Practica III

Observacin de Bacterias
Introduccin:
El tamao de la mayora de las clulas bacterianases tal que
resultan difciles de ver con el microscopio ptico. La principal
dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la
rodea, y la forma ms simple de incrementar el contraste es la
utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir
entre dos tipos diferentes de clulas o para revelar la presencia de
determinados constituyentes celulares, tales como flagelos,
esporas, capsulas, paredes celulares, centros de actividad
respiratoria, etc. (Stanieret al.2005). La mayora de los colorantes
son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por
los materiales celulares. Muchos de estos utilizados con frecuencia,
son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan
con intensidad con los constituyentes celulares cargados
negativamente, tales como los cidos nucleicos y los polisacridos
cidos (Ingrahametal 1999). Ejemplos de colorantes catinicos son
el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes
son molculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan
con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales
como muchas protenas. (Planas, 2000).En esta prctica se us la
tincin GRAM, esta es uno de los mtodos ms importantes en el
laboratorio bacteriolgico ya que permite diferenciar las bacterias
en Gram Positivas y Gram Negativas. Este mtodo fue descubierto
por Christian Gram (Dans), en 1884, quien observ que en cortes
histolgicos que contenan bacterias coloreadas con violeta de
genciana y tratadas con solucin acuosa de yodo, este colorante
podra ser removido del corte histolgico con el empleo de alcohol,
pero no delas bacterias. Posteriormente descubri que no todas las
bacterias retenan al violeta de gencianasino que algunas eran
decoloradas por accin del alcohol. A las primeras las llamo
Gram positivas ylas segundas Gram negativas. Estas que quedan
incoloras son teidas luego mediante el empleo deun colorante de
contraste como la safranina, parahacer posible su observacin.

(Madiganetal, 2004).La reaccin de la tincin de Gram se basa en

lacantidad de peptidoglicano que se encuentra en las paredes
celulares de las bacterias. Las Gram ( +)tiene muchas capas de
peptidoglicano, las cuales asu vez, sostienen molculas de acido
teicoico. Este reacciona con el cristal violeta y el yodo utilizadoen
este proceso de tincin. Un complejo de las molculas cristal
violeta-yodo-cido teicoico esmuy difcil de remover. Como la pared
celular delas Gram positivas retiene estos compuestos, esms difcil
decolorar una clula Gram (+ )que una Gram (- )(Schlegelet al,
2000) Una mezcla de