Universidad Autnoma de Nayarit

Unidad Acadmica de Ciencias Qumico Biolgicas y

Farmacuticas
Q.F.B.

Bacteriologa Clnica
Prctica No. 4
Coprocultivo
Docente:
Q.F.B Dora Liliana Luna Vzquez
Equipo No. 4
Integrantes:
Arroyo Lira Arlette Guadalupe.
Rubio Ortiz Margarita.
Snchez Gonzlez Brigette.
8 Semestre Clnicos

Tepic Nay. 7/Abril/2008

RESULTADOS.
MUESTRA.
S.S

Sin crecimiento

XLD

Blanquecinas,
borde
irregulares,
planas, cremosas, sin viraje del medio,
con aspecto rugoso pequeas.
Posiblemente fermentadoras

MC
Buen crecimiento; 2 tipos de colonias:
1. Moradas, redondas,
grandes,planas, cremosas con
un halo de un morado mas
intenso.
2. Rosas, grandes redondas,
cremosas, elevadas.

Tepic Nay. 7/Abril/2008

TETRATIONATO

Turbio blanquecino en la parte de la

base del tubo se observo un
precipitado en forma de polvo, blanco.

CEPA
S.S

Sin crecimiento

XLD
Colonias de borde regular, redondas,
con halo grisceo, blanquecinas,
elevadas, viraje del medio de naranja a
amarilla (posiblemente fermentadoras)

MC

Colonias redondas, borde regular,

moradas con relieve, elevadas,
presentan un halo morado

Tepic Nay. 7/Abril/2008

SB

Sin crecimiento

VB

Colonias redondas, cremosas, opacas,

pequeas, plana, sin viraje del medio
(posiblemente fermentadoras)

PRUEBAS BIOQUIMICAS

FAD

RESULTADO

Negativo

CITRATO

MUESTRA A.
Mc

Positivo

Tepic Nay. 7/Abril/2008

Pico de flauta
azul

CEPA A.Mc

RESULTADO

Negativo

Negativo

Ac/AC

Produccin de
gas

Produccin de
gas

Descarboxilac
in
positiva

Descarboxilac
in positiva

Movilidad (+)

Movilidad (+)

Indol (-)

Indol (+)

Ornitina (-)

Ornitina (-)

VP

Negativo

Negativo

RM

Positivo

Positivo

MIO

LIA

KLIGER

Alc/A

Tepic Nay. 7/Abril/2008

UREA

Negativo

Negativo

NOTA: LAS PRUEBAS BIOQUIMICAS SE REALIZARON A PARTIR DE COLONIAS DE LOS AGARES MCK, TANTO DE LA MUESTRA
COMO DE LA CEPA. UTILIZANDO LAS COLONIAS ROSADAS DE LA MUESTRA Y LAS COLONIAS MORADAS DE LA CEPA.

Resiembra de la muestra a partir de Caldo tetrationato

Colonias redondas, con borde

definido, elevadas, cremosas,
brillantes, blanquecinas.
VB

Colonias puntiformes, pequeas

negras, algunas verdosas
SB

ANLISIS DE RESULTADOS
En la muestra de coprocultivo no se realiz la tincin Gram ya que no seria
de gran ayuda en la identificacin por que en la flora normal del tracto intestinal
se encuentra una gran cantidad de microorganismos de los cuales la gran mayora
son Gram negativos; solo se realiz un montaje directo en fresco en el cual se
observ restos vegetales sin la presencia de algn parasito. Posteriormente se
procedi a la siembra de la muestra en los agares XLD, MacConkey ,SalmonellaShigella, y Caldo Tetrationato; debido a que estos medios son selectivos y
diferenciales para enterobacteriaceae; en el caso del caldo tetrationato es un
medio de enriquecimiento y a la vez selectivo a determinados gneros de
enterobacterias e inhibe los Coliformes.

