Laboratorio de Microbiología Ambiental ANTONIO

Universidad Nacional San Luis Gonzaga de Ica
ndice
1) Introduccin a la Microbiologa
Ambiental (6)
Informes de Laboratorio de Microbiologa Ambiental
Pgina
2) Microscopa y Mundo
Microbiano.. (7)
a) Introduccin
(7)
b) Objetivos
(7)
c) Fundamento
Terico
(8)
i) Estructura y Manejo del Microscopio
ptico. (8)
(1)Parte
Mecnica
(8)
(2)Parte
ptica
.. (8)
ii) Montaje y Enfoque de una Preparacin
Microscpica (9)
d) Procedimiento
Experimental
(12)
i) Materiales
. (12)
ii) Experimentacin
.. (12)
e) Conclusiones
(13)
f) Cuestionario
. (13)
3) Coloraciones Bacterianas: Coloracin
Gram. (16)
a) Introduccin
. (16)
b) Objetivo
.. (16)
c) Fundamento
Terico.
(17)
d) Procedimiento
Experimental
(17)
i) Materiales
. (17)
ii) Experimentacin
.. (18)
Pgina
e) Conclusiones
(22)
f) Cuestionario
. (22)
4) Medios de
Cultivo
. (26)
a) Introduccin
. (26)
b) Objetivos
(26)
c) Fundamento
Terico.
(27)
i) Clasificacin
. (27)
(1)Por su Aspecto
Fsico (27)
(2)Por su
Funcin
.. (28)
d) Procedimiento
Experimental
(29)
i) Materiales
. (29)
ii) Experimentacin
.. (29)
iii) Observaciones de las Muestras Realizadas en el
Laboratorio. (32)
(1)En el Agar
Sangre
(32)
(2)En el Agar
Nutritivo
(32)
(3)En el Agar Mc.
Conkey. (32)
(4)En el Agar Manitol
Malado.. (33)
(5)En el Caldo
Nutritivo.
(33)
e) Conclusiones
(34)
Pgina
f) Cuestionario
. (34)
5) Coloracin cido-Alcohol
Resistente.. (37)
a) Introduccin
. (37)
b) Objetivos
(37)
c) Fundamento
Terico.
(38)
d) Procedimiento
Experimental
(38)
i) Materiales
. (38)
ii) Experimentacin
.. (38)
e) Conclusiones
(41)
f) Cuestionario
. (42)
6) Aislamiento de Patgenos en Infeccin
Urinaria (44)
a) Introduccin
. (44)
b) Objetivos
(44)
c) Fundamento
Terico.
(45)
i) Factores Predisponentes a una
ITU (45)
ii) Sntomas de las
ITU
(45)
iii) Urocultivo
(46)
(1)Utilidad
Clnica
.. (46)
d) Procedimiento
Experimental
(46)
Pgina
i) Materiales
. (46)
ii) Experimentacin
.. (46)
e) Conclusiones
(50)
f) Cuestionario
. (50)
7) Control de los Microorganismos: El
Antibiograma (53)
a) Introduccin
. (53)
b) Objetivos
(53)
c) Fundamento
Terico.
(54)
i) Antibiticos
. (54)
ii) Antibiogramas
(55)
(1)Resistencia
Bacteriana
(56)
d) Procedimiento
Experimental
(57)
i) Materiales
. (57)
ii) Experimentacin
.. (57)
e) Tratamiento de
Datos
(60)
i) Patrn de
Efectividad
(60)
ii) Reporte de
Resultados.
(60)
iii) Resultado
.. (61)
f) Discusin de
Resultados.
(61)
Pgina
g) Conclusiones
(61)
h) Cuestionario
. (62)
8) Estudio de
Hongos
(66)
a) Introduccin
. (66)
b) Objetivos
(66)
c) Fundamento
Terico.
(67)
i) Hongos Comestibles, Medicinales y
Sagrados. (68)
ii) Los Hongos en la
Industria (68)
iii) Los Hongos en la
Medicina.. (68)
d) Procedimiento
Experimental
(69)
i) Materiales
. (69)
ii) Experimentacin
.. (69)
(1)Vistas
Microscpicas
. (69)
(2)Vistas
Macroscpicas
(70)
e) Conclusiones
(72)
f) Cuestionario
. (72)
9) Examen Microbiolgico: Identificacin de Coliformes Totales y
Fecales.. (75)
a) Introduccin
. (75)
b) Objetivos
(75)
c) Fundamento
Terico.
(76)
Pgina
i) Hbitat
(76)
ii) Los Coliformes como
Indicadores (76)
iii) Bacterias que Integran el
Grupo (76)
iv) Coliformes TermoTolerantes. (77)
v) Coliformes e Higiene de
Alimentos. (77)
d) Procedimiento
Experimental
(77)
i) Materiales
. (77)
ii) Experimentacin
.. (78)
(1)Identificacin de Coliformes
Totales. (78)
(2)Identificacin de Coliformes
Fecales. (81)
e) Conclusiones
(83)
10) Bibliografa
. (84)
Introduccin a la Microbiologa Ambiental

La microbiologa Ambiental es la ciencia encargada del estudio de los
seres ms diminutos denominados microorganismos y su
comportamiento en el desarrollo de bioprocesos que nos puedan
ayudar en la descontaminacin ambiental del suelo, agua o aire,
etimolgicamente estos seres vivos y pequeos que en su gran
mayora slo son visibles al poder resolutivo del microscopio,
Pgina
vienen de
las palabras mikros (pequeo), bios (vida) y logos
(estudio), es decir, es el estudio de la vida en su mnima expresin.
La Microbiologa Ambiental, es el estudio de la funcin y diversidad de
los microorganismos en sus entornos naturales. Incluye la Ecologa
Microbiana, la Geomicrobiologa, la diversidad microbiana y la
Biorremediacin.
Requiere fundamentalmente de un amplio conocimiento y
comprensin de los procesos bsicos de tipo fsico, qumico y
biolgico que se dan en la naturaleza para la solucin de problemas
ambientales, debido a esto es necesario un personal idneo que
afronte esta problemtica que integra casi todas las ramas del saber
y que deben confluir en un esfuerzo por lograr una adecuada relacin
del hombre con su entorno.
Se analiza la problemtica ambiental desde una amplia ptica
biolgica, con una visin integral de los componentes del medio
ambiente, de tal forma que se pueden formular polticas ambientales
basadas en procesos investigativos. Igualmente se realizan estudios
de impacto ambiental que son definitivos para la toma de decisiones
en relacin con la construccin de obras y otras actividades que
afecten el medio ambiente.
Microscopa y Mundo Microbiano

Introduccin
Pgina
Los microorganismos o microbios son un extenso y variado grupo de

seres vivos que debido a sus reducidas dimensiones, slo pueden ser
observados con el microscopio ptico, e incluso en algunas ocasiones
es necesario recurrir al microscopio electrnico.
Pueden existir como formas celulares aisladas, libres e
independientes, capaces de llevar a cabo sus procesos vitales de
reproduccin, generacin de energa y crecimiento, o como
agrupaciones celulares. Tambin son microorganismos los virus, que
son microscpicos pero no celulares.
Existen cinco grupos, que excepto por el tamao, no estn
relacionados entre s: bacterias, algas, hongos, protozoos y virus.
La diferencia entre ellos radica en su estructura: las bacterias son
clulas procariotas, las algas, hongos y protozoos son eucariotas,
(como animales y plantas).
La ciencia que
Microbiologa.
estudia
los
microorganismos
se
denomina
Objetivos
Identificar las partes del microscopio ptico y saber emplear su
correcto uso
Reconocer los diferentes microorganismos que existen en las
muestras tomadas y observadas en el microscopio ptico.
El alumno deber obtener una visin general de la materia en
estudio.
Fundamento Terico
Microscopio ptico es un microscopio basado en lentes pticos.
Tambin se le conoce como microscopio de luz, (que utiliza luz o
"fotones") o microscopio de campo claro. El desarrollo de este aparato
Pgina
suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek. Aumenta

el tamao de los objetos que son realmente muy pequeos y que no
se pueden ver a simple vista, a su vez puede ser monocular, binocular
entre otros.
Estructura y Manejo del Microscopio ptico:

Las partes esenciales que componen un microscopio ptico son:
Parte Mecnica:
Pie o soporte: sirve como base al microscopio y en l se
encuentra la fuente de iluminacin.
Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En
el centro se encuentra un orificio que permite el paso de la luz.
Sobre la platina hay un sistema de pinza o similar, para sujetar
el portaobjetos con la preparacin, y unas escalas que ayudan a
conocer qu parte de la muestra se est observando. La platina
presenta 2 tornillos, generalmente situados en la parte inferior
de la misma, que permiten desplazar la preparacin sobre la
platina, en sentido longitudinal y transversal respectivamente.
Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio.
Constituye el soporte de oculares y objetivos.
Revlver porta-objetivos: estructura giratoria que contiene los
objetivos.
Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se
debe tomar el microscopio para trasladarlo de lugar.
Tornillo macromtrico o de enfoque grosero: sirve para obtener
un primer enfoque de la muestra al utilizarse el objetivo de
menor aumento. Desplaza la platina verticalmente de forma
perceptible.
Tornillo micromtrico o de enfoque fino: sirve para un
enfoque preciso de la muestra, una vez que se ha realizado el
enfoque con el macromtrico. Tambin desplaza verticalmente
la platina, pero de forma prcticamente imperceptible. Es
el nico tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el
primer enfoque, al ir cambiando a objetivos de mayor aumento.
Parte ptica:
Oculares: son los sistemas de lentes ms cercanos al ojo del
observador, situados en la parte superior del microscopio. Son
cilindros huecos provistos de lentes convergentes cuyo
aumento se resea en la parte superior de los mismos
(normalmente 10X en los microscopios que se utilizarn en esta
Pgina
prctica). Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los

microscopios pueden se mono o binoculares.
Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan
en la parte inferior del tubo, mediante el revlver. En esta
estructura se pueden acoplar varios objetivos (ordenados de
forma creciente segn sus aumentos, en el sentido de las
agujas el reloj). Un anillo coloreado es distintivo de los
aumentos de cada objetivo, que tambin van reseados en el
lateral del mismo. Algunos objetivos no enfocan bien la
preparacin al aire, y se deben de utilizar con un aceite de
inmersin (normalmente van marcados con un anillo rojo).
Estos objetivos de inmersin no se utilizarn normalmente en
estas prcticas.
Condensador: sistema de lentes convergentes que capta los
rayos de luz y los concentra sobre la preparacin, de manera
que proporciona mayor o menos contraste. Se regula en altura
mediante un tornillo (letra J de la figura).
Fuente de iluminacin: en los microscopios a utilizar, el aparato
de iluminacin est constituido por una lmpara halgena de
bajo voltaje (12V) situada en el pie del microscopio. La luz
procedente de la bombilla pasa por un reflector que enva los
rayos luminosos hacia la platina.
Diafragma o iris: sobre el reflector de la fuente de iluminacin.
Abrindolo o cerrndolo permite graduar la intensidad de la luz.
Transformador: ya que el voltaje de la bombilla es menor que el
de la red, es necesario para enchufar el microscopio. Algunos
modelos ya lo llevan incorporado en el pie del microscopio.
Adems, el transformador dispone de un potencimetro para
regular la intensidad de la luz.
Montaje y Enfoque de una Preparacin Microscpica:

Antes de observar la preparacin al microscopio, esta debe de ser
montada sobre vidrio.
Para
ello
existen
dos
piezas
de
vidrio
denominadas portaobjetos (porta), que, como su nombre indica, es el
soporte sobre el que va la muestra, y cubreobjetos (cubre)
que siempre ha de colocarse sobre la muestra. Una vez colocada la
muestra en el porta, se debe aadir una gota de agua, o de la
solucin acuosa pertinente, antes de colocar el cubre, para evitar
interfases agua-aire, que provocan zonas ciegas.
Para enfocar la preparacin se ha de seguir de forma minuciosa el
protocolo descrito debajo de la figura.
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Consejos prcticos:
En los microscopios que requieren transformador, el enchufe a la red
y desenchufe debe hacerse sobre el transformador, y nunca debe
desenchufarse el microscopio del transformador.
Se debe mantener apagada la luz del microscopio siempre que no se
est utilizando, ya que la vida media de la bombilla es corta.
Siempre se debe comenzar el enfoque con el objetivo de menor
aumento.
Anotar siempre el nmero de aumentos con el que se observa la
preparacin. Para calcularlo basta multiplicar el nmero de aumentos
del objetivo por el de los oculares. Hacer esquemas y dibujos de lo
observado con cada aumento.
Salvo que se indique lo contrario no utilizar nunca el objetivo de
inmersin, ya que se requiere un aceite especial sin el que, adems
de no enfocar bien, existe una gran probabilidad de daar la lente al
rozar con el cubreobjetos.
Los pasos a seguir para la perfecta utilizacin del microscopio son las
siguientes:
1. Proyectar la luz a travs del espejo con tal de que el espacio
observable en la lente se encuentre con la debida iluminacin
para observar las muestras.
2. Colocar la preparacin sobre la platina de forma que la
estructura a observar quede en el orificio central de la platina.
3. Poner el objetivo de menor aumento cuyo amplio campo visual
facilita el hallazgo de estructuras importantes.
Pgina
4. Subir la pletina accionando el tornillo macromtrico y mirando

