados
negativamente, y un ncleo que a su vez est formado por protones que son partculas que
poseen carga elctrica positiva y neutrones que no poseen carga elctrica. En la naturaleza
los tomos se encuentran con la cantidad de electrones igual al nmero de protones,
entonces se dice que el tomo esta neutro y por lo tanto su carga elctrica total es cero. Si
esto no es as, se dice que el tomo esta ionizado y presenta carga elctrica por lo tanto al
tomo en ese estado se le llama in.
21

Los tomos mayormente se encuentran en la naturaleza de forma estable, es decir


en estado neutro, sin embargo, algunos tomos se encuentran de forma inestables, y estn
emitiendo espontneamente radiacin electromagntica, que pueden modificar su
estructura debido a la bsqueda de su estabilidad al perder un electrn. A estos ncleos
inestables se les denomina, radionucledos o radioistopos y al proceso de emisin, se le
denomina decaimiento o desintegracin radioactiva. Por otro lado, si los productos del
decaimiento interaccionan con otro tomo y este, provoca la liberacin un electrn,
entonces decimos que ocurri una ionizacin. Todos los fotones que presentan suficiente
energa para producir una ionizacin producen radiaciones ionizantes, estas radiaciones son
capaces de romper ligaduras que forman parte de los tomos, lo pueden hacer por grandes
cantidades antes de perder toda su energa. Es por esta razn, que las radiaciones ionizantes
causan efectos biolgicos en la clula, al ionizarla o interactuar con un blanco celular [8].
La desintegracin radioactiva, es un proceso fsico y probabilstico, por lo que se
puede predecir la frecuencia en que pueda suceder u ocurrir una desintegracin, pero no
podemos predecir en que momento ocurra, solo conocer la probabilidad de que se produzca
el evento en un determinado intervalo de tiempo, esta probabilidad es independiente del
momento en que un ncleo radioactivo es creado, por lo que, se deduce que los ncleos no
envejecen. La desintegracin radioactiva no depende de las influencias del entorno como
presin, temperatura, reacciones qumicas y otros. Por consiguiente, cada radionclido est
caracterizado por la denominacin de vida media, que es lo que conocemos como el
tiempo en el que la mitad de un conjunto de ncleos radioactivos se desintegra. Este
perodo o vida media, puede tomar valores desde fracciones de segundos, hasta billones de
aos y es caracterstico para cada radionclido. Las radiaciones ionizantes tambin pueden
producirse en procesos diferentes a las desintegraciones radioactivas. Por ejemplo, cuando
se aceleran o frenan partculas con carga elctrica, se emiten fotones capaces de ionizar.
Tambin es posible con dispositivos muy sofisticados como el ciclotrn, acelerador lineal
que aceleran partculas cargadas, como ncleos o electrones, hasta altas energas.
Las radiaciones ionizantes se pueden clasificar en:
Radiacin (alfa): Se presenta generalmente en ncleos pesados, los cuales para
alcanzar la estabilidad emiten una partcula alfa (

, formada por 2 protones y dos

neutrones, Observe Fig. 10, su penetrabilidad es muy baja por la carga que posee y notable
masa.
22

Su energa tiene valores definidos dependiendo del radionucleido que lo emita, es


decir su espectro es discreto. Ejemplo:

FIG. 10. Decaimiento Alfa, ejemplo del 226Ra. Ref. [18]


Radiacin (beta): Existen dos tipos de radiacin :
-

Decaimiento -, Se presenta en ncleos en los cuales un neutrn se


convierte en protn, liberndose un electrn (partcula beta negativa),
adems

emitindose

una

partcula

complementaria

denominada

antineutrino Fig. 11. La energa del espectro beta es un continuo a


diferencia del espectro de la emisin alfa. Ejemplo:

23

FIG. 11. Decaimiento - ejemplo de 60Co. Ref. [18]

Decaimiento +, Se presenta en ncleos en los cuales un protn se


convierte en neutrn, liberndose un positrn (partcula beta positiva),
adems emitindose una partcula complementaria denominada neutrino.
Fig. 12. La energa del espectro beta es continuo a diferencia del
espectro de la emisin alfa.

24

FIG. 12. Ejemplo de decaimiento + de 13N. Ref. [18]

Radiacin gamma (): Son fotones usualmente de muy alta energa, emitidos por
ncleos inestables u otros procesos. El ncleo no cambia su identidad sino que nicamente
pierde energa.
I.4. RADIACIN GAMMA:
Antes de definir el concepto de radiacin gamma, primero diferenciemos los
trminos radiacin e irradiacin.
La radiacin es una manera de trasmisin de la energa que se transmite a travs del
espacio en forma de ondas electromagnticas, ejemplo: microondas, la luz, el calor, los
rayos X y los rayos gamma. Si la radiacin presenta suficiente energa para provocar
cambios en los tomos, se dice que es radiacin ionizante por los efectos descrito
anteriormente. La radiacin es similar a la luz visible o a las ondas de radio, se
diferencian en la longitud de onda que es muy corta para radiacin y, por tanto, un nivel
de energa ms alto que la luz. Estas diferencias, facilitan la penetracin profunda de la
radiacin gamma dentro de ciertos materiales, en nuestro caso es el paciente.
La irradiacin est referida al proceso que describe la exposicin deliberada en
forma controlada a un material por la accin de una fuente de radiacin, como pueden ser
los rayos gamma o un haz de electrones.
La radiacin ocurre cuando un ncleo excitado
por decaimiento - o +, alcanza su estado fundamental

; generalmente producido
a travs de la emisin de uno

o varios fotones . Un ejemplo de decaimiento es la transicin de la


resultante de la descomposicin 60Co, en

excitado,

estable a travs de una emisin de dos rayos

con energas de 1.17 y 1.33 MeV [5].


La radiacin () est constituida por fotones y puede ser producida por elementos
radiactivos o procesos como la aniquilacin de un par positrn-electrn o travs de
fenmenos astrofsicos de gran violencia.
La radiacin gamma, debido a su alta energa y poder de ionizacin en profundidad
de un material, son capaces de penetrar la materia a diferencia de la radiacin alfa y beta,
que su poder de penetracin en la materia es mucho menor, por lo tanto pueden causar
grave dao al ncleo de las clulas, es por este motivo que se utiliza para esterilizar
equipos mdicos y alimentos.
25

La energa que emite la radiacin gamma se mide a travs de una unidad que se
llama electrn voltio (eV), con sus respectivos mltiplos como (MeV). Un MeV es la
escala que corresponde a fotones gamma de longitudes de onda inferiores a 1011 m o a
frecuencias superiores a 1019 Hz.
Los rayos gamma se diferencian de los rayos X por su origen, este ltimo se genera
a nivel extranuclear, por un fenmeno conocido como frenado electrnico, a diferencia de
los rayos gamma, que se producen por desexcitacin de un nuclen, que se encuentra en
estado excitado a otro de menor energa y por desintegracin de istopos radiactivos.
La radiactividad existe en el entorno natural, ejemplo:

Rayos csmicos, que emite el sol.

