VITALES

Se realizan directamente
en el individuo vivo.

SUPRAVITALES

Se estudian tejidos vivos

separados del individuo.

TCNICAS
HISTOLGICAS
PARA PREPARAR
MUESTRAS PARA SU
OBSERVACION

POSTVITALES

Se efecta sobre
muestras de tejido
muerto fijados o no
fijados

Emplea: Tcnicas de
Cultivos Celulares y
Tisulares.

ETAPAS:

FIJACIN

INCLUSIN

TCNICAS EN
MICROSCOPA
PTICA

TEJIDOS
BLANDOS

TCNICA
HISTOLGICA
BSICA
CORTE
TCNICA
HISTOQUMICA

TEJIDOS DUROS

COLORACIN

MONTAJE

MICROSCOPA ELECTRNICA DE
TRANSMISIN

TCNICAS EN MICROSCOPA
ELECTRNICA

MICROSCOPA ELECTRNICA DE
BARRIDO
MICROSCOPA ELECTRNICA
ANALTICA

Interrumpe los
procesos del
metabolismo
celular

Dura desde unas

horas hasta
varios das
dependiendo del
tamao de la
muestra

Se debe iniciar lo
ms pronto
posible para
evitar la autolisis

Conserva
manera
fidedigna
Estructuras
Celulares y
Tisulares

Fijacin

Procedimientos
Fsicos
(Congelacin) o
Qumicos (el
ms usado)

de

Obtiene una
lmina
delgada de la
Muestra, 5
Micras

Para realizar la
inclusin:
Deshidratar las
muestras (alcohol
etlico)
Aclarar la Muestra
(Benceno, xileno,
tolueno, entre otros).

INCLUSIN

La ms
utilizada es
la Inclusin
en Parafina.

Las Muestras
adquieren
dureza para
poder ser
cortados.

Manual
Micrtomo

Motorizado

Corte

Micrtomo
Minot o de
rotacin
Una Vez realizado el
corte se extiende por
flotacin en agua a
37C
Se recoge el corte en
un porta objetos y se
deja secar en una
estufa a 37C

Cuchilla de acero
asegurada
fuertemente y
permanece fija con un
ngulo de inclinacin
adecuado

Sistema de fijacin
del Bloque de
Parafina

Desplazamiento
Vertical para el corte

Mayormente Soluciones
Acuosas

COLORACIN

Utiliza colorantes

Hematoxilina

Resalta estructuras basfilas

Eosina

Resalta Eosinofilas o
cidofilas

Eliminacin de la Parafina

Solventes orgnicos tipo

xileno

Hidratacin del Corte en

soluciones decrecientes de
etanol

Se termina de Hidratar el
corte

Se sumerge la muestra en
una cubeta con colorante
Se elimina el exceso de
colorante

Se sumerge en agua
destilada

Agua destilada

Montaje

Lavado del Corte

Agua Destilada

Deshidratacin

Soluciones
crecientes de
etanol

Aclaracin de la
Muestra

Xileno
Se colocan gotas
de medio de
montaje

Cubrir el objeto
Se coloca un
cubreobjetos

Reacciones
qumicas y/o
bioqumicas

Tcnica
Histoqumica

Cromgenos

Tcnicas
InmunoHistoqumicas

Localiza substancias o actividad

de enzimas en muestras
histolgicas.

La enzima adquiere una

coloracin observable con el
microscopio ptico.

Utilizan antisueros o
anticuerpos
especficos contra
componentes
tisulares o celulares a
identificar.

Reacciones Anti
Cuerpo (Ac) /
Antgeno (Ag)

Resaltar
inmunoglobinas
unindolas a
molculas
fluorescentes o
enzimas
mediante el uso
de cromgenos

Soluciones de cidos
fuertes

Se descalcifican y
ablandan los tejidos
despus de la fijacin.

cidos dbiles

Quelantes qumicos
Tejidos Duros

Tcnica de
Descalcificacin
Se realiza la inclusin
en parafina.

Se cortan y tien

Para piezas dentarias

se recomienda una
inclusin en celoidina

Se utiliza Metilmetacrilato

Tejidos
Duros

Tcnica de
Inclusin del
tejido duro fijado
sin descalcificar

Micrtomo
motorizado con
una cuchilla de
carburo de
tungsteno
Las Secciones
pueden
observarse con
luz comn, luz
polarizada o
fluorescencia sin
colorear.

Cualquier
Metacrilato que
alcance gran
dureza

Se toman lminas
gruesas de la
muestra.

Tejidos Duros

Tcnica de
Desgaste

Frotacin contra
piedra de Arkansas
de Grano Grueso.
Frotacin contra
piedra de Arkansas
de Grano Fino.
Se obtiene una
muestra de 30
Micras.

Ultra
micrtomo para
muestras de 30
a120 nm de
grosor
Para el estudio
de tejidos duros
se utilizan
tcnicas de
microscopa
analtica

Contraste con
citrato de
uranilo y/o
citrato de
plomo

Deshidratacin
con Etanol o
acetona
Microscopa
Electrnica
de
Transmisin

Postfijacin con
Tetrxido de
Osmio

Tcnica no
destructiva
Permite conocer <In
Situ> y en segundos la
morfologa y
composicin qumica
de la muestra

Microscopa
Electrnica
Analtica
Es necesario realizar
una criofijacin de las
muestras a bajas
temperaturas.

Microanlisis por
energa dispersiva de
Rayos X
Induccin de electrones
con rayos X para identificar
los elementos qumicos de
la muestra
Se registran los espectros
en picos Gaussianos

Interaccin de
un haz de
electrones sobre
la superficie del
espcimen

Microscopa
Electrnica
de Barrido
El detector
amplifica la
seal elctrica y
la transmite a un
monitor

Origina
electrones
secundarios
captados por un
detector.

Fijacin en
Glutaraldehdo
Para Tejidos
duros solo es
necesario
montar y
recubrir las
muestras

Metalizacin
con oro para
asegurar la
conductividad
elctrica

PostFijacin
con tetrxido
de osmio

Preparacin
de
Muestras:

Montaje de las
muestras en
porta muestras
de aluminio
usando como
adherente y
Conductor Plata
coloidal.

Desecacin
mediante tcnica
de punto crtico
(Sustitucin del
lquido en la
muestra por CO2
Lquido el cual se
vuelve gas y se
elimina
lentamente)

Deshidratacin
de las muestras
postfijadas en
soluciones de
acetona o
etanol