la preparacin desde fuera hasta alcanzar el tope superior. En
ningn caso tocar la preparacin con los objetivos.
5. Mirando por los oculares, bajar lentamente la platina con el
tornillo macromtrico hasta conseguir ver el objeto lo ms
ntido posible.
6. Ajustar el enfoque con el tornillo micromtrico hasta verlo
claramente.
Para observar la preparacin a mayores aumentos cambiar de
objetivo
con
un
simple
giro
del
revolver.
Las
pequeas variaciones que observis en el enfoque se producen al
cambiar de objetivo y se corrigen con el micro.
Para observar otros campos, desplazar la preparacin moviendo los
tornillos de la platina.
Para cambiar la preparacin:
1. Bajar la platina.
2. Colocar el objetivo de menor aumento
3. Quitar la preparacin y colocar la siguiente
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Procedimiento Experimental
Materiales:
Microscopio compuesto
Porta y cubre objetos
Palillo
Hisopos
Agua estancada
Experimentacin:
Colocar en el porta objeto una gota de agua estancada con ayuda del gotero, luego
colocar sobre ella el cubre objeto, luego enfocar y observar en el microscopio.
Mosquito en estado larvario:
X100
Lnea ondulatoria del agua:
X100
Cymbella
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X400
Conclusiones
La prctica nos da a conocer los usos que tiene un microscopio, su
manejo; adems los microorganismos que existen en el agua
estancada junto con sus caractersticas, formas y tamaos. Y con el
empeo empleado logramos identificarlos para posteriormente estar
capacitados al momento de utilizar el microscopio ptico.
Cuestionario
1. Qu es poder de resolucin?
El poder resolutivo es la capacidad que tiene un microscopio de
percibir por separado dos puntos pequeos, adyacentes y cercanos.
Asimismo, es la capacidad para percibir detalles, aumenta a medida
que disminuye la distancia que separa dichos puntos. Es decir, si dos
puntos distan 1cm uno del otro y yo los veo como un solo punto
borroso tendr menor poder resolutivo que alguien que los distingue
por separado o que distingue perfectamente puntos que distan de
0,5cm entre s.
2. Con qu finalidad se utiliza el microscopio compuesto?
Microscopio Compuesto o tambin microscopio ptico que tiene ms
de una lente de objetivo, tambin se le conoce como microscopio de
luz, (que utiliza luz o "fotones").Aumenta el tamao de los objetos que
son realmente muy pequeos y que no se pueden ver a simple vista,
su finalidad es poder hacer observaciones con diferentes aumentos
en un solo microscopio.
Pgina
Este instrumento ha sido de gran utilidad, sobre todo en los campos

de la ciencia donde la estructura y la organizacin microscpica es
importante, incorporndose con xito a investigaciones dentro del
rea de la Qumica (en el estudio de cristales), la Fsica (en la
investigacin de las propiedades fsicas de los materiales),
la Geologa (en el anlisis de la composicin mineralgica de algunas
rocas) y en el campo de la Biologa (en el estudio de estructuras
microscpicas de la materia viva.
Se utiliza en laboratorios de histologa y anatoma patolgica, donde
la microscopa permite determinadas aplicaciones diagnsticas como
el diagnstico de certeza del cncer, numerosas estructuras
cristalinas, pigmentos, lpidos, protenas, depsitos seos, entre otras.
3. Cul es la importancia que tiene el diafragma en el
microscopio?
Tambin conocido como el iris, que es un disco giratorio que tiene
como funcin graduar la cantidad de luz que llega a la muestra.
4. Qu diferencias
electrnico?
hay
entre
el
microscopio
Microscopio ptico
Imagen dada por
Fuente
Elementos
Estudian clulas
Observacin de la
muestra
Lmite de
resolucin
Longitud de onda
Aumento
Nivel de
observacin
Interferencia de rayos
luminosos
Luz(fotones)
Lentes: ocular,
objetivo,
condensador
Vivas o muertas
Coloreada o no
2500 A a 0.25
micrmetros
5500 A (trmino
medio)
500X a 1500X
Estructuras
ptico
Microscopio
Electrnico
Dispersin de
electrones
Filamento de tungsteno
Bobinas
electromagnticas
Muertas
Sin coloracin o con
aumento de contraste
con tcnicas especiales
10 A a 2A
0.056 A
20000X a 160.000X con
lente
intermedia.1.000.000X
o ms con aumento
fotogrfico
Ultraestructura
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5. Qu importancia tiene el estudiar y observar

microorganismos en muestras biolgicas frescas?
los
En trmino general si, por que la materia se puede descomponer,

sufrir cambios y dar resultados errneos. Tanto el material biolgico
como las preparaciones deben estar en buenas condiciones.
Cuando se hace una preparacin y se deja enfrascada por mucho
tiempo, tiende a cambiar el pH y esto puede afectar los
experimentos. Por ello tambin depende del estudio, por ejemplo se
puede estudiar una muestra de un microorganismo en una placa
guardada hace aos, obviamente que ha sido guardada usando
ciertas tcnicas para ser conservada.
Sin embargo si se trabaja con material viejo puede ser que las
clulas, tejidos, etc. hayan sufrido un cambio pese a las condiciones
naturales, o simplemente mueran
6. Escribe el nombre
microscopio compuesto
de
cada
una
de
las
partes
del
Sistema Mecnico: Conjunto de piezas que sirven de soporte a las

lentes y dems elementos (pie o base, columna, mecanismo de
enfoque, platina, revolver, tubo).
Sistema ptico: Conjunto de lentes responsables del poder de
aumento y resolucin (objetivos y ocular).
Sistema de Iluminacin: Elementos que producen las radiaciones (luz
visible o no) y transmiten, reflejan y regulan tanto la intensidad como
la cantidad de rayos que van a incidir sobre el espcimen (lmpara o
fuente de iluminacin, espejo, condensador y diafragma).
Accesorios: Son aditivos que permiten extender las capacidades del
instrumento (cmaras fotogrficas, de video, computadoras,
accesorios para dibujar, entre otros).
Pgina
Coloraciones Bacterianas: Coloracin

Gram
Introduccin
Existen numerosos colorantes, y en su mayora son compuestos
orgnicos naturales que tienen alguna afinidad especfica por los
materiales celulares. Los colorantes que se utilizan usualmente son
molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con
intensidad con los componentes celulares cargados negativamente,
tales como los cidos nucleicos y los polisacridos (azul de metileno,
el cristal violeta y la safranina); otros colorantes son molculas
cargadas negativamente (aniones) los que se combinan con los
elementos celulares cargados positivamente, como son las protenas
(Eosina, la fucsina cida y el rojo Congo). Existe otro grupo de
colorantes conformado por sustancias liposolubles; los colorantes de
este grupo se combinan con los materiales lipdicos de la clula,
usndose generalmente para revelar la localizacin de los depsitos
de grasa (negro de Sudn).
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Objetivo
Mostrar la importancia de una tincin para la diferenciacin de
bacterias basndose en las propiedades estructurales de la
pared celular, aplicando el mecanismo de la coloracin de
Gram, con microorganismos conocidos y desconocidos.
Fundamento Terico
La tincin Gram es empleada en microbiologa para la visualizacin de
bacterias en muestras clnicas. Tambin se emplea como primer paso
en la diferenciacin bacteriana. El examen con microscopio ptico de
preparacin con tincin de Gram se emplea de rutina para determinar
la forma de las bacterias. Las formas comunes son cocos, bacilos y
formas espiraladas
Las bacterias pueden diferenciarse con esta tincin en dos grupos.
Los microorganismos Gram positivos se tien de azul, mientras que
aproximadamente un tercio de los cocos, la mitad de los bacilos y
todos los organismos espiralados se tien de rojo y se dice que son
Gram negativos.
Las aplicaciones ms comunes de la coloracin de Gram son las
siguientes:
La presencia de cocos Gram positivos agrupados sugiere
estafilococos; en cadenas sugiere estreptococos; en forma de
lanceta a los diplococos
La presencia de diplococos Gram negativos son caractersticas
de especies de Neisseria
Los bacilos Gram positivos grandes sugieren especies de
Bacillus o Clostridium, los bacilos Gram positivos pequeos
sugieren especies de Listeria o una de las corineiformes
(difteroides)
Los bacilos Gram negativos son las bacterias ms comunes
halladas en los laboratorios clnicos e incluyen a
Pgina
Enterobacteriaceae, bacilos no fermentados y especies de

Haemophilus.
El valor diagnstico de esta tincin es variable; normalmente
permite una buena orientacin al microbilogo para seleccionar
las tcnicas de cultivo ms adecuadas y tambin tiene valor en
orientar hacia un diagnstico etiolgico, en especial para
instaurar un tratamiento inicial.
Materiales:
Asa de Kolle
Microscopio
Porta objetos
Aceite de inmersin
Cristal violeta
Alcohol acetona
Safranina
Lugol para Gram
Experimentacin:
1. Para el presente experimento tomamos dos muestras de la
concentracin microbiana bucal de dos alumnas.
2. Colocamos una pequea gota de agua en el centro de dos

portaobjetos limpios. Es necesaria muy poca cantidad de agua,
por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el
extremo curvo de su filamento queda retenida una mnima gota
de agua, que resulta suficiente.
Pgina
3. Flamea el asa de siembra y toma en condiciones aspticas una

pequea cantidad del cultivo bacteriano bucal y transfirelo a la
gota de agua.
4. Remueve la mezcla con el asa de siembra hasta formar una

suspensin homognea que quede bastante extendida para
facilitar su secado, luego esterilizamos el asa flamendolo en el
mechero para eliminar componentes que se pudieron tomar en
la muestra anterior y nuevamente tomamos una pequea
cantidad de cultivo bacteriano bucal de la otra persona y la
ponemos en otra placa con una gota de agua destilada.
5. Acerca la lmina a la llama del mechero para que la muestra se
seque en forma paulatina para ambas lminas. En este caso
hay que tener mucha precaucin de no calentar demasiado la
lmina, pues las clulas pueden deformarse o romperse.
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6. Teir con cristal violeta por 1 minuto.
7. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.
8. Cubre con Lugol por 1 minuto.
9. Lava con agua el exceso de Lugol.
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10.
Decolora con alcohol-acetona o simplemente con alcohol
hasta que la preparacin deje de perder color (30seg).
11.
Lava con abundante agua para eliminar el resto de
disolvente.
12.
Tie con safranina 1 minuto.
13.
Lava con agua para eliminar el colorante de contraste.
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14.
Seca la preparacin.
15.
Examina al microscopio con aceite de inmersin (aceite
de cedro) y fijndote sobre todo en el color de cada
preparacin.
En la primera muestra se observa:
16.
Aqu se puede observar cuerpos largos de color rojo que
evidencia la presencia de tejido epitelial, tambin se puede
observar cinco cocos de color violeta. Todo esto pudo ser
observado con un aumento de X100.
X100
En al segundo amuestra se observa:
17.
Aqu se puede observar cuerpos
de color rojo que
evidencia la presencia de tejido epitelial, y un solo coco de color
violeta. Todo esto pudo ser observado con un aumento de X100.
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X100
Conclusiones
La tincin de Gram es una herramienta muy til en el laboratorio de
microbiologa as como en los anlisis clnicos y diagnostico medico
siendo ineludible conocer su fundamento y procedimiento, para poder
tener una correcta interpretacin de los datos que nos otorga la
diferenciacin de Gram positiva y negativa concluyendo que debido a
la estructura de sus paredes celulares tendrn o no propiedades
patolgicas diferentes.
Cuestionario
1. Qu es un colorante? Tipos
Un colorante es una sustancia que es capaz de teir las fibras
vegetales y animales. Los colorantes se han usado desde los tiempos
ms remotos, emplendose para ello diversas materias procedentes
de vegetales (crcuma, ndigo natural, etc.) y de animales (cochinilla,
moluscos, etc.) as como distintos minerales.
En qumica, se llama colorante a la sustancia capaz de absorber
determinadas longitudes de onda de espectro visible. Los colorantes
son sustancias que se fijan en otras sustancias y las dotan de color de
manera estable ante factores fsicos/qumicos como por ejemplo: luz,
lavados, agentes oxidantes, etc.
Tipos:
Segn su origen:
Colorantes naturales: como la hematoxilina, el carmn y la orcena.

Colorantes sintticos o artificiales: como el azul de metileno, la
safranina, azul de anilina, el naranja G, etc.
Pgina
Segn sus propiedades qumicas:

La mayora de los colorantes empleados en histologa actan como
cidos o
bases y tienden a formar uniones salinas con radicales
ionizables presentes en los tejidos.
Colorantes cidos: como por ejemplo la eosina, colorante cargado en
forma negativa, se une a componentes celulares cargados
positivamente. Estos componentes cargados positivamente se
denominan acidfilos, porque tienen afinidad por los colorantes
cidos.
Colorantes bsicos: como por ejemplo el azul de metileno, colorante
cargado positivamente, se une a componentes celulares cargados
negativamente. Estos componentes cargados negativamente se
denominan basfilos, porque tienen afinidad por los colorantes
bsicos.
Colorantes neutros: son colorantes en los que la porcin cida y la
bsica colorean. Tien las partes bsicas de una clula de un color y
las partes cidas de otro. Tien el ncleo de un color y el citoplasma
de otro. Ej.: el eosinato de azul de metileno.
Colorantes indiferentes: tien aquellas estructuras o sustancias que
los disuelven ms fcilmente que el lquido en que estn preparados.
Un ejemplo es el colorante sudan, un colorante de lpidos.
2. Con qu finalidad se fija la muestra de microorganismos
en el portaobjetos?
Para preservar su estructura morfolgica externa en caso la fijacin se
haya realizado a travs del calor y en caso se haya realizado fijacin
qumica con agentes como el etanol o el cido actico es para
preservar su estructura interna. La fijacin dejar al microorganismo
en un lugar determinado, lo que facilitar su observacin al
microscopio.
3. Qu tipos de coloraciones conoces, descrbelos.
Tincin de Gram: utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m,
lavado con alcohol, Safranina 30 seg.).
Tincin de Flagelos: Se usa mordiente el cual aumenta el tamao del
microorganismo.
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Tincin de Giensa: el colorante se aplica a un frotis de sangre y se