Isotopos radiactivos, que los encontramos en rocas y minerales.

Mayormente los rayos gamma que son producidos en el espacio, no llegan a la


superficie terrestre, pues estos son absorbidos por la alta atmsfera.
I.4.1: Interaccin de los rayos X con la materia:
La interaccin de la radiacin electromagntica con la materia, se puede producir bajo
cualquiera de los 3 procesos siguientes:

Efecto fotoelctrico.

Dispersin Compton.

Produccin de pares.
II.4.1.A: Efecto fotoelctrico.: En este caso el fotn interactua con los

electrones que se encuentran fuertemente unidos, o presenta una alta energa de ligadura,
Fig. 13, es decir, con los electrones que se encuentran mas cerca al ncleo. El fotn que
interactua cede toda su energa y por lo tanto desaparece, esto hace que el electrn sea
arrancado de su rbita. El electrn es expulsado de su rbita y se llama un fotoelectrn [5].
EK hEB
Dnde:
hEnerga del fotn incidente
EB: Energa de ligadura del electrn
26

FIG. 13. Efecto fotoelctrico.: hacia el lado izquierdo se observa la Interaccin del fotn con un
electrn de la rbita K, hacia el lado derecho se observa la emisin desde el tomo como un
fotoelectrn. Ref. [9]

Si el fotn tiene energa suficiente para arrancar electrones de la capa K, el 80% de


sus Interacciones se producen con electrones de esta capa.
La probabilidad de que se produzca un efecto fotoelctrico. disminuye cuando se
aumenta la energa de los fotones (es proporcional a I/E 3), aumenta cuando es mayor el
nmero atmico del blanco (es proporcional a Z3) y es proporcional a la densidad del
medio.
La interaccin fotoelctrica predomina a bajas energas (100 KeV) con tejidos
biolgicos.
I.4.1.B: Dispersin Compton: En este caso el fotn interacciona con uno
de los electrones poco ligados al tomo es decir con los electrones mas exteriores, y como
resultado se produce un fotn dispersado llamado fotn Compton dispersado, de menor
energa que el incidente, y un electrn (electrn compton) con energa cintica, segn se
muestra en la Fig. 14, definida por:
E= E + Ec.
Donde;
E es la energa del fotn incidente
E es la energa del fotn secundario, y
Ec es la energa cintica del electrn Compton.
27

El fotn secundario puede emerger en cualquier direccin con distintas energas


segn el ngulo, correspondiendo las energas mnimas a las direcciones cercanas a los
180 (retrodispersin) y las mximas a las direcciones cercanas a 0 (prcticamente igual a
la del fotn incidente). La representacin de esta interaccin se puede ver en la Fig. 14.

FIG. 14. Dispersin Compton. Ref. [9]

La probabilidad de que se produzca una interaccin Compton disminuye al


disminuir la energa de los fotones, varia con el nmero atmico del material y es
proporcional a la densidad atmica del medio.
Esta Interaccin predomina a energas intermedias (entre 100 y 1000 keV) en
tejidos biolgicos [5].
I.4.1.C: Creacin de pares electrnicos: Proceso por el cual una partcula
de energa suficiente, crea dos o ms partculas diferentes Fig. 15, este proceso es
caracterstico de los aceleradores de partculas, donde se hacen colisionar partculas como
electrones y positrones de muy alta energa, apareciendo toda clase de partculas que
desconocamos anteriormente.
Tambin es caracterstico en algunas reacciones nucleares de alta energa y en los
rayos csmicos, donde se generan fotones (o rayos gamma) de alta energa que pueden
crear dos o ms partculas de masa igual o menor a la energa del fotn.
Es caracterstica la reaccin e+ + e- , donde el fotn debe tener al menos una
energa igual a la masa del electrn y el positrn (ambos tienen una energa en reposo de
511 keV), es decir, 1.022 keV 1,022 MeV, para poder generar las partculas.
Generalmente este proceso viene seguido del inverso, en el que el positrn generado se
aniquila con un electrn de la materia que existe alrededor. Para que se d este proceso es

28

imprescindible que exista en las cercanas del fotn inicial un ncleo (para que se cumplan
las leyes de conservacin de momento y energa).

FIG. 15. Efecto produccin de pares. Ref. [9]

En la siguiente Fig. 16 se puede apreciar el predominio de efectos descritos.


Muestra las regiones de predominacin relativa de los tres mas importantes efectos
con las materia, el nmero atmico y la energa del fotn, se toman como parmetro. Se
observa la predominancia del efecto Fotoelctrico a bajas energas, dispersin Compton a
energas intermedias y creacin de pares a altas energas.

FIG. 16. Zonas predominio respectivamente de los efectos fotoelctricos, dispersin comptom y
creacin de pares.
Ref. [5]

29

I.4.2. Dosimetra de tcnicas sencillas:


La interpretacin de datos de las unidades de tratamiento, es individual para cada
mquina y cada energa, por lo que se cuenta con un conjunto de tablas, que suministran
los parmetros dosimtricos relevantes bajo determinadas condiciones clnicas. stas son
preparadas por un fsico mdico, a partir de las calibraciones y otras medidas. El problema
fundamental consiste en conocer la tasa de dosis en cualquier punto del medio irradiado
(normalmente agua, por similitud con el cuerpo humano). De esta forma, al prescribir una
dosis en un determinado punto, podemos calcular el tiempo de irradiacin y la dosis en
otros puntos de inters. Segn la frmula para calcular la tasa de dosis [5].

Partiendo de un punto de referencia (con unas determinadas condiciones de


referencia, tamao de campo, distancia fuente-superficie (DFS), profundidad, etc.) [10],
donde conocemos la tasa de dosis, y dependiendo de la tcnica de irradiacin, pasamos a
calcular la tasa de dosis en otros puntos, teniendo en cuenta la diferencia entre las
condiciones reales de irradiacin y las condiciones de referencia (tamao del campo,
profundidad, DFS, utilizacin de bandejas, cuas). Esto se consigue multiplicado la tasa de
dosis de referencia por un conjunto de factores, lo que al final resultara, en la dosis para
una determinada profundidad, tamao de campo, y otros factores que se deben tener en
cuenta.
I.4.3. Dosis en profundidad regin build up:
Cuando un haz de fotones golpea la superficie del tejido, los electrones se ponen en
movimiento, causando dosis y esta aumenta con la profundidad hasta que alcanza la dosis
mxima en la profundidad conocida como dmax. Fig. 17, a medida que la energa del haz
de fotones aumenta, se incrementa la profundidad de la regin de acumulacin.

