Universidad Autnoma

De Baja California
Facultad de Ciencias Marinas
Extraccin e Identificacin de glucgeno
RominaPreciadoPrez
23deabrildel2013

Resumen:Seanalizlapresenciadeglucgenoenlostejidosdemsculoehgadodel
pezOreochromisniloticus).Lapresenciadeestesolosepresentenelmsculoeneltubode
ensayoMB.Elresultadoseatribuyeaelestrsquepaselpezyaseaenelmedioenelquese
desarrollaba(altasalinidad)yalmomentoenelqueselediomuertequeocasionlabajao
nulaconcentracindeglucgenoeneltejidohepticoyporelestrslapresenciadeesteen
elmsculo.

Introduccin.
Elglucgenoeselpolisacridodereservamsimportanteenlasclulasanimales.Al
igualquelaamilopectina,elglucgenoesunpolmeroconsubunidadesdeglucosa
unidas por enlaces ( 1 4 y ramificaciones del tipo ( 1 6 , pero el
glucgenoestmsramificado(unaramificacincada8a12residuos)yesms
compactoqueelalmidn.Elglucgenoesespecialmenteabundanteenelhgado,
donde puede llegar a representar el 7% de su peso; tambin se encuentra en el
msculo esqueltico. Algunos grnulos de glucgeno contienen tambin,
ntimamenteunidos,losenzimasresponsablesdesusntesisydegradacin.
Puestoquecadaramadeestos terminaconunazcarnoreductor(quenoposee
carbonoanomricolibre),estospolmerostienentantosextremosnoreductorescomo
ramas,peronicamenteunextremoreductor.Cuandoelglucgenoseempleacomo
fuentedeenergalasunidadesdeglucosasoneliminadasdeunaenunaapartirdelos
extremos no reductores. Dada la naturaleza ramificada de la amilopectina y el
glucgeno, los enzimas degradativos (que actan en los extremos no reductores)
puedentrabajarsimultneamenteenmuchosextremos,aumentandolavelocidadde
conversindelpolmeroenmonosacridos(Lehningeretal,2005).

LaDglucoseeselprincipalcombustibledelamayoradeorganismosyocupauna
posicincentralenelmetabolismo.Esrelativamentericaenenergapotencial;su
oxidacincompletaadixidodecarbno yaguatranscurreconuna variacinde
energa libre estndar de 2.840 kJ/mol. Almacenando la glucosa en forma de
polmerodeelevadamasamolecular,unaclulapuedeapilargrandescantidadesde
unidadesdehexosaaltiempoquemantieneunaosmolaridadcitoslicarelativamente
baja.Cuandoaumentadeunamanerasbitalasnecesidadesenergticasdelaclula,
laglucosasepuedeliberarrpidamenteapartirdeestospolmerosdealmacenamiento
intracelular(Lehningeretal,2005).
En la gluclisis (del griego glykys, que significa dulce y lysis , que significa
romper)loquesucedeesquesedegradaunamolculadeglucosaenunaseriede
reaccionescatalizadasenzimticamente,dandodosmolculasdepiruvato.Durantela
secuenciadereaccionespartedelaenergalibrecedidaporlaglucosaseconservaen
forma de ATP. La gluclisis fue la primera ruta metablica elucida y es
probablementelaqueseconocemejor,mientrasquelagluconeogenesiseslasntesis
delaglucosaapartirdelpiruvatoyellactato.Paralasntesisdeunmoldeglucosa
sonnecesarios4molesdeATPy2molesdeGTP(ITP)apartirde2molesde
piruvatoy/olactato.Elcaminoquellevalaglucogenesisesbasicamenteelinverso
deldelagluclisis exceptopor3pasos especificos entrelaglucosayglucosa6
fosfato, fructosa6fosfato y fructosa1,6bifosfato, and fosfoenolpiruvato (PEP) y
piruvato.Estatienesulugarprincipalmenteenelhgadoysumisinesproporcionar
glucosaparaexportarlaaotrostejidoscuandosehanagotadootrasfuentesdeglucosa.
(Hayashi,2008).