utiliza cuando se sospeche de protozoos en la sangre para observar
materias ncleos de las clulas.
Tincin cido Resistente: Una vez teidos, conservan su color
resistiendo al lavado con cido mineral reducido. En esta tincin las
bacterias cido resistentes conservan el colorante primario color rosa
o rojo, los dems microorganismos son decolorados por el cido y
toman el color azul.
Tincin de Esporas: Se usa verde de malaquita en contraste con
safranina.
Tincin de Cpsula: Colorante nigrosuna, aqu
microorganismos encapsulados creando resistencias.
se
observa
4. Por qu es necesario emplear aceite de inmersin para la

observacin de los microorganismos?
Es un aceite hecho principalmente a base de aceite mineral que se
utiliza cuando quieres ver en el microscopio algn material fijado a un
portaobjetos sin utilizar cubreobjetos, es necesario para ver frotis
bacterianos, se coloca una gota sobre el frotis fijado al portaobjetos y
sumergir la lente del microscopio para ser observado.
5. De los reactivos que utilizaste para la tincin de Gram, El
cristal violeta a qu estructuras de la bacteria colorea?
En las Gram Positivas tie la pared bacteriana, penetra por sus poros
tiendo toda la clula en cambio en las Gram Negativas slo tie la
pared bacteriana, sucede slo por encima.
6. Por qu se dice que la coloracin Gram es de orientacin?
La coloracin de Gram como herramienta diagnstica ya que en
primera instancia permite caracterizar tamao, forma y/o agrupacin
bacteriana, la reaccin tintorial y el germen predominante en una
infeccin o en muestras contaminadas con biota normal.
En esta coloracin tambin es relevante considerar la presencia de la
respuesta leucocitaria o respuesta inflamatoria y otro tipo de clulas
como las epiteliales, con el fin de orientar la presencia de infeccin
aguda o crnica y en algunos casos evaluar la calidad de la muestra
clnica como sucede con las muestras de esputo.
7. Menciona cinco bacterias Gram positivas y escribe la
enfermedad que causa cada una de ellas.
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Bacillus Anthracis
ntrax
Clostridium Tetani
Ttano
Staphylococcus Aureus
Conjuntivitis
Streptococcus pneumoniae
Meningitis, Neumona
Clostridium Botulinum
Botulismo
8. Menciona cinco bacterias Gram negativas y escribe la

enfermedad que causa cada una de ellas.
Salmonella Typhi
Fiebre tifoidea
Vibrio Colerae
Clera
Neisseria Gonorrhoeae
Gonorrea
Escherichia Coli
Infecciones
urinarias
Pseudomona Aeruginosa
Infeccin en heridas en
especial de quemaduras
en
las
vas
Medios de Cultivo
Pgina
Introduccin
En los laboratorios de microbiologa se utilizan diferentes tipos de
medios de cultivo que pueden ser preparados en forma lquida o en
forma slida. Usualmente para preparar un medio slido se parte de
un medio lquido al que se le aade un agente solidificante como el
agar, la gelatina o la slicagel.
Los medios de cultivo se pueden clasificar de acuerdo a la naturaleza
de sus constituyentes en: Medios naturales o complejos: constituidos
por sustancias complejas de origen animal o vegetal, las que son
usualmente complementadas por la adicin de minerales y otras
sustancias.
Objetivos
Realizar el cultivo de microorganismos con diferentes muestras
para su multiplicacin e identificacin.
Tener dominio en la correcta preparacin de un medio de
cultivo.
Conocer las finalidades de utilizar medios de cultivos
Pgina
Fundamento Terico
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de
microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el medio de
cultivo.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de
cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son:
temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuado, as
como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo
debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y
debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos
similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano.
Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de
extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.
El Agar es un elemento solidificante muy empleado para la
preparacin de medios de cultivo. En los diferentes medios de cultivo
se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como
carbohidratos, suero, sangre completa, bilis, etc.
Los carbohidratos se adicionan por dos motivos fundamentales: para
incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de
fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El
suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento
de los microorganismos menos resistentes.
Clasificacin:
Por su Aspecto Fsico:
Medios lquidos:
Se emplean fundamentalmente para:
Cultivar los microorganismos y obtener grandes cantidades de
los mismos. La multiplicacin bacteriana en los medios de
cultivos lquidos se manifiesta generalmente por el
enturbiamiento de ste;
Estimular y promover la seleccin de algn o algunos
microorganismos e impedir que otros se multipliquen.
Pgina
Identificar al microorganismo estudiado mediante pruebas

bioqumicas.
Medios semislidos:
Se utilizan para identificaciones bioqumicas y averiguar si el germen
estudiado es mvil. Los medios semislidos tienen una consistencia
blanda. (0.5 gramos de agar por 100 ml)
Medios slidos:
Se utilizan para obtener colonias aisladas de microorganismos. En los
medios de cultivos slidos la multiplicacin bacteriana se manifiesta
por una formacin macroscpica denominada colonia bacteriana, que
es el resultado de la multiplicacin de una sola clula bacteriana. (2
gramos por 100 ml)
Por su Funcin:
Medios de Cultivos Comunes o Bsicos:
Se caracterizan por que el material nutritivo, permite el crecimiento
de diferentes especies de bacterias, constituyen la base para la
preparacin de otros medios. Como ejemplo pueden citarse el caldo
nutritivo y el agar nutritivo.
Medios de Cultivos Especiales:
Entre estos se encuentran:
Medios Enriquecidos: En general son los mismos medios bsicos
a los que se les agrega una sustancia enriquecedora como
sangre, suero, etc. El uso est orientado especialmente a
obtener buen desarrollo de bacterias exigentes, se utilizan en
primera instancia en el aislamiento bacteriano de productos
patolgicos. Los medios de este tipo de uso ms frecuente son:
Agar sangre, Agar chocolate.
Medios Selectivos: Son medios que contienen sustancias que
impiden el crecimiento de algunas especies microbianas y
permiten el desarrollo de otras. Se incluyen en este grupo el
agar cristal violeta para el aislamiento de bacterias Gram (-) y
el agar telurito de potasio para el aislamiento de bacterias
Gram (+).
Medios de Cultivos Diferenciales: Se emplean para demostrar
alguna propiedad bioqumica de la bacteria como degradacin
de carbohidratos, protenas, etc., contienen indicadores de
cido base, redox o sustancias que detectan cambios en el
Pgina
medio o en las caractersticas tpicas de las colonias. Entre los

de uso ms corriente se encuentran: Agar fierro-triple-azcar
(TSI agar) Medio de SIM.
Medios de Transporte: Estos medios impiden que se altere la
proporcin original de la flora microbiana en los especmenes,
es decir, que no permiten la multiplicacin de las bacterias
mantenindolos viables.
Materiales:
Placas con Agar nutritivo.

Placas con Agar Mac Conkey.
Placas con Agar Manitol Salado.
Placas con Agar sangre.
2 Mecheros.
Caja de hisopos estriles (sin abrir).
Toallas de papel.
Marcador permanente o lpiz de cera.
Un desinfectante con 70% de solucin de alcohol, 10% de una
solucin blanqueadora, jabn lquido Extran o alkox.
Experimentacin
1. En esta actividad escogers un fomite (cualquier objeto
inanimado que pueda causar enfermedad en los organismos por
contener microorganismos como: la manija, el marco, el control
remoto de la televisin, una moneda). Este fomite ayudar a
confirmar la presencia de microbios y los efectos de un
desinfectante por medio del crecimiento de colonias de
bacterias en un medio de cultivo en placas de Petri.
2. Primero tomamos un hisopo estril lo humedecemos en el caldo
nutritivo y tomamos luego una muestra bucal y tapamos. Luego
con el asa de siembra esterilizada con ayuda del mechero
sembramos en el agar sangre.
Pgina
3. Luego realizamos otra siembra realizando los mismos

procedimientos pero esta vez nuestra muestra la tomaremos de
una mano en el agar nutritivo.
Pgina

procedimientos pero en esta ocasin tomaremos muestra de
una cara en el agar Mac conkey.

procedimientos pero en esta vez tomaremos muestra de una
moneda en el agar manitol salado.
6. Luego estas muestras la llevamos a la estufa de incubacin por

un periodo de tiempo de 24 a 48 horas a una temperatura de
36 C.
Pgina
Observaciones de las Muestras Realizadas en el

Laboratorio:
En el Agar Sangre (Muestra Bucal):
En esta muestra se puede observar que ha habido un cambio e el
color del agar nutritivo, esto se debe a que los microorganismos al
irse desarrollando han ido tomando los nutrientes del medio haciendo
que este cambie de color.
En el Agar Nutritivo (Muestra de la Mano):

En esta muestra se puede apreciar que en el tiempo que se le que se
le dio de incubado han podido desarrollarse muchos microorganismos
y que en la presente imagen se pueden apreciar amanera de puntos,
cada punto es una colonia de microorganismos que se le conoce con
el nombre de UFC (unidad formadoras de colonias).
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En el Agar Mc. Conkey (Muestra de la Cara):

En esta muestra no se puede apreciar ningn crecimiento de
microorganismos esto es porque el agar Mac Conkey es un medio de
cultivo solo para bacterias Gram negativas que se pueden encontrar
en el intestino y en el material fecal.
Si es que no hubo crecimiento es porque nuestra muestra que
tomamos de la cara no contienen bacteria Gram negativas es decir no
contiene material fecal.
En el Agar Manitol Malado (Muestra de una Moneda):

En esta muestra se pueden apreciar muchas unidades formadoras de
colonias e inclusive se puede hacer otra observacin en la cual se
observa en la muestra que hay dos tipos de unidades formadoras de
colonias una s de color amarillo y otras de color blanco.
Las de color amarilla son los sthapylocoocus que han encontrado en
el agar manitol una fuente ptima de nutrientes para su crecimiento.
Pgina
En
el Caldo Nutritivo:
en nuestro caldo nutritivo se

podr
observar
un
color
amarillo y turbia esto es porque
servido para que las muestras
que haban sido capturadas del
sitio en donde se encontraban
puedan ser capturadas sin
ningn problema de cambio de
lugar.
ha
Conclusiones
De acuerdo con lo realizado en la presente prctica se concluye que
es de gran importancia preparar adecuadamente los medios de
cultivo, aadir la cantidad de solucin exacta y disolverla
correctamente para obtener los resultados esperados; adems dejar
incubar el tiempo pertinente para que de esta manera se puedan
observar los microorganismos deseados y de esa manera pueda
servir de mucho lo experimentado en el laboratorio.
Cuestionario
1. Qu es metabolismo bacteriano?
Es el conjunto de reacciones bioqumicas catablicas y anablicas que
transformarlas sustancias nutritivas para obtener energa y los
nutrientes (carbono, por ejemplo) que necesita para vivir y
reproducirse.
Anabolismo: Reacciones de sntesis.
Catabolismo: Degradacin de compuestos.
Pgina
2. Qu finalidad tiene utilizar medios de cultivo slidos?

Para la identificacin de microorganismos, observar su crecimiento en
sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El
material alimenticio en el que crecen los microorganismos es en su
Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el
Cultivo. Cuando una clula aislada e inmvil comienza a crecer sobre
un substrato slido, el resultado del crecimiento al cabo del tiempo es
una colonia. Por consiguiente, se denomina unidad formadora de
colonia (UFC) a una clula bacteriana viva y aislada que si se
encuentra en condiciones de substrato y ambientales adecuadas da
lugar a la produccin de una colonia en un breve lapso de tiempo. Se
han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.
3. Escribe el nombre de 5 medios de cultivo que se emplean
en el laboratorio de microbiologa.
Mac Conkey
Agar Sangre
Agar Polivitex
Agar Nutritivo
Agar Manitol Salado
4. Por qu la base de muchos medios de cultivo es una

infusin de extractos de carne y peptona?
Porque un medio de cultivo adecuado para la investigacin
microbiolgica ha de contener, como mnimo, carbono, nitrgeno,
azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias
ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento.
Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para
ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones
qumicas que tengan lugar. Todas estas sustancias se suministraban
originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o
extractos de levadura. Sin embargo, la preparacin de estas
sustancias para su aplicacin a los medios de cultivo provocaban la
prdida de los factores nutritivos lbiles y actualmente, la forma ms
extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona
que, adems, representa una fuente fcilmente asequible de
nitrgeno y carbn ya que la mayora de los microorganismos, que no
suelen utilizar directamente las protenas naturales, tienen capacidad
de atacar los aminocidos y otros compuestos ms simples de
nitrgeno presentes en la peptona. En conclusin la infusin de
extractos de carne y peptona proporcionan los nutrientes necesarios
para el crecimiento de los microorganismos. Adems de que los
Pgina
costos
al
utilizar
este
tipo
de
infusiones
se
reducen
considerablemente y su eficiencia es alta comparada con otros
componentes que suplementen aminocidos.
5. Qu medios de cultivo se emplean para aislar bacterias
causantes de tuberculosis, meningitis, tifoidea y neumona?
Las bacterias que causan la meningitis pueden ser aisladas en los
siguientes medios de cultivo: Agar sangre, El Agar Levine o Agar EMB
Levine, Mc Conkey, y Agar Thayer Martin
Las bacterias que causan la neumona pueden ser aisladas en los
siguientes medios de cultivo: Agar chocolate, Agar sangre, Mc
Conkey, (Neumonia)
La bacteria causante de la tuberculosis puede ser aislada en medios
slidos como: Medio Middlebrook 7H11, 7H10, Medio Lwenstein
Jensen y el Medio Ogawa. Y medios Lquidos como: Middlebrook 7H9.
La bacteria causante de la tifoidea puede ser aislada en los siguientes
medios de Cultivo: EMB o en sulfito de bismuto.
6. Cmo podemos controlar la contaminacin microbiana?
Para iniciar un cultivo celular se debe mantener las condiciones de
asepsia (limpieza total), puesto que no se puede eliminar los
contaminantes, o es muy difcil sin modificar la vida de las clulas de
cultivo. Quizs un fungicida pueda servir, pero no es inocuo para el
cultivo. El motivo por el cual es tan difcil eliminarlo luego de la
contaminacin es porque la tasa de crecimiento de las clulas
animales es mucho menor al de la mayora de los contaminantes
comunes.
Ahora, para evitar que esto ocurra, es, para empezar a realizar los
experimentos en una zona aislada, usada nicamente con el fin de
cultivar tejidos. Si se tiene la posibilidad de conseguirte los
laboratorios con sus respectivas tecnologas para el cultivo, mucho
mejor. stas son cabinas de flujo laminar, incubadoras, sistemas de
crio-gnesis, etc. Pero lo importante para evitar la contaminacin es
la cabina de flujo laminar, que cambia la presin al interior del
laboratorio, aumentndola, para evitar la entrada de aire
contaminado. Si no es posible conseguir estos instrumentos, al menos
se podra hacer lo primero, trabajar en un sector aislado, ocupado
solamente para el cultivo de ese tipo celular, para evitar
contaminacin cruzada y el medio de cultivo debera tener ciertas
sustancias que lo protejan de posibles agentes patgenos.
Pgina
7. Describa las caractersticas del agar-agar