30

FIG. 17. Regin build up en circulo rojo se observa que aumenta con la energa de fotones.
Ref. [5]. Pg. 59

Los efectos de interaccin son ms escasos en los tejidos subcutneos con los
fotones de alta energa, combinados con su gran penetrabilidad, hacen muy adecuado el
tratamiento de lesiones profundas Fig. 17.
I.4.4. Porcentaje de dosis en profundidad (PDD):
Si aumenta la profundidad entonces el nmero de fotones disminuir, a su vez va
disminuyendo el nmero de electrones secundarios, a partir del dmax la dosis cada vez es
menor. Por ejemplo: el mximo de dosis para fotones de terapia superficial se encuentra en
la superficie, para el

60

Co es a 5 mm de profundidad y para fotones 18 MeV de un

acelerador lineal alrededor de 3 cm. (Observe la Fig. 18, la diferencia del valor de dmax
conforme va aumentado la energa de fotones).

31

FIG. 18. Curvas de dosis en profundidad (PDD) para 60Co y energas de 4, 6, 10, 18 y 25 MeV
Ref [5]. Pag. 182

En las irradiaciones con fotones de alta energa, el dmax se encuentra por debajo de
la superficie, esto hace que la dosis en la piel slo sea una fraccin de la dosis en dicho
mximo, de forma que se infra dosifica. En los casos en que no se quiera esta reduccin de
dosis, se debern colocar bolus (material utilizado en radioterapia, con el fin de compensar
la distribucin de la dosis en el paciente o para aumentar su valor en las estructuras del
cuerpo del paciente situados a poca profundidad, se coloca directamente en la piel del
paciente. La mayora de bolus utilizan lminas con un espesor de 0,5-1,0 cm, el coeficiente
de absorcin de la radiacin similar a la del agua ionizante. Tienen un espesor de 0,5-1,0
cm, el coeficiente de absorcin de la radiacin similar a la del agua ionizante), en tcnica
W de bolus a menudo se utiliza arroz, de forma que el mximo ocurra cerca de la piel.
Cuanto mayor es la energa de los fotones ms profundo es el mximo y menor es la dosis
en la superficie.
Por lo tanto el PDD se define como la relacin, expresada como un porcentaje, de
la dosis absorbida en el eje central en la profundidad (d) a la dosis absorbida en el punto de
referencia dmax. Fig. 19, .Se tiene:
PDD: Dd x 100
Dd0
32

FIG. 19. PDD donde d: profundidad x, D0 es la profundidad de referencia que usualmente


es el dmax. Ref. [13]

I.5. RADIOBIOLOGIA:
Es la parte de la fsica mdica, que estudia el efecto de las radiaciones en la clulas
y es el tema principal a desarrollar en este trabajo de investigacin; con el descubrimiento
de la radioactividad en 1,896 por Henry Becquerel y el desarrollo de los Rayos X en 1,895
por William Conrad Roentgen, se observaba los efectos de las radiaciones en el ser
humano, efectos cuya visualizacin han ayudado a mejorar las tcnicas, tratamientos y
optimizacin del uso de las radiaciones para fines mdicos [2]. En trminos generales la
radioterapia se emplea en el tratamiento del cncer, ya sea de modo paliativo o curativo
actuando sobre la enfermedad; resecando el tamao del tumor, eliminando, o controlando
su crecimiento; la cantidad de radiacin que se deposita en un tejido tumoral est
determinada directamente por la radiobiologa, mediante clculos de tolerancia de dosis, y
resistencia de dosis, etc.
Los clculos que se realizan para observar cuanta energa se va a depositar en un
determinado tejido y en funcin del tiempo est a cargo de la radiobiologa, que a su vez
incluyen diferentes parmetros como tipo de tumor, cantidad, volumen, origen tumoral,
33

edad del paciente, estadio, tamao, complicacin de otros rganos adyacentes al tumor, etc.
El uso de la radioterapia en el tratamiento del cncer se fundamenta en los efectos
citotxicos de las radiaciones ionizantes sobre las clulas malignas que traen como
consecuencia la muerte celular [2]. Las complicaciones del tratamiento radiante, surgen
como resultado de la destruccin de las clulas que integran los tejidos normales. La
llamada especificidad de la radioterapia, se basa sobre todo en principios fsicos ms que
biolgicos, por ejemplo, un plan de tratamiento bien diseado, va a permitir la
administracin de una dosis apropiada al tumor, reduciendo al mnimo posible la
irradiacin de los tejidos normales, con objeto de prevenir posibles complicaciones. Sin
embargo, los conceptos de radiobiologa deben ser tomados en cuenta al seleccionar
esquemas de fraccionamiento, en la determinacin de las dosis mximas tolerables, en la
planificacin del tratamiento adyuvante, y cuando se plantea el uso de otras modalidades
teraputicas en combinacin con la radioterapia [8].
La respuesta tumoral tambin va a ser influenciada por los patrones de proliferacin
y perdida celular del tumor en el momento del tratamiento y por el cambio de estos
patrones durante el mismo. Aquellos tumores que poseen una gran proporcin de clulas
proliferativas (una alta fraccin de crecimiento) pueden disminuir de tamao de una
manera ms rpida y dramtica despus del tratamiento, hecho que se debe no a una
mayor radiosensibilidad intrnseca, sino al hecho de que las clulas esterilizadas por la
radiacin van a morir en mitosis, mediante bloqueo de diferenciacin. Por eso, las clulas
proliferativas expresan las lesiones letales y mueren ms rpidamente que las clulas en
estado de reposo. Una reduccin rpida del tumor entonces, no necesariamente implica una
muerte celular de gran magnitud [17]. Igualmente, la tasa de reduccin del tumor va a
depender de otros factores, por ejemplo, en tumores que contienen grandes cantidades de
tejido conjuntivo, el volumen del tumor puede permanecer constante mientras que la
densidad de las clulas malignas ubicadas en el centro del mismo tumor disminuye.
Los patrones de proliferacin celular del tumor pueden cambiar despus del
tratamiento. Estos cambios pueden ser complejos y estn en relacin con diversos factores
[19].
En primer lugar: las radiaciones van a inducir una variedad de bloqueos y retrasos
que impiden que las clulas sobrevivientes y aquellas destinadas a morir, puedan progresar
a travs de los primeros ciclos celulares despus del tratamiento.