Objetivo.
Extraer e identificar el glucgeno de dos distintos tejidos (higado y msulo) de
Oreochromisniloticus.
Metodologa.
1.Apartirdeunpez(Oreochromisniloticus)sacrificadosobtenermuestrasdehgado
ymusculo,enseguidapesarporduplicado1.5gdehgadoy3gdemsculo.
2.Homogeneizarlasmuestrasdetejidoscon4mldeKOHal30%.
3.Calentarloshomogenizadosenunbaodeaguaaebullicinpor15minutos,agitar
ocasionalmente.
3. Centrifugar los homogenados a 3000 rpm por 5 minutos, separar la capa de
sobrenadanteycolocarlaentubodeensayo,aadir6mldeetanolyagitar.
4.Reposarlostubosconlamezclaenbaodehielopor5minutos.
5.Centrifugarlostubos5minutosa3000rpm,desecharelsobrenadanteysepararel
glucgenoprecipitado.
6.Hidrlisiscidadelglucgeno:Alprecipitadodeglucgenoobtenidoaadir1ml
deH2SO45Nycalentarenbaodeaguaa100Cpor25minutos.Usarlentesde
seguridadyprocederconsumaprecaucinenestaetapaparaevitarsalpicadurasde
cido.
7.Altrminodelahidrlisisenfriarlostubos,adicionar2mlconaguadestiladaa
cadatuboy3gotasdefenolftalena,aadirgotaagotaNaOH5Nconagitacin
hastaelviredelindicador(pH8osuperior).
8.Identificacindelcontenidodeglucosaenelhidrolizadodeglucgeno:Colocar
0.5mldelhidrolizadodeglucgenoyaadir0.5mldeCu2SO41%,lapresencia
deglucosasedenotaporlaaparicindeturbidezdebidoalainsolubilidaddel
Cu2Oformado.

ResultadosyDiscusin.

Figura1.Medicindelglucgenoendiferentestejidosde Oreochromisniloticus. Losdos

primerostubosdeensayocontienenhgadoylosdossiguientesmusculo.
En los resultados observamos la turbidez solamente en el tubo de ensayo en donde se
encontrabapartedeuntejidodelmsculodelpez(Oreochromisniloticus).
Paradiscutirlosresultadossetomarenconsideracinqueaproximadamenteel10%delpeso
delhgadoesglucgenomientrasqueel12%delpesodelmsculoesdeglucgeno.
Enestecasocabedestacarquesedesconocecuandofuelaltimaingestadealimentodelpez
porloqueestarazncomosesabeelpezdegradaelglucgenoenperiodosdeayunolocual
pudohaberocurrido.Asmismosesabequealmomentoquesediomuertealpezestepas
pormuchoestrsyaquenofuerpidoyposiblementesufri.Trasunaintensaactividad
muscular,larespiracinsemantieneprofundaporunciertotiempo.LamayorpartedelO 2
queseobtienedeestaformaseutilizaparalaproduccindeATPporfosforilacinoxidativa
enelhgado.
Laconcentracindesalinidadenlaqueseencontrabaelpez(Oreochromisniloticus)pudo
tenerefectoenlabajaconcentracindeglucgenoenelhgadoyaqueesteesunndicede
estrsfisiolgico , yaqueelestrscausaunrangoaceleradode hidrlisis enzimtica del
glucgenoheptico(Hayashi,2008).

Preguntasaresolver:

Culeselmecanismosntesisdeglucgenoenlostejidosanimales?
Lasntesisdelglucgenotienelugarvirtualmenteentodoslostejidosanimales,peroes
especialementeimportanteenelhgadoyelmsculoesqueltico.

Enlosanimalesyenalgunosmicroorganismos,elexcesodeglucosadisponibledelos
glcidosdeladietaodelagluconeognesissealmacenaenformadeglucgeno.La
sntesisdeglucgenotienelugarvirtualmenteentodoslostejidosanimales,peroes
especialmenteimportanteenelhgadoyenelmsculoesqueltico.Elhgado,el
glucgenosirvededepsitodeglucosarpidamenteconvertibleenglucosasangunea
para su distribucin a oros tejidos, mientras que en el msculo, el glucgeno se
degradavagluclisisparaproporcionarenergaenformadeATPparalacontraccin
muscular.Elpuntodeiniciodelasntesisdeglucgenoeslaglucosa6fosfato.Esta
puedeprovenirdelaglucosalibreporlareaccindelahexoquinasa(enelhgado;
glucoquinasaenelmsculo):
DGlucosa+ ATP DGlucosa6fosfato+ ADP
Sinembargo,granpartedelaglucosaingeridaduranteunacomidavaapararal
glucgenoporunavamenosdirecta.Escaptadaprimeramenteporloseritrocitosen
el torrente circulatorio convirtindose glucolticamente en lactato; ste es a
continuacin captado por el hgado y convertido en glucosa6fosfato mediante
gluconeognesis.
Parainiciarlasntesisdeglucgeno,laglucosa6fosfatoseconviertereversiblemente
englucosa1fosfatoporlafosfoglucomutasa:
Glucosa6fosfato glucosa1fosfato

LaformacindeUDPglucosaporaccindelaUDPglucosapirofosforilasaesuna
reaccinclaveenlabiosntesisdelglucgeno:
Glucosa1fosfato+UTP UDPglucosa+ PP i

EstareaccintranscurreenladireccindeformacindelaUDPglucosadebidoaque
el pirofosfato se hidroliza rpidamente a ortofosfato por la pirofosfato inorgnico
hidrolasa( G=25 kJ /mol .

