Interciencia

ISSN: 0378-1844
interciencia@ivic.ve
Asociacin Interciencia
Venezuela

Araujo, Ismenia; Gmez, Antonio; Barrera, Magleidy; Angulo, Nancy; Morillo, Gustavo; Crdenas,
Carmen; Herrera, Lenn
SURFACTANTES BIOLGICOS EN LA BIORREMEDIACIN DE AGUAS CONTAMINADAS CON
CRUDO LIVIANO
Interciencia, vol. 33, nm. 4, abril, 2008, pp. 245-250
Asociacin Interciencia
Caracas, Venezuela

Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=33933403

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SURFACTANTES BIOLGICOS
EN LA BIORREMEDIACIN DE AGUAS
CONTAMINADAS CON CRUDO LIVIANO
Ismenia Araujo, Antonio Gmez, Magleidy Barrera, Nancy Angulo,
Gustavo Morillo, Carmen Crdenas y Lenn Herrera

RESUMEN
Se investig el efecto de los biosurfactantes en la eficiencia
de los procesos de recuperacin de aguas contaminadas con
crudo liviano. El biosurfactante utilizado fue producido a partir de cepas bacterianas (MI9 y MI10) pertenecientes al grupo
de cepas del Laboratorio de Microbiologa Industrial del Centro de Investigacin del Agua, Universidad del Zulia, Venezuela.
Para el estudio de tratabilidad, durante tres meses, adems del
biosurfactante utilizado, se prepar un cultivo mixto con las cepas bacterianas MI5, MI7, MI9, MI10, y MI11. Los tratamientos
aplicados fueron: agua del Lago de Maracaibo, hidrocarburo,
cultivo mixto y biosurfactante (ANHCB); agua del lago esterilizada, hidrocarburo y cultivo mixto (AEHC); agua del lago, hi-

esde hace dcadas se han

empleado medidas biocorrectoras en ambientes
contaminados, con importante xito (Levin
y Gealt, 1997; Eweis et al., 1999). La aplicacin ms frecuente de la biorremediacin ha
sido en la limpieza de derrames de embarcaciones y fugas de tanques que almacenan
productos petrolizados (Alexander, 1994; Cookson, 1995; Young y Gerniglia, 1995). Resalta el uso de microorganismos, en especial

drocarburo y cultivo mixto (ANHC); agua del lago, hidrocarburo

y biosurfactante (ANHB); y agua del lago e hidrocarburo (ANH).
Los anlisis fsico-qumicos y microbiolgicos permitieron determinar la eficiencia del biosurfactante y el cultivo mixto en la
biorremediacin. Los resultados mostraron que el mejor ensayo
de tratabilidad fue el ANHCB, con una remocin del 81% de los
hidrocarburos totales y la mayor remocin del N y P presentes.
La adicin del biosurfactante y utilizacin del cultivo mixto influenciaron positivamente la biodegradacin del crudo liviano, lo
cual permite inferir que el uso de biosurfactante es una opcin
que incrementa la eficiencia en los procesos de biorremediacin
de aguas contaminadas con hidrocarburo.

bacterias y hongos, para ayudar a la descontaminacin y recuperacin de ambientes naturales y para el tratamiento de efluentes industriales o municipales (Nishino y Spain, 1993;
Landa, 1994; Wrenn, 1994). Muchos de estos
microorganismos producen agentes activos de
superficie (biosurfactantes) cuando crecen en
hidrocarburos (Cooper et., 1979; Duvnjak et
al., 1982; Kitamoto et al., 1993; Desai y Banat, 1997). El trmino biosurfactante ha sido
amplimente aplicado a compuestos de origen

biolgico con la capacidad de disminuir la

tensin superficial; muchos de ellos abarcan
un amplio rango de propiedades funcionales
como son emulsificacin, separacin de fases,
actividad superficial y reduccin de la viscosidad de aceites crudos, y han sido aplicados
en las industrias agrcola, textil y petroqumica. Ellos representan un amplio espectro de
biomolculas donde se incluyen, entre otros,
cidos grasos normales e hidroxilados, glicolpidos, lipopptidos cclicos, N-acilamino-

PALABRAS CLAVE / Biorremediacin / Biosurfactante / Cultivo Mixto / Hidrocarburo /

Recibido: 14/09/06. Modificado: 27/02/2008. Aceptado: 28/02/2008.

