Cromatografia Site Mini2010

Minicursos CRQ-IV - 2010
Conceitos de cromatografia a gs
CURSO DE CROMATOGRAFIA A GS
AYRTON ARGENTON
Prof. Ayrton Argenton: Qumico formado pela USP. Pesquisador Snior pela
REPUSA Petrobrs, Chefe do Centro de Pesquisa da Oxiteno, Chefe de
Pesquisas e Laboratrio da CGS Instrumentao Ltda. Ministrou treinamentos
tcnicos para centenas de empresas brasileiras. Mais de 20 anos de experincia
e especializao em treinamento de Cromatografia a Lquido e a Gs em Inds.
Qumicas, Farmacuticas, Alimentcias, Destilarias e Usinas de Acar e lcool e
Empresas relacionadas. Atualmente aplica Treinamentos e Consultoria pelo CEP
CURSOS Centro de Educao Profissional www.cepcursos.com
Conselho Regional de Qumica IV Regio (SP) Apoio: Caixa Econmica Federal

Nas indstrias qumicas, farmacuticas,

alimentos,
cosmticos,
refinarias
de
petrleo, petroqumicas, laboratrios de
anlises clnicas e ambiental, forense entre
outras,
frequentemente
necessrio
separar, isolar, purificar, identificar e
quantificar os componentes de misturas
muitas vezes bastante complexas.

SEPARAO
Operao pela qual uma mistura dividida em pelo menos duas fraes com
diferentes composies.
obtida por meios fsicos embora reaes qumicas podem ser envolvidas no
processo.
Os mtodos fsico - qumicos de separao so baseados na utilizao de
alguma propriedade fsica das substncias a serem separadas.
Exemplos:
TIPO DE SEPARAO
PROPRIEDADE FSICA
Destilao fracionada
Diferena de ponto de ebulio

(diferena na presso de vapor)
Extrao com solvente
Diferena na constante de distribuio

(partio) dos componentes em dois
solventes imiscveis entre si.
Cromatografia
Diferena de afinidade das substncias por

um material ativo ou adsorvente(FE)

VISO GERAL DE CROMATOGRAFIA

O objetivo da cromatografia separar individualmente os diversos
constituintes de uma mistura de substncias seja para identificao,
quantificao ou obteno da substncia pura para os mais diversos fins.
Tal separao se d atravs da migrao da amostra atravs de uma fase
estacionria por intermdio de um fluido (fase mvel).
Aps a introduo da amostra no sistema cromatogrfico, os
componentes da amostra se distribuem entre as duas fases e viajam mais
lentamente que a fase mvel devido ao efeito retardante da fase
estacionria.
O equilbrio de distribuio dos componentes entre as duas fases
determina a velocidade com a qual cada componente migra atravs do
sistema.

COLUNA CROMATOGRFICA
FLUXO
SINAL
CROMATOGRAMA
Conselho Regional de TEMPO

Qumica IV Regio (SP) Apoio: Caixa Econmica Federal

FLUXO
SINAL
CROMATOGRAMA


FLUXO
SINAL
CROMATOGRAMA


FLUXO
SINAL
CROMATOGRAMA


FLUXO
SINAL
CROMATOGRAMA


FLUXO
SINAL
CROMATOGRAMA


FLUXO
SINAL
CROMATOGRAMA


FLUXO
SINAL
CROMATOGRAMA


FLUXO
SINAL
CROMATOGRAMA


FLUXO
SINAL
CROMATOGRAMA
TEMPO

CROMATOGRAFIA A GS
Amostra gasosa ou liquida volatilizada introduzida na corrente do gs de arraste que a leva sobre a
FE numa coluna.
Os constituintes se distribuem entre FE e FM, movendo-se a poro que est na fase vapor com o gs
de arraste. Podem ser separados e saem da coluna em tempos diferentes caractersticos da coluna e
das condies experimentais (vazo da FM, T).
Ao sair da coluna, os constituintes, separados, passam por um dispositivo onde so detectados,
emitindo um sinal eltrico que registrado, constituindo o que se denomina cromatograma.

IMPORTNCIA DA CROMATOGRAFIA
Velocidade - Cromatografos convencionais
Cromatografos com sistema para Fast CG
Mdulo para EZ Flash acoplado a CG convencional
Poder de resoluo Capacidade de separar adequadamente os

constituintes da amostra.
Manuseio de pequenas quantidades de amostra (10-9 10-15g)
Simplicidade da tcnica

EXEMPLOS DE
CROMATOGRAMAS

EXEMPLOS DE
CROMATOGRAMAS

CLASSIFICAO DOS MTODOS CROMATOGRFICOS
CROMAT OGRAFIA
PLANAR
EM COLUNA
TCNICA
FASE
MVEL
FASE
ESTACIONRIA
LQUIDO
LQUIDO
SLIDO
FLUIDO
SUPERCRT ICO
GS
FASE LIGADA
LQUIDO
SLIDO
FASE LIGADA
SLIDO
FASE LIGADA
LQUIDO
LQUIDO
SLIDO
FASE LIGADA

COMPARATIVO HPLC / CG
Fator
CG
HPLC
Requisitos da amostra
amostra ou derivado voltil

estvel termicamente na temperatura
de trabalho
amostra solvel na fase mvel
Tipo de Amostra
gases, lquidos e slidos

baixo peso molecular
lquidos e slidos
inicos ou covalentes
baixo e alto peso molecular
Tempo de anlise relativo
em geral mais rpidas que HPLC
em geral mais lentas que CG
Pratos tericos por coluna (Eficincia

da coluna)
at 300000
at 30000
Capacidade preparativa
pobre
boa
Sensibilidade
10-12 g (DIC / DCE)
10-9 g (UV)
10-15 g (coulomtrico)

SEPARAO CROMATOGRFICA
Em funo da fase estacionria utilizada em cromatografia a gs os seguintes
Mecanismos so os responsveis pelas interaes entre analito e fase estacionria:
Adsoro
Partio

ADSORO
A fase estacionria um slido contendo grupos (stios ativos) que podem adsorver certas
substncias. Ex. Peneira Molecular, Polmeros Porosos, Colunas PLOT
Na adsoro tem-se o seguinte equilbrio:[na FE] adsorvido
Kads =
[desorvido na FM]
Compostos com diferentes constantes de adsoro so separados.
FM
FE

PARTIO
A fase estacionria um lquido depositado ou quimicamente ligado a um suporte slido ou
depositado ou quimicamente ligado de um tubo capilar de silica fundida(CG)
As molculas dos componentes a serem separados se distribuem entre a fase estacionria
ligada e a fase mvel lquida(HPLC) ou fase mvel gasosa(CG) de acordo com sua afinidade
relativa:
Kpart =
[dissolvido na FE]
[dissolvido na FM]
Compostos com diferentes constantes de partio so separados.

PARTIO
FM
FE
A FM carrega as molculas nela dissolvidas. Para reestabelecer o equilbrio,

molculas na FE passam para a FM e so arrastadas. Tem-se um equilbrio
dinmico em cada segmento da coluna. Como a FM est em contnuo movimento,
esta acaba retirando todas as molculas da coluna.

PARMETROS CROMATOGRFICOS
Uma srie de parmetros cromatogrficos so importantes para serem utilizados na
identificao dos compostos separados, avaliar o desempenho cromatogrfico e
auxiliar na optimizao do processo de separao.
Os parmetros cromatogrficos a serem discutidos so:
Tempo de reteno
Fator de reteno
Fator de separao
Nmero de pratos
Resoluo

TEMPO DE RETENO
Por definio chamamos de TEMPO DE RETENO, tr, de uma substncia ao tempo
decorrido desde o instante em que a amostra foi introduzida at o instante do mximo do
pico. (onde to o tempo de reteno de um composto no retido na fase estacionria)
Na anlise cromatogrfica, mantido constantes a vazo da fase mvel e a temperatura da

coluna, o tempo de reteno de cada componente constante, desde que a FE no sofra
modificao.

A partir da figura acima, definimos os seguintes parmetros cromatogrficos de acordo com

as equaes abaixo:
Parmetro Cromatogrfico
Definio
Fator de reteno
Fator de separao
Nmero de pratos
Resoluo
N
Rs =
tr / to
tr2 / tr1
= 16 ( tr / Wb )2
2 ( tr2 - tr1 )/(Wb1 + Wb2)

FATOR DE RETENO (ou FATOR CAPACIDADE)
tr / to
tr= tr-to
Onde:
tr o tempo de reteno corrigido
to o tempo de reteno de um composto no retido
Relao entre o tempo de permanncia de cada substncia na fase

estacionria e o tempo de permanncia na fase mvel.

