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Acetogeninas de anonceas bioativas isoladas das sementes de

Annona cornifolia A. St - Hil.

SANTOS, L.A.R.; PIMENTA, L.P.S.; BOAVENTURA, M.A.D.

Instituto de Cincias Exatas, Departamento de Qumica, UFMG, Av. Antnio Carlos 6627, Belo Horizonte, MG,
CEP.: 31270-901, Brasil, Tel.: 31-34995754, e-mail: dianadb@netuno.lcc.ufmg.br
RESUMO: O estudo fitoqumico biomonitorado do extrato etanlico das sementes de Annona
cornifolia A. St. Hil. (Annonaceae) levou ao isolamento de duas acetogeninas, esquamocina-L
e esquamocina-M, j descritas na literatura, mas inditas nesta espcie. Testes realizados
mostraram que o extrato etanlico, a frao hexnica e as acetogeninas possuem atividade
larvicida frente ao microcrustceo Artemia salina.
Palavras-chave: acetogeninas, Annona cornifolia, Annonaceae, atividade larvicida.
ABSTRACT: Annonaceous acetogenins from the seeds of Annona cornifolia A. St. - Hil.
The bioguided phytochemical study of ethanol extract of Annona cornifolia A. St. -Hil (Annonaceae)
led to the isolation of two known acetogenins, squamocin-L and squamocin-M, both isolated for
the first time in this species. The ethanol extract, the hexane fraction, and the two pure acetogenins
showed brine shrimp larvicidal activity.
Key words: acetogenins, Annona cornifolia, Annonaceae, larvicide activity.

INTRODUO
A famlia Annonaceae compreende cerca de
130 gneros e 2300 espcies (Alali et al., 1999),
distribudas em pases de climas tropical e
subtropical. O gnero Annona, que possui mais de
120 espcies catalogadas (Joly, 1998), tem sido muito
pesquisado devido ao isolamento e caracterizao
de diversas classes de substncias com atividades
qumicas e farmacolgicas (Leboeuf et al., 1982),
principalmente no que diz respeito s acetogeninas.
Elas so derivadas de cidos graxos (C33-C37) e
apresentam um nmero varivel de anis
tetraidrofurnicos (THF) ou tetraidropirnicos (THP)
ao longo da cadeia hidrocarbnica (Alali et al., 1999).
Essas substncias naturais bioativas apresentam
importantes atividades biolgicas tais como:
citotxica, antitumoral, pesticida, vermicida,
antimicrobiana, imunossupressora, antiemtica,
inibidora do apetite e antimalrica (Cav et al., 1993;
Cav et al., 1997; Alali et al., 1999). Nosso grupo de
pesquisa tem investigado plantas da famlia
Annonaceae, principalmente os gneros Annona
(Santos et al., 1996) e Rollinia (Pimenta et al., 2001).

A espcie Annona cornifolia A. St. Hil um

arbusto frutfero encontrado na Bahia, Minas Gerais,
So Paulo, Gois e Mato Grosso, conhecido
popularmente como ata-de-cobra (Maas et al., 2001).
O arbusto apresenta altura varivel e frutos piriformes,
com aurolas globosas, da cor laranja quando
maduros. A polpa do fruto, enquanto verde, utilizada
contra lceras atnicas e depois de maduro torna-se
doce e comestvel (Correa, 1974). O primeiro estudo
fitoqumico dessa espcie foi feito pelo nosso grupo
e uma acetogenina indita foi isolada, conhecida por
cornifolina (Santos et al., 2006).
O presente trabalho relata o estudo
fitoqumico biomonitorado da espcie Annona
cornifolia, descrevendo os resultados parciais obtidos
com a purificao da frao hexnica, que levou ao
isolamento de duas acetogeninas esquamocina-L (1)
(Jolad et al., 1985; Ohsawa et al., 1991; Sahai et al.,
1994; Gu et al.,1997; Chang et al., 2003) e
esquamocina-M (2) (Sahai et al., 1994; Hisham et
al., 1991), as quais j foram isoladas anteriormente
em espcies pertencentes famlia Annonaceae e

Recebido para publicao em 06/12/2005

Aceito para publicao em 28/08/2006

Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.3, p.48-51, 2007.

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ao gnero Annona. O extrato etanlico, a frao

hexnica e as acetogeninas puras mostraram
atividade larvicida frente Artemia salina.