Gel termorreversible.
Gelifica entre 35 y 43C.
Poderoso agente gelificante.
Se derrite entre los 85 y 95C.
Excelente estabilizador de alimentos.
Forma geles en bajas concentraciones.
Se puede disolver a bajas temperaturas.
No aporta caloras, es ligeramente saciante y laxante.
Es un hidro-coloide completamente soluble en agua a 100C.
Al contacto con agua fra se hincha y puede aumentar su volumen 30
veces.
Es el nico hidro-coloide que ofrece gelatinas, que puede transportar
temperaturas de esterilizacin.
Coloracin cido-Alcohol Resistente
Introduccin
Los bacilos tuberculosos son difciles de teir con la tincin de Gram,
y se observan como bacilos Gram positivos con tincin irregular. Estos
microorganismos una vez coloreados son resistentes a la decoloracin
cido-alcohlica y por eso se denominan Bacilos cido Alcohol
Resistentes (BAAR)
Pgina
El gnero Mycobacterium incluye ms de 100 especies que pueden

clasificarse en seis grupos desde el punto de vista bacteriolgico,
pero con fines didcticos se dividen en tres apartados: Complejo
tuberculosis. Incluye las especies M. tuberculosis, Mycobacterium
bovis y Mycobacterium africanum, productoras todas ellas de
tuberculosis. Se incluye tambin Mycobacterium microti, productor de
tuberculosis en rata.
Objetivos
Se identificaran los pasos correctos para la identificacin del
bacilo de la tuberculosis.
El alumno sabr las caractersticas morfolgicas del bacilo de la
tuberculosis y su resistencia a la desecacin.
Fundamento Terico
Es la propiedad fsica de algunas bacterias a la resistencia a la
decoloracin de la fucsina bsica (rojo) la cual penetra en la clula
por accin del fenol y el calor.
Las bacterias cido-alcohol resistentes no pueden ser clasificados
segn la tincin de Gram, la cual es la tcnica ms comn en la
microbiologa contempornea, sin embargo puede ser teido con
algunas tinciones concentradas combinadas con calor. Una vez teida
tiene la capacidad de resistir la decoloracin de una combinacin de
alcohol- cido, el cual es el decolorante ms comn en los protocolos
Pgina
de tincin de bacterias, de donde viene el nombre Alcohol-cido

resistente.
La alta concentracin de cido miclico en la pared celular es la
causante, como las bacterias del gnero Mycobacterium, de la baja
absorcin y alta retencin de la tincin (fucsina). La forma ms comn
para poder identificar este tipo de bacterias es a travs de la tcnica
de tincin de Ziehl-Neelsen, donde la bacteria queda teida en rojo y
se agrega una tincin de contraste de nombre azul de metileno la
cual permite apreciar de mejor forma la bacteria.
Materiales:
Esputo de tuberculoso procesado en autoclave.

Fucsina fenicada de Ziehl- Neelsen.
Azul de metileno.
Alcohol acidulado.
Fenol al 5%.
Experimentacin:
1. Colocar el esputo en la lmina porta objetos por frotis.
2. Fijamos la muestra con ayuda del mechero.
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3. Cubre la preparacin con fucsina fenicada, Calienta la

preparacin en un mechero Bunsen durante 5 minutos no
fijndolo directamente al mechero solo pasndolo, no debe
hervir. y esperamos que enfri unos momentos.
4. Lava con agua el resto de colorante.

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5. Decolora con cido-alcohol, hasta que adquiera un tenue color

rosa. Lava con agua para que no prosiga la decoloracin.
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6. Tie con azul de metileno por 1 minuto. Lava con agua el resto
de colorante.
7. Seca la preparacin al medio ambiente.
8. Examina al microscopio con objetivo de inmersin por 100 X

(aceite)
Conclusiones
Se concluye que el alumno adquiri los conocimientos sobre bacterias
acido alcohol resistentes, su definicin, caractersticas tanto
estructurales como funcionales, mtodos para su identificacin y los
pasos de este mtodo que dio como resultado la observacin
mediante el microscopio de este bacilo, demostrando as que el
Pgina
mtodo es efectivo y que utilizando el mismo se pueden reconocer

mediante este mtodo de tincin.
Cuestionario
1. Describe las caractersticas morfolgicas del bacilo de la
tuberculosis.
Reino: Bacteria
Filo: Actinobacteria
Orden: Actinomycetales
Familia: Mycobacteriaceae
Gnero: Mycobacterium
Especie: Mycobacterium tuberculosis.
Es un bacilo aerobio, gram positivo dbil y fuertemente cido-alcohol

resistente. Es un patgeno intracelular, aerobio, inmvil, no
esporulado de 0.4 x 3um. Posee una pared celular compleja rica en
lpidos con la estructura tpica de una bacteria Gram positiva
(membrana Citoplasmtica interna, capa de pptido-glucanos y
carente de membrana externa. En su membrana se anclan protenas
LAM (relacionadas a los lipo-polisacridos O antignicos). Contienen
gran cantidad de lpidos que incluyen cidos miclicos, ceras y
fosftidos. El di-pptido muramilo en complejo con cidos miclicos
puede hacer que se formen granulomas, los Fosfolpidos inducen la
necrosis caseosa. Tambin posee un factor de cordones que inhibe
la migracin de leucocitos, causa granulomas crnicos y a veces
acta como coadyuvante inmunolgico.
2. Por qu el bacilo de Koch tiene mucha resistencia a la
desecacin?
Por su pared celular que consta de una gruesa pared, separada de la
membrana celular por el espacio peri-plsmico, con cuatro capas. La
ms interna es el glico-pptido o pptido-glucanos con molculas de
N-acetil-glucosamina y cido-N-glucolilmurmico (en lugar del
habitual N-acetil-murmico) con cortas cadenas de alanina. Esta capa
es el esqueleto de la bacteria que le da forma y rigidez.
Externamente, hay otras 3 capas compuestas, una por polmeros de
arabinosa y galactosa, otra formada por cidos miclicos (que son
cidos grasos derivados) y otra superficial formada por lpidos como
los sulfo-lpidos y los micsidos.
3. Describa los medios de cultivo para aislar al bacilo de Koch.
Medios Enriquecidos:
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Lowenstein-Jensen: est constituido por: huevo, verde de malaquita,

glicerol (fuente de carbono) y asparaginas. Crece muy lentamente (30
a 90 das) a 37 C en atmsfera con dixido de carbono (en cultivo
crecen mejor a pesar de ser aerobio estricto), dando colonias con
aspecto de migas de pan (o huevos de araa), secas amarillentas y
rugosas.
Agar Middlebrook 7H10: es un medio de crecimiento slido
especialmente utilizado para el cultivo de Mycobacterium, en
particular Mycobacterium tuberculosis. Permite detectar rpidamente
y contiene varias sales inorgnicas que proporcionan sustancias
esenciales para el crecimiento de mico-bacterias.
Caldo Middlebrook 7H9: medio de cultivo liquido no selectivo con
glicerol para el cultivo de mico-bacterias.
Medios Selectivos:
Agar Middlebrook 7H11: es idntica al Agar Middlebrook 7H10, con
una adicin de digerido pancretico de casena para facilitar el
crecimiento de cultivos exigentes de M. tuberculosis.
4. En qu casos se solicita el cultivo de esputo para el
diagnstico de una posible TBC?
Cuando los estudios clnicos y la radiografa de este tipo de pacientes
arrojan sospecha de tuberculosis.
5. Cmo se hace el reporte de la coloracin Ziehl - Neelsen?
La siguiente es la escala adoptada internacionalmente para el informe
de los resultados de extendidos examinados por la tcnica de Ziehl
Neelsen:
Pgina
Aislamiento de Patgenos en Infeccin

Urinaria
Introduccin
El origen bacteriano de la ITU es el ms frecuente (80% - 90%); en
este caso, la definicin exacta exige no solo la presencia de grmenes
en las vas urinarias, sino tambin su cuantificacin en al menos 105
unidades formadoras de colonias (UFC)/mL de orina.
Sin embargo, varios estudios han establecido que un tercio o ms de
los pacientes, mayoritariamente mujeres sintomticas, tiene conteos
de UFC por debajo de este nivel y presentan ITU. En los hombres
tienen menor probabilidad de contaminacin sintomticos, se
considera como sugerente de infeccin una cifra de 103UFC/mL. El
diagnstico de bacteriuria significativa en pacientes cateterizados se
hace con valores de 102UFC/mL.
Entre las infecciones ms importantes del ser humano, la ITU
constituye un importante problema de salud que afecta a millones de
Pgina
personas cada ao. Es la segunda causa de infeccin ms frecuente

en los humanos, es solo superada por las infecciones del tracto
respiratorio.
Ms de mitad de todas las mujeres tiene al menos una ITU durante su
vida y su presentacin ms comn es durante el embarazo. La
proporcin de frecuencia de UTI entre mujeres y hombres jvenes es
de 30:1; sin embargo, conforme el hombre envejece, esta proporcin
tiende a igualarse. En el adulto mayor, la ITU es la infeccin
bacteriana ms comn y el origen ms frecuente de bacteriemias.
Objetivos
Presenciar la tcnica que se utiliza para el urocultivo e
implementarla.
Realizar una muestra optima de orina.
Fundamento Terico
La infeccin al tracto urinario (ITU) es una de las enfermedades ms
frecuentes, que consiste en la infeccin por algn agente patgeno
(bacterias con mayor frecuencia), de cualquiera de los segmentos del
aparato urinario: riones, urteres, vejiga o uretra.
Pielonefritis: es la infeccin del rin.

Ureteritis: es la infeccin de uno o de los dos urteres.
Cistitis: es la infeccin de la vejiga.
Uretritis: es la infeccin de la uretra.
A las Pielonefritis se les conoce tambin como Infecciones del Tracto

Urinario Alto. A las Cistitis y Uretritis tambin se les conoce como
infecciones del Tracto Urinario Bajo
Las Ureteritis son generalmente una extensin de la infeccin en el
rin o en vejiga (Cistitis).
Factores Predisponentes a una ITU:

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El sexo femenino: porque la longitud de la uretra femenina es

pequea, y se favorece que las infecciones asciendan desde la
regin perineal.
Los varones que tienen la prstata aumentada de
tamao: porque se tiende a retener en la orina debido a que la
prstata aumentada de tamao genera obstruccin parcial o
total en el segmento que corresponde a la uretra.
Uso de ropas ajustadas: predispone a desarrollar infecciones
urinarias por la presin que ejercen estos que hacen que la
orina refluya hacia el interior de las vas urinarias favoreciendo
la contaminacin de estas.
La retencin voluntaria de la orina: es importante que una
persona use el urinario, tan pronto siente ganas de hacerlo
Las personas que ingieren poca ingesta de lquidos.
Las personas diabticas, por la facilidad que tienen para todo
tipo de infeccin.
Aquellos que tienen alguna malformacin congnita de las vas
urinarias.
Sntomas de las ITU:

Lo fundamental es el ardor al orinar conocido como disuria, otros
sntomas agregados pueden ocasionar polaquiuria (orinar varias
veces en cantidad menor a lo habitual), dolor al final de la emisin,
fiebre, nuseas, vmitos, malestar general, dolor lumbar dependiendo
de la localizacin de la infeccin.
Cuando es una infeccin urinaria alta se suele acompaar de fiebre,
malestar general, dolor lumbar, nuseas o vmitos; mientras que
cuando es baja no.
Si se trata de una uretritis gonoccica (se hace nicamente evidente
en el varn), que es una enfermedad de transmisin sexual, se
presenta ardor al orinar y al inicio de la miccin se evidencia una
secrecin blanquecina maloliente con el color parecido al de la "leche
condensada".
Uro-cultivo:
El uro-cultivo se utiliza para diagnosticar bacteriuria, la orina
constituye un mtodo excelente para cultivar la mayor parte de
microorganismos que infectan el aparato urinario.
La combinacin de piuria con bacteriuria considerable sugiere la
presencia de una infeccin urinaria.
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Utilidad Clnica:
Cuando los sntomas indican una posible infeccin urinaria
como: dolor y sensacin de calor al orinar, as como urgencia
frecuente de orinar.
Cuando un paciente esta canalizado por largo tiempo, aunque
no muestre sntomas de infeccin.
En mujeres embarazadas para monitorear cualquier bacteria en
la orina que pueda causar algn problema al beb.
Materiales:
Muestra de orina.
Tubos con solucin salina fisiolgica estril (9 ml).
Agar Tripticase Soya.
Agar Eosina Azul de Metileno (EMB).
Agar Mac Conkey.
Pipetas de 1 ml estriles.
Placas Petri estriles.
Asa de Kolle.
Mechero.
Experimentacin:
1. En primer lugar tenemos una muestra de orina en un frasco
estril, con todas las precauciones antes mencionadas para un
buen anlisis.
2. Luego como las concentraciones de microorganismos es mucha
se proceder a realizar las diluciones correspondientes para as
aminorar su concentracin.
3. La dilucin consiste en tomar 9 ml de solucin salina estril y
ponerlo en un tubo de ensayo, luego echar 1 ml de la muestra
de orina, esta ser una muestra de 1/10.
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4. A partir de esta muestra hacer otras muestras en diferentes

tubos de ensayo de 1/100, 1/1000, 1/10 000.
5. Luego tomamos 1 ml de muestra de cada tubo de ensayo y lo

colocamos en 4 placas Petri.
6. Luego en un matraz con el agar tripticase soya, lo fundimos con

ayuda del mechero a una temperatura de 48 a 50 c y
enfriamos
mediante
rotacin
suave,
y
distribuimos
homogneamente sobre las muestras en cada placa y los
tapamos.
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7. Enseguida lo llevaremos a la incubadora por un tiempo de 24 a