FATOR DE SEPARAO
k2 / k1 = tr2 / tr1
Relao entre os fatores de reteno de dois picos adjacentes. Por

definio sempre um nmero maior que a unidade.

NMERO DE PRATOS DA COLUNA
= 16 ( tr / Wb )2
Nmero indicativo da performance da
coluna. a medida da largura do pico em
relao ao seu tempo de reteno. o
parmetro que mais precisamente define
a qualidade de um sistema
cromatogrfico.
Outra medida da eficincia da coluna dada pela altura do prato, H (altura equivalente a um
L
prato terico.
H=
onde
L = comprimento da coluna
N
N = nmero de pratos

RESOLUO
Rs =
2 ( tr2 - tr1 )/(Wb1 + Wb2)
Fornece uma medida quantitativa da habilidade da coluna em

separar duas substncias.

RESOLUO
Rs =
2 ( tr2 - tr1 )/(Wb1 + Wb2)
Fornece uma medida quantitativa da habilidade da coluna em

separar duas substncias.

EFICINCIA DA COLUNA
A introduo da amostra na coluna leva menos de 1 segundo. Como o equilbrio entre FE e FM
muito rpido, a largura dos picos tambm deveria ser aproximadamente 1 segundo. Entretanto,
isso no ocorre devido a processos de transporte de massa que altera a velocidade das molculas
de um mesmo composto dentro da coluna. Estatisticamente algumas molculas viajam mais
rapidamente e outras mais lentamente que a mdia das molculas, atingindo o detector em tempos
diferentes. Consequentemente, o pico registrado alargado.
Um tratamento terico do comportamento das molculas na coluna foi desenvolvido por Van
Deemter.
H = A + (B/u) + (C*u)
A Equao de Van Deemter mostra a relao da Altura Equivalente de Um Prato Terico - HETP
ou simplesmente H, com a velocidade linear da fase mvel, u. Segundo Van Deemter, alguns
fatores contribuem para o alargamento de um pico dentro de uma coluna cromatogrfica:
Caminhos preferenciais = difuso de Eddy = parmetro A
Difuso longitudinal = parmetro B
Resitncia a transferncia de massa = parmetro C

EFICINCIA DA COLUNA
Caminhos preferenciais, termo A da Equao de Van Deemter.
Refere-se aos diferentes caminhos percorridos pelo soluto dentro da coluna em funo
de irregularidades no empacotamento e na forma das partculas da fase estacionria. Este termo
tambm conhecido como Difuso de Eddy.
Difuso longitudinal, termo B da Equao de Van Deemter.
Refere-se difuso molecular do soluto na fase mvel. Quanto maior a difuso maior o
alargamento da banda do pico, logo, menos eficiente a coluna.
Resistncia transferncia de massa, termo C da Equao de Van Deemter.
sem dvida o termo que mais exerce influncia no alargamento dos picos e refere-se
movimentao da amostra entre as fases mvel e estacionria. Como j descrito anteriormente,
h um equilbrio na transferncia do soluto da fase mvel para a fase estacionria. Neste processo,
as molculas que esto mais prximas fase estacionria interagem mais rapidamente.
Como a fase mvel mantm seu movimento, as molculas de soluto mais distantes da
fase estacionria so arrastadas pela fase mvel por um pequeno perodo de tempo, pequeno,
porm suficiente para alargar o pico. Esta contribuio para o alargamento do pico diretamente
proporcional ao tempo de reteno e isso ajuda a explicar a razo de os ltimos picos do
cromatograma serem mais largos que os iniciais. Com o aumento da velocidade linear da fase
mvel aumenta-se o alargamento do pico.


SCAN FIG 2.14 PAG. 9 -

INSTRUMENTAO
CROMATGRAFO
A GS

CROMATGRAFO
CIOLA - 2 - CROMATGRAFOS

FASE MVEL GS DE ARRASTE

Escolha do gs de arraste
Influncia na eficincia da coluna, tempo de anlise e sensibilidade do detector.
Disponibilidade, custo e segurana de operao
Helio, nitrognio, hidrognio, argnio
Natureza do gs de arraste equao de Van Deemter
Difuso do soluto na fase gasosa.

FASE MOVEL GS DE ARRASTE
A escolha da fase movel gs de arraste depende do tipo de detector que est

sendo usado e do tipo de coluna, empacotada ou capilar.
No caso de anlises com colunas capilares, normalmente necessita-se um gas
auxiliar (make up) para o detector, para obter sensibilidade otimizada.
Coluna capilar d.I.<0.32mm - HIDROGENIO - IDEAL
Hlio aceitvel
Nitrognio menos aceitvel
coluna megabore- d.I. 0.53mm NITROGNIO IDEAL
HLIO PODE SER USADO
Hidrognio no recomendado
Coluna empacotada: normalmente nitrogenio ou helio, mas no caso de detector de
condutividade termica, hidrogenio ou helio so os mais recomendados.
Pureza dos gases: ideal 99.9995% ou melhor, principalmente para detector de
captura de eletrons.

INJETOR E SISTEMAS DE INTRODUO DE AMOSTRA

- A injeo deve ser feita de modo que se obtenha uma banda nica e estreita para se ter picos
ideais.
- Falhas na injeo podem causar assimetria dos picos
- Quantidade de amostra no deve ultrapassar a capacidade da coluna, determinada pela quantidade
de FE.
- Quantidade injetada influi na eficincia da coluna - quanto menor, maior a eficincia.
- Quando se tem picos assimtricos, o volume injetado afeta o tR
- Amostras lquidas so em geral vaporizadas no injetor(vaporizador) e arrastadas pela FM para a
coluna.
- Temp. vaporizador 20 30 C > PE do composto menos voltil da amostra.
- Vaporizao instantnea - flash vaporization injection
- Injeo a frio direto na coluna - Cool on column injection
AMOSTRA LIQUIDA

VLVULAS DE AMOSTRAO PARA GASES
INJETOR CAPILAR


INJETOR CAPILAR
CONFIGURAO COM SPLIT
ESQUEMA DE INJETOR ANLISE COM SPLIT(DIVISOR DE FLUXO)

INJETOR CAPILAR
CONFIGURAO SPLITLESS
ESQUEMA DE INJETOR ANLISE SPLITLESS (SEM DIVISOR)

OUTRAS TCNICAS DE INJEO
Anlise de compostos volteis em baixas concentraes em matrizes slidas ou lquidas

ou no ar atmosfrico so em geral efetuadas por tcnicas especficas:
Head space purge e trap desoro
Head space(espao confinante)
Componentes em amostras altamente diluidas e to volteis que exibem alta presso de
vapor sbre a matriz da amostra slida ou lquida pode ser seletivamente introduzidas
numa coluna cg por transferncia de vapor da amostra coletada do head space(espao
vazio sbre a amostra) de um vial(frasco) fechado contendo a amostra aquecida .
Purge e trap
A amostra colocada num tubo borbulhada para arrastar os volteis para um
adsorvente(tenax, carvo ativo). Os componentes adsorvidos so liberados por
aquecimento rpido e arrastados pelo gs de arraste so introduzidos no cromatgrafo.
Desoro
um dispositivo colocado numa pessoa, succiona o ar de um ambiente para um
adsorvente especfico, por um tempo definido, levado ao laboratrio e desorvido
trmicamente ou extraido com um solvente e injetado no cromatgrafo.
Outro procedimento a adsoro dos vapores do ar ambiental para um botton, e no
laboratrio extrado com solvente e injetado no cromatgrafo.

COLUNA/FORNO DA COLUNA
A coluna a essncia do sistema cromatogrfico, pois nela que ocorrer a separao
dos componentes da amostra.
Fase estacionria (suporte slido e fase lquida)
Tubo (material, comprimento e dimetro)
Colunas empacotadas e capilares
Parmetro
Empacotada
Capilar
Dimetro interno (mm)
14
0.1 0.75
Comprimento (m)
15
5 - 100
Pratos terico por metro
2400
3000
Espessura do filme lquido (micra)
5 10
0.1 5
Granulometria das partculas

(mesh)
80 100
Vazo mdia (ml/min)
20 60
1 10
Volume de amostra lquida (l)
0.2 5
0.001 0.5

TIPOS DE COLUNA
Colunas Empacotadas (Packed Columns)
Vidro, ao inox 1 a 3m d.i. 1 a 4 mm
CGS e CGL
Escolha da FE - similar dissolve similar
Colunas Capilares
D.I. 0.1 - 0,75 mm 5 a 100 m
Slica fundida, vidro, ao inox.
Coluna tubular aberta com parede revestida (WCOT)
Coluna com suporte recoberto (SCOT)
Coluna com FE imobilizada ou quimicamente ligada s paredes do tubo wall bond open
tubular (WBOT)
Coluna capilar(megabore) com camada porosa(PLOT)
Colunas Capilares aumento do numero de pratos tericos e diminuio do alargamento
das bandas portanto melhor resoluo.

