CROMATOGRAFA DE EXCLUSIN O CROMATOGRAFA DE GEL FILTRANTE

La cromatografa es una tcnica que permite la separacin de molculas

diferentes presentes en una misma muestra, de diferentes tamaos. El mtodo
est basado en la circulacin de una fase mvil que arrastra a la mezcla de
compuestos a separar, a travs de una fase estacionaria. Dependiendo de la
afinidad relativa que por ambas fases tengan los distintos compuestos presentes
en la mezcla resultar su separacin. Se utiliza un equipo GPC el cual permite la
separacin de componentes de una mezcla polimrica, por componentes y por
distribucin de pesos moleculares, en medidas tanto absolutas como relativas.
CARACTERSTICAS

La fase estacionaria es inerte, por lo que la columna no se desactiva.

La muestra no interacciona qumicamente con la fase estacionaria, ni con la
fase mvil.
Los solutos son generalmente sustancias de peso molecular elevado,
dependiendo de su medida y estructura, stos se retienen o se eluyen a
travs de la columna.

PROCEDIMIENTO

Se realiza en columnas cilndricas rellenas con algunos de los geles que se

fabrican con este fin y que pueden ser de varios tipos: dextranos con enlaces
cruzados, agarosa, poliacrilamida, etc. Todos estos geles (fase estacionaria) se
hallan constituidos por grnulos (partculas) de un material esponjoso hidratado,
que contiene poros con un tamao de dimetro determinado. Cuando se hace
pasar una mezcla de molculas de distinto tamao, a travs de una columna de
filtracin en gel; aquellas molculas con un tamao mayor que el dimetro de los
poros de las partculas, slo podrn moverse en su camino, a travs de la fase
estacionaria, en el espacio que queda entre las partculas; y por lo tanto, no se
vern retrasadas en su descenso. En cambio aquellas molculas capaces de
penetrar en las partculas se vern retrasadas por la fase estacionaria; en mayor
medida, cuanto menor sea su tamao. Por lo tanto, las molculas eluyen en este
tipo de cromatografa por orden decreciente de tamao molecular. Las mallas del
gel permiten la entrada selectiva de las partculas de menor masa molecular. De
ah que las partculas de mayor peso molecular salgan primero y las otras quedan
en los poros.

APLICACIONES

Determinacin del peso molecular de protenas: al existir una relacin lineal

entre el volumen de elucin relativo de una sustancia y el logaritmo de su
masa molecular en un intervalo considerable de masas moleculares,
pueden graficarse dichos valores para una determinada columna de
filtracin con gel empleando macromolculas de masas moleculares
conocidas y as determinar la masa molecular de una sustancia
desconocida por su posicin en la curva.

Es un procedimiento frecuentemente utilizado en los laboratorios de

biociencia para caracterizar protenas purificadas y recombinantes.

Esta tcnica tambin es utilizada para medir el peso molecular o para

resolver mezclas de monmeros, oligmeros y agregados de orden ms
elevado. Al utilizar este mtodo, el peso molecular se calcula creando una
curva de calibracin de protenas globulares estndar y luego se compara
el tiempo de elucin de una muestra con los estndares.