Ismenia Araujo. Licenciada en Educacin, Mencin Ciencias Biolgicas, La Universidad del Zulia
(LUZ), Venezuela. M.Sc. en Microbiologa, University of Georgia, EEUU. Profesora, LUZ, Venezuela y Coordinadora, Laboratorio
de Microbiologa Industrial, Centro de Investigacin del Agua (CIA-LUZ), Venezuela. Direccin: CIA-LUZ, Ciudad Universitaria.
Ncleo Agropecuario. Lagunas de Oxidacin. Cdigo Postal 4005 - Venezuela. e-mail: ismenia_araujo@hotmail.com
Antonio Gmez. Ingeniero Qumico, LUZ, Venezuela. Estudiante de Posgrado, CIA-LUZ, Venezuela.
Magleidy Barrera. Ingeniero Qumico, LUZ, Venezuela. Estudiante de Posgrado, CIA-LUZ, Venezuela.
Nancy Angulo. Licenciada en Biologa y Maestra en Microbiologa, LUZ, Venezuela. Profesora, CIA-LUZ, Venezuela.
Gustavo Morillo. Ingeniero Agrnomo y Maestra en Ingeniera Ambiental, LUZ, Venezuela. Profesor, CIA-LUZ, Venezuela.
Carmen Crdenas. Ingeniero Qumico y Maestra en Ingeniera Ambiental, LUZ, Venezuela. Profesora, CIA-LUZ, Venezuela.
Lenn Herrera. Ingeniero Qumico, LUZ, Venezuela. Maestra en Ingeniera Ambiental y
Salud, The University of Texas, Austin, EEUU. Profesor, CIA-LUZ, Venezuela.

APR 2008, VOL. 33 N 4

0378-1844/08/04/245-06 $ 3.00/0

245

Tabla I
TRATAMIENTOS APLICADOS EN EL ESTUDIO
DE TRATABILIDAD
Tratamiento

Agua del lago

Estril

ANHCB
AEHC
ANHC
ANHB
ANH

No
estril
+

+
+
+
+

Hidrocarburo Cultivo Biosurfactante

mixto
+
+
+
+
+

+
+
+

AN: agua no estril del lago, AE: agua estril del lago, H: hidrocarburo,
C: cultivo mixto, B: biosurfactante

cidos, lipopptidos, mono- y diglicridos, y

fosfolpidos (Kosaric, 1993). Desde el punto
de vista qumico, los biosurfactantae presentan gran diversidad estructural, poseen una
efectiva selectividad y son estables a elevadas
temperaturas, pH y salinidad.
Los biosurfactantes son
ms biocompatibles, ms fcilmente biodegradables y por lo tanto menos txicos,
menos perjudiciales al ambiente y ms activos a bajas concentraciones (Rosenberg
y Ron, 1999; Lang, 2000). Adems, proporcionan un mayor contacto con el contaminante, facilitando su degradacin. Los
contaminantes hidrofbicos presentes en
los hidrocarburos del petrleo requieren su
solubilizacin para poder ser degradados
por las clulas microbianas; por lo que la
presencia de biosurfactantes incrementa la
degradacin microbiana de los contaminantes. El criterio utilizado para seleccionar
los microorganismos productores de surfactantes es, principalmente, su habilidad
para reducir la tensin superficial (Bodour
y Miller-Maier, 1998; Cooper et al., 1979).
Este estudio persigue optimizar el proceso de biorremediacin de
un agua contaminada con crudo liviano
utilizando surfactantes biolgicos y un cultivo mixto de cepas bacterianas. El trabajo fue realizado en dos etapas; la primera
etapa consisti en la produccin del biosurfactante, mientras que en la segunda etapa
se realiz un estudio de tratabilidad para
determinar el efecto del biosurfactante sobre la eficiencia del cultivo mixto integrado por cepas bacterianas aisladas de aguas
contaminadas con hidrocarburos.
Materiales y Mtodos
Produccin del biosurfactante
Se seleccionaron seis
cepas bacterianas del grupo de cepas aisladas en el Laboratorio de Microbiologa
Industrial del Centro de Investigacin del
Agua de la Universidad del Zulia (MI3,
MI5, MI7, MI9, MI10, y MI11). Cada una
de ellas fue transferida con un asa de pla-

246

Tabla II
PARMETROS FSICOQUIMICOS Y MICROBIOLGICOS
Parmetro
Hidrocarburos totales
S.A.R.A.
Nitrgeno total
Fsforo total
Metales pesados
pH
Tensin interfacial
Hetertrofos mesfilos
Tincin de Gram