34

En segundo lugar: la irradiacin va a matar preferencialmente las clulas de cierta


edad, dejando una poblacin sobreviviente, cuya proliferacin est parcialmente
sincronizada, sincronizacin que a la larga decaer debido a la variabilidad de la
progresin en el ciclo celular de cada clula. Este fenmeno a menudo se denomina
redistribucin.
En tercer lugar: las clulas en estado de reposo pueden ser reclutadas hacindolas
entrar en las siguientes etapas de proliferacin del ciclo celular, esto puede lograrse a
travs de mecanismos de control homeosttico o debido a mejoras en el ambiente, que
permiten a la clula, expresar su habilidad inherente para proliferar. Todos estos procesos
diversos pueden ocurrir despus de la irradiacin del tumor, su secuencia y aparicin
depender del esquema de radiacin [8]. Como cantidad de dosis de radiacin, tipo de
radiacin entre otros.
Otro aspecto dentro del marco de la proliferacin celular que puede influenciar la
radioresistencia del tumor, es la proporcin de clulas que tienen las mismas propiedades
clonognicas intrnsecas y por tanto tienen la potencialidad de producir una recidiva,
debido a las grados de diferenciacin celular.

I.5.1. Relacin dosis respuesta:

La radiobiologa es una ciencia que busca establecer las relaciones entre la dosis de
radiacin y la respuesta del organismo. Una relacin dosis-respuesta es simplemente una
relacin matemtica o grfica entre los niveles graduales de dosis de radiacin y la
magnitud de la respuesta observada. En medicina, las relaciones de dosis - respuesta tienen
dos aplicaciones importantes.
Primeramente, las relaciones determinadas experimentalmente son usadas para
disear los tratamientos rutinarios con fines de terapia para pacientes que sufren de
enfermedades malignas.
En segundo lugar, los estudios de radiobiologa han sido diseados para
proporcionar informacin sobre los efectos de irradiacin a bajas dosis. Estos estudios y las
relaciones de respuesta-dosis son la base para las actividades reguladoras y son de
particular significado en la radiologa.

35

Cada relacin de dosis-respuesta tiene dos caractersticas: es lineal o no lineal y


tiene umbral o no tiene umbral [20]. La relacin ms simple es la relacin dosis-respuesta
de tipo lineal, donde la respuesta es directamente proporcional a la dosis. Cuando la dosis
de radiacin se duplica, la respuesta se duplica del mismo modo. Esta relacin es
denominada de tipo lineal sin umbral, es decir que esperara una respuesta ante cualquier
dosis por pequea que esta sea, Fig. 20.

FIG. 20. Curvas Dosis- Respuesta el umbral es un nivel de dosis por debajo del cual no se observa
una respuesta. Ref. [21]

Las otras relaciones de dosis respuesta son de tipo no lineal con umbral, en general,
a bajas dosis no se medir ninguna respuesta, pero conforme esta se incremente sobre un
umbral la respuesta crecer hasta un punto donde esta respuesta ser la misma para
cualquier dosis. Fig. 20 [12].

I.5.2: Clasificacin de Radiacin en Radiobiologa:

Para uso en la radiobiologa y proteccin radiolgica, la cantidad fsica que es til


para definir la calidad de un haz de radiacin ionizante es la transferencia lineal de energa
(LET) [5]. En contraste con la potencia de frenado, que centra la atencin en la prdida de
energa, por una partcula cargada en movimiento enrgico a travs de un medio, el LET
centra la atencin en la velocidad lineal de la absorcin de energa por el medio
absorbente, como la partcula cargada atraviesa el medio. La comisin internacional de
unidades y medidas radiolgicas (ICRU) define el LET de la siguiente manera: LET de
partculas cargadas en un medio es el cociente dE/dl, donde dE es la energa media
impartida localmente al medio por una partcula cargada de energa especificada al
atravesar una distancia de dl. En contraste con la potencia de frenado con una unidad tpica
36

de MeV/cm, la unidad normalmente utilizada para la LET es KeV/m. El promedio de la


energa se obtiene dividiendo el recorrido de partculas en incrementos iguales de la
energa y un promedio de la longitud del recorrido sobre la que se depositan estos
incrementos de energa.

Tpicos valores de LET usados comnmente para radiaciones:


-

250 kVp Rayos X

2 keV/ m

Cobalt-60 Rayos gamma

0.3 keV/m

3 MeV Rayos X

0.3 keV/ m

1 MeV electrn

0.25 keV/ m

Otros valores usados en radiaciones:


-

14 MeV neutrons

12 keV/m

Partculas pesadas cargadas 100-200 keV/m

1 keV electrn

12.3 keV/m

10 keV electrn

2.3 keV /m

Los rayos X y los rayos gamma son considerados bajos LET (escasamente ionizante),
mientras que los neutrones energticos, protones y partculas cargadas pesadas son de alta
LET (altamente ionizantes). El valor de demarcacin entre la baja y la alta LET es de
aproximadamente 10 keV/m.

I.5.3: Ciclo Y Muerte Celular:

El ciclo de la proliferacin celular se define por dos periodos de tiempo bien


definidos:
(1) la mitosis (M) donde tiene lugar la divisin
(2), y el perodo de la sntesis de ADN (S).
Las fases S y M del ciclo celular estn separadas por dos perodos (gaps) G1 y G2
cuando el ADN an no se sintetiza, pero otros procesos metablicos tienen lugar.

37

El tiempo entre divisiones sucesivas (mitosis) se denomina tiempo de ciclo


celular. Para las clulas de mamferos que crecen en la fase S es por lo
general en el intervalo de 6-8 horas, M menos de una hora, G2 en el
intervalo de 2-4 horas, y G1 1-8 horas, por lo que el ciclo total de clulas es
del orden de 10-20 horas. En contraste, el ciclo celular de las clulas madre
en ciertos tejidos es de hasta aproximadamente 10 das.

En general, las clulas son ms sensibles a la radiacin en las fases G2 y M,


y ms resistentes en la fase S tarda.

El tiempo de ciclo celular de las clulas malignas es ms corto que el de


algunas clulas de tejido normal [22], pero durante la regeneracin despus
de la lesin las clulas normales puede proliferar ms rpido.

La muerte celular de clulas no proliferantes (esttica) se define como la


prdida de una funcin especfica, mientras que para las clulas madres se
define como la prdida de la integridad reproductiva (muerte reproductiva).
Una clula sobrevive cuando mantiene su integridad reproductiva y si esta a
su vez prolifera indefinidamente entonces se dice que son clonognicas
[23].