MATERIAL E MTODO
Material botnico
As sementes de Annona cornifolia A. St.
Hil. (Annonaceae) foram coletadas na regio de
Curvelo - Minas Gerais, entre janeiro a maro de 1998.
A espcie foi identificada pelo botnico Dr. R. MelloSilva e a exsicata (BHCB 68114) se encontra
depositada no Departamento de Botnica do Instituto
de Cincias Biolgicas da Universidade Federal de
Minas Gerais, Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil.
Geral
Para os procedimentos cromatogrficos foi
utilizada slica gel 60 (70-230 mesh, Merck, D-6100
Darmstadt, Germany). Nas anlises por cromatografia
em camada delgada (CCD) foram utilizadas placas
de slica gel 60 F254 (Merck, Germany), com 0,25 mm
de espessura. A deteco das placas de cromatografia
em camada delgada analtica foram feitas por
borrifamento com os reagentes de Dragendorff e de
Kedde (Wagner et al., 1984). As anlises das fraes
por Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE),
foram feitas em cromatgrafo Shimadzu LC-10AD,
com detector UV-VIS SPD-10AV e integrador IC-10AV.
Os espectros de absoro na regio do infravermelho
foram obtidos em espectrmetro Shimadzu/IR-400,
em partilhas de KBr. As freqncias de absoro foram
medidas em unidades de nmero de onda (cm-1). Os
espectros de RMN de 1H a 400 e 200 MHz e de 13C a
100 e 50 MHz (1D e 2D), em CDCl3, foram obtidos
em espectrmetro Bruker Advance DRX-400 e DPX200. Os deslocamentos qumicos foram registrados
tendo o TMS como padro interno. Os espectros de
massas EMIE (Espectro de Massas por Ionizao
de Eltrons) foram registrados em espectrmetro
marca Shimadzu, modelo CGMS QP 5050 e
ESIMS-Q/TOF (Eletrospray Ionization Mass Spectrum
- Quadrupole Ion Trap/ Time of Flight) em
espectrmetro marca Micromass, modelo Micro TM
Q-TOF, equipado com fonte de ionizao eletrospray
operando com on no modo positivo. A rotao tica
das substncias foi medida em um polarmetro PerkinElmer modelo 341, usando-se CHCl3 como solvente.
Os pontos de fuso foram determinados em aparelho
Mettler FP5 e no foram corrigidos.
Fracionamento do extrato etanlico bruto
As sementes de Annona cornifolia (150 g)
aps secagem temperatura ambiente, foram
trituradas e extradas exaustivamente em extrator tipo
Soxhlet, sob refluxo, durante 48 horas com etanol. A

destilao do etanol feita sob presso reduzida,

forneceu 10 g de resduo. Este material foi submetido
partio com hexano/acetato de etila, obtendo-se
uma frao em acetato de etila (3,5 g) e outra hexnica
(6,0 g). A frao hexnica foi submetida cromatografia
em coluna de slica gel, utilizando-se como eluentes
hexano/diclorometano/acetato de etila/metanol com
gradiente de polaridade crescente, sendo obtidas 166
fraes que foram reunidas em 15 grupos com base
em seu perfil por cromatografia em camada delgada
de slica. O grupo 9 (fraes 30-44; 596 mg) indicou,
aps revelao com reagentes de Dragendorff e Kedde
e anlise do espectro no IV, a presena de acetogeninas;
este foi ento submetido a CLAE preparativa (coluna
Shim-pack PREP-ODS, 5 mm, 250 x 20 mm), eluda
com acetonitrila/gua (isocrtico, 80:20 v/v, fluxo de
18 mL min-1), fornecendo as acetogeninas esquamocinaL (1, 38 mg) e esquamocina-M (2, 54 mg) impura. A
substncia 2 foi recristalizada em acetato de etila,
obtendo-se um slido branco (35 mg).
A caracterizao das substncias isoladas
(Figura 1) foi possvel pela anlise dos dados
espectromtricos de EM, IV, RMN de 1H e 13C, COSY
e HMQC, e por comparao com aqueles encontrados
na literatura (Jolad et al., 1985; Ohsawa et al., 1991;
Hisham et al., 1991; Sahai et al., 1994; Gu et al.,1997;
Chang et al., 2003).
Atividade larvicida sobre o microcrustceo
A. salina
O teste larvicida sobre o microcrustceo A.
salina foi padronizado utilizando-se lapachol, cuja DL50
70 g mL-1 (61< DL50< 81) e foi feito de acordo com
a metodologia descrita por Meyer et al. (1982).
Resumidamente, ovos encistados de A. salina
(Maramar) foram incubados em gua marinha artificial.
A cultura foi mantida a 28oC, sob luz e aerao
constantes. As solues de lapachol e amostrastestes (extrato etanlico, frao hexnica e
acetogeninas puras) foram dissolvidas em 1,0 mL de
dimetilsulfxido (DMSO), diludas com soluo salina
e testadas em cinco concentraes diferentes, em
triplicata. Larvas em estgio metanauplii
(aproximadamente 10 unidades) foram adicionadas
a cada tubo contendo as diluies e as culturas foram
incubadas por 24 horas. Um grupo controle utilizandose soluo marinha (com 1% de DMSO v/v) foi includo
no teste. Os valores de DL 50 com intervalo de
confiana de 95% foram determinados em mg mL-1,
utilizando o mtodo probitos de anlise (Finney, 1974).

