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DISCIPLINA: BIOQUMICA
PROFESSOR: DR.MARCELO SANTOS SILVA
IGUATU-CE
2015
(IFCE),
em
curso
de
Qumica,
IGUATU-CE
2015
SUMRIO
LISTA DE FIGURAS.......................................................................................... iv
1 INTRODUO............................................................................................... 1
2 MATERIAIS E MTODOS................................................................................ 2
2.1 Materiais.................................................................................................. 2
2.2 Mtodos.................................................................................................. 3
3 RESULTADOS E DISCUSSO.........................................................................6
3.1 Macerao............................................................................................... 6
3.2 Soluo de lise......................................................................................... 6
3.2.1 Detergente......................................................................................... 6
3.2.2 Sal.................................................................................................... 6
3.5 Banho-maria............................................................................................ 7
3.6 lcool...................................................................................................... 7
4 CONCLUSO................................................................................................ 8
5 REFERENCIAS.............................................................................................. 9
LISTA DE FIGURAS
1 INTRODUO
maioria
desoxirribonucleico, esta molcula foi descoberta por volta de 1969 por Johann
Friedrich Miescher. O DNA tem papel importante para os seres vivos, o
responsvel por todas as informaes genticas necessrias para criao de
um organismo, ele controla toda a atividade celular que transmitida de
gerao em gerao.
O DNA formado por nucleotdeos, e cada nucleotdeo formado por
uma molcula de desoxirribose, uma molcula de fosfato e uma base
nitrogenada que pode ser prica ou pirimdica. As bases pricas encontradas
no DNA so adenina e guanina; e as bases pirimdicas so citosina e timina,
sendo que a adenina liga-se timina e a guanina liga-se citosina atravs de
pontes de hidrognio.
Hoje os estudos para compreender e aperfeioar estas molculas tem
crescido rapidamente, pois suas aplicaes se tornaram inmeras para a
humanidade.
Na extrao do DNA pelos mtodos convencionais, a lise celular libera
as molculas em uma fase aquosa que separada dos restos celulares por
centrifugao. As protenas so removidas da fase aquosa por solventes
orgnicos (fenol, clorofrmio). O DNA, que permanece na fase aquosa,
precipitado com etanol e, posteriormente, purificado e suspendido em um buffer
adequado.
Neste trabalho laboratorial buscou-se verificar a existncia de molculas
de DNA em amostra de vegetais (banana) atravs da visualizao a olho nu
tendo como base um processo semelhante ao descrito anteriormente e
utilizado pelos cientistas quando comearam as primeiras investigaes sobre
o DNA. A extrao realizada basicamente utilizando-se detergentes, sais e
lcool.
2 MATERIAIS E MTODOS
Vidro relgio
2 bqueres (250 ml)
Funil de Vidro
Proveta (100 ml)
Basto de vidro
Amostras e Reagentes
1 banana
gua destilada
NaCl (sal de cozinha)
Detergente para loua
lcool etlico a 95% gelado (-10C)
Acessrios
Banho-maria (60C)
Balana analtica
Papel de filtro
Bandeja de isopor com gelo
Esptula
Pisseta
2.2 Mtodos
Com o auxilio de um vidro relgio e uma esptula amassou-se uma
banana at a mesma ficar macia e homognea. Em seguida pesou-se 5
3 RESULTADOS E DISCUSSO
A banana por ser poliploide, ou seja, possuir vrios cromossomos em suas
clulas, favoreceu a visualizao final do experimento e a ssim como esperado a
3.1 Macerao
A correta macerao do material selecionada possibilitou uma maior
superfcie de contato com a soluo de lise e melhor ao da soluo sobre as
clulas. Permitindo assim a liberao de uma maior quantidade de molculas
de DNA e, portanto, um bom rendimento.
3.2.1 Detergente
As membranas plasmtica e nuclear so compostas principalmente por
lipdios. A funo do detergente desestruturar as molculas de lipdio das
membranas biolgicas. Desta maneira, as membranas sofrem ruptura e todo o
contedo celular - inclusive o DNA - fica disperso na soluo.
3.2.2 Sal
O sal (NaCl) proporciona um ambiente favorvel para a extrao depois
de dissolvido na gua, se dissocia e contribui com ons positivos que
neutralizam a carga negativa do grupo fosfato do DNA. As molculas de DNA
passam a no sofrer repulso de cargas entre si, o que favorece sua
aglomerao.
3.5 Banho-maria
A temperatura elevada promove agitao das molculas, facilitando a
ao do detergente em desestabilizar as membranas lipdicas, por esse motivo
a soluo foi levada a banho-maria.
3.6 lcool
No bquer pode-se observar duas fases aps o adicionamento do lcool
resfriado, na parte inferior formou-se uma fase aquosa e na parte superior a
fase alcolica (sobrenadante).
O resfriamento permiti a precipitao do DNA, quanto mais gelado o
lcool, menos solvel ser o DNA . O lcool gelado desidrata o DNA, de forma
que este no mais fica dissolvido no meio aquoso. Alm disso, o DNA tende a
no ser solvel em lcool e, deste modo, suas molculas se agrupam.
Como o DNA tem menor densidade que os outros constituintes
celulares, ele surge na superfcie do extrato formando um aglomerado que
precipita junto com outras molculas. Os agregados moleculares obtidos so
uma mistura em proporo varivel de cidos nucleicos, protenas e pectina,
um carboidrato presente na lamela intercelular e no vacolo das clulas
vegetais.
Adicionar o lcool gelado em velocidade lenta auxilia na eficincia de
precipitao do DNA.
4 CONCLUSO
A aula prtica constitui um importante recurso metodolgico facilitador do
processo de ensino-aprendizagem. Atravs da experimentao, o professor alia
teoria prtica e possibilita o desenvolvimento da pesquisa e da
problematizao em sala de aula, despertando a curiosidade e o interesse do
aluno. Transforma o estudante em sujeito da aprendizagem, possibilitando que
o mesmo desenvolva habilidades e competncias especficas.
A partir da pratica realizada foi possvel observar a precipitao das
cadeias de DNA aglomeradas na fase alcolica alm de instigar a pesquisa
sobre a ao de cada substancia, agentes fsicos e qumicos, envolvidos no
processo de extrao.
Portanto correto afirmar que a aprendizagem foi efetivamente
significativa e a aula conseguiu cumprir todos os seu objetivos.
5 REFERENCIAS