I.5.4: Irradiacin de clulas:

Al irradiar las clulas aparecen los efectos fsicos que suceden a nivel de los tomos
o molculas, que estn formando las clulas, en ese momento es donde se produce el
posible dao biolgico a las funciones celulares. Los efectos biolgicos de la radiacin son
el resultado principalmente de daos en el ADN que es el objetivo ms crtico dentro de la
clula [24]. Sin embargo, tambin hay otros sitios en la clula que, cuando se daa, puede
conducir a la muerte celular. Cuando la radiacin ionizante se absorbe directamente en el
material biolgico, el dao a la clula puede ocurrir de dos maneras: accin directa y
accin indirecta.

I.5.5: Dao celular causado por accin directa:

38

En la accin directa, se dice que se interactua directamente con el objetivo crtico


de la clula. Los tomos de la propia diana o blanco pueden ser ionizados o excitado a
travs de interacciones de Coulomb, que conducen a la cadena de acontecimientos fsicos y
qumicos, que finalmente producen el dao biolgico [25]. La accin directa es el proceso
dominante en la interaccin de las partculas de alta LET con materiales biolgicos

I.6. RADIOSENSIBILIDAD CELULAR.

I.6.1 Caractersticas de los efectos biolgicos de las radiaciones ionizantes:

I.6.1.A: Aleatoriedad: Al Interaccionar la radiacin con las clulas ocurren


diversos fenmenos que tienen lugar al azar, es decir la interaccin no es selectiva,
pueda causar daos a la clula o no, pueda daar a una clula o a varias, puede
daar al ADN o al componente que estn formando las clulas.

I.6.1.B: Rpido depsito de energa: La energa se deposita en un tiempo


muy corto en el componente celular, en fracciones de millonsimas de segundo.

I.6.1.C: No selectividad: Al Interaccionar la radiacin con la clula esta no


presenta predileccin por algn componente celular.

I.6.1.D: No especificidad lesiva: Las lesiones que se pueden observar no


siempre son causada por las radiaciones, esa lesin puede ser producida por otras
causas fsicas.

I.6.1.E: Latencia: Las daos biolgicos en una clula causados por la


radiacin no son inmediatas, puedan tardar un tiempo en hacerse visibles, a esto se
le llama tiempo de latencia, el periodo es de unos pocos minutos o muchos aos,
dependiendo de la dosis y tiempo de exposicin.

I.7. RADIOSENSIBILIDAD Y RADIORESISTENCIA DE LAS CLULAS


TUMORALES:
39

La radiosensibilidad es la medida de respuesta celular, ocasionada por las


radiaciones ionizantes. Un elemento biolgico es ms sensible siempre y cuando sea mayor
su respuesta a una dosis determinada de radiacin. El elemento biolgico es ms
radiosensible cuando necesita menos dosis de radiacin para alcanzar un efecto
determinado [7].
El concepto opuesto a radiosensibilidad, es radioresistencia. No existe clula ni
tejido normal o patolgico que presente radioresistencia de forma absoluta; pues si se
aumenta ilimitadamente la dosis, siempre se puede alcanzar su destruccin. Administrando
dosis mnimas en

rganos o tejidos, se observaran diferentes grados de alteraciones

morfolgicas y/o funcionales, segn las lneas celulares de que se trate [26].

I.7.1. Escala de radiosensibilidad: Las clulas pueden ser ms sensibles


que otras, esto depende de su actividad celular o sensibilidad a la radiacin,
adems del linaje de procedencia. Tomando como punto de referencia, la muerte
celular, pueden clasificarse en cinco grupos de mayor o menor sensibilidad:

a. Muy radiosensibles: leucocitos, eritoblastos, espermatogonias.


b. Relativamente radiosensibles: Mielocitos, clulas de las criptas intestinales,
clulas basales de la epidermis.
c. Sensibilidad intermedia: clulas endoteliales, clulas de las glndulas gstricas,
osteoblastos, condroblastos, espermatocitos, etc.
d. Relativamente resistentes: granulocitos, osteocitos, espermatozoides, eritrocitos.
e. Muy radioresistentes: fibrocitos, condorcitos, clulas musculares y nerviosas.

I.7.2. Ley de la radiosensibilidad:

La radiosensibilidad celular, est ligada a una serie de factores que son


identificados y aplicados a todas las clulas del organismo, existen las leyes biolgicas, que
otorgan mucha importancia a la actividad mittica, siendo las ms importantes:

40

1.7.2.1. Ley de Bergonie y Trinbodeau (1906): Esta ley nos hace


entender el comportamiento celular, frente a las radiaciones en funcin a su actividad
mittica y diferenciacin celular, se establecen los tres puntos:

1. Una clula es tanto ms radiosensible, cuanto mayor es su actividad


reproductiva.
2. Una clula es tanto ms radiosensible, cuanto ms largo sea su porvenir de
divisin, es decir, cuantas ms divisiones deba cumplir en el futuro.
3. Una clula es tanto ms radiosensible, cuanto menos diferenciadas estn
desarrolladas sus funciones [3].

Ley de Ancel y Vitemberg: La sensibilidad de toda clula que ha de experimentar


lesiones por radiacin es la misma, pero el tiempo necesario para objetivar los efectos no
es inmediato es posterior, tardan en aparecer las lesiones inducidas, vara segn los
diferentes tipos de clulas. Los factores que influyen en el tiempo que tardan en aparecer
las lesiones radioinducidas son:

a.

El estrs biolgico que acta sobre la clula. La actividad reproductiva representa


un estrs biolgico considerable.

b.

Las condiciones en que se encuentra la clula en el periodo de pre y post radiacin.

c.

Ciclo celular: la situacin de la clula en el momento en que se produce la


irradiacin, es un factor biolgico que influye notablemente en la radiosensibilidad,
as las clulas durante la fase de mitosis son ms radiosensibles que durante la fase
de sntesis y G0 [27].

d.

Radiosensibilidad hitica: aunque la radiosensibilidad de un tejido es similar a la de


las clulas que lo forman, no es una expresin directa de la misma, a lo que
contribuyen varios factores. Un tejido u rgano est formado por dos componentes,
el parnquima (compartimiento que contiene las clulas caractersticas del tejido en
cuestin) y el formado por tejido conjuntivo y vasos (mesnquima). Los dos tienen
distinta radiosensibilidad.