FORNO DAS COLUNAS

Controlador de temperatura variao 0,1C
Analises isotrmicas
Amostras com PE elevado no eluem
Primeiros picos: agudos, pouco resolvidos
Posteriores: baixos, largos, muito resolvidos

FORNO DAS COLUNAS

Analises com Programao de Temperatura
Determinao das condies de analise, inclusive isotrmicas
Tempo de analise reduzido
Limite de deteco e preciso da medida do pico so melhorados
Velocidade de injeo no precisa ser to rpida
Transformaes qumicas dos componentes instveis so minimizadas

O
DETECTORES
Compostos analisados numa coluna CGL/CGS so monitorados pelo detector
Sinal de sada proporcional quantidade do composto analisado que est eluindo e
registrado como um trao contnuo (cromatograma).
rea de pico medida manual ou eletronicamente
Desempenho dos detectores
Resposta magnitude do sinal eltrico/massa do composto
Sensibilidade Limite de Deteco S = 2 ou 3 x N (N = ruido)
Limite de Determinao 10 x N
Linearidade do detector .

TIPOS DE DETECTORES
Detector
Sensibilidade para
compostos indicados no
caso de detectores
seletivos
Faixa Linear
Sinal gerado proporcional
linearmente com a conc.
DCT(TCD)
10-7 g mL-1
103 104
DIC(FID)
10-12 g (C)s-1
107
DCE(ECD)
10-16 moles mL-1 (lindano)
103 104
DTI (DNP)
10-14 g(N) s-1 (azobenzeno)

10-15 g(P) s-1 (tributilfosfato)
103 105
DFC(FPD)
10-10 g(S) s-1 (tiofeno)

10-12 g(P) s-1 (tributilfosfato)
103
105

DETECTOR DE CONDUTIVIDADE TRMICA

Principio: corpo aquecido perde calor com velocidade que depende da
condutividade trmica do(s) gs(es) que o envolvem.
Detector: 4 filamentos de W aquecidos pela passagem de corrente eltrica e
colocados na corrente do gs de arraste, num arranjo de Ponte Wheatstone e
suportados num bloco metlico.

DCT - CIRCUITO ESQUEMTICO

SCAN TABELA 6.2 PAG.41

DCT- INFLUNCIA DA CORRENTE
K = CONSTANTE DO DETECTOR
R = RESISTNCIA DOS FILAMENTOS
I = CORRENTE DE ALIMENTAO
Tb, Tf TEMPERATURAS DO BLOCO E DO FILAMENTO
CONDUTIVIDADES TRMICAS DO GS DE ARRASTE E
SUBSTNCIA
1
g
s
2
Tf Tb
Re sposta K . R . I
Fg
g

DETECTOR DE IONIZAO DE CHAMA - DIC FID

Gs de Arraste: corrente 10-14 amp; com composto orgnico, queima, gera radicais livres alguns
so ionizados 10-12 a 10-6 A amplificada cromatograma Princpio: condutividade eltrica num
gs proporcional quantidade de partculas carregadas presentes. H2 + O2 (ar) + gs de arraste:
queima num bico (jet). Ionizao na chama obtida aplicando um potencial > 200V.
No responde (ou apresenta reposta muito baixa) a: nitrognio, xidos de nitrognio, monxido e
dixido de carbono, sulfeto de carbono, gs sulfdrico, dixido de enxofre e gua, tetracloreto de
carbono. Isso til para uso como solvente H2O, CS2, CCl4.
Alta sensibilidade: 10-12 g/seg anlise de traos
Estvel Alta faixa de linearidade 10-6 a 10-7
Molculas com O e halognio diminuem a sensibilidade

DETECTOR DE IONIZACO DE CHAMA
A estrutura qumica, tipo de grupo func ional. Geometria e esqueleto de carbono e pm

influem na sensibilidade de gerao de sinal.
A resposta reduzida para compostos polares que contm heterotomos como grupos
funcionais. tomos de carbono ligados a heterotomos so ionizados com muito
menos probabilidade ou no so ionizados e no contribuem para a intensidade do
sinal do detector.
Para anlise quantitativa importante que o fator de resposta seja determinado
Outros fatores que influem na resposta: fluxo dos gases de queima h2 e ar, e gs de
arraste; geometria do sistema de eletrodo do detector, voltagem entre os eletrodos.

DETECTOR DE CAPTURA DE ELTRONS

Princpio: eltrons gerados por ionizao do gs por uma fonte radioativa (Ni63 ou tritio) so
capturados por alguns tipos de compostos, diminuindo a corrente que registrada.
Raios emitidos pela fonte ioniza o N2 gerando eltrons: + N2 N2* + e
gerada uma corrente constante registrada como linha de base.
Compostos eletronegativos captam eltrons diminuindo a corrente.
A queda de corrente proporcional quantidade do composto eletro-aceptor que passa pelo
detector.
Gs Arraste: Nitrognio ou Argnio a 5%CH4 - 30-40ml/min. no detector.
Sensibilidade Seletividade do DCE

Muito sensvel: 10-12 a 10-14 g de
substncias com afinidade por eltrons
Halogenados, nitrilas,
organometalicos agrotxicos.

DETECTOR DE CAPTURA DE ELTRONS


DETECTOR DE NITROGNIO E FSFORO (DNP-NPD)
DETECTOR DE IONIZAO TERMOINICO (DIT - TID)
DETECTOR DE IONIZAO DE CHAMA ALCALINA
Principio: fonte alcalina

(pastilha de cermica com
sal de Cs ou Rb) polarizada
e coletor semelhante ao DIC.
Interao dos vapores do
metal alcalino com os
compostos orgnicos de N
ou P ons negativos
Sensibilidade: N ~10-13
g/seg e P ~10-14 g/seg.;
desprezvel para orgnicos
contendo C, H e O.

DETECTOR FOTOMTRICO DE CHAMA (DFC-FPD)

Princpio: compostos so queimados em chama de O2 e H2 Compostos orgnicos de S
e P ou outros elementos emitem luz de diversos comprimentos de onda. S e P emitem
grande intensidade na regio de 394 e 526 nm respectivamente altamente sensvel
para S e P. A luz emitida detectada usando fotomultiplicadora e com filtro apropriado,
detecta-se s os elementos de interesse.
Fluxo de gs de arraste + auxiliar: pelo menos 20ml/min.
Fluxo de H2: 200 210ml/min. AR: 120 160ml/min
Sensibilidade:P HPO* luz a 526nm

4x10-14 g/s
S S2* luz a 394nm 2x10-13 g/s

DETECTOR FOTOMTRICO DE CHAMA (DFC-FPD)

DETECTORES
FID - FPD
DETECTORES - CIOLA
65

DETECTOR DE FOTOIONIZAO (DFI PID)

Princpio compostos so ionizados numa
cmara contendo lmpada ultra-violeta.
R+h R* + e Sensibilidade:similar a DIC, porm
aumenta para compostos que absorvem na
regio ultra-violeta, como p.ex. aromticos.
Responde concentrao; portanto a
resposta diminui com aumento da vazo de
gs de arraste + auxiliar. Normalmente gs
de arraste a 20ml/min e auxiliar s com
arraste menor que 10ml/min.

DETECTOR DE FOTOIONIZAO (DFI PID)
Utilizando lmpadas de
diferentes energias: 9,5; 10,2 ou
11,7 e V, as respostas dos
primeiros membros de uma srie
homloga se alteram.
Assim os compostos com baixa
S em DIC tem alta S em DFC:
ex. dicloroetano, formaldeido.