48 horas a una temperatura de 37C.
8. Una vez transcurrido el tiempo establecido se les retirara dela

incubadora y procederemos a contar las unidades formadoras
de colonia (UFC) en cada placa y tomaremos la placa que
contenga de 30 a 300.
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9. Se observar que la placa de 1/10 tiene UFC incontables, la

placa de 1/100 tiene menos UFC, la placa 1/1000 est el rango
establecido con 62 UFC es esta placa que tomaremos para
proseguir con el anlisis, pero la placa de 1/10 000 cuenta con
menos UFC y no est en el rango establecido.
1/10
1/100
1/1000
1/10 000
10.
La placa de 1/1000 tiene 62 UFC la multiplicamos por
1000 porque fue en esta proporcin su dilucin entonces
tendremos 62 000 UFC/ML y procederemos a compararlo con
por lo establecido por kass:
Segn kass:
< 10 000 UFC/ML normal
10 000 a 99 000 UFC/ML ? : volver a realizar el anlisis
>o= a 100 000 UFC/ML Infeccin del tracto urinario (ITU)
Conclusiones
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Despus de observar el siguiente recuadro podemos llegar a la

conclusin de que para un buen diagnstico se tiene que volver a
repetir el examen segn lo observado en lo anterior.
Los pacientes dados de alta con ITU
de edad avanzada y
frecuentemente presentan factores de riesgo. En excesivas ocasiones
el diagnstico se basa en criterios no especficos. E. coli es el
patgeno ms frecuente. Las quinolonas no deberan ser utilizadas en
el tratamiento de primera lnea en los pacientes con ITU complicada o
grave, dado el alto porcentaje de resistencias.Las infecciones de vas
urinarias constituyen un factor de riesgo para el parto en la
embarazada adolescente, por ello se propone la instruccin adecuada
del personal de salud para la deteccin oportuna y el tratamiento
adecuado de las infecciones genitourinarias para disminuir la tasa de
morbilidad y mortalidad neonatal secundario a pre-maturez.
Cuestionario
1. Qu tipos de bacterias pueden causar infeccin urinaria?
Descrbelos.
Entre las bacterias Gram negativas encontramos:
Escherichia coli: vive en los intestinos de la mayor parte de
los mamferos sanos.
Es
el
principal
organismo anaerobio
facultativo del sistema digestivo. En individuos sanos, es decir, si la
bacteria no adquiere elementos genticos que codifican factores
virulentos, la bacteria acta como un comensal formando parte de
la flora intestinal y ayudando as a la absorcin de nutrientes. En
humanos, la Escherichia coli coloniza el tracto gastrointestinal de un
neonato adhirindose a las mucosidades del intestino grueso en el
plazo de 48 horas despus de la primera comida. Aunque la mayora
de las cepas son inocuas y viven en los intestinos de los seres
humanos y animales saludables, esta cepa produce una
potente toxina y puede ocasionar enfermedades graves como
el sndrome urmico hemoltico. Provoca el 80% de las infecciones
urinarias agudas en general.
Klebsiella pneumoniae: Son bacterias Gram negativas , la asimilacin
y la fermentacin de la lactosa se puede observar en el agar Mac
Conkey donde las colonias son de color rosado y en el medio Kliger o
TSI donde son cido/cido, es decir fermentador de la lactosa ms
produccin de gas; y en la fermentacin acetnica o prueba de Voges
Proskauer son positivos. Por ltimo, sus condiciones ptimas de
Pgina
cultivo son en agar nutritivo a 37 C, pH de 7.0, presin osmtica de 1

atm.
Enterobacter: es un gnero de bacterias Gram negativas
facultativamente anaerbicas de la familia de las Enterobacteriaceae.
Muchas
de
estas
bacterias
son
patgenas
y
causa
de infeccin oportunista, otras son descomponedores que viven en
la materia orgnica muerta o viven en el ser humano como parte de
una poblacin microbiana normal. Algunas enterobacterias patgenas
causan principalmente infeccin del tracto urinario y del tracto
respiratorio.
Entre las bacterias Gram positivas encontramos:
Staphylococcus saprophyticus: es un coco Gram positivo, coagulasa,
anaerobio facultativo, no formador de cpsula, no formador
de espora e inmvil. Es catalasa y oxidasa positivo. Posee
la enzima ureasa y es capaz de adherirse a las clulas epiteliales del
tracto urogenital.
Streptococcus agalactiae: es una bacteria estreptococo del grupo B
(EGB), Gram
positivo, beta-hemoltico, catalasa negativo, oxidasa
negativo y anaerobio facultativo, caracterizado por presentar el grupo
B de antgenos Lancefield. Se puede encontrar en el aparato
digestivo, urinario y genital de los adultos. Aunque una infeccin por
EGB normalmente no ocasiona problemas a las mujeres sanas antes
del embarazo, puede provocar una enfermedad grave a la madre y al
beb durante la gestacin y despus del parto.
Enterococcus: son cocos Gram-positivos que se presentan en parejas
o en cadenas, siendo difcil distinguirlos de Streptococcus slo en
base a sus caractersticas fsicas. Dos de las especies
son comensales en el intestino humano: E. faecalis y E. faecium. El
enterococo es un organismo anaerobio facultativo o capnoflicos, esto
es, prefiere usar oxgeno, aunque sobrevive bien en su ausencia.
Tpicamente exhiben gamma-hemolisis en agar sangre de cordero.
Indica infeccin mixta o patologa urinaria orgnica.
Staphylococcusaureus: es una bacteria anaerobia facultativa, Gram
positiva,
productora
de
coagulasa, catalasa,
inmvil
y
no esporulada que se encuentra ampliamente distribuida por todo el
mundo, estimndose que una de cada tres personas se hallan
colonizadas, aunque no infectadas, por ella. Las cepas habituales
de Staphylococcus aureus son resistentes a la penicilina, dejando
como los antibiticos ms eficaces para combatirlos a los amino-
Pgina
glucsidos, las cefalosporinas, la oxacilina o la nafcilina. Cuando est

presente debe descartarse la contaminacin urinaria por va
hematgena si el paciente no es portador de sonda urinaria.
2. Qu puede suceder cuando una mujer tiene bacteriuria
asintomtica?
La bacteriuria asintomtica se presenta en un pequeo nmero de
personas sanas y afecta ms a menudo a las mujeres que a los
hombres.
La mayora de los pacientes con bacteriuria asintomtica no necesitan
tratamiento, dado que las bacterias no estn causando ningn dao
pero en las mujeres embarazadas la bacteriuria asintomtica puede
producir enfermedades como pielonefritis ,corioamnionitis entre otras
y al beb durante la gestacin y despus del parto, parto prematuro,
bajo peso en l beb al nacer e incluso el aborto.
3. Por qu la mujer es ms propensa a la ITU?
Un factor clave en estas diferencias podra ser que la uretra de la
mujer es corta, permitiendo as a las bacterias un acceso rpido hasta
la vejiga urinaria. Otro sera que la apertura de la uretra en la mujer
est cerca de focos bacterianos, como el ano y la vagina.
Tambin parece ser que el uso del diafragma como sistema
anticonceptivo aumenta la probabilidad de padecer una infeccin
urinaria. Adems, las mujeres cuyas parejas usan preservativos con
espermicidas tienen tendencia a un crecimiento de la bacteria
Escherichia Coli en la vagina.
4. Qu medidas se debe seguir para evitar las ITU?
Beber abundante agua y otros lquidos (ocho o ms vasos de de
litro por da).
No prolongar la miccin cuando el organismo lo requiera
Luego de orinar, la mujer debe limpiar la uretra con papel higinico,
hasta asegurarse de que est limpia y seca.
Luego de ir de vientre, debe limpiar la zona anal de adelante hacia
atrs con papel higinico, hasta que est limpia.
Utilizar ropa interior de algodn.
Pgina
Control de los Microorganismos: El

Antibiograma
Introduccin
Esta prueba consiste en hacer crecer la bacteria de manera
homognea sobre un medio de cultivo slido en una placa de Petri y
depositar unos discos impregnados con distintos antibiticos. Se
incuba la placa. Las bacterias crecern all donde no haya difundido
un antibitico que no inhiba su crecimiento; por tanto, alrededor de
los discos de antibitico se formar un halo de medio en el que no
han crecido las bacterias. El dimetro del halo depende de la
capacidad del antibitico de inhibir el crecimiento bacteriano y de la
difusin del mismo en el medio de cultivo.
El antibitico difunde en el medio desde el disco en todas direcciones;
por lo que, cuanto ms cerca del disco, mayor concentracin de
antibitico y cuanto ms alejado, la concentracin ser menor. La
bacteria crecer en la placa, excepto en los lugares donde sea crtica
la concentracin un antibitico al que es sensible. Por tanto, alrededor
de los discos de antibitico, se puede observar un halo en el que no
hay crecimiento bacteriano, siendo este mayor cuanto ms efectivo
sea el antibitico. Segn el tipo de bacteria que se siembre, Gram + o
Gram -, los antibiticos a los que se enfrenta el cultivo en el
antibiograma son unos u otros.
El antibiograma se puede hacer tanto en medio lquido como en
medio slido. En nuestro caso vamos a utilizar un agar ordinario pero
modificado de manera que grmenes y antibiticos puedan difundir
correctamente: agar de Muller-Hinton. Se utilizan para poner los
antibiticos, unos discos impregnados que llevan unas letras que nos
Pgina
indican el antibitico del que se trata y un nmero que indica la

concentracin en mg/ml que tena la disolucin en la que se
impregnaron.
Objetivos
Comprender el concepto de antibitico y su especificidad de
accin sobre determinadas bacterias.
Conocer el concepto de cepa sensible y resistente.
Entender el concepto de halo de inhibicin.
Ser consciente de la importancia de la higiene y el cuidado en la
manipulacin de materiales biolgicos.
Fundamento Terico
Antibiticos:
Son sustancias capaces de destruir y eliminar los microorganismos
causantes de una infeccin producida por bacterias (faringitis,
bronquitis, otitis, neumona, amigdalitis, etc).
No son eficaces cuando la infeccin es producida por virus (gripe).
Cada tipo de antibitico ser efectivo para destruir una clase de
microorganismos en funcin de su modo de actuacin. Se les llama
antibiticos de amplio espectro a los que son efectivos frente a un
gran nmero de agentes microbianos, los microorganismos causantes
de la infeccin son capaces de desarrollar resistencias al antibitico
de manera que este no ser eficaz para eliminarlos.
Cada ao se investiga creando nuevos antibiticos eficaces para las
formas microbianas resistentes a sus anteriores tratamientos. Se
deben usar siempre bajo prescripcin mdica.
Existen pruebas (antibiogramas) que determinan el antibitico ms
eficaz para cada infeccin, pero normalmente se sigue un protocolo
de actuacin de los antibiticos de eleccin para cada tipo de
infeccin. Es el mdico el profesional que juzga la infeccin existente
y el antibitico eficaz para su tratamiento.
Los antibiticos siempre se deben tomar bajo prescripcin mdica y
cumplir el tratamiento completo. El incumplimiento del tratamiento
puede dar lugar a recadas que precisarn el tratamiento con otro tipo
de antibitico por haber desarrollado resistencia al primero
Pgina
Los antibiticos se pueden clasificar en:

