RELAZIONE classe : 5stD Alunno : RIMOLDI FABIO Data : 26-10-10
TITOLO : Colorazione di Gram
In laboratorio stata organizzata la seguente esperienza :
Abbiamo verificato le propriet della parete cellulare di alcuni batteri presenti nello yogurt, in particolare la differenza strutturale della parete di un batterio Gram + (positivo) da un batterio Gram (negativo). Successivamente abbiamo visualizzato 3 tipologie di batteri differenti con il microscopio, notandone le caratteristiche fondamentali. Lo scopo dell esperienza studiare : lo scopo dellesperienza notare il comportamento di alcuni batteri quando sono sottoposti a colorazione, indagando sulla parete cellulare. Le propriet che essi assumono durante il processo di colorazione di Gram dipendono dalla struttura della loro parete cellulare. Se un batterio, sottoposto a colorazione, mantiene questultima anche dopo essere stato a contatto con alcol etilico, vorr dire che esso Gram positivo, infatti la sua spessa parete costituita da peptidoglicani assorbir permanentemente il colore somministratogli.
Gram + Se invece, dopo aver sottoposto a colorazione un batterio, esso perde il suo colore sotto lazione dellalcol etilico, vorr dire che il batterio considerato un Gram negativo, la cui parete cellulare composta da due membrane semipermeabili che racchiudono una parete di peptidoglicani. Il colore in questo caso non rimarr fisso, ma verr portato via dallalcol, a causa della struttura semipermeabile delle due membrane.
Gram Questa differenza di struttura tra le due pareti ci permette di appurare se i batteri considerati sono Gram+ o Gram-. I batteri da noi visualizzati nello yougurt sono: Lactobacillus Casei, Lactobacillus Bulgaricus, Streptococcus Termophilus. importante conoscere la struttura di questi batteri in quanto i Gram - sono spesso pericolosi al nostro organismo, mentre i Gram+ sono spesso innocui. 1
Nella seconda parte della prova, abbiamo osservato le differenze tra 3 diverse tipologie di batteri. stata utilizzata la seguente apparecchiatura : -vetrino -becco bunsen -pinza isolante -microscopio ottico -ovatta Sostanze: -yogurt -acqua -cristal violetto -ugol -alcol etilico -safranina Si proceduto nel seguente modo : Inizialmente si preleva un piccolo campione di yogurt e lo si pone sul vetrino dove lo si omogeneizza con acqua distillata; questo procedimento viene fatto per rendere il tutto pi diluito e quindi riconoscere meglio i batteri. Si passa poi alla fase di fissaggio, effettuato tramite la fiamma ossidante del bunsen, eseguendo passaggi rapidi del vetrino (per evitare di bruciare il campione), fino a quando lacqua della miscela acqua + yogurt non evapora completamente. A questo punto posso aggiungere il primo colorante, il cristal violetto, facendolo agire per 3 minuti. Successivamente, dopo aver tolto il colorante in eccesso, impregno il campione con lugol per 30 secondi, che funge da mordenzante. Lavo poi il tutto con alcol etilico e lascio agire per 30 secondi, passando poi il mio campione con acqua distillata. A questo punto avr i Gram+ ancora viola, mentre i Gram- incolore. Per fare risaltare anche i Gram-, aggiungo la safranina (un secondo colorante rossastro) e lascio reagire per 5 minuti. Dopo 5 minuti tampono delicatamente il campione con dellovatta ed osservo al microscopio. I Gram+ saranno rimasti colorati di viola per lassorbimento del primo colorante, mentre i Gramsaranno colorati di rosso, per lassorbimento del secondo colorante. Ovviamente se passassimo ancora una volta lalcol etilico sul campione, i Gram- perderebbero ancora una volta il colore rosso e diverranno incolore, mentre persister il colore viola sui Gram+. Al nostro microscopio abbiamo notato solo batteri con colorazione violacea, supponendo quindi che tutti i batteri presenti siano stati Gram+. Non vi erano Gram- nel nostro campione. Possiamo quindi concludere che i batteri contenuti nello yogurt: Lactobacillus Casei, Lactobacillus Bulgaricus, Streptococcus Termophilus, sono tutti Gram+.
Nella seconda parte della nostra esperienza abbiamo osservato 3 diversi tipi di batteri, servendoci del microscopio ottico: 2
1: Ebertthella Typhi
2: Nostoc
3: Bacillus Subtilis 3
Commenti sui dati, imprecisioni e procedure adottate :
lo scopo prefissato, cio capire le propriet di alcuni batteri causate dalla loro parete cellulare stato raggiunto; abbiamo infatti riconosciuto Gram+ e capito in cosa sono differenti dai Gram-. Lambiente esterno non ha influito particolarmente sullandamento della prova. Se dovessi ripetere lesperienza non cambierei nessuna procedura.