Tepic Nay. 7/Abril/2008

Tambin se realiz la siembra de la cepa en los agares MacConkey, Sulfito

Bismuto, XLD, Salmonella-Shigella y Verde Brillante; medios que nos permiten la
diferenciacin y seleccin de gneros de la familia enterobacteriaceae.
La cepa present morfologa colonial caracterstica de una colonia no
fermentadora en el agar MacConkey; sin embargo en el resto de los medios
empleados no se presento est caracterstica. En las pruebas bioqumicas se
obtuvieron 10 resultados de 12 positivos a salmonella, las nicas pruebas que no
concuerdan son el cido sulfrico y la ornitina.
En el caso de la muestra el crecimiento en los diferentes medios utilizados
coinciden con lo reportado en la literatura para E. coli, es decir microorganismo
fermentadores de lactosa con colonias grandes, hmedas, enteras. Adems de
que las caractersticas bioqumicas de esta bacteria son la fermentacin de
glucosa, lactosa as como la produccin de gas, E. coli es positivo al indol,
negativo a citrato, positivo a rojo de metilo y negativo a la prueba de VogesProskauer.

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CONCLUSINES
Muestra: E. coli.
Cepa: Salmonella.

CUESTIONARIO.
1. Explica el fundamento de los medios de cultivo empleados.
MEDIO DE CULTIVO

Agar SalmonellaShigella

FUNDAMENTO
Medio selectivo para aislar Shigella y Salmonella.
Ejerce buena inhibicin sobre agentes coliformes sin
limitar el desarrollo de los patgenos gramnegativos,
utilizndose especialmente junto con el agar sulfito de
bismuto para siembra de materiales provenientes de
medios enriquecidos como caldo tetrationato y caldo
con selenito. Contienen sales biliares, lactosa, citrato y
tiosulfato sdico, citrato frrico, verde brillante y rojo
neutro como indicador. Shigella y Salmonella no
fermentan la lactosa, aparecen como colonias lisas,
transparentes a opacas; las pocas colonias
fermentadoras de la lactosa que se pueden desarrollar
tienen un color rojo neutro y un centro negro. Las sales
biliares inhiben el crecimiento de microorganismos
grampositivos y esporulados sin interferir en el
crecimiento de los bacilos gramnegativos.
*El citrato y el verde brillante son los principales inhibidores de coliformes.
*El tiosulfato sdico ayuda a la produccin de H2S por muchas Salmonella, la que
puede detectarse por el ennegrecimiento de las colonias cuando reaccionan el H 2S
con el citrato frrico, para producir sulfito ferroso.

Agar de Sulfito de
Bismuto (Wilson-Blair
modificado)

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Entre sus componentes figuran fosfato disdico (puede

actuar como amortiguador), glucosa, sulfato ferroso,
sulfito
de
bismuto
(inhibe
casi
todos
los
microorganismos grampositivos) y verde brillante (limita
el crecimiento de los coliformes). Esta indicado para
aislar S. typhi y otros miembros del gnero
especialmente cuando el material a sido enriquecido en
caldo tetrationato. Las colonias de S. typhi son negras,
rodeadas por halo metlico, debido a que el hidrgeno
sulfurado producido reduce el sulfato ferroso a sulfuro,

que en presencia de sulfito de bismuto originan esa

coloracin. S. schottmuelleri y S. enteritidis tambin
dan colonias negras; en cambio, S. paratyphi las
produce en tinte verdoso. El medio inhibe las bacterias
grampositivas y organismos pertenecientes al grupo
coliforme. Algunas especies de Shigella germinan
produciendo colonias marrn oscuro.

Agar McConnkey

Es
un
medio
selectivo-diferencial
diseado
especficamente para el aislamiento de organismos que
pertenecen a la familia Enterobacteriaceae y permite
diferenciar a los fermentadores de lactosa de los no
fermentadores de lactosa miembros de esta familia.
Contiene sales biliares, estas inhiben la flora
grampositiva. Los agentes del grupo coliforme dan
colonias de color rojo, debido a que fermentan la
lactosa, las sales biliares en un pH cido, se precipitan
para mostrar este color an mas intenso. En cambio
Salmonella y Shigella forman colonias incoloras, lisas,
opacas. Las sales biliares en combinacin con el
violeta cristal inhiben a casi todos los organismos
grampositivos.

