MANUAL DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA

CLINICA
REGIN: ORIZABA - CRDOBA
MEDICO CIRUJANO

DRA. MARIA DE JESUS HUERTA

CORTES
DR. RAUL MARISCAL REYES
DRA. MIRIAM DEL CARMEN
SANCHEZ FLORES

FORMACIN: BSICA

INDICE

Practica 1 Introduccin, Material, Reglamento De RPIB..................3

Practica 2 Determinacin Del Colesterol HDL................................12
Practica 3 Determinacin Del Colesterol LDL ...............................14
Practica 4 Determinacin De La Urea............................................16
Practica 5 Determinacin De La Creatinina...................................19
Practica 6 Determinacin Del Acido rico.....................................22
Practica 7 Separacin De Creatinina En Orina De 24 Hrs..............27
Practica 8 Formula Roja.................................................................31
Practica 9 Formula Blanca.............................................................32
Practica 10 Conteo De Plaquetas..................................................33
Practica 11 Tiempo De Sangrado..................................................34
Practica 12 Banco De Sangre........................................................37
Practica 13 Examen General De Orina Macroscpico....................41
Practica 14 Examen General De Orina Microscpico.....................43

PRCTICA # 1
REGLAMENTO INTERNO DE LABORATORIO Y EXPLICACION DE
RPBI
GENERALIDADES
El laboratorio tiene una ubicacin especifica dotada de espacios
fsicos como: rea de trabajo con medad provistas de instalaciones de
agua, gas, regadera, cuarto de preparacin de reactivos, almacn de
reactivos y materiales, cuarto de aparatos y equipos, lavabos,
pizarrones, bancos y gavetas.
Cuenta con personal de laboratorio especficamente capacitado
para el trabajo de estos.
Se trabaja con reactivos qumicos, equipo de reactivos de
determinacin cuantitativa para diagnstico, frmacos, medios,
reactivos de tincin, desinfectantes, antispticos.
El material biolgico de trabajo incluye: animales, cepas
microbiolgicas vivas, atenuadas y muertas, rganos, tejidos, fluidos
corporales (principalmente sangre, plasma, suero y orina), heces fecales,
exudados (principalmente de mucosas).
El alumno debe de contar con:
Bata blanca de manga larga
Guantes desechables
Cubrebocas
Estuche de diseccin
Manual o libro de texto
Atlas (Por ejemplo de Orina microscopio del sedimento urinariode microbiologa)
Libreta de apuntes
Lpices o plumines de colores
REGLAS BASICAS DE SEGURIDAD
Usar siempre la bata
Cargar la bata y los guantes en una bolsa, el cubrebocas y los
pauelos en otra
No introducir ni consumir alimentos
No fumar
Al finalizar, dejar limpia el rea de trabajo y comprobar que las
llaves y vlvulas de gas queden cerradas
Terminando el trabajo, lavarse minuciosamente las manos antes
de salir
MANEJO DE REACTIVOS

Los reactivos nicamente sern provistos por el(la) encargado(a)

del laboratorio
No debern ser manejados de manera directa sino usando siempre
guantes, lentes de seguridad y material especifico para su
manipulacin (pipetas, esptulas, perillas, pinzas, etc) y bajo la
estricta supervisin del profesor(a) o del encargado
Las sustancias toxicas o venenosas, causticas, irritantes o que
constituyan un riesgo o peligro (explosivas, inflamables,
corrosivas) nicamente podrn ser manejadas por el profesor(a) o
por el(la) encargado(a).
Cualquier reactivo derramado no deber tocarse directamente
para recogerlo. Llmese inmediatamente al profesor(a) y/o
encargado(a) del laboratorio para que se ocupe de ello.
Nunca se proceda a utilizar un reactivo si se desconocen su
identidad y manejo
Toda duda acerca del manejo y disposicin de un reactivo deber
ser aclarada por el profesor(a) antes de proceder a utilizarlo.

MANEJO DE ESPECIMENES
Vigilar antes de sacar los especmenes de los frascos, que el rea
este bien ventilada, abrir ventanas.
Portar cubrebocas.
Usar lentes de seguridad.
Usar guantes desechables.
Siempre manejar el espcimen dentro de una charola
Nota: Si accidentalmente cae formol en los ojos y/o boca, lavar
nicamente con abundante agua.
MANEJO DE PREPARACIONES O LAMINILLAS
Las preparaciones o laminillas requieren ser transportadas
preferentemente en charolas.
No deber haber grasa o crema en las manos para revisar el
microscopio.
Marcar con plumn el campo por sealar.
Nunca usar aceite de inmersin sin indicacin del acadmico
Si alguna preparacin o laminilla se rompe, avisar inmediatamente
al acadmico o encargado(a).

MANEJO Y DISPOSICION DE RESIDUOS BIOLOGICOS (DE ADUERDO

A LA NORMA OFICIAL PARA EL MANEJO DE RESIDUOS
PELIGROSOS BIOLOGICOS-INFECCIOSOS Y TOXICOS MANUAL DE
PROCEDIMIENTOS BI-UV-OP-01- )
EN TODOS LOS CASOS DEBERA USARSE: BATA, GUANTES, CUBREBOCAS,
Y SI ES NECESARIO, LENTES DE SEGURIDAD)
1. SANGRE: sangre caduca o contaminada, sangre coagulada, muestras
de sangre de anlisis, suero, plasma, paquete globular, depositar en
RECIPIENTE HERMETICO ROJO (lquidos).
2. SANGRE: bolsas de sangre de transfusin, tubos de ensaye,
algodones con sangre, se depositaran en BOLSA ROJA (slidos).
3. PATOLOGICOS: orinas, salivas, vomito, liquido amnitico, liquido
cefalorraqudeo, liquido espermal, depositar en RECIPIENTE
HERMETICO AMARILLO (lquidos)
4. PATOLOGICOS: rganos, partes del cuerpo, tejidos, heces fecales,
cadveres de animales pequeos (conejos, ratas, etc), partes
corporales y desechos de animales, depositar en BOLSA AMARILLA
(slidos).
5. CEPAS Y CULTIVOS: Cultivos, inoculos, mezcla de microorganismos
en medio de cultivo inoculados, caldos de cultivo con caja de Petri
desechable, depositar en BOLSA ROJA (slidos).
6. NO ANATOMICOS: Guantes, cubrebocas, cofias, gasas, torundas,
algodones, abatelenguas, hisopos, aplicadores, papel, vendas,
curitas, batas desechables, paales, toallas sanitarias, espejos
vaginales, dispositivo intrauterino, equipo de venoclisis sin aguja,
equipo de dilisis, aserrn de camas de bioterio, se deben depositar
en BOLSA ROJA (slidos).
7. PUNZOCORTANTES: Agujas hipodrmicas, ampolletas, jeringas (con
o sin aguja acoplada), lancetas, bistures, recipientes de vidrio rotos o
intactos tales como pipetas de Pasteur, pipetas graduadas,
vacutainers, tubos para sangre, placas de cultivos, cajas de Petri,
portaobjetos, cubreobjetos, etc. Depositar en RECIPIENTE ROJO.

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS BI UV OP 01 PARA EL MANEJO

DE RESIDUOS PEIGROSOS BIOLOGICO-INFECCIOSOS Y
TOXICOS
Separacin y Envasado de Residuos Biolgico Infecciosos
1. OBJETIVO: Separar y envasar los residuos biolgicos-infecciosos
que se generen en las diversas reas que se realicen prcticas de
docencia, investigacin y de centro de atencin medica.
2. REFERENCIAS
2.1 NOM-052-ECOL-1993. Que establece las caractersticas de
los residuos peligrosos, el listado de los mismos y los limites que
hacen peligrosos a un residuo por su toxicidad el medio ambiente.
2.2 NOM-087-ECOL-1995. Que establece que los requisitos de
separacin, envasado, almacenamiento, recoleccin, trasporte,
tratamiento y disposicin final de los residuos peligrosos
biolgicos-infecciosos que se generan en los establecimientos que
presentan atencin mdica.
2.3 NOM-001-ECOL-1996. Que establece los lmites mximos
permisibles de contaminantes en las descargas residuales en
aguas y bienes nacionales.
2.4 NOM-001-STPS-1994. Relativa a las condiciones de
seguridad e higiene en los edificios, locales, instalaciones, y reas
de los centros de trabajo.
2.5 NOM-004-STPS-1994. Relativa a las condiciones de
seguridad e higiene en los centros de trabajo donde se produzcan,
almacenen o manejen sustancias qumicas capaces de generar
contaminacin en el medio ambiente laboral.
2.6 NOM-017-STPS-1993. Relativa al equilibrio de proteccin
personal para los trabajadores.
3. POLITICAS
3.1 El personal que genere los residuos deber portar
obligatoriamente el equipo bsico de seguridad acorde a la
actividad que est desarrollando.
3.2 Los recipientes para envasar los diferentes tipos de residuos,
estarn colocados en lugares estratgicos dentro de las reas de
generacin.
3.3 De acuerdo al tipo y estado fsico del residuo se llevara a cabo
su envasado.
3.4 Los recipientes para almacenamiento temporal de Residuos
Biolgicos no son reciclables.
3.5 Los recipientes debern estar rotulados con el smbolo de
riesgo biolgico.

