CEDERJ UENF

Aluna:
Plo: Maca

Disciplina: Bioquimica II
Relatrio da Prtica de Fermentao

Introduo
A fermentao um processo biolgico anaerbico, no qual acares
como a glicose, frutose e sacarose so parcialmente convertidos em energia
celular, podendo gerar produtos como o etanol, lactato e CO 2. O produto
formado no final da fermentao vai depender do organismo que a
promove, no caso desta prtica em laboratrio vamos utilizar leveduras, que
fazem a fermentao alcolica, produzindo ao fim da via etanol e CO 2.
Vamos medir por meio dos procedimentos listados abaixo a quantidade de
CO2 produzido e a quantidade de substrato (sacarose) utilizado.

Materiais e mtodos
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o

6g de levedura liofilizada (Sacharomyces cerevisae);

10g de sacarose;
gua;
Seliwanoff;
2 tubos de Falcon;
Beckers;
Pipetas;
Tubos de ensaio;
Spectofotmetro;
Banho-maria.

Procedimentos
1. Diluir 6g de levedura em 60ml de gua em um becker e reservar;
2. Diluir 10g de sacarose em 90ml de gua em um becker para obter uma
soluo com concentrao de sacarose de 10%. Reservar 70ml;
3. Diluir 30ml da soluo de sacarose 10% em 270ml de gua em um
Becker para obter uma soluo com concentrao de sacarose 1%.
Reservar 50ml;
4. Colocar 250ml da soluo de sacarose 1% em Banho-maria 40C;
5. Enumerar 11 tubos e pipetar soluo de sacarose 1% e gua de acordo
com os valores da tabela 1;
6. Diluir as solues do 5 passo em 10x (obter soluo de sacarose %):
enumerar 11 novos tubos de ensaio e pipetar 0,3ml de cada tubo do 5
passo em seu novo tubo respectivo e completar todos com 2,7ml de
gua;

7. Enumerar 11 tubos de ensaio para fazer a dosagem de sacarose com o

Seliwanoff: Pipetar 0,5ml de sacarose, dos tubos do 6 passo nos
respectivos novos tubos, e 2,0ml de Seliwanoff;
8. Colocar nos tubos de falcon, um com a tampa furada (que ser utilizado
para medir o CO2) e outro no (utilizado para medir a quantidade de
sacarose consumida), 5ml da soluo de sacarose 10%, 10ml de levedura
e completar com gua;
9. Colocar os tubos de falcon em Banho-maria: O tubo com a tampa furada
deve ser colocado com a tampa virada para o fundo, dentro do Becker
com 250ml de soluo de sacarose 1%, que j estava em Banho-maria
40C; e o outro tubo colocado normalmente no Banho-maria 40C;
10. Verificar a cada 15 minutos (exceto a primeira alquota que foi retirada
aps 30min):
o O volume de CO2 gerado;
o Retirar uma alquota de 3ml do tubo de Falcon utilizado para medir a
o

quantidade de sacarose consumida;

Pr a alquota retirada para ferver 100C por 10 minutos para parar

a fermentao.
11. Diluir as alquotas em 10x: Pipetamos 0,5ml da soluo de cada alquota
em novos tubos, e adicionamos 4,5ml de gua;
12. Preparao das amostras para obter a absorbncia no spectofotmetro:
Pipetar em novos tubos de ensaio 0,5ml da soluo diluda no 11 passo
e adicionar 2ml de Seliwanoff em cada um;
13. Ferver os tubos do 12 passo 100C por 40 minutos;
14. Calcular a absorbncia: Calibrar o spetotofotmetro com o tubo 1 da
tabela 1, e colocar uma soluo por vez dos tubos da tabela 1 no
spetofotmetro (os dados obtidos esto na tabela);
15. Calcular as absorbncias das amostras obtidas no 12 passo da mesma
maneira que as solues da tabela 1 (os dados obtidos esto na tabela
2).

Tabela 1
Tub

Sac. 1%

gua

Sacarose %

Sac. % -10x

(ml)

(ml)

(ml)

(ml)

3,0

0,3

2,7

0,1

0,01

0,023

0,6

2,4

0,2

0,02

0,048

0,9

2,1

0,3

0,03

0,078

0,12

1,8

0,4

0,04

0,109

0,15

1,5

0,5

0,05

0,172

0,18

1,2

0,6

0,06

0,213

0,21

0,9

0,7

0,07

0,246

0,24

0,6

0,8

0,08

0,399

10

0,27

0,3

0,9

0,09

0,416

ABS. 520nm

11

0,30

0,1

0,480

Tabela 2
Tempo
(min.)

CO2 (ml)

Alquota ABS. 520

nm

0,321

30

15

0,217

45

27,5

0,137

60

35

0,036

75

37,5

90

40

105

42,5

120

42,5

Resumo e anlise de dados

A sacarose para ser utilizada pelas leveduras deve ser quebrada em
frutose + glicose, que vo entrar na via glicoltica como substratos. Alm
disso, as leveduras estavam liofilizadas e fazem extracorprea, por isso a
fermentao demora um pouco para comear. Comprovamos este fato pela
liberao de CO2 nos primeiros 30 minutos da fermentao, neste intervalo
de tempo a quantidade de CO 2 observada pequena em relao aos
minutos posteriores.