I.8. LEUCEMIA:
41

Son neoplasias derivadas del sistema hematopoytico, que inicialmente proliferan


en la mdula sea antes de diseminarse a la sangre perifrica, bazo, ganglios linfticos y
por ltimo infiltrar otros organismos del sistema nervioso central. Las leucemias se
caracterizan por la acumulacin y proliferacin anormal de los precursores de las clulas
sanguneas. Existe una variacin considerable entre los diferentes tipos de leucemia [28].
Que se agrupan segn la rapidez con la que la enfermedad avanza y empeora. La leucemia
puede ser crnica (la cual normalmente empeora en forma lenta) o aguda (la cual empeora
rpidamente).

1.8.1: Leucemia crnica (LC): Las clulas leucmicas de origen crnico, realizan
algunas de las funciones de los leucocitos normales. Esto hace posible que no se presenten
sntomas al inicio de la enfermedad. Es por eso que diagnosticar o prevenir esta
enfermedad es difcil, usualmente se detecta por exmenes de rutinas realizados. [29]
La leucemia crnica empeora lentamente. A medida que aumenta el nmero de clulas
leucmicas en la sangre, las personas empiezan a presentar sntomas, como ganglios
linfticos inflamados o infecciones. Cuando los sntomas aparecen, por lo general son leves
al principio y empeoran poco a poco.

1.8.2: Leucemia aguda (LA) Las clulas de este tipo no realizan ninguna de las
funciones de los leucocitos normales. El cantidad de clulas aumenta rpidamente. Esto
hace empeorar en forma rpida, la enfermedad, que se caracterizan por la presencia de un
nmero elevado de clulas inmaduras, un cuadro clnico de comienzo agudo y de
evolucin fulminante. [30]. Podemos definir las Leucemias Agudas, como una deficiencia
hematolgica maligna que provoca la alteracin en la proliferacin y diferenciacin de un
grupo de clulas inmaduras, de estirpe mieloide o linfoide, hasta reemplazar
completamente la Mdula sea [31].
Los tipos de leucemia pueden agruparse tambin segn el tipo de leucocito
afectado. La leucemia puede comenzar en las clulas linfoides o en clulas mieloides Fig.
21.

42

FIG. 21. Glbulos que maduran de clulas madres. Ref. [32]

La leucemia que afecta a las clulas linfoides se llama linfoide, linfoctica o


linfoblstica. La leucemia que afecta a las clulas mieloides se llama mieloide, mielgena
o mieloblstica.
I.8.3: Tipos comunes de leucemia [33]

Leucemia linfoctica crnica (LLC). Daa al tipo de clulas linfoides y mayormente


presenta un crecimiento lento a diferencia de los otros tipos de leucemias. El promedio
estadstico de incidencia para este tipo de enfermedad se da en el rango de 52 a 58
aos de edad.

Leucemia mieloide crnica (LMC). Afecta a clulas mieloides, su crecimiento es lento


al igual que la LLC pero esto ocurre solo al principio de la enfermedad, mayormente
se presenta en adultos.

43

Leucemia linfoctica (linfoblstica) aguda (LLA). Afecta a clulas linfoides y es de

crecimiento rpido. Hay ms de 5 000 casos nuevos de leucemia cada ao. La LLA es
el tipo de leucemia ms comn entre nios pequeos. Tambin afecta a los adultos.
Leucemia mieloide aguda (LMA). Afecta a clulas mieloides y es de crecimiento

rpido. Hay ms de 13 000 casos nuevos de leucemia cada ao. Afecta tanto a adultos
como a nios.
I.8.4: Leucemia en el Per:

La leucemia en el Per ocupa unos de los 10 primeros tipos de cncer. Segn


Ministerio de Salud del Per - MINSA en 2005. Cuadro 1.

CUADRO1: Tipos de cncer ms recurrente en Per. Fuente MINSA 2005.


LOCALIZACION

HOMBRES

MUJERES

TOTAL

Estomago

1324

1279

2603

Hgado y vas biliares

696

954

1650

Bronquios y pulmn

729

599

1328

1244

1244

Cuello uterino
Prstata

1100

1100

Mama

14

770

784

Tumor de origen incierto

360

416

776

Colon

326

412

738

Leucemia

380

344

724

Pncreas

276

289

565

Linfoma no Hodgkin

291

230

521

Boca

114

72

186

Piel

59

57

116

5669

6666

12335

TOTAL DE MUERTES

Es importante saber, que la forma en que los pacientes se ven afectados y los
tratamientos para cada tipo de leucemia no son los mismos. Estos tipos de leucemia s
tienen una caracterstica en comn: comienzan en una clula de la mdula sea. La clula
sufre un cambio y se transforma en un tipo de clula leucmica.
44

La leucemia se denomina linfoctica o linfoblstica si el cambio canceroso se


produce en un tipo de clula medular que produce linfocitos. La leucemia se denomina
mielgena o mieloide si el cambio celular se produce en un tipo de clula medular que
normalmente se ocupa de producir glbulos rojos, algunos tipos de glbulos blancos y
plaquetas. Las formas en que los pacientes se ven afectados y los tratamientos para cada
tipo de leucemia no son los mismos. La leucemia linfoctica aguda y la leucemia
mieloblstica aguda estn compuestas por clulas jvenes, conocidas como linfoblastos o
mieloblastos. A estas clulas a veces se las denomina blastos. Las leucemias agudas
progresan rpidamente sin tratamiento [33].
Las leucemias crnicas tienen muy pocos o ningn blasto. La leucemia linfoctica
crnica y la leucemia mielgena crnica por lo general avanzan lentamente en
comparacin con las leucemias agudas [2].

I.8.5: Diagnstico de leucemia:

Incluye un amplio espectro de afecciones. La clasificacin y diagnostico depende


de la apariencia morfolgica inicial de las clulas leucmicas. Sin embargo las
caractersticas citoqumicas, inmunolgicas y citogenticas permiten una mayor precisin
en la identificacin del tipo celular. El diagnostico se establece por examen de la sangre
perifrica y de la mdula sea [34].
En el cuadro 2, se presenta la clasificacin

de las leucemias usadas en la

actualidad, descrita por el grupo francs americano britnico (FAB). Esta clasificacin es
til en la seleccin del tratamiento y al mismo tiempo aporta informacin en cuanto a las
posibilidades de respuesta al tratamiento.