Naturales: Sintetizados directamente por microorganismos
Semi-sintticos: Son aquellos que siendo sintetizados por
microorganismos, se utiliza su ncleo-estructura y se modifica
por agregacin de ciertos radicales qumicos.
Sintticos: Son
aquellos
antibiticos
sintetizados
por el
hombre una vez que se ha conocido su forma natural.
Cada antibitico tiene dos formas de accin:
Bactericidas: Entre los cuales estn la penicilina, neomicina,
polimixina, etc.
Bacteriostticos: Ej. : tetraciclinas, cloramfenicol, eritromicina,
etc.
Es importante conocer tambin las medidas de actividad de los
antibiticos, por ejemplo: La Penicilina se mide por su accin sobre la
cepa H. de estafilococo o la cepa 209 y se expresa en unidades
Oxford, que nos representa la cantidad de penicilina que disuelta en 1
ml. de diluyente produce un halo de inhibicin de 24 mm de dimetro.
La actividad de todos los dems antibiticos distintos a la penicilina,
se expresan en microorganismos de droga pura cristalina. Una unidad
Oxford de penicilina es igual a 0,6 microorganismos de penicilina pura
cristalizada.
Los antibiticos para ser estudiados, deben ser sometidos a un
antibiograma, el cual consiste en un estudio "in Vitro", de la
sensibilidad y susceptibilidad del microorganismo causante de la
enfermedad frente a los diversos antibiticos.
Luego de realizar el antibiograma podremos ver la capacidad que
tiene un antibitico de actuar sobre un nmero determinado de
especies y tambin observar la capacidad que posees ciertas
bacterias de crecer y multiplicarse en presencia de un antibitico.
Los antibiogramas se pueden realizar mediante dos mtodos:
Mtodo de Dilucin en Serie (En Tubo):
Que es un mtodo Cuantitativo que se realiza en tubos,
mediante el cual se puede titular exactamente la sensibilidad
de una cepa bacteriana a un determinado antibitico.
Mtodo de Difusin del Antibitico en Agar (En Placa de Petri):
Que es un mtodo cualitativo, donde observamos cuan
susceptible es el microorganismo al determinado antibitico.
(Ser explicado con ms detalles en el desarrollo del trabajo).
Pgina
Antibiogramas:
Para estudiar la sensibilidad de un microorganismo por tcnicas de
difusin se dispone de dos sistemas, el de discos de papel
impregnados con el antibitico y las tabletas, consistentes en una
suspensin del antibitico liofilizada y comprimida en materia inerte.
Los fabricantes recomiendan conservar los discos a 20 C para largos
periodos o entre 2 y 8 C si se utilizan en el plazo de una semana.
Por el contrario, las tabletas se han considerado ms estables,
pudindose almacenar a temperatura ambiente y manteniendo su
actividad ms tiempo que los discos.
Por lo que respecta a la temperatura de conservacin, al comparar
para cada antibitico los dimetros de los halos de inhibicin de los
discos conservados entre 4 y 6 C con los conservados a temperatura
ambiente no se encontraron diferencias significativas a lo largo de
todo el estudio; tampoco se encontraron diferencias al comparar los
halos de las pastillas conservadas entre 4 y 6 C con las conservadas
a temperatura ambiente, de modo que tanto los antibiticos que
permanecieron estables durante el tiempo del estudio como los que
disminuyeron su actividad lo hicieron de modo paralelo a ambas
temperaturas.
Para evitar esto, el antibiograma debe ser interpretado de manera
global a fin de descubrir, a travs de la comparacin de las
respuestas para cada antibitico, un mecanismo de resistencia
incluso dbilmente expresado. As, gracias a la interpretacin, una
cepa que aparece como falsamente sensible ser categorizada como I
o R (Ejemplo: Una cepa de Klebsiellapneumoniae productora de BLSE
puede aparecer sensible in vitro a las cefalosporinas de 3"
generacin. El resultado de Sensible debe ser corregido a Intermedio
o Resistente, ya que la utilizacin de estos antibiticos correra el
riesgo de provocar un fracaso teraputico).
Resistencia Bacteriana:
Cada antibitico se caracteriza por un espectro natural de actividad
antibacteriana. Este espectro comprende las especies bacterianas
que, en su estado natural, sufren una inhibicin de su crecimiento por
concentraciones de su antibitico susceptibles de ser alcanzadas in
vivo. A estas especies bacterianas se les dice naturalmente sensibles
a dicho antibitico. Las especies bacterianas que no se encuentran
incluidas dentro de dicho espectro se denominan naturalmente
resistentes.
Pgina
El antibitico no crea resistencia, pero selecciona las bacterias

resistentes eliminando las sensibles. Es lo que se conoce con el
nombre de presin de seleccin. El aumento de la frecuencia de las
cepas resistentes va unido casi siempre al uso intensivo del
antibitico en cuestin.
La resistencia natural es un carcter constante de todas las
cepas de una misma especie bacteriana. El conocimiento de las
resistencias naturales permite prever la inactividad de la
molcula frente a bacterias identificadas (despus del
crecimiento) o sospechosas (en caso de antibioterapia
emprica). En ocasiones, constituye una ayuda para la
identificacin, puesto que ciertas especies se caracterizan por
sus resistencias naturales.
Ejemplos: Resistencia natural del Proteusmirabilis a las
tetraciclinas y a la colistina. Resistencia natural de la
Klebsiellapneumoniae a las penicilinas (ampicilina, amoxicilina).
La resistencia adquirida es una caracterstica propia de ciertas
cepas, dentro de una especie bacteriana naturalmente sensible,
cuyo patrimonio gentico ha sido modificado por mutacin o
adquisicin de genes. Contrariamente a las resistencias
naturales, las resistencias adquiridas son evolutivas, y su
frecuencia depende a menudo de la utilizacin de los
antibiticos.
En el caso de numerosas especies bacterianas, y teniendo en
cuenta la evolucin de las resistencias adquiridas, el espectro
natural de actividad no es ya suficiente para guiar la eleccin
de un tratamiento antibitico. En ese caso, se hace
indispensable el antibiograma.
Una resistencia cruzada es cuando se debe a un mismo
mecanismo de resistencia. En general, afecta a varios
antibiticos dentro de una misma familia (Ejemplo: La
resistencia a la oxacilina en los estafilococos se cruza con todas
los -lactmicos). En ciertos casos, puede afectar a antibiticos
de
familias
diferentes
(Ejemplo:
La
resistencia
por
impermeabilidad a las ciclinas se cruza con la resistencia al
coloranfenicol y al trimetoprima).
Una resistencia asociada es cuando afecta a varios antibiticos
de familias diferentes. En general, se debe a la. Asociacin de
varios mecanismos de resistencia (Ejemplo: La resistencia de
los estafilococos a la oxacilina va frecuentemente asociada a las
quinolonas, aminoglicsidos, macrolidos y ciclinas).
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Materiales:
Placas de Petri con medios de cultivo Mueller-Hinton.
Asa bacteriolgica.
Mechero.
Sensidiscos (antibiogramas).
Fenol al 5%.
Cultivo
de
en
caldo
nutritivo
de
18
horas
Pseudomonasaeruginosa.
Cultivo de 18 horas de E. Coli.
de
Experimentacin:
1. Tomamos un hisopo estril y lo empapamos con el caldo
nutritivo de Pseudomonasaeruginosa y lo frotamos en la placa
Petri con el medio de cultivo Mueller-Hinton.
2. Luego por la parte externa se le harn 7 puntos con un

marcador.
3. Despus se le colocaran los siete discos de antibiticos en los

puntos marcados pero estos que estn en contacto con la parte
interna (sobre el medio de cultivo), que corresponden a:
1. Ampicilina
2. Cefasolina
3. Acitromicina
4. Estreptomicina
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5. Amoxicilina
6. Canamicina
7. Ciprofloxacina
4. Cerramos la placa y realizaremos los mismos procedimientos

pero en esta ocasin en vez de Pseudomonasaeruginosa
pondremos a la placa E. Coli.
5. Una vez que tengamos ambas placas lo cubriremos con una

hoja de papel y lo pondremos a la incubadora por un tiempo de
24 a 48 horas a una temperatura de 37 C.
Pgina
Tratamiento de Datos
Patrn de Efectividad:
Antibiticos
Resistente (R)
Intermedio (I)
Sensible (S)
Ampicilina
< 11
12 - 13
14
Cefasolina
< 14
15 - 17
18
--
--
--
Estreptomicin
a
< 11
12 - 14
15
Amoxicilina
< 13
14 - 17
18
Canamicina
--
--
--
< 15
16 - 21
22
Acitromicina
Ciprofloxacina
Reporte de Resultados:
Una vez transcurrido el tiempo establecido de incubacin se le tomo
medida a los halos que produjeron los antibiticos dando como
resultado los siguientes valores que se darn a continuacin:
BACTERIAS
ANTIBIOTICOS
PSEUDOMONAS
AERUGINOSA
E.COLI.
HALOS (mm)
Pgina
HALOS (mm)
1. Ampicilina
22
12
2. Cefasolina
22
Sin efecto
3. Acitromicina
23
14
4.
Estreptomicina
24
20
5. Amoxicilina
20
Sin efecto
6. Canamicina
19
21
7. Ciprofloxacina
30
31
Nota: Estos resultados los cuales tendrn que ser evaluados y

comparados con el patrn de efectividad al hacerlo daremos la
medicacin correcta para combatir ptimamente a la bacteria
causante de la infeccin.
Resultado:
Despus de la medida que se le ha realizado a los halos de los
diferentes antibiticos y la respectiva comparacin con el patrn de
efectividad se pueden dar los siguientes resultados que se observaran
en la tabla de resultados adjunta para cada bacteria.
BACTERIAS
ANTIBIOTICOS
PSEUDOMONAS
AERUGINOSA
E.COLI.
1. Ampicilina
(S)
(I)
2. Cefasolina
(S)
(R)
3. Acitromicina
(--)
(--)
4.
Estreptomicina
(S)
(S)
5. Amoxicilina
(S)
(R)
Pgina
6. Canamicina
(--)
(--)
7. Ciprofloxacina
(S)
(S)
Discusin de Resultados
Se observa que para el caso de la pseudomonas aeruginosa todos
estos antibiticos donde esta calificados como (S) son efectivos para
la eliminacin de la bacteria porque ellos son sensibles a estos
antibiticos.
Se observa que para el caso de la E. COLI los antibiticos que se
pueden medicar son la ciprofloxacina y en segundo lugar la
estreptomicina, de esta manera podemos medicar antibiticos
efectivos que ayuden a las ITU.
Conclusiones
La importancia que tiene conocer los antibiogramas es realmente
importante, ya que con este simple mtodo podemos hacer
un diagnstico ms certero frente a los distintos cuadros que puedan
presentar nuestros pacientes. Adems de realizar el antibiograma, de
acuerdo a los resultados vemos que en general los halos de inhibicin
fueron bastante grandes lo que quiere decir que nuestra bacteria es
muy sensible a los diversos antibiticos usados en este trabajo.
Cuestionario
1. Qu funcin tienen los antibiticos?
Los antibiticos limitan el ingreso y/o el crecimiento de los grmenes
causantes de enfermedades, de esta manera se reduce su
reproduccin y le devuelven la salud al paciente.
2. Menciona dos causas del porque los microorganismos
pueden llegar a hacerse resistentes a los antibiticos
Porque aprenden a producir enzimas inactivantes que destruyen el
antibitico. Ej: produccin de enzimas denominadas betalactamasas
que destruyen a los antibiticos betalactamicos.
Porque alteran su pared celular de tal manera que impiden la
penetracin del antibitico.
Pgina
3. De qu fuentes se obtienen los siguientes medicamentos:

estreptomicina, eritromicina, cefalosporina y cloranfenicol
Estreptomicina:
La estreptomicina fue aislada del actinomiceto Streptomyces griseus
en octubre 1943 por cientficos de la Universidad de Rutgers, los
cuales dos cepas de esta bacteria las cuales sintetizaban el frmaco.
S. griseus forma esporas grises y pigmentos grises y amarillos cuando
crece en colonia, se encuentra en el suelo y es distinguible por su
caracterstico olor a tierra mojada producido por un metabolito
secundario, la geosmina.
Eritromicina:
La Eritromicina fue el primer macrlido descubierto, en 1952, por J. M.
McGuire y colaboradores. El compuesto se hall en los productos
metablicos de una cepa de Streptomyces erytherus, obtenido
originalmente de una muestra de tierra recolectada en el archipilago
de las Filipinas.
Cefalosporina:
El hongo Cephalos-porium acremonium que inici la primera fuente
de cefalosporinas fue aislado por Brotzu en el mar, cerca de aguas
servidas en la costa de Cerdea. Se verific que el hongo de Cerdea
contena 3 antibiticos definidos: cefalosporina P (activa contra Gram
positivo),
cefalosporina
N
(activa
contra
grampositivo
y
gramnegativo) y cefalosporina C (menos potente que la anterior, pero
con la misma actividad antimicrobiana).
Cloranfenicol:
El cloranfenicol es un antibitico que fue obtenido por primera vez de
una bacteria del suelo de la familia de los actinomicetales,
Streptomyces venezuelae, ms tarde se elaborara a partir de otras
especies de Streptomyces1 y en la actualidad se produce por sntesis.
4. Segn los resultados de tu prctica. Qu medicamentos
puedes utilizar para destruir y eliminar a Staphylococcus y
Salmonella:
E. Coli:
Medicamento
Ampicilina
Amoxicilina
Estreptomicina
E. Coli
15 mm
19 mm
22 mm
Resultado
S
S
S
Pgina

Ciprofloxacina
Klepsiella:
Medicamento
Estreptomicina
Ciprofloxacina
30 mm
Klebsiella
19 mm
22 mm
S
Resultado
S
S
5. Investiga que tipo de enfermedades pueden ocasionar los

microorganismos estudiados en la prctica
Pseudomonasaeruginosa:
Causa infecciones en distintos sitios anatmicos: rganos y sistemas.
Puede causar infecciones de vas areas superiores, como por
ejemplo otitis; infecciones de las vlvulas cardiacas (endocarditis
bacteriana), infecciones de vas urinarias, infecciones de herida
quirrgica en pacientes postoperados, infecciones pulmonares
(neumona) en pacientes que utilizan ventilacin mecnica. Como
dijimos, este tipo de infecciones suelen presentarse en pacientes
susceptibles con defensas disminuidas incluyendo pacientes
con cncer. Las infecciones nosocomiales generalmente incluyen
neumonas, bacteremias, infeccin de herida quirrgica e infecciones
de vas urinarias.
E. Coli:
La bacteria E. coli tambin es la causa ms frecuente de infeccin
urinaria y, en menor medida, de otras infecciones como meningitis en
el neonato o infecciones respiratorias, precisa.
Entre los tipos de E. coli que producen gastroenteritis, el ms
destacado por su patogenicidad es el denominado E. coli enterohemorrgico, que produce un cuadro que va, desde dolores
estomacales, hasta vmitos y diarrea, en muchas ocasiones
sanguinolenta. Generalmente no hay fiebre o esta es baja y, la
mayora de los pacientes, se recupera en una semana,
Tambin la Escherichia Coli puede causar infecciones intestinales y
extra-intestinales generalmente graves, tales como infecciones del
aparato excretos, vas urinarias, cistitis, meningitis, peritonitis,
mastitis, septicemia y neumona Gram negativa.
6. Qu desventaja tiene el utilizar la esterilizacin por calor
seco?
El calor seco no permite eliminar algunas sustancias como los
priones, que s pueden eliminarse con calor hmedo.
Pgina
La esterilizacin por calor seco es poco penetrante con respecto al

calor hmedo, el aire hmedo es un conductor ms eficiente del calor
que el aire seco ya que el coeficiente de transmisin del calor del
agua es mayor que el del aire.
Requiere mayor tiempo de esterilizacin, respecto al calor hmedo,
debido a la baja penetracin del calor.
7.
Cmo
acta
microorganismos?
la
radiacin
ultravioleta
en
los
La radiacin ultravioleta se utiliza para matar los microorganismos,

