UNIVERSIDAD NACIONAL DE MISIONES

FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, QUMICAS Y

NATURALES

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

CARRERA: INGENIERA QUMICA

CTEDRA: TECNOLOGA PARA EL MEDIO AMBIENTE Y LA SALUD

PROFESOR RESPONSABLE CTEDRA: Mg.Ing. CARLOS S. JEJER

JEFE DE TRABAJO PRCTICOS: Mg CECILA PUCHALSKI
AUXILIARES.: Mg. JEANNETTE BAUMANN- CARLA SILVA

-20141

Microbiologa del aire. Introduccin

El aire contiene en suspensin diferentes tipos de microorganismos,

especialmente bacterias y hongos. La presencia de uno u otro tipo depende del origen,
de la direccin e intensidad de las corrientes de aire y de la supervivencia del
microorganismo.

Algunos microorganismos se encuentran en forma de clulas vegetativas, pero

son ms frecuente las formas esporuladas, ya que las esporas son metablicamente
menos activas y sobreviven mejor en la atmsfera porque soportan la desecacin. Las
esporas son producidas por hongos, algas, lquenes, algunos protozoos y algunas
bacterias.

Los microorganismos se encuentran presentes en todos los ambientes: en el aire,

en el agua, en la superficie de los objetos e incluso sobre nuestra piel. Debido a ello
pueden ser causa tanto de contaminacin de alimentos como de infecciones en el
hombre (patologas respiratorias, etc.).
El nmero de microorganismos en la atmsfera cambia segn la altura (10 104/m3), obtenindose mayor cantidad junto al suelo, sobre todo en los dos metros
inferiores, que constituyen el microclima del hombre. A partir de los 200 metros
disminuyen en cantidad y se hacen an ms escasos hasta los 5.000 metros. Es muy
rara la presencia de estos microorganismos hasta el lmite de la troposfera y no se
encuentran en la estratosfera.

El tiempo que permanecen los microorganismos en el aire depende de la forma,

tamao y peso del microorganismo, como as tambin de la existencia y potencia de las
corrientes areas que los sostienen y los elevan. Los factores adversos son los
obstculos que se oponen a los vientos y disminuyen su velocidad y potencia de
arrastre, como as tambin las precipitaciones, que arrastran al suelo las partculas
suspendidas.

Tipos de microorganismos

En el aire se aslan frecuentemente bacterias esporuladas de los gneros Bacillus,

Clostridium y Actinomicetos. Entre las bacterias tambin son muy frecuentes los
bacilos pleomrficos Gram positivos (Corynebacterium) y los cocos Gram positivos
(Micrococcus y Staphylococcus). Los bacilos Gram negativos (Flavobacterium,
Alcaligenes) se encuentran en menor proporcin y disminuyen con la altura.

Entre los hongos, el Cladosporium es el predominante en el aire, tanto sobre la

tierra como sobre el mar, aunque tambin es frecuente encontrar otros mohos, como
Aspergillus, Penicillium, Alternaria y Mucor y la levadura Rhodotorula.

Los virus tambin pueden encontrarse en el aire y ser transportados por l.

Numerosos virus humanos (Orto y Paramixovirus, Poxvirus, Picornavirus) se
transmiten por va respiratoria, principalmente en ambientes cerrados, y pueden
formarse bioaerosoles de virus entricos en las plantas de tratamiento de aguas
residuales. Por otro lado, pueden encontrarse virus de vegetales en aerosoles
procedentes de plantas infectadas.

Factores de supervivencia.
Las condiciones fsico-qumicas de la atmsfera no favorecen el crecimiento ni
la supervivencia de los microorganismos por lo que la mayora solo pueden sobrevivir
en ella durante un breve perodo de tiempo.

La supervivencia de las bacterias es variable, debido a su diversidad estructural y

metablica. En general, las bacterias Gram positivas son ms resistentes que las Gram
negativas ya que su pared celular es ms gruesa. Por ejemplo, en aire seco algunas
especies de Bacillus y Clostridium son capaces de sobrevivir ms de 200 aos,
Mycobacterium un mes y Salmonella slo diez minutos.
Los virus son en general, ms resistentes que las bacterias en las condiciones
ambientales.