GS DE ARRASTE E GS AUXILIAR
DETECTOR
ARRASTE
AUXILIAR
ALTERNATIVA
FID
HIDROGNIO
HLIO
NITROGNIO
NITROGNIO
NITROGNIO
NITROGNIO
HLIO
HLIO
HLIO
NPD
HIDROGNIO
HLIO
NITROGNIO
HLIO
HLIO
HLIO
ECD
HIDROGNIO
HLIO
NITROGNIO
ARGNIO/CH4
ARGNIO/CH4
ARGNIO/CH4
NITROGNIO
ARGNIO/CH4
TCD
HIDROGNIO
HLIO
NITROGNIO
MESMO DO GS
DE ARRASTE
FPD
HIDROGNIO
HLIO
NITROGNIO
NITROGNIO
NITROGNIO
NITROGNIO
HLIO
HLIO
HLIO
PID
HIDROGNIO
HLIO
NITROGNIO
NITROGNIO
NITROGNIO
NITROGNIO
HLIO
HLIO
HLIO
NITROGNIO
NITROGNIO
ARGNIO/CH4
NITROGNIO

DETECTOR DE ESPECTROMETRIA DE MASSA
CG/MS
O espectrmetro de massa baseia-se na ionizao do analito efluente da coluna por meio de
uma fonte de energia -70ev ou outro valor ajustvel, num sistema a alto vcuo.
O analito perde 1 eletron resultando numa molcula carregada positivamente, considerada
como ion molecular.
Devido a instabilidade dessa molcula, ela se fragmenta em vrias partculas menores,
caractersticas de sua estrutura.
Essas partculas so detectadas, constituindo o espectro de massa.
A tcnica de ionizao utilizada a de impacto de eltrons (ie).
Os sistemas cg/ms possuem bibliotecas com espectros de massas de vrios compostos.
O espectro de massa de um determinado pico comparado com os da biblioteca. Atravs da
similaridade dos espectros, o sistema indica a provvel estrutura do composto com um certo
nvel de probabilidade.
Bibliotecas nist/epa/nih : ~75.000 espectros
Wiley: ~229.000 espectros
Pflegar/maurer/weber drogas e metabolitos: ~1400 espectros
Pesticidas: ~205 espectros
Pirlise: ~100 especros de polmeros
Flavors & fragancias: ~1200 espectros

DETECTOR DE ESPECTRMETRO DE MASSA (CG/MS)

DETECTOR DE ESPECTRMETRO DE MASSA (CG/MS)

DETECTORES - CONSIDERAES
IMPORTANTES
Quando 1 analito separado na coluna,chega no detector, gerado um sinal cujo valor

muito pequeno.
Para possibilitar a deteco do pico, necessrio ampliar esse sinal, que obido atravs
de um sistema eletrnico amplificador que amplifica o sinal permitindo detectar o pico.
Os amplificadores possuem um sinal mximo de sada, em geral 1v, podendo variar, de

acordo com configurao do fabricante.
A amplificao pode ser ajustada. A sensibilidade mxima do detector obtida com a

maior amplificao.
Cada fabricante de CG possui um sistema de atenuao do amplificador (range do
amplificador).
Consideremos que o range selecionado d a maior amplificao sinal mximo 1v por

exemplo.
Ao injetar uma amostra, se um determinado analito gerar um sinal maior que 1v, a rea
calculada no real, pois no se conhece o valor de sinal que foi gerado. Diz-se que o
pico estoura. No software, observa-se um trao reto na escala de 1v.
Se for preciso quantificar esse composto, necessrio que o pico de um sinal dentro da
escala (no caso < 1v, o que conseguido injetando menos amostra ou alterando o range
para um valor menor.

AQUISIO DE DADOS
Atualmente utilizam-se softwares que permitem:
Registrar e processar os dados do cromatograma;
Efetuar as curvas de calibrao;
Controlar o sistema cromatogrfico;
Reprocessar os cromatogramas por ajuste dos parmetros de
integrao otimizados (width threshold tangente vale, etc.);
Selecionar a frequncia de amostragem (x hz)) de modo a se ter
pelo menos 20 a 30 medidas por pico;
Realizar os clculos para verificar o system suitability test

SELEO DA COLUNA / FASES ESTACIONRIAS

A coluna o corao do sistema cromatogrfico e determina a eficincia e seletividade
que pode ser alcanada na separao.
Colunas Empacotadas
CGL CGS
Tubo da Coluna
Inerte estvel termicamente flexvel
Vidro, ao inox, cobre teflon
Vidro lavado com acido, e DMCS tolueno metanol seca, com a finalidade
de eliminar grupos SiOH do vidro que so adsorventes.

SELEO DA COLUNA / FASES ESTACIONRIAS

Colunas Capilares Open Tubular Columns
A fase liquida revestida como um filme sobre a parede da coluna, portanto no
contem suporte wall coated open tubular (WCOT), ou ligada quimicamente ao
tubo de silica fundida
Vantagem: baixa contra presso devido a suporte na coluna empacotadas ->->
mais longas para mesma queda de presso.
Estreitas para minimizar efeitos de transferncia de massa na fase gasosa
TUBO: ao inox vidro silica fundida
Slica fundida: poucas impurezas, resistentes, flexveis.
Fases liquidas quimicamente ligadas superfcie, aumentaram a estabilidade das
colunas, com diminuio do sangramento e arraste da FE por solventes das
amostras, e superfcie do tubo desativada. Podem ser lavadas para remover
impurezas retidas.

SELEO DA COLUNA EM CGS

Seleo da Coluna em CGS
FE: slido poroso acondicionado num tubo.
Separao: adsoro seletiva dos componentes
da amostra nas partculas do slido peneiras
moleculares, carvo slica gel alumina
polmeros porosos.
Peneiras moleculares 5A e 13X.


POLMEROS POROSOS PORAPAK CHROMOSORB 100

SELEO DA COLUNA EM CGL (PARTIO)

A separao conseguida graas a diferena dos coeficientes de partio
entre FE e FM dos constituintes da amostra analisada.
COLUNAS EMPACOTADAS E CAPILARES
COLUNAS EMPACOTADAS
SUPORTE
Funo
Caractersticas:
rea especifica
Estrutura porosa adequada
Tamanho de partcula uniforme: 80-100, 100-120 mesh
Inrcia
Resistncia mecnica elevada
Principais suportes utilizados em GGL

Diatomitas Chromosorb Johns-Manville e outros


scan equivalencia de suportes tabela 5.4 pag.27

SELEO DA COLUNA EM CGL (PARTIO)

FASE LQUIDA
FL componente mais importante da CGL interaes dos constituintes da amostra com
a FL que permitir obter separao.
Caractersticas:
Efetuar separao desejada
No ser voltil na temperatura de operao
Estvel termicamente em ampla faixa de T
Inrcia qumica
Capacidade de dissolver os componentes da amostra
Fcil disponibilidade e baixo custo
Fora de Interao FL Compostos:
A solubilidade diferencial dos componentes da amostra que governa a separao.
Ela depende das foras coesivas de Van der Waals entre o soluto e a fase
estacionria . Determinam a volatilidade relativa dos solutos, dos coeficientes da
partio.

COLUNAS CAPILARES OPEN TUBULAR COLUMNS

A fase lquida revestida como um filme sbre a parede da coluna, portanto no contm
suporte wall coated open tubular(WCOT).
Vantagem: baixa contra presso devido a no ter suporte como nas colunas
empacotadas, e portanto pode-se ter colunas mais compridas e em consequncia maior
eficincia.
So estreitas para minimizar efeitos de transferncia de massa na fase gasosa.
Tubo: ao vidro - slica fundida.
Fases lquidas quimicamente ligadas superfcie (bonded phase), aumentam a
estabilidade das colunas, com diminuio do sangramento e arraste da FE por
solventes das amostras.
Superfcie do tubo de slica fundida desativada.

FASES LQUIDAS EM CGL

Muitas das fase estacionarias liquidas so praticamente o mesmo material, produzido
por diferentes fabricantes ou fornecedores, com nome ou cdigo diferente.
Podem ser agrupadas em um nmero limitado de tipos com propriedades e estruturas
similares numero limitado de fases usadas para colunas capilares e empacotadas.
Classificao genrica: polares, no polares e fases especiais.
Fases No Polares: no contem grupos que formem pontes de hidrognio ou interao
dipolo permanente - dipolo permanente.
Eluio de acordo com PE ou volatilidade relativa, nas condies de anlise.
Fases Polares: contm grupos funcionais polares, tais como halognio, hidroxila, nitrila,
carbonila ou Ester. Os compostos contendo grupos polares interagiro mais fortemente
que os no polares

FASES ESTACIONRIAS
A grande maioria das FE de colunas capilares so constituidas de polisiloxanes

(siliconas) com diferentes grupos ligados sua estrutura que lhes proporcionam as
diferentes caractersticas de interao com os componentes analisados.
Alm das polisiloxanes, so utilizadas tambm ,como fases estacionrias em
colunas capilares, polmeros com grupos politeres (glicis) e politeres
modificados (glicis modificados), e algumas outras com estruturas especiais para
anlise de compostos com isomeria ptica, so as fases quirais.
As polisiloxanes so constituidas basicamente de grupos metila, fenila, ciano-propil,
trifluoropropil, ligados ao esqueleto da silicona.
A grande maioria das fases estacionrias atualmente utilizadas so quimicamente
ligadas superfcie do tubo de silica fundida, o que lhe proporciona maior
estabilidade trmica e a solventes, o que permitem que sejam lavadas para
remoo de impurezas .
Cada fabricante de colunas capilares atribui um cdigo especfico para suas
colunas, as quais possuem caractersticas similares.