45

CUADRO 2: Tipos de leucemias, clasificacin Francesa-Americana-Britnica (FAB).Ref.


www.cancer.org.
TIPO

MORFOLOGIA

AGUDA
LINFOCITICA
Tipo comn
Pre B
Clulas T
Clulas B

L1 o L2
L1 o L2
L1
L2
NO LINFOCITICA

Mieloblstica aguda
Promieloblstica aguda
Mielomonocitica aguda
Monoblstica aguda
Erotrocitica aguda
Megacarioblastica aguda indiferenciada
Aguda
CRONICA
Linfoctica (Clulas B y T)
LPL
LCV
LCP
Linfosarcoma
Mieloctica
Crisis blstica

M1 o M2
M3
M4
M5
M6
M7
L1,L2,M1
Linfocitos pequeos
Pro linfocitos
Clulas vellosas
Clulas plasmticas
Linfocitos hendidos
Mielocitos,
metamielocitos
M1, M2, L1 o L2

I.9: VIABILIDAD CELULAR:

La viabilidad celular es una determinacin de las clulas de vivir o de estar


muertas, sobre la base de una muestra total de clulas. La medicin de la viabilidad puede
ser usada para evaluar la muerte o la vida de las clulas cancerosas y el rechazo de rganos
implantados, de la actividad celular o de la enfermedad [35].
Ya que todo lo viviente est formado por clulas, los recuentos de viabilidad celular
tienen un enorme nmero de aplicaciones. Las pruebas que por lo general consisten en
46

examinar una poblacin de clulas de la muestra y la tincin de las clulas o la aplicacin


de productos qumicos para mostrar que estn viviendo y que son muertos. Hay numerosas
pruebas y mtodos para la medicin de este.
Cuando una muestra se tie con diversos colorantes o tratado con productos
qumicos, que se somete a examen microscpico para evaluar la viabilidad celular. Estas
mediciones se pueden utilizar para evaluar la eficacia o falta de la misma de ciertos
tratamientos a las clulas.
Los tintes o las mediciones de prueba utilizados para la determinacin de la
viabilidad celular son frecuentemente llamados reactivos. Estas son sustancias diseadas
para provocar reacciones qumicas. Cuando los reactivos se aplican a las clulas, se pueden
realizar varias acciones, que permiten a los cientficos examinar clulas de diferentes
maneras. A veces, los reactivos se prueban simplemente para mostrar cmo pueden afectar
a las clulas mismas, dando as los cientficos informacin sobre la que los reactivos deben
ser evitados con el fin de obtener una prueba errada [35].

I.10: EL AZUL TRIPN

Es un colorante vital, usado para colorear selectivamente los tejidos o las clulas
muertas de color azul. Es un colorante de tipo diazo, llamado as porque presenta un
componente que es una amina aromtica (tambin llamada componente diazo) y es
transformado en un componente diazonio que a su vez reacciona con un componente de
acoplamiento, que pueden ser phenol, naphtol o una amina, para formar el colorante.
Por la amplia variedad de componentes diazo y componentes de acoplamiento
posibles, el rango de variacin de los azo-colorantes es muy grande. El nmero de
combinaciones se incrementa desde que el tinte azo puede tener ms de un compuesto azo.
Las clulas vivas o tejidos con membranas celulares intactas no son de color.
Debido a que las clulas son muy selectivas en los compuestos que pasan a travs de la
membrana, en un azul de tripn de clulas viables no es absorbida, sin embargo, atraviesa
la membrana en una clula muerta. Por lo tanto, las clulas muertas se muestran como un
distintivo color azul bajo un microscopio. Puesto que las clulas vivas estn excluidos de
tincin, tambin se describe como un mtodo de exclusin del colorante.

47

I.10.1. Antecedentes y qumica de azul de tripn:

Azul de tripn se deriva de toluidina, Fig. 22, es decir, cualquiera de varias bases
isomricas, C14H16N2, derivado de tolueno. El azul tripn es llamado as porque se puede
matar a los tripanosomas, los parsitos que causan la enfermedad del sueo. Un anlogo de
azul tripn, es la suramina que se utiliza farmacolgicamente contra la tripanosomiasis. El
azul tripn es tambin conocido como diamina azul y azul Niagara [36].
cido (3Z,3'Z)-3,3'-[(3,3'-dimetilbifenil-4,4'diil)di(1Z)hidracin-2-il-1-ilideno]bis(5-amino4-oxo-3,4-dihidronaftaleno-2,7-disulfnico
Frmula molecular

C34H28N6O14S4

Identificadores
Nmero CAS

72-57-11

PubChem

5904246

Propiedades fsicas
Masa molar

872.88 g/mol

FIG. 22. Composicin qumica azul de tripn. Ref. [36]

II.

MATERIALES Y METODOS:
El estudio fue un trabajo prospectivo de corte transversal, se evalu el efecto de una
dosis nica de radiacin Gamma, en la viabilidad celular en distintos linajes de leucemias
agudas.
Se recolectaron 20 muestras consecutivas de aspirado de mdula sea de pacientes
con leucemias agudas.
De las cuales 10 correspondieron a leucemias linfoblsticas agudas (LLA) y 10 a
leucemias mieloides agudas (LMA), conforme se colectaron las muestras fueron sometidas

48

a criopreservacin (termino que se describe en la seccin II.2), con la finalidad de realizar


una irradiacin.

II.1. AISLAMIENTO DE CELULAS MONONUCLEARES:

II.1.1.Coleccin de muestras biolgicas:

Se colectarn 3 ml de aspirado de mdula sea en pacientes nuevos portadores de


leucemias agudas (Mieloides o Linfoides).
Las muestras fueron procesadas dentro de las 2 horas de la coleccin. En un tubo
cnico de 15 ml se adicion 3 ml de la muestra ms 3 ml de solucin buffer fosfato salino
(PBS). En otro tubo de similar caractersticas se adicion 3 ml de Ficoll (lymphoprep) y se
aadi 6 ml de la suspensin anterior, posteriormente se centrifug a 3000 rpm durante 15
minutos. Luego de este tiempo, con una pipeta estril se colect la interfase (clulas
nucleadas), se coloc en un tubo cnico de 15 ml adicionndole 3 ml de PBS, se
homogeneizo suavemente y se centrifugo a 1500 rpm por 10 minutos. Con una pipeta
estril se descart el sobrenadante. Al botn celular obtenido se le adiciono 3 ml de PBS,
se homogeneizo suavemente y se centrifugo a 1500 rpm por 10 minutos. Con una pipeta
estril se descart el sobrenadante y se adicion 1.5ml de medio Hanks (Invitrogen).

II.2. CRIOPRESERVACIN:

La criopreservacin de estas clulas se realiz en viales criognicos de 1.8 ml, para


lo cual se adiciono 1.44 ml de la suspensin celular ms 0.36ml de DMSO (Cryostore).
Para congelar las clulas, se us una cmara de congelamiento (Forma Cientfica) con un
programa de descenso de temperatura. Las muestras se almacenaron a -80C hasta el
momento de la irradiacin.