RESULTADO E DISCUSSO
Estudo qumico
O ESIMS das duas substncias mostrou o
pico do aduto com sdio [M + Na]+ de m/z 629,

Rev. Bras. Pl. Med., Botucatu, v.9, n.3, p.48-51, 2007.

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indicando M+ de m/z 606 (cal. 606,92), consistente

com a frmula C37H66O6. A anlise dos espectros de
RMN de 1H, de RMN de 13C e de Massas de 1
conduziram mesma estrutura plana da
esquamocina-L (Sahai et al., 1994). A estereoqumica
relativa dos anis tetraidrofurnicos foi determinada
por comparao com dados de deslocamentos
qumicos nos espectros de RMN de 1H e de 13C de
acetogeninas conhecidas (Rupprecht et al., 1986;
Fujimoto et al., 1988; Cav et al., 1993). Assim, a
estereoqumica relativa para a substncia 1 foi
determinada como sendo treo-trans-treo-trans-eritro,
mas no se pode afirmar quanto ao sentido em que
foi determinada: se do carbono 15 para o carbono 24
ou do carbono 24 para o carbono 15.
A acetogenina esquamocina-M (2) foi isolada
como um slido ceroso branco. O EMIE da
substncia 2 apresentou o mesmo padro de
fragmentao de 1, sugerindo a mesma estrutura
plana para 1 e 2. Comparao dos dados dos
espectros de RMN de 1H e de 13C de 1 e 2 revelaram
que, em 2, a estereoqumica relativa entre C-15 e C24 treo-trans-treo-trans-treo . Assim, a nica
diferena entre as duas substncias a
estereoqumica relativa entre os carbonos C-23/C-24,
que para 1 eritro e para 2 treo.
Atividade larvicida
No teste larvicida frente Artemia salina
(TAS), as substncias so consideradas ativas
quando apresentam DL50 < 1000 g mL-1 (Meyer et

al., 1982). Mais recentemente, Dollabela (1997)

demonstrou que substncias com DL50 entre 80 e
250 g mL-1 no bioensaio frente Artemia salina
podem apresentar atividade anti-Tripanosoma cruzi;
por outro lado, substncias com DL50 < 145 g mL-1,
podem apresentar atividade antitumoral. Com base
nos experimentos realizados, foi observado que a
frao hexnica apresentou atividade larvicida
moderada (DL50 = 10,000 g mL-1), quando comparada
aos resultados obtidos para o extrato etanlico, o
grupo 9 e as acetogeninas esquamocina-L e
esquamocina-M (DL50 = 0,200 g mL-1, DL50 = 0,772
g mL -1, DL 50 = 0,121 g mL-1 e DL50 = 0,011,
respectivamente) (Tabela 1). O extrato etanlico,
frao hexnica, grupo 9 e as acetogeninas
apresentaram uma atividade larvicida mais elevada
que o lapachol, controle positivo. Com base nos
resultados obtidos no teste larvicida sobre Artemia
salina, as acetogeninas sero posteriormente
testadas quanto a atividade antitumoral, sendo esta
uma das atividades biolgicas mais pesquisadas
atualmente para essa classe de substncias.

CONCLUSO
O estudo fitoqumico biomonitorado do
extrato etanlico das sementes de Annona cornifolia
levou ao rpido isolamento de duas acetogeninas,
esquamocina-L e esquamocina-M, que embora
descritas em outras espcies, foram isoladas pela

FIGURA 1: Estruturas das acetogeninas esquamocina-L (1) e esquamocina-M (2) isoladas das sementes de
Annona cornifolia.
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TABELA 1. Atividade larvicida do extrato etanlico, frao hexnica, grupo 9 e acetogeninas puras obtidos das
sementes de Annona cornifolia

a
d

Rendimento em % de material vegetal seco; b Dose que mata 50% dos indivduos de uma populao; c Intervalo de confiana (95%);
Controle.

primeira vez nesta espcie. O extrato etanlico bruto,

frao hexnica, o grupo 9 e acetogeninas puras, em
uma triagem preliminar, apresentaram atividade
larvicida significativa nas doses investigadas e sero
posteriormente testadas quanto a uma possvel
atividade antitumoral.

AGRADECIMENTO
Este trabalho foi financiado pelo Conselho
Nacional de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico
(CNPq).
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