mohos y hongos en diversas aplicaciones ambientales. La
esterilizacin UV se utiliza para los sistemas de purificacin del aire o
del agua del acuario, para el mantenimiento de los estanques del
laboratorio, la higiene y la proteccin de alimentos y bebidas .La
esterilizacin UV funciona bien en aplicaciones donde deseas limpiar
grandes cantidades de microorganismos en el aire o el agua, como en
acuarios, estanques, laboratorios y salas, sin dejar residuos qumicos
lquidos o aerosoles.
8. Cmo acta
microorganismos?
el
proceso
de
desecacin
en
los
La desecacin al aire (sin vaco) mata a las clulas vegetativas

bacterianas, pero no a las endosporas. La sensibilidad a la desecacin
vara de una especie a otra.
Por ejemplo el Mycobacterium tuberculosis (el bacilo tuberculoso) es
muy resistente al aire (en ausencia de luz), de ah que pueda
aguantar varios meses a partir de los esputos de enfermos.
En cambio, el vibrin colrico (Vibrio cholerae) muere expuesto al aire
al cabo de slo dos horas.
Las causas de la muerte son, principalmente:
El aumento de concentracin intracelular de sales, lo que conlleva
efectos txicos y desnaturalizantes de protenas; daos por oxidacin.
La mayor eficacia de la desecacin al aire se logra con 50% de
humedad relativa.
9. A qu condiciones de temperatura y presin se destruyen
todas las formas vegetativas y esporas?
Temperatura:
Pgina
Los microorganismos mueren rpidamente cuando son sometidos a

temperaturas superiores a su ptima de crecimiento. Esto permite
utilizar altas temperaturas para eliminar microorganismos por termodestruccin. Los mtodos basados en el calor son quiz los ms
utilizados para controlar el crecimiento microbiano.
Horno Pasteur: El calor seco se utiliza principalmente para esterilizar
material de vidrio y otros materiales slidos estables al calor. El
aparato que se emplea es el horno Pasteur. Para el material de vidrio
de laboratorio se consideran suficientes dos horas de exposicin a
160 C. En general las formas vegetativas bacterianas mueren por
calentamiento a 50-70C.
Presin:
Los microorganismos mueren rpidamente cuando a estos se les
somete a altas presiones como por ejemplo en el auto clave que
opera con los valores deseados (121C y 15 lb presin).
10. Cmo acta la esterilizacin por calor hmedo en los
microorganismos?
Mata
microorganismos
por
la
coagulacin
de
protenas
(desnaturalizacin), lo que es causado por la rotura de los puentes de
hidrgeno que son los que mantienen a las protenas en su forma
tridimensional; las protenas por lo tanto regresan a su estructura
secundaria, se coagulan y se convierten en protenas no funcionales.
El calor hmedo puede penetrar ms rpidamente que el calor seco
porque las molculas de agua conducen mejor el calor que las
molculas de aire. Por ello el calor hmedo puede ser usado a
temperaturas ms bajas y menor tiempo de exposicin que el calor
seco.
Estudio de Hongos
Introduccin
Pgina
Los hongos tienen distintos hbitos de vida. Los hongos saprfitos, es

decir descomponedores de materia orgnica, cumplen una funcin
ecolgica de la mayor relevancia pues garantizan el reciclaje de la
materia muerta y, por lo tanto, la recirculacin de sustancias
nutritivas en los ecosistemas. Los hongos parsitos, que viven sobre o
dentro de otros seres vivos, obtienen su alimento de stos y llegan a
producir enfermedad en su hospedero. Los hongos simbiontes que se
asocian de manera mutualista con otros organismos constituyen
alianzas vivas de beneficio mutuo como por ejemplo los lquenes
(asociacin de hongo y alga) y las micorrizas (asociacin de hongo y
raz de una planta), simbiosis estas de gran importancia en la
naturaleza en procesos de colonizacin de hbitats y de circulacin de
nutrientes.
Desde la perspectiva econmica, los hongos ofrecen mltiples
servicios, pues se utilizan como alimentos, levaduras de la masa de
pan, fermentadores en la produccin de vino y cerveza, en la
maduracin de quesos y en el control biolgico de plagas agrcolas.
Adems, como fuentes de sustancias que por su actividad biolgica
pueden ser de enorme utilidad en medicina y en la bioindustria (ej.
antibiticos) y como agentes para estimular el desarrollo de las
plantas (hongos formadores de micorriza). Sin embargo, tambin son
dainos cuando actan como parsitos de plantas y animales o
cuando estropean estructuras de madera, alimentos almacenados,
libros y hasta obras de arte, amn de ser peligrosos si, por
desconocimiento, se consumen aquellos que tienen principios txicos
o alucingenos.
Objetivos
Observar detalladamente e identificar cul de ellos es un cultivo
joven o un cultivo esporulado.
Identificar a los cultivos con la macroscopa y a travs de la
microscopia identificar a los hongos.
Observar que los diferentes tipos de microorganismos se
diferencian todas en sus cultivos jvenes u esporulados.
Fundamento Terico
Los hongos son un grupo muy especial de organismos que se
distinguen muy bien de los vegetales y de los animales, e incluso de
los microorganismos. La diferencia se basa entre otras cosas, en que
Pgina
la clula de un hongo tiene una pared formada por quitina, sustancia

que solamente forman los animales, por ejemplo, los insectos, y la
sustancia de la pared celular de los vegetales es celulosa. Adems la
sustancia de reserva de los hongos es el glucgeno, que es tpica en
los animales, mientras que la sustancia de reserva de la clula
vegetal es el almidn. Por otra parte, la nutricin de un hongo es por
medio de la absorcin de sustancias orgnicas a travs de su pared
celular, como lo hacen las races de las plantas, pero nunca ingieren
alimentos como lo hacen los animales.
Los hongos no sintetizan sus alimentos, a diferencia de los vegetales,
puesto que no tienen la funcin clorofiliana. Los hongos no se
desplazan de un lugar a otro, contrario a los animales, ya que carecen
de movimiento al igual que los vegetales. En cuanto a los procesos de
la reproduccin sexual de los hongos, estos son totalmente diferentes
tanto a los de los vegetales como a los de los animales, puesto que al
unirse los gametos, no se fusionan los ncleos de inmediato, contrario
a lo que pasa con aquellos organismos, en los que los gametos
forman el cigoto una vez que sucede la copulacin. La unin de los
ncleos de los gametos en los hongos ocurre mucho despus en
tiempo y espacio. Es decir, su unin se lleva a cabo en dos fases,
primero solamente se fusiona el protoplasma de dos clulas opuestas,
es la llamada plasmogamia, y mucho tiempo despus ocurre la fusin
de los ncleos, la cariogamia. No as en los vegetales y en los
animales pues en estos dos procesos son uno a continuacin del otro.
Exceptuando las bacterias que son un grupo primitivo de organismos
sin ncleo, en las clulas de los microorganismos y su relacin con los
hongos, stas tienen caractersticas de vegetales y de animales.
Otra diferencia ms de los hongos es que no forman tejidos. Sus
clulas generalmente son filamentosas, se les llama hifas, como se
tratar ms adelante, o en algunos hongos microscpicos son clulas
subglobosas llamadas levaduras; su cuerpo es una simple asociacin
de ellas, al igual que las fructificaciones que desarrollan en la
reproduccin.
Hongos Comestibles, Medicinales y Sagrados:

Pgina
Visitar uno de estos mercados, es una buena experiencia, ya que con

ello se conocern bien los hongos comestibles y su rica variabilidad y
adems sus atractivos nombres vernculos.
Tmese en cuenta que en un mercado popular, bien establecido, no
es posible encontrar hongos venenosos ni datos falsos, debido a la
mucha experiencia de los vendedores, en su gran mayora de origen
indgena, que son expertos, resultado de la enorme tradicin que hay
en Mxico. Se conocen ms de mil nombres populares de los hongos,
tanto en castellano como en lenguas indgenas, ya que stos cambian
de regin en regin. Por otra parte, un bosque de conferas o de
encinos bien cuidado, puede producir toneladas de hongos, lo que
demuestra la gran importancia econmica y forestal de los hongos
silvestres. Adems muchos de los hongos comestibles y no
comestibles estn en una relacin ntima con las races de los rboles,
en una asociacin simbitica llamada ectomicorriza, que favorece el
equilibrio ecolgico del bosque.
Los Hongos en la Industria:

Las levaduras, por su carcter bioqumico de fermentar bebidas
azucaradas, se han empleado desde tiempos inmemoriales en la
obtencin de vinos, licores y cerveza. Adems, dichas levaduras como
varios mohos, se utilizan en Mxico desde tiempo prehispnicos en la
elaboracin de bebidas tradicionales como pozol, pulque, tepache,
tesgino y tuba, entre otras. Estn tambin los mohos, como especies
de Penicilium que son la base de la industria de quesos especiales
como el camembert y el roquefort. La industria qumico-farmacutica
de los antibiticos utiliza especies de mohos para obtener penicilina,
cefalosporina y griseofulvina, entre otros..
Los Hongos en la Medicina:

La mayora de estos hongos son mohos y son de vida libre, saprobios,
que por circunstancias diversas se han convertido en parsitos y se
han transformado en la fase de levadura, es decir han perdido sus
hifas. Como ejemplo de estos casos, estn los que producen
enfermedades
respiratorias
por
inhalacin,
como
la
coccidioidomicosis,
histoplasmosis,
paracoccidiodomicosis,
criptococosis, candidiasis, aspergilosis y peniciliosis. Ntese que de
estas micosis, tres son de tierras calientes y el resto de tierras
templadas. Por otra parte, existen los hongos que atacan la piel, los
llamados dermatomicetos, mal denominados dermatofitos, puesto
Pgina
que fito significa vegetal. Entre estos hongos estn las tias y el
pie de atleta.
Materiales:
Placas de Petri con cultivo de microorganismos joven.
Placas de Petri con cultivo de microorganismos esporulado.
Microscopio.
Experimentacin:
En el presente informe se centrara en observar de forma microscpica
y macroscpica para poder observar los cultivos y los hongos
respectivamente e identificar qu tipo de hongo se observa, tambin
podemos observar las placas que contiene cultivo de hongos de
forma esporulada.
Vistas Microscpicas:
Primero cogemos 7 microscopios y a cada uno de ellos lo pondremos
a observar diferentes hongos, y gracias a estos podemos identificar
qu tipo de hongo es, como se puede observar en las siguientes
imgenes que se muestran a continuacin:
Alternaria (espora macroconidia)
microconidia)
Rhizopus (espora esporangiospora)

microconidia)
Aspergillus (espora
Trichoderma (espora
Pgina
Penicillium (espora microconidia)

macroconidia)
Fusarium (espora
Mucor (espora esporangiospora)
Vistas Macroscpicas:
La observacin que se realizara en las placas son los hongos en su
forma esporulada (cultivo esporulado), en las siguientes imgenes
que se mostraran a continuacin se mostraran con sus respectivos
nombres:
Alternaria:
Cultivo joven
Cultivo esporulado
Pgina
Fusarium:
Cultivo joven
Cultivo esporulado
Mucor
Aspergillus
Rhizopus
Trichoderma
Pgina
A. Flavus
Conclusiones
Con estas observaciones de las estructuras de hongos segn sus
caractersticas nos ha permitido a nosotros, estudiantes, conocerlos y
a ser partcipes de la importancia que tienen stos en muchos los
mbitos de la vida. Entre las importancias de su estudio podemos
observar sus variadas propiedades, adems de las amplias funciones
y utilizaciones que podemos darles a los hongos como la
fermentacin, por ejemplo, adems de propiedades beneficiosas y
perjudiciales para el hombre.
Nos es importante para nosotros el aprendizaje y conocimiento de los
hongos y sobretodo conocer sobre su estructura y organizacin, ya
que son responsables de una amplia gama de patologas que afectan
al hombre y a animales. Por lo tanto este trabajo nos sirve
ampliamente como comienzo a nuestra internalizacin a la micologa.
Cuestionario
1. Qu es un hongo?
Ser vivo diferente de las plantas y de los animales, razn por la cual
se clasifican en un reino aparte llamado Fungi. La ciencia que los
estudia se llama Micologa (Mykes = Hongo y Logos = Estudio).
Poseen gran capacidad de adaptacin y pueden desarrollarse sobre
cualquier medio o superficie, tanto en los bosques como en las
ciudades. Se reproducen por medio de esporas, las cuales son
diseminadas principalmente por el viento y por el agua.
2. Por qu los hongos que causan micosis cutnea se llaman
queratinoflicos?
Porque estos hongos muestran afinidad por la queratina, protena que
encontramos en la piel, cabellos y uas.
3. Menciona y describe 4 hongos causantes de micosis
cutnea, subcutnea y sistmica en los humanos.
Pgina
Micosis Cutneas:
Candida albicans: es un hongo diploide asexual (forma de levadura).
Saprfito de la familia de los Sacaromicetos. Puede asumir
patogeneidad provocando la candidiasis; en ese caso se presenta
como una afeccin vaginal (vaginitis), de la cavidad oral, del intestino
o de la piel.
Trichophyton rubrum: es un hongo dermatofito antropoflico. Es la
causa ms frecuente de enfermedades de la piel como el pie de
atleta, prurito del jockey y tia.
Epidermophyton: es un gnero de hongos causantes de micosis
superficiales y cutneas, incluyendo a E. floccosum, causal de la
Tinea corporis (tia), Tinea cruris, Tinea pedis (pie de atleta), y
onicomicosis o Tinea unguium, una infeccin fngica del lecho de la
ua.
Malassezia: es un gnero de hongos. Se encuentra normalmente en la
piel de los animales, incluidos los humanos, y es la causa de la caspa
y de una enfermedad infecciosa y no contagiosa de la piel llamada
Pitiriasis versicolor.
Micosis Subcutneas:
Fonsecae pedrosoi: es un hongo saprtrofo, di-mrfico, pigmentado y
filamentoso que vive en plantas cactcea y suelo tropical y rido, el
cual es una de las especies causantes de lesiones subcutneas
verrugosas en humanos llamadas cromomicosis.
Sporothrix schenckii: es el nombre cientfico de un hongo dimrfico
encontrado en la naturaleza alrededor del mundo, en particular en
reas de temperaturas menores a 25 C y la nica especie del gnero
Sporothrix causante de la enfermedad mictica en humanos llamada
esporotricosis.
Madurella micetomi: es un hongo causante de micetoma una
infeccin crnica de la piel y de los tejidos subyacentes con tendencia
a afectar los huesos.
Micosis Sistemticas:
Aspergillus: es un hongo oportunista y uno de los que toma ventaja
de personas inmunocomprometidas. Causa Aspergilosis pulmonar
invasiva.
Pgina
Cryptococcus neoformans: es un hongo oportunista que a menudo se