3.6 Se llevara a cabo una supervisin operativa por lo menos una

vez a la semana, para observar el cumplimiento de las
disposiciones oficiales e institucionales
4. DESARROLLO
Una vez generado el residuo lo identifica, lo separa y lo envasa de
acuerdo a la siguiente tabla
CLASIFICACI
ON

RPNE 1.2/01
SANGRE

RPNE 1.2/02
PATOLOGICOS

RPNE 1.2/03
CEPAS
Y
CULTIVOS

TIPO DE RECIPIENTE
PARA ENVASADO

RESIDUO

Sangre
caduca
o
contaminada,
sangre
Recipiente Hermtico
coagulada, muestras de
Rojo (lquidos)
sangre de anlisis, suero,
plasma, paquete globular.
Bolsas de sangre de
transfusin,
tubos
de
Bolsa Roja (slidos)
ensaye, algodones con
sangre.
Orinas, saliva, vomito,
Recipiente Hermtico liquido amnitico, liquido
Amarillo (liquido)
cefalorraqudeo,
liquido
espermal.
rganos,
partes
del
cuerpo,
tejidos,
heces
fecales,
cadveres
de
Bolsa
Amarilla
animales
pequeos
(slidos)
(conejos,
ratas,
etc.),
partes
corporales
y
desechos animales.
Cultivos, inoculos, mezcla
de microorganismos en
medios
de
cultivo
Bolsa Roja (slidos)
inoculados,
caldos
de
cultivo con caja Petri
desechable.

Guantes,
cubrebocas,
cofias, gasas, torundas,
algodones, abatelenguas,
isopos, aplicadores, papel,
vendas, curitas, batas
RPNE 1.2/04
desechables,
paales,
NO
Bolsa Roja (slidos)
toallas sanitarias, espejos
ANATOMICOS
vaginales,
dispositivo
intrauterino, equipo de
venoclisis
sin
aguja,
equipo de dilisis, aserrn
de camas de bioterio
Agujas
hipodrmicas,
ampolletas, jeringas (con
o sin aguja acoplada),
lancetas,
bistures,
recipientes de vidrio rotos
RPNE 1.2/05
o intactos, tales como
PUNZOCORTA Recipiente Rojo
pipetas
de
Pasteur,
NTES
pipetas
graduadas,
vacutainers, tubos para
sangre, placas de cultivos,
cajas Petri, portaobjetos,
cubreobjetos, etc.
Recoleccin Interna de Residuos Peligrosos
1. OBJETIVO: Recolectar los residuos peligrosos de las reas de
generacin y enviarlas al almacn temporal respectivo.
2. REFERENCIAS
2.1 Reglamento de la Ley General del Equilibrio Ecolgico y
la Proteccin al Ambiente en Materia de Residuos
Peligrosos
2.2 NOM-087-ECOL-1995. Que establece los requisitos para la
separacin,
envasado,
almacenamiento,
recoleccin,
transporte, tratamiento y disposicin final de los residuos
peligrosos biolgico-infecciosos que se generan en los
establecimientos que prestan atencin medica.
2.3 NOM-017-STPS-1993. Relativa al equipo de proteccin
personal para los trabajadores.
3. POLITICAS
3.1 El personal encargado de la recoleccin interna deber portar
obligatoriamente el equipo bsico de seguridad personal.
3.2 El personal encargado de la recoleccin deber realizar esta
por separado de la recoleccin de los residuos biolgicoinfecciosos de los residuos qumicos, radiactivos y
municipales.

3.3 La recoleccin de los residuos desde el rea de generacin

hasta el almacn temporal, se deber llevar a cabo bajo una
ruta de recoleccin establecida.
3.4 La recoleccin de los residuos deber llevarse a cabo en
horarios de bajo flujo de personas, para evitar al mximo
accidente.
3.5 La recoleccin interna se debe llevar a cabo con materiales y
equipo de seguridad de acuerdo al tipo de residuo.
3.6 Se llevara a cabo una supervisin operativa por lo menos una
vez a la semana, para observar el cumplimiento de las
disposiciones oficiales e institucionales.
4. DESARROLLO
4.1 La recoleccin interna de los Residuos Peligrosos BiolgicoInfecciosos se debe realizar de acuerdo a una ruta de
recoleccin acorde a las caractersticas de la edificacin de las
instalaciones de la institucin.
4.1.1 Se debern depositar los recipientes perfectamente
cerrados en el carrito recolector exclusivo de Residuos
Biolgico-Infecciosos.
4.1.2 El personal deber verificar en el momento de la
recoleccin que los residuos biolgico-infecciosos se
encuentren perfectamente envasados
4.1.3 Los recipientes para envasar residuos de punzocortantes,
los retirara solo cuando alcancen su capacidad al 90%
4.1.4 Los residuos envasados en las bolsas rojas, deben estar
perfectamente cerrados, antes de ser depositados en el
carrito recolector.
4.1.5 Los recipientes que contengan residuos en estado liquido
deben
estar
perfectamente
cerrados,
antes
de
depositarlos en el carrito recolector.
4.1.6 Concluida la recoleccin, se dirigir al almacn temporal,
para su respectivo almacenamiento de los residuos.
4.1.7 Los carritos manuales no deben rebasar su capacidad de
carga durante su uso.
4.1.8 Una vez depositados los residuos en el almacn, se debe
lavar y desinfectar el carrito recolector.
4.2 La recoleccin de reactivos qumicos debe hacerse con
cuidado para evitar algn derrame, debern estar envasados
en recipientes de acuerdo a su estado fsico y a sus
caractersticas fsico-qumicas y debidamente etiquetados de
acuerdo a sus caractersticas CRETI: corrosivo, reactivo,
explosivo, toxico y su smbolo universal, como requisito, para
poder ser retirados del rea de generacin.
Almacenamiento temporal de Residuos Peligrosos

10

1. OBJETIVO: Almacenar temporalmente los residuos que han sido

recolectados, en un rea especfica asignada dentro de la
institucin, cuidando que cumplan con las normas de seguridad e
higiene.
2. REFERENCIAS
2.1 Reglamento de la Ley General del Equilibrio Ecolgico y
la Proteccin al Ambiente en Materia de Residuos
Peligrosos.
2.2 NOM-087-ECOL-1995. Que establece los requisitos para la
separacin, envasado, almacenamiento, recoleccin, transporte,
tratamiento y disposicin final de los residuos peligrosos biolgicoinfecciosos que se generan en los establecimientos que prestan
atencin medica.
2.3 NOM-001-STPS-1999. Relativa a las condiciones de
seguridad e higiene en los edificios, locales, instalaciones y reas
de los centros de trabajo.
2.4 NOM-002-STPS-1994. Relativa a las condiciones de
seguridad para la prevencin y proteccin contra incendios en los
centro de trabajo
2.5 NOM-004-STPS-1993. Relativa a los sistemas de proteccin
y dispositivos de seguridad en la maquinaria, equipos y accesorios
en los centros de trabajo.
2.6 NOM-005-STPS-1998. Relativa a las condiciones de
seguridad en los centros de trabajos para el mantenimiento,
transporte y manejo de sustancias inflamables y combustibles.
2.7 NOM-009-STPS-1999. Relativa a las condiciones de
seguridad e higiene para el almacenamiento, transporte y manejo
de sustancias corrosivas, irritantes y toxicas en los centros de
trabajo.
2.8 NOM-010-STPS-1994. Relativa a las condiciones de
seguridad e higiene en los centro de trabajo donde se produzcan,
almacenen o manejen sustancias qumicas capaces de generar
contaminacin en el medio ambiente.
2.9 NOM-017-STPS-1993. Relativa la equipo de proteccin
personal para los trabajadores.
2.10 NOM-026-STPS-1994. Seguridad Colores y su aplicacin.
2.11 NOM-026-STPS-1997. Colores y seales de seguridad e
higiene, e identificacin de riesgos por fluidos conducidos por
tuberas.
2.12 NOM-114-STPS-1994. Sistemas para la identificacin y
comunicacin de riesgos por sustancias qumicas en los centros de
trabajo.
3.
POLITICAS
3.1 El personal que maneje los residuos en el almacen temporal
deber portar obligatoriamente el equipo bsico de seguridad
personal.