Mtodo
*5520-Gravimtrico

ASTM D2007-75 Gravimtrico

*4500-NH Volumtrico
3
*4500-C cido ascrbico
Espectrofotmetro
*4500-H+ Electrodo selectivo
Tensiometro de Lecomte Du noy
9215-Plate count
Kerr, 1981; Gerhardt, 1981

*APHA (1998)

tino a un medio fresco de caldo Tripticasa

Soya y se incub a 37C durante 24h en
una incubadora Memmert B-50 para su
activacin. Luego, 1ml de cada una de las
cepas se transfiri a 9ml de caldo Tripticasa Soya y se incubaron a 37C hasta alcanzar un crecimiento superior a 1108UFC/
ml (Gerhardt et al., 1981; Kerr, 1981). Los
cultivos se centrifugaron a 2000xg en una
centrifuga MSE Med Oil-58199 por 10min
para separar las clulas del medio de cultivo. Se descart el sobrenadante y el centrifugado fue lavado y resuspendido en solucin salina estril. La nueva suspensin
fue centrifugada a 2000xg por 10min, se
descart el sobrenadante y el centrifugado
se resuspendi en un medio mnimo mineral, constituyendo as el inculo (Duvnjak
et al., 1982).
Se agreg cada inculo
(3% v/v) en fiolas que contenan un medio
mnimo mineral (MMM) (89% v/v) y gasoil
(8% v/v) como nica fuente de carbono para
un volumen total de 1 litro. El MMM usado
para la biosntesis del surfactante estuvo integrado por 1,2g NH4CL, 2,4g KNO3, 0,0005g
CaCl2.6H2O, 2,4g NaSO4, 1,2g MgSO4, 0,6g
K2HPO4 y 0,002g FeSO47H2O por litro de
agua destilada. El MMM fue esterilizado a
121C y 15lb de presin durante 15min. El
gasoil utilizado fue esterilizado por filtracin. Seguidamente, la mezcla se coloc en
una incubadora Memmert B-50, por 144h a
37C. Luego de la incubacin, la mezcla fue
centrifugada a 2000xg por 15min en una
centrfuga MSE Med Oil-58199, para separar
las clulas del sobrenadante (biosurfactante).
Se tom el sobrenadante y se adicion, en
diferentes concentraciones, a una mezcla de
gasoil con agua para determinar la tensin
interfacial, utilizando el tensimetro de Lecomte Du noy (Duvnjak et al., 1982; Roberts et al., 1991). Las cepas, cuyo sobrenadante obtenido a las 144h fue ms eficiente
en la disminucin de la tensin interfacial de
la mezcla gasoil-agua (MI9, MI10 y un cultivo mixto de ambas) fueron escogidas para
la produccin de surfactante en un perodo
de incubacin de 192h, siguiendo la metodologa descrita inicialmente.

Estudio de tratabilidad
A partir de las cepas MI5,
MI7, MI9, MI10, MI11 activadas, se prepar
el cultivo mixto para realizar el montaje de
los diversos tratamientos del estudio de tratabilidad, como se muestra en la Tabla I. Cada
tratamiento se prepar agregando el biosurfactante obtenido de las cepas MI9 y MI10
(20% v/v), cultivo mixto (10% v/v) y el
hidrocarburo liviano (1% v/v) en fiolas que
contenan agua del lago y fosfato de amonio para un volumen total de 100ml (Atlas,
1984). Los diferentes tratamientos fueron
incubados en una incubadora con agitacin
New Brunswick G25 durante 30, 60, y 90
das. Se realizaron anlisis fisicoqumicos y
microbiolgicos (Tabla II), segn la metodologa establecida en APHA (1998).
Para el anlisis estadstico
de los resultados se aplic anlisis de varianza, utilizando un diagrama de bloque al
azar y mediante la aplicacin de las pruebas
de comparacin entre pares de medias por el
mtodo de Dunnett, que compar todos los
tratamientos con un control (SAS, 2002).
Resultados y Discusin
Macro y micromorfologa
de las cepas bacterianas
Las caractersticas macromorfolgicas y micromorfolgicas de las colonias de cada una de las cepas bacterianas utilizadas para la produccin del biosurfactante
y el estudio de tratabilidad fueron registradas
segn el formato sugerido por Kerr (1981).
Las cepas resultaron cocos y bacilos, siendo
la mayora Gram negativas (Tabla III).
Tensin interfacial del gasoil-agua
con diferentes concentraciones
de biosurfactante
La Figura 1 muestra la
tensin interfacial de la mezcla gasoil-agua
cuando se adicionaron diferentes concentraciones (0, 10 y 20% v/v) del biosurfactante
obtenido a las 144h de incubacin. Puede observarse que la tensin interfacial de la mezcla gasoil-agua para las seis cepas estudiadas

