PRCTICA N 05:

CURVA DE CRECIMIENTO DE
BACTERIOFAGOS
INTRODUCCIN
La curva de crecimiento viral es el resultado de la interaccin entre el virus y
la clula husped en la cual origina una nueva entidad, la clula infectada, cuyo
destino es muy variable debido a que depende tanto de la naturaleza de la clula
como de la naturaleza del virus. Las dos interacciones virus-clula que se
observan con mayor frecuencia son. La interaccin ltica, que culmina con la lisis
de la clula husped y la interaccin lisognica o transformante debido a que el
material gentico de la clula husped se va a ver afectada debido a la integracin
del genoma viral como producto la transformacin o alteracin permanente de la
clula husped en lo que respecta a su morfologa, su hbitat de desarrollo y la
forma en que interacta con otras clulas con las cuales se pone en contacto.
Teniendo en cuenta el desarrollo viral y sus etapas en el presente trabajo se
determinara una curva de crecimiento viral utilizando sustancias que afectan el su
desarrollo (cloroformo), el cual una vez puesto en contacto con dicha sustancia
con el inoculo viral ocasionara una inhibicin en el desarrollo del virus en placa.
Tambin se realizaran titulaciones de las ultimas diluciones con la finalidad
de observar si hay o no crecimiento, determinaremos los fagos absorbidos y el
porcentaje de estos. Tambin de calcular la multiplicidad de la infeccin es decir, el
nmero de genomas virales que infecta una clula, magnitud de lisis, incremento
del fago durante el ciclo de crecimiento y por ultimo determinaremos los fagos
producidos al final del ciclo.

OBJETIVOS

Determinar la curva de crecimiento de los bacterifagos.

Calcular las relaciones porcentuales de crecimiento del bacterifago.

1. MATERIALES
Materiales Biolgicos
Suspensin de E. coli (10-9).
Suspensin vrica a ttulo conocido.
Medios: Agar Agua, Agar Triptosa, Caldo Triptosa
Materiales y Equipos de Laboratorio

Tubos de ensayo (24 27)

Pipetas de dilucin
Placas Petri
Bao Mara
Nefelmetro de Mc. Farland.

2. PROCEDIMIENTO
Rotular cuatro grupos de seis tubos cada uno y agregar 2.7 ml. de caldo
triptosa. Y un grupo de 4 tubos de repuesto.
En un tubo colocar 1 ml. de fago a ttulo conocido y 1 ml. bacterias
estandarizadas, se lleva a bao Mara a 37C por 8 min. a este tubo se le
rotula con la letra A.
A: Adsorbidos.
A la vez del fago inoculado llevar 1 ml. a un tubo con tapa rosca que
contenga 2 ml. de cloroformo, mezclar y dejar en reposo 8 min. A este tubo
se le rotula con la letra I.
I: Inoculados.

 Despus de transcurrido los 8 min. tomar 1 ml. del contenido del tubo A y
colocarlos otro tubo que contenga 2 ml. de cloroformo. A este tubo rotular
con las letras FNA.
FNA: Fago No Absorbido.
Del tubo A coger 0.3 ml. y lo llevamos al primer tubo de la primera serie y
procedemos a hacer diluciones de 10-1 a 10-6.
De la ltima dilucin 10-6 tomar 0.1 ml y proceder a titular. A la placa de
esta titulacin rotularle con las letras FA.
FA: Fago Adsorbido.
Enseguida llevar la dilucin 10-6 llevar a bao Mara por espacio de 5
minutos.
Luego de retirar del bao Mara y se realiza una dilucin ms 10 -7 y este
se titula. A la placa de esta titulacin rotularle con 1.
La dilucin 10-7 llevar a bao Mara por espacio de 4 minutos. Transcurrido
este tiempo hacer una dilucin ms 10-8 y titular. A la placa de esta
titulacin rotularle con 2.
La dilucin 10-7 llevar a bao Mara a 37o C por espacio de 20 minutos.
Transcurrido este tiempo hacer dos diluciones ms 10 -8 y 10-9 y de esta
ltima (10-9) titular. A la placa de esta titulacin rotularla con FNP.
FNP: Fago de nueva produccin.
Del tubo rotulado con la letra I se diluye en la serie de tubos # 02 y la
ltima dilucin (10-6) se titula y la placa se rotula con las letras FI.
FI: Fago inoculado.
Del tubo rotulado con las letras FNA se diluye en la serie de tubos # 03 y
la ltima dilucin (10-6) se titula y la placa se rotula con las letras FNA.
La suspensin de E. coli de 10-9 se diluye en la serie # 04 y la ltima
dilucin se titula, en la placa se distribuye con la esptula de Drigalsky.

FRMULAS
F.A= F.I F.N.A

Fagos producidos al final del ciclo

de multiplicacin = F.N.P F.N.A

Multiplicidad
de infeccin

Incremento de fagos
durante el ciclo de =
F.N.P
crecimiento
F.I. F.N.A

F.A
C.C

Magnitud de lisis = F.N.P F.N.A

(F.I. F.N.A)C.C

%F.A.= F.A. X 100

F.I

LEYENDA

FA

FAGOS ABSORBIDOS.

F.N.A:

FAGO NO ABSORBIDO

F.N.P

FAGOS DE NUEVA PRODUCCIN

F.I

FAGOS INOCULADOS

3. RESULTADOS
No se realiz la prctica por falta de medios.

REFERENCIAS

Acton, J. 1967. Virologa. 1ra ed. Edit. Interamericana. Mexico

Davis B. 1980. Tratado de Microbiologa. 2da ed. Edit. Salvat Editores S. A.
Jawetz E., J. Melnick, E. Sdelberg. 1996. 15va ed. Edit. El Manual Moderno,
S. A. de C. V. Mexico