11

3.2 Los residuos biolgico-infecciosos no podrn almacenarse con

otro tipo de residuos peligrosos
3.3 El almacn temporal debe contar con sealizacin y acceso
restringido
3.4 El personal responsable del almacenamiento debe tener la
capacitacin adecuada para esa actividad.
3.5 El almacn temporal debe cumplir con los requerimientos de
construccin de acuerdo a las normas oficiales mexicanas
vigentes.
3.6 Se llevara a cabo una supervisin operativa por lo menos una
vez a la semana, para observar el cumplimiento de las
disposiciones oficiales e institucionales.
4. DESARROLLO
4.1 Los residuos biolgico-infecciosos debern cuantificarse y
anotar los datos en las bitcoras correspondientes, previo a su
almacenamiento temporal.
4.1.1 Los residuos los debern depositar en los
contenedores con el smbolo universal de riesgo biolgico
correspondientes, ubicados en el almacn de la siguiente
manera:
Bolsas rojas: contenedores rojos.
Bolsas amarillas y recipientes hermticos amarillos: en
refrigeracin (4C)
Recipientes de punzocortantes: en los anaqueles del
almacn.
4.2 Los residuos de tipo qumico antes de enviarlos a su
almacenamiento se debern tomar en cuenta su estado fsico, sus
caractersticas fisicoqumicas y de compatibilidad.
4.3 Los residuos del rea de Rayos X, deber colocarlos en los
estantes de forma segura y en la que observe la etiqueta de
recipiente que contiene el residuo.
4.3.1Las placas de Rayos X deben mantenerse fuera de
toda posible humedad
4.4 Terminado de estibar los recipientes, cerrar de forma segura
el almacn temporal.
Seguridad en Laboratorios y Centros de Trabajo
1. OBJETIVO: Proveer de un ambiente seguro de trabajo en los
laboratorios de la Universidad Veracruzana.
2. REFERENCIA
Reglamento Federal de Seguridad, Higiene y Medio Ambiente de
Trabajo.
3. DEFINICIONES
3.1 Actividades peligrosas. Es el conjunto de tareas derivadas de
los procesos de trabajo, que generan condiciones inseguras y

12

sobreexposicin a los agentes fsicos, qumicos o biolgicos

capaces de provocar daos a la salud de los trabajadores o al
centro de trabajo.
3.2 Contaminantes del medio de trabajo. Son los agentes fsicos,
qumicos y biolgicos capaces de modificar las condiciones del
medio ambiente de trabajo, que por sus propiedades,
concentracin, nivel y tiempo de exposicin o accin pueden
alterar la salud de los trabajadores.
3.3 Material. Es todo elemento, compuesto o mezcla, ya sea de
materia prima, producto, subproducto, residuo o desecho que se
utiliza o genera en las operaciones y procesos en los centro de
trabajo.
3.4 Materiales y sustancias qumicas peligrosas. Son aquellos que
por sus propiedades fsicas y qumicas al ser manejados,
transportados, almacenados o procesados, presentan la
posibilidad de inflamabilidad, explosividad, toxicidad, reactividad,
radiactividad, corrosividad o reaccin biolgica daina, y pueden
afectar a la salud de las personas expuestas o causar daos
materiales a instalaciones o equipos.
3.5 Microorganismo patgeno. Organismo viviente microscpico,
causante de enfermedades.
4. DESARROLLO
4.1 Identificar el tipo de riesgos a los que se exponen los
profesores, estudiantes, trabajadores y visitantes que ingresan a
cada uno de los laboratorios y centros de trabajo.
4.2 Utilizar el equipo de proteccin personal indicado por el
responsable del laboratorio o centro de trabajo.
4.3 El profesor, jefe de rea y jefe de departamento son los
responsables de realizar la primera demostracin de cmo se debe
usar el equipo de proteccin personal, as como de efectuar
demostraciones peridicas.
4.4 Dependiendo del grado de riesgo de cada rea o centro de
trabajo, algunos equipos de proteccin personal debern ser
manejados como residuos peligrosos despus de su uso.
4.5 Los profesores, estudiantes, trabajadores y visitantes que
entran en contacto con materiales potencialmente infecciosos,
deben de lavarse las manos tan pronto como sea posible. El
lavado debe de hacerse vigorosamente por al menos diez
segundos utilizando un detergente suave. Las manos deben de
lavarse tan pronto como sea posible despus de haberse quitado
los guantes y antes de salir del laboratorio o centro de trabajo.
4.6 Queda prohibido comer, beber, fumar, aplicarse cosmticos y
manipular lentes de contacto en el laboratorio o centro de trabajo.
4.7 Queda prohibido almacenar alimentos y bebidas en los
refrigeradores donde se guarde material de laboratorio.

13

4.8 Mantener ordenados los bancos de trabajo y limpiarlos con un

desinfectante al menos una vez por da e inmediatamente despus
de un derrame de material potencialmente peligroso.
4.9 queda prohibido pipetear directamente con la boca.
4.10 Queda prohibido dejar que el contenido de la pipeta caiga
desde la altura hasta el contenedor. Esta operacin debe hacerse
dejando resbalar por la pared contenedor.
4.11 El uso de agujas y otros materiales punzocortantes debe
eliminarse tanto como sea posible.
4.12 Los materiales empleados en las prcticas deben de
desinfectarse tan pronto como sea posible.
4.13 Los derrames de sangre y fluido corporales deben de
limpiarse inmediatamente con toallas absorbentes desechables,
lavarse con detergente y agua, y desinfectarse con blanqueadores
casero diluido a 1:10 si la superficie es porosa y 1:100 si la
superficie es dura.

BIBLIOGRAFIA
Manual de procedimientos
peligrosos biolgicoinfecciosos y txicos

para

el

manejo

de

residuos

14

PRACTICA # 2
COLESTEROL DE ALTA DENSIDAD
(COLESTEROL HDL)
Objetivo:
Determinar la aplicacin clnica de la prueba.
Conocer la preparacin de un paciente candidato a dicha prueba.
Interpretar correctamente los resultados.
Fundamento:
La lipoprotena de alta densidad es el colesterol acarreado por las
lipoprotenas alfa. Una concentracin alta de HDL alfa-1 es una
indicacin de un sistema metablico sano en una persona libre de
enfermedad del hgado o intoxicacin de cualquier tipo. Se considera
que las lipoprotenas de alta densidad sirven como transportadoras que
liberan el colesterol de los tejidos perifricos y los llevan de nuevo al
hgado para su catabolia y excrecin. Las HDL probablemente inhiban
tambin la captacin celular en las lipoprotenas de baja densidad. Estos
dos mecanismos ayudan a explicar cmo es que las lipoprotenas de alta
densidad producen una proteccin con relacin al riesgo de una
coronariopata.
Tcnica:
Precipitacin
1.-Pipetear en un tubo de ensaye:
Reactivo B

0.2 mL
0.5 mL

2.-Agitar y dejar durante 10 minutos a temperatura ambiente

3.-Centrifugar durante 10 minutos a un mnimo de 4,000 RPM
4.-Recoger con cuidado el sobrenadante
Reaccin colorimtrica
5.-Dejar atemperar el reactivo A durante unos minutos a temperatura
ambiente.
6.-Pipetear en tubos de ensaye:
Blanco
Patrn
Muestra
Agua destilada
50 uL
----Patrn
--50 uL
--Sobrenadante
----50 uL
Reactivo A
1.0 mL
1.0 mL
1.0 mL
7.-Agitar bien e incubar los tubos durante 30 minutos a temperatura
ambiente o durante 10 minutos a 37C
8.-Leer la absorbancia (A) del patrn y de la muestra frente al blanco a
500 nm.