Los principales factores que intervienen son

Humedad relativa
Es el factor ms importante. Cuando la humedad relativa del aire decrece,
disminuye el agua disponible para los microorganismos, lo que causa deshidratacin y
por tanto la inactivacin de muchos de ellos. La desecacin puede causar una prdida de
viabilidad en las capas ms bajas de la atmsfera, especialmente durante el da. A
mayores altitudes, las condiciones son ms favorables por la evaporacin y algunas
esporas pueden germinar en las nubes.
La humedad relativa de la atmsfera vara de un 10-20 % en las regiones
desrticas. El lmite menor para el crecimiento de hongos es del 65 %.
Las bacterias requieren una mayor humedad. Las Gram negativas resisten peor
la desecacin que las positivas; esto se refleja en que existe poca evidencia de
transmisin por el aire de bacterias Gram negativas, con la excepcin de Legionella

Temperatura
Est muy relacionada con la humedad relativa, por lo que es difcil separar los
efectos que producen ambas.
La congelacin no destruye los microorganismos pero evita que estos se
multipliquen. Por su parte, las altas temperaturas disminuyen la viabilidad de los
microorganismos.

Oxgeno
Se ha observado una correlacin negativa entre la concentracin de oxgeno y la
viabilidad, que aumenta con la deshidratacin y el tiempo de exposicin. La causa de la
inactivacin podran ser los radicales libres de oxgeno.

Materia orgnica
La atmsfera contiene muy poca concentracin de materia orgnica, y en la
mayora de los casos, es insuficiente para permitir el crecimiento heterotrfico.
El agua disponible es escasa por lo que, incluso el crecimiento de
microorganismos auttrofos est limitado.

Radiaciones
La inactivacin que producen en los microorganismos depende de la longitud de
onda e intensidad de la radiacin. Las de longitud de onda corta (rayos X, rayos ()
contienen ms energa, son ionizantes y alteran o destruyen el DNA de los
microorganismos. Otros factores, como la humedad relativa, concentracin de oxgeno
y la presencia de otros gases, influyen en el efecto que producen las radiaciones sobre
los microorganismos. La forma de interaccin es poco conocida, pero la desecacin y
congelacin pueden proteger a los organismos de las radiaciones.

La exposicin a radiaciones de corta longitud de onda, como la luz ultravioleta,

es la principal causa de prdida de viabilidad de los microorganismos que entran en la
atmsfera. Las radiaciones ultravioletas aumentan con la altura, debido a una menor
retencin, lo que causa mutaciones y la muerte de los microorganismos. Algunos se
protegen de los efectos letales de la radiacin por los pigmentos que producen, as como
por el polvo y las gotas de saliva y moco, debido al escaso poder de penetracin de la
luz ultravioleta.

En la estratosfera hay una capa con una elevada concentracin de ozono que
absorbe la radiacin ultravioleta protegiendo as a la superficie de la tierra del exceso de
radiacin. Esto tambin constituye una barrera al ingreso de microorganismos vivos
procedentes de la troposfera ya que estos quedan expuestos largos periodos a las
radiaciones UV.

Control microbiolgico del aire: Tipos de muestreos.

La evaluacin de la calidad microbiolgica del ambiente nos indica la cantidad
de microorganismos que estn presentes en un rea determinada. Mientras ms limpia
es un rea, menor ser el nmero de microorganismos presentes en el aire de la misma.
Los microorganismos generalmente no estn flotando en el aire sino que se
encuentran sobre partculas inertes, por ejemplo polvo, gotas de agua, etc. que le sirven
como medio de transporte, y pueden encontrarse aislados o agregados. Algunas de estas
partculas pueden depositarse sobre las superficies.

Las personas tambin son una fuente de contaminacin, ya que liberan gran
cantidad de partculas al moverse, toser, estornudar, por exfoliacin de la piel, etc.
Algunas de estas partculas llevan microorganismos que podran contaminar el material
con el que estamos trabajando. Por lo anteriormente expuesto es necesario determinar la
calidad microbiolgica del aire, las superficies y el personal.
La obtencin de muestras representativas de ciertos productos o elementos
relacionados con la industria se vuelve difcil debido a la heterogeneidad, tanto espacial
como temporal. Los microorganismos se encuentran en cualquier parte de la industria.
La mayora de veces se instalan en lugares de difcil acceso lo que garantiza su
supervivencia (grietas, juntas, recovecos, etc).