APR 2008, VOL. 33 N 4

TABLA III
MACRO- Y MICROMORFOLOGA
DE LAS CEPAS BACTERIANAS

interfacial, de 29
a 1,3dyncm-1, utilizando una cepa
de Pseudomonas
Cepa
Macromorfologa
Micromorfologa
aeruginosa.
La Figura 2
MI3
Borde entero, blanca, circular,
Cocos Gram +,
muestra la reducconvexa y lisa.
cadenas aisladas y agrupados.
cin de la tensin
MI5
Borde entero, amarillenta,
Bacilos Gram ,
interfacial
con
circular, umbonante.
delgados aislados y en pares. las cepas MI9,
MI7
Borde entero, beige, circular,
Cocobacilos Gram ,
MI10 y el cultivo
convexa, lisa.
delgados aislados y en pares. mixto de ambas
(MI9+MI10)
a
MI8
Borde lobulado, griscea,
Bacilos Gram ,
concentraciones
filamentosa, umbonante.
alargados y en pares.
diferentes con un
MI9
Borde entero, beige, circular,
Cocobacilos Gram ,
perodo de incuconvexa, lisa.
agrupados en cadenas.
bacin de 192h.
MI10 Borde entero, blanca, circular,
Bacilos cortos Gram ,
A una concentraconvexa, lisa.
aislados y en racimos.
cin del 10% v/v
MI11 Borde entero, blanco, circular,
Cocos Gram ,
del surfactante,
convexa, lisa.
aislados y agrupados.
la tensin interfacial fue de 13,5
(MI3, MI5, MI7, MI9, MI10, y MI11) a una y 14dyncm-1, mientras que a 20% v/v los
concentracin de 10% v/v estuvo comprendi- valores disminuyeron a 8,5 y 9,5dyncm1.
da entre las 19,5 y 21,5dyncm-1, resultando Al comparar los valores obtenidos en los
en una disminucin de la tensin interfacial dos ensayos, la tensin interfacial de la
(16 y 19dyncm-1) cuando se increment la mezcla gasoil-agua con el biosurfactanconcentracin a 20% v/v. Los surfactantes te producido por las cepas MI9 y MI10 a
producidos por las cepas MI9 y MI10 fueron las 192h de incubacin fue menor, que la
los que lograron la mayor reduccin de la producida por todas las cepas bacterianas
tensin interfacial, 16 y 16,5dyncm-1, respec- a las 144h de incubacin. Ello fue debido
tivamente, seleccionndose ambas cepas bac- probablemente a una interaccin entre las
terianas para el ensayo de tratabilidad. Estos cepas que les impeda lograr una etapa de
valores mostraron mayor actividad superficial mxima actividad o a que no haban llegade las cepas a los reportados por Batista et do a completar su etapa de adaptacin y
al. (2006) en un estudio de aislamiento y aclimatacin. Tambin se puede notar que
caracterizacin de bacterias productoras de al adicionar al 20% v/v el biosurfactante
biosurfactantes procedentes de sitios conta- producido por cada una de las cepas bacminados con hidrocarburos, en los cuales terianas, la tensin interfacial de la mezcla
los sobrenadantes de dos cepas bacterianas gasoil-agua fue menor a las obtenidas con
causaron disminuciones en la tensin superfi- menor concentracin. Es posible inferir que
cial de 36,2 a 35,8 y de 46,5 a 41,8dyncm-1. a mayor tiempo de incubacin se logra una
Por su parte, Benincasa y Accorsini (2007), mayor disminucin de la tensin superficial
en una solucin acuosa con hexadecano lo- de la mezcla gasoil-agua, lo cual puede degraron una mayor disminucin de la tensin berse a que se produce una mayor cantidad
del biosurfactante. Menezes et al. (2005),
utilizando el sobrenadante de cultivos de

Figura 1. Tensin interfacial a diferentes concentraciones del biosurfactante obtenido a las 144h de
incubacin.

APR 2008, VOL. 33 N 4

Figura 2. Tensin interfacial a diferentes concentraciones del biosurfactante obtenido a las 192h
de incubacin.

