PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

I. OBJETIVO:
Los alumnos deben de conocer los principales principios para la preparacin de los
medios de cultivo.
II. EQUIPOS Y MATERIALES:

Autoclave
Cocinas
Bao Maria
Balanza y Estufa
Material de vidrio: (Balones, placas Petri, tubos de ensayo, pipetas y matraces).
Cocinas
Balanza y estufa
Agares y medios de cultivo

III. FUNDAMENTO:
Para obtener colonia de microorganismos es necesario utilizar determinados sustratos
nutritivos (medios de cultivo) en los cuales los microorganismos pueden desarrollar todos
sus procesos vitales.
Los medios de cultivo deben de reunir los siguientes requisitos:

Deben de contener Nitrgeno, Carbono, Oxgeno, Hidrgeno; Sales Minerales

(sodio, potasio, etc.); (Fe, Cu, Cr, Zn, etc.) y factores de crecimiento
(vitaminas, hormonas, etc.) todas las sustancias deben ser fcilmente
asimilables por los microorganismos.
Todos tienen un PH especfico
La presin osmtica en el medio debe ser igual que dentro de la clula
microbiana.
Los medios de cultivo deben ser esterilizados.

Actualmente existen medios de cultivo desecados, los cuales se almacenan en recipientes

bien cerrados en lugares oscuros y a una temperatura de 15-30C y son hidroscpicos
Tienen un tiempo de duracin de 5 aos desde su fecha de fabricacin.
Los medios pueden ser especficos como el caldo de tretrationato para bacterias por
ejemplo o el caldo de selenito de lehithon para salmonella y shigella.
Los medios selectivos tienen consistencia solida son coloreados y muy llamativos. Ejm:
pueden tornarse de un color naranja a un color fosforescente.

CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

Segn su estado fsico

1 Lquidos
Usualmente se denominan caldos ya que contienen los nutrientes
disueltos en agua. Permiten obtener suspensiones con un elevado
nmero de microorganismos. Ej. Caldo nutritivo.
2 Slidos
Se pueden preparar a partir de medios lquidos a los cuales se
les aaden agentes solidificantes como agar, gelatina o slica gel.
Se utilizan con frecuencia en el aislamiento y mantenimiento de
los microorganismos en el laboratorio. Ej. Agar nutritivo
Segn la naturaleza de sus constituyentes
1 Medios naturales o complejos
Estn constituidos por sustancias complejas de origen animal o vegetal y
usualmente se complementan con el aadido de minerales y otras sustancias.
No se conocen todos los componentes del medio de cultivo, ni las cantidades
exactas en que estn presentes. Ej. Extracto de carne, extracto de levaduras.
.2 Medios sintticos
Se preparan a partir de ingredientes qumicamente puros y por lo tanto se
puede conocer exactamente su composicin cualitativa y cuantitativa. Por su
costo slo se emplean en procedimientos especiales.
Segn sus propsitos de uso
1 Medios de enriquecimiento
Se llama enriquecimiento a
cualquier cultivo en medio
lquido que resulte en un
incremento en el nmero de un
tipo dado de microorganismo en
relacin con el nmero de otros
tipos de microorganismos que
puedan estar en el inculo.
Un medio de enriquecimiento puede contener sustancias que favorezcan el
crecimiento del microorganismo que nos interesa o que inhiban el crecimiento
de los otros tipos de microorganismos presentes. La selectividad de un cultivo
de enriquecimiento no est determinada nicamente por la composicin
qumica del medio usado, sino que en un medio dado puede ser variada
significativamente modificando otros factores tales como: temperatura, pH,
fuerza inica, iluminacin, aireacin etc. Ej. Caldo tetrationato utilizado para

el enriquecimiento de las especies del gnero Salmonella provenientes de

muestras de heces, orina, agua o alimentos.

2 Medios selectivos
Son bsicamente iguales a los de enriquecimiento,
se diferencian por ser medios slidos y estn
diseados para el aislamiento de microorganismos
especficos. Ej. Agar desoxicolato citrato utilizado
para el aislamiento de patgenos entricos.
3 Medios diferenciales
No contienen sustancias inhibidoras, es decir, permiten el crecimiento de
muchos tipos de microorganismos, pero si contienen indicadores de productos
derivados de la actividad metablica de los microorganismos sobre algunos de
los componentes del medio. Se utilizan para la identificacin de los
microorganismos. Ej.: Agar base rojo fenol utilizado para detectar
fermentacin de carbohidratos.
4 Medios selectivos diferenciales
A veces se combinan en un mismo medio las caractersticas de ser selectivo y
diferencial. Por ejemplo, el agar Mac Conkey, este medio contiene sales
biliares y cristal violeta, que inhiben el crecimiento de las bacterias gram
positivas. Pero como tambin contiene lactosa y un indicador de pH permite
distinguir entre las bacterias fermentadoras de lactosa y las que no lo son.
TIPOS DE AGARES Y CALDOS DE CULTIVO:
Agar Nutritivo
Composicin:

Extracto de carne, 3g
Peptona, 5g
Agar,15 g
Agua destilada hasta 1000 ml

Medio para fines generales que promueve el crecimiento de la mayora de los

microorganismos poco exigentes.
Preparacin: Se disuelven 20g de extracto de carne y peptona en 1 Lt de agua por
calentamiento hasta que la solucin sea transparente. Aadir a continuacin el agar y
el agua restante agitando hasta ebullicin. Ajustar el pH a 7 y esterilizar en autoclave
durante 15 minutos a 121 C. A continuacin se distribuye en placas Petri.
Rojo De Metilo Y Voges Proskauer
Composicin:
Caldo R.M.V.P.
Polipeptona 7,0 g

Glucosa 5,0 g
Fosfato dipotsico 5,0 g
Agua destilada 1000,0 mL
pH 6,9

Preparacin: Disuelva los ingredientes en agua destilada, distribuya en tubos y

esterilice en autoclave por 15 minutos a 121C. Solucin Indicadora de Rojo de Metilo
Se prepara disolviendo 0,1 g de este indicador en 300 mL de etanol al 95% y
diluyendo luego con agua hasta 500 mL
Agar BAIRD-PARKER (Agar selectivo para estafilococos segn BAIRD-PARKER DE 58 g;
500 g)
Composicin: (g. por litro)
Extracto de carne
5,0
Peptona de casena
10,0
Extracto de levadura
1,0
Piruvato sdico
10,0
Glicocola
12,0
Cloruro de litio
5,0
Agar-Agar
15,0
Preparacin: 58 g del producto se suspenden en 1 litro de agua recin destilada o
desmineralizada y se dejan remojar 15 minutos. A continuacin, se hierve hasta
solucin completa. La esterilizacin, se realiza en autoclave (15 minutos a 121 C).
Valor del pH del medio de cultivo listo para el uso, a 37 C: 6,8 0,2. Tras
enfriamiento hasta unos 50 C, se aaden 50 ml de una emulsin de yema de huevo
Interpretacin
Colonias (Microorganismos)
Negras, lustrosas, (Staphylococcus aureus)
Arqueadas, de 1 a 1,5 mm de dimetro, con un delgado borde blanco, rodeadas
de un halo claro de 2 a 5 mm de anchura. Dentro del halo claro se observa (no
antes de 48 horas de incubacin) la presencia de anillos opacos.
Negras, lustrosas, pero de (Staphylococcus epidennidis). Forma irregular.
Halos claros, pero despus de 24 horas, se presentan zonas opacas alrededor de
las colonias.
Agar Chapman:
Composicin por Litro:
Extracto de carne - 1g
Peptona trpsica de casena- 5g
Peptona de carne- 5g
Cloruro sdico- 75g
D-manitol- 15g
Rojo fenol- 25g
Agar- 15g
Medio para la deteccin de Staphylococcus patgenos en muestras de alimentos y

otros materiales mediante la tcnica de filtracin por membrana.

Agar Papa Dextrosa:
omposicin por Litro:
Agar -15g
Dextrosa - 20g
Infusin papa - 4g
Medio para el cultivo y enumeracin de levaduras y mohos a partir de alimentos y
otros materiales. Los hidratos de carbono y la infusin de papa favorecen el
crecimiento de levaduras y hongos, en tanto que por el bajo rango de pH, la flora
acompaante se reduce significativamente.
Agar Salmonella-Shigella:
Composicin por Litro:
Peptona de casina y carne- 5g
Extracto de carne de buey- 5g
Lactosa- 10g
Citrato sdico- 8.5g
Tiosulfato sdico- 8.5g
Citrato de hierro- 1g
Sales Biliares- 8.5g
Rojo neutro- 0.025g
Agar- 15g
Verde brillante- 0.3mg
Medio para el aislamiento de salmonelas y de Shigella de heces, de comestibles y de
otros materiales.
Agar para clostridios 50.g; 500 g
Composicin (g. por litro)
Extracto de levadura
3,0
Extracto de carne
10,0
Peptona de casena
10,0
D(+)-Glucosa
5,0
Almidn
1,0
Cloruro sdico
5,0
Acetato sdico
3,0
Cloruro de L( 4-)-cisterna
0,5
Agar-Agar
12,5
Preparacin: 50 g del producto se suspenden en 1 litro de agua recin destilada o
desmineralizada, se dejan remojar 15 minutos y se hierven hasta solucin completa.
La esterilizacin se efecta en autoclave (15 minutos a 121 C). Valor del pH del
medio de cultivo listo para el uso, a 37 C: 6,8 0,2 El medio de cultivo se distribuye
en tubos, a razn de 9 ml, o se vierte en placas. Para la inhibicin de la flora
acompaante gram-negariva pueden mezclarse al medio de cultivo enfriado a 50 C
despus de la esterilizacin, 15 a 20 mg de polimixina B por litro de medio c cultivo.