Muestreo del aire:

Tcnica de sedimentacin por gravedad
El mtodo de sedimentacin en placa Petri ha sido el ms ampliamente utilizado
desde que Frankland y Hart lo emplearan por primera vez en 1887. Las placas con
medio de cultivo estril, permanecen abiertas durante determinados perodos de tiempo,
permitiendo la sedimentacin de los microorganismos.
Este mtodo es sencillo y econmico. Tiene la ventaja de que se pueden
identificar de los cultivos los microorganismos viables, pero su interpretacin es difcil
porque no pueden relacionarse con el volumen de aire muestreado. La deposicin vara
con el tamao y forma de los microorganismos, la velocidad y la turbulencia del aire.
El mtodo no es cualitativa ni cuantitativamente exacto y detecta principalmente
los microorganismos que ms persisten en el aire, no detectndose, sin embargo, los
microorganismos ms pequeos.

Filtracin
La filtracin se realiza a travs de un material poroso, fibra de vidrio, alginato o
filtros de membrana (stos son los ms utilizados en la actualidad). Los filtros recogen
los microorganismos por sedimentacin, impacto, difusin o atraccin electrosttica,
dependiendo del tipo. Los filtros de membrana utilizados son de policarbonato, steres
de celulosa o cloruro de polivinilo, con un dimetro de poro desde 0,01 a 10 m, segn
la naturaleza de los bioaerosoles.

Para realizar la filtracin se han diseado aparatos porttiles con una bomba de
vaco y un flujo de aire de 1 a 50 litros por minuto (Millipore).
Entre los problemas que destacan, encontramos la prdida de viabilidad de las
clulas vegetativas debido a la desecacin durante el muestreo. En las muestras
obtenidas en los filtros de membrana se pueden estudiar los microorganismos por
microscopa o por cultivo, colocando los filtros en medios de cultivo slidos, para
determinar el nmero de colonias.

Impacto sobre superficies slidas

El motor funciona por medio de bateras y succiona un flujo de aire de 40 L
min.-1 (figura 5). Es un equipo pequeo y de fcil manejo, por lo que su uso se ha
popularizado especialmente en la evaluacin de la calidad microbiolgica de ambientes
hospitalarios. Sin embargo, no es un equipo recomendado para el muestreo de
ambientes ocupacionales ya que la superficie de las tiras de agar se saturan fcilmente.
Esta tcnica es la ms usada en la actualidad. El aire es succionado por el rotor
del muestreador, que al girar crea una fuerza centrfuga y ocasiona la impactacin de las
partculas sobre un medio de cultivo slido contenido en: placas de Petri de distinto
tamao, en tiras de plstico y en placas de contacto. Despus de la incubacin, se puede
realizar el recuento e identificacin de los microorganismos.
El proceso de impacto depende de las propiedades de inercia de la partcula
(tamao, densidad y velocidad) y de las propiedades fsicas del aparato tales como las
dimensiones de la boquilla y el recorrido del flujo de aire.
Se han diseado una gran variedad de aparatos que difieren por el nmero de
boquillas o impactores, y por el tamao, as como el nmero de pasos o etapas por las
que pasa el aire. Basados en estas tcnicas, actualmente existen en el mercado aparatos
fcilmente transportables que se alimentan con pilas para tomar muestras de campo,
como el muestreador centrfugo Reuter RCS Plus (Biotest), el Air Ideal (bioMrieux) o
los sistemas SAS y Microflow. El flujo de aire vara en los distintos aparatos, desde 10
hasta 700 litros por minuto.

Impactadores en lquido
El fundamento es similar al impacto sobre medios slidos y la fuerza de inercia es
esencial para separar los microorganismos contenidos en el aire y que se depositen en el
medio lquido. El flujo de aire puede ser de 12,5 20 litros por minuto. Este mtodo
tambin requiere una bomba de vaco.
Estos dispositivos, tambin llamados de trampa lquida, hacen pasar el aire mediante
un aspirador, a travs de lquidos (generalmente soluciones tampn diluidas) que
retienen los microorganismos. Este lquido puede sembrarse en placa para determinar el
nmero de microorganismos, examinarse microscpicamente