15

Clculos :
A muestra/ A patrn x 140 = mg/dL Colesterol HDL
Valores normales :
Hombres : 30 60 mg/dL
Mujeres : 40 70 mg/dL
Actividades a realizar:
1.- Cul es su resultado?
__________________________________________________________________

2.- Qu interpretacin clnica tiene ese resultado?

__________________________________________________________________

3.- Con qu se relacionan los valores incrementado, particularmente

superiores a 100 mg/dl?
__________________________________________________________________

4.- Con qu se relacionan los valores disminuidos, particularmente

entre 20-30 mg/dl?
__________________________________________________________________

5.- En qu otras patologas pueden encontrarse niveles altos o bajos?

__________________________________________________________________

6.- Qu factores intervienen en la disminucin y aumento de las HDL?

__________________________________________________________________

Bibliografa consultada:
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________

16

PRACTICA NO 3
COLESTEROL DE BAJA DENSIDAD
(COLESTEROL LDL)
Objetivo:
Determinar la aplicacin clnica de la prueba.
Conocer la preparacin de un paciente candidato a dicha prueba.
Interpretar correctamente los resultados.
Fundamento:
Las lipoprotenas de baja densidad (LDL) son sintetizadas en el
hgado. Se ha demostrado que la mayor parte del colesterol almacenado
en las placas aterosclerticas se originan del LDL, Por sta razn la
concentracin de LDL-Colesterol es considerada la determinacin ms
importante dentro de los parmetros relacionados a aterosclerosis
coronaria.
Las lipoprotenas de baja densidad y las poco frecuentes
aterognicas precipitan cuantitativamente. Se da una ligera
coprecipitacin de VLDL, pero dado que su contenido de colesterol es
bajo, los valores de colesterol LDL no aumentan significativamente y no
afecta a la estimacin de riesgo cardiovascular.
Procedimiento:
El patrn no debe usarse en el paso de precipitacin.
1.- Precipitacin:
Pipetear en tubos para centrfuga:
Muestra.................................... 100 L
Reactivo de precipitacin...... 1 000 L

Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente.

Centrifugar 15 minutos de 4 000 r.p.m.
Separar el sobrenadante y realizar la determinacin de colesterol
antes de que transcurra 1 hora.

2.- Medida de Colesterol por el mtodo CHOD-PAP

Pipetear en tubos de reacin:
Reactivo
Blanco
Patrn
Agua destilada
--50 L
Patrn
--50 L
Sobrenadante
----React.
De
1 000 L
1 000 L
Colesterol

Muestra
----50 L
1 000 L

Mezclar en incubar 10 minutos entre 15-25C o 5 minutos a 37C.

17

Medir la absorbancia de la muestra a 546 nm contra el blanco de

reactivos.

Clculos:
Concentracin de LDL-Colesterol
mg/dl = Absorbancia de la muestra x 550
Absorbancia del patrn
Interpretacin clnica:
No tratamiento requerido
< de 150
mg/dl
Rango sospecha
150-190
mg/dl
Tratamiento requerido
> de 190
mg/dl
Actividades a realizar:
1.- Anote sus resultados:
__________________________________________________________________

2.- Cul es la interpretacin clnica?

__________________________________________________________________

3.- En qu condiciones debe presentarse un paciente para realizarse

cualquier prueba relacionada con el perfil de lpidos? y por qu?
__________________________________________________________________

4.- Cumpli su paciente con dichas condiciones?

__________________________________________________________________

Bibliografa consultada:
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________

18

PRACTICA NO 4
DETERMINACIN DE UREA
OBJETIVO:

Observar que la concentracin de la urea presente en la muestra es

proporcional a la intensidad del color formado.
Correlacionar los resultados con los hallazgos clnicos.

MARCO TEORICO:
La urea es uno de los constituyentes nitrogenados no proteicos
(NNP) ms abundante en el cuerpo. Los dems son la creatinina , el
cido rico , el amonio y los aminocidos.
La urea se produce a travs de un proceso de degradacin
protenica: la protena se transforma a partir de aminocidos en
amonaco ( desaminacin oxidativa) como un producto final y de ah en
urea ( ciclo de la ornitina) dentro del hgado. Debido a que el organismo
no utiliza urea, es transportada en la sangre hasta que se excreta por va
urinaria. Sus concentraciones varan fisiolgicamente, dependiendo de
manera directa del consumo de protenas en la dieta ( exgeno) y del
estado de hidratacin ( proporcin de soluto a solvente en el cuerpo), o
de modo indirecto por la tasa del catabolismo tisular ( rpida
degradacin corporal, que incrementa el desperdicio de nitrgeno), o por
la tasa de anabolismo tisular ( disminucin de las concentraciones por
un mayor ndice de construccin tisular, como sucede durante la
gestacin o convalescencia) (Guyton, 1982).
La urea se excreta en el filtrado glomerular y se resorbe
( probablemente por difusin) en el tbulo de la nefrona. Slo se excreta
una fraccin de todo el material de desperdicio contenido en el filtrado
glomerular, pero a causa de que la urea se resorbe en los tbulos de
manera deficiente, se resorbe poca urea; esto es un efecto benfico.
Los sntomas comunes a todos los padecimientos del ciclo de la
urea incluyen: vmito en la lactancia, rechazo de alimentos con
contenido elevado de protenas. Ataxia intermitente, irritabilidad, letargo
y retraso mental.
MATERIAL:

3 tubos de ensayo
1 pipeta de 5 ml.
1 micropipeta de 0.02 ml.

19

2 vasos de precipitado
Espectrofotmetro
Centrfuga
Una parrilla
Reactivos de la prctica

PROCEDIMIENTO:
1.- Marcar 3 tubos de ensaye: B (blanco), M (muestra) y P (patrn) y
proceder como sigue:
Reactivo de color
Suero o plasma
Agua destilada
Patrn
Reactivo cid0

BLANCO
2.5 ml.
----0.02 ml.
----2.5 ml.

MUESTRA
2.5 ml.
0.02 ml
--------2.5 ml.

PATRON
2.5 ml.
--------0.02 ml.
2.5 ml.

2.- Mezclar bien y colocar en bao de agua en ebullicin durante 1

minutos. Transferir a un bao de agua fra durante 3 minutos.
3.- Determinar las absorbancias de la muestra y del patrn a 520 nm,
ajustando a cero con el blanco. La coloracin es estable 60 minutos.
CALCULOS:
UREA = Absorbancia de la
muestra ( 80)
Absorbancia del patrn
Valores de referencia:
15-40 mg/ 100ml.
2.5 a 6.6 mmol/ l
ACTIVIDADES:
1. Las concentraciones sricas de urea disminuyen en:
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________
2. En que consiste la azotemia?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________

20

3. Cundo estn elevadas las concentraciones de urea?

______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
_________________________________________________
Caso clnico:
Hiperamomemia hereditaria
Un nio de seis meses comenz con vmitos ocasionales y dej de ganar
peso. A los 8 meses y medio fue reingresado en el hospital. Las pruebas
re rutina y los exmenes de laboratorio fueron normales, pero despus
de una semana, estaba adormecido, su temperatura ascendi hasta 39.4
C, su pulso estaba elevado y su hgado haba aumentado de tamao. El
electroencefalograma era claramente patolgico. Como el lactante no
poda retener la leche que le era suministrada, se le administr glucosa
por va intravenosa. Mejor rpidamente, saliendo del coma al cabo de
24 horas. Los anlisis de orina mostraron concentraciones
anormalmente altas de glutamina y uracilo, lo que sugiri la presencia
de una elevada concentracin de amonaco en sangre, posteriormente
confirmada por el laboratorio.
1. La hiperamonemia hereditaria puede originarse por defectos en
genes para enzimas del ciclo de la urea?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________
2. Que enzimas podran estar afectadas?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________
3. Por qu estaba elevada la concentracin urinaria de glutamina?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________
4. Cul sera el tratamiento actual de un paciente similar?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________
BIBLIOGRAFA:

21

Montgomery R. Bioqumica: Casos y texto. Quinta edicin. Editorial

Mosby Year Book
Wolfe publishing.
Kathleen Morrison Treseler. Laboratorio clnico y pruebas de diagnstico.
Editorial Manual Moderno

22

PRACTICA NO 5
DEPURACION DE CREATININA
Los mtodos utilizados para determinar la creatinina se basan
fundamentalmente en la reaccin de Jaff descrita en el ao 1886. En
este mtodo, la creatinina reacciona con una solucin alcalina de
picrato sdico para formar un complejo coloreado anaranjado (lectura a
520 nm), ms intenso cuanto mayor cantidad de creatinina se encuentra
en el espcimen.
Esta tcnica se realiza tanto a punto final como en periodos
iniciales ms cortos (cintica), en los que se eliminan algunas de las
interferencias ms corrientes. Estos
mtodos han logrado amplia
aceptacin a nivel prctico. Otras tcnicas que se han utilizado, pero que
en la actualidad estn ms en desuso son la cromatografa de lquidos
de alta resolucin (HPLC por sus siglas en ingls) y los mtodos qumicos
que utilizan 3,5 dinitrobenzico (DNBA).
Mtodo: Picrato Alcalino sin Desproteizacin, a tiempo fijo.
Fundamento:
La creatinina en solucin alcalina reacciona con el picrato
para formar un compuesto rojo anaranjado (reaccin de Jaff), color que
es medido por la lectura de dos puntos.
Reactivos: Equipo SERA-PAK Creatinina.
1 Picrato.
2 Hidrxido sdico
Patrn: Creatinina 2 mg/dl (176.8 mmol /L).
Preparacin de la Solucin de Trabajo:
Mezclar un volumen del reactivo 1 con un volumen del reactivo 2.
Componentes y concentraciones:
Picrato sdico:
22 mmol/L
Hidrxido sdico:
0.125 N
Almacenamiento y estabilidad. Los reactivos 1 y 2 son estables a
temperatura ambiente (15C 25C) hasta la fecha de caducidad que
viene indicada en la etiqueta. Una vez abierto el frasco, los reactivos
pueden
utilizarse durante 6 meses mantenidos en los envases
originales bien cerrados.
En la etiqueta est indicada la fecha de caducidad del patrn guardado a
2C8C. La solucin de trabajo es estable durante 8 semanas a 2C8C
y durante 2 semanas a 15C25C.

23

Procedimiento:
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Lectura:

510 nm (490 nm 520 nm)

1 cm de paso de luz
30 C
Contra aire

La solucin de trabajo se debe atemperar hasta temperatura ambiente

antes de ser utilizada.
1- Medir en sendos tubos de ensaye:
PATRN
Solucin de trabajo
2.0 ml
Atemperar hasta 30C. Aadir
Muestra(suero)
Patrn
0.20 ml

MUESTRA
2.0 ml
0.20 ml
-

2- Conectar inmediatamente el cronmetro y mezclar. Leer las

absorbencias (A1) del patrn y de la muestra contra aire a los 20
segundos. Repetir las lecturas (A2) exactamente 60 segundos despus
de la primer lectura.
Resultados:
Suero/ Plasma
2.0 = mg/dl de creatinina
A muestra
A patrn

X
176.8 = creatinina mmol /L

Orina
A muestra.
A patrn.

1.0 mg/dl.( x dil.de 50)

X

Valores de Referencia:
Hombres:

0.7 mg/dl 1.2 mg/dl

61 mol/L 106 mol/L

Mujeres:

0.5 mg/dl 1.0 mg/dl

44 mol/L 88 mol/L

Suero

24

Hombres:
Orina
Mujeres:

21 mg/kg de peso/24h
26 mg/kg de peso/24h
16 mg/kg de peso/24h
22 mg/kg de peso/24h

Notas:
El mtodo es lineal hasta 20 mg/dl de creatinina, para
concentracin mayores, mezclar 1 volumen de la muestra con 1
volumen igual de
solucin salina fisiolgica. Repetir el anlisis y
multiplicar el resultado por 2.
Control de Calidad.
Sueros Control SERA- CHEK, Normal y Anormal.
Bibliografa
1.- Woo j. Donald Cannon, 19812. Diagnsticos y tratamientos Clnico
por el laboratorio. Edit Masson- Sal vat 9 Edic.
2.- SERA- PAK, 1998 Creatinina Mtodo al Picrato Alcalino. Bayer
Corporatin.

25

PRACTICA NO 6
DETERMINACIN DE ACIDO URICO.
OBJETIVOS:

Determinar la concentracin srica de cido rico.

Interpretar los resultados obtenidos.
Conocer
las
causas
y
consecuencias
fisiolgicas
sobreproduccin de cido rico.

de

la

FUNDAMENTO:
El cido rico de la muestra , previa desproteinizacin con cido
tngstico, reacciona en medio alcalino de carbonato de sodio con el
reactivo de fosfo-litio-tngstico dando una coloracin azul ( azul de
tungsteno ) que es proporcional a la concentracin de cido rico de la
muestra.
Mtodo empleado: W Wiener lab. ( mtodo colorimtrico para la
determinacin cuantitativa de cido rico en suero u orina.)
INTRODUCCIN:
El cido rico es un metabolito de las purinas, cidos nucleicos y
nucleoprotenas.
Habitualmente la concentracin de cido rico en suero vara de un
individuo a otro de acuerdo a diversos factores tales como sexo, dieta ,
origen tnico, constitucin gentica, embarazo. Niveles anormales de
cido rico en suero son ndices de desorden en el metabolismo de las
sustancias que lo originan o de defectos en su eliminacin.
Las purinas que se ingieren como protenas complejas son
degradadas en el intestino y absorbida a la sangre que las transporta al
hgado donde se catabolizan al producto de desecho cido rico. Una
vez formado, el cido rico no se degrada ms sino que va a formar
parte del depsito de cido rico del cuerpo. Alrededor de 50 75 %
de ste depsito es excretado todos los das. El cido rico es filtrado en
su totalidad y excretado en el glomrulo, y luego resorbido
completamente en el tbulo proximal. Luego, el filtrado se secreta de
modo activo en el tbulo distal,, que es responsable del total de urato
urinario. Las concentraciones sanguneas y urinarias varan con la
ingestin de purinas, protenas y energticos . Una segunda va de
excrecin es por la luz intestinal. Se piensa que hasta una tercera parte

26

de la cantidad de cido rico que sale cada da del cuerpo lo hace por
esta ltima va.
La medicin de cido rico en el suero es muy til para el
diagnstico de la gota, que es un sndrome provocado por la
acumulacin de cristales de cido rico en las articulaciones y en el
rin.
MATERIAL

5 tubos de ensaye
Una gradilla
Pipetas de 1, 5 ml.
Suero
Reactivos segn la tcnica de Wiener lab.
Centrfuga
Espectrofotmetro
Una micropipeta
Bao de agua a 22-28 C
Reloj

METODO
1.- Tcnica para suero.
Debe efectuarse la desproteinizacin de la siguiente manera: En un tubo
de centrfuga colocar 4 ml. de agua destilada, 0.5 ml. de cido tungstico
y 0.5 ml. de suero. Agitar vigorosamente, esperar 5 minutos y
centrifugar.
1. En tres tubos de ensaye marcados con B (blanco) S (standard) y D
(desconocido) colocar:
B
D
Desproteinizado
2.5 ml.
Agua destilada
Standard
Reactivo 1
0.5 ml.
Reactivo 2
0.5 ml.

2.5 ml.
-

S
5 ml.
50 l

0.5 ml.

1 ml.

0.5 ml.

1 ml.