Figura 3. Densidad bacteriana (a) e hidrocarburos

totales remanentes (b) durante el estudio de tratabilidad. AN: agua no estril del lago, AE: agua
estril del lago, H: hidrocarburo, C: cultivo mixto, B: biosurfactante.

cepas bacterianas aisladas de suelos contaminados con diesel, obtuvieron disminuciones de la tensin superficial de 56,4 y
41,4 a 24 y 7,4dyncm-1 despus de 168h
de incubacin.
Estudio de tratabilidad
Determinacin microbiolgi
ca. Los valores de densidad poblacional para
cada tratamiento durante el ensayo de tratabilidad se muestran en la Figura 3a, donde
se aprecia que dichos valores estuvieron entre
129106 y 1480106UFC/ml. Todos los tratamientos mostraron un aumento progresivo
en la densidad poblacional a excepcin del
tratamiento ANH, donde la poblacin bacteriana decreci. Los tratamientos con una mayor densidad poblacional al final del ensayo
fueron ANHCB, ANHC y AEHC, con 1480,
1318 y 1108106UFC/ml, respectivamente, y
en ellos se encontraban los microorganismos
aportados por el cultivo mixto. Al observar
el comportamiento de estas curvas se puede
inferir que hubo una mayor actividad metablica en el tratamiento ANHCB, evidenciado por la densidad poblacional, mientras que
en el tratamiento ANH ocurri lo contrario
(7UFC/ml); los microorganismos autctonos
del agua del Lago de Maracaibo no lograron adaptarse al crudo liviano como nica
fuente de carbono. Este resultado sugiere
que una gran variedad de microorganismos
pueden subsistir en ambientes contaminados
con petrleo aunque no todos son capaces
de asimilar hidrocarburos y adaptarse a estas
condiciones (Cook y Westlake, 1972; Prince,
1993; Levin y Gealt, 1997).

247

El anlisis de varianza
mostr que existen diferencias altamente
significativas, con un 99% de confiabilidad, en la densidad bacteriana tanto para
los diferentes tratamientos, como a lo largo
del tiempo. Al aplicar el mtodo de Dunnett se encontr que existen diferencias
significativas en la densidad bacteriana de
los tratamientos AEHC y ANHB, ambos
con respecto al control (ANH) con un 95%
de confiabilidad. Se encontr, adems, que
existen diferencias altamente significativas
en la densidad bacteriana de los tratamientos ANHCB y ANHC, ambos con respecto
al control (ANH).
Hidrocarburos totales. Las concentraciones
de hidrocarburos totales encontrados al inicio
del ensayo estuvieron entre 7467 y 8265mgl-1,
mientras que al final resultaron entre 1394 y
7726mgl-1 (Figura 3b). Las mayores concentraciones de hidrocarburos remanentes al final
del ensayo pertenecieron al tratamiento ANH
(7726mgl-1) y los valores de hidrocarburo remanentes ms bajos se reflejaron en el tratamiento ANHCB (1394mgl-1). Al correlacionar
estos resultados con los valores de densidad
poblacional se observa que a mayor densidad
poblacional menor concentracin de hidrocarburos remanentes. As, el tratamiento ANHCB tuvo los mayores valores de densidad
poblacional, mientras que los valores ms bajos fueron los del tratamiento ANH. Las concentraciones (mgl-1) de hidrocarburos de los
tratamientos ANHCB (1394), AEHC (5305),
ANHC (4746) y ANHB (3771) estuvieron
muy por debajo de los resultados obtenidos
en el control ANH (7726). Esta diferencia se
debi a la baja actividad metablica de los organismos presentes en el tratamiento control.
De igual manera, se observa que las concentraciones de crudo disminuyeron rpidamente
durante los primeros 30 das, perodo durante
el cual los microorganismos degradaron entre
un 50 y 60% del hidrocarburo.
El anlisis de varianza
mostr que existen diferencias altamente significativas en la cantidad de hidrocarburos remanentes, tanto para los diferentes tratamientos, como a lo largo del tiempo, con un 99%
de confiabilidad. La aplicacin del mtodo
de Dunnett revel que existen diferencias no
significativas en las concentraciones de hidrocarburo remanentes del tratamiento AEHC y
el control (ANH). Existen diferencias significativas en las concentraciones de hidrocarburo
remanentes del tratamiento ANHC y el control, con un 95% de confiabilidad; y, adems,
existen diferencias altamente significativas en
las concentraciones de hidrocarburos remanentes de los tratamientos ANHCB y ANHB
con respecto al control, ambos con un 99%
de confiabilidad.
La Figura 4 muestra los
valores de remocin de crudo liviano. Los
valores ms altos los presentaron los trata-