Agar XLD (Xilosa,

Lactosa,
Desoxicolato)

Este agar proporciona otro medio selectivo y diferencial

para los microorganismos gramnegativos. Los
fermentadores de lactosa o los fermentadores de
sacarosa producirn colonias amarillas, y los no
fermentadores de lactosa sern rojos. La produccin de
sulfuro de hidrgeno se ve por la aparicin de centros
negros en las colonias. Este medio parece ser ms
selectivo para Shigella que para otros gneros de la
familia Enterobacteriaceae.

Agar Verde Brillante

(KristensenKauffmann)

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Contiene verde brillante como inhibidor de gran

cantidad de microorganismos entricos; por ello su uso
esta limitado al aislamiento de salmonellas, excluyendo
a S. typhi, de materiales anteriormente sembrados en
medios enriquecedores, las que aparecen blanco
rosadas rodeadas por un medio rojo brillante,
caracterstica de no fermentadores de lactosa. Por el
contrario las colonias de los fermentadores de lactosa
se presentan amarillas a amarillo-verdoso rodeadas de
una zona amarillo-verde intenso.

Medio de cultivo utilizado para el enriquecimiento

selectivo de Salmonella spp. a partir de heces, orina,
alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.
Por la presencia de las sales biliares se inhibe el
crecimiento de los microorganismos Gram-positivos. El
tetrationato se produce a partir del Tiosulfato, cuando
se aade la solucin yodo-yodurada; el tetrationato
tiene un efecto inhibidor sobre los Coliformes y la
Caldo con
mayor parte de las bacterias intestinales. Los Proteus y
Tetrationato (Mueller y las Salmonellas pueden desarrollarse correctamente. A
Kauffmann)
su vez el Calcio Carbonato mantiene el pH del medio al
neutralizar el Acido Sulfrico producido por la reduccin
del tetrationato, de lo contrario el medio se ira
acidificando y se detendra el crecimiento de todos los
grmenes. La mezcla de peptonas constituye el soporte
nutritivo. Podemos inhibir el desarrollo de Proteus
aadiendo 0,04 g/l de Novobiocina.

2. Por qu no se realiza en el coprocultivo un gram directo de la

muestra?
Debido a que la muestra procede del tracto intestinal, el cual est ampliamente
colonizado por una gran cantidad de microorganismos gram negativos; esto no
permitira la diferenciacin clara de un tipo especfico de un microorganismo.
3. Por qu es necesario realizar una siembra de la muestra fecal en
caldo tetrationato?
Para facilitar el aislamiento de las bacterias entricas patgenas se emplean
medios de enriquecimiento y medios selectivos. Uno de los ms empleados es el
caldo con tetrationato, el cual es un medio de enriquecimiento, y ya que los
medios de enriquecimiento contienen algunas sustancias inhibidoras, con lo que
crean un medio ambiente especialmente favorable para lmites ms bien estrechos
de bacterias.
4. Cul es la funcin del yodo en el caldo tetrationato?
El yodo acta sobre el tiosulfito produciendo tetrationato.
5. Qu otros medios de cultivo se pueden emplear en un coprocultivo?
Caldo con selenito (Leifson). Para desarrollo de salmonelas y
shigelas.
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Agar citrato-desoxicolato. En este se inhiben grampositivos, Proteus y