27

2. Mezclar por inversin y colocar en bao de agua entre 22 y 28 C

entre 30 y 45 minutos despus, leer en espectrofotmetro a 660
nm, llevando el aparato a cero con el blanco.
CALCULOS:
cido rico ( mg/ l) = D x f

f = 100 mg/l
S

Valores de Referencia:
Hombres: 35 a 70 mg/l
Mujeres: 25 a 60 mg/l

ACTIVIDADES:
1. Qu es la gota?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________
2. Cul es la diferencia entre gota primaria y secundaria?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________
3. Las concentraciones sricas de cido rico disminuyen en :
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________
4. Que alteraciones metablicas pueden traer como consecuencia
un aumento en los niveles sricos de cido rico?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________
5. Son necesarias las purinas y pirimidinas en la dieta?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________

28

6.

Mencione los principales medicamentos utilizados para el

tratamiento de la gota.
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________
Caso clnico. Gota
Un hombre de 53 aos relata que su padecimiento actual se inici con
una inflamacin aguda del ortejo mayor del pie derecho e intenso dolor,
el cual se intensificaba con el fro y el movimiento: Adems, asegura que
poco antes de presentar este episodio agudo incremebt el consumo de
carne, vsceras, leguminosas y vino de mesa en abundancia.
Fue tratado con fenilbutazona, pero present dao gstrico, por lo que
se cambi el medicamento por alopurinol y naproxn.
1. Qu alteraciones metablicas pueden traer como consecuencia
un aumento en los niveles sricos de cido rico?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________
2. Son necesarias las purinas y pirimidinas en la dieta?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________
3. Son importantes los antecedentes familiares de este paciente?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________
4. Qu rgimen diettico le recomendara a esta persona para
mejorar sus niveles de cido rico?
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________
5. Cmo se relaciona la ingestin de etanol con el incremento de la
concentracin plasmtica de cido rico?

29

______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
______________________________________________________________________
__________________________________________

BIBLIOGRAFA:
Kathleen Morrison Treseler. Laboratorio Clnico y pruebas de diagnstico.
Editorial Manual Moderno.
Ana Mara Lpez Colome. Bioqumica y Biologa Molecular. Facultad de
Medicina UNAM. Editorial Mc. Graw Hill Interamericana.
Montgomery R. Bioqumica: Casos y texto. Quinta edicin. Editorial
Mosby Year Book

30

PRACTICA NO 7
DETERMINACION DE DEPURACION DE CREATININA EN ORINA DE
24 HRS
INDICACIONES PARA LA CORRECTA RECOLECCIN DE LA ORINA
DURANTE UN PERIODO DE 24 HORAS:

El perodo de recoleccin es de 24 horas, esto quiere decir un da

completo.
Se debe conseguir un recipiente (botella, garrafa, etc)
preferentemente de plstico de dos o ms litros, debidamente
limpio.
El da que empieza la recoleccin de orina se le llama da inicial y el
siguiente, que es cuando llevar la orina al laboratorio, se llama da
final.
A las 6 de la maana del da inicial debe orinar y desechar la orina
para dejar su vejiga vaca. Esta es la hora cero, a partir de este
momento, toda la orina que se forme debe guardarse.
Todas las veces, orine en un cmodo, si lo tiene, o en cualquier otro
utensilio que le pueda servir para esto, y deposite la orina en la
botella o garrafa.
Procure NO DESPERDICIAR, no derramar y no tirar la orina.
Cualquier cantidad que no se colecte, por pequea que sta sea,
afectar el resultado del estudio.
La orina recolectada debe guardarse en refrigeracin.
El da final o sea, el da que llevar su orina al laboratorio, debe
orinar por ltima vez a las 6 de la maana y esta orina debe
colectarse con el resto que tiene en refrigeracin. Aqu se cumplen
24 horas y se termina el procedimiento de recoleccin.
El ltimo paso es presentarse en el laboratorio con TODA la orina
recolectada.

Fundamento:
Es el mismo que para creatinina en suero.
Reactivos:
Se utiliza el mismo equipo que para creatinina en suero.
Muestra biolgica:
Orina: diluida 1: 50 con agua destilada.
Procedimiento.
Longitud de onda:
Cubeta:
Temperatura:
Lectura:

510 nm (490 nm 520 nm)

1 cm de paso de luz
30C
Contra aire

31

La solucin de trabajo se debe atemperar hasta temperatura ambiente

antes de ser utilizadas.

1.- Medir en sendos tubos de ensaye:

32

Solucin de trabajo

PATRN

MUESTRA

2.0 ml

2.0 ml

Atemperar hasta 30C. Aadir

Muestra (orina dil.)

0.20 ml

Patrn
0.20 ml
Conectar inmediatamente el cronmetro y mezclar. Leer las
absorbencias (A1) del patrn y de la muestra contra aire a los 20
segundos. Repetir las lecturas (A2) exactamente 60 segundos despus
de la primer lectura.
Resultados:
Orina.
A muestra.
A patrn.

1.0 mg/dl.( x dil.de 50)

X

Clculos para obtener la depuracin de creatinina en orina de 24 horas:

(ml/min en 24 horas)
Volumen minutado (ml/min) x creatinina en orina (mg/dl)
Creatinina srica (mg/dl)
Ejemplo: Volumen de orina recolectada: 1800 ml.
Volumen de orina minutada:1800 entre 1440 min (24 h)
R = 1.25 ml/min
Creatinina en suero: 3.8 mg/dl
Creatinina en orina: 12.5 mg/dl (X dilucin de 50)
R = 625 mg/dl
Dep. Creatinina en 24 h. = 1.25 ml/min X 625 mg/dl
3.8 mg/dl
= 205 ml/min
Reporte de la prueba.Volumen =
Volumen minutado=
Creatinina en orina=
Creatinina srica =
Depuracin=
Valores de Referencia.

mililitros.
ml/min
mg/dl.
mg/dl.
ml/min. en 24 horas.

33

Edad (aos)
1 20
15 30
30 40
40 50
50 60
60 70
70 80
80 90
90 99

40
50
20
45
40
25
35
18
15

Hombres
95 ml/min
156 ml/min
175 ml/min
132 ml/min
123 ml/min
116 ml/min
95 ml/min
76 ml/min
50 ml/min

43
74
53
29
25
35
30
19
24

Mujeres
97
ml/min
133 ml/min
153 ml/min
133 ml/min
122 ml/min
93
ml/min
75
ml/min
75
ml/min
55
ml/min

Importancia de los Resultados:

Las cifras bajas de depuracin pueden ser consecuencia de
disminucin del flujo sanguneo por riones (junto con choque u
obstruccin de arteria renal), necrosis tubular aguda, glomrulo nefritis
aguda o crnica, pielonefritis bilateral avanzada y crnica y, lesiones
avanzadas en ambos riones como en el caso de enfermedad
poliqustica, tuberculosis y cncer o nefroesclerosis. La insuficiencia
congestiva cardiaca y la deshidratacin intensa pueden hacer tambin
que la depuracin de creatinina disminuya a cifras menores de lo
normal.
Los ndices elevados de depuracin de creatinina por lo regular
tienen poca importancia diagnstica.
Factores que interfieren en los resultados:
Los frmacos que pueden afectar la depuracin de creatinina
incluyen anfotericina B, clorotiacidas, furosemida y gentamicina.
La ingestin de fenacetina por largo tiempo puede hacer que
disminuya la depuracin de creatinina.
La ingestin de una dieta rica en protenas antes del estudio y el
ejercicio fsico agotador durante el perodo de reunin, pueden
incrementar la excrecin de creatinina.
El incumplimiento de las restricciones anteriores a la prueba, el
hecho de no reunir toda la orina durante el periodo especificado o
no almacenar la muestra adecuadamente, pueden interferir en la
cuantificacin precisa de los resultados.
ACTIVIDADES POR REALIZAR:

34

PRACTICA NO. 8
FORMULA ROJA

35

PRACTICA NO. 9
FORMULA BLANCA

36

PRACTICA No. 10
PRUEBAS DE COAGULACION
(CONTEO DE PLAQUETAS)
(Tcnica de Brecher y Cronkite)
OBJETIVOS:
Determinar la aplicacin clnica de la prueba.
Conocer la preparacin de un paciente candidato a dicha prueba.
Interpretar correctamente los resultados.
Conocer la Cascada de Coagulacin
FUNDAMENTO :
Se destruyen los eritrocitos con una solucin de oxalato de amonio al
1.0 por ciento y se hace cuenta directa de plaquetas con el microscopio
de contraste de fase en una cmara de Neubauer de fondo plano.
MATERIAL:
Oxalato de amonio
Merthiolate incoloro (filtrar antes de usar)
Diluyentes para plaquetas, 309
Oxalato de amonio al 1.0 por ciento
Cmara de fondo plano Clay Adams 2908.
Material biologico: 1.0 ml. de sangre venosa o capilar con
anticoagulante en un tubo plstico.
TCNICA:
Cargar de sangre una pipeta par glbulos rojos hasta la marca 0.5 y
llenar con liquido de dilucin hasta la marca 10.1
Agitar.
Cargar una cmara de Neubauer plana.
Dejar reposar 10 min. en cmara hmeda.
Contar las plaquetas en toda la cuadricula central con el microscopio
de contraste de fases y a mayor aumento.
La cifra obtenida se multiplica por 2 000 y nos da el nmero de plaqueta
por milmetro cbico.
Valores Normales:
150,000 - 450 000 plaquetas por mm3
ACTIVIDADES POR REALIZAR
Bibliografia:
Brecher, g y Cronkite e. p. Morphology and enumeration of human
blood platelets. j. appl. physto. s. Pags. 365. Ao1990.
PRACTICA NO 11

37

(TIEMPO DE SANGRADO)
(Tcnica de Duke)
Fundamento:
La lesin de un pared vascular produce vasoconstriccin refleja
inmediata y temporal, aglutinacin de las plaquetas en el sitio de lesin,
las plaquetas liberan serotonina, una sustancia que causa
vasoconstriccin mas prolongada de los vasos lesionados, adems de
las plaquetas y de los tejidos se libera tromboplastina que desencadena
el proceso que termina con la coagulacin de la sangre.
Material:
Lancetas desechables.
Tiras de papel filtro
Cronmetro de mano.
Tcnica:
Limpie con una torunda con alcohol el lbulo de la oreja y espere a
que se evapore el exceso de alcohol.
Puncione el lbulo de la oreja con una lanceta desechable.
Seque la sangre (sin tocar la piel) cada 15 segundos hasta que cese
la hemorragia.
Valores Normales:
1-3 minutos.
Bibliografia:
Duke,w.w: The relation of blood platelets to hemorragic disease.
j.a.m.a. 55:1195, 1910
(TIEMPO DE COAGULACION)
Fundamento:
Las hemorragia patolgicas en un individuo pueden deberse a
alteraciones en cualquiera de los tres mecanismos de los que depende
la hemostasia normal. La presente prueba tiene una utilidad muy
limitada, ya que solo es til para detectar deficiencias graves del factor
de coagulacin.
Material:
Dos tubos de ensaye limpios, de 75 x 10 mm, del mismo calibre,
marcados en el nivel de 1 mm.
Un cronmetro.
Un Bao Mara a 37C, o un matraz al vaco con agua a la misma
temperatura.
Utensilios y materiales para puncin venosa.
Tcnica:
Extraiga 2-3 ml de sangre venosa.

38

Ponga a funcionar el cronmetro tan pronto como la sangre comience

a entrar en la jeringa.
Llene con sta sangre cada uno de los dos tubos de ensayo hasta la
marca de l ml.
Tapon ambos tubos con algodn no absorbente.
Colquelos en el bao Mara a 37C (o en el matraz al vaco)
Despus de 3 minutos saque el primer tubo.
Incline el tubo hasta un plano de 45 para observar si la sangre se ha
coagulado.
Si no se ha coagulado regrselo al bao Mara y efecte el
procedimiento anterior cada 30 segundos hasta que est realizada la
coagulacin.
Examine el segundo tubo inmediatamente despus de que se halla
coagulado la sangre del primero. Nota: Por lo general, la sangre del
segundo tubo se coagula muy rpidamente despus de que lo ha
hecho la sangre del primero.
Detenga el cronmetro o tome nota del tiempo transcurrido.

Se notifica como tiempo de coagulacin de la sangre el correspondiente

al segundo tubo.
Registre el tiempo de coagulacin en minutos, redondendolo al medio
minuto ms cercano.
Valores normales:
5 - 12 minutos.
(RETRACCIN DEL COAGULO)
FUNDAMENTO:
La rapidez e intensidad de la retraccin del cogulo dependen del
nmero y calidad de las plaquetas, y del volumen de glbulos rojos.
MATERIAL:
Tubos de centrifuga graduados de 15 ml.
Alambre de hierro de 1.5mm de dimetro de manera que tenga seis
vueltas por cada 2.5 cm la espiral deber tener unos 5 cm. de largo.
Material biolgico: 5 ml. de sangre sin anticoagulante.
TCNICA:
Se deposita la sangre en un tubo de centrifuga hasta la marca de 5
ml.
Se coloca dentro de el tubo de alambre enroscado.
Se incuba el tubo en bao de agua a 37 c y una hora despus de
haberse formado el cogulo se saca el tubo del bao.
Se quita el alambre permitiendo el drenaje del suero.

39

El volumen del suero y de las clulas exprimidas del cogulo se lee

directamente en el tubo; el resultado se expresa como porcentaje del
volumen inicial de 5 ml.

Ejemplo: si despus de la coagulacin 5 ml. de sangre suministraron 3

ml. de liquido la relacin es de 3 x 100/5= 60 por ciento.
Valores Normales:
48 - 64 por ciento.
Bibliografia:
Ackroyd, j.f., Method of estimating clot retraction with a survey of
normal values and the changes that ocurr with menstruaction, Clin. sc.
lond, 7; 231, 1949
Macfarlene r. g. : A simple method for measuring clot retraction,
Lancet,1: 1199, 1939.
Actividades a realizar (como resultado de las tres actividades):
1.- En qu casos realizara usted stas pruebas?

2.- Es posible realizar algunas en su consultorio?, Porqu?

3.- Esquematice usted la llamada: Cascada de Coagulacin

40

Bibliografa consultada:

PRACTICA NO 12
BANCO DE SANGRE
GRUPOS SANGUINEOS Y PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD
SANGUINEA
Objetivos:
Conocer la inmunologa aplicada al Banco de Sangre.
Conocer las indicaciones especficas de una transfusin sangunea.
Conocer las pruebas necesarias para solicitar una transfusin
sangunea.
GRUPOS SANGUINEOS (ABO) Y FACTOR RH:
Para identificar los antgenos de los grupos A, B y O se usan antisueros
contra ellos y su presencia se pone de manifiesto por la aglutinacin de
los eritrocitos.
Reactivos:
- Sueros antiA, antiB y antiD.
Material
Tcnica:
-

biolgico:
5 ml. de sangre venosa sin anticoagulante
3 ml. con anticoagulante.
Centrifuge la muestra a 3 000 RPM durante 3 minutos (sin
anticoagulante).
Independientemente coloque en un portaobjetos tres gotas de
sangre con anticoagulante.
Aplique los sueros antiA, antiB y antiD (una gota de suero
diferente a cada gota de sangre)
Homogeneizar con un aplicador la gota de sangre con la gota
del suero respectivo.
Agite suavemente durante 30 segundos la placa portaobjetos
con movimientos circulares de balanceo.
Lea los resultados durante los dos primeros minutos.