FASE ESTACIONRIA
POLI(DIMETILSILOXANE)
Metilsilicona no polar. Fase ligada

Quimicamente compatvel com gua e outros
solventes. Pode ser lavada.
Faixa de temperatura: -60c a 320c

NMERO DE MCREYNOLDS: x- y- z- u- s = 4
58 43 56 38
Aplicaes tpicas: hidrocarbonetos, gasolina,
solventes, alcois, fame, ac.Graxos,alimentos,
flavorizantes, fragncias.
Fases comerciais similares: ciola 1, db1, hp1, at1,
fi53, cpsil5cb, optima1, ov1, ov101, zb1, 007-1, rtx1,
bp1, spb1.
Fase equivalente a cg-usp g1

ANLISE DE ESTERES METLICOS DE CIDOS GRAXOS EM
COLUNA NO POLAR - METILSILOXANE

ANLISE DE SOLVENTES DE EMBALAGENS
COLUNA TIPO POLIDIMETILSILOXANE

FASE ESTACIONRIA
POLI(5%DIFENIL- 95%DIMETILSILOXANE)
No polar fase ligada.

Quimicamente compatvel com agua e
outros solventes. Pode ser lavada.
Faixa de temperatura: -60c a 320c
NMERO DE MCREYNOLDS: x- y- zu- s = 19 74 64 93 - 62
Aplicaes tpicas: hidrocarbonetos,
gasolina, solventes, pesticidas, alimentos,
fame, fenois, alcaloides aromticos,
drogas de abuso, flavorizantes,
fragncias.
Fases comerciais similares: ciola 5, db5,
hp5, at5, fi54, cpsil8cb, optima5, ov5, zb5,
007-5, rtx5, bp5, spb5..

ANLISE DE PESTICIDAS ORGANOCLORADOS EM COLUNA

5%FENIL-95%METILISILOXANE

FASE ESTACIONRIA
POLI(14%CIANOPROPILFENIL-86%DIMETILSILOXANE)
Polaridade intermediria. Fase ligada.

Grupo ciano torna a fase mais susceptvel
a danificao por oxignio e umidade do
que outras fases de silicona. Pode ser
lavada.
Faixa de temperatura: subambiente a
280c
NMERO DE MCREYNOLDS: x- y- z- us = 67 170 153 228 - 171
Aplicaes tpicas: pesticidas, semivolteis, esteroides, ac.ORGNICOS,
ALCOOIS, pahs, pcbs, AROCLOR,
TRANQUILIZANTS.
Fases comerciais similares: ciola1701,
db1701, hp1701, fn210, cpsil19cb,
optima1701, ov1701, 007-1701, rtx1701,
bp10, spb1701.

FASE ESTACIONRIA
Fase polaridade mdia. Fase ligada.

Fase desenvolvida para anlises de
compostos organo-volteis, halogenados,
no halogenados e aromticos pela
tcnica de purge & trap como
contaminantes em ar, gua potvel, e
efluentes e solos. Fase indicada para
atender os vrios requisitos dos mtodos
epa 502.2, 524.2, 601, 602, 624, 5041,
8010, 8020, 8260. Pode ser lavada..
Faixa de temperatura: subambiente a
250c.
Fases comerciais similares: db624, hpvoc, hp624, at624,rtxvolteis, spb624,
cpsil13cb, vocol
A coluna tipo 624 adequada para
anlise de impurezas em alcool etlico

ALCOOL ANLISE EM COLUNA TIPO 624


COLUNA DESENVOLVIDA PARA ANLISE DE HALOGENADOS, NO
HALOGENADOS E AROMTICOS VOLTEIS POR PURGE E TRAP

ANLISE DE ORGANOVOLTEIS

FASE ESTACIONRIA
POLI-70%CIANOPROPILSILOXANE/SILFENILENO
Polar. Fase ligada.

Fase estacionria desenvolvida pela sge com
grupo aromtico silfenileno incorporado no
esqueleto da siloxane, que permite operar a
260c isotermicamente e at 290c por
programao de temperatura.
Faixa de temperatura: 50 a 260c
Aplicao tpica: analise de fame cis-trans.
Obs: a sge desenvolveu tambm fase com
90% ao invs de
70%cianopropilsiloxane/silfenileno, utilizada
tambm para fame cis-trans, com reteno
um pouco diferente.
Fase comercial: bpx70 e bpx90.

ANLISE DE ESTERES METLICOS DE CIDOS GRAXOS
COLUNA POLI-70%CIANOPROPILSILOXANE/SILFENILENO

FASE ESTACIONRIA
POLIETILENOGLICOL(CARBOWAX 20M)
Fase polar. Fase lquimicamente

compatvel com gua e outros solventes,
porm solven e metanol e gua devem ser
vaporizados no injetor antes de alcanar a
Coluna, portanto evite usar com injeo oncolumn. Pode ser lavada.
NMERO DE MCREYNOLDS: x- y- zu- s- : 305 551 360 562 484
Aplicaes tpicas: alcois,
aromticos(btex), glicois, fame, ac.Graxos,
fenois, flavorizantes, fragncias.
Fases comerciais similares: ciola-wax, ]dbwax, hp-wax, hp-innowax, at-wax, cp-wax52cb, permabond -cw20m, carbowax 20m,
zb-wax, 007-cw, stabilwax, bp20,
supelcowax 10, rtxwax, pe-wax.

ANLISE DE SOLVENTES
COMPARATIVO DE COLUNA POLAR E NO POLAR

ANLISE DE FRAGNCIAS EM COLUNA

POLIETILENOGLICOL

FASE ESTACIONRIA
POLIETILENOGLICOL MODIFICADO COM CIDO NITROTEREFTLICO
Fase polar. Fase ligada.

Quimicamente compatvel com gua e outros
solventes. Porm solventes como gua e
metanol devem ser vaporizados no injetor antes
de alcanar a coluna, portanto evite uso com
injeo on-column. Pode ser lavada.
NMERO DE REYNOLDS: x- y- z- u- z- : 311572 374 572 520
Aplicaes tpicas: alcoois, glicois, solventes,
fames, cidos graxos livres(ideal).
Fases comerciais similares: ciola ffap, db-ffap,
hp-ffap, at-1000, cp-wax-58cb, peeermabond
ffap, ov351, 007-ffap, stabilwax-da, bp21, nukol
Fase cg-usp g25.

ANLISE DE CIDOS GRAXOS LIVRES EM COLUNA DE
POLIETILENOGLICOL MODIFICADO COM CIDO NITROTEREFTLICO

OUTRAS FASES ESTACIONRIAS

COM ESTRUTURA DE SILOXANE
Alm das fases estacionarias mencionadas nos slides anteriores, vrias outras so
disponveis.
Destaca-se as fases com estruturas similares s citadas, porm com a designao fe-ms,
produzidas com tratamento trmico especial para serem utilizadas em cg-ms. Para
aumentar a estabilidade incorpora-se o grupo fenila entre tomos de silicio.
Fases comerciais base metilsilicona similares: ciola1-ms, hp1-ms, db1-ms, cpsil-5cb-ms,
optima-1-ms, mdm-1
FASES COMERCIAIS BASE 5%FENIL95%METILSILICONA: CIOLA5-MS, HP5-MS, cpsil8cb-ms, OPTIMA 5-MS, MDM-5
Outras fases baseadas em polimetilsiloxane foram desenvolvidas especialmente para
anlises de larga faixa de ebulio de hidrocarbonetos e usada para pna,pona e piona. A
literatura fornece dados de ndice de reteno de kovats de mais de 400 analitos, o que
permite identifica-los.
Exemplos de fases comerciais similares: tr50.2PONA, db-petro100, cpsil-pona, rtx1-pona,
BP1-PONA. Petrocol dh50.2.
Outras fases base metilsilicona: petrocol dh150, petrocol dh, petrocol-dh-octil(esta permite
separao na linha de base entre benzeno/1metilciclopenteno e tolueno/2,3,3
trimetilpentano.