coliformes con el desoxicolato y citrato de sodio adicionados al medio.
Los no fermentadores de lactosa crecen en colonias incoloras, los
fermentadores de lactosa adquieren color rosado a rojo.
Agar Levine. Es un medio selectivo-diferencial donde E. coli forma
colonias pequeas, morado-negruzcas, generalmente con brillo verde
metlico. Salmonella y Shigella dan colonias pequeas e incoloras. Las
especies de los gneros Klebsiella y Enterobacter forman colonias
mucosas, de color caf y sin reflejo metlico.
Agar entrico Hektoen. Medio diferencial donde se observan colonias
coloreadas de amarillo a salmn para los fermentadores de lactosa; los
no fermentadores, especialmente Proteus crece en colonias coloreadas
de azul-verde a azul o salmn, la mayora con centros negros.
Eosina-azul de metileno (EMB). Medio diferencial donde E. coli crece
en colonias azul oscuro-negras a parduscas con brillo metlico o sin el;
puede presentar centros oscuros con periferias incoloras ambarinas,
estas caractersticas indican que es fermentador de lactosa; un
microorganismo no fermentador de lactosa crece en colonias
transparentes con color mbar (prpura claro) o incoloras.
PATOLOGA

AGENTE ETIOLGICO

Sndrome gastroenterocolitico:

Staohylococcus aureus

fiebre, dolor abdominal, diarrea.

Escherichia coli
Klebsiella ssp.
Proteus ssp
Yersenia enterocolitica
Pseudomonas aeruginosa
Campylobacter jejuni
C.coli
Clostridium difficile

Fiebre tifoidea: fiebre, malestar

general y dolor abdominal, diarrea
frecuente, erupcin cutnea "manchas
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Salmonella entrica typhy

rosas".
Salmonelosis: diarrea, fiebre y dolores
abdominales

S.choleraesuis
S. entrica-typhimurium
S. entrica-paratyphi A
S. entrica-paratyphi B
S. entrica-enteritisdis

Disentera bacilar: dolor abdominal,

fiebre, diarrea, e inflamacin y
ulceracin de la boca.

Shigella dysenteriae

Shigelosis: dolor abdominal, fiebre,

diarrea, e inflamacin y ulceracin de la
boca

S. flexneri
S.boydii
D.sonnei

Clera:

Vibrio clera

evacuaciones diarreicas abundantes,

con vmito y deshidratacin que puede
llevar al paciente a acidosis y colapso
circulatorio en el trmino de 24 horas
Gastritis y ulceras:

Helicobacter pylori

Inflamacin de la mucosa gstrica,

hemorragias, dolor estomacal,agruras.

Colitis pseudomembranosa:
Inflamacin del colon, edema, diarrea .

BIBLIOGRAFA
Tepic Nay. 7/Abril/2008

C. difficile

Elmer W. Koneman y col. Diagnostico Microbiologico Texto y atlas a

color. 5ta edicin, (2001). Editorial mdica panamericana. Mexico.
Pag.180182, 197.
MacFaddin Jean. Pruebas Bioqumicas para la Identificacin de
Bacterias de Importancia Clnica 3ra Edicin (2003). Editorial Mdica
Panamericana. Buenos Aires Argentina. Pgs. 682-683.
Delaat Adrian N. C. MICROBIOLOGA 2da Edicin (1985). Editorial
Interamericana. Mxico, D.F. Pgs. 364-379, 177-185.
Divo Alejandro. Microbiologa Mdica 4ta Edicin (1990). Editorial
Interamericana. Mxico, D.F. Pgs. 424-427.
Pelczar (1982). Microbiologa. 4ta Edicin. Edit. Mc Graw Hill.
Garca Rodrguez J. A. (1996). Microbiologa Mdica General. Tomo1.
Edit. Harcourt Brace.
Basualdo Juan ngel (1996). Microbiologa Biomdica. Editorial Atlante.
http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/tetrationatocaldo.htm
Fecha de ltima consulta: 15 de Abril de 2008.
Manual Bsico de Microbiologa. Cultimed 2003. Panreac Qumica S.A.
http://www.scribd.com/doc/2069266/manual-microbiologia-2002-medios-de-cultivo

Fecha de ltima consulta: 15 de Abril de 2008.

Tepic Nay. 7/Abril/2008