Una alternativa es el muestreador conocido como MSLI (multistage all glass liquid
impinger) y se presenta en tres tamaos que colectan 55, 20 y 10 L min-1 por medio de
una bomba de vaco. Las partculas suspendidas en la corriente de aire se separan en tres
fracciones, que corresponden por su tamao, a la depositacin en la regin
extratorcica, bronquial y alveolar del tracto respiratorio

Muestreo de superficies inertes y vivas:

Mtodo del Hisopo

Se utiliza para superficies inertes regulares e irregulares, tales como tabla de
picar, bandejas, mesas de trabajo, utensilios, cuchillas de equipos, cortadora de
embutidos, cortadora de pan de molde, fajas transportadoras, tolvas, mezcladoras, pisos,
paredes y otros.
Consiste en la frotacin del rea delimitada con un hisopo. Tras el hisopado se
introduce el mismo en una solucin diluyente a partir del cual se realizaran los ensayos
microbiolgicos. Los resultados se expresan como unidades formadoras de colonias por
centmetro cuadrado (UFC/cm2).

Mtodo de la Esponja
El mtodo de la esponja se utiliza preferentemente para muestrear superficies de
mayor rea. Consiste en frotar con una esponja estril, previamente humedecida en una
solucin diluyente, el rea determinada en el muestreo.

Mtodo del Enjuague

Se utiliza para superficies vivas (manos) y para objetos pequeos o para el
muestreo de superficies interiores de envases, botellas, bolsas de plstico, etc.

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Dependiendo de la muestra, el mtodo consiste en realizar un enjuague (botellas,

frascos, utensilios, similares) o inmersin (manos, objetos pequeos) en una solucin
diluyente.

Mtodo de la placa de contacto

Consiste en hacer contactar la superficie a analizar de forma directa con el medio
de cultivo, el cual posteriormente se incuba para realizar el recuento.

Desventaja de los mtodos

Las placas de contacto no son las ms adecuadas para control de superficies, ya
que solamente pueden aplicarse sobre reas llanas, lisas y con recuentos bacterianos
bajos ya que no pueden realizarse diluciones. Otra desventaja que presentan es que no
permite el estudio de biofilms adheridos a las superficies ya que para su determinacin
es necesario que se produzca la ruptura de su estructura.
Respecto a la tcnica de hisopado, la desventaja radica en que hay variaciones
individuales de hisopar las superficies. Es por ello que no suele ser reproducible, ya que
se observaron diferentes recuentos por rea de muestra. Otro inconveniente es que no se
recupera bien los microorganismos y biofilms, pudiendo quedarse adheridos al
capuchn y no ser transferidos al medio liquido. Esto puede evitarse humedeciendo
previamente el hisopo en la solucin salina antes de tomar la muestra y luego agitar
enrgicamente para transferir los microorganismos al medio liquido.

Procedimiento para la seleccin de la muestra

El procedimiento para seleccionar las muestras, debe estar en funcin de los riesgos
sanitarios relacionados a las diferentes etapas del procesamiento ya sea de fabricacin,
elaboracin, expendio, etc.

En fbricas de alimentos y bebidas

a) Superficies inertes
Se seleccionarn aquellas que estn o tendrn contacto directo con los alimentos que no
sern sometidos a un proceso trmico posterior u otro que disminuya la carga
microbiana.

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b) Superficies vivas
Se seleccionarn a los manipuladores de alimentos, con o sin guantes, que estn en
contacto directo con los alimentos que no sern sometidos a un proceso trmico
posterior u otro tratamiento que diminuya la carga microbiana.

En establecimientos de elaboracin y expendio

a) Superficies inertes
Se seleccionarn aquellas superficies que estn en contacto con los alimentos destinados
al consumo directo, como utensilios, vajilla, superficies de corte, menaje, equipos, entre
otros.

b) Superficies vivas
Se seleccionarn las manos de los manipuladores, con o sin guantes, que estn en
contacto con los alimentos destinados al consumo directo.

Enfermedades transmitidas por el aire.

Gran nmero de infecciones humanas y animales se trasmiten por el aire y
causan enfermedad, principalmente, en el aparato respiratorio. Las enfermedades
respiratorias tienen una gran importancia socio econmica ya que se trasmiten
fcilmente a travs de las actividades normales del hombre y son las ms frecuentes en
la comunidad. Las principales afecciones son la rinitis alrgica y el asma.