ANLISE DE GASOLINA EM COLUNA PETROCOL DH

FASES ESTACIONRIAS
COLUNAS PLOT
Colunas plot refere-se s colunas com fase estacionria slida porosa, dentro de tubo de slica fundida com
dimetro interno de 0.53mm( widebore).
Plot (porous layer open tubular) camada porosa em tubo aberto.
As colunas plot foram desenvolvidas para substituir colunas empacotadas com fases estacionrias slidas,
com o objetivo de proporcionar maior nmero de pratos da coluna e consequentemente melhor resoluo
dos analitos.
Por serem tubos abertos pode-se preparar colunas com maior comprimento: 15, 30. 50m SO OS MAIS
UTILIZADOS.
Exemplo de colunas plot:
1 - peneira molecular 5a para anlise de gases: h2, o2, n2, ch4, co
FASES COMERCIAIS SIMILARES: G5 molesieve, molesieve 5A, PLT5A, rt-msieve13x,
molsieve5aplot, hp-plot-molesieve, cp-molesieve 5A, mt-sieve5a, mxt-msieve 5A.
2 alumina separa hidrocarbonetos leves: c1-c4 saturados e insaturados(exemplo glp) alm de c5c10.
Fases comerciais similares: gs-alumina, rt-alumina plot, alumina plot, al2o3/kcl,al2o3/na2so4.
3 alumina/kcl e alumina/na2so4 polaridade menor que alumina.
Fases comerciais similares: gs-alumina/kcl, cp-alumina/kcl, hp_plot al2o3, rt-alumina, valcoplot
al2o3/kcl, valcoplot al2o3/na2so4.

ANLISE DE HIDROCARBONETOS C1-C5 EM COLUNA PLOT

FASES ESTACIONRIAS
COLUNAS PLOT
Outros tipos de colunas plot utilizam polmeros porosos derivados de estireno-divinilbenzeno e

outros compostos , usadas como alternativa das colunas empacotadas tipo porapks E hayeseps.
Exemplo de colunas plot de polmeros porosos:
Base divinilbenzeno: GS-Q, PoraPLOT Q, PoraPLOT Q_HT, Rt-QPLOT, SupelQ PLOT,
HP-Q PLOT.
A empresa Vici produz vrias colunas plot baseadas nos polmeros porosos hayesep, com
diferentes estruturas e diversas aplicaes;
Valco PLOT HAYESEP A: BASE DIVINILBENZENO/ETILENOGLICOLDIMETRACRILATO.
ValcoPLOT HAYESEP B: BASE DIVINILBENZENO/POLIETILENODIIMINA
ValcoPLOT HAYESEP C: BASE DIVINILBENZENO/ACRILONITRILA
ValcoPLOT HAYESEP D: BASE DIVINILBENZENO DE ALTA PUREZA
ValcoPLOT HAYESEP N: BASE DIVINILBENZENO/ETILENOGLICOLMETACRILATO
ValcoPLOT HAYESEP P: BASE DIVINILBENZENO/ESTIRENO
ValcoPLOT HAYESEP Q: BASE DIVINILBENZENO
ValcoPLOT HAYESEP R: BASE DIVINILBENZENO/N-VINIL-2 PIROLIDINONA
ValcoPLOT HAYESEP S: BASE DIVINILBENZENO/4-VINIL-PIRIDINA
APLICA/ES E CROMATOGRAMAS: www.vvici.com/columns/vp.php

ANLISE DE HIDROCARBONETOS C1-C5 EM COLUNA PLOT

CONDICIONAMENTO DAS COLUNAS
Cada fase estacionria tem uma temperatura mxima de operao, acima

da qual a sua presso de vapor suficientemente elevada para o gs de
arraste carreg-la (sangramento), alterando portanto as caractersticas da
coluna. No operar a coluna acima dessa temperatura.
Uma coluna nova pode ter oligmeros e/ou solvente residual e portanto
necessrio condicion-la para evitar deslocamento da linha de base.
Para efetuar o condicionamento recomendado instalar a coluna no injetor
e no instalar no detector:
AJUSTAR FLUXO DE GS DE ARRASTE (N2 OU he). Mantendo-o por
cerca de 15 minutos a temperatura ambiente, para eliminar ar da coluna.
Ajustar a temperatura do forno a ~50c e aumentar a temperatura
gradativamente( ~10c/min) at ~20c abaixo da temperatura mxima e
mante-la no mnimo 8 horas, no caso de uso de detector de captura de
eletrons necessrio maior tempo de condicionamento. Resfriar o forno,e
conectar a coluna no detector.

RECOMENDAES OPERACIONAIS
Procedimento para iniciar operao do cromatgrafo:
Primeiramente alinhar os gases para o cromatografo e ajustar os fluxos de

trabalho.
Manter o forno temperatura ambiente por ~15 minutos e s ento aquecer,

para evitar que oxignio do ar danifique a coluna.
Para desligar o cromatografo, reduzir a temperatura do forno prximo da

ambiente e s ento fechar os gases e desligar o cromatgrafo
Na retirada de uma coluna do forno( sempre a temperatura prxima da

ambiente), certificar-se que as vlvulas de h2 estejam fechadas.
Na instalao da coluna, certificar-se que no h vazamento nas conexes

do injetor e do detector.
Quando necessrio, recondicionar a coluna conforme o procedimento do

condicionamento ou lavar (quando permitido) com solvente conveniente..

ANLISE QUALITATIVA
A anlise qualitativa em CROMATOGRAFIA tem por objetivo a
identificao dos analitos de interesse.
Existem dois casos a serem considerados para anlise
qualitativa:
Anlise Qualitativa em controle de qualidade
Anlise Qualitativa em identificaes no rotineiras

ANLISE QUALITATIVA
Anlise Qualitativa em Controle

de qualidade
normalmente efetuada atravs da
comparao do tempo de reteno ou
reteno relativa dos analitos de
interesse com esses parmetros de
padres. Tais anlises so realizadas
com metodologias j estabelecidas.
fundamental
o
controle
e
monitoramento
das
condies
analticas para evitar concluses
errneas.

ANLISE QUALITATIVA
Anlise Qualitativa em identificaes no rotineiras
Quando o objetivo identificar compostos de presena possvel em uma amostra, ou
caracterizao de contaminantes em uma amostra, o analista depara-se com uma situao
complexa.
Um rastreamento da amostra muito til, para auxiliar a identificao de compostos em
anlise no rotineira.
necessrio obter-se condies de deteco especfica de cada componente. Isso pode
ocorrer de duas maneiras:
1.) com a separao dos compostos na coluna para tcnicas de deteco no seletivas
2.) atravs de uma condio de deteco exclusiva para o componente em questo
mesmo que outros componentes eluam com mesmo tempo de reteno deteco
seletiva. Usando detectores que respondem especificamente a determinados
compostos, tais como: ECD, PID, NPD, PFD.
Para esse tipo de anlise,frequentemente necessrio o uso de diferentes tipos de
detectores; o detector de espectrometria de massa acoplado ao cromatografo muito
recomendado, pois pode definir a estrutura do composto e portanto identific-lo.

ANLISE QUALITATIVA
IDENTIFICAO ATRAVS DO NDICE DE RETENO DE KOVATS
O ndice de Reteno de Kovats um parametro muito recomendado para identificar
compostos num cromatograma.
A determinao do IR feita injetando-se padres de vrios compostos, juntamente com
normais parafinas e determinando os valores pela equao:
IR = 100n + 100 x (log tr i log tr n/log tr n+1 log tr n), para condies isotrmicas e
IR = 100n + 100 x (tri trn/trn+1 trn) , por programao de temperatura
Onde n o nmero de C da parafina que elui antes do composto e n+1 o nmero de C

da parafina que elui aps o composto.
Existem muitos dados de ir publicados na literatura, para diferentes compostos:
hidrocarbonetos (+ de 400), solventes, fragncias, etc.
Injetando-se a amostra junto com n-parafinas, determina-se os ndices de reteno dos
compostos da amostra que comparados com dados da literatura possvel identifica-los.