248

Figura 4. Porcentajes de remocin de crudo liviano. AN: agua no estril del lago, AE: agua estril del lago, H: hidrocarburo, C: cultivo mixto, B:
biosurfactante.

mientos ANHCB y ANHB, con 81 y 50%,

respectivamente, seguidos por los tratamientos ANHC y AEHC con 36 y 29%. El me-

de hidrocarburo presentes en el crudo liviano

fueron 5746 de saturados, 125 de aromticos,
1467 de resinas y 109 de asfaltenos, mientras
que al final del ensayo fueron 3.821, 123, 340
y 74 mg/l, respectivamente. Estos resultados muestran que el crudo estaba constituido
principalmente por hidrocarburos saturados y
resinas. El anlisis de varianza demostr que
existen diferencias altamente significativas en
las fracciones de hidrocarburos (saturados,
aromticos, resinas y asfaltenos) tanto para los
diferentes tratamientos, como a lo largo del
tiempo, con un 99% de confiabilidad.
En la Figura 5 se presenta
la remocin de las fracciones de hidrocarburos, aprecindose una mayor remocin de
hidrocarburos saturados en los tratamientos
ANHCB (78%) y ANHB (43%), mientras
que en los tratamientos AEHC y ANHC la

Tabla IV
FRACCIONES DE HIDROCARBUROS SATURADOS,
AROMTICOS I Y II, RESINAS Y ASFALTENOS AL INICIO Y AL FINAL
DEL ESTUDIO DE TRATABILIDAD
Tratamiento
ANHCB
AEHC
ANHC
ANHB
ANH

Das
0
90
0
90
0
90
0
90
0
90

Concentracin (mgl-1)
Saturados
5633
1226
5695
4740
5676
3745
5289
3016
6434
6378

Aromticos I

Aromticos II

152
34
175
157
188
128
105
129
158
152

141
40
154
154
148
116
93
123
136
196

Resinas

Asfaltenos

1414
67
1337
168
1321
175
1870
416
1390
872

119
2,66
99
85
114
108
89
54
124
121

AN: agua no estril del lago, AE: agua estril del lago, H: hidrocarburo, C: cultivo mixto, B: biosurfactante.

nor porcentaje de remocin (7%) fue el del

tratamiento control ANH.
Los tratamientos ANHCB
y ANHB presentaron remociones superiores a ANHC y AEHC que contenan cultivo
mixto, debido a que el biosurfactante adicionado influenci positivamente la emulsin
creando una superficie de contacto mayor
(Zhaozhe et al., 2003). Whang et al. (2007)
en un estudio de degradacin de diesel con
la utilizacin de un biosurfactante obtuvieron
100% de degradacin de los hidrocarburos
totales, mientras que en el
tratamiento sin el biosurfactante, se obtuvo el 64% en
200h de tratamiento.
Saturados, aromticos, resinas y asfaltenos. La Tabla
IV presenta los valores de
fracciones de hidrocarburos
presentes en el crudo (saturados, aromticos, resinas y
asfaltenos) al inicio y final
del ensayo. Al inicio las
concentraciones promedio
(mgl-1) de las fracciones

remocin obtenida fue de 17 y 34%, respectivamente. El tratamiento ANH (1%) permaneci sin cambio significativo en la cantidad
de saturados, siendo este tratamiento el que
present un menor porcentaje de remocin
de crudo liviano. Se observ una remocin
en las fracciones de resinas en todos los tratamientos; encontrndose en los tratamientos
ANHCB (95%), AEHC (87%), ANHC (87%)
y ANHB (78%) los cambios ms significativos; mientras que el control removi el 30%.
Con respecto a los asfaltenos, se observ una

Figura 5. Remocin de fracciones de hidrocarburos (SARA).