2. Cules son las funciones y vas metablicas del glucgeno heptico y del
muscular?
Glucgeno muscular: Su metabolismo est especializado en producir ATP como
fuente inmediata de energa. Este se encuentra adaptado para satisfacer las
necesidadesenergticasdeformaintermitentesegnlademandadeenerga.

Puedenformarcuerposcetnicos,glucosaocidosgrasoslibrescomocombustible,
dependiendodelgradodeactividadmuscularqueseprecise.Enelmsculoenreposo
losprincipalescombustiblessonloscidosgrasosquevienendeltejidoadiposoylos
cuerposcetnicosquevienendelhgado.Estoscompuestosoxidanysedegradanpara
daracetilCoA,queentraenelciclodelcidoctricoparaseroxidadohastaCO 2.La
transferenciadeelectronesalO2queresultadeesteprocesoproporcionaenergapara
lasntesisdeATPporfosforilacinoxidativa.Laglucosaseforsforila,atravsdela
gluclisissedegradahastapiruvatoysteasuvezseconvierteenacetilCoAyse
oxidaporlavadelciclodelcidoctrico.
Bajocondicionesdemsculosmuyactivos,elglucgenoalmacenadoenelmsculo
sedegradahastalactatoporfermentacin,proporcionandodosmolculasdeATPpor
cadaunidaddeglucosadegradada.Lautilizacindelaglucosadelasangreydel
glucgenomuscularcomocombustiblesdeemergenciaparalaactividadmuscularse
incrementa de forma importante por la secrecin de adrenalina, que estimula la
formacindeglucosaensangreapartirdelglucgenohepticoyladegradacindel
glucgenodeltejidomuscular.Elglucgenomuscularest,porlotanto,enteramente
dedicadoalsuministrodeenergaenelmsculoatravsdeladegradacinglucoltica.

Glucgenoheptico;Esparatodoelorganismo,demaneraqueelhgadodegradar
eseglucgenocuandoelniveldeGensangrebaje,fundamentalmenteenperodosde
ayuno,demaneraqueenelayunoentrecomidas oayunonocturnoelhgadova
degradandosuglucgeno.
Encondicionesnormalesnohaymasqueparaundadereservaesporesoqueexiste
lagluconeognesisyaquelosnivelessedisminuyenalpararlaingestadealimentos.
Elglucgenosealmacenadespusdeingeriralimentos,anmstrasunadietaricaen
HC.
Elglucgenoenelhgadomantienelahomeostasisdeglucosaensangre,esdecir,
mantenersiempreuna[glucosa]constanteensangre,loqueresultavitalparalavida,
pueslaglucosaeslafuenteprincipaldeenergiadetodoslosorganos,yenespecial
delcerebroydelosglobulosrojosoeritrocitos,yaqueconstituyesuunicafuentede
energia.Elglucogenodelhigadoserompeensituaciondeayuno(deglucosaen
sangre)expresiondesufunciondereservadeenergia.
Conclusiones.
Lapresenciayausenciadeglucgenoenlostejidosdemusculoehgadorespectivamentese
pudodeberalestrsalquehabasidosometidoelpez (Oreochromisniloticus)porsalinidad
delaguaoelmomentoenelqueselediomuerte.
Referencias.
Hayashi,S.,Kumagai,A.(2008)Studiesoneelliverfunctionsusingperfusedliverand
primaryculturedhepatocytes.AquaBioSci.Monogr.1(2):157.

Lehninger,A.L.,Nelson,D.L.,Cox,M.M.,2005.PrincipiosdeBioqumica.
EdicionesOmega,S.A.SegundaEdicion.Espaa.1152
OrjiR.C.AEffectofTransportationStressonHepaticGlycogenofOreochromisniloticus(L.)
Naga,TheICLARMQuarterly(http://www.worldfishcenter.org/Naga/na_2279.pdf).