ANLISE QUANTITATIVA
Duas metodologias:
Mtodos por normalizao
Mtodos absolutos
MTODOS POR NORMALIZAO
Assume-se que todos os componentes da amostra eluem da coluna e so detectveis
Existem dois procedimentos:
Normalizao de rea (% em rea)
Normalizao utilizando-se a rea corrigida

ANLISE QUANTITATIVA
Normalizao de rea (% em rea)
%i
Ai
x100
Ai
Ai = rea do composto i
Ai = somatria das reas de todos componentes
Considera-se que todos os componente apresentam resposta proporcional sua
concentrao e que mesma concentrao de diferentes compostos resulte em
reas iguais (o que dificilmente ocorre).

ANLISE QUANTITATIVA
Normalizao com rea corrigida
Ai xFi
%i
x100
Ai xFi
onde Fi= Ci/Ai do componente i na mistura padro
Ai = rea do composto i
Fi = fator de resposta do componente i
AiFi = somatria das reas de todos componentes multiplicadas pelos respectivos
fatores de resposta
necessrio conhecer todos os componentes da amostra para determinao dos
fatores de resposta de cada componente

ANLISE QUANTITATIVA
Mtodos absolutos
Utiliza-se mtodos absolutos quando:
O objetivo da anlise quantificar um ou alguns dos componentes da amostra.
Ao utilizar detectores especficos ou seletivos que detectam somente os componentes
de interesse
Existncia de compostos na amostra que no so eludos nas condies de anlise
ou no so detectados e que no haja interesse de quantific-los.
Quantificao de componentes em baixa concentrao.
Existem dois procedimentos:
Padronizao externa
Padronizao interna

ANLISE QUANTITATIVA
Mtodos absolutos - Padronizao externa
1. Determina-se a curva de calibrao de cada componente atravs da anlise de misturas
padres injetando-se um determinado volume.
2. Posteriormente, injeta-se o mesmo volume da amostra e obtem-se a concentrao do
analito atravs da curva de calibrao.
Ai
Ci
Nesta tcnica, se o volume injetado no for exatamente o mesmo ou se houver alterao de
algum parmetro que afete a resposta do componente no detector, como por exemplo,
variao da intensidade de luz do UV-VIS ou alterao na FM, as reas dos picos podero
ser maiores ou menores daquelas obtidas na calibrao e consequentemente os resultados
sero incorretos.

ANLISE QUANTITATIVA
Mtodos absolutos - Padronizao interna
Para minimizar os problemas da padronizao externa, a amostra e a mistura
padro so modificadas pela adio de um composto considerado como
padro interno. O padro interno deve ter as seguintes caractersticas:
1. No estar presente na amostra original, ser estvel e no reativa.
2. Pico separado dos componentes da amostra
3. Eluir prximo dos componentes de interesse
4. Deteco semelhante dos picos de interesse
5. Concentrao que produza rea similar aos picos analisados
6. Pureza elevada ou conhecida (possveis impurezas no devem eluir com os
picos de interesse).

Mtodos absolutos - Padronizao interna
1. Determina-se a curva de calibrao de cada componente atravs da anlise de misturas
padres contendo o padro interno. Nessa curva de calibrao utiliza-se a relao entre rea
do componente i e rea do padro interno em funo das relaes de suas concentraes.
2. Posteriormente, injeta-se a amostra contendo padro interno (preferencialmente na
mesma concentrao utilizada na calibrao) e obtem-se a concentrao do analito atravs
da curva de calibrao.
Ai / Api
Ci / Cpi
Se o volume de amostra injetado for diferente do utilizado na calibrao, ou se algum

parmetro analtico for alterado resultando em reas diferentes daquelas esperadas nas
condies de calibrao, a relao de rea entre analito e padro interno no ser afetada.

COMO ESCOLHER UMA COLUNA CAPILAR
A seleo da coluna baseada em cinco fatores principais: tipo de amostra, tipo de

fase estacionria, dimetro da coluna(id), espessura do filme de fase estacionria(df)
(os quais esto interelacionados), e comprimento da coluna(L).
AMOSTRA E FASE ESTACIONRIA
A fase estacionria um filme polimrico cobrindo a parede interna da coluna
capilar. Diferenas nas propriedades qumicas e fsicas dos compostos orgnicos
injetados e suas interaes com a fase estacionria, so a base para o processo de
separao.
Interaes entre os componentes da amostra e a fase estacionria variam em funo
das propriedades dos compostos analisados. Quando a ENERGIA DE INTERAO
ANALITO-FASE difere significadamente para dois compostos, um retido mais
tempo que o outro.
Mudando as caractersticas qumicas da fase polimrica, altera suas propriedades
fsicas. Dois compostos que no so separados(co-eluem) numa fase estacionria
particular podem ser separadas em outra fase de polaridade diferente, se a diferena
de interao analito-fase for significativa.Esta a razo da disponibilidade de uma
variedade de fases de colunas capilares cada fase fornece uma combinao de
interaes especficas para cada classe de analitos.


TIPO DE FASE
POLARIDADE DA FASE A escolha da fase estacionria normalmente o item mais importante

na seleo de uma coluna. A caracteristica mais importante a polaridade da fase, pois ela dita a
seletividade, ou seja a habilidade da coluna separar os componentes da amostra.A seleo da
fase baseada no princpio qumico geral que SIMILAR DISSOLVE SIMILAR. Uma coluna no
polar melhor para analises de compostos no polares. Colunas polares separam mais
efetivamente compostos polares.
MOLCULAS NO POLARES Geralmente compostas s de tomos de carbono e hidrognio,

com simples ligaes carbono-carbono, tais como os hidrocarbonetos parafnicos. Estes so bem
separados por colunas capilares no polares. As interaes entre compostos no polares e fase
no polar do tipo dispersiva, na qual a ordem de eluio baseada nos pontos de ebulio.
MOLCULAS POLARES Compostas principalmente de tomos de carbono e hidrognio,

contendo um ou mais tomos de bromo, cloro, fluor, nitrognio, oxignio, fosforo ou enxofre.
Compostos polares tipicamente analisados por coluna capilar incluem: alcoois, aminas, cidos
carboxlicos, diois, esteres, eteres, cetonas, bifenil policlorados(PCBs) e tiois.
MOLCULAS POLARIZVEIS Compostas de carbono e hidrognio, contendo uma ou mais

dupla ou tripla ligao, tais como olefinas e hidrocarbonetos aromticos.
Compostos polares e polarizveis so geralmente separados em coluna de polaridade

intermediria e polar. Alm das interaes dispersivas entre as molculas polares e fases polares
incluem interaes dipolo e cido-base. As separaes so determinadas pelas diferenas dos
efeitos globais destas interaes.


DIMETRO INTERNO DA COLUNA ID
Os dimetros internos das colunas capilares comerciais disponveis permitem
balancear dois fatores: eficincia(N) e capacidade da amostra(quantidade de
qualquer componente ser aplicado na coluna sem causar sobrecarga na coluna e
portanto pico assimtrico.
Colunas com ID 0.20, 0.25 e 0.32mm permitem maior resoluo (maior eficincia),
enquanto as wide bore (mega-bore) 0.53 e 0.75mm, maior capacidade de amostra.
A natureza dos componentes da amostra e da FE afetam a capacidade da amostra:
fases no polares tem maior capacidade de amostra para analitos no polares;
fases polares tem maior capacidade de amostra para analitos polares.
Outro fator a considerar o tipo de detector, assim por exemplo detector de
espectrometria de massa(CG/MS) no aceita os fluxos de gs de arraste elevado de
colunas mais largas que 0.20 e 0.25mm.
Para compostos que eluem muito prximos(ex.. Isomeros), usar colunas de ID 0.20
ou 0.25mm que do maior resoluo. Estas colunas requerem equipamento com
dispositivo de splitting e controlador de fluxo que controla confiavelmente o fluxo de
gs de arraste a baixas vazes.Para amostra em concentrao elevada ou com
larga faixa de concentrao colunas com 0.53 e 0.75mm so melhores.


ESPESSURA DO FILME DA FASE ESTACIONRIA - df
Quanto maior df, maior a largura do pico reduz a eficincia da coluna devido a
maior dificuldade de transferncia de massa(Equao de Van Deemter H) e
aumenta os tempos de reteno dos analitos e reduz a interao com a parede do
tubo.
Aumentando df, aumenta a capacidade mxima da amostra e a temperatura na qual
um componente eluir da coluna. Aumento da espessura do filme reduz a
temperatura mxima limite da coluna devido ao maior sangramentoda FE.
Em geral colunas com filme fino thin film -(0.10 a 0.25m) so usados para
anlises com pontos de ebulio elevados. Os compostos eluem a temperaturas
menores e com tempos de reteno mais curtos.
Filmes mais grossos - thicker films-(1 a 5m) so mais adequados para analitos com
baixo ponto de ebulio(ex. Organo-volteis e gases) Colunas com filmes espessos
aumentam a reteno de compostos altamente volteis, eliminando portanto a
necessidade de criogenia no forno das colunas. Alm disso possuem maior
capacidade de amostra, reduzindo sobrecarga overloading (picos que alargam e
do caudas frontais para componentes em concentrao elevada.