II.3. IRRADIACIN DE LAS MUESTRAS:


Antes de la irradiacin, los viales se descongelaron en un bao mara a 37C.
Luego se diluyeron en PBS para posteriormente colocar la suspensin en frascos de
cultivos. Todas las muestras se irradiaron simultneamente con 1Gy en una maquina
49

Cobalto modelo Theratron 80, a una distancia de 80 cm de la fuente a la muestra. Luego de


la irradiacin, los cultivos fueron centrifugados para colectar las clulas mononucleares y
as poder realizar las pruebas de viabilidad celular.

II.4. PRUEBAS DE VIABILIDAD CELULAR:

La viabilidad celular fue evaluada antes y 20 minutos luego de la irradiacin. En un


tubo de 1,5 ml se coloc 0,5 ml de HBSS (Invitrogen) mas 0,3 ml de una solucin azul de
tripn al 0,4% (Merck) mas 0.2 ml de la suspensin celular a una dilucin 1:5 con HBSS
(Invitrogen). Se dej en reposo durante 10 minutos. Se tom 100 ul y se coloc en la
cmara de Neubauer (Brand). La evaluacin de la Viabilidad celular se realiz en un
microscopio ptico a 400 aumentos. Se consideraron como clulas viables aquellas que no
se colorearon con el azul de tripn. Para calcular el porcentaje de clulas viables se utiliz
la siguiente frmula:

II.5. CLCULO DE LA VIABILIDAD CELULAR CORREGIDA:

Debido a que un porcentaje de las clulas no fue viable luego de la


criopreservacin, se tuvo que corregir la viabilidad celular post irradiacin mediante la
siguiente frmula:

50

Dnde:
CV Post-i= clulas viables post irradiacin;
CT Post-i= clulas totales post irradiacin y
V Pre-i= Viabilidad pre irradiacin.

II.6. ANLISIS ESTADSTICO:

Se presentan estadsticas descriptivas sobre las medidas de tendencia central y


medidas de dispersin. La comparacin entre la viabilidad celular de las LMA y LLA fue
realizada usando la prueba T de Student. Se consider un nivel de significancia P<0.05
como estadsticamente significativo.

II.7. ASPECTOS TICOS:

Los pacientes aceptaron donar voluntariamente sus muestras para el estudio mediante
la firma de un consentimiento informado. Este protocolo de investigacin (INEN N 05-43)
fue aprobado por el Comit de tica del Instituto Nacional de Enfermedades Neoplsicas.

III. RESULTADOS

Se colectaron 20 muestras, de las cuales 10 correspondieron a LLA de estirpe B. Las 10


muestras de LMA correspondieron en 2 casos a LMA, M2, 2 casos a LMA M3; 4 casos, a
LMA M4 y 2 casos, a LMA M5. En la tabla 3, se presentan los datos de las 20 muestras
evaluadas.

TABLA 3. Resultados de la viabilidad celular de todos los casos.

51

52

GRAFICO 1. Viabilidad celular post irradiacin segn el tipo de Leucemia aguda.

No existieron diferencias entre ambos grupos cuando se compar la viabilidad


celular pre irradiacin (medianas de 79,2% para LLA y 82,8% para LMA; P=0,531). La
mediana de clulas evaluadas antes de la irradiacin fue de 85,5 para LLA (media 90,8; DE
11.1), mientras que para el grupo de LMA fue de 93 clulas (media 91,4; DE 9.5), sin
observarse diferencias (P=0.899). Del mismo modo, no existieron diferencias significativas
con respecto al nmero de clulas evaluadas en ambos grupos, con una mediana de 85
clulas para el grupo de LLA (media 86,4; DE 14,9) y de 73 para el grupo de LMA (media
80; DE: 24,7; P=0,495). La mediana de viabilidad celular corregida para las LLA fue de
66.5% (media 68.4%, Desviacin Estndar [DE] 6,4), mientras que para las LMA, la
Mediana fue de 73,0% (media 74,2%, DE 10,3). A pesar de las diferencias observadas en
las medianas, no se observaron diferencias estadsticamente significativas (P=0,149).
Grfico 1.

53

GRAFICO 2: Viabilidad celular post irradiacin segn el subtipo de LMA.


Cuando se compararon las medianas dentro del grupo de LMA, se observ que la
mediana de viabilidad para la LMA M2 fue de 71,9%; para M3, de 72,5%; para M4, de
78,1% y para M5 de 69,7%. Grfico 2.

54

IV.

DISCUSION

En este estudio, se evalu la radiosensibilidad de diferentes linajes de leucemias


agudas, mediante tincin vital con azul de tripn, para determinar diferencias en las tasas
de viabilidad celular en los diferentes tipos de leucemias. Este estudio no pretende evaluar
la muerte celular inducida por la activacin de genes blanco de P53, cuya expresin se
manifiestan aproximadamente una hora despus de la irradiacin, pues ya existe en la
literatura muchos estudios de este tipo. En cambio, nuestra intencin fue evaluar la muerte
celular producida por la toxicidad aguda de la radiacin gama.
En nuestro estudio pudimos observar que, a pesar de observarse una discreta diferencia
en las tasas de viabilidad celular, observndose que las LMA son ms radioresistentes, no
existieron diferencias estadsticamente significativas, y quiz esto ocurra porque las
leucemias agudas de estirpe mieloide son ms heterogneas, evidencindose en una mayor
desviacin estndar en la viabilidad celular cuando se compara con las LLA. Dentro de las
LMA, observamos que las leucemias M4 son ms radioresistentes.
Un sesgo de este estudio es el reducido nmero de subtipos de LMA, no obstante, este
trabajo aporta datos interesantes con respecto a lo que ocurre con estos tumores
hematolgicos, evidencindose una diferencia con respecto a las clulas mononucleares
normales. En un estudio reciente se ha reportado que la mortalidad celular en clulas
normales no ocurre inmediatamente, sino ms bien se pueden observar diferencias en la
mortalidad (irradiados versus control) a partir de las 72 horas, siendo directamente
proporcional a la dosis de radiacin absorbida. Probablemente, la maquinaria de reparacin
del DNA que trabaje en un corto plazo, sea menos eficiente en las clulas leucmicas que
en las clulas normales.
En conclusin, se observa una mayor radioresistencia en las clulas de leucemia
mieloide aguda que en la leucemia linfoblstica aguda, aunque sin observarse diferencias
significativas,

constituyendo

el grupo de

leucemias

mieloides, un grupo de

radiosensibilidad heterognea.

55

V.

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