Agar Sangre:
Composicin por Litro:
Digestivo pancretico de casena -15g
Peptona de soja - 5g
Cloruro sdico-5g
Agar-15g

Medio de propsito general para el cultivo de una gran variedad de microorganismos

incluyendo los exigentes. Al aadirle sangre, puede utilizarse para la determinacin de
las reacciones hemolticas. El medio esta libre de azucares reductores, ya que estos
influiran de forma adversa en reacciones hemolticas.
Caldo Nutriente:
Composicin por Litro:
Digestivo pancretico de casena- 17g
Digestivo papaico de harina de soja- 3g
Dextrosa- 2.5g
Cloruro sdico- 5g
Fosfato Dipotsico- 2.5g
Medio de uso general, utilizado para el crecimiento de microorganismos exigentes as
como para los no exigentes. Clostridios y anaerobios pueden crecer tambin cuando
se incuban bajo condiciones de anaerobiosis.
Caldo-prpura de bromocresol-azida
Composicin: (g. por litro)
Peptona de casena
10,0
Estracto de levadura
10,0
D(+)-Glucosa
5,0
Cloruro sdico
5,0
Hidrogenofosfato dipotsico
2,7
Dihidrogenofosfato potsico
2,7
Azida sdica
0,5
Prpura de bromocresol
0,032
La presencia de enterococos se manifiesta por crecimiento (turbidez progresiva) as
como por viraje hacia amarillo del medio de cultivo primitivamente de color prpura.
Caldo SBM
Composicin (g por litro)
Peptona especial
Extracto de levadura
D-Manita
Selenito sdico
Taurocolato sdico

5,0
5,0
5,0
4,0
1,0

 Verde brillante
0,005
Dihidrogenofosfato potsico
3,4
Hidrogenofosfato dipotsico
4,35
(Caldo de enriquecimiento selenito-verde brillante-manita segn STORES y OSBORNE)

IV. PREPARACIN:
Para la preparacin de medios de cultivo se utiliza agua limpia destilada neutra. Los
recipientes que se utilizaran se lavaran esmeradamente con el fin de eliminar
cualquier sustancia extraa.
En lo posible se prepara mximo 2 Lts. por recipiente en la balanza digital calcular el
peso por regla de tres.
Se preparan segn las indicaciones de las etiquetas del envase de cada medio de
cultivo.
Los medios que contienen Agar o gelatina deben ser calentados para obtener su
disolucin.
Con cuidado los medios que no contienen Agar ni gelatinas se pueden disolver por lo
general en agua fra o bajo ligero calentamiento.
Antes de esterilizarlos es conveniente repartir el medio de cultivo en porciones ms
pequeas como (tubos , balones etc), si las normas indicadas en el envase nos indican
otra cosa.
La esterilizacin de los medios de cultivo se lleva a cabo en autoclave, a 121C
durante 15 minutos.
Distribuir en recipientes como placas de petri, tubos, etc.
Luego se coloca un algodn y papel antes de esterilizar para evitar la contaminacin
al trasladarlo del autoclave al lugar de trabajo
V. CONCLUSIONES:
En dicha prctica se puede llegar a concluir que existen diferentes tipos de agares y
caldos de cultivo utilizados como medios de cultivo para la gran gama de
microorganismos.
As vez la identificacin de los microorganismos nos lleva a la conclusin de que cada
microorganismo puede tener uno varios medios de cultivo especficos en el mercado
que aparte de favorecer a un determinado microorganismo puede favorecer a otro con
similares propiedades, lo que conlleva a un crecimiento de ambos..
Tambin se dice que cuando un microorganismo posee propiedades especificas solo un
tipo de cultivo ser beneficioso par asu crecimiento, estos medios especficos tienen
nutrientes que facilitan el desarrollo del microorganismo inhiben el desarrollo de otros
microorganismo en el mismo medio de cultivo.
VI. BIBLIOGRAFA:
E. MERCK. manual de microbiologa DARMASTACH (R.F. de ALMANIA)

 GARCA GARIBAY. QUINTEROS

RAMREZ.
LPEZ
MUNGUIA/
BIOTECNOLOGA ALIMENTARIA/ Editorial - Limusa S.A./Edicin - Primera/
Espaa - 1998/ Pg.170 - 171.
PEARSON, D. 1986. Tcnicas de laboratorio para el anlisis de alimentos. Editorial
Acribia. Espaa
AGURTO, T. 1989. Manual de tcnicas de Microbiologa. Editorial La Pluma Fuente
S.A. Per.
http://www.merck.com.ar/MQA/SITE/wmsp.nsf/vstRefConPorTit/Microbiolog
%C3%ADa%20-%20Inicial?opendocument