Se caracterizan por su tendencia a causar epidemias, siendo mas frecuentes

durante el otoo y el invierno, cuando las personas se renen en recintos cerrados. Los
microorganismos causales se trasmiten por las secreciones de la nariz y la garganta y
son diseminados por la tos, los estornudos y la conversacin pudiendo alcanzar una
velocidad de 300 km/h.

La concentracin de bioaerosoles en el exterior es mayor que la existente en los

interiores; sin embargo la posibilidad de infeccin para la poblacin general en los
ambientes externos es menor. La entrada de bioaerosoles a los ambientes representa un
peligro importante principalmente en los hospitales, en los que los pacientes con

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problemas inmunes pueden ser afectados tanto por los microorganismos patgenos
como por los oportunistas presentes en estos.

Hay numerosas enfermedades bacterianas trasmitidas por el aire que se resumen

en la tabla 1. Estn producidas, principalmente, por bacterias Gram positivas debido a
su mayor supervivencia en el aire. Afectan al tracto respiratorio superior (faringitis,
epiglotitis, difteria) e inferior (bronquitis, neumonas, tosferina, tuberculosis) o, desde
ste pasan a sangre y otros rganos (meningitis, carbunco pulmonar, fiebre Q, peste).

Enfermedades

Gneros y especies

Amigdalitis, faringitis, bronquitis, escarlatina

Difteria
Neumona clsica

Neumona atpica, bronquitis

Meningitis
Meningitis, epiglotitis, neumona
Tosferina
Tuberculosis
Legionelosis
Actinomicosis
Nocardiosis
Fiebre Q
Carbunco pulmonar
Peste

Streptococcus pyogenes
Corynebacterium diphtheriae
Streptococcus pneumoniae
Staphylococcus aureus
Klebsiella pneumoniae
Mycoplasma pneumoniae
Chlamydophila pneumoniae
Chlamydophila psittaci
Neisseria meningitidis
Haemophilus influenzae
Bordetella pertussis
Mycobacterium tuberculosis
Legionella pneumophila
Actinomyces israelii
Nocardia asteroides
Coxiella burnetii
Bacillus anthracis
Yersinia

Tabla 1: Enfermedades bacterianas transmitidas por el aire

Enfermedades
Resfriado comn
Gripe
Bronquitis, neumona

Sarampin
Parotiditis
Poliomielitis
Viruela
Varicela
Rubeola
Rabia
Gastroenteritis
Caliciviridae

Vrus
Familia
Picornaviridae
Adenoviridae
Orthomyxoviridae
Paramyxoviridae Adenoviridae
Bunyaviridae
Paramyxoviridae
Paramyxoviridae
Picornaviridae
Poxviridae
Herpesviridae
Togaviridae
Rhabdoviridae
Reoviridae
Virus

Gnero
Rhinovirus
Mastadenovirus
Influenzavirus
Pneumovirus
Mastadenovirus
Hantavirus
Morbillivirus
Rubulavirus
Enterovirus
Orthopoxvirus
Varicellovirus
Rubivirus
Lyssavirus
Rotavirus
Norwalk

Tabla 2: Enfermedades vricas transmitidas por el aire

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Los hongos ambientales se encuentran ampliamente distribuidos en la

naturaleza, creciendo habitualmente en el suelo, aire y a expensas de la vegetacin. Se
aslan en muestras de aire, sistemas de aire acondicionado, en superficies, alimentos,
plantas ornamentales, celulosa de muebles, papel de las paredes y polvo. Se puede
encontrar rutinariamente en el aire de hospitales y medio ambiente del interior de
edificios. Su concentracin aumenta durante la realizacin de obras.
Se han conseguido identificar a ms de 200.000 especies de hongos. Sin
embargo se conocen menos de 200 especies que produzcan infecciones humanas, siendo
en el 90% de las micosis atribuidas slo a una docena., de las cuales en el 80% son del
gnero Aspergillus.
Enfermedades
Neumonas
Micosis sistmicas

Hipersensibilidad

Micotoxicosis

Hongos
Pneumocystis carinii
Cryptococcus neoformans
Blastomyces dermatitidis
Histoplasma capsulatum
Coccidioides immitis
Aspergillus fumigatus
Serpula Penicillium
Cladosporium Mucor
Aspergillus Puccinia
Alternaria Botrytis
Stachybotrys
Aspergillus
Fusarium

Tabla 3: Enfermedades fngicas transmitidas por el aire

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