Resultados:

41

GRUPOS SANGUINEOS
A
B
AB
O
RH +
RH

DETERMINACION DIRECTA:
REACTIVOS TRANSCLONE
AntiA
AntiB
AntiD
+
0
0
+
+
+
0
0
+
0

42

PRUEBA DE COMPATIBILIDAD EN SOLUCIN SALINA:

Fundamento:
Las pruebas de compatibilidad sangunea deben efectuarse antes de una
transfusin. Adems de la seleccin de sangre compatible en los
sistemas ABO y Rh, se incluyen las pruebas cruzadas que se llevan a
cabo con eritrocitos del donador y suero del receptor (prueba Mayor) y
con eritrocitos de receptor y suero del donador (prueba Menor).
Rutinariamente las reacciones se efectan en solucin salina, en ste
medio los anticuerpos que aglutinan son principalmente de clase IgM.
Tcnica:
1.- Marque cuatro tubos, dos con S (salina 1 y 2) y dos con A (albmina
1 y 2) y adicione dos gotas de suero fresco a cada uno (el obtenido de la
centrifugacin anterior: gpos. y Rh).
- Para prueba cruzada Mayor (S 1) usar suero del receptor.
- Para prueba cruzada Menor (S 2) usar suero del donador.
2.- En dos tubos independientes de los anteriores adicionar una gota de
eritrocitos en solucin salina fisiolgica, del receptor y del donador
(tomados del fondo de los tubos centrifugados). Lavar los eritrocitos de 3
a 4 veces con solucin salina fisiolgica (centrifugando a 3 000 RPM
cada vez).
- En la prueba Mayor (S 1) usar eritrocitos lavados del donador.
- En la prueba Menor (S 2) usar eritrocitos lavados del receptor.
3.- Adicionar una gota de los eritrocitos lavados a cada uno de los tubos
S1 (suero receptor adicionar eritrocitos del donador = fase Mayor) y S2
(suero donador adicionar eritrocitos del receptor = fase Menor).
4.- Centrifugar inmediatamente a 1 000 RPM por 20 segundos.
5.- Evaluar a trasluz la aglutinacin.
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD CON REACTIVO DE ALBUMINA:
Fundamento:
Las pruebas cruzadas tienen como funcin poner de manifiesto la
presencia de anticuerpos incompletos dirigidos contra antgenos de
sistemas menores o secundarios, y deben realizarse en condiciones que
favorezcan la reaccin antgeno-anticuerpo y en consecuencia la
aglutinacin.
El empleo de albmina bovina facilita la deteccin de anticuerpos de
clase IgG, ya que stos se ven impedidos en su efecto aglutinante, por el
potencial Z.
Tcnica:
1.- Utilice los tubos marcados con A 1 y A 2 de la fase anterior.
2.- Adicione eritrocitos lavados de manera cruzada: suero del receptor
con eritrocitos del donador (fase Mayor) y suero de donador con
eritrocitos del receptor (fase Menor).

43

3.- Agregar una gota de albmina a los tubos marcados con A1 y A2.
4.- Centrifugar inmediatamente a 1 000 RPM por 20 segundos.
5.- Evaluar a trasluz si hay aglutinacin.
Si ambas son negativas continuar con la siguiente prueba:
PRUEBA DE COMPATIBILIDAD CON REACTIVO DE COOMBS:
El suero de Coombs se utiliza para poner de manifiesto anticuerpos que
no tienen actividad aglutinante y que se encuentran unidos a la
membrana del eritrocito.
Si hay aglutininas en el suero del receptor aglutinarn los glbulos rojos
del donador, y si hay aglutininas en el suero del donador, aglutinarn los
glbulos rojos del receptor.
Tcnica:
1.- Lavar cuatro veces los eritrocitos de los tubos S 1, 2 y A 1, 2.
2.- Escurrir el sobrenadante del ltimo lavado y homogeneizar en la gota
remanente.
3.- Adicionar una gota de reactivo de Coombs y mezclar.
4.- Incubar a 37 C por 5 minutos.
5.- Retirar y centrifugar.
6.- Evaluar a trasluz si hay aglutinacin.
ACTIVIDADES A REALIZAR:
1.- Qu es una transfusin?

2.- Cuntos tipos de transfusin conoce?

3.- Qu importancia tiene el conocimiento del grupo sanguneo y factor

Rh?

4.- En qu casos, que no se trate de una transfusin, solicitara usted el

Coombs indirecto?
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
____________________________________________________
5.- Explique los mecanismos de la reaccin de:
Sueros antiA, antiB y antiD:

44

_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
____________________________________________________

Reactivo de albmina:
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
____________________________________________________
Reactivo de Coombs:
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
____________________________________________________
6.- En qu casos indicara una transfusin sangunea?
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
____________________________________________________
7.- Explique los tratamientos alternativos a una transfusin sangunea.
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
____________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
____________________________________________________
Bibliografia consultada:
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
_____________________________________________
_________________________________________________________________________
_________________________________________________________________________
____________________________________________________

45

PRACTICA NO 13
EXAMEN GENERAL DE ORINA MACROSCOPICO
OBJETIVOS: Que el alumno aprenda cmo realizar el examen, y sea
capaz de valorar cada uno de los parmetros adecuadamente.
FUNDAMENTOS: El examen de la orina se ha convertido en un
procedimiento sensible y rpido. Actualmente es posible analizar hasta
nueve pruebas diferentes en menos de 60 segundos con la introduccin
de tiras reactivas simples y mltiples, cintas de pruebas y tabletas.
INTRODUCCION:
MATERIAL Y EQUIPO:
Probeta
Refractmetro
Tubo de ensaye de 13x100 mm
Tiras reactivas
TECNICA
Volumen: En una probeta medir el volumen de la muestra reportndolo
en mililitros.
Densidad: Procedimiento con tira reactiva (Tiempo de lectura 45
segundos).
Sumergir la tira reactiva en una muestra de orina y comparar con
la escala cromtica la variacin en el cambio de color. Esta prueba se
basa en el cambio
aparente de pKa
de ciertos polielectrolitos
pretratados en relacin con la concentracin inica. En presencia de un
indicador los colores varan desde un verde-azul oscuro en orinas de
baja concentracin, hasta un verde amarillo en muestras de alta
concentracin inica. Este mtodo permite la determinacin de la
gravedad especifica (densidad) de la orina entre 1.000 a 1.030.
En general existe una correlacin que no rebasa las 0.005
unidades de los valores obtenidos con el mtodo del ndice de
refraccin. En orinas con un pH 6.5, se puede mejorar la exactitud
aadiendo 0.005 al valor obtenido. Si la lectura es instrumental el ajuste
es automtico.
Procedimiento tcnico con el refractmetro:
Limpiar y secar la superficie de la tapa y el prisma del
refractmetro, depositar una gota de orina y cerrar la tapa, dirigir el
instrumento hacia la fuente de luz y leer la escala de densidad en el
lmite luz - oscuridad. La escala permite lecturas de hasta 1.035, de
modo que las muestras con valores superiores deben ser diluidas.

46

COLOR, OLOR Y ASPECTO: Se hace una inspeccin ocular de la

muestra de orina anotando las observaciones correspondientes.
ACTIVIADES POR REALIZAR:

47

PRACTICA NO 14
EXAMEN MICROSCOPICO DE LA ORINA
OBJETIVO
FUNDAMENTOS
INTRODUCCION
MATERIAL Y EQUIPO:
Portaobjetos
Cubreobjetos de 22x22
Tubos de ensaye de 13x100
Microscopio
TECNICA
1. En un tubo de ensaye de 13 x 100 mm medir una muestra de orina
previamente mezclada y centrifugar a 3000 r.p.m. durante
10
minutos.
2. Decantar el sobrenadante en otro tubo.
3. Poner aproximadamente una gota de sedimento resuspendido sobre
un porta-objetos y colocar un cubre-objetos, evitando la formacin de
burbujas. La cantidad de sedimento no debe ser excesiva que flote en
cubreobjetos.
4. La observacin debe hacerse lo ms pronto posible para evitar que se
seque y se altere su contenido.
5. Hacer la observacin microscpica a bajo y alto aumento, cuidando de
variar continuamente el foco y de seguir en forma sistemtica los
cuatro lados del cubre. Los elementos ms comunes a investigar son:
6. Leucocitos por la tira reactiva. (tiempo de lectura 2 minutos)
Los leucocitos granulocticos contienen esterasas que catalizan la
hidrlisis del derivado ster cido aminopirrol, liberando 3-hidroxi-5-fenil
pirrol; este ltimo compuesto de pirrol, reacciona con una sal de
diazonio. El color de reaccin negativa es crema y violeta para las
positivas.
Leucocitos por observacin microscpica:
Por las interferencias que pueden darse con la tira
reactiva, se
recomienda hacer la identificacin microscpica de leucocitos en seco
fuerte contando el nmero de ellos en 10 campos representativos.
Bacterias, levaduras, cristales y cilindros; se cuentan en forma
apreciativa y se reportan desde escasos hasta abundantes.
Clulas epiteliales escamosas; slo se informan si son numerosas.

48

Eritrocitos; de estar presentes, se informan desde escasos hasta

abundantes.
ACTIVIADES POR REALIZAR