APR 2008, VOL. 33 N 4

incrementando los valores

de estas fracciones (Young
y Gerniglia, 1995; Levin y
Gealt, 1997).
Nitrgeno y fosforo
Las Figuras 6a y b
presentan las concentraciones totales de N y P. Se
observa una disminucin
de sus concentraciones durante todo el estudio. Las
concentraciones iniciales
para el N estuvieron alrededor de 460 y 684mgl1
en los tratamientos y disminuyeron hasta 246 y
329mgl-1, mientras que
las concentraciones iniciales para el P estuvieron
Figura 6. Concentraciones de nitrgeno (a) y fsforo (b) totales. AN: alrededor de 10 y 42mgl-1
agua no estril del lago, AE: agua estril del lago, H: hidrocarburo, en los tratamientos y disC: cultivo mixto, B: biosurfactante.
minuyeron hasta 0,07 y
14mgl-1. Los mayores conmayor remocin en los tratamientos ANHCB sumos de N y P se observan en el tratamien(98%) y ANHB (39%); mientras que en los to ANHBC. El anlisis de varianza mostr
tratamientos AEHC y ANHC fue 14 y 5% que existen diferencias altamente significatirespectivamente y el tratamiento ANH (2%) vas en las concentraciones de P, tanto para
present el menor porcentaje de remocin. El los diferentes tratamientos, como a lo largo
tratamiento ANHCB (75%) alcanz la mayor del tiempo, con un 99% de confiabilidad, y
remocin de hidrocarburos aromticos, se- diferencias significativas en las concentracioguido de ANHC (28%) y AEHC (5%). Los nes de N, tanto para los diferentes tratamientratamientos ANHB y ANH mostraron un tos, como a lo largo del tiempo, con un 95%
incremento en los aromticos con respecto de confiabilidad.
Hubo un mayor consua los valores iniciales, comportamiento que
se debe a la biotransformacin de resinas y mo del N y P durante los primeros 30 das
asfaltenos, que al degradarse parcialmente del ensayo. Esto se debi a que durante este
dan lugar a la acumulacin de derivados ms tiempo se degrad la mayor cantidad de crusencillos como los saturados y aromticos, do y los organismos utilizan los nutrientes
Tabla V
CONCENTRACIONES DE METALES PESADOS
AL INICIO DEL ESTUDIO DE TRATABILIDAD
Tratamiento
ANHCB
AEHC
ANHC
ANHB
ANH

Ni

Zn

<0,14
<0,14
<0,14
<0,14
<0,14

0,20
0,30
0,25
0,09
0,16

Metales pesados (mg/l)

Cd
Pb
Cr
<0,04
<0,04
<0,04
<0,04
<0,04

<0,19
<0,19
<0,19
<0,19
<0,19

<0,078
<0,078
<0,078
<0,078
<0,078

Tratamiento/Das
ANHCB
AEHC
ANHC
ANHB
ANH

0
8,96
9,03
8,93
7,2
7,3

Potencial de hidrgeno
30
60
9,44
9,3
9,35
9,33
9,45
9,44
9,15
9,4
8,96
8,8

AN: agua no estril del lago, AE: agua estril del lago,
H: hidrocarburo, C: cultivo mixto, B: biosurfactante.

APR 2008, VOL. 33 N 4

90
9,36
9,09
9,12
9,51
8,65

Metales pesados
Los metales pesados generalmente presentan un moderado ndice
de toxicidad en los microorganismos. En la
Tabla V se muestran las concentraciones de
metales pesados para cada tratamiento al inicio del ensayo. Los resultados determinaron
que los niveles de metales analizados estaban por debajo de lo establecido en la norma
vigente para lmites y rangos mximos permitidos de calidad de vertidos lquidos, que
sean o vayan a ser descargados, en forma
directa o indirecta a ros, estuarios, lagos y
embalses (Gaceta Oficial, 1998), por lo que
no se continuaron realizando los anlisis a lo
largo del estudio.
La Tabla VI muestra el pH
en los tratamientos durante todo el estudio.
Los valores de pH en los tratamientos ANHCB, AEHC, ANHC y ANHB estuvieron
alrededor de 9 y 9,5, mientras que en el tratamiento control (ANH) se encontr en 7,3 y
~8,8. Los valores de pH en cada uno de los
tratamientos fueron bastante cercanos y estables, lo cual favoreci el proceso de degradacin en cada tratamiento. El rango ptimo
para que muchos microorganismos se establezcan en sistemas de tratamientos biolgicos
se encuentra entre 7 y 9 (Atlas, 1984), ya que
los niveles de pH ligeramente alcalinos favorecen el crecimiento biolgico.
REFERENCIAS

Ba

<1,9
<1,9
<1,9
<1,9
<1,9

4,6
4,4
4,0
4,5
4,6

AN: agua no estril del lago, AE: agua estril del lago, H: hidrocarburo, C: cultivo mixto, B: biosurfactante.