COMPRIMENTO DA COLUNA L
COLUNA MAIOR OFERECE MAIOR RESOLUO QUE COLUNA MENOR.
Porm h um limite prtico para aumentar o comprimento da coluna: em anlises
isotrmicas, numa coluna de 60m a resoluo aumenta 40% em relao a uma
coluna de 30m a resoluo (R) aumenta de acrdo com a raiz quadrada de L, mas
dobra o tempo de anlise e aumenta a presso requerida para mover a amostra
atravs da coluna. Uma coluna de 60m custa mais do que uma de 30m.
Em geral coluna de 30m d o melhor balano entre resoluo e tempo de anlise.
Usar coluna de15m para anlises de screening ou para amostras simples cujos
componentes so de natureza qumica diferente.
Usar coluna de 60m quando as amostras so complexas ou volteis com
componentes eluindo muito prximos, ou quando usar programao de temperatura
para minimizar o aumento do tempo de anlise.
Para analisar essas amostras difceis, uma coluna de 30m com espessura de filme
grosso em geral to til quanto uma de 60m.
Em certos casos especiais necessrio colunas de 100 150m, por exemplo
componentes de petrleo e esteres metlicos de cidos graxos.

SELEO INICIAL DE COLUNA CAPILAR

Referncias: Supelco The Reporter Vol. 18.2 e 18.5
A forma mais simples para selecionar coluna capilar inclui: consultar colegas
cromatografistas, pesquisar a literatura de aplicaes e/ou os Servios Tcnicos de
fornecedores de colunas.
O passo mais importante para o desenvolvimento de um novo mtodo conhecer o mximo
possvel da amostra, tais como:
Origem da amostra
Componentes e matriz da amostra
Nmero de compostos esperados
Ponto de Ebulio dos compostos
Faixa de ebulio da amostra
Grupos funcionais nos compostos
Concentrao esperada dos compostos
Estabilidade trmica e qumica dos compostos

Considerar se que todos os compostos devem ser identificados e quantificados, o que
determinar a necessidade de separao total ou parcial de todos os compostos e se ser
necessrio usar CG/MS e tambm o tempo de anlise.
Essas informaes orientaro como selecionar a coluna.

Recomenda-se como primeiro passo, injetar a amostra numa coluna no polar, como
polimetilsiloxane(DB1 ou similar) ou Poli 5%fenil 95%metilsiloxane(DB5 ou similar)
Utilizar coluna com 30m x 0.25mm x 0.25m. Colunas de 0.25mm oferecem bom
compromisso entre capacidade de amostra, eficincia de separao e tempo de
anlise.
Condies iniciais dos testes:
Gs de arraste: Helio velocidade linear 25cm/seg Presso constante
Tcol: 50C 10Cmin at 300C manter 10 min.
Split: 100:1 - Vol.inj: 1L
Tdet(FID): 340C
Avalie se os resultados so aceitveis: atingiram os objetivos? separaram o
nmero de compostos esperados? Os picos so simtricos? O tempo de anlise
aceitvel?
Se os resultados no forem satisfatrios, dependendo da irregularidade observada:
reinstalar a coluna, ajustar condies analiticas diferentes, selecionar coluna com FE
de diferente polaridade, injetar menos material.


TROUBLESHOOTING
PROBLEMAS CROMATOGRFICOS E SOLUES
A tarefa real para corrigir um problema com o sistema cromatogrfico identificar a

causa, sem gastar tempo.
Manuais dos equipamentos e informaes de fornecedores de colunas e acessrios

de cg, oferecem procedimentos sistemticos para avaliar a causa do problema e
sugestes de como soluciona-lo.(Ex. Bulletin 853b da supelco,catlogo da j& w
Scientific, e outros)
Problemas mais comuns: picos fantasmas, ruido excessivo da linha de
base,instabilidade da linha de bases, picos com cauda, picos divididos(split),
deslocamento dos tempos de reteno, mudana da forma do pico, perda de
resoluo.
As fontes de roblemas em cg so devidas s 5 fontes seguintes: o operador, a

amostra, a coluna, os sistemas eltricos do instrumento e o sistema de fluxo de
gases do sistema.

TROUBLESHOOTING
reas e itens a serem checados:
1- Gases presses, velocidade linear, fluxo(no detector, split e purga do

septo).
2- Temperaturas coluna, injetor, detector, linhas de transferncia.
3- Parmetros do sistema tempo de ativao da purga, atenuao e
range do detctor, range de massa injetada,etc.
4- Linhas dos gases e traps limpeza, vazamentos, expirao dos traps.
5- Consumveis do injetor septos, liners, orings, anilhas.
6- Integridade da amostra concentrao, degradao, solvente,
estocagem.
7- Seringas tcnica de manuseio, vazamentos, limpeza, agulhas com
rebarbas.
8 Sistema de dados ajustes e conexes.

TROUBLESHOOTING
Picos fantasmas: contaminao do sistema o mais provvel se os picos

so de largura similar aos dos componentes da amostra(reteno similar),
os contaminantes esto sendo introduzidos ao mesmo tempo que a
amostra. Podem estar presentes no injetor, ou na prpria amostra, devido a
impurezas no solvente, vials, tampas e seringas.
Injetando branco do solvente e amostra pode ajudar a encontrar as
possveis fontes dos contaminantes.
Se os picos fantasmas so mais largos do que os da amostra, deveriam

estar na coluna antes de efetuar a injeo. Aumente a temperatura da
programao ou o tempo para eliminar esses componentes e minimizar ou
eliminar o problema. Alternativamente utilize a tcnica de backflush.

REFERNCIAS PARA CONSULTA

Fundamentos da Cromatografia a Gs REMOLO CIOLA-, ed. Edgard Blucher -
Bulletin 792, Packed Column - Troubleshooting guide,

http://www.sigmaaldrich.com/Brands/Supelco_Home/Technical_Library/Literature.html
Bulletin 853B, Capillary GC - Troubleshooting guide,

Bulletin 879, CG and HPLC Phases and packings for US Pharmacopoeia methods,
THE REPORTER 18,2, 18.5, 18.11 E 19.9 SITE DA SUPELCO
Pharmaceutical Technology, ed. Brasileira, vol. 2, nmero 3, junho 1998, Validao de mtodos
cromatogrficos, pg. 12
PERIDICOS: Journal of Chromatography Journal of chromatographic Science Chromatographia etc.

Fontes de internet
Fornecedores de equipamentos colunas e acessrios de CG e HPLC
www.chem.agilent.com
www.alltech.web
www.dionex.com
www.esind.com
www.gls.co.jp
www.hamiltoncompany.com
www.macherey-nagel.com
www.mac-mod.com
www.merck.de
www.microlc.com
www.microsolvtech.com/
www.phenomenex.com
www.instruments.perkinelmer.com
www.polymerlabs.com
www.restekcorp.com/h
www.sigmaaldrich.com/Brands/Supelco
www.thermo.com
www.tosoh.com/
www.varianinc.com
www.vydac.com/
www.waters.com
www.zirchrom.com/

Agradecimentos
CEP CURSOS - Centro de Educao Profissional
O Centro de Educao Profissional (CEP) uma Empresa voltada para a Educao
Continuada e Profissionalizante atravs de: Cursos de Extenso Presenciais; Cursos a
Distncia (EAD); Cursos In-Company;Programas Especiais e Especializaes;
Assessoria e Consultoria Customizada;
Dentro das diversas reas que o CEP atua, destacam-se: Instrumentao e Desenvolvimento Analtico,
Controle de Qualidade, Garantia da Qualidade, Assuntos Regulatrios, Pesquisa e Desenvolvimento,
Microbiologia e Habilidades Gerenciais.
Informaes: www.cepcursos.com / info@cepcursos.com

Professor Ayrton: ayrtonargenton@hotmail.com
Av. Ibirapuera 2907, Ed. Comercial State, Conj. 1709, Moema - SP - SP - TEL/ FAX: 11 50539755

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gases, lquidos e slidos

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em geral mais lentas que CG

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