encuentra en los excrementos de palomas. Este hongo se transmite
por inhalacin a partir de los excrementos. Puede ocasionar
criptococosis pulmonar y neumona aguda atpica.
Coccidioides: es un gnero de ascomicotas dis-mrficos, responsables
de la coccidiomicosis una infeccin endmica en los desiertos de
Norteamrica. El hospedero adquiere la infeccin por las vas
respiratorias (esporas).
Histoplasma capsulatum: hongo di-mrfico, es el agente etiolgico de
histoplasmosis, una micosis sistmica endmica en zonas tropicales,
subtropicales y templadas. El hongo se desarrolla en excremento de
aves y guano de murcilagos en ambientes cerrados.
4. Debido a qu, Candida Albican es conocido como un hongo
causante de micosis oportunista?
Porque ante determinadas oportunidades que les ofrece el
hospedador, al disminuir su capacidad defensiva, pueden colonizar,
infectar y producir enfermedad. En ocasiones y segn el estado
inmunitario pueden invadir tejidos y producir alteraciones que pueden
llevar a la muerte.
5. Menciona la forma de prevencin de las micosis cutneas
Mantener la piel seca y limpia, lavndola frecuentemente con agua y
jabn.
Secado muy cuidadoso de la piel, especialmente en reas de
pliegues.
Cambiar frecuentemente los paales en nios pequeos, utilizando
paales desechables de un solo uso.
Cambiar frecuentemente de calcetines, y evitar calzado cerrado que
mantenga el pie clido y hmedo.
Utilizar toallas limpias y de uso personal.
En las duchas y baos pblicos, utilizar sandalias de plstico o
chanclas.
6. Por qu se aade antibitico al medio de cultivo para
aislar hongos?
Se les aade antibiticos para inhibir el crecimiento de las bacterias
saprofitas que suelen contaminar las muestras. Los ms usados son el
Pgina
Cloranfenicol y la Gentamicina. Se aade tambin actidiona

(Cicloheximida) que inhibe el desarrollo de hongos saprofitos
ambientales.
Examen Microbiolgico: Identificacin de

Coliformes Totales y Fecales
Introduccin
Los procedimientos basados en diluciones en serie, haciendo crecer
microorganismos en medios de cultivo sintticos slidos o lquidos,
como el recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias (UFC)
o la estimacin por el mtodo del Nmero Ms Probable (NMP).
El mtodo del nmero ms probable fue descrito por Mc. Crady en
1915 y actualmente sigue siendo ampliamente utilizado. En un
principio este mtodo fue empleado para estimar el nmero de
microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo, se
ha demostrado que tambin puede ser aplicado para la determinacin
de microorganismos aerobios y anaerobios en lodos, sedimentos
marinos y suelos contaminados, por tanto este mtodo es aplicable
para estimar el nmero de microorganismos en muestras
de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias como anaerobias.
Los coliformes fecales son un subgrupo de los coliformes totales,
capaces de fermentar la lactosa a 44 C en vez de 37 C como lo
hacen los totales.
Pgina
stos ltimos se denominan termo-tolerantes por su capacidad de

soportar temperaturas ms elevadas. Esta es la caracterstica que
diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los
Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales
homeo-trmicos es favorecida por la existencia de condiciones
adecuadas
de materia orgnica, pH,
humedad.
Desde
hace
mucho tiempo se
han
utilizado
como
indicador
ideal
de
contaminacin fecal. Su presencia se interpreta como una indicacin
de que los organismos patgenos pueden estar presentes y su
ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos
de organismos productores de enfermedades.
Objetivos
El alumno conocer el medio de cultivo especfico para la
determinacin de coliformes.
Tambin el alumno debe realizar el anlisis y determinar la
presencia de coliformes totales y coliformes fecales.
Determinar la presencia de mesfilos.
Fundamento Terico
Los coliformes designan a un grupo de especies bacterianas que
tienen ciertas caractersticas bioqumicas en comn e importancia
relevante como indicadores de contaminacin del agua y los
alimentos.
Coliforme significa con forma de coli, refirindose a la bacteria
principal del grupo, la Escherichia Coli, descubierta por el bacterilogo
alemn Theodor von Escherich en 1860. Von Escherich la bautiz
como bacterium coli ("bacteria del intestino", del griego , kolon,
"intestino"). Con posterioridad, la microbiologa sistemtica nombrara
el gnero Escherichia en honor a su descubridor.
Hbitat:
Las bacterias de este gnero se encuentran principalmente en el
intestino de los humanos y de los animales de sangre caliente, es
decir, homeotermos, pero tambin ampliamente distribuidas en la
naturaleza, especialmente en suelos, semillas y vegetales.
Los coliformes se introducen en gran nmero al medio ambiente por
las heces de humanos y animales. Por tal motivo suele deducirse la
Pgina
mayora de los coliformes que se encuentran en el ambiente son de

origen fecal. Sin embargo, an existen muchos coliformes de vida
libre.
Los Coliformes como Indicadores:

Tradicionalmente se los ha considerado como indicadores de
contaminacin fecal en el control de calidad del agua destinada al
consumo humano en razn de que, en los medios acuticos, los
coliformes
son
ms
resistentes
que
las
bacterias patgenas intestinales y porque su origen es principalmente
fecal. Por tanto, su ausencia indica que el agua es
bacteriolgicamente segura.
Asimismo, su nmero en el agua es directamente e inversamente
proporcional al grado de contaminacin fecal; mientras ms
coliformes se aslan del agua, mayor es la gravedad de la descarga
de heces.
Bacterias que Integran el Grupo:

El grupo de los coliformes incluye bacterias en forma de bacilo, Gram
negativos,
con
las
siguientes
propiedades
bioqumicas: oxidasa negativo y capacidad de fermentar lactosa, con
produccin de gas en 48 horas a una temperatura de 37 C.
El grupo coliformes est formado por los siguientes gneros
Escherichia
Klebsiella
Enterobacter
Citrobacter
Coliformes Termo-Tolerantes:
Las bacterias coliformes fecales forman parte del total del grupo
coliforme. Son definidas como bacilos Gram-negativos, no
esporulados que fermentan la lactosa con produccin de cido y gas a
44.5 C +/ 0.2 C dentro de las 24 +/ 2 horas. La mayor especie en
el grupo de coliforme fecal es el Escherichia coli.1 2La presencia de
coliformes en el suministro de agua es un indicio de que el suministro
de agua puede estar contaminado con aguas negras u otro tipo de
desechos en descomposicin. Generalmente, las bacterias coliformes
se encuentran en mayor abundancia en la capa superficial del agua o
en los sedimentos del fondo.
Pgina
Coliformes e Higiene de Alimentos:

En la higiene de alimentos los coliformes no se consideran indicadores
de contaminacin fecal sino solamente indicadores de calidad.
Los coliformes totales se usan para evaluar la calidad de la leche
pasteurizada, leche en polvo, helados, pastas frescas, frmulas para
lactantes, fideos y cereales para el desayuno mientras que los
coliformes fecales se usan para evaluar los mariscos frescos.
Por ltimo, la E. Coli se usa como indicador en quesos frescos,
quesillos, cereales, masas con relleno, alimentos infantiles, cecinas
cocidas y verduras frescas.
Materiales:
Medio de cultivo caldo lactosa bilis verde brillante (BRILA).

Asa de col.
Campana de DURHAN.
Tobos de ensayo.
Algodn.
Pipeta estril.
Agua de cebada (agua a analizar).
Experimentacin:
Para la determinacin si el agua que consumimos es de buena calidad
segn parmetros debe tener menos de 500 UFC/ML, y si es de mala
calidad debe tener ms de 500 UFC/ML.
Para ello debemos de determinar mesfilos (para saber si es de buena
o mala calidad), estos mesfilos son bacterias indicadoras presentes
en aguas no aptas para el consumo que estn en grandes cantidades
y crecen rpido su presencia nos indica que algo malo est pasando
en el alimento.
Y para determinarlo se hace un estudio de nmero ms probable
(NMP).
Identificacin de Coliformes Totales:
1. Primero tomamos nueve tubos de ensayo y lo separamos en
tres grupos de tres y a todo esto lo llamaremos batera de
tubos.
Pgina
2. Luego preparamos la solucin medio de cultivo BRILA a una

doble concentracin, es decir si para una concentracin normal
se preparan 5 gr por cada 100 ml de agua entonces a una doble
concentracin seria 10 gr por 100ml de agua:
5 gr x 100 ml = 1x (concentracin normal)
10 gr x 100 ml = 2x (doble concentracin)
3. De todo ello solo tomamos 10 ml y lo echamos con una pipeta a
los tres primeros tubos de la batera. Y colocar dentro de ellas
una campana de DURHAN invertida a los 3 primeros tubos.
4. Luego se prepara la solucin BRILA a concentracin normal

como indica su preparacin, y de ello solo tomamos 9 ml y con
ayuda de la pipeta lo echamos a los 3 tobos siguientes a cada
uno de ellos y de igual manera a cada una de ellos se le
colocaran una campana de DURHAN de forma invertida.
5. Y despus se vuelve a preparar solucin BRILA tambin a

concentracin normal y de ello solo tomamos con la ayuda de la
pipeta 9.9 ml y lo echamos en los 3 ltimos tubos de la batera
Pgina
y tambin a cada uno de ellos se les colocara de forma invertida

una campana de DURHAN.
6. Una vez que todos los nueve tubos de la batera contengan el

medio de cultivo BRILA con ayuda de la pipeta estril echamos
10 ml de agua de cebada a los tres primeros tubos de la
batera.
7. Luego con la pipeta estril echamos 1 ml de agua de cebada a

los tres segundos tubos de la batera.
Pgina
8. Y por ltimo con la pipeta estril echamos 0.1 ml de agua de

cebada a cada tubo de ensayo a los 3 ltimos tubos de la
batera.
9. Por ultimo lo tapamos a todos con algodn y lo llevamos a

incubar a 37 c por un tiempo de 48 horas.
Observaciones:
Una vez transcurrido el tiempo de incubacin se le retiro de la
incubadora y se pudo observar que los 3 primeros tubos de la bateria
contenan gas (CO2), los 3 siguientes ninguno contenia gas y los 3
ultimos de la bateria tampoco contenan gas, esta lectura se
representa en NUMERO MAS PROBABLE como (3 0 0) NMP y que
compara con los parmetros deben de tener menos de 100 UFC/ML
para coliformes totales.
Pgina
Contiene gas
(CO2)
No contiene
gas
Identificacin de Coliformes Fecales:

1. Despus de este primer anlisis, y para la determinacin de los
coliformes fecales solo tomamos los tubos que formaron gas y
que se pudo observar en la campana de DURHAN.
2. Luego preparamos medio de cultivo BRILA a concentracin

normal y lo echamos con la pipeta estril a dos tubos de ensayo
y luego se colocaran una campana de DURHAN en cada tubo.
3. Luego tomamos el asa de col y sacamos una gota de los tubos

que formaron gas (uno por cada tubo) y lo pondremos en uno
de los dos tubos que acabamos de preparar, luego esterilizamos
el asa de col y sacamos una gota del tubo que formo gas (no
sacar esta gota del mismo tubo sino de cualquiera de los dos
restantes) y lo echamos en el segundo tubo que preparamos
recientemente.
Pgina
4. Una vez terminado esto lo tapamos con algodn y lo llevamos a

incubar a 45 C por un tiempo de 48 horas.
Observaciones:
Una vez transcurrido el tiempo de incubacin se le retiro de la
incubadora y se pudo observar que los ambos tubos contienen gas
dentro de la campana de DURHAN, como se puede observar en las
imgenes a continuacin:
Conclusiones
Se concluye con la determinacin de bacterias coliformes fecales y
totales, pueden estar presentes tanto en los alimentos (aguas de
cebada, jugos, refrescos etc. que has sido preparados sin un buen
cuidado higinico), y en el transcurso de los anlisis realizados en el
Pgina
laboratorio se pudo llegar a la conclusin que esas aguas de cebada

que comercializan a las afueras de la ciudad universitaria no son
aptas para el consumo humano ya que presentan coliformes.
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Pgina

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5. Qu importancia tiene el estudiar y observar

En trmino general si, por que la materia se puede descomponer,

Sistema Mecnico: Conjunto de piezas que sirven de soporte a las

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Coloraciones Bacterianas: Coloracin

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Enterobacteriaceae, bacilos no fermentados y especies de

2. Colocamos una pequea gota de agua en el centro de dos

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3. Flamea el asa de siembra y toma en condiciones aspticas una

4. Remueve la mezcla con el asa de siembra hasta formar una

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6. Teir con cristal violeta por 1 minuto.

7. Lavar con abundante agua el exceso de colorante.

8. Cubre con Lugol por 1 minuto.

9. Lava con agua el exceso de Lugol.

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Tie con safranina 1 minuto.

Lava con agua para eliminar el colorante de contraste.

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