Tabla VI
DETERMINACIN DE pH

la concentracin disminuye en mayor proporcin para el N que para el P, lo que pudiera ser atribuido a que en la mayora de las
clulas bacterianas el N representa ~10-14%
de la masa microbiana y el P un 0,5-2%, y
al momento de formar nuevos individuos
los microorganismos necesitan ms de estos
constituyentes para la asimilacin y la sntesis del nuevo material celular.

para lograr una degradacin rpida y completa.

Muchos informes demuestran que las escasas concentraciones de N y P en
el agua de mar reducen
la velocidad de degradacin de los hidrocarburos
despus de los derrames
de petrleo (Dibble y Bartyla, 1976; Ward y Brock,
1978; Prince, 1993). Tambin puede observarse que

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BIOLOGICAL SURFACTANTS IN THE BIOREMEDIATION OF LIGHT OIL CONTAMINATED WATER

Ismenia Araujo, Antonio Gmez, Magleidy Barrera, Nancy Angulo, Gustavo Morillo, Carmen Crdenas and Lenn Herrera
SUMMARY
The efficiency of biosurfactants in the bioremediation of light
crude oil in contaminated waters was studied. The biosurfactant
used was produced by selection of bacterial strains (MI9 and MI10)
from the laboratory stock of the Industrial Microbiology Laboratory, Centro de Investigacin del Agua, Universidad del Zulia, Venezuela. For the study of different treatments, lasting three months,
besides the biosurfactant used a mixed culture was prepared with
the bacterial strains MI5, MI7, MI9, MI10, and MI11. The applied
treatments were: Maracaibo Lake water, hydrocarbon, mixed growth
and biosurfactant (ANHCB); sterilized lake water, hydrocarbon and
mixed growth (AEHC); lake water, hydrocarbon and mixed growth

(ANHC); lake water, hydrocarbon and bisurfactant (ANHB); and

lake water and hydrocarbon (ANH). Physico-chemical and microbiological analyses allowed to determine the efficiency of the biosurfactant and mixed cultures in the bioremediation. The best treatment
essayed resulted to be the ANHCB, with an 81% removal of total
hydrocarbons and the highest removal of N and P. The addition of
the biosurfactants and the use of the mixed cultures influenced positively the biodegradation of the light crude oil. This indicates that
the use of the surfactants increases the efficiency of bioremediation
in hydrocarbon-contaminated waters.

SURFACTANTES BIOLGICOS NA BIORREMEDIAO DE GUAS CONTAMINADAS COM PETRLEO LEVE

Ismenia Araujo, Antonio Gmez, Magleidy Barrera, Nancy Angulo, Gustavo Morillo, Carmen Crdenas e Lenn Herrera
RESUMO
Investigou-se o efeito dos biosurfactantes na eficincia dos processos de recuperao de guas contaminadas com petrleo leve. O
biosurfactante utilizado foi produzido a partir de cepas bacterianas
(MI9 e MI10) pertencentes ao grupo de cepas do Laboratrio de
Microbiologia Industrial do Centro de Investigao da gua, Universidade del Zulia, Venezuela. Para o estudo de tratabilidade, durante
trs meses, alm do biosurfactante utilizado, se preparou um cultivo
misto com as cepas bacterianas MI5, MI7, MI9, MI10, e MI11. Os
tratamentos aplicados foram: gua do Lago de Maracaibo, hidrocarboneto, cultivo misto e biosurfactante (ANHCB); gua do lago esterilizada, hidrocarboneto e cultivo misto (AEHC); gua do lago, hi-

250

drocarboneto e cultivo misto (ANHC); gua do lago, hidrocarboneto

e biosurfactante (ANHB); e gua do lago e hidrocarboneto (ANH).
As anlises fsico-qumicas e microbiolgicas permitiram determinar
a eficincia do biosurfactante e o cultivo misto na biorremediao.
Os resultados mostraram que o melhor ensaio de tratabilidade foi
o ANHCB, com uma remoo de 81% dos hidrocarbonetos totais e
a maior remoo de N e P presentes. A adio do biosurfactante e
utilizao do cultivo misto influenciaram positivamente a biodegradao do petrleo leve, o qual permite inferir que o uso de biosurfactante uma opo que incrementa a eficincia nos processos de
biorremediao de guas contaminadas com hidrocarboneto.

APR 2008, VOL. 33 N 4